Генетическая характеристика спонтанно трансформированных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат наук Омельченко, Денис Олегович

• Омельченко, Денис Олегович
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Омельченко, Денис Олегович

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Цели и задачи

Научная новизна и практическая значимость

Положения, выносимые на защиту

Степень достоверности и апробация результатов

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки

1.2. Происхождение ММСК

1.3. Цитогенетические исследования ММСК

1.4. Роль ММСК из разных источников в возникновении сарком мягкихтканей

1.5. Исследования профиля экспрессии ММСК

1.6. Генная инженерия ММСК

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Клеточные культуры и условия культивирования

2.2. Подсчет концентрации клеток в суспензии в камере Горяева

2.3. Криоконсервация и разморозка клеточных культур ММСК ЖТ

2.4. Получение моноклональных культур спонтанно трансформированных ММСК ЖТ

2.5. Цитогенетическое исследование спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека

2.5.1. Приготовление препаратов рутинно окрашенных метафазных пластинок

2.5.2. Исследование рутинно окрашенных метафазных пластинок

2.5.3. Статистический анализ данных цитогенетического исследования

2.6. Сравнительный парный анализ транскриптома спонтанно трансформированных и нормальных ММСК ЖТ человека

2.6.1. Подготовка образцов клеточных культур трансформированных и нормальных ММСК ЖТ человека для выделения тотальной РНК

2.6.2. Выделение тотальной РНК из образцов клеточных культур

2.6.3. Амплификация и измерение концентрации тотальной РНК

2.6.4. Гибридизация биотинилированной кРНК на микрочипе Illumina

2.6.5. Обработка первичныхданных по интенсивности флуоресценции зондов перед статистическим анализом

2.6.6. Определение дифференциально экспрессированныхтранскриптов с помошыо алгоритма Significance analysis ofmicroarrays (SAM)

2.6.7. Функциональный анализ дифференциально экспрессированных между образцами транскриптов

2.7. Исследование стабильной лентивирусной транедукции спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека

2.7.1. Отбор культуры клеток трансформированных ММСК ЖТ, способной к росту на бессывороточной среде

2.7.2. Лентивирусная транедукция спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека

2.7.3. Селекция флуоресцентных клеток после транедукции

2.7.4. Проточная цитометрия спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека

2.7.5. Выделение ДНК из клеточных культур

2.7.6. Точное определение концентрации выделенной ДИК

2.7.7. Измерение копийности трансгена в трансдуцированных клетках

2.7.8. Выделение белка TagGFP2 из трансдуцированных клеток

2.7.9. Измерение концентрации белка TagGFP2 в трансдуцированных клетках

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Цитогенетическое исследование

3.1.1. Хромосомный набор культур спонтанно трансформированных ММСКЖТ человека

3.1.2. Хромосомные аберрации в культурах спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека

3.2. Сравнительный парный анализ трапскриптома нормальных и спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека

3.2.1. Подготовка данных для анализа

3.2.2. Определение дифференциально экспрессированных транскриптов с помощью алгоритма Significance analysis ofmicroarrays (SAM)

3.2.3. Связь дифференциальной экспрессии транскриптов с результатами цитогенетического анализа

3.2.4. Функциональный анализ наиболее значимо изменившихся по экспрессии транскриптов

3.2.5. Разнонаправленное изменение экспрессии транскриптов одного гена

3.2.6. Групповой функциональный анализ дифференциально экпрессированных генов

3.3. Оценка потенциала спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека к стабильной генетической модификации

3.3.1. Отбор культуры клеток трансформированных ММСКЖТ, способной к росту на бессывороточной среде

3.3.2. Трансдукция культуры клеток спонтанно трансформированной культуры ММСКЖТ человека VA18_2 лентивирусным вектором с репортерным геном TagGFP2

3.3.3. Анализ стабильности транедукции и экспрессии трансгена при длительном культивировании трансформированных ММСК ЖТ человека VA18_2

3.3.4. Селекция клеток трансформированных ММСК ЖТ человека VA18_2, стабильно трансдуцированных лентивирусным вектором с репортерным геном TagGFP2

3.3.5. Количественная оценка копийности трансгена в клетках трансдуцированных моноклональных культур VA2GFP_lk, VA2GFP_2k, VA2GFP_3k и VA2GFP_4k при длительном пассировании

3.3.6. Количественное определение продукции трансгенного белка TagGFP2 в клетках моноклональных культур VA2GFP_lk, VA2GFP_2k, VA2GFP_3k и VA2GFP_4k после транедукции лентивирусным вектором pLVT-TagGFP2-N при длительном культивировании

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5. ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

ПРИЛОЖЕНИЕ 2

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Генетическая характеристика спонтанно трансформированных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования

Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки жировой ткани (ММСК ЖТ)- это перспективный и популярный объект для генной инженерии и клеточной терапии, благодаря наименее инвазивному способу получения в достаточно больших для культивирования и трансплантации объемах.

Одним из важных вопросов при использовании стволовых клеток для терапии является их безопасность в отношении риска неопластической трансформации при выделении и ведении ex vivo. В процессе культивирования ММСК претерпевают изменения, в результате которых наступает клеточное старение и остановкаделения. Неизбежно появляющиеся в ходе культивирования мутации могут привести к неопластической трансформации клеток. Поэтому при культивировании ММСК перед трансплантацией необходимо быть уверенным, что клетки не изменили своего фенотипа и не накопили мутации, способные инициировать неопластическую трансформацию и дать начало онкологическому заболеванию в организме после трансплантации.

Многочисленные исследования ММСК человека показывают противоречивую картину относительно вопроса оценки риска их спонтанной трансформации in vifro [Bentivegna A. et al., 2013].

Большинство исследователей склоняются к мнению, что ММСК человека гораздо больше генетически устойчивы ex vivo, чем например мышиные ММСК, и в культуре без дополнительной серии онкогенных стимулов не трансформируются [Lund R.J. et al., 2012].

Описанные в литературе случаи, когда человеческие ММСК претерпевали спонтанную трансформацию в культуре, приобретали свойства и фенотип неопластических клеток и вызывали новообразования при трансплантации в животных моделях, редки. Есть ряд работ, в которых описано явление спонтанной

трансформации ММСК человека, но процесс трансформации малоизучен [Rubio D. et al., 2005; Rosland G.V. et al., 2009; Ning H. et al., 2009].

Возможной причиной противоречивости данных является отсутствие специфических маркеров, отличающих истинно мезенхимальные стволовые клетки. Из ткани при выделении получаются гетерогенные по фенотипу культуры клеток мультипотентных мезенхимальиых предшественников (ММСК), лишь небольшой процент из них принадлежит к истинно стволовым клеткам. В связи с этим узнать, из какой именно популяции клеток в гетерогенной культуре ММСК возникли трансформированные клетки, часто не представляется возможным.

Общепринятым является мнение, что при соблюдении должной техники безопасности, правильном выделении и культивировании ММСК человека, полученные культуры и трансплантаты на их основе являются безопасными с точки зрения риска туморогенеза [Centeno C.J. et al., 2010; Tarte К. et al., 2010; Wang Y. et al., 2012].

В лаборатории генетики стволовых клеток ФГБУ «МГНЦ» РАМН из первичных культур ММСК ЖТ человека, полученных от здоровых доноров, на ранних пассажах после выделения были изолированы клетки с характерными признаками неопластической трансформации - обладавших высокой скоростью пролиферации, морфологическими изменениями и отсутствием контактного ингибирования. Выделенные спонтанно трансформированные ММСК ЖТ человека обладали фенотипом стволовых клеток-предшественников перицитов CD146+. Результаты исследований морфо-фупкциональных характеристик таких клеток [Ржанинова А.А. и др., 2010] позволили выдвинуть гипотезу о том, что данные ММСК с неким комплексом мутаций присутствуют в нише нормальных ММСК до выделения клеток из ткани, но в условиях давления организма в норме их развитие подавляется присутствием нормального микроокружения. При выделении в культуру и нарушении связей с нормальным микроокружением клетки с аберрантным фенотипом выявляют свою функциональность. Интересным является также тот факт, что ММСК считаются наиболее

вероятными клетками-инициаторами саркомогенеза - процесса, приводящего к развитию опухолей мягких тканей [Xiao W. et al., 2013].

Современные теории саркомогенеза и накопленные результаты исследований свидетельствуют о том, что наиболее вероятными клетками-инициаторами сарком (опухолей мезенхимального происхождения) являются трансформированные ММСК [Mohseny A.B. & Hogendoorn P.C., 2011].

В связи с этим всестороннее изучение спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека внесет вклад в изучение механизмов спонтанной трансформации клеток мезенхимального происхождения в культуре, а также безопасности применения ММСК в клинической практике.

Одной из основных характеристик для исследования неопластической трансформации ММСК является их генетическая характеристика. Анализ хромосомных аберраций и профиля экспрессии генов данных клеток позволит охарактеризовать процесс спонтанной неопластической трансформации в данном случае.

Также интересной областью практического применения спонтанно трансформированных ММСК ЖТ является продукция рекомбинантных белков человека. Полученные спонтанно трансформированные ММСК ЖТ человека обладают необходимыми характеристиками неопластических клеточных линий, применяемых для этих целей: высокая скорость пролиферации, отсутствие контактного ингибирования, способность расти в минимальной среде, не содержащей сыворотку крови. Данных о получении генно-модифицированных неопластически трансформированных ММСК из тканей человека в литературе не имеется. Это делает их привлекательным объектом для генной инженерии несмотря на то, что на сегодняшний день создано множество генно-модифицированных нормальных ММСК человека, экспрессирующих терапевтические гены. Оценка способности спонтанно трансформированных клеточных культур ММСК ЖТ человека к постоянной генетической модификации даст возможность их использования в качестве нового

перспективного источника генетически-модифицированных клеток для нужд биотехнологии и биомедицины.

Цели и задачи

Целыо данной работы явилось исследование генетических характеристик спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека.

Задачи исследования:

1. С помощью цитогенетического анализа определить хромосомный набор и аберрации исследуемых трансформированных клеток.

2. Провести сравнительный парный анализ транскриптома образцов спонтанно трансформированных и нормальных ММСК ЖТ человека для определения характерного профиля экспрессии трансформированных клеток.

3. Провести функциональный анализ дифференциально экспрессированных транскриптов для выявления генов и сигнальных путей, затронутых трансформацией.

4. Оценить возможность внесения постоянной генетической модификации в геном спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека с помощью лентивирусной трансдукции.

5. Оценить стабильность трансгенной системы на основе трансформированных ММСК ЖТ человека.

Научная новизна и практическая значимость

В данной работе впервые проведен комплексный анализ генетических характеристик нового объекта - спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека. Показаны изменения, произошедшие с клетками в результате трансформации, как на уровне хромосом, так и на уровне транскрипции. Обнаружен высокий уровень структурных хромосомных аберраций, а также показан характерный профиль экспрессии генов, согласующихся с амплификацией центросом и хромосомной нестабильностью спонтанно

трансформированныхММСКЖТ человека. Впервые было показано, что профиль экспрессии спонтанно трансформированныхММСК ЖТ человека ассоциируется с нарушениями в сигнальных путях АКТ и RHOA, а также RAS (RalA и RalB), ATR/ATM и E2F, что позволило расширить представления о причинах спонтанной трансформации ММСК человека в культуре.

Из 30-ти наиболее значимо изменивших экспрессию транскриптов впервые показана аберрантная экспрессия 6 генов (HSPB6, PLAC9, FEZ1, DTWD1, АРН1А, ATP5L), которые ранее не ассоциировали с неопластической трансформацией клеток. Возможно, аберрантная экспрессия этих генов является маркерной для неопластической трансформации ММСК ЖТ человека.

Впервые была исследована эффективность лентивирусной трансдукции спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека. Спонтанно трансформированные ММСК ЖТ человека эффективно трансдуцируются лентивирусным вектором и, при селективном отборе клонов, стабильно экспрессируют трансген при длительном пассировании. Получение на основе данных клеток продуцентов рекомбинантных терапевтических белков будет способствовать развитию биотехнологии и биомедицины.

Положения, выносимые на защиту

1. У спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека наблюдается хромосомная нестабильность.

2. Хромосомная нестабильность и наблюдаемые аберрации появилась вследствие амплификации центросом и последующего мультиполярного митоза.

3. Спонтанная трансформация ММСК ЖТ человека в культуре ассоциируется с нарушениями в сигнальных путях АКТ и RHO А, а также RAS (RalA и RalB), ATR/ATM и E2F.

4. 6 из 30-ти наиболее значимо изменившихся по экспрессии генов (HSPB6, PLAC9, FEZ1, DTWD1, АРН1А, ATP5L) ранее не упоминалась в литературе в связи с неопластической трансформацией. Данные гены

являются новыми потенциальными маркерами трансформации ММСК ЖТ человека.

5. Спонтанно трансформированные ММСК ЖТ человека эффективно трансдуцируются лентивирусом. После селекции трансдуцированные клетки стабильно экспрессируют трансген и нарабатывают белок в течение 25 пассажей.

Степень достоверности и апробация результатов

Результаты, отражающие основные этапы диссертационной работы были представлены в виде устных докладов на ежегодных конференциях молодых ученых ФГБУ «МГНЦ» РАМН в 2011-2013 г.г., а также опубликованы в виде тезисов на IV международном конгрессе «Stem Cells and Tissue Formation. Quantitative stem cell biology - From models to applications» в 2012 г. (Дрезден. Германия), на конкурсной конференции молодых ученых ФГБУ «МГНЦ» РАМН в 2011-2013 г.г. (г. Москва), на V-ом Ежегодном Международном Симпозиуме «Актуальные вопросы генных и клеточных технологий» в 2012 г. (г. Москва). Проект разработки клеток-продуцентов на основе спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека стал одним из победителей конкурсной конференции У.М.Н.И.К.-2012.

Работа апробирована и рекомендована к защите на заседании научного семинара ФГБУ «МГНЦ» РАМН 4 декабря 2013 года.

Основные результаты напечатаны в научных журналах, рекомендуемых

ВАК:

1. Омельченко Д.О., Ржанинова A.A., Федюнина H.A., Ржанинова Е.Е., Кириенко Е.Е., Гольдштейн Д.В. Анализ хромосомного набора и аберраций в спонтанно иммортализованных мультипотентных мезенхимных стромальных клетках из разных тканей человека// Медицинская генетика. -2012.-Т. 11, № 11.-С. 32-36.

2. Ржанинова A.A., Омельченко Д.О., Федюнина И.А. I-Ieo пластическая трансформация мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в культуре in vitro II Медицинская генетика. - 2013. -Т. 12, № 3. - С. 20-28.

3. Омельченко Д.О., Ржанинова A.A., Гольдштейн Д.В. Сравнительный парный анализ транскриптома спонтанно трансформированных мультипотентных стромальных клеток жировой ткани человека//Генетика. -2014. - Т. 50, № 1. - С.106-115.

4. Омельченко Д.О., Ржанинова A.A., Федюнина И.А., Ратушный А.Ю., Гольдштейн Д.В. Эффективность лентивирусиой трансдукции спонтанно трансформированных мультипотентных мезенхимных стромальных клеток жировой ткани (ММСК ЖТ) человека // Медицинская генетика (тезисы конкурсной конференции молодых ученых ФГБУ «МГНЦ» РАМН). -2013. С. 6.

5. A. Rzhaninova, D. Omelchenko, I. Fedyunina, D. Goldshtein Spontaneous transformation of cultured MSCs is the result of cellular stress but not replicative senescence // 4th International Congress on Stem Cells and Tissue Formation. -2012. C. 204.

6. Омельченко Д.О., Ржанинова A.A., Федюнина И.А., Кириенко Е.Е., Гольдштейн Д.В. Цитогенетическое исследование клеточных линий спонтанно иммортализованных перицитов из ММСК разных тканей человека // V Ежегодный Меяедународный Симпозиум «Актуальные вопросы генных и клеточных технологий» (тезисы). - 2012. С. 42.

7. Омельченко Д.О., Ржанинова A.A., Федюнина И.А., Ржанинова Е.Е., Гольдштейн Д.В. Сравнительный парный анализ профиля транскрипции генов спонтанно иммортализованных ММСК жировой ткани человека // Медицинская генетика (тезисы конкурсной конференции молодых ученых ФГБУ «МГНЦ» РАМН). - 2012. С. 11.

8. Омельченко Д.О., Ржанинова A.A., Федюнина И.А., Кириенко Е.Е., Гольдштейн Д.В. Цитогенетическое исследование спонтанно трансформированных периваскулярных ММСК из разных тканей человека // Медицинская генетика (тезисы конкурсной конференции молодых ученых ФГБУ «МГНЦ» РАМН).-2011. С. 16-17.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Омельченко, Денис Олегович

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки жировой ткани (ММСК ЖТ)- это перспективный и популярный объект для генной инженерии и клеточной терапии. Одним из важных вопросов при использовании стволовых клеток для терапии является их безопасность в отношении риска неоплатической трансформации при выделении и ведении ex vivo. Описанные в литературе случаи, когда человеческие ММСК претерпевали спонтанную трансформацию в культуре, приобретали свойства и фенотип неопластических клеток и вызывали новообразования при трансплантации в животных моделях, редки. Есть ряд работ, в которых описано явление спонтанной трансформации ММСК человека, но до сих пор возможные причины этого явления не выявлены [Rubio D. et al., 2005; Zhou Y.F. et al., 2006; Rosland G.V. et al., 2009; Ning H. et al., 2009].

В лаборатории генетики стволовых клеток ФГБУ «МГНЦ» РАМН из липоаспирата здоровых доноров (39±13,97 лет) было выделено в культуру и изучено 36 культур клеток, обладавших характеристиками ММСК. При выделении клеток в 6 культурах ММСК из 36 на первых пассажах после выделения из липоаспирата (2-3 пассаж) были замечены отдельные колонии, отличавшиеся по морфологии и скорости пролиферации от общей культуры. Полученные из этих колоний клетки в культуре обладали характерными чертами неопластической трансформации и отличались от основной популяции ММСК почти 100% представленностью поверхностного маркера CD 146, характерного для перицитов.

В настоящей работе было впервые проведено комплексное исследование генетических характеристик нового объекта - спонтанно трансформированных ММСК из жировой ткани человека.

В работе анализировали 6 первичных культур спонтанно трансформированных ММСК ЖТ, полученных от 6-ти здоровых доноров и обозначенных как BL29, KR30, VA18, V021, PU28, ВВ25; и 20 моноклональных культур, полученных с помощью культивирования клеток VA18, PU28, KR30 и

ВЬ29 в ростовой среде в низкой плотности и обозначенных как (УА18_1,2...5; РШ8_1,2...5; КЮ0_1,2...5; ВЬ29_1,2...5)

Проведенный цитогенетический анализ показал, что клетки спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека анеуплоидны. Более того наблюдается хромосомная нестабильность - одна из характерных черт неопластической трансформации. Модальное число хромосом в культурах попадает в диапазон между триплоидным (69 хромосомна клетку) и тетраплоидным (92 хромосомы на клетку) хромосомным набором, что свидетельствует о возможной стадии тетраплоидизации в процессе трансформации клеток. Во всех исследованных культурах с разной частотой встречаются гигантские многоядерные клетки, хромосомный набор которых превышает 100 хромосом на клетку. Одним из механизмов образования подобных клеток является амплификация центросом и последующий мультиполярный митоз. Амплификация центросом также является одной из самых распространенных причин хромосомной нестабильности неопластических клеток.

Характерные хромосомные аберрации дополняют картину неопластической трансформации. Из всех хромосомных аномалий 46,41% составляют полицентрики (дицентрики, трицентрики и т.д.), 30,94% двойные микрохромосомы, 3,38% кольцевые хромосомы, 18,77% другие хромосомные аберрации (одно- и дву-хроматидные разрывы, межхромосомные хроматидные обмены и др.). Процент аберрантных клеток в среднем составляет 47,4% по всем культурам (от 11,4 до 86,7). Дицентрики и двойные микрохромосомы характерны для цикла разрыва-слияния-перемычки (Ьгеа1^е-:Ри5юп-Ьпс^е) -распространенного процесса при неопластической трансформации, обеспечивающего структурную нестабильность хромосом.

Анализ соответствий по данным транскриптома культур показал, что образцы нормальных клеток значительно отличаются друг от друга по профилю экспрессии, что возможно связано с известной гетерогенностью культур ММСК. Образцы трансформированных клеток сгруппированы близко друг к другу и, следовательно, очень близки по профилю экспрессии. Это может

свидетельствовать о том, что из изначально гетерогенной популяции ММСК in vitro трансформацию претерпевает определенная субпопуляция клеток и/или процесс трансформации гетерогенной культуры ММСК приводит к унифицированному профилю экспрессии.

Дифференциальный и функциональный анализ транскриптома подтвердил выводы цитогенетического анализа. В спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека достоверно наблюдается повышение экспрессии генов 70CIN (гены, ассоциированные с хромосомной нестабильностью), а также аберрантная экпрессия генов, ассоциированных с амплификацией центросом и мультиполярным митозом (AURKA, AURKB, р21, ТРХ2 и др).

Также было показано, что большинство из 30-ти наиболее значимо изменившихся по экспрессии генов представляют собой маркеры неопластической трансформации. Из них 6 генов (PISPB6, PLAC9, FEZ1, DTWD1, АРН1А, ATP5L) являются либо малоизученными, либо ранее не упоминались в связи с неопластической трансформации клеток. Групповой функциональный анализ GSEA по базам данных MSigDB показал, что в результате трансформации повысилась экспрессия генов задействованных в регуляции клеточного цикла и митотического деления, процессинга РНК, синтезе и репарации ДНК. Снизилась экспрессия генов адгезии, межклеточных взаимодействий и цитоскелета, а также поверхностных рецепторов и генов передачи внутриклеточных сигналов. Данные результаты отражают произошедшие изменения в морфологии и ростовых характеристиках клеток, а также изменения в генетическом аппарате в результате трансформации.

По результатам данного анализа также были найдены возможные механизмы трансформации. Трансформация ММСК наиболее вероятно связана с нарушениями в АКТ и RHOA сигнальных путях. Также в ходе трансформации были затронуты и другие онкологические сигнальные пути, как например, RAS (RalA и RalB), ATR/ATM и E2F.

Впервые на основе клеток спонтанно трансформированных ММСК ЖТ человека была исследована эффективность постоянной генетической

модификации лентивирусным вектором и получена трансгенная клеточная система, сохраняющая стабильную экспрессию трансгена при длительном культивировании. Подобраны оптимальные условия трансдукции и последующей селекции трансдуцированных клонов, обеспечивающих высокий выход культур клеток, сохраняющих высокую экспрессию длительное время. Созданная трансгенная система способна продуцировать в среднем до 1 мкг потенциального терапевического белка на каждые 1х106 клеток.

123

5. ВЫВОДЫ

1. Трансформированные ММСК ЖТ человека характеризуются высокой хромосомной нестабильностью. Модальное число хромосом на клетку варьирует от 73 до 91. Встречаются гигантские многоядерные клетки с числом хромосом больше 100.

2. В трансформированных ММСК ЖТ наблюдается множество хромосомных аберраций. Процент клеток с аберрантными хромосомами в среднем составляет 47,4% по всем культурам (от 11,4% до 86,7%). Из всех хромосомных аномалий 46,41% составляют полицентрики, 30,94% двойные микрохромосомы, 3,38% кольцевые хромосомы, 18,77% другие хромосомные аберрации (одно- и дву-хроматидные разрывы, межхромосомные хроматидные обмены и др.).

3. Сравнительный анализ транскриптома показал статистически значимое повышение экспрессии генов 70 CIN (гены, ассоциированные с хромосомной нестабильностью), а также гиперэкспрессию генов, связанных с амплификацией центросом и мультиполярным митозом (AURKA, AURKB и др.).

4. Спонтанная трансформация ММСК ЖТ человека ассоциируется с нарушениями в сигнальных путях АКТ и RHOA, а также RAS (RalA и RalB), ATR/ATM и E2F.

5. Изменение экспрессии большинства из 30-ти наиболее значимо изменившихся по экспрессии транскриптов (согласно статистике SAM) ассоциировано по данным литературы с неопластической трансформацией клеток. Аберрантная экспрессия 6 генов из этой группы (HSPB6, PLAC9, FEZ1, DTWD1, АРН1А, ATP5L) ранее не упоминалась в литературе в связи с неопластической трансформацией. Данные гены являются новыми потенциальными маркерами трансформации ММСК ЖТ человека

6. Анализ эффективности трансдукции культур лентивирусным и частицами показал, что при использовании 50 MOI эффективно трансдуцируется -95% трансформированных ММСК ЖТ человека.

7. После селективного отбора трансдуцированных при 50 MOI лентивируса клонов трансформированных ММСК ЖТ можно получить культуры, стабильно

сохраняющие продуктивность трансгена на уровне ~1 мг внутриклеточного белка на 1х106 клеток в течение 25 пассажей (~6 месяцев).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Омельченко, Денис Олегович, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Бочков Н.П. и др. Хромосомная изменчивость мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2007. № 1. С. 11-15.

Бочков Н.П. и др. Цитогенетическое исследование мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека в процессе культивирования // Медицинская генетика. 2009. Т. 8. № 12.

Владимирская Е.Б. и др. Биологические основы и перспективы терапии стволовыми клетками // М.: ИД МЕДПРАКТИКА-М. 2005.

Захаров А.Ф., Бешош В.А., Кулешов Н.П. Хромосомы человека: Атлас. Медицина, 1982.

Новикова Н.И. и др. Исследование биобезопасности клеточных культур мезенхимальных стромальных клеток на иммунодефицитных мышах линии Nu/Nu В/С // Токсикологический вестник. 2011. № 2. С. 13-19.

Омельченко Д.О. Генная инженерия мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток// ФГБУ «МГНЦ» РАМН [Электронный ресурс]. URL: httpy/www.med-gen.ru/docs/genetic-engineering.pdf (дата обращения: 11.02.2014).

Омельченко Д.О. и др. Анализ хромосомного набора и аберраций в спонтанно иммортализованных мультипотентных мезенхимных стромальных клетках из разных тканей человека // Медицинская генетика. 2012. Т. 11. № 11. С. 32-36.

Омельченко Д.О., Ржанинова А.А., Гольдштейн Д.В. Сравнительный парный анализ транскриптомаспонтанно трансформированных мультипотентных стромальных клеток жировой ткани человека//Генетика. 2014. Т. 50. № 1. С. 106— 115.

Ржанинова А.А. и др. Получение и характеристика культуры CD146+-клеток из жировой ткани человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2010. № 1. С. 3-9.

Adhikari A.S. et al. CD117 and Stro-1 identify osteosarcoma tumor-initiating cells associated with metastasis and drug resistance//Cancer Res. 2010. T. 70. № 11. C. 4602-4612.

Akavia U.D., Veinblat O., Benayahu D. Comparing the transcriptional profile of mesenchymal cells to cardiac and skeletal muscle cells // J. Cell. Physiol. 2008. T. 216. № 3. C. 663-672.

Alava E. de, Gerald W.L. Molecular biology of the Ewing's sarcoma/primitive neuroectodermal tumor family //J. Clin. Oncol. 2000. T. 18. № 1. C. 204-213.

Allay J.A. et al. LacZ and interleukin-3 expression in vivo after retroviral transduction of marrow-derived human osteogenic mesenchymal progenitors // Hum. Gene Ther. 1997. T. 8. № 12. C. 1417-1427.

Alliot-Licht B. et al. Dexamethasone stimulates differentiation of odontoblast-like cells in human dental pulp cultures // Cell Tissue Res. 2005. T. 321. № 3. C. 391-400.

Amiri A. et al. eEFlA2 activates Akt and stimulates Akt-dependent actin remodeling, invasion and migration // Oncogene. 2007. T. 26. № 21. C. 3027—3040.

Anastassiou D. et al. Human cancer cells express Slug-based epithelial-mesenchymal transition gene expression signature obtained in vivo // BMC Cancer. 2011. T. 11. C. 529.

Andersson D.I. et al. Translation rates and misreading characteristics of rpsD mutants in Escherichia coli//Mol. Gen. Genet. 1982. T. 187. № 3. C. 467-472.

Anversa P., Nadal-Ginard B. Myocyte renewal and ventricular remodelling // Nature. 2002. T. 415. № 6868. C. 240-243.

Armesilia-Diaz A., Elvira G., Silva A. p53 regulates the proliferation, differentiation and spontaneous transformation of mesenchymal stem cells // Exp. Cell Res. 2009. T. 315. № 20. C. 3598-3610.

Aylon Y., Oren M. p53: guardian of ploidy // Mol Oncol. 2011. T. 5. № 4. C. 315-323.

Bae J.-S. et al. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells promote neuronal networks with functional synaptic transmission after transplantation into mice with neurodegeneration // Stem Cells. 2007. T. 25. № 5. C. 1307-1316.

Bajic V. et al. Deregulated sequential motion of centromeres induced by antitumor agents may lead to genome instability in human peripheral blood lymphocytes //JBUON. 2007. T. 12. №1.C. 77-83.

Baker D.E.C. et al. Adaptation to culture of human embryonic stem cells and oncogenesis in vivo //Nat. Biotechnol. 2007. T. 25. № 2. C. 207-215.

Barnes L.M., Bentley C.M., Dickson A.J. Stability of protein production from recombinant mammalian cells //Biotechnol. Bioeng. 2003. T. 81. № 6. C. 631-639.

Bennett G. et al. A functional and transcriptomic analysis of NET1 bioactivity in gastric cancer//BMC Cancer. 2011. T. 11. C. 50.

Bentivegna A. et al. DNA Methylation Changes during In Vitro Propagation of Human Mesenchymal Stem Cells: Implications for Their Genomic Stability? // Stem Cells Int. 2013. T. 2013. C. 192425.

Berenjeno I.M., Nunez F., Bustelo X.R. Transcriptomal profiling of the cellular transformation induced by Rho subfamily GTPases // Oncogene. 2007. T. 26. № 29. C. 4295-4305.

Bernardo M.E. et al. Human bone marrow derived mesenchymal stem cells do not undergo transformation after long-term in vitro culture and do not exhibit telomere maintenance mechanisms // Cancer Res. 2007. T. 67. № 19. C. 9142-9149.

Bhatia P.К., Mukhopadhyay A. Protein glycosylation: implications for in vivo functions and therapeutic applications // Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. 1999. T. 64. C. 155-201.

Blanc K. Le et al. Mesenchymal stem cells for treatment of steroid-resistant, severe, acute graft-versus-host disease: a phase II study // Lancet. 2008. T. 371. № 9624. C. 1579-1586.

Boer J. De, Wang H.J., Blitterswijk C. Van. Effects of Wnt signaling on proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cells // Tissue Eng. 2004. T. 10. №3-4. C. 393-401.

Bouacida A. et al. Pericyte-like progenitors show high immaturity and engraftment potential as compared with mesenchymal stem cells //PLoS ONE. 2012. T. 7. № 11. C. e48648.

Boura J.S. et al. Direct head-to-head comparison of cationic liposome-mediated gene delivery to mesenchymal stem/stromal cells of different human sources: a comprehensive study // Hum Gene Ther Methods. 2013. T. 24. № 1. C. 38-48.

Brondyk W.H. Selecting an appropriate method for expressing a recombinant protein//Meth. Enzymol. 2009. T. 463. C. 131-147.

Browne S.M., Al-Rubeai M. Selection Methods for High-Producing Mammalian Cell Lines // Cell Line Development Cell Engineering. / под ред. M. Al-Rubeai. Springer Netherlands, 2009. С. 127-151.

Burns J.S. et al. The histopathology of a human mesenchymal stem cell experimental tumor model: support for an liMSC origin for Ewing's sarcoma? // Histol. Histopathol. 2008. T. 23. № 10. C. 1229-1240.

Buzzard J.J. et al. Karyotype of human ES cells during extended culture // Nat. Biotechnol. 2004. T. 22. № 4. C. 381-382; author reply 382.

Cai T.-Y. et al. Fibroblast growth factor 2 induces mesenchymal stem cells to differentiate into tenocytes through the МАРК pathway // Mol Med Rep. 2013. T. 8. № 5. C. 1323-1328.

Caisander G. et al. Chromosomal integrity maintained in five human embiyonic stem cell lines after prolonged in vitro culture// Chromosome Res. 2006. T. 14. № 2. C. 131-137.

Caplan A.I. Adult mesenchymal stem cells for tissue engineering versus regenerative medicine //J. Cell. Physiol. 2007. T. 213. № 2. C. 341-347.

Caplan A.I. All MSCs are pericytes? // Cell Stem Cell. 2008. T. 3. № 3. c. 229230.

Caplan A.I. Mesenchymal stem cells // J. Orthop. Res. 1991. T. 9. № 5. C. 641650.

Caplan A.I. Review: mesenchymal stem cells: cell-based reconstructive therapy in orthopedics//Tissue Eng. 2005. T. 11. №7-8. C. 1198-1211.

Ii ' ,-AVif

Carnero A. et al. The PTEN/PI3K/AKT signalling pathway in cancer, therapeutic implications // Curr Cancer Drug Targets. 2008. T. 8. № 3. C. 187-198.

Carnero A. The PKB/AKT pathway in cancer // Curr. Pharm. Des. 2010. T. 16. № 1. C. 34-44.

Carter S.L. et al. A signature of chromosomal instability inferred from gene expression profiles predicts clinical outcome in multiple human cancers // Nat. Genet. 2006. T. 38. № 9. C. 1043-1048.

Casiraghi F. et al. Multipotent mesenchymal stromal cell therapy and risk of malignancies // Stem Cell Rev. 2013. T. 9. № 1. C. 65-79.

Centeno C.J. et al. Safety and complications reporting on the re-implantation of culture-expanded mesenchymal stem cells using autologous platelet lysate technique // Curr Stem Cell Res Ther. 2010. T. 5. № 1. C. 81-93.

Cetin B., Cleveland D.W. How to survive aneuploidy // Cell. 2010. T. 143. № 1. C. 27-29.

Chan J.Y. A clinical overview of centrosome amplification in human cancers // Int. J. Biol. Sei. 2011. T. 7. № 8. C. 1122-1144.

Chang S. Chromosome ends teach unexpected lessons on DNA damage signalling //EMBO J. 2012. T. 31. № 16. C. 3380-3381.

Charytonowicz E. et al. Alveolar rhabdomyosarcoma: is the cell of origin a mesenchymal stem cell? // Cancer Lett. 2009. T. 279. № 2. C. 126-136.

Chen L. et al. [Expression and significance of NET-1 protein in hepatocellular carcinoma] //Zhonghua Zhong Liu ZaZhi. 2007. T. 29. № 12. C. 917-921.

Cheng Z. et al. Targeted migration of mesenchymal stem cells modified with CXCR4 gene to infarcted myocardium improves cardiac performance // Mol. Ther. 2008. T. 16. № 3. C. 571-579.

Chiaradonna F. et al. Ras-dependent carbon metabolism and transformation in mouse fibroblasts // Oncogene. 2006. T. 25. № 39. C. 5391-5404.

Cho S.W. et al. Transplantation of mesenchymal stem cells overexpressing RANK-Fc or CXCR4 prevents bone loss in ovariectomized mice // Mol. Ther. 2009. T. 17. № 11. C. 1979-1987.

Choumerianou D.M. et al. Study of oncogenic transformation in ex vivo expanded mesenchymal cells, from paediatric bone marrow // Cell Prolif. 2008. T. 41. № 6. C. 909-922.

Christakos S. et al. New insights into the mechanisms of vitamin D action // J. Cell. Biochem. 2003. T. 88. № 4. C. 695-705.

Citi S. et al. The tight junction protein cingulin regulates gene expression and RhoA signaling //Ann. N. Y. Acad. Sei. 2009. T. 1165. C. 88-98.

Cleton-Jansen A.M. et al. Profiling of high-grade central osteosarcoma and its putative progenitor cells identifies tumourigenic pathways // Br. J. Cancer. 2009. T. 101. № 11. C. 1909-1918

Collin F. et al. Flow cytometric DNA content analysis of 185 soft tissue neoplasms indicates that S-phase fraction is a prognostic factor for sarcomas. French Federation of Cancer Centers (FNCLCC) Sarcoma Group // Cancer. 1997. T. 79. № 12. C. 2371-2379.

Colnaghi R. et al. The consequences of structural genomic alterations in humans: genomic disorders, genomic instability and cancer // Semin. Cell Dev. Biol. 2011. T. 22. № 8. C. 875-885.

Coutu D.L. et al. Hierarchical scaffold design for mesenchymal stem cell-based gene therapy of hemophilia B // Biomaterials. 2011. T. 32. № 1. C. 295-305.

Cowan C.A. et al. Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts //N. Engl. J. Med. 2004. T. 350. № 13. C. 1353-1356.

Crisan M. et al. Multilineage stem cells in the adult: a perivascular legacy? // Organogenesis. 2011. T. 7. № 2. C. 101-104.

Danielson L.S. et al. A differentiation-based microRNA signature identifies leiomyosarcoma as a mesenchymal stem cell-related malignancy // Am. J. Pathol. 2010. T. 177. №2. C. 908-917.

Dela Cruz F.S. Cancer stem cells in pediatric sarcomas// Front Oncol. 2013. T. 3. C. 168.

Dellavalle A. et al. Pericytes of human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells //Nat. Cell Biol. 2007. T. 9. № 3. C. 255-267.

Demain A.L., Vaishnav P. Production of recombinant proteins by microbes and higher organisms // Biotechnol. Adv. 2009. T. 27. № 3. C. 297-306.

Dimarino A.M., Caplan A.I., Bonfield T.L. Mesenchymal Stem Cells in Tissue Repair//Front Immunol. 2013. T. 4. C. 201.

Djouad F. et al. Microenvironmental changes during differentiation of mesenchymal stem cells towards chondrocytes // Arthritis Res. Ther. 2007. T. 9. № 2. C. R33.

Doering C.B. Retroviral modification of mesenchymal stem cells for gene therapy of hemophilia //Methods Mol. Biol. 2008. T. 433. C. 203-212.

Dominici M. et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement // Cytotherapy. 2006. T. 8. № 4. C. 315-317.

Du J. et al. O-fucosylation of thrombospondin type 1 repeats restricts epithelial to mesenchymal transition (EMT) and maintains epiblast pluripotency during mouse gastrulation //Dev. Biol. 2010. T. 346. № 1. C. 25-38.

Du P., Kibbe W.A., Lin S.M. lumi: a pipeline for processing Illumina microarray //Bioinformatics. 2008. T. 24. № 13. C. 1547-1548.

Du Z. et al. Mesenchymal stem cells overexpressing C-X-C chemokine receptor type 4 improve early liver regeneration of small-for-size liver grafts // Liver Transpl. 2013. T. 19. №2. C. 215-225.

Duan H.-F. et al. Treatment of myocardial ischemia with bone marrow-derived mesenchymal stem cells overexpressing hepatocyte growth factor // Mol. Ther. 2003. T. 8. № 3. C. 467-^74.

Dubash A.D. et al. The small GTPase RhoA localizes to the nucleus and is activated by Netl and DNA damage signals //PLoS ONE. 2011. T. 6. № 2. C. el7380.

Duensing A. et al. p21(Wafl/Cipl) deficiency stimulates centriole overduplication // Cell Cycle. 2006. T. 5. № 24. C. 2899-2902.

Duesberg P., Li R. Multistep carcinogenesis: a chain reaction of aneuploidizations //Cell Cycle. 2003. T. 2. № 3. C. 202-210.

Eden E. et al. GOrilla: a tool for discovery and visualization of enriched GO terms in ranked gene lists //BMC Bioinformatics. 2009. T. 10. C. 48.

Elabd C. et al. Human adipose tissue-derived multipotent stem cells differentiate in vitro and in vivo into osteocyte-like cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2007. T. 361. №2. C. 342-348.

Eisler S. et al. Effective, safe nonviral gene transfer to preserve the chondrogenic differentiation potential of human mesenchymal stem cells // J Gene Med. 2012. T. 14. №7. C. 501-511.

English K. Mechanisms of mesenchymal stromal cell immunomodulation // Immunol. Cell Biol. 2013. T. 91. № 1. C. 19-26.

Ewing J. The Classic: Diffuse endothelioma of bone. Proceedings of the New York Pathological Society. 1921;12:17 // Clin. Orthop. Relat. Res. 2006. T. 450. C. 2527.

Facchin S. et al. Phosphorylation and activation of the atypical kinase p53-related protein kinase (PRPK) by Akt/PKB // Cell. Mol. Life Sei. 2007. T. 64. № 19-20. C. 2680-2689.

Farrington-Rock C. et al. Chondrogenic and adipogenic potential of microvascular pericytes //Circulation. 2004. T. 110. № 15. C. 2226-2232.

Ferreira B.I. et al. Array CGH and gene-expression profiling reveals distinct genomic instability patterns associated with DNA repair and cell-cycle checkpoint pathways in Ewing's sarcoma// Oncogene. 2008. T. 27. № 14. C. 2084-2090.

Figueroa B. Jr et al. Enhanced cell culture performance using inducible anti-apoptotic genes E1B-19K and Aven in the production of a monoclonal antibody with Chinese hamster ovaty cells //Biotechnol. Bioeng. 2007. T. 97. №4. C. 877-892.

Flanagan M. et al. Competitive DNA transfection formulation via electroporation for human adipose stem cells and mesenchymal stem cells // Biol Proced Online. 2012. T. 14. № 1. C. 7.

Fletcher C.D.M., Unni K.K., Mertens F. Pathology and Genetics of Tumours of Soft Tissue and Bone. IARC, 2002. 416 C.

Fodde R., Brabletz T. Wnt/beta-catenin signaling in cancer sternness and malignant behavior // Curr. Opin. Cell Biol. 2007. T. 19. № 2. C. 150-158.

Fridman A.L., Tainsky M.A. Critical pathways in cellular senescence and immortalization revealed by gene expression profiling // Oncogene. 2008. T. 27. № 46. C. 5975-5987.

Fujii H. et al. Sphere-forming stem-like cell populations with drug resistance in human sarcoma cell lines //Int. J. Oncol. 2009. T. 34. № 5. C. 1381-1386.

Funes J.M. et al. Transformation of human mesenchymal stem cells increases their dependency on oxidative phosphorylation for energy production // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2007. T. 104. № 15. C. 6223-6228.

Gascoigne K.E., Cheeseman I.M. Induced dicentric chromosome formation promotes genomic rearrangements and tumorigenesis // Chromosome Res. 2013. T. 21. №4. C. 407-418.

Giannelli F. et al. Effect of antiviral treatment in patients with chronic HCV infection and t(14;18) translocation //Blood. 2003. T. 102. № 4. C. 1196-1201.

Gibbs C.P. et al. Stem-like cells in bone sarcomas: implications for tumorigenesis //Neoplasia. 2005. T. 7. № 11. C. 967-976.

Goessler U.R. et al. In vitro analysis of integrin expression during chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and chondrocytes upon dedifferentiation in cell culture // Int. J. Mol. Med. 2006. T. 17. № 2. C. 301-307.

Goldoni S., Iozzo R.V. Tumor microenvironment: Modulation by decorin and related molecules harboring leucine-rich tandem motifs // Int. J. Cancer. 2008. T. 123. № 11. C. 2473-2479.

Gotoda T. et al. Expression of CD44 variants and prognosis in oesophageal squamous cell carcinoma // Gut. 2000. T. 46. № 1. C. 14-19.

Gou S. et al. Spontaneous differentiation of murine bone marrow-derived mesenchymal stem cells into adipocytes without malignant transformation after long-term culture // Cells Tissues Organs (Print). 2010. T. 191. № 3. C. 185-192.

Goustin A.S., Wilt F.H. Direct measurement of histone peptide elongation rate in cleaving sea urchin embryos //Biochim. Biophys. Acta. 1982. T. 699. № 1. C. 22-27.

Greco S.J., Rameshwar P. Enhancing effect of IL-lalpha on neurogenesis from adult human mesenchymal stem cells: implication for inflammatory mediators in regenerative medicine //J. Immunol. 2007. T. 179. № 5. C. 3342-3350.

Grimes B.R. et al. Interphase FISH demonstrates that human adipose stromal cells maintain a high level of genomic stability in long-term culture // Stem Cells Dev. 2009. T. 18. № 5. C. 717-724.

Gronthos S. et al. Heat shock protein-90 beta is expressed at the surface of multipotential mesenchymal precursor cells: generation of a novel monoclonal antibody, STRO-4, with specificity for mesenchymal precursor cells from human and ovine tissues // Stem Cells Dev. 2009. T. 18. № 9. C. 1253-1262.

Grotsky D.A. et al. BRCA1 loss activates cathepsin L-mediated degradation of 53BP1 in breast cancer cells // J. Cell Biol. 2013. T. 200. № 2. C. 187-202.

Gupta S. et al. A nuclear protein tyrosine phosphatase activates p53 and induces caspase-l-dependent apoptosis //FEBS Lett. 2002. T. 532. № 1-2. C. 61-66.

Hajdu S.I. Soft tissue sarcomas // Cancer. 2007. T. 109. № 9. C. 1697-1704.

Han E., Hilsenbeck S.G. Array-based gene expression profiling to study aging // Mech. Ageing Dev. 2001. T. 122. № 10. C. 999-1018.

Helledie T., Nurcombe V., Cool S.M. A simple and reliable electroporation method for human bone marrow mesenchymal stem cells // Stem Cells Dev. 2008. T. 17. №4. C. 837-848.

Helman L.J., Meltzer P. Mechanisms of sarcoma development // Nat. Rev. Cancer. 2003. T. 3. № 9. C. 685-694.

Hernando E. et al. The AKT-mTOR pathway plays a critical role in the development of leiomyosarcomas //Nat. Med. 2007. T. 13. № 6. C. 748-753.

Hirohata S. et al. Punctin, a novel ADAMTS-like molecule, ADAMTSL-1, in extracellular matrix //J. Biol. Chem. 2002. T. 277. № 14. C. 12182-12189.

Hirst M. et al. Human GMP synthetase. Protein purification, cloning, and functional expression of cDNA// J. Biol. Chem. 1994. T. 269. № 38. C. 23830-23837.

Honoki K. Do stem-like cells play a role in drug resistance of sarcomas? // Expert Rev Anticancer Ther. 2010. T. 10. № 2. C. 261-270.

Horwitz E.M. et al. Clarification of the nomenclature for MSC: The International Society for Cellular Therapy position statement // Cytotherapy. 2005. T. 7. № 5. C. 393-395.

Hu Y. et al. Nonviral gene targeting at rDNA locus of human mesenchymal stem cells //Biomed Res Int. 2013. T. 2013. C. 135189.

Huang F. et al. Overexpression of miR-126 promotes the differentiation of mesenchymal stem cells toward endothelial cells via activation of PI3K/Akt and MAPK/ERK pathways and release of paracrine factors // Biol. Chem. 2013. T. 394. № 9. C. 1223-1233.

Huang G. et al. 15-Hydroxyprostaglandin dehydrogenase is a target of hepatocyte nuclear factor 3beta and a tumor suppressor in lung cancer // Cancer Res. 2008. T. 68. № 13. C. 5040-5048.

Humtsoe J.O. et al. Lipid phosphate phosphatase 3 stabilization of beta-catenin induces endothelial cell migration and formation of branching point structures // Mol. Cell. Biol. 2010. T. 30. № 7. C. 1593-1606.

Hung S.-C. et al. Immortalization without neoplastic transformation of human mesenchymal stem cells by transduction with HPV16 E6/E7 genes // Int. J. Cancer. 2004. T. 110. № 3. C. 313-319.

Ikeda R. et al. The promyelotic leukemia zinc finger promotes osteoblastic differentiation of human mesenchymal stem cells as an upstream regulator of CBFA1 // J. Biol. Chem. 2005. T. 280. № 9. C. 8523-8530.

Inzunza J. et al. Comparative genomic hybridization and karyotyping of human embryonic stem cells reveals the occurrence of an isodicentric X chromosome after long-term cultivation //Mol. Hum. Reprod. 2004. T. 10. № 6. C. 461-466.

Ip J.E. et al. Mesenchymal stem cells use integrin betal not CXC chemokine receptor 4 for myocardial migration and engrafitment // Mol. Biol. Cell. 2007. T. 18. № 8. C. 2873-2882.

Ishida S. et al. Role for E2F in control of both DNA replication and mitotic functions as revealed from DNA microarray analysis // Mol. Cell. Biol. 2001. T. 21. № 14. C. 4684-4699.

Iswaran V. Seed pelleting with systemic insecticide (Aldicarb) for the control of pests of mungo (Phaseolus aureus L.) // Zentralbl Bakteriol Parasitenkd Infektionskr Hyg. 1975. T. 130. № 4. C. 365-366.

Iwasaki H. et al. Benign and malignant fibrous histiocytomas of the soft tissues: functional characterization of the cultured cells // Cancer. 1982. T. 50. № 3. C. 520530.

Iwasaki H. et al. Malignant fibrous histiocytoma. A tumor of facultative histiocytes showing mesenchymal differentiation in cultured cell lines // Cancer. 1992. T. 69. № 2. C. 437-447.

Iwasaki H. et al. Malignant fibrous histiocytoma. Evidence of perivascular mesenchymal cell origin immunocytochemical studies with monoclonal anti-MFH antibodies //Am. J. Pathol. 1987. T. 128. № 3. C. 528-537.

Iwasaki H. et al. Pathology of soft-tissue tumors: daily diagnosis, molecular cytogenetics and experimental approach//Pathol. Int. 2009. T. 59. № 8. C. 501-521.

Jain S. et al. Molecular classification of soft tissue sarcomas and its clinical applications // Int J Clin Exp Pathol. 2010. T. 3. № 4. C. 416-428.

Jana S., Deb J.K. Strategies for efficient production of heterologous proteins in Escherichia coli // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005. T. 67. № 3. C. 289-298.

Joshi M. et al. Real-time PCR to determine transgene copy number and to quantitate the biolocalization of adoptively transferred cells from EGFP-transgenic mice //BioTechniques. 2008. T. 45. № 3. C. 247-258.

Kalinina N.I. et al. Mesenchymal stem cells in tissue growth and repair // Acta Naturae. 2011. T. 3. № 4. C. 30-37.

Kallioniemi O.P. et al. Tissue microarray technology for high-throughput molecular profiling of cancer//Hum. Mol. Genet. 2001. T. 10. № 7. C. 657-662.

Karnieli O. et al. Generation of insulin-producing cells from human bone marrow mesenchymal stem cells by genetic manipulation // Stem Cells. 2007. T. 25. № 11. C. 2837-2844.

Karsten U., Goletz S. What makes cancer stem cell markers different? // Springerplus. 2013. T. 2. № 1. C. 301.

Kasper G. et al. The human LAPTM4b transcript is upregulated in various types of solid tumours and seems to play a dual functional role during tumour progression // Cancer Lett. 2005. T. 224. № 1. C. 93-103.

Katayama H. et al. Phosphorylation by aurora kinase A induces Mdm2-mediated destabilization and inhibition ofp53 //Nat. Genet. 2004. T. 36. № 1. C. 55-62.

Kaur M., Cole M.D. MYC acts via the PTEN tumor suppressor to elicit autoregulation and genome-wide gene repression by activation of the Ezh2 methyltransferase //CancerRes. 2013. T. 73. № 2. C. 695-705.

Ke L. et al. HSPB1, HSPB6, HSPB7 and HSPB8 protect against RhoA GTPase-induced remodeling in tachypaced atrial myocytes // PLoS ONE. 2011. T. 6. № 6. C. e20395.

Kern S. et al. Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue // Stem Cells. 2006. T. 24. № 5. C. 1294—1301.

Kim M. et al. A mechanistic understanding of production instability in CHO cell lines expressing recombinant monoclonal antibodies // Biotechnol. Bioeng. 2011. T. 108. № 10. C. 2434-2446.

King R.W. When 2+2=5: the origins and fates of aneuploid and tetraploid cells // Biochim. Biophys. Acta. 2008. T. 1786. № 1. C. 4-14.

Kocaefe C. et al. Reprogramming of human umbilical cord stromal mesenchymal stem cells for myogenic differentiation and muscle repair // Stem Cell Rev. 2010. T. 6. №4. C. 512-522.

Krajcovic M. et al. A non-genetic route to aneuploidy in human cancers // Nat. Cell Biol. 2011. T. 13. № 3. C. 324-330.

Kuhn N.Z., Tuan R.S. Regulation of sternness and stem cell niche of mesenchymal stem cells: implications in tumorigenesis and metastasis // J. Cell. Physiol. 2010. T. 222. № 2. C. 268-277.

Kulterer B. et al. Gene expression profiling of human mesenchymal stem cells derived from bone marrow during expansion and osteoblast differentiation // BMC Genomics. 2007. T. 8. C. 70.

Kuzmina L.A. et al. Multipotent Mesenchymal Stromal Cells for the Prophylaxis of Acute Graft-versus-Host Disease-A Phase II Study // Stem Cells Int. 2012. T. 2012. C. 968213.

Kwaks T.H.J., Otte A.P. Employing epigenetics to augment the expression of therapeutic proteins in mammalian cells // Trends Biotechnol. 2006. T. 24. № 3. C. 137-142.

Lander E.S. et al. Initial sequencing and analysis of the human genome // Nature. 2001. T. 409. № 6822. C. 860-921.

Lange C. et al. Accelerated and safe expansion of human mesenchymal stromal cells in animal serum-free medium for transplantation and regenerative medicine // J. Cell. Physiol. 2007. T. 213. № 1. C. 18-26.

Larson B.L. et al. Soxl 1 is expressed in early progenitor human multipotent stromal cells and decreases with extensive expansion of the cells // Tissue Eng Part A. 2010. T. 16. № 11. C. 3385-3394.

Lasham A. et al. YB-1: oncoprotein, prognostic marker and therapeutic target? // Biochem. J. 2013. T. 449. № 1. C. 11-23.

Lazennec G., Jorgensen C. Concise review: adult multipotent stromal cells and cancer: risk or benefit? // Stem Cells. 2008. T. 26. № 6. C. 1387-1394.

Leandro-García L.J. et al. Tumoral and tissue-specific expression of the major human beta-tubulin isotypes // Cytoskeleton (Hoboken). 2010. T. 67. № 4. C. 214-223.

Lee J. et al. Smad3 regulates Rho signaling via NET1 in the transforming growth factor-beta-induced epithelial-mesenchymal transition of human retinal pigment epithelial cells // J. Biol. Chem. 2010. T. 285. № 34. C. 26618-26627.

Lee J.H. et al. Alterations in Gemin5 expression contribute to alternative mRNA splicing patterns and tumor cell motility // Cancer Res. 2008. T. 68. № 3. C. 639-644.

Lee K. et al. Human mesenchymal stem cells maintain transgene expression during expansion and differentiation // Mol. Ther. 2001. T. 3. № 6. C. 857-866.

Lee M.-H., Surh Y.-J. eEFlA2 as a putative oncogene // Ann. N. Y. Acad. Sei. 2009. T. 1171. C. 87-93.

Levings P.P. et al. Expression of an exogenous human Oct-4 promoter identifies tumor-initiating cells in osteosarcoma // Cancer Res. 2009. T. 69. № 14. C. 5648-5655.

Li H. et al. Spontaneous expression of embryonic factors and p53 point mutations in aged mesenchymal stem cells: a model of age-related tumorigenesis in mice // Cancer Res. 2007. T. 67. № 22. C. 10889-10898.

Li J.-F. et al. Differentiation of hUC-MSC into dopaminergic-like cells after transduction with hepatocyte growth factor // Mol. Cell. Biochem. 2013. T. 381. № 1-2. C. 183-190.

Li N. et al. Genetically transforming human mesenchymal stem cells to sarcomas: changes in cellular phenotype and multilineage differentiation potential // Cancer. 2009. T. 115. №20. C. 4795-4806.

Li Q. et al. Differential expression of CD146 in tissues and endothelial cells derived from infantile haemangioma and normal human skin // J. Pathol. 2003. T. 201. № 2. C. 296-302.

Li Y. et al. Generation of insulin-producing cells from PDX-1 gene-modified human mesenchymal stem cells //J. Cell. Physiol. 2007. T. 211. № 1. C. 36-44.

Lin P. et al. Efficient lentiviral transduction of human mesenchymal stem cells that preserves proliferation and differentiation capabilities // Stem Cells Transí Med. 2012. T. 1. № 12. C. 886-897.

Lindvall C. et al. Molecular characterization of human telomerase reverse transcriptase-immortalized human fibroblasts by gene expression profiling: activation of the epiregulin gene // Cancer Res. 2003. T. 63. № 8. C. 1743-1747.

Liu L. et al. Ex vivo expansion and in vivo infusion of bone marrow-derived Flk-1+CD31-CD34- mesenchymal stem cells: feasibility and safety from monkey to human // Stem Cells Dev. 2006. T. 15. № 3. C. 349-357.

Liu Q. et al. Aurora-A abrogation of p53 DNA binding and trans activation activity by phosphorylation of serine 215 // J. Biol. Chem. 2004. T. 279. № 50. C. 52175-52182.

Liu T.M. et al. Identification of common pathways mediating differentiation of bone marrow- and adipose tissue-derived human mesenchymal stem cells into three mesenchymal lineages // Stem Cells. 2007. T. 25. № 3. C. 750-760.

Locke M. et al. Transduction of human adipose-derived mesenchymal stem cells by recombinant adeno-associated virus vectors // Tissue Eng Part C Methods. 2011. T. 17. № 9. C. 949-959.

Lu C.-H. et al. Recent progresses in gene delivery-based bone tissue engineering // Biotechnol. Adv. 2013. T. 31. № 8. C. 1695-1706.

Lu L. et al. Therapeutic benefit of TH-engineered mesenchymal stem cells for Parkinson's disease//Brain Res. Brain Res. Protoc. 2005. T. 15. № 1. C. 46-51.

Lund R.J., Närvä E., Lahesmaa R. Genetic and epigenetic stability of human pluripotent stem cells // Nat. Rev. Genet. 2012. T. 13. № 10. C. 732-744.

Madeira C. et al. Nonviral gene delivery to mesenchymal stem cells using cationic liposomes for gene and cell therapy // J. Biomed. Biotechnol. 2010. T. 2010. C. 735349.

Madonna R. et al. Transplantation of mesenchymal cells rejuvenated by the overexpression of telomerase and myocardin promotes revascularization and tissue repair in a murine model of hindlimb ischemia // Circ. Res. 2013. T. 113. № 7. C. 902914.

Majid S.M. et al. The suppression of SH3BGRL is important for v-Rel-mediated transformation // Oncogene. 2006. T. 25. № 5. C. 756-768.

Mareschi K. et al. Expansion of mesenchymal stem cells isolated from pediatric and adult donor bone marrow // J. Cell. Biochem. 2006. T. 97. № 4. C. 744-754.

Matsumine A. et al. Expression of decorin, a small leucine-rich proteoglycan, as a prognostic factor in soft tissue tumors // J Surg Oncol. 2007. T. 96. № 5. C. 411^118.

Matushansky I. et al. Derivation of sarcomas from mesenchymal stem cells via inactivation oftheWnt pathway//J. Clin. Invest. 2007. T. 117. № 11. C. 3248-3257.

McClintick J.N., Edenberg H.J. Effects of filtering by Present call on analysis of microarray experiments // BMC Bioinformatics. 2006. T. 7. C. 49.

McDowell C.L., Bryan Sutton R., Obermann W.M.J. Expression of Hsp90 chaperone [corrected] proteins in human tumor tissue // Int. J. Biol. Macromol. 2009. T. 45. №3. C. 310-314.

McGinley L. et al. Lentiviral vector mediated modification of mesenchymal stem cells & enhanced survival in an in vitro model of ischaemia // Stem Cell Res Ther. 2011. T. 2. №2. C. 12.

McGinley L.M. et al. Mesenchymal stem cell survival in the infarcted heart is enhanced by lentivirus vector-mediated heat shock protein 27 expression // Hum. Gene Ther. 2013. T. 24. № 10. C. 840-851.

McMahon J.M. et al. Gene transfer into rat mesenchymal stem cells: a comparative study of viral and nonviral vectors // Stem Cells Dev. 2006. T. 15. № 1. C. 87-96.

Menicanin D. et al. Genomic profiling of mesenchymal stem cells // Stem Cell Rev. 2009. T. 5. № 1. C. 36-50.

Menon L.G. et al. Human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells expressing S-TRAIL as a cellular delivery vehicle for human glioma therapy // Stem Cells. 2009. T. 27. № 9. C. 2320-2330.

Meraldi P., Honda R., Nigg E.A. Aurora-A overexpression reveals tetraploidization as a major route to centrosome amplification in p53-/- cells //EMBO J. 2002. T. 21. № 4. C. 483-492.

Mestas J., Plughes C.C.W. Of mice and not men: differences between mouse and human immunology //J. Immunol. 2004. T. 172. № 5. C. 2731-2738.

Meza-Zepeda L.A. et al. High-resolution analysis of genetic stability of human adipose tissue stem cells cultured to senescence // J. Cell. Mol. Med. 2008. T. 12. № 2. C. 553-563.

Middleton J. et al. A comparative study of endothelial cell markers expressed in chronically inflamed human tissues: MECA-79, Duffy antigen receptor for chemokines, von Willebrand factor, CD31, CD34, CD105 and CD146 //J. Pathol. 2005. T. 206. № 3. C. 260-268.

Miettinen M.M. Diagnostic soft tissue pathology. New York: Churchill Livingstone, 2003.

Miller J.A. et al. Strategies for aggregating gene expression data: the collapseRows R function//BMC Bioinformatics. 2011. T. 12. C. 322.

Mitalipova M.M. et al. Preserving the genetic integrity of human embryonic stem cells //Nat. Biotechnol. 2005. T. 23. № 1. C. 19-20.

Miura M. et al. Accumulated chromosomal instability in murine bone marrow mesenchymal stem cells leads to malignant transformation // Stem Cells. 2006. T. 24. № 4. C. 1095-1103.

Mohseny A.B. et al. Osteosarcoma originates from mesenchymal stem cells in consequence of aneuploidization and genomic loss of Cdkn2 // J. Pathol. 2009. T. 219. № 3. C. 294—305.

Mohseny A.B., Hogendoorn P.C.W. Concise review: mesenchymal tumors: when stem cells go mad // Stem Cells. 2011. T. 29. № 3. C. 397-403.

Moriyama H. et al. Tightly regulated and homogeneous transgene expression in human adipose-derived mesenchymal stem cells by lentivirus with tet-off system // PLoS ONE. 2013. T. 8. № 6. C. e66274.

Morizono K. et al. Multilineage cells from adipose tissue as gene delivery vehicles //Hum. Gene Ther. 2003. T. 14. № 1. C. 59-66.

Muller II., Helin K. The E2F transcription factors: key regulators of cell proliferation //Biochim. Biophys. Acta. 2000. T. 1470. № 1. C. Ml-12.

Murnane J.P. Telomere dysfunction and chromosome instability // Mutat. Res. 2012. T. 730. № 1-2. C. 28-36.

Naka N. et al. Synovial sarcoma is a stem cell malignancy // Stem Cells. 2010. T. 28. №7. C. 1119-1131.

Nakagami H. et al. Adipose tissue-derived stromal cells as a novel option for regenerative cell therapy// J. Atheroscler. Thromb. 2006. T. 13. № 2. C. 77-81.

Nakamizo A. et al. Human bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the treatment of gliomas //Cancer Res. 2005. T. 65. № 8. C. 3307-3318.

Nakamura K. et al. Antitumor effect of genetically engineered mesenchymal stem cells in a rat glioma model//Gene Ther. 2004. T. 11. № 14. C. 1155-1164.

Neth P. et al. Wnt signaling regulates the invasion capacity of human mesenchymal stem cells // Stem Cells. 2006. T. 24. № 8. C. 1892-1903.

Nicholson J.M., Cimini D. Cancer karyotypes: survival of the fittest // Front Oncol. 2013. T. 3. C. 148.

Nielsen T.O. et al. Molecular characterisation of soft tissue tumours: a gene expression study//Lancet. 2002. T. 359. № 9314. C. 1301-1307.

Ning H. et al. Identification of an aberrant cell line among human adipose tissue-derived stem cell isolates //Differentiation. 2009. T. 77. № 2. C. 172-180.

Nishio J. Contributions of cytogenetics and molecular cytogenetics to the diagnosis of adipocytic tumors //J. Biomed. Biotechnol. 2011. T. 2011. C. 524067.

Noguchi C. et al. Fusion of the Dhfr/Mtx and IR/MAR gene amplification methods produces a rapid and efficient method for stable recombinant protein production//PLoS ONE. 2012. T. 7. № 12. C. e52990.

O'Callaghan P.M., James D.C. Systems biotechnology of mammalian cell factories //Brief Funct Genomic Proteomic. 2008. T. 7. № 2. C. 95-110.

Oberlin E. et al. Blood-forming potential of vascular endothelium in the human embryo //Development. 2002. T. 129. № 17. C. 4147-4157.

Ocaña O.H. et al. Metastatic colonization requires the repression of the epithelialmesenchymal transition inducer Prrxl //Cancer Cell. 2012. T. 22. № 6. C. 709-724.

Okuyama H. et al. Downregulation of c-MYC protein levels contributes to cancer cell survival under dual deficiency of oxygen and glucose // Cancer Res. 2010. T. 70. № 24. C. 10213-10223.

Omerovic J., Clague M.J., Prior I.A. Phosphatome profiling reveals PTPN2, PTPRJ and PTEN as potent negative regulators of PKB/Akt activation in Ras-mutated cancer cells // Biochem. J. 2010. T. 426. № 1. C. 65-72.

Orso F. et al. AP-2alpha and AP-2gamma regulate tumor progression via specific genetic programs // FASEB J. 2008. T. 22. № 8. C. 2702-2714.

Oxford G. et al. Expression profiling of Ral-depleted bladder cancer cells identifies RREB-1 as a novel transcriptional Ral effector // Oncogene. 2007. T. 26. № 50. C. 7143-7152.

Papageorgis P. et al. Smad signaling is required to maintain epigenetic silencing during breast cancer progression// Cancer Res. 2010. T. 70. № 3. C. 968-978.

Pardali E. et al. Critical role of endoglin in tumor cell plasticity of Ewing sarcoma and melanoma // Oncogene. 2011. T. 30. № 3. C. 334-345.

Park J.S. et al. Differential effects of equiaxial and uniaxial strain on mesenchymal stem cells //Biotechnol. Bioeng. 2004. T. 88. № 3. C. 359-368.

Park J.S. et al. Retro virus-mediated transduction of a cytosine deaminase gene preserves the sternness of mesenchymal stem cells // Exp. Mol. Med. 2013. T. 45. C. elO.

Pathak S. et al. Telomere dynamics, aneuploidy, stem cells, and cancer (review) // Int. J. Oncol. 2002. T. 20. № 3. C. 637-641.

Payne N.L. et al. Early intervention with gene-modified mesenchymal stem cells overexpressing interleukin-4 enhances anti-inflammatory responses and functional recovery in experimental autoimmune demyelination // Cell Adh Migr. 2012. T. 6. № 3. C. 179-189.

Péault B. et al. Stem and progenitor cells in skeletal muscle development, maintenance, and therapy // Mol. Ther. 2007. T. 15. № 5. C. 867-877.

Pérez-Mancera P.A., Sánchez-García I. Understanding mesenchymal cancer: the liposarcoma-associated FUS-DDIT3 fusion gene as a model // Semin. Cancer Biol. 2005. T. 15. № 3. C. 206-214.

Phinney D.G., Sensebé L. Mesenchymal stromal cells: misconceptions and evolving concepts //Cytotherapy. 2013. T. 15. № 2. C. 140-145.

Pilger A. et al. Long-term monitoring of sister chromatid exchanges and micronucleus frequencies in pharmacy personnel occupationally exposed to cytostatic drugs // Int Arch Occup Environ Health. 2000. T. 73. № 7. C. 442-448.

Pirone D.M. et al. SPECs, small binding proteins for Cdc42 // J. Biol. Chem. 2000. T. 275. № 30. C. 22650-22656.

Pochampally R.R. et al. Histamine receptor HI and dermatopontin: new downstream targets of the vitamin D receptor // J. Bone Miner. Res. 2007. T. 22. № 9. C. 1338-1349.

Porada C.D., Almeida-Porada G. Mesenchymal stem cells as therapeutics and vehicles for gene and drug delivery // Adv. Drug Deliv. Rev. 2010. T. 62. № 12. C. 1156-1166.

Qin H. et al. Characterization of the biochemical and transforming properties of the neuroepithelial transforming protein 1 // J. Biol. Chem. 2005. T. 280. № 9. C. 76037613.

Qin J.Y. et al. Systematic comparison of constitutive promoters and the doxycycline-inducible promoter//PLoS ONE. 2010. T. 5. № 5. C. el0611.

Razali N.M., Wah Y.B. Power comparisons of Shapiro-Wilk, Kolmogorov-Smirnov, Lilliefors and Anderson-Darling tests // Journal of Statistical Modeling and Analytics Vol. 2011. T. 2. № l. C. 21-33.

Real G. et al. Improvement of lentiviral transfer vectors using eis-acting regulatory elements for increased gene expression // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2011. T. 91. №6. C. 1581-1591.

Reing J.E. et al. Degradation products of extracellular matrix affect cell migration and proliferation // Tissue Eng Part A. 2009. T. 15. № 3. C. 605-614.

Reisinger H. et al. The absence of effect of gene copy number and mRNA level on the amount of mAb secretion from mammalian cells // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2008. T. 81. №4. C. 701-710.

Ren Y.-X. et al. Mouse mesenchymal stem cells expressing PAX-FKHR form alveolar rhabdomyosarcomas by cooperating with secondary mutations // Cancer Res. 2008. T. 68. № 16. C. 6587-6597.

Ricke R.M., Deursen J.M. van. Aneuploidy in health, disease, and aging // J. Cell Biol. 2013. T. 201. № 1. C. 11-21.

Ricke R.M., Jeganathan K.B., Deursen J.M. van. Bubl overexpression induces aneuploidy and tumor formation through Aurora B kinase hyperactivation // J. Cell Biol. 2011. T. 193. № 6. C. 1049-1064.

Riggi N. et al. EWS-FLI-1 expression triggers a Ewing's sarcoma initiation program in primary human mesenchymal stem cells // Cancer Res. 2008. T. 68. № 7. C. 2176-2185.

Rodriguez A.-M. et al. Adipocyte differentiation of multipotent cells established from human adipose tissue // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. T. 315. № 2. C. 255-263.

Rodriguez A.-M. et al. Transplantation of a multipotent cell population from human adipose tissue induces dystrophin expression in the immunocompetent mdx mouse // J. Exp. Med. 2005. T. 201. № 9. C. 1397-1405.

Rodriguez R. et al. FUS-CHOP fusion protein expression coupled to p53 deficiency induces liposarcoma in mouse but not in human adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells // Stem Cells. 2011. T. 29. № 2. C. 179-192.

Rodriguez R. et al. Loss of p53 induces tumorigenesis in p21-deficient mesenchymal stem cells //Neoplasia. 2009. T. 11. № 4. C. 397-407.

Rosland G.V. et al. Long-term cultures of bone marrow-derived human mesenchymal stem cells frequently undergo spontaneous malignant transformation // Cancer Res. 2009. T. 69. № 13. C. 5331-5339.

Rubio D. et al. Spontaneous human adult stem cell transformation // Cancer Res. 2005. T. 65. № 8. C. 3035-3039.

Rubio R. et al. Deficiency in p53 but not retinoblastoma induces the transformation of mesenchymal stem cells in vitro and initiates leiomyosarcoma in vivo // Cancer Res. 2010. T. 70. № 10. C. 4185-4194.

Sacchetti B. et al. Self-renewing osteoprogenitors in bone marrow sinusoids can organize a hematopoietic microenvironment // Cell. 2007. T. 131. № 2. C. 324-336.

Sanchez-Ramos J. et al. Adult bone marrow stromal cells differentiate into neural cells in vitro //Exp. Neurol. 2000. T. 164. № 2. C. 247-256.

Santo E.E. et al. Oncogenic activation of FOXR1 by llq23 intrachromosomal deletion-fusions in neuroblastoma//Oncogene. 2012. T. 31. № 12. C. 1571—1581.

Santos J.L. et al. Non-viral gene delivery to mesenchymal stem cells: methods, strategies and application in bone tissue engineering and regeneration // Curr Gene Ther. 2011. T. 11. № 1. C. 46-57.

Sasportas L.S. et al. Assessment of therapeutic efficacy and fate of engineered human mesenchymal stem cells for cancer therapy // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 2009. T. 106. № 12. C. 4822-4827.

Scheideier M. et al. Comparative transcriptomics of human multipotent stem cells during adipogenesis and osteoblastogenesis // BMC Genomics. 2008. T. 9. C. 340.

Schierling W. et al. Fates of genetically engineered haematopoietic and mesenchymal stem cell grafts in normal and injured rat hearts // J Tissue Eng Regen Med. 2008. T. 2. № 6. C. 354-364.

Sekiya I. et al. Adipogenic differentiation of human adult stem cells from bone marrow stroma (MSCs) // J. Bone Miner. Res. 2004. T. 19. № 2. C. 256-264.

Serakinci N. et al. Adult human mesenchymal stem cell as a target for neoplastic transformation // Oncogene. 2004. T. 23. № 29. C. 5095-5098.

Shi S., Gronthos S. Perivascular niche of postnatal mesenchymal stem cells in human bone marrow and dental pulp // J. Bone Miner. Res. 2003. T. 18. № 4. C. 696704.

Shih D.T. et al. Isolation and characterization of neurogenic mesenchymal stem cells in human scalp tissue // Stem Cells. 2005. T. 23. № 7. C. 1012-1020.

Shima Y. et al. In vitro transformation of mesenchymal stem cells by oncogenic H-rasVall2 //Biochem. Biophys. Res. Commun. 2007. T. 353. № 1. C. 60-66.

Shimizu T. et al. c-MYC overexpression with loss of Ink4a/Arf transforms bone marrow stromal cells into osteosarcoma accompanied by loss of adipogenesis // Oncogene. 2010. T. 29. № 42. C. 5687-5699.

Shiras A. et al. Spontaneous transformation of human adult nontumorigenic stem cells to cancer stem cells is driven by genomic instability in a human model of glioblastoma // Stem Cells. 2007. T. 25. № 6. C. 1478-1489.

Silva Meirelles L. da, Chagastelles P.C., Nardi N.B. Mesenchymal stem cells reside in virtually all post-natal organs and tissues // J. Cell. Sci. 2006. T. 119. № Pt 11. C. 2204-2213.

Simon R. Microarray-based expression profiling and informatics // Curr. Opin. Biotechnol. 2008. T. 19. № 1. C. 26-29.

Sinacore M.S., Drapeau D., Adamson S.R. Adaptation of mammalian cells to growth in serum-free media // Mol. Biotechnol. 2000. T. 15. № 3. C. 249-257.

Skalamera D. et al. Generation of a genome scale lentiviral vector library for EFla promoter-driven expression of human ORFs and identification of human genes affecting viral titer //PLoS ONE. 2012. T. 7. № 12. C. e51733.

Skubitz K.M. et al. Identification of heterogeneity among soft tissue sarcomas by gene expression profiles from different tumors // J TranslMed. 2008. T. 6. C. 23.

Skubitz K.M., D'Adamo D.R. Sarcoma// Mayo Clin. Proc. 2007. T. 82. № 11. C. 1409-1432.

Smith J. et al. The ATM-Chk2 and ATR-Chkl pathways in DNA damage signaling and cancer//Adv. Cancer Res. 2010. T. 108. C. 73-112.

Sorrentino A. et al. Isolation and characterization of CD146+ multipotent mesenchymal stromal cells //Exp. Hematol. 2008. T. 36. № 8. C. 1035-1046.

Soukup T. et al. Mesenchymal stem cells isolated from the human bone marrow: cultivation, phenotypic analysis and changes in proliferation kinetics // Acta Medica (Hradec Kralove). 2006. T. 49. № 1. C. 27-33.

Stagg J. Mesenchymal stem cells in cancer // Stem Cell Rev. 2008. T. 4. № 2. C. 119-124.

Strem B.M. et al. Multipotential differentiation of adipose tissue-derived stem cells // Keio J Med. 2005. T. 54. № 3. C. 132-141.

Studeny M. et al. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells as vehicles for interferon-beta delivery into tumors // Cancer Res. 2002. T. 62. № 13. C. 3603-3608.

Subramanian A. et al. Gene set enrichment analysis: a knowledge-based approach for interpreting genome-wide expression profiles // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2005. T. 102. №43. C. 15545-15550.

Suemori H. et al. Efficient establishment of human embryonic stem cell lines and long-term maintenance with stable karyotype by enzymatic bulk passage // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. T. 345. № 3. C. 926-932.

Sun Y. et al. The eukaryotic translation elongation factor eEFlA2 induces neoplastic properties and mediates tumorigenic effects of ZNF217 in precursor cells of human ovarian carcinomas //Int. J. Cancer. 2008. T. 123. № 8. C. 1761-1769.

Suva M.-L. et al. Identification of cancer stem cells in Ewing's sarcoma// Cancer Res. 2009. T. 69. № 5. C. 1776-1781.

Swiech K., Picanipo-Castro V., Covas D.T. Human cells: new platform for recombinant therapeutic protein production // Protein Expr. Purif. 2012. T. 84. № 1. C. 147-153.

Takikita M., Chung J.-Y., Hewitt S.M. Tissue microarrays enabling high-throughput molecular pathology // Curr. Opin. Biotechnol. 2007. T. 18. № 4. C. 318325.

Tanaka PI., Yao M.-C. Palindromic gene amplification—an evolutionarily conserved role for DNA inverted repeats in the genome //Nat. Rev. Cancer. 2009. T. 9. № 3. C. 216-224.

Tarte K. et al. Clinical-grade production of human mesenchymal stromal cells: occurrence of aneuploidy without transformation // Blood. 2010. T. 115. № 8. C. 15491553.

Thollet A. et al. ZNF217 confers resistance to the pro-apoptotic signals of paclitaxel and aberrant expression of Aurora-A in breast cancer cells // Mol. Cancer. 2010. T. 9. C. 291.

Tiganis T. et al. Epidermal growth factor receptor and the adaptor protein p52Shc are specific substrates of T-cell protein tyrosine phosphatase//Mol. Cell. Biol. 1998. T. 18. №3. C. 1622-1634.

Tolar J. et al. Sarcoma derived from cultured mesenchymal stem cells // Stem Cells. 2007. T. 25. № 2. C. 371-379.

Toma J.G. et al. Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin //Nat. Cell Biol. 2001. T. 3. № 9. C. 778-784.

Tondreau T. et al. Gene expression pattern of functional neuronal cells derived from human bone marrow mesenchymal stromal cells // BMC Genomics. 2008. T. 9. C. 166.

Treacy O. et al. Adenoviral transduction of mesenchymal stem cells: in vitro responses and in vivo immune responses after cell transplantation // PLoS ONE. 2012. T. 7. № 8. C. e42662.

Tsai M.-S. et al. Functional network analysis of the transcriptomes of mesenchymal stem cells derived from amniotic fluid, amniotic membrane, cord blood, and bone marrow // Stem Cells. 2007. T. 25. № 10. C. 2511-2523.

Turc-Carel C. et al. Cytogenetic studies of adipose tissue tumors. I. A benign lipoma with reciprocal translocation t(3;12)(q28;ql4) // Cancer Genet. Cytogenet. 1986. T. 23. № 4. C. 283-289.

Urazova O.I. et al. Cytogenetic impairments of peripheral blood lymphocytes during infectious mononucleosis // Bull. Exp. Biol. Med. 2001. T. 131. № 4. C. 392393.

Vargas A.E. et al. Genetic modification of mesenchymal stem cells // Methods Mol. Biol. 2012. T. 879. C. 479-490.

Varma N.R.S. et al. Lentiviral Based Gene Transduction and Promoter Studies in Human Hematopoietic Stem Cells (hHSCs) // J Stem Cells Regen Med. 2011. T. 7. № 1. C. 41-53.

Vendrell J.A. et al. ZNF217 is a marker of poor prognosis in breast cancer that drives epithelial-mesenchymal transition and invasion // Cancer Res. 2012. T. 72. № 14. C. 3593-3606.

Venter J.C. et al. The sequence of the human genome // Science. 2001. T. 291. № 5507. C. 1304-1351.

Vermeulen L. et al. Cancer stem cells—old concepts, new insights // Cell Death Differ. 2008. T. 15. № 6. C. 947-958.

Visvader J.E. Cells of origin in cancer // Nature. 2011. T. 469. № 7330. C. 314322.

Vitale I. et al. Illicit survival of cancer cells during polyploidization and depolyploidization // Cell Death Differ. 2011. T. 18. № 9. C. 1403-1413.

Vierken L.E. van et al. EZH2 is required for breast and pancreatic cancer stem cell maintenance and can be used as a functional cancer stem cell reporter // Stem Cells Transl Med. 2013. T. 2. № 1. C. 43-52.

Wagner W. et al. Comparative characteristics of mesenchymal stem cells from human bone marrow, adipose tissue, and umbilical cord blood // Exp. Hematol. 2005. T. 33. № 11. C. 1402-1416.

Wang N. et al. Down-regulation of HtrAl activates the epithelial-mesenchymal transition and ATM DNA damage response pathways // PLoS ONE. 2012. T. 7. № 6. C. e39446.

Wang X. et al. Hsp20-engineered mesenchymal stem cells are resistant to oxidative stress via enhanced activation of Akt and increased secretion of growth factors // Stem Cells. 2009. T. 27. № 12. C. 3021-3031.

Wang Y. et al. A toxicity study of multiple-administration human umbilical cord mesenchymal stem cells in cynomolgus monkeys // Stem Cells Dev. 2012. T. 21. № 9. C. 1401-1408.

Wang Y. et al. Outgrowth of a transformed cell population derived from normal human BM mesenchymal stem cell culture // Cytotherapy. 2005. T. 7. № 6. C. 509-519.

Wang Y.-L. et al. Overexpression of calcineurin В subunit (CnB) enhances the oncogenic potential of HEK293 cells // Cancer Sci. 2008. T. 99. № 6. С. 1100-1108.

Watanabe N. et al. Genetically modified adipose tissue-derived stem/stromal cells, using simian immunodeficiency virus-based lentiviral vectors, in the treatment of hemophilia В //Hum. Gene Ther. 2013. T. 24. № 3. C. 283-294.

Weiss S.W. 44th Maude Abbott Lecture. Soft tissue sarcomas: lessons from the past, challenges for the future //Mod. Pathol. 2002. T. 15. № 1. C. 77-86.

Weiss S.W., Goldblum J.R., Folpe A.L. Enzinger and Weiss's Soft Tissue Tumors. Elsevier Health Sciences, 2007. Вып. 5. 4348 С.

Wild L. et al. In vitro transformation of mesenchymal stem cells induces gradual genomic hypomethylation // Carcinogenesis. 2010. T. 31. № 10. C. 1854-1862.

Woodbury D. et al. Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons // J. Neurosci. Res. 2000. T. 61. № 4. C. 364-370.

Wosnitza M. et al. Plasticity of human adipose stem cells to perform adipogenic and endothelial differentiation //Differentiation. 2007. T. 75. № 1. C. 12-23.

Wu B. et al. Lentiviral delivery of biglycan promotes proliferation and increases osteogenic potential of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in vitro // J. Mol. Histol. 2013. T. 44. № 4. C. 423-431.

Wu C. et al. Aggressive fibromatosis (desmoid tumor) is derived from mesenchymal progenitor cells // Cancer Res. 2010. T. 70. № 19. C. 7690-7698.

Wurm F.M. Production of recombinant protein therapeutics in cultivated mammalian cells //Nat. Biotechnol. 2004. T. 22. № 11. C. 1393-1398.

Xia J. et al. Elevated serine protease HtrAl inhibits cell proliferation, reduces invasion, and induces apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma by blocking the nuclear factor-icB signaling pathway // Tumour Biol. 2013. T. 34. № 1. C. 317-328.

Xia X. et al. Transgenes delivered by lentiviral vector are suppressed in human embryonic stem cells in a promoter-dependent manner // Stem Cells Dev. 2007. T. 16. № 1. C. 167-176.

Xiao W. et al. Mesenchymal stem cell transformation and sarcoma genesis // Clin Sarcoma Res. 2013. T. 3. № 1. C. 10.

Yamamoto Y. et al. Overexpression of polo-like kinase 1 (PLK1) and chromosomal instability in bladder cancer // Oncology. 2006. T. 70. № 3. C. 231-237.

Yamate J. et al. Adipogenic, osteogenic and myofibrogenic differentiations of a rat malignant fibrous histiocytoma (MFH)-derived cell line, and a relationship of MFH cells with embryonal mesenchymal, perivascular and bone marrow stem cells // Eur. J. Cancer. 2007. T. 43. № 18. C. 2747-2756.

Zaragosi L.-E., Ailhaud G., Dani C. Autocrine fibroblast growth factor 2 signaling is critical for self-renewal of human multipotent adipose-derived stem cells // Stem Cells. 2006. T. 24. № 11. C. 2412-2419.

Zeller K.I. et al. An integrated database of genes responsive to the Myc oncogenic transcription factor: identification of direct genomic targets // Genome Biol. 2003. T. 4. № 10. C. R69.

Zhang D. et al. Over-expression of CXCR4 on mesenchymal stem cells augments myoangiogenesis in the infarcted myocardium // J. Mol. Cell. Cardiol. 2008. T. 44. № 2. C. 281-292.

Zhang G. et al. Therapeutic gene expression in transduced mesenchymal stem cells can be monitored using a reporter gene // Nucl. Med. Biol. 2012. T. 39. № 8. C. 1243-1250.

Zhang L. et al. PEP-l-CAT-transduced mesenchymal stem cells acquire an enhanced viability and promote ischemia-induced angiogenesis // PLoS ONE. 2012. T. 7. № 12. C. e52537.

Zhang X., Godbey W.T. Viral vectors for gene delivery in tissue engineering // Adv. Drug Deliv. Rev. 2006. T. 58. № 4. C. 515-534.

Zhang Z.-X. et al. Cytogenetic analysis of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells passaged in vitro // Cell Biol. Int. 2007. T. 31. № 6. C. 645648.

Zhou Y.F. et al. Spontaneous transformation of cultured mouse bone marrow-derived stromal cells // Cancer Res. 2006. T. 66. № 22. C. 10849-10854.

Zielske S.P., Livant D.L., Lawrence T.S. Radiation increases invasion of gene-modified mesenchymal stem cells into tumors // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 2009. T. 75. № 3. C. 843-853.

148