Механизмы токсического действия бета-амилоидных пептидов на эритроциты и клетки мозга тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Соломадин, Илья Николаевич

• Соломадин, Илья Николаевич
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Соломадин, Илья Николаевич

1. Введение

2. Амилоидные пептиды

2.1.1. История открытия, амилоидозы, болезнь Альцгеймера

2.1.2. Состав и свойства бета-амилоидных пептидов

2.1.3. АРР: образование и возможная роль в организме

2.1.3.1. АРР: транскрипция и трансляция

2.1.3.2. Протеолитические превращения АРР

2.1.3.3. Строение и свойства у-секретазы

2.1.3.4. Свойства бета-амилоидных пептидов.

2.1.3.5. Механизмы токсического действия бета-амилоидных пептидов

2.2. Модели для изучения токсического действия Ар

3. Цели и задачи работы

4. Материалы и методы исследования

4.1. Реактивы

4.2. Животные

4.3. Приготовление препарата синтетического бета-амилоидного пептида, (А[3) фрагмент 25

4.4.Введение (Ар) фрагмента 25-35 посредством стереотаксических операций

4.5.Выделение различных отделов из мозга крыс

4.6.Получение митохондрий из различных отделов мозга крыс

4.7.Выделение и очистка эритроцитов

4.8.Лизис эритроцитов

4.9.Получение кислотных экстрактов из эритроцитов

4.10. Получение и очистка мембран эритроцитов

4.11. Исследование морфологии эритроцитов с помощью оптического ^ микроскопа

4.12. Определение активности ферментов

4.12.1. Лактатдегидрогеназа (КФ 1.1.1.27)(ЛДГ)

4.12.2. Каталаза(КФ 1.11.1.6)

4.12.3. Супероксиддисмутаза (СОД)(КФ 1.15.1.1)

4.12.4. Глутатионредуктаза (КФ 1.6.4.2)

4.12.5. Глутатионпероксидаза (КФ 1.11.1.9)

4.12.6. Ш+/К+-АТФ аза. (КФ 3.6.3.9)

4.12.7. Глутаминсинтетаза (КФ 6.3.1.2)

4.12.8. Аспартатаминотрансфераза (КФ 2.6.1.1)

4.12.9. Фосфофруктокиназа (КФ 2.7.1.11)

4.12.10. Определение содержания окисленного и восстановленного глутатиона в эритроцитах

4.13. Определение содержания окисленного и восстановленного глутатиона в эритроцитах

4.14. Анализ асимметрии фосфолипидов мембран эритроцитов

4.15. Определение концентрации АТФ в эритроцитах 35 5. Результаты и обсуждение.

5.1. Влияние Ар 25-35 на активность ферментов-антиоксидантов в разных отделах мозга старых крыс in vivo

5.2. Глутаминсинтетаза, возможный вклад в токсическое действие Ар.

5.3. Токсическое действие Ар пептидов на эритроциты:

5.3.1. Изменения формы эритроцитов

5.3.2. Нарушение ионного баланса в эритроците, измерение активности Ка+/К+-АТФазы 5.3.3. Метаболизм эритроцита при действии Ар, ферменты гликолиза и пентозофосфатного пути

5.3.4. Антиоксидантная система эритроцитов при действии Ар, система глутатиона 61 5.3.4.1. Нарушение асимметрии фосфолипидов мембраны эритроцита при действии Ар