Фармакологическая активность и токсикологическая безопасность препарата генной терапии для лечения дисферлинопатии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Кузубова Елена Валерьевна

• Кузубова Елена Валерьевна
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Кузубова Елена Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Дисферлинопатия - характеристика патологии

1.2 Основные стандарты лечения

1.3 Экспериментальные модели мышечной дистрофии

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы исследования

2.1.1 Лабораторные животные и этика исследования

2.1.2 Исследуемые препараты

2.1.2.1 Подготовка и введение препарата, экспериментальные группы

2.1.2.2 Подготовка препарата AAV9-Dysf-DV

2.1.3 Создание экспериментальной группы животных

2.2 Методы исследования

2.2.1 Анализ двигательной функции у мышей

2.2.1.1 Тест «Перевернутая сетка»

2.2.1.2 Тест «Сила хватки»

2.2.1.3 Тест «Удержание на проволоке»

2.2.1.4 Тест «Вынужденное плавание с грузом»

2.2.1.5 Тест «Удержание животного на скользком вертикальном стержне»

2.2.2 Анализ когнитивной функции у мышей

2.2.2.1 Тест «Открытое поле»

2.2.3 Терминальные процедуры

2.2.4 Проведение гистологических исследований

2.2.5 Иммуногистохимическое исследование

2.2.6 Анализ экспрессии генов

2.2.7 Электромиография

2.2.8 Субхроничесая токсичность

2.2.9 Острая токсичность

2.2.10 Специфические виды токсичности

2.2.11 Статистическая обработка

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Характеристика линии трансгенных мышей В6.А-Dysfprmd/GeneJ

3.2 Сравнительная оценка специфической активности (эффективности) AAV9-Dysf-DV И ПЛ-ДИСФ

3.3 Результаты исследования фармакологической активности наиболее эффективного препарата генной терапии на линии мышей, нокаутных по гену DYSF

3.4 Результаты исследования токсикологической безопасности (острая и субхроническая токсичность) наиболее эффективного препарата генной терапии

для лечения дисферлинопатии

3.5 Результаты исследования иммунотоксичности препарата AAV9-Dysf-DV

4 ОБСУЖДЕНИЕ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакологическая активность и токсикологическая безопасность препарата генной терапии для лечения дисферлинопатии»

Актуальность темы исследования

Интенсивность развития современной медицины и фармакологии, в частности, заставляет здравоохранение обратить все большее внимание на наследственные заболевания и расширить разработки в сфере патогенетического и этиотропного их лечения. По данным ВОЗ около 10-15% новорожденных имеют врожденные и наследственные болезни [17, 42].

Дисферлинопатия - это редкий вид нозологии, которая включает в себя спектр мышечных заболеваний, вызываемых рецессивными мутациями в гене DYSF. Фенотипически заболевание варьируется от бессимптомного течения до избирательного и прогрессирующего поражения проксимальных и/или дистальных мышц конечностей. Различают пять основных фенотипов дисферлинопатии: дистальная миопатия Миоши (OMIM # 254130), поясно-конечностная мышечная дистрофия R2 (МДПК R2, OMIM # 253601); дистальная миопатия переднего ложа голени (дистальная, с началом в передней большеберцовой мышце (DMAT, OMIM # 606768); проксимально-дистальная форма (переходная форма) и врожденный фенотип [16, 77, 111].

Манифестация заболевания приходится на поздний подростковый возраст -ранний взрослый возраст с последующим неуклонным прогрессированием мышечной слабости и утратой амбулаторного статуса в 35-45 лет.

Установлено, что, несмотря на отсутствие экспрессии белка дисферлина в скелетных мышцах, наблюдается варьирование клинических проявлений и тяжести заболевания. Аналогичным образом, дисферлинопатия может прогрессировать с различной скоростью даже при наличии одной и той же мутации. Описан ряд факторов, модифицирующих фенотип и скорость прогрессирования дисферлинопатии: степень и продолжительность физической активности, и тип мутации (гомозиготность по нонсенс-мутациям).

Степень разработанности темы исследования

В настоящее время существует несколько основных направлений в терапии миодистрофий: патогенетическая, симптоматическая и этиотропная. В данном контексте патогенетическая терапия подразумевает под собой воздействие на основные звенья патогенеза, что позволяет скорректировать течение заболевания, но не затрагивает первопричину - мутации в гене, кодирующем мышечный белок. Этиотропная терапия заключается в генетической коррекции мутации с целью избежать первичного поражения мышечного волокна в связи с отсутствием или неполноценностью того или иного мышечного белка [11].

Основными технологическими трендами этиотропной терапии являются:

1. Одним из наиболее перспективных направлений является геномное редактирование, основанное на использовании нуклеаз для точечного разрезания ДНК с последующим «удалением» и/или «вставкой» генетических последовательностей. Однако у этой технологии есть ряд существенных ограничений, затрудняющих её клиническое применение:

• Риск нецелевого воздействия. Системы редактирования могут ошибочно связываться с непредназначенными участками ДНК, что снижает не только эффективность, но и безопасность терапии.

• Высокие требования к скринингу ex vivo. Для исключения побочных мутаций требуется сложный и дорогостоящий контроль, что значительно увеличивает стоимость лечения.

• Ограниченная репарация ДНК в мышечной ткани. В мышечных волокнах практически отсутствует механизм восстановления ДНК с использованием донорской матрицы, что делает невозможной вставку новых последовательностей [57]. В результате метод применим только для удаления фрагментов генома, что не подходит для многих форм миодистрофий (например, дисферлинопатии), поскольку укороченные белки часто теряют функциональность.

• Узкий спектр действия. Препараты на основе геномного редактирования эффективны только против конкретных мутаций в строго

определённых участках ДНК. Разработка таких средств для множества редких вариантов мутаций может быть экономически неоправданной.

Таким образом, несмотря на высокий потенциал, геномное редактирование пока сталкивается с серьёзными техническими и экономическими барьерами, требующими дальнейших исследований и оптимизации.

2. Технологии редактирования РНК представляют собой перспективное, но неоднозначное направление в лечении генетически обусловленных патологий мышц. С одной стороны, такие методы, как транс-сплайсинг, несут потенциальные риски - терапевтические молекулы могут непредсказуемо вмешиваться в процесс сплайсинга, приводя к образованию аномальных белков [39]. С другой стороны, подход экзон-скиппинга рассматривается как основной терапевтический вариант при миодистрофии Дюшенна.

Несмотря на предварительное одобрение в США препарата Exondys 51 (основанного на экзон-скиппинге), его клиническая эффективность остается предметом дискуссий [87]. Для других форм миодистрофий доказательная база применения этой технологии отсутствует.

Ключевые ограничения РНК-редактирования включают:

• Зависимость от типа мутации - метод применим только в случаях, когда исключение экзона не нарушает нормальную структуру белка (например, при «удалении» псевдоэкзонов, включенных в транскрипт из-за мутации).

• Функциональные требования - даже при сохранении структуры белка после редактирования его функциональность может быть нарушена. Это существенно ограничивает круг потенциальных мишеней, делая разработку коммерчески оправданных препаратов возможной лишь для узкого круга заболеваний.

Таким образом, хотя редактирование РНК открывает новые возможности терапии, его применение сдерживается как биологическими ограничениями, так и экономическими факторами.

3. Доставка полной копии гена в клетку.

Данный подход лишен многих недостатков, характерных для методов геномного редактирования. Однако его широкое применение сдерживается ключевой проблемой - необходимостью эффективной и точной доставки терапевтического гена в целевые клетки.

Хотя вирусные векторы успешно применяются в доклинических и клинических исследованиях (фазы 1-3) для лечения различных наследственных заболеваний, прогресс в терапии миодистрофий остается скромным [35]. Основная сложность связана с особенностями мышечной ткани:

• Большой объем ткани требует введения высоких доз вектора;

• Риск побочных эффектов: иммуногенные реакции и токсичность;

• Необходимость тканеспецифичной доставки для повышения эффективности и безопасности;

Перспективным решение данных проблем могут стать - ААV-векторы. Аденоассоциированные вирусы (ААV) представляют наиболее безопасный вариант доставки благодаря:

• Отсутствию интеграции в геном (нет риска мутагенеза и канцерогенеза, минимальная вероятность онкологических осложнений);

• Возможностям модификации (создание тканеспецифичных векторов, повышение эффективности экспрессии терапевтического белка, снижение требуемой дозы препарата);

• Признанной безопасности (широкое применение в доклинических исследованиях, использование в клинических испытаниях, подтвержденный профиль безопасности мировым научным сообществом) [60].

Разработка тканеспецифичных ААV-векторов - наиболее перспективное направление для генной терапии миодистрофий. Данный вектор позволит уменьшить терапевтическую дозу, повысить эффективность лечения и снизить риск побочных эффектов. Дальнейшие исследования должны быть направлены на оптимизацию тропности векторов к мышечной ткани и повышение эффективности экспрессии целевых белков.

Мутации, вызывающие сдвиг рамки считывания (делеции, инсерции) могут успешно корректироваться методами, основанными на пропуске экзонов (Рисунок 1).

»яядидтп э пят п>тп м о

Ц1 17 КЕС Й9<«Э ВС 24<<T25<«»ЕХ

<30 €П [32 Е1 Ж<ж<&1 <Ж<&~< «а ЕС 41<<42<<43< О; 45 23 ОС Ж в! ВГОДГ <51

<5Г^ПЕ23СЖ<Ж

* *

ШМИ21 зз<54Т €3

4 *

Примечания: А. Экзоны гена дисферлина. Делеция экзонов, обозначенных черным цветом вызывает сдвиг рамки считывания. Б. Слева: в этом примере мутация в экзоне 32 приводит к преждевременному стоп-кодону (обозначен переходом черного цвета в белый в пре-мРНК (вверху) и мРНК (в центре), что приводит к преждевременному усечению белка (внизу). Справа: при использовании подходов, основанных на методе пропуска экзонов, нацеленных на экзон 32, происходит восстановление рамки считывания и, как следствие,

целостности белка

Рисунок 1 - Схематическое изображение механизма терапии пропуском экзона

для коррекции мутаций в гене DYSF

Выбор технологического подхода к генной терапии в зависимости от типа мутации зависит в первую очередь от того, взывает мутация сдвиг рамки считывания, или нет [109]. При этом в качестве инструмента выбора, в первую очередь, имеет смысл рассматривать те инструменты, которые позволяют охватить наиболее широкий спектр мутаций. Поскольку для дисферлинопатии не описано наиболее часто встречающихся типов мутаций или же наиболее часто повреждённых экзонов, наиболее оптимальным выбором становятся инструменты,

основанные на генном транфере, что позволяет охватить всю популяцию пациентов, вне зависимости от типа мутации [84].

Цель исследования

Изучить фармакологическую активность и токсикологическую безопасность двухвекторной системы AAV9-Dysf-DV на мышиной модели В6.А-Dysfprmd/GeneJ поясно-конечностной мышечной дистрофии R2.

Задачи исследования

1. Провести фенотипирование мышей, нокаутных по гену DYSF (BLA/J), с целью дальнейшего использования мышиной линии в качестве тест-системы для фармакологического изучения препаратов генной терапии, направленных на лечение дисферлинопатии.

2. Провести сравнительное исследование фармакологической активности и выбрать наиболее эффективный лекарственный кандидат среди препаратов генной терапии на основе аденоассоциированного вирусного вектора и плазмидной ДНК на мышах, нокаутных по гену DYSF.

3. Изучить влияние наиболее эффективного препарата генной терапии на физическую работоспособность и координацию мышей, нокаутных по гену DYSF.

4. Провести изучение токсикологической безопасности (острая и субхроническая токсичность) наиболее эффективного препарата генной терапии для лечения дисферлинопатии.

5. Провести изучение специфических видов токсичности наиболее эффективного препарата генной терапии для лечения дисферлинопатии.

Научная новизна исследования

Впервые на экспериментальном уровне в работе проведено обоснование перспективности применения двойного аденоассоциированного вируса 9 с кодон-оптимизированным геном DYSF для фармакологической коррекции фенотипических проявлений мышечной дистрофии пояса конечностей типа R2.

В проведенном исследовании впервые было изучено влияние AAV-9 с кодон-оптимизированным геном DYSF на показатели физической работоспособности генетически модифицированных мышей с моделью дисферлинопатии и сделан

вывод о том, что использование двухвекторной системы на основе AAV оправдано с точки зрения терапевтической эффективности. В исследовании впервые проведена оценка влияния AAV9-Dysf-DV на физиологические показатели мышей линии B6.A-Dysfprmd/GeneJ. Кроме того, впервые было показано, что генная терапия при помощи двухвекторной системы на основе AAV 9 серотипа способна сохранять терапевтический эффект с течением времени.

Так, впервые в ходе проведения следующих поведенческих тестов «Сила хватки», «Принудительное плавание с грузом», «Удержание на проволоке» и «Удержание животного на скользком вертикальном стержне», было показано, что со временем положительная тенденция между экспериментальными группами и контрольными сохраняется. Эффект препарата в течение полугода сохраняется, даже с учетом падения физиологической активности в связи со старением животных.

Новизна научных исследований подтверждена 5 патентами РФ на изобретение.

Теоретическая и практическая значимость работы

В работе на экспериментальном уровне была обоснована перспективность применения двухвекторной системы AAV9-Dysf-DV с перекрывающимися последовательностями кДНК DYSF для генной терапии мышечной дистрофии пояса конечностей типа R2.

AAV9-Dysf-DV оказал положительный эффект на силу конечностей и общее физиологическое состояние мышиной модели дисферлинопатии.

Результаты исследования расширяют представления о возможностях двухвекторной системы на основе аденоассоциированного вируса для лечения генных заболеваний и позволяют обосновать применение данной системы для лечения дисферлинопатий различного типа.

Полученные результаты исследования создают предпосылки для проведения клинических исследований AAV9-Dysf-DV с целью получения данных о возможности генной терапии мышечных дистрофий.

Методология и методы исследования

Методология проведенного исследования основана на методических подходах научных исследований отечественных и зарубежных авторов, общепризнанных протоколах поведенческих тестов («Перевернутая сетка», «Сила хватки», «Удержание на проволоке», «Вынужденное плавание с грузом», «Удержание животного на скользком вертикальном стержне», «Открытое поле» [1, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 110] и гистологических протоколов в том числе и иммуногистохимический анализ, биохимия, генотипирование животных при помощи ПЦР с обратной транскрипцией, анализ экспрессии генов при помощи ПЦР в реальном времени, электромиография [16, 73, 86].

Расчет дозирования и режим введения генно-терапевтического препарата основывался на эффективности и патофизиологических особенностях заболевания. Дизайн проведенного исследования планировался с учетом рекомендаций по проведению доклинических исследований и одобрен местным этическим комитетом.

Внедрение результатов научных исследований

Проведенные доклинические исследования in vivo на высоковалидной мышиной модели дисферлинопатии убедительно продемонстрировали выраженную терапевтическую эффективность препарата генной терапии AAV9-Dysf-DV, что проявлялось в восстановлении мышечной функции по ключевым поведенческим тестам до уровня интактных животных. Сравнительный анализ платформ доставки выявил безусловное превосходство аденоассоциированного вирусного вектора над плазмидными конструкциями, с оптимальной эффективностью при внутримышечном введении в дозе 5*1012 вирусных частиц. Комплексные токсикологические исследования подтвердили благоприятный профиль безопасности препарата, включая отсутствие иммунотоксичности, гематологических и биохимических отклонений, а также патологических изменений во внутренних органах при остром и субхроническом введении, что в совокупности позволяет рекомендовать AAV9-Dysf-DV в качестве перспективного лекарственного кандидата для перехода к этапу клинических исследований.

Полученные результаты диссертационной работы используются в учебно-методической и научно-исследовательской деятельности кафедры фармакологии и клинической фармакологии и НИИ Фармакологии живых систем ФГАОУ ВО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», что подтверждается соответствующими актами внедрения.

Положения, выносимые на защиту

1. Линия мышей В6.А-Dysfprmd/GeneJ, нокаутных по гену DYSF(BLA/J), с учетом их фенотипической характеристики может быть использована для изучения специфической фармакологической активности препаратов генной терапии, направленных на лечение дисферлинопатии.

2. Препарат генной терапии на основе аденоассоциирванного вирусного вектора AAV9-Dysf-DV значительно превосходит препарат на основе плазмидной ДНК ПЛ-ДИСФ по всем ключевым параметрам: эффективности доставки гена, уровню экспрессии целевого белка и функциональному восстановлению мышц у больных животных.

3. Терапия на основе AAV9-вектора демонстрирует высокий терапевтический потенциал для лечения дисферлинопатии по результатм изучения фармакологической активности препарата AAV9-Dysf-DV.

4. Результаты проведения исследования субхронической и острой токсичности препарата генной терапии AAV9-Dysf-DV в изученных дозах продемонстрировали отсутствие токсических проявлений у экспериментальных животных по сравнению с соответствующими группами контроля.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность и обоснованность полученных результатов обеспечиваются репрезентативным объемом выборки, применением валидированного методического аппарата, адекватного поставленным исследовательским задачам, а также последующей статистической обработкой данных с определением уровня статистической значимости наблюдаемых различий.

Основные результаты диссертационной работы были представлены на Двенадцатой конференции молодых ученых ИФАВ РАН (Черноголовка, 16

декабря 2022 г.), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «НИИ Фармакологии живых систем: семь лет пассионарного развития» (Белгород, 10 апреля 2023 г.), межрегиональной научно-практической конференции «Инновационные технологии в медицине» (Белгород, 13 апреля 2023 г.), международном конгрессе «CRISPR-2023» (Новосибирск, 11-13 сентября 2023 г.), II Всероссийской научной школе-конференции молодых ученых и студентов «Генетические технологии в исследованиях природных соединений» (Владивосток, 23-28 сентября 2024 г.), VI Съезде фармакологов России «Смена поколений и сохранение традиций. новые идеи - новые лекарства» (Москва, 20-24 ноября 2023 г.), международной научно-практической конференции «Генетические технологии для биологии и медицины» (Белгород (Россия), Дэчжоу (Китай), ноябрь 2024 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых журналах, входящих в базы данных Scopus, и 7 тезисов в сборниках докладов научных конференций, получено 5 патентов РФ на изобретение.

Личный вклад

Разработка плана эксперимента, фенотипирование линии мышей для корректного нахождения временного промежутка для применения генной терапии. Планирование диссертационного исследования выполнено при непосредственном активном участии автора. Формирование когорт, генотипирование животных, введение препарата, поведенческое тестирование выполнено лично автором. Часть вошедших в диссертационную работу данных получена в соавторстве с другими исследователями при участии автора. Автором самостоятельно проведен анализ результатов, выполнена их статистическая обработка и интерпретация. Выводы на основе полученных результатов сформулированы автором самостоятельно. Основные публикации написаны автором самостоятельно по результатам выполненной работы.

Структура и объём работы

Диссертационная работа содержит: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение, заключение, выводы, список сокращений и условных обозначений и список литературы, включающий работы на русском (9) и иностранном (115) языках. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и содержит 22 таблицы, 76 рисунков.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Дисферлинопатия - характеристика патологии

Мутации в гене DYSF, который кодирует белок дисферлин, вызывают аутосомно-рецессивные мышечные заболевания, известные как дисферлинопатии. Существует несколько форм дисферлинопатии: поясно-конечностная мышечная дистрофия пояса конечностей типа R2 (ПКМД R2), миопатия Миоши (ММ) и другие фенотипы (Таблица 1), такие как дистальная миопатия [12, 66, 85].

Таблица 1 - Ключевые гены поясно-конечностной мышечной дистрофии

Ген Функция кодируемого белка Тип заболевания

DNAJB6 Сворачивание белка и сборка олигомерных белковых комплексов ПКМД D1

ТКР03 Является ядерным рецептором импорта богатых серином/аргинином (SR) белков, таких как факторы сплайсинга SFRS1 и SFRS2 ПКМД 2D

HNRNPDL Влияет на процессинг пре-мРНК и другие аспекты метаболизма и транспорта мРНК ПКМД 3D

CAPN3 Основная внутриклеточная протеаза ПКМД Ж и 4D

DYSF Участвует в сокращении мышц и содержит домены С2, которые играют роль в событиях слияния мембран, опосредованных кальцием, что позволяет предположить, что он может быть вовлечен в регенерацию и восстановление мембран ПКМД 2R

SGCG Обеспечивает структурную связь между субсарколеммальным цитоскелетом и внеклеточным матриксом мышечных клеток. ПКМД 2С

SGCB Стабилизация мембраны мышечных волокон и связывают мышечный цитоскелет с внеклеточным матриксом ПКМД

SGCD Является связующим звеном между F-актиновым цитоскелетом и внеклеточным матриксом. ПКМД 1Я

ТСАР Связывается с доменами титина 7172 и является субстратом титинкиназы, взаимодействия которых, как считается, имеют решающее значение для сборки саркомера ПКМД 2Я

TRIM32 Связывает и убиквитинирует дисбиндин, усиливая его деградацию ПКМД 8Я

FKRP Участвует в посттрансляционной модификации дистрогликана. Врожденная форма мышечной дистрофии

ТШ Служит матрицей для правильной сборки белков, входящих в состав саркомера Дистальная мышечная дистрофия Миоши

Р0МТ1 Обеспечивает целостность клеточных мембран ПКМД 1К

FCMD Модификация вновь производимых белков в аппарате Гольджи Врожденная мышечная дистрофия по типу Фукуямы

Р0МТ2 Формирование связи белков внеклеточного матрикса, таких как ламинин, с клеточными компонентами Синдром Уокера -Варбурга, мышечная дистрофия

POMGNT1 Участвует в О-маннозилгликозилировании и специфичен для альфа- связанной терминальной маннозы Аутосомно-рецессивная МД нижних конечностей типа 20, МД-дистрогликанопатия В3 и А3

DAG1 Связывание внеклеточного матрикса и цитоскелета в скелетных мышцах Различные виды мышечных дистрофий

PLEC1 В мышцах плектин связывается с периферией 7-дисков, выполняет функцию связи цитоскелета с межклеточными соединениями Различные виды мышечных дистрофий

TRAPPC11 Участвует в ранней стадии транспорта эндоплазматического ретикулума в везикулы Гольджи и во внутриклеточном транспорте везикул ПКМД 18Я

GMPPB Катализирует реакцию превращения манноза-1-фосфат и ГТФ в D-маннозу, которая участвует в производстве ^связанных олигосахаридов ПКМД 14Я

ISPD Не описана ПКМД 20R

COL6A1 Участвует в поддержании структуры и функции внеклеточного матрикса ПКМД 22R и 5D

LAMA2 Участвует в опосредуемом прикреплении, миграции и организации клеток в ткани во время эмбрионального развития путем взаимодействия с другими компонентами внеклеточного матрикса ПКМД 23R

BVES Участвует в клеточной адгезии, подвижности клеток, также играет роль в везикулярном транспорте ПКМД 25R

POPDC3 Не описана ПКМД 26R

JAG2 Не описана ПКМД 27R

HMGCR Контролирует скорость метаболизма мевалонатного метаболического пути, который продуцирует холестерин и другие изопреноиды, катализирует превращение ГМГ-КоА в мевалоновую кислоту, что является необходимым этапом в биосинтезе холестерина ПКМД 28R

Распространённость данного типа заболевания по данным всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) колеблется о 2,3 до 10 случаев на 100 000 (от 1: 44 000 до 1: 10 000 ). Мышечная дистрофия пояса конечностей типа R2 находится на 4 месте по распространённости среди мышечных дистрофий. Выделено более 25 форм ПКМД, которые различаются между собой по степени тяжести течения,

возрасту манифестации, фенотипическим проявлениям и патологическим изменениям в мышечной ткани [61, 82, 107].

В базе данных СНпУаг насчитывается 719 наследственных мутаций в гене DYSF, которые были классифицированы как патогенные или вероятно патогенные и которые могут вызывать дисферлинопатию [52, 118].

Разделение подтипов заболевания ПКМД Я2 происходит в зависимости от обусловленной мутации: кальпаина, дисферлина, коллагена VI, саркогликанов, аноктамина 5 и 6, белка, связанного с фукутином [58, 119]. В Евразии именно мутация связанная с кальпаином является основной причиной ПКМД Я2, на втором месте стоит мутация, связанная с фукутин-связанным белком [64, 110].

Ген DYSF (DYStrophy-assotiated Fer-1-like) состоит из 55 экзонов, которые покрывают 150 килобаз геномной ДНК и он продуцирует транскрипт мРНК длиной 6,2 килобазы. Ген кодирует белок массой 237 килодальтон, который состоит из длинной ^концевой цитозольной части, имеющей семь доменов С2, два специфических центральных домена ферлина и трансмембранный домен на С-конце [41, 80, 120]. Имеются доказательства того, что дисферлин играет решающую роль в репарации сарколеммы посредством слияния мембран и перемещения везикул; миоволокна с дефицитом дисферлина обладают сниженной способностью к повторному заживлению мембран после повреждения, вызванного лазером. Дефект репарации мембран играет определенную роль в развитии патологии [14, 122, 123]. В мышцах пациентов с ПКМД Я2 / ММ наблюдалось воспаление; чрезмерный иммунный ответ может способствовать патофизиологии заболевания. Повышенная регуляция инфламмасомы в мышцах с дефицитом дисферлина предполагает, что при этом состоянии могут активироваться провоспалительные цитокины [15, 38]. Биопсии мышц у пациентов с идиопатическими воспалительными миопатиями также показали наличие клеток, экспрессирующих провоспалительные цитокины [13, 121]. Провоспалительные цитокины могут запускать миграцию лейкоцитов, включая макрофаги, в мышечную ткань [36, 63].

Роль дисферлина

Дисферлин, играет огромную роль в сарколеммах, но помимо этого у него есть ещё ряд функций. Во-первых, он участвует в восстановлении мембран Во-вторых, доказана его функция при фагоцитозе. В-третьих, участвует в регуляции миогенина [81, 108] (Рисунок 2).

Саркоплазматический ретикулум

Аффиксин

Дисферлин

Кавеолин

11/111/1/11111/1 п V1/1/11 ш/Г

Кальпаин-З

Тубулин

Рисунок 2 - Дисферлин в сарколемме

Скелетная мышца состоит из волокон. Каждое волокно обернуто плазматической мембраной, сарколеммой, которая проходит в Т-образные канальцы через саркоплазматический ретикулум. Саркоплазматический ретикулум состоит из полостей для накопления кальция в мышцах. Сарколемма представляет собой мембрану, содержащую несколько белков, играющих разные роли в передаче сигналов кальция и восстановлении мембран. Аффиксин связывается с С-концевой областью дисферлина и демонстрирует аномальную локализацию в мышцах с дефицитом дисферлина [37, 70, 102]. Кавеолин-3 также колокализуется с дисферлином, а также с дигидропиридиновым рецептором, каналом Са 2+ L-типа в Т-канальцах. Кальпаин-3 расщепляет аннексины A1 и A2, а также AHNAK для регуляции дисферлинового комплекса и является Са2+-зависимым. S100A10

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кузубова Елена Валерьевна, 2026 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Зайцева, М.С. Работоспособность крыс в тесте «Вынужденное плавание с грузом» и причины её вариабельности / М.С. Зайцева, Д.Г. Иванов, Н.В. Александровская // Биомедицина. - 2015. - № 4. - P. 30-42.

2. Исабекова, П.Ш. Наследственная прогрессирующая поясно-конечностная мышечная дистрофия 2L типа (аноктаминопатия) / П.Ш. Исабекова, Т.М. Алексеева // Современные проблемы науки и образования. - 2020. - № 4.

3. Концепция применения теста «вынужденное плавание с грузом» для экспериментального моделирования трудового процесса на лабораторных животных / Л.В. Полякова, Е.С. Жукова, А.М. Иркаева [и др.] // Лабораторные животные для научных исследований. - 2021. - №2 4 : Тезисы Девятой конференции специалистов по лабораторным животным Rus-LASA, Москва, 2-4 дек. 2021 г.

4. Магкоева, Ф. З. Влияние мутантных аллелей на поведение мышей в тесте открытого поля / Ф.З. Магкоева, Т.Б. Бескова, И.Г. Лильп [и др.] // Биомедицина. -2007. - №1. - С. 136-142.

5. Роль метаболизма кортизола в реализации патогенетических звеньев развития остеопороза - обоснование поиска новых фармакотерапевтических мишеней : обзор / М.В. Корокин, В.О. Солдатов, О.С. Гудырев [и др.] // Научные результаты биомедицинских исследований. - 2022. - Т. 8, № 4. - С. 457-473.

6. Старостина, И. Г. Дисферлинопатии: возможности диагностики, моделирования и генно-клеточной терапии / Старостина И. Г., Соловьева В. В., Юрьева К. С. [и др.] // Гены и клетки. - 2013. - №3. - С. 61-70.

7. Сравнительный анализ нейротоксического эффекта МФТП на двух линиях мышей с конститутивным нокаутом гена альфа-синуклеина / К.Д. Чапров, Е.В. Тетерина, А.Ю. Роман [и др.] // Молекулярная биология. - 2021. - Т. 55, № 1. - С. 152-163.

8. Физиологические эффекты острой неонатальной нормобарической гипоксии у мышей линии C57BL/6 / Д.Д. Хухарева, К.Д. Гусева, Ю.А. Суханова [и

др.] // Журнал высшей нервной деятельности им. И.П. Павлова. - 2020. - Т. 70, № 4. - С. 515-527.

9. Функциональное спортивное питание для единоборцев: разработка и критерии эффективности / Е.Б. Шустов, В.С. Новиков, И.А. Берзин [и др.] // Биомедицина. - 2017. - № 1. - С. 10-23.

10.A clinical, neuropathological and genetic study of homozygous A467T polg-related mitochondrial disease / S. Rajakulendran, R.D. Pitceathly, J.W. Taanman [et al.]// PLoS One. - 2016. - Vol. 11, № 1. - Art. e0145500.

11.A comparison of AAV strategies distinguishes overlapping vectors for efficient systemic delivery of the 6.2 kb Dysferlin coding sequence / M. Pryadkina, W. Lostal, N. Bourg [et al.] // Mol. Ther. Methods Clin. Dev. - 2015. - Vol. 2. - Art. 15009.

12.A Wnt-TGFß2 axis induces a fibrogenic program in muscle stem cells from dystrophic mice / S. Biressi, E.H. Miyabara, S.D. Gopinath [et al.] // Sci. Transl. Med. -

2014. - Vol. 6, № 267. - Art. 267ra176.

13.Abramov, A.Y. Cellular mechanisms of complex I-associated pathology / A.Y. Abramov, P.R. Angelova // Biochem. Soc. Trans. - 2019. - Vol. 47, № 6. - P. 1963-1969.

14.Adler, M. Metabolic myopathies / M. Adler, P.B. Shieh // Semin. Neurol. -

2015. - Vol. 35, № 4. - P. 385-397.

15.Aminoglycoside antibiotics restore dystrophin function to skeletal muscles of mdx mice / E.R. Barton-Davis, L. Cordier, D.I. Shoturma [et al.] // J. Clin. Invest. - 1999. - Vol. 104, № 4. - P. 375-381.

16.Anti-latent TGFß binding protein 4 antibody improves muscle function and reduces muscle fibrosis in muscular dystrophy / A.R. Demonbreun, K.S. Fallon, C.C. Oosterbaan [et al.] // Sci. Transl. Med. - 2021. - Vol. 13, № 610. - Art. eabf0376.

17.Approach to the diagnosis of congenital myopathies / K.N. North, C.H. Wang, N. Clarke [et al.] ; International Standard of Care Committee for Congenital Myopathies // Neuromuscul. Disord. - 2014. - Vol. 24, № 2. - P. 97-116.

18.Assessing dysferlinopathy patients over three years with a new motor scale / M.B. Jacobs, M.K. James, L.P. Lowes [et al.] // Ann. Neurol. - 2021. - Vol. 89, № 1. -P. 967-978.

19.Assessment of disease progression in dysferlinopathy: a 1-year cohort study / U. Moore, M. Jacobs, M.K. James [et al.] ; Jain COS Consortium // Neurology. - 2019. - Vol. 92, № 5. - P. e461-e474.

20.A female case report of LGMD2B with compound heterozygous mutations of the DYSF gene and asymptomatic mutation of the X-linked DMD gene / X. Cao, L. Zeng, Lu, Z. Fan [et al.] // Frontiers in neurology. - 2023. - №14. - 1213090.

21.Assessment of visual function in chronic progressive external ophthalmoplegia / C.Y. Yu Wai Man, T. Smith, P.F. Chinnery [et al.] // Eye (Lond). - 2006. - Vol. 20, № 5. - P. 564-568.

22.Autosomal recessive distal muscular dystrophy as a new type of progressive muscular dystrophy. Seventeen cases in eight families including an autopsied case / K. Miyoshi, H. Kawai, M. Iwasa [et al.] // Brain. - 1986. - Vol. 109, pt. 1. - P. 31-54.

23.Bonnemann, C.G. The collagen Vl-related myopathies Ullrich congenital muscular dystrophy and Bethlem myopathy / C.G. Bonnemann // Handb. Clin. Neurol. -2011. - Vol. 101. - P. 81-96.

24.Bonnemann, C.G. The collagen Vl-related myopathies: muscle meets its matrix / C.G. Bonnemann // Nat. Rev. Neurol. - 2011. - Vol. 7, № 7. - P. 379-390.

25.Bushby, K. One gene, one or many diseases? Simplifying dysferlinopathy / K. Bushby, V. Straub // Neurology. - 2010. - Vol. 75, № 4. - P. 298-299.

26.Butterfield, R.J. Congenital muscular dystrophy and congenital myopathy / R.J. Butterfield // Continuum (Minneap Minn). - 2019. - Vol. 25, № 6. - P. 1640-1661.

27.Cardamone, M. Inherited myopathies and muscular dystrophies / M. Cardamone, B.T. Darras, M.M. Ryan // Semin. Neurol. - 2008. - Vol. 28, № 2. - P. 250259.

28.Ceco, E. Modifying muscular dystrophy through transforming growth factor-^ / E. Ceco, E.M. McNally // FEBS J. - 2013. - Vol. 280, № 17. - P. 4198-4209.

29.Cell-penetrating peptides as transporters for morpholino oligomers: effects of amino acid composition on intracellular delivery and cytotoxicity / R.P. Wu, D.S. Youngblood, J.N. Hassinger [et al.] // Nucleic Acids Res. - 2007. - Vol. 35, № 15. - P. 5182-5191.

30.Chang, N.C. Satellite cells in muscular dystrophy - lost in polarity / N.C. Chang, F.P. Chevalier, M.A. Rudnicki // Trends Mol. Med. - 2016. - Vol. 22, № 6. - P. 479-496.

31.Clinical and genomic evaluation of 207 genetic myopathies in the Indian Subcontinent / S. Chakravorty, B.R.R. Nallamilli, S.V. Khadilkar [et al.] // Front. Neurol. - 2020. - № 11. - Art. 559327.

32.Cohen, T.V. Myogenesis in dysferlin-deficient myoblasts is inhibited by an intrinsic inflammatory response / T.V. Cohen, J.E. Cohen, T.A. Partridge // Neuromuscul. Disord. - 2012. - Vol. 22, № 7. - P. 648-658.

33. Comparison of strength testing modalities in dysferlinopathy / N.F. Reash, M.K. James, L.N. Alfano [et al.]; Jain COS Consortium // Muscle Nerve. - 2022. - Vol. 66, № 2. - P. 159-166.

34.Conditional up-regulation of MHC class I in skeletal muscle leads to self-sustaining autoimmune myositis and myositis-specific autoantibodies / K. Nagaraju, N. Raben, L. Loeffler [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2000. - Vol. 97, № 16. - P. 9209-9214.

35.Congenital myopathies: clinical phenotypes and new diagnostic tools / D. Cassandrini, R. Trovato, A. Rubegni [et al.] // Ital. J. Pediatr. - 2017. - Vol. 43, № 1. -Art. 101.

36.Connective tissue growth factor is overexpressed in muscles of human muscular dystrophy / G. Sun, K. Haginoya, Y. Wu [et al.] // J. Neurol. Sci. - 2008. - Vol. 267, № 1-2. - P. 48-56.

37.Crudele, J.M. AAV-based gene therapies for the muscular dystrophies / J.M. Crudele, J.S. Chamberlain // Hum. Mol. Genet. - 2019. - Vol. 28, № 1. - P. R102- R107.

38.Deacetylase inhibitors increase muscle cell size by promoting myoblast recruitment and fusion through induction of follistatin / S. Iezzi, M. Di Padova, C. Serra [et al.] // Dev. Cell. - 2004. - Vol. 6, № 5. - P. 673-684.

39.Dhillon, S. Avalglucosidase alfa: first approval / S. Dhillon // Drugs. - 2021. -Vol. 81, №. 15. - P. 1803-1809.

40.Diagnosis and treatment of mitochondrial myopathies / S.T. Ahmed, L. Craven,

0.M. Russell [et al.] // Neurotherapeutics. - 2018. - Vol. 15, № 4. - P. 943-953.

41.Diop, D. Aminoglycosides and other factors promoting stop codon readthrough in human cells / D. Diop, C. Chauvin, O. Jean-Jean // C.R. Biol. - 2007. - Vol. 330, №

1. - P. 71-79.

42.Discovery and mechanism of action studies of 4,6-diphenylpyrimidine-2-carbohydrazides as utrophin modulators for the treatment of Duchenne muscular dystrophy / A. Vuorinen, I.V.L. Wilkinson, M. Chatzopoulou [et al.] // Eur. J. Med. Chem. - 2021. - Vol. 220. - Art. 113431.

43.Disruption of muscle membrane and phenotype divergence in two novel mouse models of dysferlin deficiency / M. Ho, C.M. Post, L.R. Donahue [et al.] // Hum. Mol. Gen. - 2004. - Vol. 13, № 18. - P. 1999-2010.

44. Drug-induced readthrough of premature stop codons leads to the stabilization of laminin alpha2 chain mRNA in CMD myotubes / V. Allamand, L. Bidou, M. Arakawa [et al.] // J. Gene Med. - 2008. - Vol. 10, № 2. - P. 217-224.

45.Dysferlin mutations in LGMD2B, Miyoshi myopathy, and atypical dysferlinopathies / K. Nguyen, G. Bassez, R. Bernard [et al.] // Hum. Mutat. - 2005. -Vol. 26, № 2. - Art. 165.

46.Dysferlin, a novel skeletal muscle gene, is mutated in Miyoshi myopathy and limb girdle muscular dystrophy / J. Liu, M. Aoki, I. Illa [et al.] // Nat. Genet. - 1998. -Vol. 20, № 1. - P. 31-36.

47.Dysferlin-deficiency has greater impact on function of slow muscles, compared with fast, in aged BLAJ mice / E.M. Lloyd, H. Xu, R.M. Murphy [et al.] // PLoS One. -2019. - Vol. 14, № 4. - Art. e0214908.

48.Dysferlinopathy misdiagnosed with juvenile polymyositis in the pre-symptomatic stage of hyperCKemia: a case report and literature review / C. Contreras-Cubas, F. Barajas-Olmos, M.I. Frayre-Martinez [et al.] // BMC Med. Genomics. - 2022. - Vol. 15, № 1. - Art. 139.

49.Dystrophin as a molecular shock absorber / S. Le, M. Yu, L. Hovan [et al.] // ACS Nano. - 2018. - Vol. 12, № 12. - P. 12140-12148.

50.Dystrophin expression in muscle stem cells regulates their polarity and asymmetric division / N.A. Dumont, Y.X. Wang, J. von Maltzahn [et al.] // Nat. Med. -2015. - Vol. 21, № 12. - P. 1455-1463.

51.Effect of Ataluren on dystrophin mutations / J. Berger, M. Li, S. Berger [et al.] // J. Cell. Mol. Med. - 2020. - Vol. 24, № 12. - P. 6680-6689.

52.Effect of high-dose creatine therapy on symptoms of exercise intolerance in McArdle disease: double-blind, placebo-controlled crossover study / M. Vorgerd, J. Zange, R. Kley [et al.] // Arch. Neurol. - 2002. - Vol. 59, № 1. - P. 97-101.

53.Efficient recovery of dysferlin deficiency by dual adeno-associated vector-mediated gene transfer / W. Lostal, M. Bartoli, N. Bourg [et al.] // Hum. Mol. Genet. -2010. - Vol. 19, № 10. - P.1897-1907.

54.Enzyme replacement therapy rescues weakness and improves muscle pathology in mice with X-linked myotubular myopathy / M.W. Lawlor, D. Armstrong, M.G. Viola [et al.] // Hum. Mol. Genet. - 2013. - Vol. 22, № 8. - P. 1525-1538.

55.Ervasti, J.M. A role for the dystrophin-glycoprotein complex as a transmembrane linker between laminin and actin / J.M. Ervasti, K.P. Campbell // J. Cell. Biol. - 1993. - Vol. 122, № 4. - P. 809-823.

56. Evidence of mdx mouse skeletal muscle fragility in vivo by eccentric running exercise / J.T. Vilquin, V. Brussee, I. Asselin [et al.] // Muscle Nerve. - 1998. - Vol. 21, № 5. - P. 567-576.

57.Evidence that systemic gentamicin suppresses premature stop mutations in patients with cystic fibrosis / J.P. Clancy, Z. Bebök, F. Ruiz [et al.] // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 2001. - Vol. 163, № 7. - P. 1683-1692.

58.Exercise intolerance in Glycogen Storage Disease Type III: weakness or energy deficiency? / N. Preisler, A. Pradel, E. Husu [et al.] // Mol. Genet. Metab. - 2013. - Vol. 109, № 1. - P. 14-20.

59.Fanin, M. Progress and challenges in diagnosis of dysferlinopathy / M. Fanin, C. Angelini // Muscle Nerve. - 2016. - Vol. 54, № 5. - P. 821-835.

60.Fassone, E. Complex I deficiency: clinical features, biochemistry and molecular genetics / E. Fassone, S. Rahman // J. Med. Genet. - 2012. - Vol. 49, № 9. - P. 578-590 ; Erratum: J. Med. Genet. - 2012. - Vol. 49, № 10. - P. 668.

61.Fat and carbohydrate metabolism during exercise in phosphoglucomutase type 1 deficiency / N. Preisler, P. Laforet, A Echaniz-Laguna [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2013. - Vol. 98, № 7. - P. E1235-E1240.

62.Flanigan, K.M. Duchenne and Becker muscular dystrophies / K.M. Flanigan // Neurol. Clin. - 2014. - Vol. 32, № 3. - P. 671-688.

63.Functional and morphological recovery of dystrophic muscles in mice treated with deacetylase inhibitors / G.C. Minetti, C. Colussi, R. Adami [et al.] // Nat. Med. -2006. - Vol. 12, № 10. - P. 1147-1150.

64.Functional recovery of a novel knockin mouse model of dysferlinopathy by readthrough of nonsense mutation / K. Seo, E.K. Kim, J. Choi [et al.] // Mol. Ther. Methods Clin. Dev. - 2021. - Vol. 21. - P. 702-709.

65.Ghosh, P. Mannose 6-phosphate receptors: new twists in the tale / P. Ghosh, N.M. Dahms, S. Kornfeld // Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. - 2003. - Vol. 4, № 3. - P. 202212.

66.Guiraud, S. Pharmacological advances for treatment in Duchenne muscular dystrophy / S. Guiraud, K.E. Davies // Curr. Opin. Pharmacol. - 2017. - Vol. 34. - P. 3648.

67.Hindlimb immobilization applied to 21-day-old mdx mice prevents the occurrence of muscle degeneration / A. Mokhtarian, J.P. Lefaucheur, P.C. Even, A. Sebille // J. Appl. Physiol. - 1999. - Vol. 86, № 3. - P. 924-931.

68. Homologous recombination mediates functional recovery of dysferlin deficiency following AAV5 gene transfer / W.E. Grose, K.R. Clark, D. Griffin [et al.] // PLoS One. - 2012. - Vol. 7, № 6. - Art. e39233.

69.Horn, J.M. Genetic and covalent protein modification strategies to facilitate intracellular delivery / J.M. Horn, A.C. Obermeyer // Biomacromolecules. - 2021. - Vol. 22, № 12. - P. 4883-4904.

70.Howard, M. Aminoglycoside antibiotics restore CFTR function by overcoming premature stop mutations / M. Howard, R.A. Frizzell, D.M. Bedwell // Nat. Med. - 1996. - Vol. 2, № 4. - P. 467-469.

71.Immunolocalization and developmental expression of dystrophin related protein in skeletal muscle / T.S. Khurana, S.C. Watkins, P. Chafey [et al.] // Neuromuscul. Disord. - 1991. - Vol. 1, № 3. - P. 185-194.

72.Inhibition of the angiotensin-converting enzyme decreases skeletal muscle fibrosis in dystrophic mice by a diminution in the expression and activity of connective tissue growth factor (CTGF/CCN-2) / M.G. Morales, D. Cabrera, C. Céspedes [et al.] // Cell Tissue Res. - 2013. - Vol. 353, № 1. - P. 173-187.

73.Jungbluth, H. Congenital myopathies: not only a paediatric topic / H. Jungbluth, N.C. Voermans // Curr. Opin. Neurol. - 2016. - Vol. 29, № 5. - P. 642-650.

74.Katzin, L.W. Pompe disease: a review of the current diagnosis and treatment recommendations in the era of enzyme replacement therapy / L.W. Katzin, A.A. Amato // J. Clin. Neuromuscul. Dis. - 2008. - Vol. 9, № 4. - P. 421-431.

75.Khurana, T.S. Identification of a chromosome 6-encoded dystrophin-related protein / T.S. Khurana, E.P. Hoffman, L.M. Kunkel // J. Biol. Chem. - 1990. - Vol. 265, № 28. - P. 16717-16720.

76. Kohler, L. Pompe disease: from basic science to therapy / L. Kohler, R. Puertollano, N. Raben // Neurotherapeutics. - 2018. - Vol. 15, № 4. - P. 928-942.

77.Le Rumeur, E. Dystrophin: more than just the sum of its parts / E. Le Rumeur, S.J. Winder, J.F. Hubert // Biochim. Biophys. Acta. - 2010. - Vol. 1804, № 9. - P. 17131722.

78.Lipid accumulation in dysferlin-deficient muscles / M.D. Grounds, J.R. Terrill, H.G. Radley-Crabb [et al.] // Am. J. Pathol. - 2014. - Vol. 184, № 6. - P. 1668-1676.

79.Macrophage plasticity in skeletal muscle repair / E. Rigamonti, P. Zordan, C Sciorati [et al.] // Biomed. Res. Int. - 2014. - Vol. 2014. - Art. 560629.

80.Magnetic resonance imaging pattern variability in dysferlinopathy / S.N. Bardakov, V.A. Tsargush, P.G. Carlier [et al.] // Acta Myol. - 2021. - Vol. 40, № 4. - P. 158-171.

81.Maternal transmission of mitochondrial diseases / M.R. Chiaratti, C.H. Macabelli, J.D. Augusto Neto [et al.] // Genet. Mol. Biol. - 2020. - Vol. 43, № 1.

82.McPherron, A.C. Regulation of skeletal muscle mass in mice by a new TGF-beta superfamily member / A.C. McPherron, A.M. Lawler, S.J. Lee // Nature. - 1997. -Vol. 387, № 6628. - P. 83-90.

83.Meena, N.K. Pompe Disease: new developments in an old lysosomal storage disorder / N.K. Meena, N. Raben // Biomolecules. - 2020. - Vol. 10, № 9. - Art. 1339.

84.Mercuri, E. Muscular dystrophies / E. Mercuri, F. Muntoni // Lancet. - 2013. -Vol. 381, № 9869. - P. 845-860.

85.Mitochondrial heteroplasmy beyond the oocyte bottleneck / J. van den Ameele, A.Y.Z. Li, H. Ma, P.F. Chinnery // Semin. Cell Dev. Biol. - 2020. - Vol. 97. - P. 156166.

86.Mizuno, Y. Prevention of myonecrosis in mdx mice: effect of immobilization by the local tetanus method / Y. Mizuno // Brain Dev. - 1992. - Vol. 14, № 5. - P. 319322.

87.Molecular and clinical genetics of mitochondrial diseases due to POLG mutations / L.J. Wong, R.K. Naviaux, N. Brunetti-Pierri [et al.] // Hum. Mutat. - 2008. -Vol. 29, № 9. - P. E150-E172.

88.M-Track: a new software for automated detection of grooming trajectories in mice / S.L. Reeves, K.E. Fleming, L. Zhang, A. Scimemi. // PLoS Comput. Biol. - 2016.

- Vol. 12, № 9. - Art. e1005115.

89.Muntoni, F. Dystrophin and mutations: one gene, several proteins, multiple phenotypes / F. Muntoni, S. Torelli, A. Ferlini // Lancet Neurol. - 2003. - Vol. 2, № 12.

- P. 731-740.

90.Muscle glycogenosis due to phosphoglucomutase 1 deficiency / T. Stojkovic, J. Vissing, F. Petit [et al.] // N. Engl. J. Med. - 2009. - Vol. 361, № 4. - P. 425-427.

91.Muscle phosphofructokinase deficiency (Tarui's disease) / M.J. Tarlow, D.A. Ellis, G.W. Pearce, M. Anderson // Proc. Nutr. Soc. - 1979. - Vol. 38, № 3. - P. 110A.

92.Muscular dystrophy in dysferlin-deficient mouse models / M.A. Hornsey, S.H. Laval, R. Barresi [et al.] // Neuromuscul. Disord. - 2013. - Vol. 23, № 5. - P. 377-387.

93.N-acetylcysteine reduces skeletal muscles oxidative stress and improves grip strength in dysferlin-deficient Bla/J Mice / P. García-Campos, X. Báez-Matus, C. Jara-Gutiérrez [et al.] // Int. J. Mol. Sci. - 2020. - Vol. 21, № 12. - Art. 4293.

94.Naidoo, M. Dystrophin Dp71 and the neuropathophysiology of Duchenne muscular dystrophy / M. Naidoo, K. Anthony // Mol. Neurobiol. - 2020. - Vol. 57, № 3.

- P. 1748-1767.

95.Pearson, C.M. A metabolic myopathy due to absence of muscle phosphorylase / C.M. Pearson, D.G. Rimer, W.F. Mommaerts // Am. J. Med. - 1961. - Vol. 30. - P. 502-517.

96.Peruzzo, P. Molecular genetics of Pompe disease: a comprehensive overview / P. Peruzzo, E. Pavan, A. Dardis. // Ann. Transl. Med. - 2019. - Vol. 7, № 13. - Art. 278.

97.Phenotypic drug screening for dysferlinopathy using patient-derived induced pluripotent stem cells / Y. Kokubu, T. Nagino, K. Sasa [et al.] // Stem. Cells Transl. Med.

- 2019. - Vol. 8, № 10. - P. 1017-1029.

98.POLG-Related Disorders / B.H. Cohen, P.F. Chinnery, W.C. Copeland [et al.] // GeneReviews® / editor-in-chief M.P. Adam ; University of Washington. - Seattle (WA), 1993-2025.

99.Pompe disease: pathogenesis, molecular genetics and diagnosis / S. Taverna, G. Cammarata, P. Colomba [et al.] // Aging (Albany NY). - 2020. - Vol. 12, № 15. - P. 15856-15874.

100. Preclinical drug trials in the mdx mouse: assessment of reliable and sensitive outcome measures / C.F. Spurney, H. Gordish-Dressman, A.D. Guerron [et al.] // Muscle Nerve. - 2009. - Vol. 39, № 5. - P. 591-602.

101. Prefrontal cortex inflammation and liver pathologies accompany cognitive and motor deficits following Western diet consumption in non-obese female mice / E. Veniaminova, M. Oplatchikova, L. Bettendorff [et al.] // Life Sci. - 2020. - Vol. 241. -Art. 117163.

102. PTC124 targets genetic disorders caused by nonsense mutations / E.M. Welch, E.R. Barton, J. Zhuo [et al.] // Nature. - 2007. - Vol. 447, № 7140. - P. 87-91.

103. Reactive changes in elements of stromal-vascular différons of dysferlin-deficient skeletal muscles after procaine injection / O.N. Chernova, M.O. Mavlikeev, A.P. Kiyasov [et al.] // Bull. Exp. Biol. Med. - 2021. - Vol. 170, № 5. - P. 677-681.

104. Schroeder, R. Modulation of RNA function by aminoglycoside antibiotics / R. Schroeder, C. Waldsich, H. Wank // EMBO J. - 2000. - Vol. 19, № 1. - P. 1-9.

105. Segregation of mitochondrial DNA heteroplasmy through a developmental genetic bottleneck in human embryos / V.I. Floros, A. Pyle, S. Dietmann [et al.] // Nat. Cell Biol. - 2018. - Vol. 20, № 2. - P. 144-151.

106. Stage-specific modulation of skeletal myogenesis by inhibitors of nuclear deacetylases / S. Iezzi, G. Cossu, C. Nervi [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2002.

- Vol. 99, № 11. - P. 7757-7762.

107. Stimulation of fibroblast cell growth, matrix production, and granulation tissue formation by connective tissue growth factor / K. Frazier, S. Williams, D. Kothapalli [et al.] // J. Invest. Dermatol. - 1996. - Vol. 107, № 3. - P. 404-411.

108. Stop codon suppression via inhibition of eRF1 expression / J. Carnes, M. Jacobson, L. Leinwand, M. Yarus // RNA. - 2003. - Vol. 9, № 6. - P. 648-653.

109. Structural and ultrastructural changes in the skeletal muscles of dysferlin-deficient mice during postnatal ontogenesis / O.N. Chernova, I.A. Chekmareva, M.O. Mavlikeev [et al.] // Ultrastruct. Pathol. - 2022. - Vol. 46, № 4. - P. 359-367.

110. Structure-activity relationships of 2-pyrimidinecarbohydrazides as utrophin modulators for the potential treatment of Duchenne muscular dystrophy / M. Chatzopoulou, D. Conole, E. Emer [et al.] // Bioorg. Med. Chem. - 2022. - Vol. 69. -Art. 116812.

111. Structure-based designed nano-dysferlin significantly improves dysferlinopathy in BLA/J Mice / T. Llanga, N. Nagy, L. Conatser [et al.] // Mol. Ther. -2017. - Vol. 25, № 9. - P. 2150-2162.

112. Tarnopolsky, M.A. Metabolic Myopathies / M.A. Tarnopolsky // Continuum (Minneap Minn). - 2016. - Vol. 22, № 6 : Muscle and Neuromuscular Junction Disorders.

- P. 1829-1851.

113. Tein, I. Metabolic myopathies / I. Tein // Semin. Pediatr. Neurol. - 1996. -Vol. 3, № 2. - P. 59-98.

114. The Clinical Outcome Study for dysferlinopathy: an international multicenter study / E. Harris, C.L. Bladen, A. Mayhew [et al.] // Neurol. Genet. - 2016. - Vol. 2, № 4. - Art. e89.

115. The failed clinical story of myostatin inhibitors against Duchenne muscular dystrophy: exploring the biology behind the battle / E. Rybalka, C.A. Timpani, D.A. Debruin [et al.] // Cells. - 2020. - Vol. 9, № 12. - Art. 2657.

116. The investigation and management of metabolic myopathies / S.E. Olpin, E. Murphy, R.J. Kirk [et al.] // J. Clin. Pathol. - 2015. - Vol. 68, № 6. - P. 410-417.

117. The TREAT-NMD DMD Global Database: analysis of more than 7,000 Duchenne muscular dystrophy mutations / C.L. Bladen, D. Salgado, S. Monges [et al.] // Hum. Mutat. - 2015. - Vol. 36, № 4. - P. 395-402.

118. Therapeutic potential of highly functional codon-optimized microutrophin for muscle-specific expression / A.V. Starikova, V.V. Skopenkova, A.V. Polikarpova [et al.] // Sci. Rep. - 2022. - Vol. 12, № 1. - Art. 848.

119. Toscano, A. Tarui disease and distal glycogenoses: clinical and genetic update / A. Toscano, O. Musumeci // Acta Myol. - 2007. - Vol. 26, № 2. - P. 105-107.

120. TracMouse: a computer aided movement analysis script for the mouse inverted horizontal grid test / W. Niewiadomski, E. Palasz, M. Skupinska [et al.] // Sci. Rep. - 2016. - Vol. 6. - Art. 39331.

121. Tubridy, N. Congenital myopathies and congenital muscular dystrophies / N. Tubridy, B. Fontaine, B. Eymard // Curr. Opin. Neurol. - 2001. - Vol. 14, № 5. - P. 575-582.

122. Weller, B. Dystrophin-deficient mdx muscle fibers are preferentially vulnerable to necrosis induced by experimental lengthening contractions / B. Weller, G. Karpati, S. Carpenter // J. Neurol. Sci. - 1990. - Vol. 100, № 1-2. - P. 9-13.

123. Yiu, E.M. Duchenne muscular dystrophy / E.M. Yiu, A.J. Kornberg // J. Paediatr. Child. Health. - 2015. - Vol. 51, № 8. - P. 759-764.

124. Yiu, E.M. Duchenne muscular dystrophy / E.M. Yiu, A.J. Kornberg // Neurol. India. - 2008. - Vol. 56, № 3. - P. 236-247.