Особенности структуры молекулярно-генетических дефектов гена DMD в России и их влияние на возможности использования этиопатогенетической терапии миодистрофии Дюшенна тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Зинина Елена Витальевна

• Зинина Елена Витальевна
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Зинина Елена Витальевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Степень разработанности темы исследования

Цель исследования

Задачи, решаемые в ходе исследования:

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость работы

Методология и методы диссертационного исследования

Положения, выносимые на защиту

Степень достоверности результатов

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Апробация работы

Личный вклад автора в проведение исследования

Публикации

Структура и объем диссертации

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общие сведения

1.1.1 История открытия и изучения мышечной дистрофии Дюшенна/Беккера

1.1.2 Эпидемиология заболевания

1.2 Молекулярные основы патогенеза МДД

1.2.1 Структура и функции дистрофина

1.2.2 Патогенетические механизмы формирования МДД/МДБ

1.2.3 Молекулярно-генетические аспекты МДД, представление о спектре патогенных/вероятно патогенных вариантов

1.3 Современные подходы к диагностике

1.3.1 Биохимическая диагностика МДД/МДБ

1.3.2 Молекулярно-генетическая диагностика МДД/МДБ, поиск протяженных делеций/дупликаций

1.3.3 Молекулярно-генетическая диагностика МДД/МДБ, поиск точковых вариантов

1.3.4 Молекулярно-генетическая диагностика МДД/МДБ, структурные перестройки и интронные варианты

1.4 Существующие подходы к терапии

1.4.1. Подход терапии, основанный на пропуске экзонов

1.4.2 Подход терапии, основанный на прочтении преждевременных стоп-кодонов

1.4.3 Генозаместительная терапия

1.4.4 Перспективы терапии МДД

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Выделение геномной ДНК из венозной крови

2.2.2 Мультиплексная лигазозависимая амплификации проб (MLPA MRC-Holland)

2.2.3 Определение нуклеотидной последовательности анализируемых генов методом таргетного массового параллельного секвенирования

2.2.4 Секвенирование полного генома

2.2.5 Полимеразная цепная реакция

2.2.6 Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ)

2.2.7 Прямое автоматическое секвенирование по Сенгеру

2.2.8 Исследование гаплотипов хромосом с частыми патогенными вариантами

2.2.9 Анализ неравновесия по сцеплению

2.2.10 Биоинформатический анализ

2.2.11 Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Анализ полного спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене БМБ в исследуемой выборке

3.1.1 Оценка долей вариантов нуклеотидной последовательности

3.1.2 Особенности и отличия спектра патогенных/вероятно патогенных в РФ от мировых данных

3.1.3 Причины отличия спектра патогенных/вероятно патогенных в РФ от мировых данных

3.2. Анализ спектра точковых вариантов в гене БМБ в исследуемой выборке

3.2.1 Распределение точковых вариантов по гену БМБ

3.2.2. Нонсенс-варианты

3.2.3 Варианты со сдвигом рамки считывания

3.2.4 Варианты, затрагивающие сайты сплайсинга

3.2.5 Миссенс-варианты

3.2.6 Варианты без сдвига рамки считывания

3.3 Поиск причины заболевания в группе больных с отрицательными результатами ДНК-диагностики

3.3.1 Структурные варианты

3.3.2 Интронные варианты

3.4 Оценка применимости существующих подходов патогенетической терапии МДД

3.4.1 Применимость подхода терапии, основанной на пропуске экзонов, потенциальными препаратами

3.4.2 Применимость подхода терапии, основанной на пропуске экзонов, существующими препаратами

3.4.3 Применимость подхода терапии, основанной на прочтении преждевременных стоп-кодонов

3.4.4 Применимость генозаместительной терапии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Список статей, опубликованных в журналах, рекомендованных ВАК при Минобрнауки России

Список публикаций в других изданиях

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Олигонуклеотидные праймеры и условия амплификации, применявшиеся для анализа последовательности гена БМБ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

МДД/МДБ - мышечная дистрофия Дюшенна/Беккера

OMIM - Online Mendelian Inheritance in Man; база данных менделирующих заболеваний человека

РФ - Российская Федерация

DGC - Dystrophin Glycoprotein Complex; дистрофин-гликопротеиновый комплекс ПЦР - полимеразная цепная реакция

MLPA - Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification; мультиплексная лигазозависимая амплификации проб

ПДАФ - полиморфизм длин амплификационных фрагментов МПС - массовое параллельное секвенирование КФК - креатинфосфокиназа а.о. - аминокислотные остатки

ABD - Actin-binding domain; актин-связывающий домен

СН - Calponin Homology domain; домен кальпониновой гомологии

SR - Spectrin Repeats; спектриновые повторы

CR - Cysteine-Rich Domain; цистеин-богатый домен

nNOS - Neuronal Nitric Oxide Synthase; нейрональная синтаза оксида озота

DAPC - The Dystrophin-Associated Protein Complex; дистрофин-ассоциированный

белковый комплекс

HGMD - Human Gene Mutation Database; база данных всех опубликованных вариантов нуклеотидной последовательности человека

SNP - Single Nucleotide Polymorphism; однонуклеотидный полиморфизм

LINE2 - Long Interspersed Nuclear Elements

MIR - Mammalian-wide Interspersed Repeats

АЛТ - Аланинаминотрансфераза

АСТ - Аспартатаминотрансфераза

ЛДГ - Лактатдегидрогеназа

NGS - Next Generation Sequencing; секвенирование следующего поколения CGH - Comparative Genomic Hybridization; сравнительная геномная гибридизация CNV - Copy Number Variation; вариация числа копий

ASO - Antisense Oligonucleotides; антисмысловые олигонуклеотиды

FDA - Food and Drug Administration; управление по санитарному надзору за качеством

пищевых продуктов и медикаментов

МНН - Международное непатентованное наименование

AAV - Adeno-Associated Virus; аденоассоциированный вирус

CRISPR/Cas9 - Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats; регулярно расположенные группами короткие палиндромные повторы

LGMD - Limb-Girdle Muscular Dystrophy; поясно-конечностная мышечная дистрофия ПААГ - полиакриламидный гель АА - акриламид БА - бисакриламид

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности структуры молекулярно-генетических дефектов гена DMD в России и их влияние на возможности использования этиопатогенетической терапии миодистрофии Дюшенна»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования

Мышечная дистрофия Дюшенна/Беккера (МДД/МДБ) представляет собой Х-сцепленное наследственное нервно-мышечное заболевание, обусловленное патогенными/вероятно патогенными вариантами в гене, кодирующем белок дистрофин [1]. Существуют две аллельные формы заболевания, различающиеся по тяжести клинических проявлений. Мышечная дистрофия Дюшенна (МДД) (OMIM: 310200) по оценкам поражает 1:5000 новорожденных мальчиков и приводит к прогрессирующей мышечной слабости и задержке моторного развития в раннем возрасте. При отсутствии должного лечения и ухода пациенты умирают в подростковом возрасте вследствие прогрессирующей кардиомиопатии и дыхательной недостаточности [2]. Мышечная дистрофия Беккера (МДБ) (OMIM: 300376) является более мягкой, поздно манифестирующей аллельной формой заболевания. Клинические симптомы могут варьировать от мышечной слабости до потери способности к самостоятельному передвижению [3]. Известно, что суммарно МДД/МДБ встречается у 1/3500-5000 новорожденных мальчиков, и в редких случаях заболевание может затрагивать и девочек [4]. Согласно данным о распространенности заболевания расчетное количество пациентов с МДД в Российской Федерации (РФ) составляет около 4000 человек [1]. Частота МДД в РФ в настоящий момент неизвестна.

Причиной МДД/МДБ являются патогенные и вероятно патогенные варианты в гене DMD, расположенном на Х-хромосоме. Ген DMD является самым крупным геном в геноме человека, протяженностью более 2,2 МБ, кодирующим белок дистрофин [5]. Дистрофин представляет собой основной белок мышечного цитоскелета, являющийся составляющей частью дистрофин-гликопротеинового комплекса (DGC). Основными функциями данного комплекса является соединение компонентов межклеточного матрикса с элементами цитоскелета, что обеспечивает механическую стабилизацию мышечной клетки [6]. Размер гена DMD, а также особенности его структуры (наличие транспозонподобных элементов в интронах, их большой размер) обуславливают высокую частоту вариантов de novo в нем. Патогенные и вероятно патогенные варианты в гене DMD приводят к нарушению синтеза полноценного белка дистрофина, в результате чего

нарушается нормальное функционирование DGC-комплекса, что приводит к дестабилизации клеточных мембран и разрушению мышечных клеток [7].

При МДД/МДБ были зарегистрированы все типы вариантов нуклеотидной последовательности, однако, наиболее распространенными вариантами являются протяженные делеции и дупликации одного или нескольких экзонов [8]. Также в гене ими описаны точковые варианты, сложные структурные перестройки и глубоко интронные варианты. Представление о спектре патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене ими постоянно меняется с расширением методических возможностей лабораторий по всему миру. Кроме того, было высказано предположение, что спектр вариантов в гене иМи может варьировать в зависимости от популяции, что делает затруднительным определение доли пациентов, для которых доступна этиопатогенетическая терапия [9]. Работ по определению спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов гене ими в РФ не проводилось.

На данный момент существует три доступных подхода этиотропной/патогенетической терапии, направленных на восстановление экспрессии и функциональной активности белка дистрофина. К первому относят применение терапии путем пропуска определенных экзонов гена. Второй подход заключается в прочтении преждевременно образующихся стоп-кодонов. Кроме того, в последний год была одобрена этиотропная терапия при МДД, основанная на введение в клетки пациентов усеченного гена ими (мини-/микродистрофина), в результате чего синтезируется короткий, но функционально активный белок дистрофин. С внедрением в практику данный подход этиотропной терапии станет доступен для большей доли пациентов с МДД. Однако, у генной терапии также имеются свои ограничения, такие как возраст пациентов и наличие определенных вариантов нуклеотидной последовательности. Таким образом, анализ спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене ими имеет решающее значения, поскольку позволяет определять доли пациентов с МДД/МДБ, который доступна этиотропная/патогенетическая терапия, специфичная для конкретного типа вариантов нуклеотидной последовательности.

Степень разработанности темы исследования

Изучение спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене БМБ ведется на протяжении многих лет по всему миру и является сложной задачей в связи с большой протяженностью гена. Кроме того, полноценно оценить варианты в гене БМБ, их спектр и распределение по гену длительное время не представлялось возможным в связи с ограниченными методическими возможностями лабораторий по всему миру. С развитием методов молекулярно-генетической диагностики и внедрением в практику методов массового параллельного секвенирование удалось в полной мере проанализировать спектр вариантов нуклеотидной последовательности в гене БМБ. Согласно накопленным данным, в гене БМБ наиболее распространенными вариантами нуклеотидной последовательности являются протяженные делеции (50-60%) и дупликации (6-11%) одного или нескольких экзонов [8]. Оставшиеся 20-30% случаев вызваны точковыми вариантами [10], к которым относятся нонсенс-варианты (10,2%), варианты, затрагивающие сайты сплайсинга (2,8%), небольшие перестройки (инсерции/делеции/дупликации) и миссенс-варианты (0,4%). Кроме того, было высказано предположение, что спектр патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене дистрофина сильно варьирует в зависимости от популяции, и возможным объяснением этого могут служить этнические различия в интронных структурах гена [11].

С появлением методов патогенетической терапии при МДД изучение спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов и определение долей пациентов с частыми вариантами в гене БМБ становится наиболее актуально, поскольку все существующие подходы нацелены на определенные варианты нуклеотидной последовательности и применимы для конкретных групп пациентов с МДД. Также разнообразие вариантов нуклеотидной последовательности и их распределение по гену затрудняют разработку терапевтических подходов. На настоящее время для пациентов доступны несколько потенциальных методов лечения - прочтение преждевременно образующихся стоп-кодонов, пропуск наиболее частных экзонов 45, 51, 53 и генозаместительная терапия с использованием вирусных векторов.

В Российской Федерации до сих пор не проводилось масштабных исследований по изучению полного спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене БМБ, что затрудняет оценку доли пациентов, для которых применимы существующие и доступные

методы патогенетической терапии. Анализ спектра позволит в полной мере оценить применимость подходов терапии, основанных на пропуске экзонов, на прочтении преждевременных стоп-кодонов и генозаместительной терапии среди российских пациентов.

Цель исследования

Цель: Определение спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов гена DMD для оценки долей пациентов с мышечной дистрофией Дюшенна/Беккера, подходящих для лечения существующими и перспективными методами патогенетической терапии.

Задачи, решаемые в ходе исследования:

1. Определить спектр патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене DMD, ответственном за МДД/МДБ, в выборке российских пациентов.

2. Установить возможные причины отличия спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов гена DMD у российских пациентов от такового в мировых регистрах больных.

3. Оценить применимость подхода терапии, основанной на пропуске экзонов, и сравнить с общими мировыми и европейскими данными.

4. Оценить применимость подхода терапии, основанной на прочтении преждевременных стоп-кодонов, и сравнить с общими мировыми и европейскими данными.

5. Оценить применимость генозаместительной терапии в выборке российских пациентов и сравнить с общими мировыми данными.

Научная новизна

Впервые в РФ проведено молекулярно-генетическое исследование одной из самых больших когорт в мире пациентов с мышечной дистрофией Дюшенна/Беккера с использованием всего арсенала современных молекулярно-генетических методов.

Впервые в группе российских пациентов с МДД/МДБ проведен анализ полного спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов и определены доли различных вариантов в гене ими, проведен анализ распределения нуклеотидных вариантов по последовательности гена, определены частые патогенные точковые варианты и изучена причина их распространенности. Кроме того, были проанализированы и предложены возможные причины отличия спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов гена ими у российских больных от представленных мировых и европейских данных.

Впервые в РФ определена доля потенциальных пациентов, подходящих под доступные виды этиопатогенетической терапии, оценена применимость терапии, направленной на прочтение преждевременных стоп-кодонов, экзон-скиппинга и генозаместительной терапии среди российских пациентов с МДД/МДБ.

Теоретическая и практическая значимость работы

Анализ спектра вариантов у пациентов с МДД на территории РФ позволил оценить долю вариантов и их распределение по гену. В ходе работы были определены особенности спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене ими среди российских пациентов. На основании полученных данных определены доли пациентов, для которых применимы существующие подходы патогенетической терапии, такие как прочтение преждевременных стоп-кодонов и пропуск экзонов 51, 53, 45. Также оценена применимость генозаместительной терапии на основе вирусных векторов среди пациентов в РФ с учетом имеющихся на настоящее время ограничений. Данная информация является существенно важной при определении конкретных групп пациентов, для которых доступна патогенетическая терапия. Кроме того, анализ спектра вариантов позволил выявить группы пациентов с повторяющимися и частыми вариантами, что имеет огромное значение для разработки в будущем потенциально новых типов патогенетической терапии. Результаты проведенной работы будут востребованы в научных, образовательных и медицинских организациях при проведении молекулярно-генетической диагностики и определении тактики лечения у пациентов с МДД.

Методология и методы диссертационного исследования

Методологической и теоретической основой диссертационного исследования явились научные работы отечественных и зарубежных исследователей в области нервно-мышечных заболеваний, в частности мышечной дистрофии Дюшенна/Беккера и поясно-конечностных мышечных дистрофий, молекулярно-генетических подходов к их диагностике, популяционных исследований и методов терапии.

В работе использованы следующие методы: молекулярно-генетические методы (выделение геномной ДНК из цельной крови, метод полимеразной цепной реакции, мультиплексная лигазозависимая амплификация проб (MRC-Holland MLPA), электрофорез в полиакриламидном геле, метод прямого автоматического секвенирование по Сенгеру, высокопроизводительное секвенирование с использованием таргетной панели генов, полногеномное секвенирование, метод анализа полиморфизма длин амплификационных фрагментов (ПДАФ), оценка неравновесия по сцеплению, методы статистической обработки данных и биоинформатического анализа данных массового параллельного секвенирования (МПС).

Положения, выносимые на защиту

1. Молекулярно-генетическая диагностика мышечной дистрофии Дюшенна/Беккера выполнена для 1871 пациентов из 1792 неродственных семей, направленных в ФГБНУ «МГНЦ» в рамках программы селективного скрининга. Патогенные и вероятно патогенные варианты в гене БМБ были выявлены в 1289 (71,9%) семьях методами мультиплексной лигазозависимой амплификации проб (MLPA) и массового параллельного секвенирования. В 199 (11,1%) семьях были обнаружены варианты в генах, ответственных за различные формы поясно-конечностных мышечных дистрофий, и в 304 (17,0%) не были идентифицированы причинные варианты, связанные с заболеванием.

2. В когорте из 1289 семей с направительным диагнозом мышечная дистрофия Дюшенна/Беккера был определен спектр патогенных/вероятно патогенных вариантов в гене БМБ. Доля протяженных делеций составила 48,1%, протяженных дупликаций -14,7%, точковых вариантов - 37,0%.

3. Секвенирование полного генома позволило выявить молекулярно-генетическую причину заболевания у 7 пробандов из исследуемых 62. Были обнаружены по одному случаю сбалансированной транслокации и перицентрической инверсии и пять патогенных глубоко интронных вариантов.

4. При сравнении спектра патогенных/вероятно патогенных вариантов гена ими в когорте российских пациентов с общими мировыми и европейскими данными было показано, что доля делеций в изученной выборке статистически значимо ниже (48,1% относительно представленных 68,5%), а доли дупликаций и точковых вариантов достоверно выше - 14,7% относительно 11,0% и 37,0% относительно 20,5%, соответственно.

5. Теоретическая применимость существующими и потенциальными методами терапии, основанной на пропуске экзонов, для российских больных составляет 31,0%, что достоверно ниже представленных ранее мировых данных (54,0%). Применимость существующих и доступных в РФ четырех препаратов для пропуска экзонов 51, 53 и 45 составляет 16,5%, что также статистически ниже общих мировых и европейских данных (42,3%).

6. Показано, что применимость подхода терапии, основанном на прочтении преждевременных стоп-кодонов, достоверно выше для российских больных (18,0%), по сравнению с общими мировыми и европейскими данными (10,0%). В связи с этим данный подход терапии является наиболее актуальным для пациентов в РФ.

7. Применимость генозаместительной терапии оказалась меньше ожидаемой и составила 12,6%, что в первую очередь связано с существующими на данный момент ограничениями по возрасту пациентов 4-8 лет.

Степень достоверности результатов

Результаты получены при исследовании репрезентативной выборки из 1792 семей, с направляющим диагнозом мышечная дистрофия Дюшенна/Беккера. Исследование проведено с использованием всего спектра современных молекулярно-генетических методов диагностики, методов статистического анализа и обработки данных. Для теоретического обоснования и сравнительного анализа было использовано большое количество как отечественных, так и зарубежных источников литературы. Результаты,

полученные в ходе исследования, наглядно представлены автором в виде таблиц и рисунков, что подтверждает выполнение поставленных задач. Выводы и заключения основаны на убедительных экспериментальных данных и в полной мере отражают результаты проведенного исследования.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

В соответствии с областями исследования специальности 1.5.7. Генетика (биологические науки) - п. 1 «Молекулярные и цитологические основы наследственности», п. 5 «Мутационная изменчивость», п. 19 «Генетика человека. Медицинская генетика. Наследственные болезни. Молекулярно-

генетическая/биохимическая диагностика заболеваний человека. Генетическая терапия», - работа включает в себя обсуждение генетики человека, медицинской генетики, моногенных наследственных заболеваний, спектров патогенных/вероятно патогенных вариантов в генах, используются молекулярно-генетические методы диагностики.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на 15 международных и всероссийских конференциях, среди которых European Human Genetics Conference 2022, Vienna, Austria; European Human Genetics Conference 2024, Berlin, Germany; 4-я Научно-практическая онлайн-конференция РОМГ «Новые технологии в диагностике и лечении наследственных болезней» 26-27 апреля 2022, Москва; Московская школа - Референс-центра орфанных заболеваний для детей: как не пропустить Миодистрофию Дюшенна

03.08.2022, Москва; Первый Евразийский форум по диагностике и лечению орфанных болезней "Содружество без границ" 27-28.10.2022, Москва; XIII научная конференция «Генетика человека и патология» 20-22.11.2022, Томск; Научно-практическая конференция РОМГ «Новые технологии в диагностике и лечении наследственных болезней» 7-8.12.2022, Москва; Образовательная школа Мнения экспертов РОМГ: обсуждение с членом-корреспондентом РАН А.В. Поляковым «Наследственные нервно-мышечные болезни». Выбор препарата для лечения в зависимости от типа мутации,

16.05.2023, Москва; Научно-практическая онлайн конференция РОМГ «Новые

технологии в диагностике и лечении наследственных болезней», 18.10.2023, Москва; Второй Евразийский форум по диагностике и лечению орфанных болезней "Содружество без границ", 26.10.2023, Москва; ХХ Юбилейные Вейновские чтения, 2024, Москва; MGNGS'24 - NGS в медицинской генетике, 24-26.04.2024, Суздаль; VI Всероссийский научно-практический конгресс с международным участием «Орфанные болезни», посвященный 55-летию Медико-генетической службы России и 55-летию «Медико-генетического научного центра имени академика Н.П. Бочкова» 20-21.06.2024, Москва; Четвертая Всероссийская конференция с международным участием «Миодистрофия Дюшенна: время имеет значение», 17.10.2024, Москва; Третий Евразийский форум по диагностике и лечению орфанных болезней «Содружество без границ», 23.10.2024, Москва

Работа одобрена этическим комитетом и прошла экспертную комиссию, рекомендована к защите на заседании Диссертационного совета 24.1.168.01 при Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Медико-генетический научный центр имени академика Н.П. Бочкова» (ФГБНУ «МГНЦ»).

Личный вклад автора в проведение исследования

Автор данной работы принимал непосредственное участие в определении целей и задач исследования, поиске и анализе литературных данных по теме настоящего исследования, в теоретическом анализе и разработке стратегии исследования. Автором была исследована геномная ДНК пациентов с применением всех использованных в работе молекулярно-генетических методов, были проанализированы и обработаны полученные данные, сформулированы результаты и выводы, написана рукопись. Результаты проведенной работы опубликованы в рецензируемых журналах, а также представлены на российских и зарубежных научных конференциях.

Публикации

Материалы диссертационной работы представлены в 10 печатных работах соискателя, в том числе в 8 статьях в журналах, рекомендованных ВАК при Минобрнауки России для соискателей ученой степени кандидата биологических наук (7 из них Web of

Science и/или Scopus). Основные результаты диссертации, а также её положения и выводы полностью представлены в опубликованных научных работах.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста, содержит 16 таблиц, 21 рисунок, приложение. Работа состоит из введения, обзора литературы, глав с изложением материалов, методов, результатов собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографического указателя, включающего 185 источников, из них 180 - зарубежные, 5 - российские.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общие сведения 1.1.1 История открытия и изучения мышечной дистрофии Дюшенна/Беккера

Наследственные нервно-мышечные заболевания - это гетерогенная группа состояний, характеризующихся нарушением функций мышц, двигательных нейронов, периферических нервов и нервно--мышечных синапсов [12]. Среди всех групп наследственных нервно-мышечных заболеваний наиболее распространенным и тяжелым заболеванием, встречающимся преимущественно у пациентов мужского пола, является мышечная дистрофия Дюшенна/Беккера (МДД/МДБ).

Согласно данным Национального института неврологических расстройств и инсульта (National Institute of Neurological Disorders and Stroke, USA), первые исторические сведения о МДД появились в 1830 году при описании шотландским физиологом Чарльзом Беллом (1774-1842) болезни, вызывающей прогрессирующую мышечную слабость и гипертрофию у мальчиков [13]. Впоследствии на протяжении десятилетий многими исследователями в разных странах были отмечены и описаны семьи с мальчиками, у которых наблюдались похожие клинические проявления в виде слабости мышц, без вовлечения центральной нервной системы. В 1861 году французским неврологом Гийомом Бенжамином Аманом Дюшенном (1806-1875) было подробно охарактеризовано заболевание - "парализующая мышечная псевдогипертрофия" - и были представлены в полном объеме клинические симптомы МДД [14]. Заболевание

-3 лет и характеризуется неуклюжей утиной походкой, трудностями при подъеме по лестнице и частыми падениями [15]. Также специфическими признаками МДД является наличие у пациентов псевдогипертрофии мышц голени и значительное повышение уровня креатинфосфокиназы (КФК) в крови. Согласно данным, без надлежащего ухода и терапии пациенты уже к возрасту 12 лет становятся прикованными к инвалидному креслу [16] (рисунок 1).

Рисунок 1 - Характерные клинические проявления у пациентов с МДД. А - вид сзади (крыловидные лопатки, псевдогипертрофия икроножных мышц). В - вид сбоку (усиление поясничного лордоза). C - сколиоз у пациентов с МДД [17]

Позднее в 1955 году немецкими учеными Петером Эмилем Беккером и Францем Кинером была описана мышечная дистрофия Беккера (МДБ), которая является аллельной формой МДД, со схожей клинической картиной, но, как правило, с более медленным течением, поздним началом и легкими клиническими проявлениями [14].

После подробного описания заболевания исследования патогенеза МДД продолжалось и в начале ХХ века был установлен тип наследования МДД - Х-сцепленный рецессивный [14], что гораздо сузило область поисков гена, ответственного за развитие МДД. Однако, долгое время ген не был идентифицирован. В начале 1980-х годов многократно было сообщено о случаях заболевания мышечной дистрофией у женщин, клинически похожей на МДД, и впоследствии у всех пациенток была обнаружена транслокация хромосомы Х с примерными границами точек разрыва в области Хр21 [18]. В результате чего было предположено, что именно в этом регионе будет находится ген, ответственный за развитие МДД. Впервые ген БМБ был идентифицирован на Х-хромосоме в 1986 г. в лаборатории Льюса Кункеля [19], и также в 1987 г. был определен белок дистрофин, что позволило установить связь между заболеванием и конкретным геном, а также в полной мере понять молекулярные механизмы патогенеза МДД [20].

Для объяснения фенотипических различий при МДД и МДБ Энтони Монако было предложено правило «открытой рамки считывания» [21], заключающееся в том, что клинические проявления МДД и МДБ зависят от влияния патогенного/вероятно патогенного варианта на рамку считывания. Для МДД характерна полная потеря синтеза дистрофина вследствие делеций/дупликаций, сдвигающих открытую рамку считывания. МДБ, как правило, вызывают патогенные/вероятно патогенные варианты, не приводящие к сдвигу рамки считывания, в результате чего вырабатывается укороченный, но частично функционально активный белок [1] [22] [23]. По оценкам около 90% пациентов соответствуют данному правилу [24].

1.1.2 Эпидемиология заболевания

Частота заболевания МДД во всем мире, согласно объединенным мировым данным, составляет 7,1 случаев на 100 000 мужчин и 2,8 случаев на 100 000 в общей популяции [25]. Однако, в различных исследованиях распространенность заболевания сильно варьирует. Так, например, при анализе международных регистров, было показано, что в США отмечается наибольшая общая заболеваемость МДД, которая составляет 5,1 на 100 000 человек, в Азии - 4,8 на 100 000 человек, а в Европе - 3,5 на 100 000 человек. Самая же низкая частота наблюдается в Африке - 1,7 на 100 000 человек, что вероятно связано с доступностью методов молекулярно-генетической диагностики [26]. Кроме того, эпидемиологические исследования МДД ведутся в многих странах, и данные также существенно различаются. Распространенность МДД в Италии составляет 10,71 на 100 000 человек [27], в Словении 5,7 на 100 000 человек [28], в Австралии 2,0 на 100 000 человек [29]. Такая разница показателей связана в первую очередь с различиями в размере исследуемых выборок, методах молекулярно-генетического и популяционного анализов. Также отсутствие доступных данных из многих стран и континентов не позволяет в полной мере оценить частоту заболевания, и согласно различным исследованиям и объединенным данным показатели распространенности отличаются и точные значения до сих пор остаются неизвестными [30].

Общемировая частота МДБ оценивается в 1,53-1,6 на 100 000 человек [26], однако, на сегодняшний день очень мало данных о распространенности МДБ, так как зачастую частота МДД/МДБ оценивается объединено. Кроме того, некоторые случаи МДБ могли

быть ошибочно диагностированы как другие мышечные дистрофии до проведения молекулярно-генетической диагностики, так как в раннем возрасте симптомы заболевания слабо выражены и провести дифференциальный диагноз достаточно трудно. В результате этого истинная распространенность МДБ также остается неизвестной [30].

В настоящее время данные о распространенности МДД/МДБ в Российской Федерации отсутствуют. Однако, в отдельных регионах РФ оценка частоты МДД/МДБ была проведена. Благодаря регистру наследственных нервно-мышечных заболеваний удалось установить среднюю распространенность МДД/МДБ в Республике Дагестан. Согласно представленным данным, она составляет 6,0±0,64 на 100 000 человек (1:33 321 мужчин) [31]. Также имеются данные о распространенности МДД в Ростовской области - 21,6 на 100 000 человек [32].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Зинина Елена Витальевна, 2025 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Bladen C.L. The TREAT-NMD DMD Global Database: Analysis of More than 7,000 Duchenne Muscular Dystrophy Mutations / Bladen C.L., Salgado D., Monges S., Lochmüller H. // Human Mutation - 2015. - Т. 36 - № 4 - С.395-402.

2. Yiu E.M. Duchenne muscular dystrophy / Yiu E.M., Kornberg A.J. // Journal of Paediatrics and Child Health - 2015. - Т. 51 - № 8 - С.759-764.

3. Waldrop M.A. Update in Duchenne and Becker muscular dystrophy / Waldrop M.A., Flanigan K.M. // Current Opinion in Neurology - 2019. - Т. 32 - № 5 - С.722-727.

4. Annexstad E.J. Duchennes muskeldystrofi / Annexstad E.J., Lund-Petersen I., Rasmussen M. // Tidsskrift for Den norske legeforening - 2014. - Т. 134 - № 14 - С.1361-1364.

5. Keegan N.P. Pseudoexons of the DMD Gene / Keegan N.P. // Journal of Neuromuscular Diseases - 2020. - Т. 7 - № 2 - С.77-95.

6. Sheikh O. Developing DMD therapeutics: a review of the effectiveness of small molecules, stop-codon readthrough, dystrophin gene replacement, and exon-skipping therapies / Sheikh O., Yokota T. // Expert Opinion on Investigational Drugs - 2021. - Т. 30 - № 2 - С.167-176.

7. Fortunato F. The DMD gene and therapeutic approaches to restore dystrophin / Fortunato F., Farne M., Ferlini A. // Neuromuscular Disorders - 2021. - Т. 31 - № 10 - С. 1013-1020.

8. Elangkovan N. Gene Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy / Elangkovan N., Dickson G. // Journal of Neuromuscular Diseases - 2021. - Т. 8 - № s2 - C.S303-S316.

9. Neri M. The Genetic Landscape of Dystrophin Mutations in Italy: A Nationwide Study / Neri M., Rossi R., Trabanelli C., Ferlini A. // Frontiers in Genetics - 2020. - Т. 11 - С.131.

10. Falzarano M. Duchenne Muscular Dystrophy: From Diagnosis to Therapy / Falzarano M., Scotton C., Passarelli C., Ferlini A. // Molecules - 2015. - Т. 20 - № 10 - С.18168-18184.

11. Babbs A. From diagnosis to therapy in Duchenne muscular dystrophy / Babbs A., Chatzopoulou M., Edwards B., Squire S.E., Wilkinson I.V.L., Wynne G.M., Russell A.J., Davies K.E. // Biochemical Society Transactions - 2020. - Т. 48 - № 3 - С.813-821.

12. Sun C. Therapeutic Strategies for Duchenne Muscular Dystrophy: An Update / Sun C., Shen L., Zhang Z., Xie X. // Genes - 2020. - Т. 11 - № 8 - С.837.

13. Huml R.A. Muscular Dystrophy: Historical Background and Types / под ред. R.A. Huml. Cham: Springer International Publishing, 2015. - 5-7с.

14. Gaynetdinova D.D. Current diagnosis and treatment of Duchenne muscular dystrophy / Gaynetdinova D.D., Novoselova A.A. // Kazan medical journal - 2020. - T. 101 - № 4 - C.530-537.

15. Duan D. Duchenne muscular dystrophy / Duan D., Goemans N., Takeda S., Mercuri E., Aartsma-Rus A. // Nature Reviews Disease Primers - 2021. - T. 7 - № 1 - C.13.

16. Evans B.K. Duchenne's Muscular Dystrophy: Review and Recent Scientific Findings / Evans B.K., Goyne C. // The American Journal of the Medical Sciences - 1991. - T. 302 - № 2

- C.118-123.

17. Heller K.D. Scoliosis in Duchenne muscular dystrophy: Aspects of orthotic treatment / Heller K.D., Forst R., Forst J., Hengstler K. // Prosthetics & Orthotics International - 1997. - T. 21 - № 3 - C.202-209.

18. The problem of Duchenne muscular dystrophy / // Philosophical Transactions of the Royal Society of London. B, Biological Sciences - 1988. - T. 319 - № 1194 - C.275-284.

19. Koenig M. Complete cloning of the duchenne muscular dystrophy (DMD) cDNA and preliminary genomic organization of the DMD gene in normal and affected individuals / Koenig M., Hoffman E.P., Bertelson C.J., Monaco A.P., Feener C., Kunkel L.M. // Cell - 1987. - T. 50

- № 3 - C.509-517.

20. Hoffman E.P. The discovery of dystrophin, the protein product of the Duchenne muscular dystrophy gene / Hoffman E.P. // The FEBS Journal - 2020. - T. 287 - № 18 - C.3879-3887.

21. Monaco A.P. An explanation for the phenotypic differences between patients bearing partial deletions of the DMD locus / Monaco A.P., Bertelson C.J., Liechti-Gallati S., Moser H., Kunkel L.M. // Genomics - 1988. - T. 2 - № 1 - C.90-95.

22. Flanigan K.M. Duchenne and Becker Muscular Dystrophies / Flanigan K.M. // Neurologic Clinics - 2014. - T. 32 - № 3 - C.671-688.

23. Matsuo M. Duchenne and Becker Muscular Dystrophy: From Gene Diagnosis to Molecular Therapy / Matsuo M. // IUBMB Life - 2002. - T. 53 - № 3 - C. 147-152.

24. Aartsma-Rus A. Entries in the Leiden Duchenne muscular dystrophy mutation database: An overview of mutation types and paradoxical cases that confirm the reading-frame rule / Aartsma-Rus A., Van Deutekom J.C.T., Fokkema I.F., Van Ommen G.B., Den Dunnen J.T. // Muscle & Nerve - 2006. - T. 34 - № 2 - C.135-144.

25. Crisafulli S. Global epidemiology of Duchenne muscular dystrophy: an updated systematic review and meta-analysis / Crisafulli S., Sultana J., Fontana A., Salvo F., Messina S., Trifiro G. // Orphanet Journal of Rare Diseases - 2020. - Т. 15 - № 1 - С.141.

26. Salari N. Global prevalence of Duchenne and Becker muscular dystrophy: a systematic review and meta-analysis / Salari N., Fatahi B., Valipour E., Kazeminia M., Fatahian R., Kiaei A., Shohaimi S., Mohammadi M. // Journal of Orthopaedic Surgery and Research - 2022. - Т. 17 - № 1 - С.96.

27. Orso M. Duchenne muscular dystrophy in Italy: A systematic review of epidemiology, quality of life, treatment adherence, and economic impact / Orso M., Migliore A., Polistena B., Russo E., Gatto F., Monterubbianesi M., Angela D. d', Spandonaro F., Pane M. // PLOS ONE - 2023. - Т. 18 - № 6 - C.e0287774.

28. Peterlin B. Genetic epidemiology of Duchenne and Becker muscular dystrophy in Slovenia / Peterlin B., Zidar J., Meznaric-Petrusa M., Zupancic N. // Clinical Genetics - 1997. - Т. 51 -№ 2 - С.94-97.

29. Kariyawasam D. Incidence of Duchenne muscular dystrophy in the modern era; an Australian study / Kariyawasam D., D'Silva A., Mowat D., Russell J., Sampaio H., Jones K., Taylor P., Farrar M. // European Journal of Human Genetics - 2022. - Т. 30 - № 12 - С.1398-1404.

30. Mah J.K. A systematic review and meta-analysis on the epidemiology of Duchenne and Becker muscular dystrophy / Mah J.K., Korngut L., Dykeman J., Day L., Pringsheim T., Jette N. // Neuromuscular Disorders - 2014. - Т. 24 - № 6 - С.482-491.

31. Ахмедова П.Г. Распространённость прогрессирующих мышечных дистрофий Дюшенна/Беккера в республике Дагестан (по данным регистра нервно-мышечных заболеваний). / Угаров И.В., Умаханова З.Р., Зинченко Р.А., Гинтер Е.К. // Медицинская генетика. 2015;14(1):20-24.

32. Зинченко Р.А. Нозологический спектр частой наследственной патологии среди детского населения Ростовской области. / Амелина С.С., Ветрова Н.В., Амелина М.А., Пономарева Т.И., Вальков Р.А., Петрова Н.В., Петрина Н.Е., Степанова А.А., Поляков А.В., Дегтерева Е.В., Каширская Н.Ю.// Педиатрия. Журнал им. Г. Н. Сперанского, vol. 98, no. 1, 2019, pp. 236-241.

33. Blake D.J. Function and Genetics of Dystrophin and Dystrophin-Related Proteins in Muscle / Blake D.J., Weir A., Newey S.E., Davies K.E. // Physiological Reviews - 2002. - Т. 82 - № 2

- С.291-329.

34. Broderick M.J.F. Spectrin, a-Actinin, and Dystrophin Elsevier, 2005. - 203-246с.

35. Elasbali A.M. A review on mechanistic insights into structure and function of dystrophin protein in pathophysiology and therapeutic targeting of Duchenne muscular dystrophy / Elasbali

A.M., Al-Soud W.A., Anwar S., Alhassan H.H., Adnan M., Hassan Md.I. // International Journal of Biological Macromolecules - 2024. - Т. 264 - С.130544.

36. Gao Q.Q. The Dystrophin Complex: Structure, Function, and Implications for Therapy / под ред. R. Terjung. Wiley, 2015. Вып. 1 - 1223-1239с.

37. Guhathakurta P. Enhancing interaction of actin and actin-binding domain 1 of dystrophin with modulators: Toward improved gene therapy for Duchenne muscular dystrophy / Guhathakurta P., Carter A.L., Thompson A.R., Kurila D., LaFrence J., Zhang L., Trask J.R., Vanderheyden B., Muretta J.M., Ervasti J.M., Thomas D.D. // Journal of Biological Chemistry

- 2022. - Т. 298 - № 12 - С.102675.

38. Constantin B. Dystrophin complex functions as a scaffold for signalling proteins / Constantin

B. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes - 2014. - Т. 1838 - № 2 - С.635-642.

39. Mirouse V. Evolution and developmental functions of the dystrophin-associated protein complex: beyond the idea of a muscle-specific cell adhesion complex / Mirouse V. // Frontiers in Cell and Developmental Biology - 2023. - Т. 11 - С. 1182524.

40. Muthu M. The Crystal Structures of Dystrophin and Utrophin Spectrin Repeats: Implications for Domain Boundaries / Muthu M., Richardson K.A., Sutherland-Smith A.J. // PLoS ONE -2012. - Т. 7 - № 7 - C.e40066.

41. Vulin A. The ZZ Domain of Dystrophin in DMD: Making Sense of Missense Mutations / Vulin A., Wein N., Strandjord D.M., Johnson E.K., Findlay A.R., Maiti B., Howard M.T., Kaminoh Y.J., Taylor L.E., Simmons T.R., Ray W.C., Montanaro F., Ervasti J.M., Flanigan K.M. // Human Mutation - 2014. - Т. 35 - № 2 - С.257-264.

42. Zhao J. Dystrophin contains multiple independent membrane-binding domains / Zhao J., Kodippili K., Yue Y., Hakim C.H., Wasala L., Pan X., Zhang K., Yang N.N., Duan D., Lai Y. // Human Molecular Genetics - 2016. - Т. 25 - № 17 - С.3647-3653.

43. Harper S.Q. Molecular dissection of dystrophin identifies the docking site for nNOS / Harper S.Q. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2013. - T. 110 - № 2 - C.387-388.

44. Canessa E.H. Characterization of the dystrophin-associated protein complex by mass spectrometry / Canessa E.H., Spathis R., Novak J.S., Beedle A., Nagaraju K., Bello L., Pegoraro E., Hoffman E.P., Hathout Y. // Mass Spectrometry Reviews - 2024. - T. 43 - № 1 - C.90-105.

45. Gawor M. The molecular cross talk of the dystrophin-glycoprotein complex / Gawor M., Proszynski T.J. // Annals of the New York Academy of Sciences - 2018. - T. 1412 - № 1 -C.62-72.

46. Ehmsen J. The dystrophin-associated protein complex / Ehmsen J., Poon E., Davies K. // Journal of Cell Science - 2002. - T. 115 - № 14 - C.2801-2803.

47. Sander M. Functional muscle ischemia in neuronal nitric oxide synthase-deficient skeletal muscle of children with Duchenne muscular dystrophy / Sander M., Chavoshan B., Harris S.A., Iannaccone S.T., Stull J.T., Thomas G.D., Victor R.G. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2000. - T. 97 - № 25 - C. 13818-13823.

48. Lapidos K.A. The Dystrophin Glycoprotein Complex: Signaling Strength and Integrity for the Sarcolemma / Lapidos K.A., Kakkar R., McNally E.M. // Circulation Research - 2004. - T. 94 - № 8 - C.1023-1031.

49. Dowling J.J. Molecular and cellular basis of genetically inherited skeletal muscle disorders / Dowling J.J., Weihl C.C., Spencer M.J. // Nature Reviews Molecular Cell Biology - 2021. -T. 22 - № 11 - C.713-732.

50. Wilson D.G.S. The role of the dystrophin glycoprotein complex in muscle cell mechanotransduction / Wilson D.G.S., Tinker A., Iskratsch T. // Communications Biology -2022. - T. 5 - № 1 - C.1022.

51. Bez Batti Angulski A. Duchenne muscular dystrophy: disease mechanism and therapeutic strategies / Bez Batti Angulski A., Hosny N., Cohen H., Martin A.A., Hahn D., Bauer J., Metzger J.M. // Frontiers in Physiology - 2023. - T. 14 - C.1183101.

52. Nowak K.J. Duchenne muscular dystrophy and dystrophin: pathogenesis and opportunities for treatment: Third in Molecular Medicine Review Series / Nowak K.J., Davies K.E. // EMBO reports - 2004. - T. 5 - № 9 - C.872-876.

53. Pilgram G.S.K. The Roles of the Dystrophin-Associated Glycoprotein Complex at the Synapse / Pilgram G.S.K., Potikanond S., Baines R.A., Fradkin L.G., Noordermeer J.N. // Molecular Neurobiology - 2010. - T. 41 - № 1 - C.1-21.

54. Chang N.C. The Dystrophin Glycoprotein Complex Regulates the Epigenetic Activation of Muscle Stem Cell Commitment / Chang N.C., Sincennes M.-C., Chevalier F.P., Bran C.E., Lacaria M., Segales J., Munoz-Canoves P., Ming H., Rudnicki M.A. // Cell Stem Cell - 2018. -T. 22 - № 5 - C.755- 768.e6.

55. Chang M. Duchenne muscular dystrophy: pathogenesis and promising therapies / Chang M., Cai Y., Gao Z., Chen X., Liu B., Zhang C., Yu W., Cao Q., Shen Y., Yao X., Chen X., Sun H. // Journal of Neurology - 2023. - T. 270 - № 8 - C.3733-3749.

56. Shoji E. Early pathogenesis of Duchenne muscular dystrophy modelled in patient-derived human induced pluripotent stem cells / Shoji E., Sakurai H., Nishino T., Nakahata T., Heike T., Awaya T., Fujii N., Manabe Y., Matsuo M., Sehara-Fujisawa A. // Scientific Reports - 2015. -T. 5 - № 1 - C.12831.

57. Fortunato F. The DMD gene and therapeutic approaches to restore dystrophin / Fortunato

F., Fame M., Ferlini A. // Neuromuscular Disorders - 2021. - T. 31 - № 10 - C. 1013-1020.

58. Muntoni F. Dystrophin and mutations: one gene, several proteins, multiple phenotypes / Muntoni F., Torelli S., Ferlini A. // The Lancet Neurology - 2003. - T. 2 - № 12 - C.731-740.

59. Gherardi S. Transcriptional and epigenetic analyses of the DMD locus reveal novel cis -acting DNA elements that govern muscle dystrophin expression / Gherardi S., Bovolenta M., Passarelli C., Falzarano M.S., Pigini P., Scotton C., Neri M., Armaroli A., Osman H., Selvatici R., Gualandi F., Recchia A., Mora M., Bernasconi P., Maggi L., Morandi L., Ferlini A., Perini

G. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Gene Regulatory Mechanisms - 2017. - T. 1860 - № 11 - C.1138-1147.

60. Chesshyre M. Investigating the role of dystrophin isoform deficiency in motor function in Duchenne muscular dystrophy / Chesshyre M., Ridout D., Hashimoto Y., Ookubo Y., Torelli S., Maresh K., Ricotti V., Abbott L., Gupta V.A., Main M., Ferrari G., Kowala A., Lin Y., Tedesco F.S., Scoto M., Baranello G., Manzur A., Aoki Y., Muntoni F. // Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle - 2022. - T. 13 - № 2 - C. 1360-1372.

61. Falzarano M. Duchenne Muscular Dystrophy: From Diagnosis to Therapy / Falzarano M., Scotton C., Passarelli C., Ferlini A. // Molecules - 2015. - T. 20 - № 10 - C.18168-18184.

62. Beggs AlanH. Detection of 98% of DMD/BMD gene deletions by polymerase chain reaction / Beggs AlanH., Koenig M., Boyce FrederickM., Kunkel LouisM. // Human Genetics - 1990. -T. 86 - № 1.

63. Bieber F.R. Duchenne and Becker muscular dystrophies: genetics, prenatal diagnosis, and future prospects / Bieber F.R., Hoffman E.P. // Clinics in Perinatology - 1990. - T. 17 - № 4 -C.845-865.

64. Ferlini A. The medical genetics of dystrophinopathies: Molecular genetic diagnosis and its impact on clinical practice / Ferlini A., Neri M., Gualandi F. // Neuromuscular Disorders - 2013.

- T. 23 - № 1 - C.4-14.

65. Suzuki H. Nested introns in an intron: Evidence of multi-step splicing in a large intron of the human dystrophin pre-mRNA / Suzuki H., Kameyama T., Ohe K., Tsukahara T., Mayeda A. // FEBS Letters - 2013. - T. 587 - № 6 - C.555-561.

66. Geng C. Sequence and Structure Characteristics of 22 Deletion Breakpoints in Intron 44 of the DMD Gene Based on Long-Read Sequencing / Geng C., Tong Y., Zhang S., Ling C., Wu X., Wang D., Dai Y. // Frontiers in Genetics - 2021. - T. 12 - C.638220.

67. Tayeb M.T. Deletion mutations in Duchenne muscular dystrophy (DMD) in Western Saudi children / Tayeb M.T. // Saudi Journal of Biological Sciences - 2010. - T. 17 - № 3 - C.237-240.

68. Fortunato F. The DMD gene and therapeutic approaches to restore dystrophin / Fortunato F., Farne M., Ferlini A. // Neuromuscular Disorders - 2021. - T. 31 - № 10 - C. 1013-1020.

69. Aartsma-Rus A. The importance of genetic diagnosis for Duchenne muscular dystrophy / Aartsma-Rus A., Ginjaar I.B., Bushby K. // Journal of Medical Genetics - 2016. - T. 53 - № 3

- C.145-151.

70. Gatto F. The complex landscape of DMD mutations: moving towards personalized medicine / Gatto F., Benemei S., Piluso G., Bello L. // Frontiers in Genetics - 2024. - T. 15 - C.1360224.

71. Flanigan K.M. Duchenne and Becker Muscular Dystrophies / Flanigan K.M. // Neurologic Clinics - 2014. - T. 32 - № 3 - C.671-688.

72. Matsuo M. Duchenne and Becker Muscular Dystrophy: From Gene Diagnosis to Molecular Therapy / Matsuo M. // IUBMB Life - 2002. - T. 53 - № 3 - C. 147-152.

73. https://compbio.berkeley.edu/people/ed/rust/Dystrophin.html.

74. Kansu A. The frequency of Duchenne muscular dystrophy/Becker muscular dystrophy and Pompe disease in children with isolated transaminase elevation: results from the observational VICTORIA study / Kansu A., Kuloglu Z., Tumgor G., Ta§km D.G., Dalgi? B., £altepe G., Demiroren K., Dogan G., Tuna Kirsa?hoglu C., Arslan D., I§ik i.A., Demir H., Bekem O., §ahin

Y., Bayrak N.A., Selimoglu M.A., Yavuz S., Ta§kaya I.E., Altay D., the VICTORIA Study Group // Frontiers in Pediatrics - 2023. - T. 11 - C.1272177.

75. Chunkayeva D. A review of diagnosis of Duchenne and Becker muscular dystrophy / Chunkayeva D., Jaxybayeva A. // Journal of Clinical Medicine of Kazakhstan - 2021. - T. 18 -№ 5 - C.6-10.

76. Hrach H.C. miRNA Profiling for Early Detection and Treatment of Duchenne Muscular Dystrophy / Hrach H.C., Mangone M. // International Journal of Molecular Sciences - 2019. -T. 20 - № 18 - C.4638.

77. Okubo M. Genetic diagnosis of Duchenne/Becker muscular dystrophy using next-generation sequencing: validation analysis of DMD mutations / Okubo M., Minami N., Goto K., Goto Y., Noguchi S., Mitsuhashi S., Nishino I. // Journal of Human Genetics - 2016. - T. 61 - № 6 -C.483-489.

78. Fratter C. EMQN best practice guidelines for genetic testing in dystrophinopathies / Fratter C., Dalgleish R., Allen S.K., Santos R., Abbs S., Tuffery-Giraud S., Ferlini A. // European Journal of Human Genetics - 2020. - T. 28 - № 9 - C.1141-1159.

79. Laing N.G. Molecular diagnosis of duchenne muscular dystrophy: past, present and future in relation to implementing therapies / Laing N.G., Davis M.R., Bayley K., Fletcher S., Wilton S.D. // The Clinical Biochemist. Reviews - 2011. - T. 32 - № 3 - C.129-134.

80. Abbs S. Best Practice Guidelines on molecular diagnostics in Duchenne/Becker muscular dystrophies / Abbs S., Tuffery-Giraud S., Bakker E., Ferlini A., Sejersen T., Mueller C.R. // Neuromuscular Disorders - 2010. - T. 20 - № 6 - C.422-427.

81. Zhang K. Molecular genetic testing and diagnosis strategies for dystrophinopathies in the era of next generation sequencing / Zhang K., Yang X., Lin G., Han Y., Li J. // Clinica Chimica Acta - 2019. - T. 491 - C.66-73.

82. Nallamilli B.R.R. Molecular Diagnosis of Duchenne Muscular Dystrophy Using Single NGS-Based Assay / Nallamilli B.R.R., Guruju N., Jump V., Liu R., Hegde M. // Current Protocols - 2023. - T. 3 - № 2 - C.e669.

83. Ishmukhametova A. Comprehensive oligonucleotide array-comparative genomic hybridization analysis: new insights into the molecular pathology of the DMD gene / Ishmukhametova A., Van Kien P.K., Mechin D., Thorel D., Vincent M.-C., Rivier F., Coubes C., Humbertclaude V., Claustres M., Tuffery-Giraud S. // European Journal of Human Genetics - 2012. - T. 20 - № 10 - C.1096-1100.

84. Waldrop M.A. Intron mutations and early transcription termination in Duchenne and Becker muscular dystrophy / Waldrop M.A., Moore S.A., Mathews K.D., Darbro B.W., Medne L., Finkel R., Connolly A.M., Crawford T.O., Drachman D., Wein N., Habib A.A., Krzesniak-Swinarska M.A., Zaidman C.M., Collins J.J., Jokela M., Udd B., Day J.W., Ortiz-Guerrero G., Statland J., Butterfield R.J., Dunn D.M., Weiss R.B., Flanigan K.M. // Human Mutation - 2022.

- T. 43 - № 4 - C.511-528.

85. Lauffer M.C. Possibilities and limitations of antisense oligonucleotide therapies for the treatment of monogenic disorders / Lauffer M.C., Van Roon-Mom W., Aartsma-Rus A., N = 1 Collaborative // Communications Medicine - 2024. - T. 4 - № 1 - C.6.

86. Collotta D. Antisense oligonucleotides: a novel Frontier in pharmacological strategy / Collotta D., Bertocchi I., Chiapello E., Collino M. // Frontiers in Pharmacology - 2023. - T. 14

- C.1304342.

87. Dominski Z. Restoration of correct splicing in thalassemic pre-mRNA by antisense oligonucleotides. / Dominski Z., Kole R. // Proceedings of the National Academy of Sciences -1993. - T. 90 - № 18 - C.8673-8677.

88. Aartsma-Rus A. Antisense-mediated exon skipping: A versatile tool with therapeutic and research applications / Aartsma-Rus A., Van Ommen G.-J.B. // RNA - 2007. - T. 13 - № 10 -C.1609-1624.

89. Schneider A.-F.E. Developments in reading frame restoring therapy approaches for Duchenne muscular dystrophy / Schneider A.-F.E., Aartsma-Rus A. // Expert Opinion on Biological Therapy - 2021. - T. 21 - № 3 - C.343-359.

90. Takeda S. Exon-Skipping in Duchenne Muscular Dystrophy / Takeda S., Clemens P.R., Hoffman E.P. // Journal of Neuromuscular Diseases - 2021. - T. 8 - № s2 - C.S343-S358.

91. Yokota T. Optimizing exon skipping therapies for DMD / Yokota T., Duddy W., Partridge T. // Acta Myologica: Myopathies and Cardiomyopathies: Official Journal of the Mediterranean Society of Myology - 2007. - T. 26 - № 3 - C.179-184.

92. Lim K.R. Eteplirsen in the treatment of Duchenne muscular dystrophy / Lim K.R., Maruyama R., Yokota T. // Drug Design, Development and Therapy - 2017. - T. Volume11 -C.533-545.

93. Eser G. Current Outline of Exon Skipping Trials in Duchenne Muscular Dystrophy / Eser G., Topaloglu H. // Genes - 2022. - T. 13 - № 7 - C.1241.

94. Aartsma-Rus A. Theoretic applicability of antisense-mediated exon skipping for Duchenne muscular dystrophy mutations / Aartsma-Rus A., Fokkema I., Verschuuren J., Ginjaar I., Van Deutekom J., Van Ommen G.-J., Den Dunnen J.T. // Human Mutation - 2009. - T. 30 - № 3 -C.293-299.

95. Brolin C. Antisense mediated exon skipping therapy for duchenne muscular dystrophy (DMD) / Brolin C., Shiraishi T. // Artificial DNA: PNA & XNA - 2011. - T. 2 - № 1 - C.6-15.

96. Wood M.J.A. RNA-targeted splice-correction therapy for neuromuscular disease / Wood M.J.A., Gait M.J., Yin H. // Brain - 2010. - T. 133 - № 4 - C.957-972.

97. Artemyeva S.B. Modern methods of therapy of Duchenne muscular dystrophy: literature review with a clinical case / Artemyeva S.B., Shidlovskaya O.A., Papina Yu.O., Monakhova A.V., Shulyakov I.V., Vlodavets D.V. // Neuromuscular Diseases - 2024. - T. 13 - № 4 -C.103-112.

98. Krishna L. Molecular and Biochemical Therapeutic Strategies for Duchenne Muscular Dystrophy / Krishna L., Prashant A., Kumar Y.H., Paneyala S., Patil S.J., Ramachandra S.C., Vishwanath P. // Neurology International - 2024. - T. 16 - № 4 - C.731-760.

99. Susorov D. mRNA-specific readthrough of nonsense codons by antisense oligonucleotides (R-ASOs) / Susorov D., Echeverria D., Khvorova A., Korostelev A.A. // Nucleic Acids Research - 2024. - T. 52 - № 15 - C.8687-8701.

100. Palma M. Deciphering the molecular mechanism of stop codon readthrough / Palma M., Lejeune F. // Biological Reviews - 2021. - T. 96 - № 1 - C.310-329.

101. Kellermayer R. Translational readthrough induction of pathogenic nonsense mutations / Kellermayer R. // European Journal of Medical Genetics - 2006. - T. 49 - № 6 - C.445-450.

102. Torella A. The position of nonsense mutations can predict the phenotype severity: A survey on the DMD gene / Torella A., Zanobio M., Zeuli R., Del Vecchio Blanco F., Savarese M., Giugliano T., Garofalo A., Piluso G., Politano L., Nigro V. // PLOS ONE - 2020. - T. 15 - № 8 - C.e0237803.

103. Mercuri E. Safety and effectiveness of ataluren in patients with nonsense mutation DMD in the STRIDE Registry compared with the CINRG Duchenne Natural History Study (20152022): 2022 interim analysis / Mercuri E., Osorio A.N., Muntoni F., Buccella F., Desguerre I., Kirschner J., Tulinius M., De Resende M.B.D., Morgenroth L.P., Gordish-Dressman H., Johnson S., Kristensen A., Werner C., Trifillis P., Henricson E.K., McDonald C.M., the STRIDE

and CINRG DNHS investigators // Journal of Neurology - 2023. - Т. 270 - № 8 - С.3896-3913.

104. Michorowska S. Ataluren-Promising Therapeutic Premature Termination Codon Readthrough Frontrunner / Michorowska S. // Pharmaceuticals (Basel, Switzerland) - 2021. -Т. 14 - № 8 - С.785.

105. Кекеева Т.Н. Опыт применения препарата аталурен при миодистрофии Дюшенна в Москве: первые итоги. /Печатникова Н.Л., Витковская И.П., Какаулина В.С., Краснощекова Н.А., Мартыненко Ю.Е. // Нервно-мышечные болезни 2023;13(4):56-61. https://doi.org/10.17650/2222-8721-2023-13-4-56-61 / Кекеева Т.Н.

106. Bertoni C. Clinical potential of ataluren in the treatment of Duchenne muscular dystrophy / Bertoni C., Namgoong J. // Degenerative Neurological and Neuromuscular Disease - 2016. -С.37.

107. Loboda A. Muscle and cardiac therapeutic strategies for Duchenne muscular dystrophy: past, present, and future / Loboda A., Dulak J. // Pharmacological Reports - 2020. - Т. 72 - № 5 - С.1227-1263.

108. Le Guiner C. Evaluation of an AAV9-mini-dystrophin gene therapy candidate in a rat model of Duchenne muscular dystrophy / Le Guiner C., Xiao X., Larcher T., Lafoux A., Huchet C., Toumaniantz G., Adjali O., Anegon I., Remy S., Grieger J., Li J., Farrokhi V., Neubert H., Owens J., McIntyre M., Moullier P., Samulski R.J. // Molecular Therapy - Methods & Clinical Development - 2023. - Т. 30 - С.30-47.

109. Hart C.C. Potential limitations of microdystrophin gene therapy for Duchenne muscular dystrophy / Hart C.C., Lee Y.I., Xie J., Gao G., Lin B.L., Hammers D.W., Sweeney H.L. // JCI Insight - 2024. - Т. 9 - № 11 - C.e165869.

110. Palmieri L. In Silico Structural Prediction for the Generation of Novel Performant Midi-Dystrophins Based on Intein-Mediated Dual AAV Approach / Palmieri L., Ferrand M., Vu Hong A., Richard I., Albini S. // International Journal of Molecular Sciences - 2024. - Т. 25 - № 19 - С.10444.

111. Patterson G. Duchenne muscular dystrophy: Current treatment and emerging exon skipping and gene therapy approach / Patterson G., Conner H., Groneman M., Blavo C., Parmar M.S. // European Journal of Pharmacology - 2023. - Т. 947 - С.175675.

112. https://dmdhelp.org/about-us/our-projects/.

113. Solano L. Novel gene therapies for sickle cell disease, Duchenne muscular dystrophy, and hemophilia A / Solano L. // JAAPA - 2024. - T. 37 - № 11 - C.17-22.

114. Mendell J.R. Practical Considerations for Delandistrogene Moxeparvovec Gene Therapy in Patients With Duchenne Muscular Dystrophy / Mendell J.R., Proud C., Zaidman C.M., Mason S., Darton E., Wang S., Wandel C., Murphy A.P., Mercuri E., Muntoni F., McDonald C.M. // Pediatric Neurology - 2024. - T. 153 - C.11-18.

115. Tominari T. Clinical development of novel therapies for Duchenne muscular dystrophy— Current and future / Tominari T., Aoki Y. // Neurology and Clinical Neuroscience - 2023. - T. 11 - № 3 - C.111-118.

116. Happi Mbakam C. CRISPR-Cas9 Gene Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy / Happi Mbakam C., Lamothe G., Tremblay G., Tremblay J.P. // Neurotherapeutics - 2022. - T. 19 - № 3 - C.931-941.

117. Yao S. Current Pharmacological Strategies for Duchenne Muscular Dystrophy / Yao S., Chen Z., Yu Y., Zhang N., Jiang H., Zhang G., Zhang Z., Zhang B. // Frontiers in Cell and Developmental Biology - 2021. - T. 9 - C.689533.

118. Fortunato F. Innovative Therapeutic Approaches for Duchenne Muscular Dystrophy / Fortunato F., Rossi R., Falzarano M.S., Ferlini A. // Journal of Clinical Medicine - 2021. - T. 10 - № 4 - C.820.

119. Sengupta K. Genome Editing-Mediated Utrophin Upregulation in Duchenne Muscular Dystrophy Stem Cells / Sengupta K., Mishra M.K., Loro E., Spencer M.J., Pyle A.D., Khurana T.S. // Molecular Therapy - Nucleic Acids - 2020. - T. 22 - C.500-509.

120. Andrysiak K. Upregulation of utrophin improves the phenotype of Duchenne muscular dystrophy hiPSC-derived CMs / Andrysiak K., Ferdek P.E., Sanetra A.M., Machaj G., Schmidt L., Kraszewska I., Sarad K., Palus-Chramiec K., Lis O., Targosz-Korecka M., Krüger M., Lewandowski M.H., Ylla G., St^pniewski J., Dulak J. // Molecular Therapy - Nucleic Acids -2024. - T. 35 - № 3 - C.102247.

121. Roberts T.C. Therapeutic approaches for Duchenne muscular dystrophy / Roberts T.C., Wood M.J.A., Davies K.E. // Nature Reviews Drug Discovery - 2023. - T. 22 - № 11 - C.917-934.

122. Soblechero-Martín P. Utrophin modulator drugs as potential therapies for Duchenne and Becker muscular dystrophies / Soblechero-Martín P., López-Martínez A., De La Puente-Ovejero

L., Vallejo-Illarramendi A., Arechavala-Gomeza V. // Neuropathology and Applied Neurobiology - 2021. - Т. 47 - № 6 - С.711-723.

123. Aartsma-Rus A. Histone deacetylase inhibition with givinostat: a multi-targeted mode of action with the potential to halt the pathological cascade of Duchenne muscular dystrophy / Aartsma-Rus A. // Frontiers in Cell and Developmental Biology - 2025. - Т. 12 - С.1514898.

124. Bettica P. Histological effects of givinostat in boys with Duchenne muscular dystrophy / Bettica P., Petrini S., D'Oria V., D'Amico A., Catteruccia M., Pane M., Sivo S., Magri F., Brajkovic S., Messina S., Vita G.L., Gatti B., Moggio M., Puri P.L., Rocchetti M., De Nicolao G., Vita G., Comi G.P., Bertini E., Mercuri E. // Neuromuscular Disorders - 2016. - Т. 26 - № 10 - С.643-649.

125. Mercuri E. Safety and efficacy of givinostat in boys with Duchenne muscular dystrophy (EPIDYS): a multicentre, randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial / Mercuri E., Vilchez J.J., Boespflug-Tanguy O., Willis T. // The Lancet Neurology - 2024. - Т. 23 - № 4 - С.393-403.

126. Richards S. Standards and guidelines for the interpretation of sequence variants: a joint consensus recommendation of the American College of Medical Genetics and Genomics and the Association for Molecular Pathology / Richards S., Aziz N., Bale S., Bick D., Das S., Gastier-Foster J., Grody W.W., Hegde M., Lyon E., Spector E., Voelkerding K., Rehm H.L. // Genetics in Medicine - 2015. - Т. 17 - № 5 - С.405-424.

127. Рыжкова О.П. Руководство по интерпретации данных последовательности ДНК человека, полученных методами массового параллельного секвенирования (MPS) (редакция 2018, версия 2) / Рыжкова О.П., Кардымон О.Л., Прохорчук Е.Б., Коновалов Ф.А., Масленников А.Б., Степанов В.А., Афанасьев А.А., Заклязьминская Е.В., Ребриков Д.В., Савостьянов К.В., Глотов А.С., Костарева А.А., Павлов А.Е., Голубенко М.В., Поляков А.В., Куцев С.И. // Nauchno-prakticheskii zhurnal «Medicinskaia genetika» - 2020. - № 2() - С.3-23.

128. Elangkovan N. Gene Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy / Elangkovan N., Dickson G. // Journal of Neuromuscular Diseases - 2021. - Т. 8 - № s2 - CS303-S316.

129. Fortunato F. DMD deletions underlining mild dystrophinopathies: literature review highlights phenotype-related mutation clusters and provides insights about genetic mechanisms and prognosis / Fortunato F., Tonelli L., Fame M., Selvatici R., Ferlini A. // Frontiers in Neurology - 2024. - Т. 14 - С.1288721.

130. Tayeb M.T. Deletion mutations in Duchenne muscular dystrophy (DMD) in Western Saudi children / Tayeb M.T. // Saudi Journal of Biological Sciences - 2010. - T. 17 - № 3 - C.237-240.

131. Thakur N. The spectrum of deletions and duplications in the dystrophin (DMD) gene in a cohort of patients with Duchenne muscular dystrophy in Sri Lanka / Thakur N., Abeysekera G., Wanigasinghe J., Dissanayake V. // Neurology India - 2019. - T. 67 - № 3 - C.714.

132. Vieitez I. Mutational spectrum of Duchenne muscular dystrophy in Spain: study of 284 cases / Vieitez I., Gallano P., González-Quereda L., Borrego S., Marcos I., Millán J.M., Jairo T., Prior C., Molano J., Trujillo-Tiebas M.J., Gallego-Merlo J., García-Barcina M., Fenollar M., Navarro C. // Neurología (English Edition) - 2017. - T. 32 - № 6 - C.377-385.

133. White S.J. Duplications in theDMD gene / White S.J., Aartsma-Rus A., Flanigan K.M., Weiss R.B., Kneppers A.L.J., Lalic T., Janson A.A.M., Ginjaar H.B., Breuning M.H., Den Dunnen J.T. // Human Mutation - 2006. - T. 27 - № 9 - C.938-945.

134. Flanigan K.M. Mutational spectrum of DMD mutations in dystrophinopathy patients: application of modern diagnostic techniques to a large cohort / Flanigan K.M., Dunn D.M., Von Niederhausern A., Soltanzadeh P., Gappmaier E., Howard M.T., Sampson J.B., Mendell J.R., Wall C., King W.M., Pestronk A., Florence J.M., Connolly A.M., Mathews K.D., Stephan C.M., Laubenthal K.S., Wong B.L., Morehart P.J., Meyer A., Finkel R.S., Bonnemann C.G., Medne L., Day J.W., Dalton J.C., Margolis M.K., Hinton V.J., the United Dystrophinopathy Project Consortium, Weiss R.B. // Human Mutation - 2009. - T. 30 - № 12 - C.1657-1666.

135. Baskin B. Duchenne muscular dystrophy caused by a complex rearrangement between intron 43 of the DMD gene and chromosome 4 / Baskin B., Gibson W.T., Ray P.N. // Neuromuscular Disorders - 2011. - T. 21 - № 3 - C.178-182.

136. Ling C. Uncovering the true features of dystrophin gene rearrangement and improving the molecular diagnosis of Duchenne and Becker muscular dystrophies / Ling C., Dai Y., Geng C., Pan S., Quan W., Ding Q., Yang X., Shen D., Tao Q., Li J., Li J., Wang Y., Jiang S., Wang Y., Chen L., Cui L., Wang D. // iScience - 2023. - T. 26 - № 12 - C.108365.

137. Magri F. Genotype and phenotype characterization in a large dystrophinopathic cohort with extended follow-up / Magri F., Govoni A., D'Angelo M.G., Del Bo R., Ghezzi S., Sandra G., Turconi A.C., Sciacco M., Ciscato P., Bordoni A., Tedeschi S., Fortunato F., Lucchini V., Bonato S., Lamperti C., Coviello D., Torrente Y., Corti S., Moggio M., Bresolin N., Comi G.P. // Journal of Neurology - 2011. - T. 258 - № 9 - C.1610-1623.

138. Kong X. Genetic analysis of 1051 Chinese families with Duchenne/Becker Muscular Dystrophy / Kong X., Zhong X., Liu L., Cui S., Yang Y., Kong L. // BMC Medical Genetics -2019. - T. 20 - № 1 - C.139.

139. Prior T.W. Spectrum of small mutations in the dystrophin coding region / Prior T.W., Bartolo C., Pearl D.K., Papp A.C., Snyder P.J., Sedra M.S., Burghes A.H., Mendell J.R. // American Journal of Human Genetics - 1995. - T. 57 - № 1 - C.22-33.

140. Tuffery-Giraud S. Genotype-phenotype analysis in 2,405 patients with a dystrophinopathy using the UMD-DMD database: a model of nationwide knowledgebase / Tuffery-Giraud S., Beroud C., Leturcq F., Yaou R.B., Hamroun D., Michel-Calemard L., Moizard M.-P., Bernard R., Cossee M., Boisseau P., Blayau M., Creveaux I., Guiochon-Mantel A., De Martinville B., Philippe C., Monnier N., Bieth E., Van Kien P.K., Desmet F.-O., Humbertclaude V., Kaplan J.-C., Chelly J., Claustres M. // Human Mutation - 2009. - T. 30 - № 6 - C.934-945.

141. Kong X. Genetic analysis of 1051 Chinese families with Duchenne/Becker Muscular Dystrophy / Kong X., Zhong X., Liu L., Cui S., Yang Y., Kong L. // BMC Medical Genetics -2019. - T. 20 - № 1 - C.139.

142. Flanigan K.M. Mutational spectrum of DMD mutations in dystrophinopathy patients: application of modern diagnostic techniques to a large cohort / Flanigan K.M., Dunn D.M., Von Niederhausern A., Soltanzadeh P., Gappmaier E., Howard M.T., Sampson J.B., Mendell J.R., Wall C., King W.M., Pestronk A., Florence J.M., Connolly A.M., Mathews K.D., Stephan C.M., Laubenthal K.S., Wong B.L., Morehart P.J., Meyer A., Finkel R.S., Bonnemann C.G., Medne L., Day J.W., Dalton J.C., Margolis M.K., Hinton V.J., the United Dystrophinopathy Project Consortium, Weiss R.B. // Human Mutation - 2009. - T. 30 - № 12 - C.1657-1666.

143. Juan-Mateu J. DMD Mutations in 576 Dystrophinopathy Families: A Step Forward in Genotype-Phenotype Correlations / Juan-Mateu J., Gonzalez-Quereda L., Rodriguez M.J., Baena M., Verdura E., Nascimento A., Ortez C., Baiget M., Gallano P. // PLOS ONE - 2015. -T. 10 - № 8 - C.e0135189.

144. Takeshima Y. Mutation spectrum of the dystrophin gene in 442 Duchenne/Becker muscular dystrophy cases from one Japanese referral center / Takeshima Y., Yagi M., Okizuka Y., Awano H., Zhang Z., Yamauchi Y., Nishio H., Matsuo M. // Journal of Human Genetics - 2010. - T. 55 - № 6 - C.379-388.

145. Viggiano E. Spectrum of Genetic Variants in the Dystrophin Gene: A Single Centre Retrospective Analysis of 750 Duchenne and Becker Patients from Southern Italy / Viggiano E.,

Picillo E., Passamano L., Onore M., Piluso G., Scutifero M., Torella A., Nigro V., Politano L. // Genes - 2023. - T. 14 - № 1 - C.214.

146. Sun C. Therapeutic Strategies for Duchenne Muscular Dystrophy: An Update / Sun C., Shen L., Zhang Z., Xie X. // Genes - 2020. - T. 11 - № 8 - C.837.

147. Mathieson I. Differences in the rare variant spectrum among human populations / Mathieson I., Reich D. // PLOS Genetics - 2017. - T. 13 - № 2 - C.e1006581.

148. Den Dunnen J.T. Multiplex PCR for Identifying DMD Gene Deletions / Den Dunnen J.T., Beggs A.H. // Current Protocols in Human Genetics - 2006. - T. 49 - № 1.

149. Giliberto F. Prenatal diagnosis of duchenne/becker muscular dystrophy by short tandem repeat segregation analysis in argentine families / Giliberto F., Ferreiro V., Massot F., Ferrer M., Francipane L., Szijan I. // Muscle & Nerve - 2011. - T. 43 - № 4 - C.510-517.

150. Zamani G. The First Comprehensive Cohort of the Duchenne Muscular Dystrophy in Iranian Population: Mutation Spectrum of 314 Patients and Identifying Two Novel Nonsense Mutations / Zamani G., Hosseini Bereshneh A., Azizi Malamiri R., Bagheri S., Moradi K., Ashrafi M.R., Tavasoli A.R., Mohammadi M., Badv R.S., Ghahvechi Akbari M., Heidari M. // Journal of Molecular Neuroscience - 2020. - T. 70 - № 10 - C.1565-1573.

151. Luce L.N. Small mutation screening in the DMD gene by whole exome sequencing of an Argentine Duchenne/Becker muscular dystrophies cohort / Luce L.N., Carcione M., Mazzanti C., Ferrer M., Szijan I., Giliberto F. // Neuromuscular Disorders - 2018. - T. 28 - № 12 - C.986-995.

152. Wang L. Genotypes and Phenotypes of DMD Small Mutations in Chinese Patients With Dystrophinopathies / Wang L., Xu M., Li H., He R., Lin J., Zhang C., Zhu Y. // Frontiers in Genetics - 2019. - T. 10 - C.114.

153. Kyrychenko V. Functional correction of dystrophin actin binding domain mutations by genome editing / Kyrychenko V., Kyrychenko S., Tiburcy M., Shelton J.M., Long C., Schneider J.W., Zimmermann W.-H., Bassel-Duby R., Olson E.N. // JCI Insight - 2017. - T. 2 - № 18 -C.e95918.

154. Henderson D.M. Disease-causing missense mutations in actin binding domain 1 of dystrophin induce thermodynamic instability and protein aggregation / Henderson D.M., Lee A., Ervasti J.M. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2010. - T. 107 - № 21 -C.9632-9637.

155. Wang L. Genotypes and Phenotypes of DMD Small Mutations in Chinese Patients With Dystrophinopathies / Wang L., Xu M., Li H., He R., Lin J., Zhang C., Zhu Y. // Frontiers in Genetics - 2019. - T. 10 - C.114.

156. Cooper D.N. Cytosine methylation and the fate of CpG dinucleotides in vertebrate genomes / Cooper D.N., Krawczak M. // Human Genetics - 1989. - T. 83 - № 2 - C.181-188.

157. Vieitez I. Espectro mutacional de la distrofia muscular de Duchenne en España: estudio de 284 casos / Vieitez I., Gallano P., González-Quereda L., Borrego S., Marcos I., Millán J.M., Jairo T., Prior C., Molano J., Trujillo-Tiebas M.J., Gallego-Merlo J., García-Barcina M., Fenollar M., Navarro C. // Neurología - 2017. - T. 32 - № 6 - C.377-385.

158. Tuffery-Giraud S. Genotype-phenotype analysis in 2,405 patients with a dystrophinopathy using the UMD-DMD database: a model of nationwide knowledgebase / Tuffery-Giraud S., Béroud C., Leturcq F., Yaou R.B., Hamroun D., Michel-Calemard L., Moizard M.-P., Bernard R., Cossée M., Boisseau P., Blayau M., Creveaux I., Guiochon-Mantel A., De Martinville B., Philippe C., Monnier N., Bieth E., Van Kien P.K., Desmet F.-O., Humbertclaude V., Kaplan J.-C., Chelly J., Claustres M. // Human Mutation - 2009. - T. 30 - № 6 - C.934-945.

159. Guo R. DMD mutation spectrum analysis in 613 Chinese patients with dystrophinopathy / Guo R., Zhu G., Zhu H., Ma R., Peng Y., Liang D., Wu L. // Journal of Human Genetics - 2015. - T. 60 - № 8 - C.435-442.

160. Xie S. Detection of truncated dystrophin lacking the C-terminal domain in a Chinese pedigree by next-generation sequencing / Xie S., Lan Z., Qu N., Wei X., Yu P., Zhu Q., Yang G., Wang J., Shi Q., Wang W., Yang L., Yi X. // Gene - 2012. - T. 499 - № 1 - C.139-142.

161. Pons R. Single amino acid loss in the dystrophin protein associated with a mild clinical phenotype / Pons R., Kekou K., Gkika A., Papadimas G., Vogiatzakis N., Svingou M., Papadopooulos C., Nikas I., Dinopoulos A., Youroukos S., Kanavakis E. // Muscle & Nerve -2017. - T. 55 - № 1 - C.46-50.

162. Gurvich O.L. DMD exon 1 truncating point mutations: Amelioration of phenotype by alternative translation initiation in exon 6 / Gurvich O.L., Maiti B., Weiss R.B., Aggarwal G., Howard M.T., Flanigan K.M. // Human Mutation - 2009. - T. 30 - № 4 - C.633-640.

163. Poyatos-García J. Dystrophinopathy Phenotypes and Modifying Factors in DMD Exon 45-55 Deletion / Poyatos-García J., Martí P., Liquori A., Muelas N., Pitarch I., Martinez-Dolz L., Rodríguez B., Gonzalez-Quereda L., Damiá M., Aller E., Selva-Gimenez M., Vilchez R., Diaz-Manera J., Alonso-Pérez J., Barcena J.E., Jauregui A., Gámez J., Aladrén J.A., Fernández

A., Montolio M., Azorin I., Hervas D., Casasús A., Nieto M., Gallano P., Sevilla T., Vilchez J.J. // Annals of Neurology - 2022. - T. 92 - № 5 - C.793-806.

164. Paes J. The Contribution of JAK2 46/1 Haplotype in the Predisposition to Myeloproliferative Neoplasms / Paes J., Silva G.A.V., Tarrago A.M., Mourao L.P.D.S. // International Journal of Molecular Sciences - 2022. - T. 23 - № 20 - C.12582.

165. Hutter P. An MLH1 haplotype is over-represented on chromosomes carrying an HNPCC predisposing mutation in MLH1 / Hutter P. // Journal of Medical Genetics - 2002. - T. 39 - № 5 - C.323-327.

166. Apolinário T.A. Distribution of the HTT Gene A1 and A2 Haplotypes Worldwide: A Systematic Review / Apolinário T.A., Rodrigues D.C., Lemos M.B., Antao Paiva C.L., Agostinho L.A. // Clinical Medicine & Research - 2020. - T. 18 - № 4 - C.145-152.

167. Juan-Mateu J. Interplay between DMD Point Mutations and Splicing Signals in Dystrophinopathy Phenotypes / Juan-Mateu J., González-Quereda L., Rodríguez M.J., Verdura E., Lázaro K., Jou C., Nascimento A., Jiménez-Mallebrera C., Colomer J., Monges S., Lubieniecki F., Foncuberta M.E., Pascual-Pascual S.I., Molano J., Baiget M., Gallano P. // PLoS ONE - 2013. - T. 8 - № 3 - C.e59916.

168. Ikeda T. Becker muscular dystrophy caused by exon 2-truncating mutation of DMD / Ikeda T., Fujinaka H., Goto K., Nakajima T., Ozawa T. // Human Genome Variation - 2019. - T. 6 -№ 1 - C.52.

169. Juan-Mateu J. DMD Mutations in 576 Dystrophinopathy Families: A Step Forward in Genotype-Phenotype Correlations / Juan-Mateu J., Gonzalez-Quereda L., Rodriguez M.J., Baena M., Verdura E., Nascimento A., Ortez C., Baiget M., Gallano P. // PLOS ONE - 2015. -T. 10 - № 8 - C.e0135189.

170. Xie Z. Clinical, muscle imaging, and genetic characteristics of dystrophinopathies with deep-intronic DMD variants / Xie Z., Sun C., Liu C., Xie Z., Wei L., Yu J., Ling C., Guo X., Liu Y., Yu M., Leng Y., Meng L., Sun Y., Deng J., Leal S.M., Schrauwen I., Wang Z., Yuan Y. // Journal of Neurology - 2023. - T. 270 - № 2 - C.925-937.

171. Chen L. Identifying inversions with breakpoints in the Dystrophin gene through long-read sequencing: report of two cases / Chen L., Luo X., Wang H., Tian Y., Liu Y. // BMC Medical Genomics - 2024. - T. 17 - № 1 - C.227.

172. Segarra-Casas A. An Integrated Transcriptomics and Genomics Approach Detects an X/Autosome Translocation in a Female with Duchenne Muscular Dystrophy / Segarra-Casas A.,

Yépez V.A., Demidov G., Laurie S., Esteve-Codina A., Gagneur J., Parkhurst Y., Muni-Lofra R., Harris E., Marini-Bettolo C., Straub V., Topf A. // International Journal of Molecular Sciences - 2024. - T. 25 - № 14 - C.7793.

173. Baskin B. Duchenne muscular dystrophy caused by a complex rearrangement between intron 43 of the DMD gene and chromosome 4 / Baskin B., Gibson W.T., Ray P.N. // Neuromuscular Disorders - 2011. - T. 21 - № 3 - C.178-182.

174. Xie Z. Splicing Characteristics of Dystrophin Pseudoexons and Identification of a Novel Pathogenic Intronic Variant in the DMD Gene / Xie Z., Tang L., Xie Z., Sun C., Shuai H., Zhou C., Liu Y., Yu M., Zheng Y., Meng L., Zhang W., Leal S.M., Wang Z., Schrauwen I., Yuan Y. // Genes - 2020. - T. 11 - № 10 - C.1180.

175. Yagi M. Two alternative exons can result from activation of the cryptic splice acceptor site deep within intron 2 of the dystrophin gene in a patient with as yet asymptomatic dystrophinopathy / Yagi M., Takeshima Y., Wada H., Nakamura H., Matsuo M. // Human Genetics - 2003. - T. 112 - № 2 - C.164-170.

176. Waldrop M.A. Intron mutations and early transcription termination in Duchenne and Becker muscular dystrophy / Waldrop M.A., Moore S.A., Mathews K.D., Darbro B.W., Medne L., Finkel R., Connolly A.M., Crawford T.O., Drachman D., Wein N., Habib A.A., Krzesniak-Swinarska M.A., Zaidman C.M., Collins J.J., Jokela M., Udd B., Day J.W., Ortiz-Guerrero G., Statland J., Butterfield R.J., Dunn D.M., Weiss R.B., Flanigan K.M. // Human Mutation - 2022.

- T. 43 - № 4 - C.511-528.

177. Foncuberta M.E. A novel deep intronic variant in the DMD gene causes Duchenne muscular dystrophy by pseudoexon activation encoding a nonsense codon / Foncuberta M.E., Monges S., Medina A., Lubieniecki F., Gravina L.P. // Gene - 2024. - T. 930 - C.148862.

178. Ishizuka T. Systemic administration of the antisense oligonucleotide NS -089/ NCNP -02 for skipping of exon 44 in patients with Duchenne muscular dystrophy: Study protocol for a phase I/ II clinical trial / Ishizuka T., Komaki H., Asahina Y., Nakamura H., Motohashi N., Takeshita E., Shimizu-Motohashi Y., Ishiyama A., Yonee C., Maruyama S., Hida E., Aoki Y. // Neuropsychopharmacology Reports - 2023. - T. 43 - № 2 - C.277-286.

179. Barthélémy F. Targeting RyR Activity Boosts Antisense Exon 44 and 45 Skipping in Human DMD Skeletal or Cardiac Muscle Culture Models / Barthélémy F., Wang R.T., Hsu C., Douine E.D., Marcantonio E.E., Nelson S.F., Miceli M.C. // Molecular Therapy Nucleic Acids

- 2019. - T. 18 - C.580-589.

180. Luce L. Theragnosis for Duchenne Muscular Dystrophy / Luce L., Carcione M., Mazzanti C., Buonfiglio P.I., Dalamon V., Mesa L., Dubrovsky A., Corderi J., Giliberto F. // Frontiers in Pharmacology - 2021. - T. 12 - C.648390.

181. Aartsma-Rus A. The Dilemma of Choice for Duchenne Patients Eligible for Exon 51 Skipping The European Experience / Aartsma-Rus A., De Waele L., Houwen-Opstal S., Kirschner J., Krom Y.D., Mercuri E., Niks E.H., Straub V., Van Duyvenvoorde H.A., Vroom E. // Journal of Neuromuscular Diseases - 2023. - T. 10 - № 3 - C.315-325.

182. Happi Mbakam C. Therapeutic Strategies for Dystrophin Replacement in Duchenne Muscular Dystrophy / Happi Mbakam C., Lamothe G., Tremblay J.P. // Frontiers in Medicine -2022. - T. 9 - C.859930.

183. Bushby K. Ataluren treatment of patients with nonsense mutation dystrophinopathy / Bushby K., Finkel R., Wong B., Barohn R., Campbell C., Comi G.P., Connolly A.M., Day J.W., Flanigan K.M., Goemans N., Jones K.J., Mercuri E., Quinlivan R., Renfroe J.B., Russman B., Ryan M.M., Tulinius M., Voit T., Moore S.A., Lee Sweeney H., Abresch R.T., Coleman K.L., Eagle M., Florence J., Gappmaier E., Glanzman A.M., Henricson E., Barth J., Elfring G.L., Reha A., Spiegel R.J., O'donnell M.W., Peltz S.W., Mcdonald C.M., FOR THE PTC124-GD-007-DMD STUDY GROUP // Muscle & Nerve - 2014. - T. 50 - № 4 - C.477-487.

184. Davydenko K. Revision of splicing variants in the DMD gene // - 2024.

185. Mendell J.R. AAV gene therapy for Duchenne muscular dystrophy: the EMBARK phase 3 randomized trial / Mendell J.R., Muntoni F., McDonald C.M., Mercuri E.M., Ciafaloni E., Komaki H., Leon-Astudillo C., Nascimento A., Proud C., Schara-Schmidt U., Veerapandiyan A., Zaidman C.M., Guridi M., Murphy A.P., Reid C., Wandel C., Asher D.R., Darton E., Mason S., Potter R.A., Singh T., Zhang W., Fontoura P., Elkins J.S., Rodino-Klapac L.R. // Nature Medicine - 2025. - T. 31 - № 1 - C.332-341.

186. https://www.treat-nmd.org/resources-and-support/research-overview/dmd/gene-therapy/).

187. Chulanova Y. Delivery of genetic medicines for muscular dystrophies / Chulanova Y., Breier D., Peer D. // Cell Reports Medicine - 2025. - T. 6 - № 1 - C. 101885.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Олигонуклеотидные праймеры и условия амплификации, применявшиеся для анализа последовательности гена

DMD

Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ

DMD-1F CAGGACTCAGATCTGGGAGGC 600C 2 DMD-41F GGTTGATGTGGTTAGCTAACTGC 600C 2

DMD-1R GTGAGCTTGTCACAAACTAAACGT DMD-41R GCCTCTGTTAATAGAGTAGTAGTTGC

DMD-2F GATGAAAGAGAAGATGTTCAAAAGAAAAC 600C 2 DMD-42F CACACTGTCCGTGAAGAAACGATGATG 600C 2

DMD-2R CACAACTTAGATCTTAAAAGTAAAGTAACAAACC DMD-42R TTAGCACAGAGGTCAGGAGCATTGAG

DMD-3F TCATCCATCATCTTCGGCAGATTAA 600C 2 DMD-43F GAACATGTCAAAGTCACTGGACTTCATGG 600C 2

DMD-3R CAGGCGGTAGAGTATGCCAAATGAAAATCA DMD-43R ATATATGTGTTACCTACCCTTGTCGGTCC

DMD-4F TTGTCGGTCTCCTGCTGGTCAGTG 600C 2 DMD-44F CTTGATCCATATGCTTTTACCTGCA 600C 2

DMD-4R CAAAGCCCTCACTCAAACATGAAGC DMD-44R TCCATCACCCTTCAGAACCTGATCT

DMD-5F CAACTAGGCATTTGGTCTCTTACC 600C 2 DMD-45F CTTTCTTTGCCAGTACAACTGCATGTG 600C 2

DMD-5R CATTTCAGACGACATGGTAGTGTC DMD-45R CATTCCTATTAGATCTGTCGCCCTAC

DMD-6F CCACATGTAGGTCAAAAATGTAATGAA 600C 2 DMD-46F CAGTTTGCATTAACAAATAGTTTGAGAAC 600C 2

DMD-6R GTCTCAGTAATCTTCTTACCTATGACTATGG DMD-46R CATATACTTCTTTATGCAAGCAGGC

DMD-7F GCATGGAAGTAAATCTCATGGAAC 600C 2 DMD-47F CGTTGTTGCATTTGTCTGTTTCAGTTAC 600C 2

DMD-7R CCATACTAAAAGCAGTGGTAGTCC DMD-47R GTCTAACCTTTATCCACTGGAGATTTG

Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ

DMD-8F GTCCTTTACACACTTTACCTGTTGAG 600C 2 DMD-48F TTGAATACATTGGTTAAATCCCAACATG 600C 2

DMD-8R GGCCTCATTCTCATGTTCTAATTAG DMD-48R CCTGAATAAAGTCTTCCTTACCACAC

DMD-9F CCCTCCTCTCTATCCACTCCC 600C 2 DMD-49F TTGCTAACTGTGAAGTTAATCTGCAC 60^ 2

DMD-9R GCAGTGTTAGATTATCTTGGAAGC DMD-49R CACGTCAATGGCAAATGTACAAC

DMD-10F GTGCAGCATTTGGAAGCTCC 60^ 2 DMD-50F CACCAAATGGATTAAGATGTTCATGAAT 600C 2

DMD-10R GTTTACCTCATGAGTATGAAACTGGTC DMD-50R TCTCTCTCACCCAGTCATCACTTCATAG

DMD-11F GGGTACATGATGGATTTGACAGC 600C 2 DMD-51F GAAATTGGCTCTTTAGCTTGTGTTTC 600C 2

DMD-11R CATGCTAGCTACCCTGAGGC DMD-51R GGAGAGTAAAGTGATTGGTGGAAAATC

DMD-12F CAAAGAGGTCATAATAGGCTTCTTTC 600C 2 DMD-52F AATGCAGGATTTGGAACAGAGGCGTCC 600C 2

DMD-12R GCTTTCTAGTAGAAAGCACGCAAC DMD-52R TTCGATCCGTAATGATTGTTCTAGCCTC

DMD-13F AATAGGAGTACCTGAGATGTAGCAGAAAT 600C 2 DMD-53F TTGAAAGAATTCAGAATCAGTGGGATG 600C 2

DMD-13R CTGACCTTAAGTTGTTCTTCCAAAGCAG DMD-53R CTTGGTTTCTGTGATTTTCTTTTGGATTG

DMD-14F ACATAGGAGACTGAGATACTTTGGC 600C 2 DMD-54F CCTGAGGATTCAGAAGCTGTTTAC 60^ 2

DMD-14R CCGTGTCTTTTACAGCTAGTTTCTC DMD-54R CCACCCCATTATTACAGCCAAC

DMD-15F GTGTGAGAAACTAGCTGTAAAAGACAC 60^ 2 DMD-55F GAGTTCACTAGGTGCACCATTC 600C 2

DMD-15R CTGGGTTTTTATAAGACCATTGAAAGC DMD-55R GCTGAGAATTGTTCAATTGGATCC

DMD-16F CTATAGTGGTGTATGGAATGCAAC 600C 2 DMD-56F CTGCACATATTCTTCTTCCTGC 600C 2

DMD-16R GATAGTCTGTAGCATGATAATTGGTATC DMD-56R GGCCATTTTAATTCATTTGTGGC

DMD-17F GACTTTCGATGTTGAGATTACTTTCCC 600C 2 DMD-57F CTGACATGGTACGCTGCTGTTC 600C 2

DMD-17R AAGCTTGAGATGCTCTCACCTTTTCC DMD-57R CATGTGCAAGGCACGAGGC

Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ

DMD-18F CCTAACAGGGAAAATAGTGCTGC 600C 2 DMD-58F GAGTTTCATAAACAAGTTCTGAGCAC 600С 2

DMD-18R CAGATAACAAAGCACGGAGTTTAC DMD-58R CGTCACCACTGATCCTTCTATC

DMD-19F TTCTACCACATCCCATTTTCTTCCA 600C 2 DMD-59F GCCTAAAACCTTGTCATATTGCC 600С 2

DMD-19R GATGGCAAAAGTGTTGAGAAAAAGTC DMD-59R GCCCTGAAGCAAAGAAGTAGAC

DMD-20F CATTTCTTTCAGTCTGTGGGTTC 600С 2 DMD-60F AGGAGAAATTGCGCCTCTGAAAGAGAAC О 600С 2

DMD-20R CCAAATGGAAGGAGAAGAGATTC DMD-60R CTGCAGAAGCTTCCATCTGGTGTTCAGG

DMD-21F GTAAACGTGTTACTTACTTTCCATACTC 600C 2 DMD-61F GTGTTCTCAGTCTTGGAGACTC 600С 2

DMD-21R CCATTTTGGAAAATGTCAAGTTAGC DMD-61R CCTAACCTTCTCAACTTATCAACC

DMD-22F CACCAATGCGCTATCAGGAGAC 600C 2 DMD-62F GAGTTCAGTTTCGCTTAGATTAGGAC 600С 2

DMD-22R CGAGTCTCTGCTCCATGATTTC DMD-62R CTTTGTTTGGCGAGATGGCTC

DMD-23F CAAGTACAGTTAATTTCACTAAAACTCATC 600C 2 DMD-63F CTGTTTTCTTGACTACTCATTGTAAATGC 600С 2

DMD-23R CAAGTAAATAAAAATGAGGGTAGAAAGTAAAATC DMD-63R GGAAGGTGCCACTGCTTTCAC

DMD-24F GTAATCAGCACACCAGTAATGCC 600C 2 DMD-64F GGAACAGGACTACATGAATGCC 600С 2

DMD-24R CAGCTGTAAAACACTGATCTAACC DMD-64R GCTGAGAATCTGACATTATTCAGGTC

DMD-25F GGCAGTAATTTTTTTCAGCTGGC 600С 2 DMD-65F GAAAGGAAGGTTTTACTCTTTGAGTC 600С 2

DMD-25R GTTAAGTACGTTGAGGCAAGCC DMD-65R CCCGGGAAATAAAAACATGCC

DMD-26F GTTTCATCACTGTCAATAATCGTGT 600C 2 DMD-66F GTTTACCCTCTAGGAAAGGGTC 600С 2

DMD-26R CTGTATACAACTTCAAGCATTGTTGC DMD-66R CAGTCTGTCATTTCCCATCTAGAAC

DMD-27F CGAAAGTGAAACTCCTTACTGAGTC 600C 2 DMD-67F GGCCTCCTTCTGCATGATTC 600С 2

DMD-27R CATTTCCCATTCAGCCTAGTGC DMD-67R GCTCCGGACACTTGGCTC

Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ

DMD-28F GCTGCATTTTGAATTACCTGCTAC 600C 2 DMD-68F CTTCTTTCCTTTCATCCTTTTGCC 600C 2

DMD-28R CTATTTGGTACTTGACCTCTTTTAATACTGC DMD-68R GCACAGGAGATAAAAGATCAAGTC

DMD-29F GATACTGAGCATTTGCTGATAATCC 600C 2 DMD-69F CATTGCTTTCTGTTTCTCAAATTAGAAC 60^ 2

DMD-29R CATTTTATCTGAGAGGCCTGTATC DMD-69R GTGAACTAACTCTCACGTCAGGC

DMD-30F GTTCAGCAGGATTACAGAAAAGCTATC 60^ 2 DMD-70F CCTGTCCTAAATCTGATCTCACC 600C 2

DMD-30R GGAAGCTGATTCCCAGATGTAC DMD-70R CATCAAACAAGAGTGTGTTCTGC

DMD-31F GGAGAGTTTCTGAATTTCGTCTTC 600C 2 DMD-71F TGCGGCTGAGTTTGCGTGTGTC 600C 2

DMD-31R GCCCAACGAAAACACGTTCC DMD-71R GAAATGAAGGAAGGGGAATTAATATGTC

DMD-32F ATGTCTCCATGAAGTTTCGATTATTCC 600C 2 DMD-72F GCAGAAGTATGAGAAATCATCTCTC 600C 2

DMD-32R CACACTCTTTGTTTCCAATGCAGGC DMD-72R CAATCAATATTTGCCTGGCATACAAC

DMD-33F CTCTACTGATTATCATGTTTTGTTTTATGT 600C 2 DMD-73F GAAGGATTCCTTTCTCTTCTTGC 600C 2

DMD-33R GTGTTTGTGGTCTCAGCATGC DMD-73R CCTATATCCTGTGCTATCCTACCTC

DMD-34F GGTTATAACGAAATTTGAATTAAAGAGTAAAC 600C 2 DMD-74F GAGTCCCTAACCCCCAAAGC 60^ 2

DMD-34R GTGTTTTCACGTATGTTCAAAATAACC DMD-74R CTCTGCATACCAATGACAAAGC

DMD-35F GACATTACTTGAAGGTCAATGCTC 60^ 2 DMD-75F1 CCATGGTATATAAAATTTGGTGATGATATTC 600C 2

DMD-35R GAAGGGTGTAAAAGCTTCTAGCC DMD-75R1 CTGTGTAACTGTGACTCCAGC

DMD-36F CTAACCAATAATGCCATGGTATGTC 600C 2 DMD-75F2 CAAGCAGAATATGACCGTCTAAAGC 600C 2

DMD-36R CAAAGATGATTGAAGTAACTGGTGTAC DMD-75R2 GAAAAATGAATGTTTGTAAAAATCCCATCTC

DMD-37F GACCTTCATTAATTACTAACTTCAAGTCC 600C 2 DMD-76F GGCTTCTAAAGTAGGAAGGGTC 600C 2

DMD-37R CAAGTTTCCACCTTGGAGTAGATC DMD-76R CAAATATTCATGTCCCTGTAATACGAC

Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ Название праймера Последовательность олигонуклеотидов Температура отжига, 0С MgCl2, мМ

DMD-38F CATAATGCATGTGATTAGTTTAGCAAC 600C 2 DMD-77F CTCCAAGGGTAATGATATAGATAAACTAC 600C 2

DMD-38R GTGCTCTGAAAATTCAGTTGGAGAC DMD-77R CCAGCAAATCTGAGTCCCTTC

DMD-39F AACATGTCTTATTATCTCTGTTAACAATGTACAGC 600C 2 DMD-78F TTCTGATATCTCTGCCTCTTCCTC 600C 2

DMD-39R GAGTTTCTGATGACTAAGTCTGAAGC DMD-78R GGAATGTTCCTCATGAGCTGC

DMD-40F CTGCAGCCAGAAGTGCACTATAC 600C 2 DMD-79F GAGTGATGCTATCTATCTGCACC 600C 2

DMD-40R AATCTGGTATTGACATTCTAAAACAAC DMD-79R GAAATCTACAGTATAATACCACTACCCTTC