Гиполипидемическая активность и механизм действия L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Буйко Евгений Евгеньевич

• Буйко Евгений Евгеньевич
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Буйко Евгений Евгеньевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Актуальное эпидимиологическое состояние и подходы к терапии дислипидемических расстройств

1.2 Метаболизм желчных кислот и их участие в липидном обмене

1.3 Природа и механизм действия секвестрантов желчных кислот

1.4 Биологически активные вещества растительного происхождения

секвестранты желчных кислот

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Характеристика объекта исследования

2.2 Характеристика препаратов сравнения

2.3 Дизайн исследований на лабораторных животных

2.3.1 Содержание экспериментальных животных

2.3.2 Оценка острой токсичности субстанции L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана при однократном внутрижелудочном или внутрибрюшинном введении крысам и мышам

2.3.3 Способы и пути введения лабораторным животным исследуемого вещества и препаратов сравнения при оценке специфической фармакологической активности

2.3.4 Определение эффективной дозы гиполипидемического действия Ь-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана у крыс при стандартном питании

2.3.5 Исследование гиполипидемической активности L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана на модели хронической гиперлипидемии у крыс

2.3.6 Исследование гиполипидемической активности L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана на модели хронической гиперлипидемии у хомяков

2.4 Определение лабораторных показателей липидного метаболизма

2.4.1 Определение содержания триацилглицеролов в сыворотке крови

2.4.2 Определение содержания общего холестерола в сыворотке крови

2.4.3 Определение содержания холестерола в липопротеинах низкой плотности в сыворотке крови

2.4.4 Определение содержания холестерола в липопротеинах высокой плотности в сыворотке крови

2.4.5 Расчет индекса атерогенности

2.4.6 Определение содержания общих желчных кислот в сыворотке крови

2.4.7 Определение содержания холестерола и триацилглицеролов в печени

2.4.8 Определение содержания желчных кислот в фекалиях

2.5 Определение скорости секреции желчи и содержания в ней желчных кислот

2.6 Определение экспрессии мРНК генов 7а-гидроксилазы и рецептора к липопротеинам низкой плотности

2.7 Оценка способности L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана сорбировать желчные кислоты in vitro

2.8 Численное моделирование возможных механизмов взаимодействия Ь-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана с молекулами желчных кислот на уровне молекулярной динамики

2.9 Оценка способности L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана сорбировать желчные кислоты методом световой микроскопии

2.10 Статистическая обработка полученных экспериментальных данных

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Оценка токсичности L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана при

однократном введении

3.1.1 Влияние однократного внутрижелудочного или внутрибрюшинного введения субстанции L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана на клиническое состояние мышей и крыс

3.1.2 Влияние однократного внутрижелудочного или внутрибрюшинного введения субстанции L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана на массу тела мышей и крыс

3.1.3 Влияние однократного внутрижелудочного или внутрибрюшинного введения субстанции L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана на массу внутренних органов мышей и крыс

3.2 Исследование специфической гиполипидемической активности L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана

3.2.1 Определение эффективной терапевтической дозы L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана у здоровых крыс при питании стандартным лабораторным кормом

3.2.2 Определение гиполипидемической активности L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана на модели хронической гиперлипидемии, индуцированной высокожировой диетой у крыс

3.2.3 Исследование активности L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана при комбинированной терапии на модели высокожировой диеты у хомяков

3.3 Исследование механизма гиполипидемического действия L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана

3.3.1 Исследование влияния L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана на уровень желчных кислот в крови крыс и хомяков с диет-индуцированной гиперлипидемией........................................................................................................11б

3.3.2 Исследование влияния L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана на скорость секреции желчи и содержание в ней желчных кислот на модели диет-индуцированной гиперлипидемии у крыс

3.3.3 Изучение механизма гиполипидемического действия L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана, обусловленного влиянием на экскрецию желчных кислот с калом на модели высокожировой диеты у крыс и хомяков

3.3.4 Оценка связывающей способности L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана в отношении желчных кислот in vitro

3.3.5 Исследование влияния L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана на экспрессию мРНК генов 7а-гидроксилазы и рецептора к липопротеинам низкой плотности у крыс

3.3.6 Численное моделирование возможных механизмов взаимодействия L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана с молекулами желчных кислот на

уровне молекулярной динамики

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Гиполипидемическая активность и механизм действия L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Дислипидемия - патологическое состояние, характеризуемое разнообразными нарушениями в обмене фракций липопротеинов, определяющих общее количество холестерола (ХС) в организме человека [1]. Нарушение соотношений и содержания ХС липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП) и липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП), а также часто и других липидов сопряжено с увеличением общего риска возникновения и развития сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), включая инфаркт миокарда и инсульт [1]. Наиболее частой формой гиперлипидемии является повышение содержания ХС в ЛПНП - гиперлипидемия. К другим вариантам относят гипертриглицеридемию, а также смешанную гиперлипидемию, при которой повышены уровни как ХС, так и триглицеридов (ТАГ) [2]. В структуре заболеваемости важное место занимает генетически опосредованная семейная гиперхолестеролемия (СГ).

В медицинских кругах наблюдается серьезная обеспокоенность по поводу резкого увеличения числа случаев дислипидемии по всему миру, поскольку известно, что дислипидемические расстворйства играют важную роль в развитии сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ). При осуществлении комплекмных проспективных исследований, ориентированных на выявление этиопатогенетических причин ССЗ, было выявлено, что атерогенная дислипидемия неизменно занимает ведущее место в списке наиболее предрасполагающих факторов [3]. Фактически, люди с выявленной гиперлипидемией обладают вероятностью возникновения ССЗ примерно вдвое большей по сравнению с лицами, у которых концентрация общего ХС в крови соответствует установленным референсным значениям [3, 4]. Исследования по созданию новых лекарственных препаратов для лечения состояний, вызванных нарушениями метаболизма ХС, становятся особенно актуальными вследствие высокой эпидемиологической частоты, значительной летальности и массовой

инвалидизации населения, а также ввиду увеличения затрат на медицинскую помощь. Пациенты, страдающие сахарным диабетом, обладают повышенным риском возникновения ССЗ, включая случаи манифестирования заболевания в молодом возрасте [2]. Всё это подчёркивает важность разработки комплексных стратегических мер и подходов к коррекции гиперлипидемий.

Исследователи проявляют все больше заинтересованности в изучении применения природных биологически активных компонентов, в частности, полисахаридов растительного происхождения для создания инновационных препаратов, обеспечивающих эффективную и безопасную терапию дислипидемий.

Опубликованные результаты исследований свидетельствуют о том, что некоторые растительные полисахариды обладают способностью снижать уровни ХС и ТАГ в сыворотке крови [6-8]. Перспективным соединением, потенициально обладающим гиполипидемической активностью, является L-рамнопиранозил^-О-метил-галактуронан (L-RAG) - полисахарид, выделенный из листьев березы повислой (Betula pendula L.) [9, 10] по ранее разработанной и валидированной методике [11].

Степень разработанности проблемы. Исследования полисахаридов с гиполипидемическим потенциалом ведутся очень активно и сосредоточены в основном на поиске новых источников полисахаридов и модификации потенциальных полисахаридов-кандидатов физико-химическими и биохимическими методами [12]. Природные БАВ полисахаридной природы, такие как ß-глюканы, в настоящее время используются в качестве гипохолестеролемических биологически активных добавок к пище, при этом их эффективность признается Европейским агентством по безопасности пищевых продуктов (EFSA) и Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) [13, 14].

Известно, что несколько классов полисахаридов растительного происхождения обладают гиполипидемическим потенциалом, действуя подобно

препаратам-секвестрантам желчных кислот (ЖК). В настоящий момент секвестранты ЖК являются третьим по значимости классом препаратов для терапии дислипидемий в мире [15]. Уменьшая всасывание ЖК в кишечнике, секвестранты снижают сывороточный уровень ХС-ЛПНП на 10-30%, активизируя синтез ЖК из ХС в печени, что приводит росту числа печеночных рецепторов к липопротеинам низкой плотности и интенсифицирует захват циркулирующих в кровотоке атерогенных липопротеинов [16]. Показано, что препараты этого класса улучшают гликемический контроль у пациентов с диабетом, что является дополнительным преимуществом [17].

Основным требованием к молекулам-кандидатам при исследовании новых соединений, обладающих секвестрантными свойствами, является их способность в высокой мере селективно связываться с ЖК, однако процесс адсорбции должен протекать по возможности медленно, что обеспечит развитие меньшего количества нежелательных побочных эффектов и более низкой токсичности [18].

Способность полисахаридов влиять на гомеостаз ХС путем сорбции ЖК зависит от их физико-химических характеристик [19, 20]. Было показано, что хитозан и производные олигосахариды, обладающие положительным зарядом, связывают ЖК как in vitro [20, 21], так и in vivo [22-24]. Эксперименты in vitro показали, что катионные полисахариды, полученные из Р-1,3-глюкана Эвглены -одноклеточного организма класса эвгленид (Euglenida), имеют способность к селективной адсорбции ЖК (более высокая адсорбционная селективность, чем у холестирамина) [25]. Одновременно с этим, полисахариды, обладающие длинной цепью моносахаридных остатков, обладают значительным потенциалом для избирательного связывания жирорастворимых солей ЖК [25]. Фукоиданы представляют собой отрицательно заряженные полисахариды, которые связывают ЖК в модельных системах in vitro [26]. Исследования на мышах показали, что введение экспериментальным животным фукоиданов может изменить экспрессию ферментов, связанных с метаболизмом ХС [19, 20]. Описан механизм

гиполипидемического действия ß-циклодекстрина, полученного ферментативной модификацией крахмала, как секвестранта ЖК и стеролов [27].

В ходе исследования, проведенного на кафедре фармацевтического анализа ФГБОУ ВО СибГМУ, был выполнен скрининг гипохолестеролемического потенциала нескольких полисахаридов высших растений. Образцы полисахаридных комплексов для исследования способности связывать ЖК в модельной системе были получены из различных частей березы, мать-и-мачехи, девясила высокого, боярышника, липы, багульника болотного, люцерны посевной, ряски, календулы, аира, подорожника большого. Три наиболее перспективных образца были отобраны для дальнейших экспериментов: полисахариды листьев берёзы, боярышника и надземной части люцерны [10]. Далее было проведено сравнительное исследование гиполипидемического эффекта полисахаридных комплексов на модели гиперлипидемии у крыс. Полисахарид листьев берёзы L-RAG проявил наибольшую активность, образцы, полученные из боярышника, оказали менее выраженный эффект, в то время как полисахариды люцерны практически не демонстрировали гипохолестеролемических свойств [10].

Таким образом, полисахарид L-RAG является перспективным соединением-кандидатом для разработки на его основе нового гиполипидемического препарата. Исследование выраженности и механизма гиполипидемической активности L-RAG, полученного из листьев березы повислой (Betula pendula L.), позволит рассматривать это соединение с позиций возможности включения его в схемы индивидуальной и комбинированной терапии дислипидемических расстройств.

Цель исследования: Комплексное изучение гиполипидемических свойств и механизмов активности L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана на модели хронической гиперлипидемии, вызванной высокожировой диетой с увеличенным содержанием холестерола, для разработки нового гиполипидемического препарата.

Задачи исследования:

1. Провести оценку токсичности субстанции L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана при однократном внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении;

2. Установить эффективную дозу гиполипидемического действия L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана у лабораторных крыс, находящихся на стандартной диете;

3. На модели хронической гиперлипидемии, индуцированной высокожировой диетой с повышенным содержанием холестерола, исследовать гиполипидемическую активность L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана;

4. Исследовать гиполипидемическую активность L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана при комбинированном введении совместно с розувастатином или эзетимибом на модели хронической гиперлипидемии, индуцированной высокожировой диетой с повышенным содержанием холестерола;

5. В экспериментах in vitro и in vivo установить механизм гиполипидемической активности L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронана, предположительно связанный с его влиянием на метаболизм холестерола, и провести теоретические исследования характера взаимодействия полисахарида с молекулами желчных кислот.

Научная новизна. Впервые показано, что L-RAG, полисахарид, выделенный из листьев березы повислой (Betula pendula L.), в эффективной терапевтической дозе оказывает гиполипидемическое действие in vivo в моделях диет-индуцированной гиперлипидемии у крыс и хомяков, что выражается в снижении уровней общего ХС, ХС-ЛПНП и ТАГ в сыворотке крови, нормализации индекса атерогенности (ИА), уменьшении содержания ХС и ТАГ в печени. Установлено, что падение концентрации общего ХС в крови животных, получавших высокожировую диету с добавлением высокого уровня ХС, связано главным образом со снижением его содержания в атерогенной фракции ХС-ЛПНП, что приводит к уменьшению ИА.

Эффективность полисахарида оценивалась в сравнении с известными лекарственными препаратами - розувастатином и эзетимибом. Исследования подтверждают, что сочетанное применение розувастатина и эзетимиба с L-RAG на модели хронической диет-индуцированной гиперлипидемии у лабораторных животных способствует значительному снижению концентрации липидов, выраженной в большей степени, чем при отдельном применении препаратов или полисахарида.

В целом, полученные данные указывают на потенциальную возможность включения полисахарида в комплексные схемы фармакотерапии дислипидемий.

В результате проведенных экспериментов впервые установлено, что полисахарид влияет на метаболизм ЖК в организме крыс и хомяков с экспериментальной моделью гиперлипидемии, снижая их содержание в сыворотке крови и увеличивая экскрецию с фекалиями. Впервые показано, что курсовое введение экспериментальным животным, находящимся на высокожировой диете с увеличенным содержанием ХС, L-RAG влияет на уровень экспрессии мРНК генов 7а-гидроксилазы и рецептора к липопротеинам низкой плотности, что объясняется стимуляцией клиренса ХС путем его биотрансформации в ЖК.

Полученные данные о механизме гиполипидемической активности полисахарида были подтверждены в экспериментах in vitro по количественной оценке связывания молекул ЖК и микроскопическому анализу образовавшихся комплексов «L-RAG-ЖК». На основе результатов численного моделирования на уровне молекулярной динамики при взаимодействии ЖК с L-RAG показано образование нековалентных связей, наиболее вероятно, водородных.

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате выполнения работы получены результаты, демонстрирующие наличие у L-RAG, полученного из листьев березы повислой (Betula pendula L.), выраженной гиполипидемической активности, сопоставимой с таковой у препаратов сравнения розувастатина, эзетимиба и холестирамина - синтетического сополимера, способного связывать ЖК в кишечнике, образуя нерастворимые комплексы, что

препятствуют их всасыванию в системный кровоток и способствует удалению из цикла энтерогепатической рециркуляции. Сочетание терапии гиполипидемическими лекарственными препаратами, обладающими различными механизмами фармакологической активности, розувастатином и эзетимибом с L-RAG вызывает значительно более выраженное снижение уровней липидов в крови. Установлен механизм специфической фармакологической активности полисахарида, опосредованный его влиянием на обмен ЖК в организме. Полученные данные указывают на целесообразность проведения дальнейших доклинических и клинических исследований и обосновывают перспективность использования L-RAG в индивидуальной и комплексной терапии гиперлипидемии.

Методология и методы исследования. Экспериментальная часть исследования выполнена на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории и на кафедре фармацевтического анализа ФГБОУ ВО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, в исследовательской школе химических и биомедицинских технологий ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Томский политехнический университет». Содержание животных и дизайн экспериментов одобрены, этическая экспертиза проведена, протокол экспериментов на животных соответствовал этическим нормам и принципам биомедицинских исследований и одобрен Комиссией по гуманному отношению к животным НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга (протокол № 129062017 от 29 июня 2017 г.).

В эксперименте по оценке острой токсичности использовались аутбредные конвенциональные мыши Ва1Ь/с и аутбредные конвенциональные крысы SD. Исследования, направленные на установление эффективной дозы L-RAG, были проведены на крысах-самках Wistar. Исследования специфической фармакологической гиполипидемической активности выполнены на крысах-самках Wistar и сирийских хомяках-самцах SPF категории.

Для моделирования гиперлипидемии у животных использовали специально подготовленный корм с повышенным содержанием жиров и ХС. Поскольку лекарственные средства группы секвестрантов у пациентов принимаются с пищей, L-RAG (0,2 г; 1 г; 3 г; 4,5 г/100 г корма) и препарат сравнения холестирамин (2 г/100 г корма) добавлялся в стандартный лабораторный корм или высокожировую диету для крыс. В эксперименте на хомяках L-RAG добавлялся в синтетический корм AIN-93G с высоким содержанием жира и ХС в дозе 3 г/100 г корма. Внутрижелудочное введение хомякам эзетимиба и розувастатина осуществляли в дозах 2 мг/кг и 1 мг/кг. В качестве носителя препаратов сравнения использовали 0,5% водную суспензию крахмала.

После проведения эксперимента животные всех групп подвергались эвтаназии путем передозировки углекислого газа, после чего была собрана кровь и получена сыворотка, в которой измерили концентрации ТАГ, ХС, ХС-ЛПНП, ХС-ЛПВП, ЖК и рассчитывали индекс атерогенности (ИА). Концентрацию ХС и ТАГ в печени животных определяли спектрофотометрически после получения липидной фракции хлороформ-метанольной экстракцией. Изучение механизмов действия L-RAG базируется на оценке in vivo влияния полисахарида на количество ЖК в сыворотке крови и фекалиях животных, скорость секреции желчи, а также величину экспрессии мРНК генов 7а-гидроксилазы и рецептора к ЛПНП в печени. В экспериментах in vitro проведена оценка способности L-RAG сорбировать ЖК с образованием нерастворимых комплексов «L-RAG-ЖК». Проводили теоретическое исследование механизмов биологической активности с помощью численного моделирования на уровне молекулярной динамики.

Проверка на соответствие выборок нормальному закону распределения проводилась критерием Шапиро-Вилка. Данные, полученные в исследовании специфической фармакологической активности и механизма действия полисахарида, не подчинялись нормальному закону распределения и представлены в виде медианы (Ме) и квартилей (Q1-Q3). В токсикологических исследованиях расчетывались среднее значение (М) и ошибка среднего (m). Для

оценки значимости различий между независимыми выборками был применен непараметрический критерий Манна-Уитни. Различия между группами считались статистически значимыми, при p<0,05. Результаты обрабатывали с использованием программ Microsoft Ехсе1 (2016), Graph Pad Prism 8.0 (Graph Pad Software, США) и SPSS Statistics17.0 (IBM, США).

Положения, выносимые на защиту:

1. Полисахарид листьев березы (Betula Pendula L.), являясь нетоксичным соединением, в эффективной терапевтической дозе при курсовом введении крысам и хомякам на модели диет-индуцированной гиперлипидемии проявляет гиполипидемическую активность, снижая повышенные уровни холестерола, триацилглицеролов и холестерола фракции липопротеинов низкой плотности в крови животных, холестерола и триацилглицеролов в ткани печени;

2. L-рамнопиранозил-б-О-метил-галактуронан является перспективным соединением для применения в комбинированной терапии дислипидемий, демонстрирующим более выраженное снижение уровней триацилглицеролов, холестерола и холестерола фракции липопротеинов низкой плотности в сыворотке крови и печени при совместном назначении с гиполипидемическими препаратами, обладающими различными механизмами фармакологической активности (розувастатином или эзетимибом);

3. Механизм гиполипидемической активности полисахарида L-рамнопиранозил-6-О-метил-галактуронана обусловлен влиянием на метаболизм холестерола вследствие связывания желчных кислот в просвете кишечника с образованием нековалентных связей. Увеличение экскреции желчных кислот с фекалиями разрывает их энтерогепатическую циркуляцию, что приводит возрастанию скорости захвата богатых холестеролом липопротеинов низкой плотности из кровотока печенью и конверсии холестерола в желчные кислоты.

Степень достоверности и апробация результатов. Результаты, полученные при выполнении экспериментальной части работы, характеризуются высокой степенью достоверности. Это подтверждается тем, что в части

разработки дизайна экспериментов, направленных на изучение гиполипидемических свойств L-RAG, использовались подходы, эффективность и достоверность которых многократно подтверждается данными отечественной и мировой научной литературы. При выполнении исследований использовались современные методологические приемы и высокоинформативные лабораторные методы исследования, включая биохимический анализ биологических образцов, полученных от экспериментальных животных, метод количественной ПЦР с обратной транскрипцией в режиме реального времени по технологии TaqMan и другие. Теоретические исследования механизмов реализации гиполипидемических свойств L-RAG проведены с помощью численного моделирования на уровне молекулярной динамики, являющегося мощным и информативным инструментом оценки потенциальной биологической активности. Точность полученных результатов обеспечивается использованием аттестованного оборудования и статистической обработкой результатов.

Результаты проведенных в рамках работы исследований были доложены и обсуждались на Всероссийской итоговой 77-ой студенческой научной конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 24-26 апреля 2018 г.), XX Международной научно-практической конференции имени профессора Л.П. Кулёва студентов и молодых ученых «Химия и химическая технология в XXI веке» (г. Томск, 20-23 мая 2019 г.), III Всероссийском межвузовском GxP-саммите с международным участием «Выбор лучших. Время вперед» (г. Ярославль, июль 2019 г.), Международном молодежном научном форуме «Ломоносов - 2020» (г. Москва, 13-17 апреля 2020 г.), XXI Международной научно-практической конференции имени профессора Л.П. Кулёва студентов и молодых ученых «Химия и химическая технология в XXI веке» (г. Томск, 21-24 сентября 2020 г.), XXII Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых имени выдающихся химиков Л.П. Кулёва и Н.М. Кижнера, посвященной 125-летию со дня основания Томского политехнического университета (г. Томск, 17-20 мая 2021 г.).

Личный вклад автора. Автор принимал активное участие в разработке концепции научной работы, формулировании и постановке целей и задач исследования. При непосредственном участии автора разработан дизайн исследования. При личном участии автора выполнялись экспериментальные исследования, осуществлялась постановка моделей гиперлипидемии, введение животным объекта исследования и препаратов сравнения, проводились биохимические исследования и эксперименты in vitro. Автор осуществлял статистический анализ полученных результатов, формулировал выводы и обобщал полученные экспериментальные данные, принимал активное участие в написании публикаций по материалам работы.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 3 статьи в рецензируемых научных изданиях и журналах, включенных в перечень рецензируемых научных изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук, из которых 2 статьи опубликованы в научных журналах, индексируемых в международных реферативных базах данных Web of Science и/или Scopus; 5 тезисов в материалах международных научных конференций и 1 статья в сборнике научных трудов.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 182 страницах компьютерного текста, содержит: введение, обзор литературы (глава 1), материалы и методы исследования (глава 2); результаты собственных исследований и их обсуждение (глава 3), выводы и заключение; содержит 32 таблицы, 28 рисунков. Список литературы включает 259 биографических источника, из которых 20 отечественных и 239 зарубежных.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Гиперлипидемии описываются как нарушения липидного обмена, сочетающие повышение уровней общего ХС, ТАГ и ХС-ЛПНП в крови пациентов при сниженном уровне ХС-ЛПВП [1]. Аномальные уровни липидов являются основными факторами риска развития ССЗ, представляющими серьезную угрозу для здоровья человека [2].

ССЗ являются ведущей причиной смерти в развитых странах [3, 28]. Часто в основе клинических рекомендаций по терапии этих заболеваний лежит использование немедикаментозных подходов, основанных на коррекции модифицируемых факторов риска, таких как диета с преобладанием насыщенных и транс-жиров, отсутствие физической активности и курение [3, 29].

Однако в большинстве случаев такой подход должен сопровождаться фармакотерапией с применением современных гиполипидемических лекарственных препаратов. Наличие значительных ограничений к приему большинства гиполипидемических средств обуславливает актуальность продолжения исследований, направленных на поиск новых эффективных средств фармакотерапии дислипидемических расстройств [4]. В настоящее время все большее внимание привлекает метаболизм ЖК как потенциальная мишень терапии дислипидемий и связанный с этим фактом повышенный интерес к расширению разнообразия препаратов группы секвестрантов ЖК, отличающихся разнообразной природой и молекулярной структурой [17].

В результате связывания ЖК в кишечнике молекулами секвестранта ЖК происходит снижение содержания сывороточного ХС-ЛПНП на 10-30%, что обусловлено нарушением энтерогепатической циркуляции ЖК, уменьшением общего количества ЖК и стимуляцией их образования из ХС de novo, снижением концентрации ХС в печени и увеличением числа печеночных рецепторов, связывающих циркулирующие в крови липопротеины низкой плотности [17].

Известно, что несколько классов полисахаридов растительного происхождения обладают гиполипидемическим потенциалом, действуя подобно препаратам-секвестрантам ЖК [7]. При этом влияние полисахаридов на гомеостаз ХС зависит от их физико-химических характеристик, таких как молекулярная масса, растворимость и суммарный заряд молекулы, а также от состава моносахаридных звеньев и разветвления полисахаридной цепи [30-32].

Таким образом, полисахариды являются важными молекулами-кандидатами при разработке фармакологически активных субстанций, обладающих гиполипидемической активностью.

1.1 Актуальное эпидимиологическое состояние и подходы к терапии дислипидемических расстройств

У человека дислипидемия проявляется как совокупность нарушений процесса обмена липопротеиновых фракций (главным образом, ЛПНП и ЛПВП), определяющих общий уровень ХС в организме. У пациентов наблюдается интегрированное и взаимозависимое расстройство обмена липидов, включающее количественные изменения концентраций ЛПНП, ЛПВП и прочих липидных компонентов в крови [1, 2]. Увеличение общей концентрации ХС-ЛПНП и изменение пропорционального соотношения между различными видами липопротеинов способствует возникновению атерогенного дисбаланса (дислипидемии), что повышает риск развития сердечно-сосудистых заболеваний, включая инфаркт миокарда и инсульт [3, 4, 28].

Избыток ХС-ЛПНП в настоящее время признается ключевым фактором в патогенезе атеросклероза, так как липопротеины именно этой фракции адгезируются на стенках артерий, формируя первичный очаг атеросклеротического поражения. В противоположность этому, ХС-ЛПВП выполняет функцию обратного транспорта ХС из периферических тканей в печень для последующего метаболизма и экскреции в виде ЖК [2].

Таким образом, риск развития атеросклеротических изменений и, следовательно, сердечно-сосудистых осложнений определяется не только абсолютными уровнями этих фракций липопротеинов, но и их функциональными свойствами.

К другим формам гиперлипидемий, помимо увеличения содержания исключительно ХС-ЛПНП, относят гипертриглицеридемию, а также смешанную гиперлипидемию, при которой повышены уровни как ХС, так и ТАГ [2]. В структуре заболеваемости важное место занимает генетически опосредованная СГ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Буйко Евгений Евгеньевич, 2025 год

- P. 1111-1121.

100. Meissner, M. Bile Acid Sequestration Normalizes Plasma Cholesterol and Reduces Atherosclerosis in Hypercholesterolemic Mice. No Additional Effect of Physical Activity / M. Meissner, H. Wolters, R.A. de Boer et al. // Atherosclerosis. -2013. - Vol. 228. - P. 117-123.

101. Mazidi, M. The effects of bile acid sequestrants on lipid profile and blood glucose concentrations: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials / M. Mazidi, P. Rezaie, E. Karimi et al. // Int. J. Cardiol. - 2017. - Vol. 227. - P. 850-857.

102. Kuipers, F. Beyond intestinal soap—Bile acids in metabolic control / F. Kuipers, V.W. Bloks, A.K. Groen // Nat. Rev. Endocrinol. - 2014. - Vol. 10. - P. 488498.

103. Van de Heijning, B.J.M. Bile Salt-Induced Cholesterol Crystal Formation from Model Bile Vesicles: A Time Course Study / B.J.M. Van de Heijning, M.F.J. Stolk, K.J. Van Erpecum et al. // J. Lipid Res. - 1994. - Vol. 35. - P. 1002-1011.

104. Chiang, J.Y Bile acid regulation of gene expression: roles of nuclear hormone receptors // Endocr Rev. - 2002. - Vol. 23. - P. 443-463/

105. Li, T. Bile Acid Signaling in Metabolic Disease and Drug Therapy / T. Li, J.Y. Chiang // Pharmacological reviews. - 2014. - Vol. 66. - P. 948-983.

106. Boron, W.F. Medical physiology 3rd Edition E-book. / W.F. Boron, E.L. Boulpaep // Elsevier Health Sciences, 2016. eBook ISBN: 9781455733286/

107. Lu, T.T. Molecular basis for feedback regulation of bile acid synthesis by nuclear receptors / T.T. Lu, M. Makishima, J.J. Repa et al. // Mol Cell. - 2000. - Vol. 6.

- P. 507-515.

108. Inagaki, T. Fibroblast growth factor 15 functions as an enterohepatic signal to regulate bile acid homeostasis / T. Inagaki, M. Choi, A. Moschetta et al. // Cell Metab. - 2005. - Vol. 2. - P. 217-225.

109. Yu, C. Independent repression of bile acid synthesis and activation of c-Jun N-terminal kinase (JNK) by activated hepatocyte fibroblast growth factor receptor 4 (FGFR4) and bile acids / C. Yu, F. Wang, C. Jin et al. // The Journal of biological chemistry. - 2005. - Vol. 280. - P. 17707-17714.

110. Kong, B. Mechanism of tissue-specific farnesoid X receptor in suppressing the expression of genes in bile-acid synthesis in mice / B. Kong, L. Wang, J.Y. Chiang et al. // Hepatology. - 2012. - Vol. 56. - P. 1034-1043.

111. Lan, T. Inhibition of ileal apical but not basolateral bile acid transport reduces atherosclerosis in apoE(-)/(-) mice / T. Lan, J. Haywood, P.A. Dawson // Atherosclerosis. - 2013. - Vol. 229. - P. 374-380.

112. Charach, G. Decreased fecal bile acid output in patients with coronary atherosclerosis / G. Charach, P. D. Rabinovich, F.M. Konikoff et al. // J. Med. - 1998. -Vol. 29. - P. 125-136.

113. Charach, G. Diminished bile acids excretion is a risk factor for coronary artery disease: 20-year follow up and long-term outcome / G. Charach, O. Argov, K. Geiger et al. // Therap. Adv. Gastroenterol. - 2018. - Vol. 11., N 4.

114. Charach, G. Reduced bile acid excretion is an independent risk factor for stroke and mortality: A prospective follow-up study / G. Charach, E. Karniel, I. Novikov et al. // Atherosclerosis. - 2020. - Vol. 293. - P. 79-85.

115. Rifkind, B.M. The lipid research clinics coronary primary prevention trial results. I. Reduction in incidence of coronary heart disease // J Am Med Assoc. - 1984.

- Vol. 251. - P. 351-364.

116. Axelson, M. Levels of 7 alpha-hydroxy-4-cholesten-3-one in plasma reflect rates of bile acid synthesis in man / M.Axelson, A. Aly, J. Sjovall // FEBS Lett. - 1988.

- Vol. 239. - P. 324-328.

117. Axelson, M. The plasma level of 7 alpha-hydroxy-4-cholesten-3-one reflects the activity of hepatic cholesterol 7 alpha-hydroxylase in man / M. Axelson, I. Bjorkhem, E. Reihnér et al. // FEBS Lett. - 1991. - Vol. 284. - P. 216-218.

118. Goldstein, J.L. Protein sensors for membrane sterols / J.L. Goldstein, R.A. DeBose-Boyd, M.S. Brown // Cell. - 2006. - Vol. 124. - P. 35-46.

119. Staels, B. Bile acid sequestrants and the treatment of type 2 diabetes mellitus / B. Staels, F. Kuipers // Drugs. - 2007. - Vol. 67. - P. 1383-1392.

120. Blahova, T. The effect of colesevelam treatment on bile acid and lipid metabolism and glycemic control in healthy men / T. Blahova, L. Peterkova, M. Lenicek et al. // Physiol. Res. - 2016. - Vol. 65. - P. 995.

121. Scaldaferri, F. Use and indications of cholestyramine and bile acid sequestrants / F. Scaldaferri, M. Pizzoferrato, F.R. Ponziani et al. // InterN Emerg. Med.

- 2013. - Vol. 8. - P. 205-210.

122. Davidson, M. The efficacy of colesevelam HCL in the treatment of heterozygous familial hypercholesterolemia in pediatric and adult patients // CliN Ther.

- 2013. - Vol. 35. - P. 1247-1252.

123. Stein, E.A. Colesevelam Hydrochloride: Efficacy and Safety in Pediatric Subjects with Heterozygous Familial Hypercholesterolemia / E.A. Stein, A.D. Marais, T. Szamosi et al. // J. Pediatr. - 2010. - Vol. 156. - P. 231-236.

124. Alder, M. Meta-Analysis Assessing Additional LDL-C Reduction from Addition of a Bile Acid Sequestrant to Statin Therapy / M. Alder, A. Bavishi, K. Zumpf et al. // Am. J. Med. - 2020. - Vol. 133. - P. 1322-1327.

125. Mendonça, P.V. Polymeric bile acid sequestrants—synthesis using conventional methods and new approaches based on "controlled'Vliving radical polymerization / P.V. Mendonça, A.C. Serra, C.L. Silva //Progress in polymer science. -2013. - Vol. 38. - N 3-4. - P. 445-461.

126. Walters, J.R.F. A New Mechanism for Bile Acid Diarrhea: Defective Feedback Inhibition of Bile Acid Biosynthesis / J.R.F. Walters, A.L.I.M Tasleem., O.S. Omer et al. // CliN Gastroenterol. Hepatol. - 2009. - Vol. 7. - P. 1189-1194.

127. Johnston, I. New Insights into Bile Acid Malabsorption / I. Johnston, J. Nolan, S.S. Pattni et al. // Curr. Gastroenterol. Rep. - 2011. - Vol. 13. - P. 418-425.

128. Wilcox, C. Systematic Review: The Management of Chronic Diarrhoea Due to Bile Acid Malabsorption / C. Wilcox, J. Turner, J. Green // Aliment. Pharm. Ther. - 2014. - Vol. 39. - P. 923-939.

129. Hansen, M. Bile Acid Sequestrants: Glucose-Lowering Mechanisms and Efficacy in Type 2 Diabetes / M. Hansen, D.P. Sonne, F.K. Knop // Curr. Diab. Rep. -2014. - Vol. 14. - P. 482.

130. Kalra, S. Colesevelam in the management of type 2 diabetes / S. Kalra, G. Priya, S. Aggarwal // JPMA. The Journal of the Pakistan Medical AssociatioN - 2020. -Vol. 70, N 5. - P. 934-936.

131. Potthoff, M.J. Colesevelam suppresses hepatic glycogenolysis by TGR5-mediated induction of GLP-1 action in DIO mice / M.J. Potthoff, A. Potts, T. He et al. // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. - 2013. - Vol. 304, N 4. - P. 371-80.

132. Beysen, C. Effect of bile acid sequestrants on glucose metabolism, hepatic de novo lipogenesis, and cholesterol and bile acid kinetics in type 2 diabetes: a randomised controlled study / C. Beysen, E.J. Murphy, K. Deines et al. // Diabetologia.

- 2012. - Vol. 55, N 2. - P. 432-42.

133. Nwose, O.M. Atypical mechanism of glucose modulation by colesevelam in patients with type 2 diabetes / O.M. Nwose, M.R. Jones // Clin Med Insights Endocrinol Diabetes. - 2013. - Vol. 8. - N 6. - P. 75-9.

134. Yamakawa, T. Colestimide improves glycemic control via hepatic glucose production in db/db mice / T. Yamakawa, K. Ogihara, H. Utsunomiya et al. // Endocr J.

- 2014. - Vol. 61. - P. 425-436.

135. Mandeville, W.H. The sequestration of bile acids, a nonabsorbed method for cholesterol reduction: a review / W.H. Mandeville, D.I. Goldberg // Curr Pharm Des. - 1997. - Vol. 3. - P. 15-28.

136. Huval, C.C. Syntheses of hydrophobically modified cationic hydrogels by copolymerization of alkyl substituted diallylamine monomers and their use as bile acid

sequestrants / C.C. Huval, S.R. Holmes-Farley, W.H. Mandeville // European Polymer Journal - 2004. - Vol. 40. - N.4. - P. 693-701.

137. Benson, G.M. SK&F 97426-A: A novel bile acid sequestrant with higher affinities and slower dissociation rates for bile acids in vitro than cholestyramine / G.M. Benson, D.R. Alston, D.M. Hickey et al. // Journal of pharmaceutical sciences. - 1997.

- Vol. 86. - N 1. - P. 76-81.

138. Mendonça, P.V. Synthesis of tailor-made bile acid sequestrants by supplemental activator and reducing agent atom transfer radical polymerization / P.V. Mendonça, M.J. Moreno, A.C. Serra // RSC advances. - 2016. - Vol. 6. - N 57. - P. 52143-52153.

139. Shimshick, E.J. DMP 504, a novel hydrogel bile acid sequestrant: I. Equilibrium binding properties and computer simulation of human bile flow / E.J. Shimshick, G.D. Figuly, L.C. Grimminger et al. // Drug development research. - 1997.

- Vol. 41. - N 2. - P. 58-64.

140. Polomoscanik, S.C. Hydrophobically modified poly (allylamine) hydrogels containing internal quaternary ammonium groups as cholesterol lowering agents: synthesis, characterization, and biological studies / S.C. Polomoscanik, S.R. Holmes-Farley, J.S. Petersen et al. // Journal of Macromolecular Science, Part A. - 2012. - Vol. 49. - N 12. - P. 1011-1021.

141. Fernández, M.A. Complex systems that incorporate cyclodextrins to get materials for some specific applications / M.A. Fernández, O.F. Silva, R.V. Vico et al. // Carbohydrate research. - 2019. - Vol. 480. - P. 12-34.

142. Lopez-Jaramillo, F.J. In vitro and in vivo evaluation of novel cross-linked saccharide based polymers as bile acid sequestrants / F.J. Lopez-Jaramillo, M.D. Giron-Gonzalez, R. Salto-Gonzalez et al. // Molecules. - 2015. - Vol. 20, N 3. - P. 3716-3729.

143. Schonbeck, C. Hydroxypropyl-substituted P-cyclodextrins: influence of degree of substitution on the thermodynamics of complexation with tauroconjugated and glycoconjugated bile salts / C. Schonbeck, P. Westh, J.C. Madsen et al. // Langmuir.

- 2010. - Vol. 26, N.23. - P. 17949-17957.

144. Hermankova, E. Polymeric bile acid sequestrants: Review of design, in vitro binding activities, and hypocholesterolemic effects / E. Hermankova, A. Zak, L. Polakova et al. // European journal of medicinal chemistry. - 2018. - Vol. 144. - P. 300317.

145. Theuwissen, E. Water-soluble dietary fibers and cardiovascular disease / E. Theuwissen, R.P. Mensink // Physiol. Behav. - 2008. - Vol. 94. - P. 285-292.

146. Alla, V.M. A reappraisal of the risks and benefits of treating to target with cholesterol lowering drugs / V.M. Alla, V. Agrawal, A. Denazareth et al. // Drugs. -2013. - Vol. 10. - P. 1025-1054.

147. Knodel, L.C. Adverse Effects of Hypolipidaemic Drugs / L.C. Knodel, R.L. Talbert // Med. Toxicol. Advers. Drug Exp. - 1987. - Vol. 1. - P. 10-32.

148. Xu, W. Bile acid-binding capacity of lobster shell-derived chitin, chitosan and chitooligosaccharides / W. Xu, A. Mohan, N.L. Pitts et al. // Food Biosci. - 2020. -Vol. 33.

149. Naumann, S. In vitro interactions of dietary fibre enriched food ingredients with primary and secondary bile acids / S. Naumann, U. Schweiggert-Weisz, J. Eglmeier et al. // Nutrients. - 2019. - Vol. 11. - P. 1424.

150. Hofmann, A.F. Key discoveries in bile acid chemistry and biology and their clinical applications: history of the last eight decades / A.F. Hofmann, L.R. Hagey // J Lipid Res. - 2014. - Vol. 55. - P. 1553-1595.

151. Hofmann, A.F. Bile acids: Chemistry, pathochemistry, biology, pathobiology, and therapeutics / A.F. Hofmann, L.R. Hagey // Cell. Mol. Life Sci. -2008. - Vol. 65. - P. 2461-2483.

152. Thandapilly, S.J. Barley ß-glucan increases fecal bile acid excretion and short chain fatty acid levels in mildly hypercholesterolemic individuals / S.J. Thandapilly, S.P. Ndou, Y Wang et al. // Food Funct. - 2018. Vol. 9. - P. 3092-3096.

153. Thongngamm, M. Isothermal titration calorimetry study of the interactions between chitosan and a bile salt (sodium taurocholate) / M. Thongngam, D.J. McClements // Food Hydrocoll. - 2005. - Vol. 19. - P. 813-819.

154. Dongowski, G. Interactions between dietary fibre-rich preparations and glycoconjugated bile acids in vitro // Food Chem. - 2007. - Vol. 104. - P. 390-397.

155. Dongowski, G. Influence of pectin structure on the interaction with bile acids under in vitro conditions // Zeitschrift für Lebensmittel-Untersuchung und Forschung. - 1995. - Vol. 201. - N 4. - P. 390-398.

156. Zacherl, C. In vitro model to correlate viscosity and bile acid-binding capacity of digested water-soluble and insoluble dietary fibres / C. Zacherl, P. Eisner, K.

H. Engel // Food Chem. - 2011. - Vol. 126. - P. 423-428.

157. Gunness, P. Molecular interactions between cereal soluble dietary fibre polymers and a model bile salt deduced from 13C NMR titration / P. Gunness, B.M. Flanagan, M.J. Gidley // Journal of Cereal Science. - 2010. - Vol. 52, N 3. - P. 444449.

158. Maezaki, Y Hypocholesterolemic effect of chitosan in adult males / Y. Maezaki, K. Tsuji, Y. Nakagawa et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. - 1993. - Vol. 57.

- P. 1439-1444.

159. Choi, C.R. Chitooligosaccharides decreases plasma lipid levels in healthy men / C.R. Choi, E.K. Kim, Y.S. Kim et al. // Int. J. Food Sci. Nutr. - 2012. - Vol. 63. -P. 103-106.

160. Caffall, K.H. The structure, function, and biosynthesis of plant cell wall pectic polysaccharides / K.H. Caffall, D. Mohnen // Carbohydr. Res. - 2009. - Vol. 344.

- P. 1879-1900.

161. Zhou, K. In vitro binding of bile acids and triglycerides by selected chitosan preparations and their physico-chemical properties / K. Zhou, W. Xia, C. Zhang et al. // LWT Food Sci. Technol. - 2006. - Vol. 39. - P. 1087-1092.

162. Mumtaz Hamdani, A. Guar and Locust bean gum: Composition, total phenolic content, antioxidant and antinutritional characterization / A. Mumtaz Hamdani,

I. Ahmed Wani // Bioact. Carbohydr. Diet. Fibre. - 2017. - Vol. 11. - P. 53-59.

163. Garcia-Diez, F. Pectin feeding influences fecal bile acid excretion, hepatic bile acid and cholesterol synthesis and serum cholesterol in rats / F. Garcia-Diez, V. Garcia-Mediavilla, J.E. Bayon et al. // J. Nutr. - 1996. - Vol. 126. - P. 1766-1771.

164. Coreta-Gomes, F.M. In Vitro Hypocholesterolemic Effect of Coffee Compounds / F.M. Coreta-Gomes, G.R. Lopes, C.P. Passos et al. // Nutrients. - 2020. -Vol. 12. - P. 437.

165. Huang, L. Hypolipidemic effect of fucoidan from Laminaria japonica in hyperlipidemic rats / L. Huang, K. Wen, X. Gao et al. // Pharm. Biol. - 2010. - Vol. 48. - P. 422-426.

166. Prasad, A. Comparative study of ezetimibe and atorvastatin alone and in combination on lipid profile in rats / A. Prasad, P.P. Datta, R. Roy et al. //Materia Socio-Medica. - 2013. - Vol. 25. - N 3. - P. 192

167. Dourado, P.M.M. Rosuvastatin prevents myocardial necrosis in an experimental model of acute myocardial infarction / P.M.M. Dourado, J.M. Tsutsui, M.B.P. Landim et al. //Brazilian Journal of Medical and Biological Research. - 2011. -Vol. 44. - P. 469-476.

168. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2013. - 944 с.

169. Reeves, P.G. AIN-93 purified diets for laboratory rodents: final report of the American Institute of Nutrition ad hoc writing committee on the reformulation of the AIN-76A rodent diet / P.G. Reeves, F.H. Nielsen, G.C. Jr. Fahey // J. Nutr. - 1993. -Vol. 123. - N 11. - P. 1939-1951.

170. Тышко, Н.В. Сравнительная характеристика влияния экспериментальных рационов на рост и развитие крыс / Н.В. Тышко, В.М, Жминченко, В.А. Пашорина и др. // Вопросы питания. - 2011. - Т. 80, № 5. - С. 30-38.160.

171. Zhang, X. Dysregulated Serum Lipid Metabolism Promotes the Occurrence and Development of Diabetic Retinopathy Associated With Upregulated Circulating

Levels of VEGF-A, VEGF-D, and PlGF / X. Zhang, B. Qiu, Q. Wang et al. //Frontiers in Medicine. - 2021. - N 8. - P. 779413.

172. Zhang, G.H. An enzymatic cycling method for the determination of serum total bile ac-ids with recombinant 3alpha-hydroxysteroid dehydrogenase / G.H. Zhang, A.R. Cong, G.B. Xu et al. // Biochem. Biophys. Res. CommuN - 2005. -Vol. 326, N 1. - P. 87-92.

173. Folch, J. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues / J. Folch, M. Lees, G.H. Sloane-Stanley // J. Biol. Chem. - 1957. -Vol. 226, N 1. - P. 497-509.

174. Van Veldhoven, P.P. Lipase-based quantization of triacylglycerols in cellular lipid ex-tracts: requirement for presence of detergent and prior separation by thin-layer chroma-tography / P.P. Van Veldhoven, J.V. Swinnen, M. Esquent, G. Verhoeven // Lipids. - 1997. - Vol. 32, N 12. - P. 1297-1300.

175. Suckling, K.E. Cholesterol lowering and bile acid excretion in the hamster with cholestyramine treatment / K.E. Suckling, G.M. Benson, B. Bond et al. // Atherosclerosis. - 1991. - Vol. 89., N 2-3. - P. 183-190.

176. Pfaffl, M.W. A new mathematical model for relative quantification in realtime RT-PCR //Nucleic acids research. - 2001. - Vol. 29. - N 9. - P. e45-e45.

177. Golovchenko, V.V. Pectin from leaves of birch (Betula pendula Roth.): Results of NMR experiments and hypothesis of the RG-I structure / V.V. Golovchenko, V.A. Khlopin, O.A. Patova et al. // Carbohydrate Polymers. - 2022. - Vol. 284. - P. 119186.

178. Park, S-J. CHARMM-GUI Glycan Modeler for Modeling and Simulation of Carbohydrates and Glycoconjugates / S-J. Park, J. Lee, Y. Qi et al. // Glycobiology. -2019. - Vol. 29., N 284. - P. 320-331.

179. Abraham, M.J. GROMACS: High performance molecular simulations through multi-level parallelism from laptops to supercomputers / M.J. Abraham, T. Murtola, R. Schulz et al. // SoftwareX. - 2015. - Vol. 1, No. 2. - P. 19-25.

180. Schrodinger, L.L.C. The {JyMOL} Molecular Graphics Development Component, Version~1.8. —2015.

181. Гмурман, В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика : учебное пособие / В.Е. Гмурман. - 12-е издание, переработанное. - Москва : Высшее образование, 2006. - 479 с. - (Основы наук) . - ISBN 5-9692-0031-x.

182. Федеральный закон от 12.04.2010 N 61-ФЗ (ред. от 28.04.2023) "Об обращении лекарственных средств".

183. Решение ЕЭК от 03.11.2016 № 81 «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств».

184. EFSA Panel on Dietetic Products, Nutrition and Allergies (NDA). Scientific Opinion on the substantiation of a health claim related to barley beta-glucans and lowering of blood cholesterol and reduced risk of (coronary) heart disease pursuant to Article 14 of Regulation (EC) No 1924/2006 //EFSA Journal. - 2011. - Vol. 9. - N 12. - P. 2470.

185. Aldini, R. Effects of a salt of cholestyramine and 2-4-(p-chlorobenzoyl)phenoxy2-methyl propionic acid (alpha-1081) on biliary lipid secretion in rats / R. Aldini, L. Barbara, A. Benelli et al. // Br J Pharmacol. - 1981. - Vol. 74, No. 3. - P. 611-617.

186. Zhang, Y. Effects of feeding bile acids and a bile acid sequestrant on hepatic bile acid composition in mice / Y Zhang, C.D. Klaassen // J Lipid Res. - 2010. - Vol. 51, No. 11. - P. 3230-3242.

187. Gustafsson, B.E. Influence of cholestyramine on synthesis of cholesterol and bile acids in germfree rats / B.E. Gustafsson, B. Angelin, K. Einarsson et al. // J Lipid Res. - 1978. - Vol. 19, No. 8. - P. 972-977.

188. Norlin, M. Oxysterol 7 alpha-hydroxylase activity by cholesterol 7 alpha-hydroxylase (CYP7A) / M. Norlin, U. Andersson, I. Bjorkhem et al. // J Biol Chem. -2000. - Vol. 3. - No. 275(44). - P. 34046-34053.

190. Ando, H. Regulation of cholesterol 7alpha-hydroxylase mRNA expression in C57BL/6 mice fed an atherogenic diet / H. Ando, S. Tsuruoka, H. Yamamoto et al. // Atherosclerosis. - 2005. - Vol. 178, No. 2. - P. 265-269.

191. Pellizzon, M.A. Diet-induced atherosclerosis/hypercholesterolemia in rodent models / M.A. Pellizzon // Res Diets. - 2008. - P. 1-3.

192. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева. - М., 2005. - 832 с.

193. Shahdadian, F. Association of plant-based diets with adropin, atherogenic index of plasma, and metabolic syndrome and its components: A cross-sectional study on adults / F. Shahdadian, P. Saneei, K. Lotfi et al. // Frontiers in NutritioN - 2023. -Vol. 11. - N 7. - P. 966.

194. Латынцева, Л.Д. Новый способ персонифицированной оценки риска сердечно-сосудистых заболеваний с помощью коэффициента атерогенности / Л.Д. Латынцева, К.В. Макаренкова, О.В. Цыганкова и др. //Атеросклероз. - 2017. - Т. 13. - №. 3. - С. 28-32.

195. Lioy, B. The Association between the Atherogenic Index of plasma and cardiometabolic risk factors: a review / B. Lioy, R.J. Webb, F. Amirabdollahian // Healthcare. -2023. - Vol. 11, Issue 7. - P. 966.

196. Рузметова, И.А. Показатели коэффициента атерогенности у больных атеросклерозом брахиоцефальных сосудов / И.А. Рузметова, Д.А. Эгамбердиева, Е.Э. Расулев //CardioСоматика. - 2017. - Т. 8. - №. 1. - С. 67-67.

197. Телепнева, Е.Ю. Формирование гипохолестеролемии при холестеролопатиях / Е.Ю. Телепнева, Н.Н. Янковская //Вестник Витебского государственного медицинского университета. - 2014. - Т. 13. - №. 2. - С. 17-24.

198. Роднова, Е.А. Гиполипидемическое действие леукомизина на модели острой гиперлипидемии, индуцированной этанолом / Е.А. Роднова, В.В. Иванов,

199. Dhal, P.K. Biologically active polymeric sequestrants: Design, synthesis, and therapeutic applications / P.K. Dhal, C.C. Huval, S.R. Holmes-Farley // Pure and Applied Chemistry. - 2007. - Vol. 79, No. 9. - P. 1521-1530.

200. Staels, B. Bile acid sequestrants for lipid and glucose control / B. Staels, Y Handelsman, V. Fonseca // Current diabetes reports. - 2010. - Vol. 10. - P. 70-77.

201. Lamb, Y.N. Rosuvastatin/ezetimibe: a review in hypercholesterolemia //American journal of cardiovascular drugs. - 2020. - Vol. 20. - P. 381-392.

202. Сергиенко, И.В. Влияние терапии статинами на динамику уровней сосудистого эндотелиального фактора роста и фактора роста фибробластов у больных ишемической болезнью сердца / И.В. Сергиенко, А.Е. Семенова, В.П. Масенко //Кардиология. - 2007. - Т. 47. - №. 8. - С. 4-7.

203. Корнева, В.А. Терапия липидснижающими препаратами у пациентов с семейной гиперхолестеринемией в реальной клинической практике / В.А. Корнева, Т.Ю. Кузнецова //Клин. фармакол. тер. - 2018. - Т. 27. - №. 4. - С. 24-28.

204. Сергиенко, И.В. Ингибирование всасывания холестерина в энтероцитах //Атеросклероз и дислипидемии. - 2012. - №. 1. - С. 37-47.

205. Fiore, V. Dyslipidemia and cardiovascular prevention in the elderly: a balance between benefits and risks of statin treatment in a specific population / V. Fiore, A. Barucca, S. Barraco // Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. - 2023.

206. Nowowiejska-Wiewiora, A. Dyslipidemia treatment and attainment of LDL-cholesterol treatment goals in patients participating in the Managed Care for Acute Myocardial Infarction Survivors program / A. Nowowiejska-Wiewiora, K. Wita, Z. M?drala et al. // Kardiol Pol. - 2023. - Vol. 81, No. 4. - P. 359-365.

207. Jamialahmadi, T. The Effects of Statin Dose, Lipophilicity, and Combination of Statins plus Ezetimibe on Circulating Oxidized Low-Density Lipoprotein Levels: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized

Controlled Trials / T. Jamialahmadi, F. Baratzadeh, Z. Reiner et al.// Mediators Inflamm. - 2021. - No. 4. - P. 2021:9661752.

208. Yeh, E.J. Systematic literature review and meta-analysis of cardiovascular risk factor management in selected Asian countries / E.J. Yeh, R.B. Grigolon, S.R. Rodrigues // J Comp Eff Res. - 2023. - Vol. 12 - No 4. - P. :e220085.

209. Cho, K.H. Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 inhibition in cardiovascular disease: current status and future perspectives / K.H. Cho, Y J. Hong //The Korean Journal of Internal Medicine. - 2020. - Vol. 35. - N 5. - P. 1045.

210. Ah, YM. Comparative safety and efficacy of low- or moderate-intensity statin plus ezetimibe combination therapy and high-intensity statin monotherapy: A meta-analysis of randomized controlled studies / Y.M. Ah, M. Jeong, H.D. Choi // Plos one. - 2022. - Vol. 17, No. 3. - P. e0264437.

211. Shin, K.H. Comparison of Efficacy and Safety of Statin-Ezetimibe Combination Therapy with Statin Monotherapy in Patients with Diabetes: A Meta-Analysis of Randomized Controlled Studies / K.H. Shin, H.D. Choi //American Journal of Cardiovascular Drugs. - 2022. - P. 1-12.

212. Gudzune, K.A. Effectiveness of combination therapy with statin and another lipid-modifying agent compared with intensified statin monotherapy: a systematic review / K.A. Gudzune, A.K. Monroe, R. Sharma //Annals of internal medicine. - 2014. - Vol. 160. - N 7. - P. 468-476.

213. Knapp, H.H. Efficacy and safety of combination simvastatin and colesevelam in patients with primary hypercholesterolemia / H.H. Knapp, H. Schrott, P. Ma et al. //The American journal of medicine. - 2001. - Vol. 110. - N 5. - P. 352-360.

214. Davidson, M.H. Low-dose combination therapy with colesevelam hydrochloride and lovastatin effectively decreases low-density lipoprotein cholesterol in patients with primary hypercholesterolemia / M.H. Davidson, P. Toth, S. Weiss et al. //Clinical cardiology. - 2001. - Vol. 24. - N 6. - P. 467-474.

215. Rivers, S.M. Colesevelam hydrochloride-ezetimibe combination lipid-lowering therapy in patients with diabetes or metabolic syndrome and a history of statin

intolerance / S.M. Rivers, M.P. Kane, R.S. Busch et al. //Endocrine Practice. - 2007. -Vol. 13. - N 1. - P. 11-16.

216. Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 03.11.2016 N 78 (ред. от 23.09.2022) "О Правилах регистрации и экспертизы лекарственных средств для медицинского применения"

217. Ma, G. Preparation of newly identified polysaccharide from Pleurotus eryngii and its anti-inflammation activities potential / G. Ma., B.M. Kimatu, W. Yang et al. //Journal of Food Science. - 2020. - Vol. 85, No 9. - P. 2822-2831.

218. Acay, H. Evaluation and characterization of Pleurotus eryngii extract-loaded chitosan nanoparticles as antimicrobial agents against some human pathogens / H. Acay, A. Yildirim, E. Erdem Guzel et al. //Preparative Biochemistry & Biotechnology. - 2020. - Vol. 50, No 9. - P. 897-906.

219. Chutkan, R. Viscous versus nonviscous soluble fiber supplements: Mechanisms and evidence for fiber-specific health benefits / R. Chutkan, G. Fahey, W.L. Wright et al. //Journal of the American Academy of Nurse Practitioners. - 2012. -Vol. 24, No 8. - P. 476-487.

220. Delgado-Andrade, C. Modifications in bacterial groups and short chain fatty acid production in the gut of healthy adult rats after long-term consumption of dietary Maillard reaction products / C. Delgado-Andrade, S.P. de la Cueva, M.J. Peinado et al. //Food Research International. - 2017. - Vol. 100. - P. 134-142.

221. Chung, W.S.F. Impact of carbohydrate substrate complexity on the diversity of the human colonic microbiota / W.S.F. Chung, A.W. Walker, J. Vermeiren et al. //FEMS microbiology ecology. - 2019. - Vol. 95, No 1. - P. 201.

222. Marasca, E. Bile acid-retention by native and modified oat and barley P-glucan / E. Marasca, S. Boulos, L. Nystrom //Carbohydrate polymers. - 2020. - Vol. 236. - P. 116034.

223. Gao, J. Comparison study on polysaccharide fractions from Laminaria japonica: Structural characterization and bile acid binding capacity / J. Gao, L. Lin, B.

Sun et al. //Journal of agricultural and food chemistry. - 2017. - Vol. 65, No 44. - P. 9790-9798.

224. BeMiller, J.N. Polysaccharides: properties / J.N. BeMiller //Carbohydrate chemistry for food scientists. - 2019. - P. 103-157.

225. Aravamudhan, A. Natural and synthetic biomedical polymers. Chapter 4— Natural Polymers: Polysaccharides and Their Derivatives for Biomedical Applications / A. Aravamudhan, D.M. Ramos, A.A. Nada et al. - 2014. - P. 67-89.

226. Wan, Y. Unconjugated and secondary bile acid profiles in response to higher-fat, lower-carbohydrate diet and associated with related gut microbiota: A 6-month randomized controlled-feeding trial / Y Wan, J. Yuan, J. Li et al. //Clinical NutritioN - 2020. - Vol. 39, No 2. - P. 395-404.

227. Ambros-Rudolph, C.M. The importance of serum bile acid level analysis and treatment with ursodeoxycholic acid in intrahepatic cholestasis of pregnancy: a case series from central Europe / C.M. Ambros-Rudolph, M. Glatz, M. Trauner et al. //Archives of dermatology. - 2007. - Vol. 143, No 6. - P. 757-762.

228. Getz, G.S. Diet and murine atherosclerosis / G.S. Getz, C.A. Reardon //Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. - 2006. - Vol. 26, No 2. - P. 242249.

229. Shansky, Y Bile Acids: Physiological Activity and Perspectives of Using in Clinical and Laboratory Diagnostics / Y Shansky, J. Bespyatykh //Molecules. - 2022. -Vol. 27, No 22. - P. 7830.

230. Miggiels, P. Novel technologies for metabolomics: More for less / P. Miggiels, B. Wouters, G.J. van Westen et al. //TrAC Trends in Analytical Chemistry. -2019. - Vol. 120. - P. 115323.

231. Shulpekova, Y A recent ten-year perspective: Bile acid metabolism and signaling / Y. Shulpekova, E. Shirokova, M. Zharkova et al. //Molecules. - 2022. - Vol. 27, No. 6. - P. 1983.

232. Zeng, M. Disposition of flavonoids via recycling: Direct biliary excretion of enterically or extrahepatically derived flavonoid glucuronides / M. Zeng, R. Sun, S.

233. Bachir-Cherif, D. Characterization of post-surgical alterations in the bile duct-cannulated rat / D. Bachir-Cherif, D. Blum, A. Braendli-Baiocco et al. //Xenobiotica. - 2011. - Vol. 41. No 8. - P. 701-711.

234. Тюрюмин, Я.Л. Роль желчного пузыря (обзор литературы) / Я.Л. Тюрюмин, В.А. Шантуров, Е.Э. Тюрюмина // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2011. - Т.80, № 4. - С. 347-352.

235. Love, M.W. New insights into bile acid transport / M.W. Love, P.A. Dawson // Curr. OpiN Lipidol. - 1998. - Vol. 9, No 3. - P. 225-229.

236. Banno, A. Identification of a novel cholesterol-lowering dipeptide, phenylalanine-proline (FP), and its down-regulation of intestinal ABCA1 in hypercholesterolemic rats and Caco-2 cells / A. Banno, J. Wang, K. Okada et al. //Scientific Reports. - 2019. - Vol. 9, No 1. - P. 19416.

237. Zhang, B. Modulation of bile acid metabolism to improve plasma lipid and lipoprotein profiles / B. Zhang, F. Kuipers, J.F. de Boer et al. //Journal of clinical medicine. - 2021. - Vol. 11, No 1. - P. 4.

238. Tsuji, Y Bile acid sequestrant, sevelamer ameliorates hepatic fibrosis with reduced overload of endogenous lipopolysaccharide in experimental nonalcoholic steatohepatitis / Y Tsuji, K. Kaji, M. Kitade et al. //Microorganisms. - 2020. - Vol. 8, No 6. - P. 925.

239. Stanciu, M.C. Bile Acid Sequestrants Based on Natural and Synthetic Gels / M.C. Stanciu, M. Nichifor, C.A. Teacä //Gels. - 2023. - Vol. 9, No 6. - P. 500.

240. Dhal, P.K. Functional polymers as therapeutic agents: concept to market place / P.K. Dhal, S.C. Polomoscanik, L.Z. Avila et al. //Advanced drug delivery reviews. - 2009. - Vol. 61, No 13. - P. 1121-1130.

241. Catapano, A.L. ESC/EAS Guidelines for the management of dyslipidaemias: the Task Force for the management of dyslipidaemias of the European Society of

Cardiology (ESC) and the European Atherosclerosis Society (EAS) / A.L. Catapano, Z. Reiner, G. De Backer et al. //Atherosclerosis. - 2011. - Vol. 217, No 1. - P. 3-46.

242. Benson, G.M. In vitro studies to investigate the reasons for the low potency of cholestyramine and colestipol / G.M. Benson, C. Haynes, S. Blanchard et al. //Journal of pharmaceutical sciences. - 1993. - Vol. 82, No 1. - P. 80-86.

243. Kritchevsky, D. In vitro binding of bile acids and bile salts / D. Kritchevsky, J.A. Story //The American Journal of Clinical NutritioN - 1975. - Vol. 28, No 4. - P. 305-306.

244. Deng, Z.H. Bile salt-binding capacity and lipid-lowering mechanisms of water extracts from fresh tea leaves and tea flowers / Z.H. Deng, H. Hui-hua //Food Sci. - 2011. - Vol. 19. - P. 96-99.

245. Thale, M. Binding of bile acids to anion-exchanging drugs in vitro / M. Thale, O. Faergeman //Scandinavian Journal of Gastroenterology. - 1978. - Vol. 13, No 3. - P. 353-356.

246. Ding, L. Bile acid nuclear receptor FXR and digestive system diseases / L. Ding, L. Yang, Z. Wang et al. //Acta Pharmaceutica Sinica B. - 2015. - Vol. 5, No 2. -P. 135-144.

247. Sjöberg, B.G. Cholestyramine treatment of healthy humans rapidly induces transient hypertriglyceridemia when treatment is initiated / B.G. Sjöberg, S. Straniero, B. Angelin et al. //American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. -2017. - Vol. 313, No 2. - P. E167-E174

248. Cortés, V.A. Pathophysiological connections between gallstone disease, insulin resistance, and obesity / V.A. Cortés, F. Barrera, F. Nervi //Obesity Reviews. -2020. - Vol. 21, No 4. - P. e12983.

249. Goldstein, J.L. The LDL receptor / J.L. Goldstein, M.S. Brown //Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. - 2009. - Vol. 29, No 4. - P. 431438.

250. Rudenko, G. Structure of the LDL receptor extracellular domain at endosomal pH / G. Rudenko, L. Henry, K. Henderson et al. //Science. - 2002. - Vol. 298, No 5602. - P. 2353-2358.

251. Duarte, F. Recent advances in QM/MM free energy calculations using reference potentials / F. Duarte, B. A. Amrein, D. Blaha-Nelson // Biochim Biophys Acta. - 2015. - Vol. 1850, No 5. - P. 954-965.

252. Гуреев, М.А. Молекулярный докинг и его верификация в контексте виртуального скрининга / М.А. Гуреев, В.В. Кадочников, Ю.Б. Порозов // СПб: Университет ИТМО, 2018. - 50 с.

253. Kazachenko, A.S. A density functional theory calculations of infrared spectra of galactomannan butyl ether / A.S. Kazachenko, YN Malyar, S. Ghatfaoui et al. //Journal of Molecular Structure. - 2022. - Vol. 1251.

254. Schumacher, J.D. Pharmacologic modulation of bile acid-FXR-FGF15/FGF19 pathway for the treatment of nonalcoholic steatohepatitis / J.D. Schumacher, G.L. Guo //Bile Acids and Their Receptors. - 2019. - P. 325-357.

255. Keely, S.J. The farnesoid X receptor: good for BAD / S.J. Keely, J.R.F. Walters //Cellular and molecular gastroenterology and hepatology. - 2016. - Vol. 2. - N 6. - P. 725-732.

256. Jiang, L. Farnesoid X receptor (FXR): Structures and ligands / L. Jiang, H. Zhang, D. Xiao et al. //Computational and structural biotechnology journal. - 2021. -Vol. 19. - P. 2148-2159.

257. Cariello, M. The enterokine fibroblast growth factor 15/19 in bile acid metabolism / M. Cariello, M. Piglionica, R.M. Gadaleta et al. //Bile Acids and Their Receptors. - 2019. - P. 73-93.

258. Chiang, J.Y.L. Up to date on cholesterol 7 alpha-hydroxylase (CYP7A1) in bile acid synthesis / J.Y L. Chiang, J.M. Ferrell //Liver research. - 2020. - Vol. 4. - N 2. - P. 47-63.

259. Brendel, C. The small heterodimer partner interacts with the liver X receptor a and represses its transcriptional activity / C. Brendel, K. Schoonjans, O.A. Botrugno et al. //Molecular Endocrinology. - 2002. - Vol. 16. - N 9. - P. 2065-2076.