Изменение функционального состояния синтетического аппарата иммунокомпетентных клеток животных in situ под действием ионизирующего излучения: Микроспектральное флуоресцентное исследование тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Сергиевич, Лариса Анатольевна

• Сергиевич, Лариса Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сергиевич, Лариса Анатольевна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Литературный обзор

1.1. Общая характеристика клеток иммунной системы

1.2. Действие ионизирующей радиации на лимфоциты

1.2.1. Особенности действия острого и хронического у-облучения на лимфоциты крови и клетки тимуса

1.2.2. Механизмы действия малых доз ионизирующей радиации на живые организмы

1.2.3. Радиационная гибель лимфоцитов

1.2.4. Подавление функциональной активности лимфоцитов под действием облучения

1.2.5. Активирующее действие облучения на лимфоциты

1.3. Флуоресцентные методы исследований

1.3.1. Связывание флуорохромов с нуклеиновыми кислотами

1.3.2. Основные методы флуоресцентной цитохимии нуклеиновых кислот и области их применения

1.3.3. Флуоресцентный микроспектральный анализ 45 ГЛАВА 2. Материалы и методы

2.1. Животные и условия облучения

2.2. Приготовление образцов крови

2.3. Приготовление препаратов тимуса

2.4. Флуоресцентный микроспектральный анализ

2.5. Статистическая обработка данных 2.6. Метод проточной цитометрии

ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1. Действие острого у-облучения на имму некомпетентные клетки

животных

3.1.1. Лимфоциты периферической крови

3.1.2. Модель апоптоза на тимоцитах крыс

3.1.3. Клетки тимуса

3.2. Действие хронического у-облучения на лимфоциты крови животных

3.2.1. Хроническое у-облучение с мощностью дозы 14,4сГр/сут

3.2.2. Действие хронического облучения с различными мощностями доз на лимфоциты крови крыс в отдаленный период облучения

3.2.3. Сравнительное исследование действия хронического у-облучения на лимфоциты крови кроликов и крыс

3.3. Обсуждение полученных результатов 81 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 87 ВЫВОДЫ 89 ЛИТЕРАТУРА

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АМ - активационные маркеры АГ - антиген

НК - нуклеиновые кислоты

ЛПС - липополисахарид

ФГА - фитогемагглютинин

ПТЛ - предшественники Т-лимфоцитов

АО - акридиновый оранжевый

ЭБ - этидиум бромид

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изменение функционального состояния синтетического аппарата иммунокомпетентных клеток животных in situ под действием ионизирующего излучения: Микроспектральное флуоресцентное исследование»

ВВЕДЕНИЕ.

Изменения физико-химических параметров среды обитания приводят к изменениям состояния живых организмов. Первичные процессы, вызывающие патологические изменения органов и тканей, развиваются в клетке. Поэтому именно на клеточном уровне можно обнаружить неблагоприятные для организма изменения на самой ранней стадии, когда существует возможность определить причины этих процессов и ликвидировать их до того, как они вызовут необратимые изменения организма (Карнаухов, 1988).

Изучение функциональной устойчивости иммунной системы организма, которая является основным фактором защиты от неблагоприятных условий внешней среды, очень важно в связи с возрастающим техногенным влиянием на организм. Многочисленные функции иммунной системы определяются не только контактами с различными антигенами и связью с нейроэндокринной системой, а также тем фактом, что сами клетки иммунной системы обладают регуляторными свойствами, опосредуемыми через систему синтезируемых ими растворимых медиаторов - лимфокинов (Абрамов, 1991; Савина и Хоптынская, 1995, Пальцев, 1996). Поэтому иммунокомпетентные клетки имеют такие специфические свойства, которые могут служить индикаторами состояния организма, отражая его адаптивные и патологические изменения.

Кровь является тканью, обеспечивающей интеграцию различных органов и клеток в единый, гармонически функционирующий организм, реагирующий на любые нарушения нормального функционирования многочисленных систем организма, а также на различные внешние воздействия. Через кровяное русло лимфоциты поступают в места своего функционирования. Следовательно, кровь отражает все процессы, происходящие в иммунной системе и в организме в целом. Исследование синтетической активности лимфоцитов непосредственно в мазках крови позволяет избежать негативных воздействий на клетки в процессе их выделения, сохранить их нативное окружение.

Проблема сходства и различия в механизмах действия острого и хронического облучения в низких и высоких дозах является одной из наиболее дискуссионных в настоящее время (РетеМедеп а1., 1988; Спитковский, 1993; Кузин, 1995; Бурлакова и др., 1996). Несмотря на многочисленные исследования, проводимые в этой области, проблема индивидуального реагирования организма на облучение в течение длительного периода времени является недостаточно изученной. На основании биохимических данных можно лишь предполагать, что при облучении происходит разобщение согласованных в норме процессов синтеза ДНК, РНК и белка. Исследование синтетической активности лимфоцитов крови флуоресцентным микроспектральным методом является таким способом интегральной оценки развития патогенеза, который позволяет судить о процессах, происходящих в целом организме на ранних стадиях развития деструктивных изменений.

Данная работа посвящена исследованию функционального состояния синтетического аппарата иммунокомпетентных клеток индивидуального организма под действием разных доз острого и хронического ионизирующего излучения, вызывающих различную степень повреждения клеток иммунной системы, а следовательно, и различные процессы их восстановления.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Сергиевич, Лариса Анатольевна

выводы.

1. Обосновано применение флуоресцентного микроспектрального метода для исследования функционального состояния синтетического аппарата лимфоцитов in situ при действии ионизирующего излучения на организм.

2. Изменения функционального состояния синтетического аппарата лимфоцитов, описываемые параметром а, под действием острого у-облучения происходят в три стадии. Стадии отражают депрессию синтетических процессов и интерфазную гибель клеток, экстренное восстановление клеток иммунной системы, вторичную волну окончательного восстановления лимфоцитов и гибель клеток первичного восстановления.

3. Основные стадии изменения параметра а, описанные для лимфоцитов периферической крови, характерны и для клеток тимуса: депрессия и активация синтетических процессов связаны с интерфазной и митотической гибелью клеток и последующей репопуляцией тимуса.

4. Под действием хронического у-облучения изменения функционального состояния синтетического аппарата лимфоцитов происходят в четыре стадии. Особенностью действия хронического облучения с мощностью дозы 14,4сГр/сут. на лимфоциты крови крыс является увеличение параметра а на первой стадии в результате адаптивно-компенсаторной реакции и активации клеток иммунной системы в ответ на малые дозы облучения.

5. В отдаленные сроки хронического облучения происходит снижение синтетической активности, что отражает процессы депрессии в иммунной системе. При этом не существует монотонной зависимости между мощностью дозы и изменением синтетической активности.

6. При хроническом облучении с мощностью дозы 14,4сГр/сут. у кроликов в отличие от крыс не происходит увеличение синтетической активности лимфоцитов крови на первой стадии. Длительное воздействие хронического облучения вызывает устойчивое снижение параметра а у этих видов животных.

7. На основании исследования флуоресцентных характеристик показаны индивидуальные различия в реакции на облучение между животными одного вида и возраста, облученными в одной и той же дозе. Обнаружена корреляция между величиной изменения синтетической активности и степенью выраженности лучевого поражения у индивидуального организма.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Впервые проведенное методом флуоресцентного микроспектрального анализа исследование функционального состояния синтетического аппарата иммунокомпетентных клеток, описываемое параметром а, под действием различных доз острого и хронического у-облучения позволило получить принципиально новые сведения о действии ионизирующей радиации на индивидуальный организм.

Были выделены характерные стадии изменения синтетической активности лимфоцитов как для острого, так и для хронического у-облучения. Анализ индивидуальных кривых изменения параметра а позволил обнаружить, что на определенных стадиях (I и II -для острого и I, II и IV - для хронического облучения) происходят однонаправленные изменения синтетической активности, однако разнонаправленные колебания параметра а у отдельных животных в течение длительного периода времени (III стадия) свидетельствуют о различном характере протекания процессов депрессии и репарации как в иммунной системе, так и в других тканях организма у различных животных. Это подтверждает целесообразность проведения исследований на отдельных животных.

Полученные серии гистограмм распределения параметра а позволили исследовать поведение всей клеточной популяции, выявить погибающие и активированные клетки. Показан немонотонный характер изменения синтетической активности под действием различных доз хронического у-облучения. Колебательный характер изменений синтетической активности под действием хронического облучения с низкими мощностями доз свидетельствует об одновременном протекании процессов репарации и депрессии в иммунной системе. Вместе с тем, можно полагать, что длительное снижение синтетической активности лимфоцитов указывает на поражение иммунореактивности, что способствует возникновению иммунодефицитов, неоплазий, восприимчивости к инфекциям.

Преобладание тех или иных процессов в иммунной системе зависит от индивидуальной и видовой радиочувствительности организма.

Обнаруженная корреляция между величиной изменения синтетической активности и степенью выраженности лучевого поражения у индивидуального организма подтвердила, что методы и техника флуоресцентной диагностики могут быть использованы для цитодиагностики радиационных повреждений иммунной системы и коррекции индивидуального облучения при радиационной терапии раковых заболеваний. Полученные результаты позволят интерпретировать данные клеточного мониторинга состояния здоровья населения, проживающего на экологически неблагоприятных территориях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сергиевич, Лариса Анатольевна, 1999 год

ЛИТЕРАТУРА.

1. Абрамов В.В., Интеграция нервной и эндокринной системы. Новосибирск, 1991.

2. Бейер В.А. Краткое пособие по гематологии. Ленинград: Медицина, 1967, 219с.

3. Белоусова О.И., Горизонтов П.Д., Федотова М.И. Радиация и система крови. М.: Атомиздат, 1979, 127с.

4. Бонд В., Флиндер Т., Аршамбо Д. Радиационная гибель млекопитающих. М.: Атомиздат, 1971.

5. Борисова О.Ф., Минят Э.Е. Комплексы дезоксирибонуклеопротеида с акридиновым оранжевым. Мол. биол., т.З, №5, 1969, с. 758-768.

6. Борисова О.Ф., Суровая А.Н. Применение флуоресцентных красителей для изучения нуклеиновых кислот. В кн. Итоги науки и техники. Сер. Мол. биол., т.1,1973, с.141-193.

7. Бурлакова Е.Б., Голощапов А.Н., Горбунова Н.В., Гуревич С.М., Жижина Г.П., Козаченко А.И., Конрадов A.A., Корман Д.Б., Молочкина Е.М., Наглер Л.Г., Озерова И.Б., Скалацкая С.И., Смотряева М.А., Тарасенко O.A., Трещенкова Ю.А., Шевченко В.А., Особенности биологического действия малых доз облучения. Рад. Биология. Радиоэкология, т. 36, 1996, с.610-631.

8. Гордон Р.Я., Карнаухов В.Н. Люминесцентный анализ периферической крови при некоторых видах аллергии. Архив патол., т.43, №9, 1981, с. 21-25.

9. Гордон Р.Я., Бочарова Л.С., Архипов В.И., Карнаухов В.Н. Метаболизм РНК и транспорт уридина в мозге зимнеспящих животных. В сб. Эволюционные аспекты гипобиоза и гибернации, Ленинград, 1986, с. 73-79.

10. Гордон Р.Я., Бочарова Л.С., Попов В.И., Карнаухов В.Н. Различия в состоянии рибосом нервных клеток, выявляемые при флуорохромировании акридиновым оранжевым. Цитология, т.31, №1, 1989, с.73-79.

11. Горчаков A.M., Остапенко В.А., Остапенко С.М., Горчакова Ф.Т. Патогенетическая опасность хронического низкодозового облучения детского организма: состояние иммунокомпетентных клеток крови в качестве свидетельства. Экологическая антропология (ежегодник), вып.2,1997, с.263-267.

12. Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике. М.: Наука, 1984, 424с.

13. Зеленин A.B. Люминесцентная цитохимия нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1967, 207с.

14. Зеленин A.B. Взаимодействие производных акридина с клеткой. М.: Наука, 1971, 231с.

15. Зеленин A.B., Полетаев А.И., Степанова Н.Г. Флуоресцентная цитохимия нуклеиновых кислот. Современное состояние и перспективы: к 35-летию метода. Цитология, т.29, №12, 1987, с.1323-1336.

16. Иммунология: в 3х томах (под ред. У. Пола), Москва, 1987.

17. Карнаухов В.Н. Люминесцентный спектральный анализ клетки. М.: Наука, 1978, 207с.

18. Карнаухов В.Н., Шварцбурд П.М. Исследование информативности показателя синтетической активности субпопуляций клеток крови. Деп. ВИНИТИ, №1479-79, 1979, с. 1-19.

19. Карнаухов В.Н., Карнаухова H.A., Яшин В.А., Методы и техника флуоресцентной диагностики. ОНТИ НЦБИ, Пущино. 1983, 32с.

20. Карнаухов В.Н., Яшин В.А., Казанцев А.П., Карнаухова H.A., Кулаков В.И. Двухволновый микрофлуориметр-фотометр на базе стандартных блоков и узлов. Цитология, т.29,№1, 1987, с.50-53.

21. Карнаухова H.A., Татарюнас А.Б. Динамика нуклеиновых кислот в ядерных клетках периферической крови при экспериментальном инфаркте миокарда у кроликов. В сб. Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины, Каунас, 1981, с. 90-91.

22. Карнаухова H.A. Люминесцентные параметры ядерных клеток крови в процессе иммунного ответа. Биофизика, т.29, вып.2, 1984, с.276-279.

23. Карнаухова H.A., Шейко Е.А., Шихлярова А.И., Флуоресцентные характеристики различных функциональных состояний клеток саркомы 45. Проблемы онкологии, т.31, 1985, с.81-85.

24. Карнаухова H.A., Бриндак О.И., Алешин Б.В. Применение люминесцентного микроспектрального анализа для оценки синтетической активности инкреторных клеток семенников. Проблемы эндокринологии, т.32, №5,1986, с. 76-78.

25. Карнаухова H.A., Изменение спектров люминесценции окрашенных акридиновым оранжевым клеток крови больных лимфосаркомой и лейкозом в процессе химиотерапии. Экспериментальная онкология, т.13, 1991, с.50-53.

26. Карнаухова H.A., Сергиевич JI.A., Аксенова Г.Е., Изменение флуоресцентных характеристик окрашенных акридиновым оранжевым лимфоцитов крови крыс после острого гамма-облучения. Биофизика, т.39, 1994, с.127-132.

27. Карнаухова H.A., Сергиевич JI.A., Аксенова Г.Е., Карнаухов В.Н., Флуоресцентная диагностика лифоцитов крови крыс под действием хронического гамма-облучения. Биофизика, т.40, 1995, с.687-689.

28. Карнаухова H.A., Сергиевич JI.A., Аксенова Г.Е., Карнаухов В.Н., Флуоресцентные спектральные исследования синтетической активности лимфоцитов крови животных при хроническом гамма-облучении. Рад. биология. Радиоэкология, т.38, 1998, с.552-559.

29. Карнаухова H.A., Сергиевич Л.А., Карнаухов A.B., Митьковская Л.И., Карнаухов В.Н., Количество и качество иммунокомпетентных клеток животных в сопоставлении с вариациями солнечеой активности. Биофизика, т.44, №2, с. 313-319.

30. Кирсанова В.А., Сергеева Н.С., Свиридова И.К., Чиссов В.И., Бабарина A.B., Кириляк O.A., Махмурова Н.Т., Пелевина И.И. Разработка и применение автоматического МТТ-

метода для оценки реакции лимфоцитов периферической крови человека на облучение. Рад. биология. Радиоэкология, 1994, т.34, с.213-219.

31. Корогодин В.И. Проблемы пострадиационного восстановления. М.:Атомиздат, 1966, 390с.

32. Кузин A.M., Идеи радиационного гормезиса в атомном веке. Москва, 1995,159с.

33. Литвина М.М., Никонова М.Ф., Ярилин A.A., Состояние классического и альтернативных путей активации Т-лимфоцитов у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС. Там же, с.598-602.

34. Ляшенко В.А., Дроженников В.А., Молотковская И.М. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток. М.: Медицина, 1988, 239с.

35. Манько В.М. Успехи совр. биол., 1981, т. 92, с.81.

36. Манько В.М., Хаитов P.M., Иммунокомпетентные клетки. Итоги науки и техники, сер. Иммунология, т. 18, 1987.

37. Мейсель М.Н., Корчагин В.Б. Люминесцентно-микроскопическое выявление нуклеиновых кислот и нуклеопротеидов. Бюл. экспер. биол. мед., т.ЗЗ, №3, 1952, с.49.

38. Мельникова Е.В., Карнаухов В.Н. Температурная зависимость соотношения односпиральных и двухспиральных нуклеиновых кислот в идентифицированных гигантских нейронах моллюска. Цитология, т.22, №4,1980, с. 355-357.

39. Мирошниченко И.В., Рябинина И.Д., Шарова Н.И., Мальцева В.В., Столпникова В.Н., Кочергина Н.И., Методические подходы к анализу пострадиационных нарушений лимфо-и гемопоэза. Рад. биология. Радиоэкология, т. 34, 1994, с.467-473.

40. Мишурова Е., Мацкова Н., Кропачева К. Изменение содержания рибонуклеиновой кислоты в клетках и плазме крови в сопоставлении с гематологическими индикаторами радиационноиндуцированного поражения у крыс. Рад. биология. Радиоэкология, 1997, т.37, с.148-151.

41. Окада Ш., Радиационная биохимия клетки. Москва, 1974. 407 с.

42. Павлюк A.C., Беда М.В., Веселова A.B., Мишин В.Ю., Толстов Ю.В., Ковальчук JI.B., Фенотип интактных и активированных in vitro митогеном Т-лимфоцитов. Исследование Т-клеток здоровых доноров. Иммунология, вып.3,1993, с.21-24.

43. Пальцев М.А. Цитокины. От теории к практике. Вестник Российской Академии Наук, т. 66, 1996, с.1079-1084.

44. Петров Р.В., Зарецкая Ю.М. Радиационная иммунология и трансплантация. М., 1970.

45. Петров Р.В., Ковальчук J1.B., Чередеев А.Н. Радиобиология, 1971, т.11, с.483-494.

46. Петров Р.В., Сеславина J1.C. Актуальные проблемы пересадки органов. М., Медицина, 1978, с. 14.

47. Петров Р.В., Хаитов P.M., Манько В.М., Михайлова A.A. Контроль и регуляция иммунного ответа. Л., Медицина, 1981, 311с.

48. Печатников В.А., Афанасьев В.Н., Король Б.А., Корнеев В.Н., Уманский С.Р., Анализ деградации ДНК в тимоцитах облученных крыс методом проточной цитометрии. Радиобиология, т.24,1984, с.439-444.

49. Савина Н.П., Хоптынская С.К., Нарушение фунуции тимуса и эндокринного контроля как одна из причин позднего иммунодефицита. Рад. биология. Радиоэкология, т.35, 1995, с.463-480.

50. Самбур М.Б., Мельников О.Ф., Сидоренко Т.В., Тимченко C.B., Розенфельд Л.Г. Участие вилочковой железы в развитии адаптационных реакций иммунной системы при фракционированном у-облучении в малых дозах. Радиац. биология. Радиоэкология, 1994, т.34, с.474-481.

51. Спитковский Д.М., Концепция действия малых доз ионизирующих излучений на клетки и ее возможные приложения к трактовке медико-биологических последствий. Радиобиология, т.32, 1992, с.З82-400.

52. Стржижевский А.Д., Динамические и дозовые характеристики процесса опустошения лимфоидной ткани облученных грызунов. Радиобиология, т. 14, 1974, с. 409-412.

53. Тяжелова В.Г. Кинетический принцип в межвидовых экстраполяциях. М., Наука, 1988, 192с.

54. Уманский С.Р. Успехи современной биологии, 1982, т.93, с.139-148.

55. Уманский С.Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы. Мол. Биология, 1996, т.ЗО, с.487-502.

56. Франк Г.М., Карнаухов В.Н., Колаев В.А., Яшин В.А. Спектральные характеристики флуорохромированных акридиновым оранжевым клеток белой крови человека. Биофизика;г.22, №6,1977, с.1015-1022.

57. Фримель X., Брок Й.,Основы иммунологии, Москва, 1986.

58. Хансон К.П., Комар В.Е., Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток. Москва, 1985, 150с.

59. Хомутецкая О.Е., Гордон Р.Я., Карманова И.Г., Карнаухов В.Н. Функциональное сходство формы П-2 первичного сна и гипобиоза у лягушки Rana Temporaria (по данным люминесцентного микроспектрального анализа цитоплазмы нейросекреторных нейронов). Журнал эволюц. биохимии и физиологии, т.25, №1,1989, с.113-119.

60. Чередеев А.Н. Характеристика и функциональные свойства субпопуляций лимфоцитов человека. В кн. Итоги науки и техники. Сер. Иммунология, 1984, т.13, с.108-133.

61. Чертков И.Л., Гуревич О.А. Стволовая кроветворная клетка и ее окружение. М., Медицина, 1984, 238 с.

62. Эйдус JI.X., О едином механизме инициации различных эффектов малых доз ионизирующих излучений. Рад. Биология. Радиоэкология, т. 36, 1996, с.874-882.

63. Ярилин А.А., Современные вопросы радиобиологии, с.36-48. Москва, 1980.

64. Ярилин А.А., Анохин Ю.Н., Полушкина Э.Ф., Радиационное поражение и восстановление Т-лимфоцитов. Радиобиология, т.21,1981, с.74-79.

65. Ярилин А.А., Полушкина Э.Ф., Радиационное поражение и восстановление клеток мышей. Радиобиология, т.22, 1982, с.220-225.

66. Ярилин А.А., Полушкина Э.Ф., Мирошниченко И.В., Кочергина Н.И., Пострадиационная динамика предшественников Т-лимфоцитов и регенерация тимуса у мышей. Радиобиология, т.25, 1985, с.505-509.

67. Ярилин А.А., Актуальные проблемы прикладной иммунологии. Итоги науки и техники, сер. Иммунология, т. 15, 1986.

68. Ярилин А.А., Действие ионизирующей радиации на лимфоциты (повреждающий и активирующий эффекты). Иммунология, вып.5,1988, с.5-11.

69. Ярилин А.А., Мирошниченко И.В., Шичкин В.П. Итоги науки и техники, сер. Иммунология, т.23, 1990.

70. Ярилин А.А., Апоптоз и его место в иммунных процессах. Иммунология, вып.З, 1996, с. 10-23.

71. Ярмоненко С.П. Радиобиология человека и животных. М: Высшая школа, 1984, 375с.

72. Afanasyev V.N., Korol В.А., Matylevich N.P., Pechatnikov Y.A., Umansky S.R. The use of flow cytometry for investigation of cell death. Cytometry, 1993, v.14, p.603-609.

73. Akijama M., Zhou O.-L., Kusunoki Y., Kyoizumi S., Kohno N., Akiba S., Deolongchamp R.R., Age and dose related alteration of in vitro mixed lymphocyte culture response of blood lymphocytes from A-bomb survivors. Rad. Res., v.l 17, 1989, p.26-34.

74. Amosova E.N., Afonina G.B., MostbauerG.V., Reva S.N. T-lymphocyte functional activity in myocardial infarct patient with different clinical courses (based on data from fluorescent nuclear probing). Lik. Sprava, v.5, 1997, p.44-47.

75. Anderson R.E., Warner N.L., Ionizing radiation and the immune response. Advances in Immunology, v.24, 1976, p.215-335.

76. Anderson R.E., Lefkovi ts I., /« vitro evaluation of radiation induced augmentation of the immune response. American Journal of Pathology, v.197, 1979, p.467-472.

77. Anderson R.E., Williams W.L., Tokuda S. Effect of low-dose irradiation upon T cell subsets involved in the response of primed A/J mice to Sal cells. Int J Radiat Biol., v.53, 1988, p. 103118.

78. Andreef M., Beck J.D., Darzynkiewicz Z., Traganos F., Gupta S., Melamed M R., Good R.A. RNA content in human lymphocyte subpopulation. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, v.75, №4, 1978, p. 1938-1942.

79. Askew D., Yurochko A.D., Burger C.J., Elgert K.D. Normal and tumor-bearing host macrophage responses: variability in accessory function, surface markers, and cell-cycle kinetics. Immunol. Lett, v.24, 1990, p.21-29.

80. Bach J-F. Clin.Immunol. Allergol., 1985, v.3, p. 133-156.

81. Bartlett W.C., Purchio A., Fell H P., Noelle R.J. Cognate interaction between helper T cells and B cells. VI. TGF-beta inhibits B cell activation and antigen-specific, physical interaction between Th and B cells. Lymphokine Cytokine Res., v. 10, 1991, p. 177-183.

82. Bich-Thuy L.T., Dukovich M., Peffer N.J., Fauci A S., Kehrl J.H., Greene W.C. Direct activation of human resting T cells by IL 2: the role of an IL 2 receptor distinct from the Tac protein. J Immunol, 1987, v.139, p.1550-1556.

83. Brovall C., Schacter B. Radiation sensitivity of human natural killer cell activity: control by X-linked genes. J Immunol, 1981, v. 126, p.2236-2239.

84. Bruserud O., Moen T. Production of interleukin 2 containing growth medium for cloning of human T lymphocytes. J Immunol Methods, 1984, v.71, p.175-184.

85. Clave E., Sociy G., Cosset J.M., Chaillet M P, Tartour E., Girinsky T.,Carosella E., Fridman

H., Gluckman E., Mathiot C., Multicolor flow cytometry analysis of blood cell subsets in patients given total body irradiation before bone marrow transplantation. Int. J. Radial Oncol. Biol Phys., v.33, 1995, p. 881-886.

86. Comings D.E. Mechanism of chromosome banding. VIII. Hoechst 33258 - DNA interaction. Chromosoma, v.52, 1975, p.229-243.

87. Darzynkiewicz Z., Traganos F., Sharpless T., Melamed M R. Conformation of RNA in situ as studied by acridine orange staining and automated cytofluorometry. Exp. Cell Res. v. 95, 1975, p.143-153.

88. Darzynkiewicz Z., Traganos F., Sharpless T., Melamed M R. Cell cycle-related changes in nuclear chromatin of stimulated lymphocytes as measured by flow cytometry. Cancer research, v.37, 1977, p.4635-4640.

89. Darzynkiewicz Z , Traganos F., Andreef M., Sharpless T., Melamed M R. Different sensitivity of chromatin to acid denaturation in quescent and cycling cells as revealed by flow cytometry. J. Histochem. Cytocham. v.27, 1979a, p.478-485.

90. Darzynkiewicz Z., Evenson D., Staiano-Calco L., Sharpless T., Melamed M.R. Relation between RNA content and prograssion of lymphocytes through S phase of the cell cycle. Proc. Nat. \Acad. Sci. US'/, v.76, 1979b, p. 358-362.

91. Dolfini S.F. The effect of distamycin A on heterochromatin condensation of Drosophila chromosomes. Chromosoma, v.95, 1987, p.57-62.

92. Dorey F. & Zighelbiom J. immunologic variability in healthy population. Clin. Immunol. Immunopathol., 1980, v. 16, p.406-415.

93. Duncan D.D., Lawrence D A. Oxidatively stressed lymphocytes remain in Go/Gi on mitogenic stimulation. J. Biochem. Toxicol., v.5, №4, 1990, p.229-235.

94. Duncan D.D., Lawrence D.A. T-cells and cloned andtransformed T-cells lines to assess immune function. Methods in Immunotoxicology., 1995, v.l, p.483-505.

95. Dyck J. A., Shifrine M., Klein A.K., Rosenblatt L.S., Kawakami T. Spontaneous cell-mediated cytolysis by peripheral blood cells obtained from whole-body chronically irradiated beagle dogs. RadiatRes, 1986, v. 106, p.31-40.

96. Elkind M.M.,Whitmore G.F., Radiobiology of Cultured Mammalian Cells. New York, 1967.

97. Fabricant J.I. Adaptation of cell renewal systems under continuous irradiation. Health Phys., 1987, v.52, p.561-570/

98. Feinendegen L.E., Bond V P., Booz J., Muhlensiepen H. Biochemical and cellular mechanism of low-dose effects. Int JRadiat Biol., v.53, 1988, p.23-37.

99. Ferlini C , Di Cesare S., Rainaldi G., Malorni W., SamoggiaP., Biselli R., Fattorossi A. Cytometry, v.24, 1996, p. 106-115.

100. Filippovich I.V., Sorokina N.I., Soldatenkov V. A., Alfierova T.M., Trebenok Z. A. Effects of the inducers of cellular differentiation and of ionazing radiation on thymus lymphocytes: chromatin degradation and programmed cell death. Int J of Radiat Biol., v.53, 1988, p.617-628.

101. Fong T.C., Makinodan T. Preferential enhancement by 2-mercaptoethanol of IL-2 responsiveness of t blast cells from old over young mice is assosiated with potentiated protein kinase C translocation. Immunol. Lett., 1989, v.20, p. 149-154.

102. Forslund T., Welin M.G., Laasonen L., Weber T.H., Edgren J. Periferal Blood lymphocyte subsets in radiologists exposed to ionizing radiation, t/cta Radiol Oncol, v.24, 1985, p.415-417.

103. Geiger B ., Gallily R., Gery I. The effect of irradiation on the release of lymphocyte-activating factor (LAF). Cell Immunol, 1973, v. 7, p. 177-180.

104. Girinsky T., Baume D., Sociy G., Pico J.M., MalaiseE., CossetJ.M., Blood cell kinetics after a 385cGy total body irradiation given to CML patient for bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplant., v.7, 1991, p.317-320.

105. Gordon R.Ya., Bocharova L.S., Kruman I.I., Popov V.I., Kazantsev A.P., Khutzian S.S.,

Karnaukhov V.N. Acridine orange as an indicator of ribosome state in cell. Cytometry, v.29, 1997, p.215-221.

106. Gualde N., Goodwin J.S. Effect of irradiation on human T-cell proliferation: low dose irradiation stimulates mitogen-induced proliferation and function of the suppressor/cytotoxic T-cell subset. Cell Immunol, 1984, v.84, p.439-445.

107. Hara T., Jung L.K., Bjorndahl J.M., Fu S.M. Human T cell activation. III. Rapid induction of a phosphorylated 28 kD/32 kD disulfide-linked early activation antigen (EA 1) by 12-o-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, mitogens, and antigens. JExpMed, 1986, v.164, p.1988-2005.

108. Hendry J.H. Survival of cells in mammalian tissues after low doses of irradiation. Int. J. Radiat. Biol, 1988, v.53, p.89-94.

109. Hirokawa K., Sado T., Kubo S., Kamisaku H., Hitomi K., Utsuyama M. Intrathymic T cell differentiation in radiation bone marrow chimeras and its role in T cell emigration to the spleen. An immunohistochemical study. J Immunol 1985, v.134, p.3615-3624.

110. Hurme M., Sihvola M. Cytokine modulation of HLA-DR expression on proliferating cord blood T cells. Immunol Lett, 1989, v. 20, p. 217-22.

111. Ishii K., Misonoh I.,Hosoi Y., Sakamoto K. Effects of low-dose irradiation on proliferative response and IL-1 production of mouse splenocytes. The Intern conf on low dose irradiation and biol defense mechanisms. Kyoto, 1992, p.89.

112. James J., Makinodan T. T-cell potentiation in normal and autoimmune-prone mice after extended exposure to low-dose ionizing radiation and/or caloric restriction. Int. J. Radiat. Biol., 1988, v.53, p.137-152.

113. Jonson CM., Benson N. A., Papadi G.P. Apoptosis and CD4+ lymphocyte depletion following feline immunodeficiency virus infection of a T-lymphocyte cell line. Vet. Pathol., v.33, №2, 1996, p. 195-203.

114. Johnstone A.P., Williams G.T. Role of DNA breaks and ADP-ribosyl transferase activity in eukaryotic differantiation. Nature, 1982, v.300, p.368-370.

115. Karnaukhova N. A., Sergiyevich L.A., Aksenova G.E., Karnaukhov V.N., Fluorescent microspectral study of synthetic activity of rat blood lymphocytes under acute and continuous gamma-irradiation. Radiat. Environ. Bioph. (in press).

116. Keiichiro I. Enhancement of mitogen response of rat lymphocytes by whole body exposure to low dose X-ray. Cent Res Inst Elec Power Industr. v.48, 1989, p20.

117. Knowles J.F., The effect of chronic radiation on the humoral immune response of rainbow trout. Int. J. Radiat. Biol., v.62, 1992, p.239-248.

118. Kolomiytseva I.K., Novoselova E.G., Kulagina T.P., Kuzin A.M. The effect of ionizing radiation on lipid metabolizm lymphoid cells. Int. J. Radiat. Biol., 1987, v.51, p.53-58.

119. Kolomiytseva I.K., Slozenikina L. V., Fialkovskaya L. A., Kulagina T P., Markevich L.N. Nonmonotonous changes of the metabolic parameters under the action of ionizing radiation of the living cells. Book of abstracts Nonlinear phenomena in biology, 1998, p.55.

120. Kondo S., Altruistic sell suicide in relation to radiation hormesis. Int. J. Radiat. Biol., v.53, 1988, p.95-102.

121. Kraal G., Groeneveld P.H., Boden D., Kors N. T-cell differentiation in lethally irradiated and reconstituted mice: functional recovery of PNA-fractionated subpopulations. Cell Immunol, 1981, v.62, p.74-81.

122. Lee S.K., Woodland R.T. Selective effect of irradiation on responses to thymus-independent antigen. J Immunol, 1985, v. 134, p.761-764.

123. Lemoli R.M., Tafuri A., Fortuna A., Petrussi M.T., Ricciardi M R., Catani L., Rondelli D., Fogli M., Leopardi G., Ariola C., Tura S. Cycling status of CD34+ cells mobilized into peripheral blood of healthy donors by recombinant human granulocyte colony-stimulating factor. Blood, v.89, №4, 1997, p. 1189-1196.

124. Lerman LS. Structural consideration in the interaction of DNA and acridines. J Mol Biol, v.3, 1961, p.18-30.

125. Liegler T.J., Hyun W., Yen TS., Stites D.P. Detection and quantification of live, apoptotic, and necrotic human peripheral lymphocytes by single-laser flow cytometry. Clin Diagn Lab Immunol, v.2, 1995, p.369-376.

126. Liu S.Z., Liu W.H., Sun I B. Radiatioin hormesis - its expression in the immune system. HealthPhys., v.52, 1987, p.579583.

127. Liu S.Z. Radiation hormesis: A new concept in radiologicalscience. Chin. Med. J. v. 102< 1989, p.750-755.

128. Liu S.Z. Multilevel mechanism of stimulation effects of low-level radiation on immunity. The intern. Conf. on low dose irradiation and biol. defense mechanisms. Kyoto. 1992, p. 15-16.

129. Little J.B. Low-dose radiation effects: enteraction and synergism. Health. Physics., 1990, v.59, p.49-55.

130. Loontiens F.G., Regenfuss P., Zechel A., Dumortier L., Clegg R.M. Binding characteristics of Hoechst 33258 with calf thymus DNA. Biochemistry, v.29, 1990, p.9029-9038.

131. Makinodan T., James S.J., T-cell potentiation by low-dose ionizing radiation: possible mechanism. Health Physics, v.59, 1990, p.29-34.

132. Mouse R. V., Thomas P.T. In vitro induction of cytotoxic T-lymphocytes. Methods in Immunol., 1995, v.l, p. 159-171.

133. Mazini G , Barcellona ML., Avitabile M., Quadrifoglio F. Interaction of diamino -2 -phenilindole (DAPI) with natural and synthetic nucleic acids. Nucl\7cidRes, v. 11, 1983, p. 8861-8876.

134. Nakamura N., Kusunoki Y., Akiyama M. Radiosesitivity of CD4 or CD8 Positive Human T-Lymphocytes by an in Vitro Colony Formation Assay. Rad Res, v. 123, 1990, p.224-227.

135. Neckers L.M., Cossman J. Transferrin receptor induction in mitogen-stimulated human T

lymphocytes is required for DNA synthesis and cell division and is regulated by interleukin 2. Proc Natl\ 7cadSci US\% 1983, v.80, p.3494-3498.

136. Nogami M., Huang G.T., Nakamura L.T., Makinodan T. T cells are the cellular target of the proliferation-augmenting effect of chronic low-dose ionizing radiation in mice. Radial Res., v. 139, 1994, p.47-52.

137. Novoselova E.G., Safonova M.G., Gordon R.Ya., Semiletova N.V., Immune functions of spleen lymphocytes of rats subjected to chronic irradiation and antioxidant (ubiquinone) diet. Int. J. Radiat. Biol., v.67, 1995, p.469-476.

138. Odum N., Martin P.J., Schieven G.L., Hansen J. A., Ledbetter J. A. Signal transduction by HLA class II antigens expressed on activated T cells. Eur J Immunol, 1991, v.21, p. 123-129.

139. Ogawa H., Tsunematsu T. In vitro X-ray irradiation of human peripheral blood T lymphocytes enhances suppressor function. Clin Exp Immunol, 1983, v.53, p.444-450.

140. Ozsahin M, Ozsahin H, Shi Y, Larsson B , Wergler F.E., Crompton N.E. Rapid assay of intrinsic radiosensitivity based on apoptosis in human CD4 and CD8 T-lymphocytes. IntJ Radiat Oncol Biol Phys., v.38, 1997, p.429-440.

141. Parkinson J. A., Barber J., Douglas K.T, Rosamond J., Sharplees D. Minor-groove recognition of the self-complementary duplex a (CGCGAATTCGCG)2 by Hoechst 33258: a high field NMR study. Biochemistry, v.29, 1990, p. 10181-10189.

142. Proser J.S, Edwards A.A., Lloyd D C, The relationship between colony-forming ability and chromosomal aberrations induced in human T-lymphocytes after gamma-irradiation. Int. J. Radiat. Biol, v.58, 1990, p.293-301.

143. Rana R, Vitale M, Mazotti G, Manzoli L, Papa S. Radiosensitivity of human natural killer cells: binding and cytotoxic activities of natural killer cell subsets. Radiat Res., v. 124, 1990, p.96-102.

144. Rigler R. Microfluorimetric characterization of intracellular nucleic acids and

nucleoproteins by acridine orange. I /eta Physiol scand, v.67, suppl.267, 1966, p.1-137.

145. Robbins P.A., Maino V.C., Warner N.L., Brodsky F.M. Activated T cells and monocytes have characteristic patterns of class II antigen expression. J Immunol, 1988, v. 141, p. 12811287.

146. Roberts A., Nezamis J.E., Lancaster C., Davis J.P., Hancher A.J. Mild irritans prevent gastric necrosis through "adaptive cytoprotection" mediated by prostaglandin. 17m. J. Physiol, 1985, v.245, p.l 13-121.

147. Rydberg B. Detection of DNA strand breaks in single cells using flow cytometry. IntJ RadiatBiol, v.46, 1984, p.521-527.

148. Sabzevary H., Propp S., Kono D.H., Theofilopoulos A.N. Gi arrest and high expression of cyclin kinase and apoptosis inhibitors in accumulated activated/mamory phenotipe CD4+ cells of older lupus mice. Eur J Immunol, v.27, 1997, p. 1901-1910.

149. Sado T., Komisaku H., Ikarashi Y., Kubo E., Immadiate and long-term effects of radiation on the immune system of specific-pathogen-free mice. Int. J. Radiat. Biol., v.53, 1988, p. 177187.

150. Sagan L.A. Radiation hormesis. Health Physics, v.52, 1987, p.5-15.

151. Seki H., Iwai K., Konno A., Ohta K., Yachie A., Taniguchi N.,Miyawaki T. Differential protective action of cytokines on radiation-inducted apoptosis of periferal lymphocyte subpopulations. Cell Immunol., v. 163, 1995, p. 30-36.

152. Serio C.S., Henning C.B., Leonid R.E., Tochey R.E., Mitogenic stimulation of periferal lymphocytes from radium workers. Int. J. Radiat. Biol, v.38, 1989, p.26-34.

153. Stewart C., Stevenson A., Habersett R., The effect of low-dose irradiation on unstimulated and PHA-stimulated human lymphocyte subsets. Int. J. Radiat. Biol, v.53, 1988, p.77-87.

154. Stout R.D., Suttles J. T cells bearing the CD44hi memory phenotipe display characteristics of activated cells in Gi stage of cell cycle. Cell Immunol, v.141, 1992, p.433-443.

155. Stutman O. Intrathymic and extrathymic T cell maturation. Immunol Rev, 1978, v.42, p. 138-184.

156. Troup G.M., Anderson R.E. Radiation-induced augmantation of mitogenic responsiveness in murine spleen cells. Fed. Proc., 1982, v.4, p.335.

157. Tuschl H., Kovac R., Wottawa A. T-lymphocyte subsets in occupationally exposed persons. Int JRadiatBiol., v.58, 1990, p.651-659.

158. Waring M.I. DNA modification and cancer, l /nn Rev Biochem, v.50, 1981, p. 159-192.

159. Williams J.L., Patchen M.L., Darden J.H., Jakson V.E., Effect of radiation on survival and recovery of T-lymphocyte subsets in C3H/HeN mice. Exp.Hematol., v.22, 1994, p.510-516.

160. Woodle E.S., Smith D M., Zhou N. Class IMNS mediates programmed cell death in human lymphoid cells. Transplantation,w.64, 1997, p. 140-146.

161. Wyllie A.H., Kerr J.F., Currie A.R. Cell death: The significance of apoptosis. Intern. Rev. Cytol., 1980, v.68, p.251-306.

162. Wyllie A H. Apoptosis (the Frank Rose Memorial lecture). Brit. J. Cancer., 1993, v.67, p.205-208.

163. Zeher M., Paloczi K., Szegedi G. Activation antigens in patients with Sjogren's syndrome. Haematologia (Budap), 1990, v.23, p. 193-197.

164. Zelenin A. V. Cytochemical investigation of chromatin propeties in cells with different functional activity. BiolZbl, v.96, 1977, p.407-422.

165. Zimmer C., Wahner U. Nonintercalating DNA binding ligands: specificity of the interection and their use as tool in biophysical, biochemical and biological investigations of the genetic material. ProgBiophysMolec Biol, v.47, 1986, p.31-112.