Изучение фармакокинетики нового отечественного препарата содержащего клопидогрел тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат биологических наук Рувинов, Юлий Вячеславович

• Рувинов, Юлий Вячеславович
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Рувинов, Юлий Вячеславович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Тиклопидин и клопидогрел - тиенопиридины разных поколений.

1.2. Клопидогрел против ацетилсалициловой кислоты : исследование САРМЕ.

1.3. Фармакокинетика клопидогрела.

1.4. Оценка активности изофермента цитохрома.

1.5. Методы оценки активности СУРЗА4.

1.6. Взаимодействие клопидогрела и статинов на уровне СУРЗА4.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Препараты, средства измерений, вспомогательные устройства.

2.2. Реактивы и их приготовление.

2.3. Выбор добровольцев.

2.4. Проведение исследования.

2.5. Расчет фармакокинетических параметров.

2.6. Оценка фармакокинетики и клинической эффективности Зилта и Аториса.

2.7. Определение концентрации МЕОХ методом ВЭЖХ.

2.8. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Количественное определение клопидогрела в плазме крови.

3.2. Изучение фармакокинетики клопидогрела после однократного приема внутрь.

3.3. Количественное определение клопидогрел кислоты в плазме крови.

3.4. Изучение фармакокинетики клопидогрел кислоты после однократного приема внутрь.

3.5. Сравнительное фармакокинетическое исследование биоэквивалентности препаратов Клорель и Плавике.

3.6. Взаимодействие клопидогрела и аторвастатина у больных ИБС.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение фармакокинетики нового отечественного препарата содержащего клопидогрел»

Актуальность темы. Профилактика и лечение тромбозов является одной из важнейших задач повседневной кардиологической и неврологической практики. Актуальность этой проблемы обусловлена высокой частотой и тяжелыми последствиями тромбозов и тромбоэболий[13Д9]. Клопидогрел (КЛ) является препаратом, ингибирующим агрегацию тромбоцитов, вызванную аденозин дифосфатом (АДФ). Селективно и необратимо блокирует связывание АДФ с рецепторами тромбоцитов, подавляет их активацию, уменьшает количество функционирующих АДФ-рецепторов (без повреждения), препятствует сорбции фибриногена и ингибирует агрегацию тромбоцитов. С непрерывным применением терапевтических доз клопидогрела (75 мг/мл), с первого дня терапии, проявляется значительная ингибиция тромбоцитной агрегации, потом антиагрегационный эффект постепенно усиливается и достигает максимума на 3-й и 7-й день терапии. После непрерывного применения терапевтических доз, средний уровень ингибирования между 40 и 60%. После прекращения терапии, эффект клопидогрела на тромбоцитарную агрегацию и время кровотечения теряется на 5-й день [77].

Наряду с тиклопедином (другой препарат с аналогичным механизмом действия) клопидогрел широко применяется для профилактики тромбов, однако по сравнению с тиклопедином клопидогрел более безопасен. Оба эти препарата по крайней мере столь же эффективны для профилактики тромбоза, как и аспирин или превосходят последний по способности снижать степень комбинированного риска инфаркта миокарда, сосудистой смерти и инсульта среди пациентов с постинфарктным кардиосклерозом, инсультом и периферическим кардиосклерозом [55,95]. При этом клопидогрел оказался экономически выгоднее аспирина у пациентов, недавно перенесших ишемический инсульт, инфаркт миокарда и больных эссенциальной артериальной гипертензией [51].

Повышение эффективности и безопасности лекарственной терапии возможно благодаря подробному изучению фармакокинетических и фармакодинамических показателей. Проблемы фармакокинетики: анализ скорости и интенсивности процессов всасывания, распределния по органам и тканям, направленности и количественной оценки процессов биотрансформации, путей и скорости выведения — в последние годы приобретают решающее значение при создании, испытании и разработке оптимального режима фармакотерапии лекарственными препаратами.

По литературным данным основное внимание уделено фармакокинетике и стереохимии клопидогрела, нет данных по сопоставлению фармакокинетики различных препаратов клопидогрела. Очень мало данных по определению метаболита клопидогрела Нет данных по относительной биодоступности различных препаратов клопидогрела в плазме крови.

Создание новых генерических препаратов предусматривает проведение исследований по биоэквивалентности, что предусматривает разработку методики количественного определения изучаемого соединения в плазме крови. Используемые в настоящее время методики определения клопидогрела требуют больших затрат времени и поэтому неудобны для проведения рутинных анализов.

Цель исследования:

Основной целью исследования явилось изучение фармакокинетики клопидогрела и его метаболита (клопидогрел кислоты), проведение сравнительной фармакокинетической характеристики и относительной биодоступности двух препаратов клопидогрела.

Задачи исследования. 1. Разработать методику количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови методом ВЭЖХ методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором.

2. Определить динамику концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови добровольцев после однократного перорального приема препарата Клорель.

3. Рассчитать фармакокинетические параметры модельно-независимым методом статистических моментов.

4. Изучить относительную биодоступность и биоэквивалентность препаратов Клорель и Плавике.

5. Провести статистическую обработку полученных результатов.

Научная новизна. Впервые изучена относительная биодоступность нового отечественного препарата, содержащего клопидогрел.

Определена динамика концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови после перорального однократного приема препарата, содержащего клопидогрел.

Разработана доступная методика определения метаболита клопидогрела в плазме крови.

Практическая значимость. Разработаны методики, позволяющие определять с высокой чувствительностью и точностью концентрации клопидогрела и клопидогрел кислоты в биологических жидкостях, обеспечивающие повышение контроля качества лекарственных средств. Разработанные методики могут быть использованы при проведении фармацевтического анализа, для контроля качества препарата в процессе производства и хранения.

Определены значения основных фармакокинетических параметров после однократного приема таблеток Клорель и Плавике.

Заключение о биоэквивалентности таблеток Клорель, производитель ЗАО «ФП Оболенское» (Россия) и Плавике, производитель «Санофи-Винтроп» (Франция) позволило выпустить на отечественный фармацевтический рынок новый российский препарат, соответствующий мировым стандартам лечения и обладающий более низкой стоимостью, что делает его доступным для широкого использования населением.

Внедрение в практику. Результаты исследования используются в аналитической и клинической практике в Филиале «Клиническая фармакология» НЦ Биомедицинских технологий РАМН и Институте клинической фармакологии ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоцразвития РФ.

На основании исследований по биоэквивалентности препарат Клорель был рекомендован к медицинскому применению ФГБУ НЦСЭМП Минздравсоцразвития РФ.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Методики количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.

2. Динамика концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови после однократного приема препарата Клорель.

3. Результаты фармакокинетических исследований.

4. Относительная биодоступность двух лекарственных препаратов Клорель и Плавике.

Апробация работы. Диссертационная работа апробирована на совместной научно-практической конференции кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней ПМГМУ им. И.М. Сеченова и Института клинической фармакологии Федерального государственного учреждения «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздравнадзора (Москва, 2010 г.).

Публикации. По результатам диссертационного исследования опубликовано 5 работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рецензируемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описание материалов и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований, заключения и выводов. В работе представлены 35 таблиц и 12 рисунков. Библиографический указатель включает 24 отечественных и 135 зарубежных публикаций.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Рувинов, Юлий Вячеславович

выводы

1. Разработаны чувствительные, воспроизводимые методики количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови добровольцев с помощью ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором: подобраны оптимальные условия экстракции, хроматографического разделения и детектирования . Предел обнаружения в плазме крови для клопидогрела составляет пг/мл, а клопидогрел кислоты мкг/мл.

2. Изучена фармакокинетика и определены основные фармакокинетические параметры клопидогрела после однократного перорального приема таблеток Клорель. Фармакокинетика клопидогрела характеризуется низким содержанием препарата в крови. Показано, что клопидогрел быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте и также быстро выводится из организма.

3. Оценены основные фармакокинетические параметры (С max, Tmax, AUC о-оо, Т1/2, MRT, V) клопидогрел кислоты (метаболита клопидогрела). Метаболит клопидогрела быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте.

4. Проведены анализ и оценка сравнительной биодоступности клопидогрел кислоты при пероральном приеме таблеток Клорель (Россия) и Плавике (Франция). Установлено, что фармакокинетические показатели, характеризующие всасывание, распределение и элиминацию после приема препаратов одинаковы. Исследованные лекарственные препараты биоэквивалентны.

5. Установлено, что клопидогрел без сочетанного применения с аторвастатином практически не оказывал никакого влияния на состояние липидного спектра крови у больных с ГЛП II А и II Б типов. При проведении MEGX теста у больных на фоне терапии клопидогрелем, концентрация MEGX колеблется в пределах нормы, что указывает на достаточное количество активного метаболита и высокой его эффективности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Как показал анализ литературных данных, наряду с тиклопидином( другой препарат с аналогичным механизмом действия) клопидогрел широко применяется для профилактики тромбозов, однако по ставнению с тиклопидином КЛ более безопасен. Применение тиклопидина ограничивается более частыми побочными эффектами и его более высокой стоимостью по сравнению с апирином. КЛ оказался экономически выгоднее аспирина у пациентов, недавно перенесших ишемический инсульт, инфаркт миокарда и больных эксенциальной артериальной гипертензией.

В настоящее время в практике количественного определения содержания лекарственных веществ в биологических субстанциях все большее применение находят так называемые «гибридные» методы. Под этим подразумевается сочетание масс-спектрометрии с хроматографическими методами разделения. По той же причине, что и ВЭЖХ все больше вытесняет газовую хроматографию из фармацевтического анализа, так и в «гибридных» подходах сочетание с масс-спектрометрией (ЬС-МБ) становится преобладающим методом анализа биологических образцов. Дело в том, что LC-MS позволяет анализировать нелетучие и термонестабильные вещества.

В клинической фармакокинетике главным преимуществом LC-MS по сравнению с традиционными методами жидкостной и газовой хроматографии является более высокая чувствительность количественного определения концентрации лекарственных веществ. Таким образом масс-спектрометрия является мощным орудием идентификации и количественного определения органических соединений.

Разработанные в ходе решения поставленных задач оригинальные аналитические методики с применением ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием позволили с высокой точностью определить концентрации клопидогрела и его неактивного метаболита на всем интервале наблюдения.

После приема внутрь KJI быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте, через 3 часа в крови практически не определяется.

У 18 добровольцев исследована относительная биодоступность препарата Клорель (действующее вещество — клопидогрел) производства ЗАО «ФП Оболенское» (Россия) после перорального приема 2 таблеток, содержащих суммарно 150 мг клопидогрела. В качестве препарата сравнения использовали аналогичный препарат Плавике, таблетки по 75 мг, производства компании «Санофи-Винтроп» (Франция). Оценка биоэквивалентности проводилась путем определения концентрации неактивного метаболита клопидогрела - производного карбоксиловой кислоты, в плазме крови добровольцев после однократного приема сравниваемых препаратов (доза 150 мг), которую определяли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Установлено, что полнота и скорость всасывания клопидогрела из препаратов производства ЗАО «ФП Оболенское» и фирмы «Санофи-Винтроп» практически одинаковы. Сделан вывод: сравниваемые лекарственные препараты биоэквивалентны.

При проведении исследований по изучению сравнительной фармакокинетики и биоэквивалентности препаратов клопидогрела ни один доброволец не выбыл из исследования. Анализ лабораторных и инструментальных исследований добровольцев до и после приема таблеток клопидогрела показал, что параметры были в пределах нормы. Таким образом, не было обнаружено проявлений нежелательного действия препаратов на состояние добровольцев.

Таким образом, изменением активности ферментов биотрансформации, и, в частности СУРЗА4, можно объяснить многие проблемы, связанные с «не адекватным» фармакологическим ответом при применении того или иного ЛС: развитие нежелательных лекарственных реакций или недостаточная эффективность ЛС. При этом, оценка активности СУРЗА4, может использоваться не только в клинических исследованиях для решения тех или иных клинико-фармакологических проблем, но и в реальной клинической практике для персонализированного подхода к выбору ЛС и его дозы в зависимости от активности СУРЗА4. И в настоящее время разработаны тесты для оценки активности СУРЗА4, позволяющие использовать для персонализации фармакотерапии. Ожидается, что в будущем и для оценки других ферментов биотрансформации появятся удобные и безопасные методы, которые скорее всего будут использоваться в комплексе как один из элементов персонализированной медицины.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Рувинов, Юлий Вячеславович, 2011 год

1.Аверков O.A. Тиклопидин и клопидогрел — есть ли поводы для противостояния? //Клин, фармак. и терап. — 2007. — Т. 33, № !. - С.33-40.

2. Агафонов A.A., Пиотровский В.К. Программа M-IND оценки системных параметров фармакокинетики модельно-независимым методом статистических моментов//Хим-фарм.журнал — 1991. №10. — С. 16-19.

3. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены «предрасположенности». Введение в предиктивную медицину .//СПб.: Интермедика.- 200.-272 с.

4. Безверхая И.С. Фармакокинетика при старении. — Киев: Здоровье, 1991. -168с.

5. Дупляков Д.В. Клопидогрел и статины, или еще раз об опасности прямого переноса результатов экспериментальных исследований в клиническую практику //Кардиология. 2008. - Т.48, № 2. - С.65-66.

6. Жердев В.П., Литвин A.A. Роль и организация фармакокинетических исследований // Клиническая фармакокинетика. — 2005. №2(3). — С. 1-3.

7. Кашаева О.В. Состояние метаболической функции печени и оптимизация фармакотерапии у больных хронической сердечной недостаточностью.//Автореферат. дис.канд.мед.наук. — М. — 2002. — 19 с.

8. Кукес В.Г. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты.//М.:Издательство «Рефарм» — 2004. -186 с.

9. Кукес В.Г., Сычев Д.А., Ших Е.В. Изучение биотрансформации лекарственных средств путь к повышению эффективности и безопасности фармакотерапии.//Врач. - 2007. - №1. - С. 6-8.

10. Ю.Мирошниченко И.И. Основы фармакокинетики. М.: Изд.д. «Геотар-мед», 2002. — 186с.

11. П.Мирошниченко И.И., Тюляев И.И., Зуев А.П. Биодоступность лекарственных средств — М.: «Грамотей», 2003.-101с.

12. Моисеев C.B. Перспективы антитромбоцитарной терапии //Клиническая фармакология и терапия. 2003. - Т.12, №4ю — С.18-22.

13. З.Парфенов В. А. Лечение и профилактика ишемического инсульта//Соп8Шиш Medicum. 2002 г. Т. 4, №2.

14. Преображенский Д.С., Сидоренко Б.А., Батыралиев Т.А. Тиенопиридины в лечении и профилактике сердечно-сосудистых заболеваний. Часть II. Клиническая фармакология клопидогрела //Кардиология. 2009. - Т.49, №10. - С. 88-96.

15. Применение MEGX-теста для оценки активности изофермента цитохрома Р-450 ЗФ4: Методические рекомендации / В.Г.Кукес, Г.В.Раменская, А.А.Игонин и др. М.: ООО КПСФ «Спецстройсервис-92», 2004. - 22с.

16. Проведение качественных исследований биоэквивалентности лекарственных средств.// Метод.указания. 2004.

17. Раменская Г.В. Хроматографическое определение лекарственных средств и их метаболитов для фенотипирования изоферментов цитохрома Р-450.//Химико-фармацевтический журнал: научно-технический и производственный журнал. 2005. — Том 39,№ 2. — С. 53-56.

18. Раменская Г.В., Светый Л.И., Кулинченко A.A. Влияние флуконазола на концентрацию блокаторов медленных кальциевых каналов в плазме крови.// Клиническая фармакология и терапия. 2002. - №5. - С. 54-56.

19. Руксин В.В. Тромбозы в кардиологической практике. СПб.: Невский диалект, М.: Бином, 1998. - 126с.

20. Серебряный В.Л., Малинин А.И., Макаров Л.М. Резистентность к клопидогрелу: миф или реальность? //Кардиология — 2007. Т.47, № 10. - С. 69-72.

21. Соколов Ф.В. Правила исследования биоэквивалентности лекарств.// Клиническая фармакокинетика. 2004. - №1. - С. 5-13.

22. Страчунский JI.C., Фирсов А.А., Белоусов Ю.Б. и др. Правила проведения биоэквивалентности лекарственных средств. //М. 1995. ч.2. - 16с.

23. Сычев Д.А., Раменская Г.В., Игнатьев И.В., Кукес В.Г. Клиническая фармакогенетика./Под редакцией Кукеса В.Г., Бочкова Н.П.//М.:Гэотар-медиа. 2007. - 248с.

24. Abbracchio М.Р., Burnstock G. Purinoreceptors: are there families of P2X and P2Y purinoreceptors? // Pharmacol Ther. 1994.- №64-P.445-475.

25. Aspinal M.G., Hamermesh R.G. Realizing the promise of personalized medicine.//Harv Bus Rev. 2007. - 85(10). P. 108-117, 165.

26. Ayalasomayajula S.P., Vaidyanathan S., Kemp C. et all.Effects of clopidogrel on the steady state pharmacokinetics of fluvastatin//Journal of Clinical Pharmacology. 2007.-47. - P. 613-619.

27. Bahrami G., Mohammadi B. and Sisakhtnezhad S. High performance liquid chromatographic determination of inactive carboxylic acid metabolite of clopidogrel in human serum: Application to a bioequivalence study.//J.Chromatogr.-2008.-V.864.-P. 168-172.

28. Beitelshees A.L., McLead H.L. Clopidogrel pharmacokinetics, promising steps toward patientt care? //Arterioscler Thromb. 2006. - V. 26. - P. 1681-1683.

29. Belal F., El-Brashy A., Eid M. and Nasr J.J. Stability-Indicating Micellar Liquid Chromatographic Method for the Determination of Clopidogrel/

30. Application to Tablets and Content Uniformity Testing.//J.of Liquid Chromatog. — 2009. V.32, №20. - P.2993-3008.

31. Benedetti M.S, Whomsley R., Canning M. Drug metabolism in the paediatric population and in the elderly.//Drug Discovery Today. 2007. -12(15-16).- P.599-610.

32. Bennett C., Weinberg P., Rozenberg-Ben-Dror K. et al . Thrombotic thrombocytopenic purpura associated with ticlopidine: a review of 60 cases.// Ann Intern Med. 1998. - V. 128 - P. 541 -544.

33. Beom S.S. and Sun D.Y. Determination of Clopidogrel in human plasma by liguid chromatography/tandem mass spectrometry: application to a clinical pharmacokinetic study // Biomed. Chromatogr.- 2007.-V.21.- P. 883-889.

34. Bhatt D., Marso S., Hirsch A. et al. Amplified benefit of Clopidogrel versus aspirin in patients with diabetes mellitus.// Am J Cardiol. 2002. - V. 90 - P. 625628.

35. Boneu B., Desteile G. Platelet anti-aggregating activity and tolerance of Clopidogrel in atherosclerotic patients.// Thromb Haemost. 1996. - V.76 - P. 939-943.

36. Brandt J.T., Close S.L., Itturia S.J. et all. Common polymorphisms of CYP2C19 and CYP2C9 affect the pharmacokinetic and pharmacodynamic response to Clopidogrel not prasugrel//Journal of Thrombosis and Hemostasis 2007. 5. - P. 2429-2436.

37. Brandt J.T., Payne C.D., Wiviott S.D. et al. A comparison of prasugrel and Clopidogrel loading doses on platelet function: magnitude of platelet inhibition isrelated to active metabolite formation.//Amer.Heart J. 2007. - V.153, №l. -P.66-69.

38. Braunwald E., Antman E.M., Beasley J.W. et al. ACC/AHA Guideline Update for the management of patients with unstable angina and non-ST elevation myocardial infraction-2002. Summary article.// Circulation. 2002. — V.106, №14. - 1893 p.

39. Brophy J.M., Babapulle M.N., Costa V., Rinfret S. A pharmacoepidemiology study of the interaction between atorvastatin and clopidogrel after percutaneous coronary intervention.//Am Heart J. 2006. - V.152, №2. - P. 263-269.

40. Caplain H., Donat F., Gaud C., Necciari J. Pharmacokinetics of clopidogrel.// Semin Thromb Hemost.- 1999.- V.25 suppl 2 P. 25-28.

41. Carlo Patrono, Barry Coller, James E. Dalen et. al. Platelet-Active Drugs. The relationships Among Dose, Effectiveness, and Side Effects .//Chest. 2001. -V.119.-P. 39S-63S.

42. Cattaneo M., Akkawat B., Lecehi A. et al. Tichlopidine selectively inhibits human platelet responses to adenosine diphosphate//Thromb. Haemost 1991.-V.66.-P.694-699.

43. Chen K.W., Chow S.C., Li G/ A note on sample size determination for studies with high-order crossover designs.//J.Pharmacokinet.Biofarm. 1997. -Vol.25,No.6.-P.753-765.

44. Chen M.L., Lee S.C., Ng M.J. et al Pharmacjkinetic analysis of bioeguivalence trials: implications for sex-related issues in clinical pharmacology and biopharmaceutics.//Clin.Pharmacol.Ther. 2000. - Vol.68, No5.- P.510-521.

45. Chirhard M., Lalan Keraly, Delautier D. et al. Reduced sensitivity of human platelets to PAF-acether following tichlopidine intake.//Haemostasis 1989.-V.19-P.213-218.

46. Clarke T.A., Waskell L.A. Clopidogrel is metabolized by human cytochrome P450 3A and inhibited by atorvastatin. Drug Metab. Dispos. 2003. - V.31, №1.1091. P. 53-59.

47. Coukell A.J., Markham A. Clopidogrel.// Drugs. 1997. - V.54 -P. 745-750.

48. Daniel J., Dangelmaier C., Jin J. at al. Molecular basis for ADP-induced platelet activation: evidence for three distinct ADP receptors on human platelets.// J Biol Chem. 1998. - 273 - P.2024-2029.

49. Darius H., Rupprecht H.J., Kreb P. et al. Accelerated inhibition of platelet activity by Clopidogrel loading dose in patients following coronory stent implantation//Eur. Heart J.- 1999. V.20. - P.252-254.

50. Delea T.E., Edelsburg J.S., Richardson E. et al. Cost-effectivness of Clopidogrel in patients with ishemic stroke, myocardial infraction or peripheal arterial disease.// Value in Health. vol. 6 no. 3 may/june 2003 - p. 184-185.

51. Denninger M.H., Necciari J., Serre-Lacroix E., Sissmann J. Clopidogrel antiplatelet activity is independent of age and presence of atherosclerosis.// Semin Thromb Haemost. 1999.- 25, Suppl 2- P.41-50.

52. Desager J.P. Clinical pharmacokinetics of ticlopidine.// Clin Pharmacokinet. -1994.-26-P. 347-355.

53. Defreyn G., Gachet C., Savi P. et al. Ticlopidine abd Clopidogrel (SR 25990C) selectively neutralize ADP inhibition of PGE1-activated platelet adenylate cyclase in rats and rabbits.// Thromb Haemost. 1991. - V.765. - P.186-190.

54. Diener H.C, Ringleb P.A., and Savi P. Clopidogrel for the secondary prevention of stroke//Expert Opinion n Pharmacotherapy . 2005. - 6. — P. 755-764.

55. Farid N.A., Payne C.D., Small D.S. et al. Cytochrome P450 3A inhibition by ketaconazole affects prasugrel and Clopidogrel pharmacokinetics andpharmacodynamics differently .//Clin Pharmacol Ther. 2007. - V.81, №5. - P. 735-741.

56. Farid N.A., Kurihara A., Wrighton S.A. Metabolism and Disposition of the Thienopyridine Antiplatelet Drugs Ticlopidine, Clopidogrel and Prasugrel in Humans.//! of Clin.Pharmac. 2010. - V.50, No2. - P. 126-142

57. Fontana P., Dupont A., Gandrille S. et al. Adenosine diphosphate-induced platelet aggregation is associated with P2Y12 gene sequence variations in healthy subjects.// Circulation. 2003. - 108 - P.989-995.

58. Foster C.J., Prosser D.M., Agans J.M. et al. Molecular indentification and characterization of the platelet ADP receptor targeted by thienoptridine antithrombotic drugs.// J Clin Invest. 2001. - 107 - P.1591-1598.

59. Fox K.A. and Chelliah R. Clopidogrel: an updated and comprehensive review//Expert Opinion Drug Metabolism and Toxicology. 2007. - 3. - P. 621631.

60. Frelinger A.L. and Michelson A.D. Clopidogrel: Linking Evaluation of Platelet Response Variability to Mechanism of Action.// J. Am. Coll. Cardiol. -August 16, 2005.- 46(4) P. 646-647.

61. Galteau M.M., Shamsa F. Urinary 6-beta-hydroxycortisol: a validated test for evaluating drug induction or drug inhibition mediated through CYP3A in humans and in animals.//Eur J Clin Pharmacol. 2003. - 59(10). - P. 713-733.

62. Gawaz M., Ruf A., Neumann F.J. et al. Effect of glycoprotein Ilb-IIIa receptor antagonism on platelet membrane glycoproteins after coronary stent placement.// Thromb Haemost. 1998. - 80 - P.994-1001.

63. Gerbel P.A., Bliden K.P., Hiatt B.L. et al. Clopidogrel for coronary stentingAresponse variability, dgur resistance and the effect of pretreatment platelet reactivity.// Circulation. 2003.- 107 - P.2908-2913.

64. Gill S., Majumdar S., Brown N.E., Armstrong P.W. Ticlopidine -associated pancytopenia: implications of an acetylsalicylic acid alternative.// Can J Cardiol. -1997. 13 - P.909-913.

65. Girolamo D., Czernuk P., Bertuola R., Keller G. Bioequivalence of Two Tablet Formulations of Clopidogrel in Healthy Argentinian volunteers: A Single-Dose, Randomized-Sequence, Open-Label Crossover Study.//Clin.Therap. -2010. — V.32, No 1. -P.161-170.

66. Gulec S., Ozdol C., Rahimov U.et al. Myonecrosis after elective percutaneous coronary intervention: effect of clopidogrel-stain interaction.// J Invasive Cardiol. -2005.-17(11).-P. 589-593.

67. Han Y.L., Li C.Y., Li Y. et al/ The antiplatelet effect of Clopidogrel is not attenuated by statin treatment in patients with acute coronary syndromes undergone coronary stenting.//Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2007. -35(9).- P. 788-792.

68. Hass W.K., Easton J.D., Adams H.P. et al/ A randomized trial comparing ticlopidine hydrochloride with aspirin for the prevention of stroke in hight-risk patients: Ticlopidine Aspirin Stroke Study Group.// N Engl J Med. 1989. - 3211121. P. 501-507.

69. Hechler B., Leon C., Vial C.et al. The P2Y1 receptor is necessary for adenosine 5 '-diphosphate-induced platelet aggregation.//Blood-1998.-92-P. 152-159/

70. Heptinstall S., May J.A., Glenn J.R. et al. Effects of tichlopidine administered to healthy volunteers on platelet function in whole blood.//Thromb Haemost 1995.-V.74.-P.1310-1315.

71. Hertbert J., Dol F., Bernat A. et al. The antiaggregating and antithrombotic activity of clopidogrel is potentiated by aspirine in several experimental odels in the rabbit.// Thromb Haemost. 1998. - 80 - P. 512-518.

72. Herbert J.M., Savi J.P. Biochemical and pharmacological properties of clopidogrel: a new ADP receptor antagonist // Eur. Heart J.-1999-№1 (Suppl A).-A31-A-40.

73. Jin J., Daniel J., Kunapuli S. Molecular basis for ADP induced platelet aggregation: the P2Y1 receptor mediates ADP-induced intracellular calcium mobilization and shape change in platelets.//J Biol Chem. 1998. - V.273-P.2030-2034.

74. Jin J., Kunapuli S.P. Coactivation of two different G protein-coupled receptors is essential for ADP-induced platelet aggregation.// Proc Natl Acad Sci USA. -1998. V.95 - P. 8070-8074.

75. Kachhadia P.K., Doshi A.S., Joshi H.S. Validated Column High-Performance Liguid Chromatographic Method for Determination of Aspirin and Clopidigrel in Combined Tablets in the Presence of Degradation Product Formed Under ICH

76. Recommended Stress Conditions.//! of AOAC International. 2009. - V.92, №l. -P.152-157.

77. Kazui M., Ishizuka T., Yamamura A. et al. Mechanis of production of pharmacologically active metabolites of CS-747, a new pro-drug ADP-receptor antagonist.// XVIIIth Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis.- 2001.- P.1916.

78. Kolwankar D., Vuppalanchi R., Ethell B. et al. Association between nonalcoholic hepatic steatosis and hepatic cytochrome P-450 3A activity .//Clin Gastroenterol Hepatol. 2007. - V.5,N°3. - P. 388-393

79. Ksycinska H., Rudski P., Bukowska-Kiliszek M. Determination of Clopidogrel metabolite (SR26334) in human plasms by LC-MS.// J Pharm Biomed Anal. -2006 . V.41, №2. - P. 533-9. .

80. Lagorce P., Perez Y., Ortiz J.et al. Assay method for the carboxylic acid metabolite of Clopidogrel in human plasma by gas hromatography-mass spectrometry.// J Chromatogr B Biomed Sei Appl. 1998. - V.720, № 1-2. - P. 107-117.

81. Lainesse A., Ozalp Y., Wong H. and Aplan R.S. Bioequivalence study of Clopidogrel bisulfate film-coated tablets//Arzneimittlforschung. — 2004. — 54. — P. 618-624.

82. Lau W.C., Waskell L.A., Watkins P.B. et al. Atorvastatin reduces the ability of Clopidogrel to inhibit platelet aggregationA a new drug interaction. // Circulation. -2003. -V.107 — P.32-37.

83. Lau W.C., Gurbek P.A., Watkins P.B. et all. Contribution of hepatic cytochrome P450 3A4 metabolic activity to the phenomenon of Clopidogrel resistance.//Circulation. 2004. - 109, №2. - P. 166-171.

84. Lau W.C. and Gurbek P.A. Antiplatele drag resistance and drug-drug interactions: role of cytochrome P450 3A4//Pharmaceutical Research. — 2006. — 23.-P. 2691-2708/

85. Leon C., Hechler B., Vial C., Leray C., Cazenave J.P., Gachet C. The P2Y1 receptor is an ADP receptor antagonized by ATP and expressed in platelets and megakaryoblastic cells.//FEBS Lett. 1997. -V. 403 -P.26-30.

86. Lingpunsakul S., Kolwankar D., Pinto A., Gorski J.C., Hall S.D., Chalasani N. Activity of CYP2E1 and CYP3A enzymes in adults with moderate alcohol consumption: a comparison with nonalcoholics./ZHepatology. — 2005. — 41(5). P. 1144-1150.

87. Mach F., Senouf D., Fontana P. et al. Not all sMins- htterfere with Clopidogrel during antiplatelet therapy.//Eur.J.Clin. Invest. 2005. - V.35. - P. 476-481.

88. Mani H., Toennes S.W.,Linnemann B. et al. Determination of Clopidogrel main metabolite in plasma: a useful tool for monitoring therapy?//Therapeutic Drug Monitoring 2008. - V.30. - P.84-89.

89. Martin J. Quinn and Desmond J. Fitzgerald. Tclopidine and Clopidogrel// Circulation- 1999.-V. 100.-P.1667-1672.

90. McEwen J., Strauch G., Perles P.et al/ Clopidogrel bioavailability: absence of influence of food or antacids.// Semin Thromb Hemost.- 1999.- V.25 suppl 2 P. 47-50.

91. Meyers K.M, Holmsen H., Seachord C.L. Comparative study of platelet densegranule constituents. Am J Physiol. 1982.243: R454-R461.

92. Minno G., Cerbone A.M., Mattioli P.L. et al. Functionally thrombathenic state in normal platelets following the administration of ticlopidine//J. Clin. Ivest. 1965-V.75-P.328-338.

93. Mohan A., Hariharan M., Vikraman E. et al. Identification and characterization of a principal oxidation impurity in Clopidogrel drug substance and drug product.// J. of Pharmac. and Biomed. Anal. 2008. - V.47, №l. -P.183-189.

94. Moliterno D.J., Topol E.J. Meta-analysis of platelet GP Ilb/IIIa antagonist randomized clinical trials in ischeic heart disease: consistent, durable salutary effects.// Circulation. 1997. - 96 (Suppl I) - P. 1-475.

95. Moussa I., Oetgen M., Roubin G. et al. Effectiveness of Clopidogrel and Aspirin Versus Ticlopidine and Aspirin in Preventing Stent Thrombosis After Coronary Stent Implantation.// Circulation. 1999. - 99 - P. 2364-2366.

96. Muller I., Besta F., Schulz C. et al. Prevalence of Clopidogrel non-responders among patients with stable angina pectoris scheduled for elective coronary stent placement.// Thromb. Haemost. 2003. - V. 89 - P. 783-787.

97. Neubauer H., Gunesdogan B., Hanefeld C. et al. Lipophilic statins interfere with the inhibitory effects of Clopidogrel on platelet function a flow cytometry study .//Eur Heart J. 2003. - V.24, №19. - P.1744-1749.

98. Nguyen T.A., Diodati J.G. and Pharand C. Resistance to Clopidogrel: A rewiew of the evidence.// J. Am. Coll. Cardiol. 2005. - V.45, №8 - P. 11571164.

99. Nirogi R.V.S., Kandikere V.N. and Mudigonda K. Effect of Food on

100. Bioavailability of a Single Oral Dose of Clopidogrel in Healthy Male Subjects.//Arzneim.-Forsch./Drug Res. 2006. -V.56, Nol 1. - P.735-739.

101. Pal D., Mitra A.K. MDR and CYP3A4-mediated drug-drug interactions.//! Neuroimmune Pharmacol. 2006. - V.l, №3. - P. 323-339.

102. Pereillo J-M., Maftouh M., Andrieu A. et al. Structure and Steriochrmistry of the Active Metabolite of Clopidogrel.// Drug Metabolism and Deposition.- 2002. -Vol.30, Issue 11. P.1288-1295.

103. Piorkowsky M., Weikert U., Schwimmbeck P.L., Martus P., Schultheiss H.P., Rauch U. ADP induced platelet degranulation in healthy individuals is reduced by

104. Clopidogrel after pretreatment with atorvastatin.//Thromb Haemost. -2004. 92(3). -P. 614-620.

105. Rajput S.J., George R.K., Ruikar D.B. Chemometric Simultaneous Estimation of Clopidogrel Bisulphate and Aspirin from Combined Dosage Form.//Indian J. of Pharmaceut. Scinces. 2008. - V.70, No4. - P.450-454.

106. Ramesh Mullangi and Nuggehally R.Srinivas. Clopidogrel: reviw of bioanalytical methods, pharmacokinetics/pharmacodynamics, and update on recent trends in drug-drug interaction studies//Biomed.Chromatogr. 2009.-V.23.-P.26-41.

107. Robinson A., Hills J., Neal C. and Leary A.C. The validation of a bioanalytical method for the determination of Clopidogrel in human plasma.// J. of Chromatography B. 2007. - V.848.- P.344.

108. Rouini M.R., Ardakani Y.H., Foroumadi A et al. Sensitive Quantification of Carboxylic Acid Metabolite of Clopidogrel in Human Plasma by LS with UV Detection// Chromatographia. 2009. - V.70, № 5-6. - P.953-956.

109. Quinn M.J., Fitzgerald D.J. Ticlopidine and Clopidogrel. Circulation — 1999. -V.1000. -P.1667-1672.

110. Saber A.L., Elmosallamy M.A., Amin A.A. and Killa H.M.A. Liquid chromatographic and Potentiometrie method for determination of clopidogrel.//J. of Food and Druq Anal. 2008. - V.16, №2. - P.l 1-18.

111. Savcic M., Hauert J., Bachmann F. at al. Clopidogrel Dose Regimens: Kinetic Prifile of Pharmacodynamic Response in Healthy Subjects.//Semin Thromb Hemost-1999.-V.25.-P. 15-19.

112. Savi P., Beauverger P., Labouret C. et all. Role of P2Y1 purinoreceptor in ADP-induced platelet activation.//FEBS Lett. 1998. - 422 - P.291-295.

113. Savi P., Pereillo J.M., Uzabiaga F. et al Identification and biological activity of the active metabolite of Clopidogrel.// Thromb Haemostasis. 2000. -V.84 - P. 891-896.

114. Savi P., Labouret C., Delesque N. et all. (2001) P2Y12, a new platelet ADP receptor, target of Clopidogrel.//Biophys Biochem Res Commun.- 2001. V.283 -P.379-383.

115. Savi P. and Herbert J.M. Clopidogrel and ticlopedine: P2Y12 adenosine diphosphate-receptor antagonists for the prevention of atherothrombosis//Seminars in Thrombosis and Haemostasis. — 2005. — 31.—P. 174-183.

116. Saw J., Brennan D.M., Steinhubl S.R. et al/ CHARISMA Investigators. Lack of evidence of clopidogrel-statin interaction in the CHARISMA trial.//J Am Coll Cardiol. 2007. - 50(4). - P. 291-295.

117. Shah J., Fratis A., Ellis D.et al. Effect of food and antacid on absorstion of orally administered ticlopidine hydrochloride.// J Clin Pharmacol. 1990. — V.30 -P.733-736.

118. Shakeri-Nejad K., Stahlmann R. Drug interactions during therapy with three major groups of antimicrobial agents.//Expert Opin Pharmacother. 2006. - 7(6). -P. 639-651.

119. Shin B.S., Yoo S.D. Determination of Clopidogrel in human plasma by liquid chromatography/tandem mass spectrometry: application to a clinical pharmacokinetic study .//Biomedical Chromatography. 2007. - V.21. -P.883-889.

120. Singh S.S., Sharma K., Barot D. et al. Estimation of carboxylic acid metabolite of Clopidogrel in wistar rat plasma by HPLC and its application to pharmacokineticstudy.// J of Chromatogr. B. 2005. - V.821. - P.173.

121. Sippel J., Sfaip L.L., Schapoval E.S., Steppe M. New high-performance liquid chromatographic method for determination of clopidogrel in coated tablets //J. of AOAC International. 2008. - V.91, №l. - P.67-72.

122. Smith S.M., Judge H.M., Peters G., Storey R.F. Multiple antiplatelet effects of clopidogrel are not modulated by statin type in patients undergoing percutaneous coronary intervention.//Platelets. 2004. - 15(8). - P. 465-474.

123. Souri E., Jalalizadeh H., Kebriaee-Zadeh A. et al. Validated method for determination of carboxylic acid metabolite of clopidogrel in human plasma and its application to a pharmacokinetic study.//Biomed. Chromatogr. 2006. - V.20. -P.1309-1314.

124. Sugidachi A., Asai F., Ogawa T.et al The in vivo pharmacological profile of CS-747, a novel antiplatelet agent platelet ADP receptor antagonist properties.// B J Pharmacol. 2000,- 129 - P. 1439-1446.

125. Sugidachi A., Asai F., Yoneda K. et al/ Antiplatelet action of R-99224, an active metabolite of a novel thienopyridine-type Gi-linked antagonist, CS-747.// B J Pharmacol. -2001.-132- P.47-54.

126. Sultana N., Arayne M.S., Nawas M., Ali K.A. Development and validation of liquid chromatographic method for the determination of clopidogrel from pharmaceutical dosage form.//J. of the Indian Chemical Society. 2009. — V.86, №4. - P.406-409.

127. Sun, B., Li J., Okahara K., Kambayashi J. P2X1 purinoreceptors in human platelets: molecular cloning and functional characterization after heterologous expression.// 1998.-V.273.-P.11544-11547.

128. Takahashi M., Pang H., Kawabata K. et al. Quantitative determination of Clopidogrel active metabolite in human plasma by LC-MS/MS.// J. of Pharmac. And Biomed. Anal. 2008. - V.48, №4. - P. 1219-1224.

129. Taubert D., Kastrati A.,Harlflnger S. et al. Pharmacokinetics of Clopidogrel after administration of a high loading dose.// Thrombosis and Haemostasis 2004. - V.92. -P.311-316.

130. Taubert D., von Beckerath N., Grimberg G. et all.Impact of P-glycoprotein on Clopidogrel absorption//Clinical Pharmacology and Therapeutics. — 2006. 80. — P.486-501.

131. Traub S.U., Johnson C.E. Comparison of methods of estimating creatinine clearance in children// Am.J.Hosp.Pharm.- 1980.-Vol.37.-P. 195-201.

132. Vocilkova L., Opatrilova R., Sramek V. Determination of Clopidogrel by Chromatography .//Current Phamaceutical Analysis 2009. - V.5, No4. - P.424-431.

133. Wada M., Nishiwaki J., Yamane T. et all. Interaction study of aspirin or Clopidogrel on pharmacokinetics of dopenezil hydrochloride in rats by HPLC-fluorescence detection/ZBiomedical Chromatography. 2007. - 21. - P. 616-620.

134. Wang T.H., Bhatt D.L.and Topol E.J. Aspirin and Clopidogrel resistance: an emerging clinical entity.// Eur. Heart. J. March 2, 2006. - 27 (6) - P. 647-654.

135. Wenaweser P., Windecker S., Billinger M. et al. Effect of atorvastatin and pravastatin on platelet inhibition by aspirin and Clopidogrel treatment in patients with coronary stent thrombosis.//Am J Cardiol. 2007. - 99(3). - P. 353-356.

136. Wildt S.N., Berns M.J., van der Anker J.N. 13C-erythromycin breath test as a noninvasive measure of CYP3A activity in newborn infants: a pilot study.//Ther-Drug Monit. 2007. - 29(2). - P. 225-230.

137. Yang X.L., Liu S.Q., Sun J. Et al. UPLC for the Determination of Clopidogrel in Dog Plasma by Tandem Quadrupole MS: Application to a Pharmacokinetic Study.//Chromatographia 2009. - V.70, № 1-2. - P.259-263.

138. Yim H.B., Lieu P.K., Choo P.W. Ticlopidine induced cholestatic jaundice.// Singapore Med J. 1997 . - 38 - P. 132-133.

139. Yousef A.M., Arafat T., Bulatova N.R. and Al-Zumyli R. Smoking behaviour modulates pharmacokinetics of orally administered clopidogrel//Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics. 2008. - 33. - P. 439-449.

140. Zhou S.F., Xue C.C., Yu X.Q., Wang G. Metabolic activation of herbal and dietary constituents and its clinical and toxicological implications: an update.//Curr Drug Metab. 2007. - 8(6). - P. 526-553.