Методы выделения и модификации хитин-глюканового комплекса из биомассы Aspergillus Niger тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат технических наук Котляр, Мирослава Николаевна

• Котляр, Мирослава Николаевна
• кандидат технических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат технических наук Котляр, Мирослава Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Природные источники хитина и хитозана и методы их выделения

1.1.1 .Источники хитина и хитозана и их особенности

1.1.2. Методы выделения хитина и хитозана

1.1.2.1. Методы выделения хитина из ракообразных

1.1.2.2. Методы выделения хитина из грибов

1.1.2.3. Методы выделения хитозана из грибов 1В

1.1.2.4.Методы выделения хитин-глюканового и хитозан-глюканового комплексов из грибов

1.1.2.5. Методы выделения хитщщиз других источников

1.2.Строение и физико-химические свойства хитин-глюканового и хитозан-глюканового комплексов

1.3.Применение хитин-глюканового комплекса и его производных

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объект исследования

2.2. Питательная среда для культивирования Aspergillus niger

2.3. Культивирование гриба Aspergillus niger

2.4. Выделение хитин-глюканового комплекса из нативной биомассы гриба Aspergillus niger по четырехстадийной схеме

2.5. Получение хитин-глюканового комплекса из нативной биомассы гриба Aspergillus niger по трехстадийной схеме

2.6. Получение оксипропилового эфира хитозан-глюканового комплекса

2.7. Получение метилового эфира хитин-глюканового комплекса

2.8. Получение этилового эфира хитин-глюканового комплекса

2.9. Получение бензилового эфира хитин-глюканового комплекса

2.10. Получение уксуснокислого эфира хитин-глюканового комплекса

2.11. Методы анализа

2.11.1.Определение связанной уксусной кислоты в уксуснокислом эфире хитин-глюканового комплекса

2.11.2.Определение массовой доли D-глюкозамина хлоргидрата

2.11.3. Метод определения белков

2.11.4. Определение зольности

2.11.5. Определение азота

2.11.6. Определение D-глюкозамина

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Разработка метода выделения хитин-глюканового комплекса из нативной биомассы гриба Aspergillus niger

3.2. Химическая модификация хитин-глюканового комплекса

3.2.1. Оксипропилирование хитин-глюканового комплекса

3.2.2. Алкилирование хитин-глюканового комплекса

3.2.3. Ацетилирование хитин-глюканового комплекса

3.3. Применение хитин-глюканового комплекса и продуктов его химической модификации

3.4. Технология полупромышленного получения хитинглюканового комплекса

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Методы выделения и модификации хитин-глюканового комплекса из биомассы Aspergillus Niger»

Хитин - это природный аминополисахарид - структурный аналог целлюлозы, состоящий из остатков 2- ацетамидо-2-дезокси-0- глюкозы, связанных /?-(1-4)- гликозидными связями. По ряду физико-химических свойств он сходен с целлюлозой, однако наличие в молекуле ацетамидных групп придает ему особые, ценные в практическом отношении свойства. Хитин и его производные характеризуются биологической активностью, радиационной устойчивостью, способностью к волокно- и пленкообразованию, что обуславливает его широкое применение. По распространенности в живой природе хитин занимает второе место после целлюлозы. Он входит в состав панцирей ракообразных (крабов, креветок, криля), содержится в скелетах насекомых, клеточных стенках грибов и некоторых водорослей и т. п. Благодаря указанным свойствам эти биополимеры весьма перспективны для использования в медицине, фармацевтической и косметической промышленности, а также для дальнейшей химической модификации. Области их применения постоянно расширяются.

О большом интересе к проблемам изучения хитина и его производных, технологии их получения и использования свидетельствуют семь международных конференций по хитину и хитозану проведенных за последние 20 лет: США (1977), Япония (1982), Италия (1985), Норвегия (1988), США (1991), Польша (1994), Франция (1997). В 1995 и 1997г. в Бресте (Франция) состоялись две конференции Европейского хитинового общества, посвященные этим полимерам. В нашей стране состоялись три Всесоюзные конференции: во Владивостоке (1983), в Мурманске (1987), в Москве (1991) и две Всероссийские: в Москве (1995, 1999). Основным источником получения хитина до сих пор является панцирьсодержащее сырье, получаемое как отход от морепродуктов и пищевых производств, в которых используют представителей ракообразных. Мировой потенциал панщгрьсодержащих источников сейчас составляет 150 тысяч тонн хитина в год. Однако несмотря на то, что запасы ракообразных увеличиваются за счет искусственного разведения ракообразных, в последние годы все острее встает вопрос о новых источниках получения хитина. По литературным данным известно, что воспроизводимое количество хитина составляет до 100 биллионов тонн в год, причем основным продуцентом являются мицелиальные грибы, в которых он содержится в виде хитин-глюканового комплекса, а на долю, например арктического криля приходится всего 5.78.4 млн. тонн [1]. Поэтому важны исследования, посвященные разработке способов получения хитина из микроскопических грибов.

Актуальность темы обусловлена, с одной стороны, удивительными свойствами изучаемых объектов - хитин-глюканового комплекса и его производных, которые могут найти применение в различных областях современной промышленности, сельского хозяйства, медицине - как сорбенты для извлечения ионов тяжелых металлов и радионуклеидов из сточных и морских вод, как пленки и волокна для бумаги и тканей, в качестве препаратов для лечения заболеваний печени, желчного пузыря и поджелудочной железы, а также как биологически активные пищевые добавки. С другой стороны, резко возрос за последние годы интерес к проблемам более рационального использования возобновляемых природных ресурсов с экономической и экологической точек зрения.

Основным источником хитина и хитозана сейчас являются морские ракообразные - крабы, креветки, омары, раки и рачки. Но как, известно, панцири ракообразных достаточно дорогостоящее сырье, цена которого зависит от сезонности, связана с возрастом и биологическим видом краба. В последнее время особенно негативным фактором стала загрязненность панцирей тяжелыми металлами, ядохимикатами и другими ядовитыми отходами производства.

В то же время, одним из сырьевых источников хитина могут быть отходы микробиологической промышленности. Большой интерес представляет биомасса Aspergillus niger, остающаяся при производстве лимонной кислоты. В ряде европейских государств отходы биомассы при получении лимонной кислоты составляют около 50 тысяч тонн в год. В такой биомассе содержится 20-22% хитин-глюканового комплекса. В связи с этим актуальна разработка способов получения хитин-глюканового и хитозан-глюканового комплексов из биомассы Aspergillus niger, которая поможет частично решить ряд проблем, связанных с хитиновым сырьём. Использование данной биомассы как источника хитин-глюканового комплекса имеет ряд преимуществ по сравнению с использованием панцирей ракообразных:

•грибы обладают более высокой скоростью роста по сравнению с другими группами организмов, продуцирующих хитин;

•вследствие того, что производство грибов осуществляется биотехнологическими методами, оно не зависит от природных источников и характеризуется стабильностью показателей качества продукции;

•грибы - продуценты хитина являются либо сами отходом, либо для их получения используются субстраты, являющиеся отходами производства.

Цель работы. Целью настоящей работы является разработка метода выделения хитин-глюканового комплекса из нативной биомассы гриба Aspergillus niger и химическая модификация для получения производных, растворимых в различных растворителях.

Научная новизна. Разработан метод выделения хитин-глюканового комплекса из нативной биомассы мицелиального гриба Aspergillus niger -отхода производства лимонной кислоты, отличающийся от известных методов простотой и меньшим ассортиментом и концентрацией реагентов, используемых для выделения.

Впервые химической модификацией хитин-глюканового комплекса получены следующие производные: гидроксипропилоксипропиловый эфир хитозан-глюканового комплекса, метиловый, этиловый, бензиновый, уксуснокислый эфиры хитин-глюканового комплекса. Данные производные отличаются от исходного хитин-глюканового комплекса растворимостью в различных органических растворителях, кислотах, воде.

Практическая значимость. Предлагаемый метод выделения хитин-глюканового комплекса апробирован в цехе на отходах производства лимонной кислоты. Полученные производные, в отличие от хитин-глюканового комплекса, обладают растворимостью в различных средах, что расширяет сферу их применения. Показано, что хитин-глюкановый комплекс может быть применен в производстве фильтрующих материалов, для иммобилизации ферментов, а водорастворимые производные этого комплекса могут быть успешно использованы в сельском хозяйстве для борьбы с грибковыми заболеваниями растений.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на ежегодных отчетных конференциях КГТУ (1998-1999 г.), на IX Международной конференции молодых ученых «Синтез, исследование свойств, модификация и переработка высокомолекулярных соединений» (Казань, 1998), на второй Межрегиональной конференции «Пищевая промышленность - 2000» (Казань, 1998), на V-той международной конференции «Методы кибернетики химико-технологических процессов» (Казань, 1999), на 1-ой межрегиональной конференции молодых ученых «Пищевые технологии» (Казань, 1999), на конференции ISEB'99 «Biopolymers» (Германия, Лейпциг, 1999).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ.

Объём и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов и библиографического указателя, содержащего 157 источников. Работа изложена на 122 страницах машинописного текста, включает в себя 19 таблиц, 11 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Котляр, Мирослава Николаевна

выводы

1. Разработан метод выделения хитин-глюканового комплекса из нативной биомассы гриба Aspergillus niger - отхода производства лимонной кислоты, количество стадий которой может варьироваться в зависимости от области использования хитин-глюканового комплекса и требований, предъявляемых к его чистоте. Разработанный метод отличается от известных методов простотой и меньшим ассортиментом, количеством и концентрацией реагентов.

2. Показано, что для выделения очищенного хитин-глюканового комплекса требуется четырехстадийная обработка биомассы, включающая определенную последовательность обработок растворами гидроокиси натрия, соляной кислоты и перекиси водорода. Определены оптимальные концентрации реагентов, температура и продолжительность каждой стадии процесса.

3. В результате взаимодействия хитин-глюканового комплекса с галоидными алкилами, диметилсульфатом, уксусным ангидридом получены эфиры: метиловый, этиловый, уксуснокислый. Во всех этих эфирах эте-рификация прошла по гидроксильным группам при атомах С-3 и С-6 глюкопиранозного кольца. Этерификацией хитин-глюканового комплекса хлористым бензилом получен бензиловый эфир хитин-глюканового комплекса со степенью замещения 1.

4. Показано, что наличие прочно связанных с хитином глюканов не только не препятствует протеканию реакций по их гидроксильным группам, но и способствует более легкому по сравнению с хитином взаимодействию с реагентами.

5. Установлено, что в реакции хитин-глюканового комплекса с окисью пропилена наряду с оксипропилированием гидроксильных групп при атомах С-3 и С-6 глюкопиранозного кольца протекает деацетилирование хитин-глюканового комплекса и привитая димеризация окиси пропилена,

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Котляр, Мирослава Николаевна, 2001 год

1. Феофилова Е.П. Терешина В.М., Меморская A.C. Хитин мицеллиальных грибов: методы выделения, идентификации и физико-химические свойства //Микробиология. 1995,- Т. 64, № 1,- С. 27-31.

2. Дубинская A.M., Добротворский А.Е. Применение хитина и его производных в фармации. // Хим.-фарм. жур,- 1989, № 5,- С. 623-628.

3. Плиско Е.А., Нудьга Л.А., Данилов С.Н. Хитин и его химические превращения. // Успехи химии. 1977. - Т. 46, вып. 8. - С. 1470-1487.

4. Милушева Р.Ю., Рашидова С.Ш., Рубан И.Н., Воропаева H.JI. Исследование и применение хитина и его производных. Ташкент: Узбек, хим. ж. - 1991. - 23 с. - Деп. в ВИНИТИ 01.02.01 N 514-1391.

5. Тесленко А.Я., Попов В.Г. Хитин и его производные в биотехнологии. М. 1982,-Вып. 3,- 44с.

6. Абдулов А.И., Симонова Л.В., Фролова М.А., Пилитейко Е.А., Фоменко A.C. Перспективы применения хитозана в косметике. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Тез. докл. пятой конф. М.: Изд-во ВНИРО, 1999. С. 117-119.

7. Proceeding of the Fist International conference on chitin/chitosan. Eds Muzzarelli R.A.A., Pariser E.R. MIT Grant Report MITSG, 1978.

8. IV Всероссийская конференция «Производство и применение хитина и хитозана», Москва апр., 1995 // Журн. прикл. химии. 1995. - 68, № 6. - С. 1046-1047.

9. Herth W., Barthloth W.-J. // Ultrastr. Res. 1979.- V. 69, №1.-P.6-15.

10. Muzzarelli R.A.A. Chitin. Oxford: N.Y., Toronto: Sydney; Paris; Frankfurt: pergamon Press, 1977. 309 p.

11. Meisenheimer J. Die stickstoffhaltigen Bestandteile der Hefe. // Chem. Zbl. -1915, № 2.-S. 1259.

12. Schmidt M. Makrochemische Untersuchung über das Vorkommen von Chitin Mikroorganismen. //Arch. Microbiol. 1936. - V. 7, H. 3. - S. 241-260.

13. Петруненко Г.М., Калюжный М.Я. Хитин дрожжеподобных организмов рода Candida. // Прикл. биохимия и микробиология. 1971. - Т. 7. - С. 637642.

14. Кулаев И.С. Биохимия высокомолекулярных полифосфатов. М., 1975.225 с.

15. Вегап К, Holan Z., Boldrian J. The ctitin-glucan complex in Saccharomyces cerevisiae. // Folia Microbiol. 1972. - V. 17. - Р.322-326.

16. Феофилова Е.П. Клеточная стенка грибов. М.: Наука,- 1983,- 248 с.

17. Беккер З.Э. Физиология и биохимия грибов. М,: Изд-во Моск. Ун-та, 1988. - 230 с.

18. Gilson Е. Das Chitin und die Membranen der Pelzzellden. // Ber. Dt. Chem. Ges. 1895. - l.-S. 821-822.

19. Northcote D.H. The biology and chemistry of cell walls of higher plant, algae, fungi. N.Y.; L.; Acad. Press, 1953.

20. Katz D., Rosenberger R.F. Hyphal wall synthesis in Aspergillus nidulans: effects of protein synthesis inhibition and osmotic shock on chitin insertion and morphogenesis. //J. Bacteriol. 1971. -V. 108. - P. 184-190.

21. Беккер З.Э. Физиология грибов и их практическое использование. М.: Изд-во МГУ, 1963.268 с.

22. Костина А.М., Бабицкая В.Г. Хитин мицелиальных грибов рода Penicillum. // Прикладная биохимия и микробиология. 1978. - Т. 14, вып. 4. - С. 586-593.

23. Фостер Д. Химическая деятельность грибов. М.: Изд-во иностр. Лит., 1950, с. 603.

24. Gooday G.W. The control of differentiation in frut boodies of Coprinus cinereus. //Rep. TottoriMycol. Inst. (Japan). 1975. - 12. - P. 151-160.

25. Tschinyangu K.K., Hennebert G.L. Protein and chitin nitrogen contents and protein content in Pleurotus ostreatus var.colombinus. // Food Chem. 1996. -V. 57, № 2. - P. 223-227. РЖХим. 1988 1 P 1163.

26. Mendoza G. C., Leal J.A., Novaes-Lediem M. Studies of the spore walls of Agarucus bisporus and Agaricus campestris. // Can. J. Microbiol. 1979. - V. 25, № 1.- P. 32-39. РЖБиологическая химия 1979 15 X 81.

27. Blumental H.J., Roseman S. Quantitative estimation of chitin in fungi. // J, Bacteriol. 1957. - V. 74. - P. 222-224.

28. Muzzarelli R.A.A, in The Polysaccharides, Vol. 3 (G.O.Aspinall, ed.), Academic Press, Orlando, 1985, P. 417-450.

29. Berkeley R.C.W. Chitin, chitosan and their degradative enzymes. In: Microbial polysaccharides and polysaccharases. L. ets.: Acad. Press, 1979, p. 205-236.

30. Stagg C.M., Feather M.S. The characterization of a chitinassociated D-glucan from the cells of Aspergillus niger. // Biochim. et biophys. acta. 1973. V. -320, №1,- P. 64-72.

31. Ghosh B.K. Introduction to ultrastructure of fungi. In: CRC Handbook of Microbiology/Ed. H.A.I. Laskin, H.A. Lechevalier. 2nd ed. V. 2,- 1978. - P. 1114, Cleveland, Ohio.

32. Siestma I.H., Wessel J.G.H. Evidence for covalent likages between chitin and p -glucan in fungal wall. 11 J. Gen. Microboil.- 1979,- V. 114,- P. 99-108.

33. Pringsheim N. Über Cellulinköraer, eine Modification der Cellulose in Körnerfom. //Ber. Dt. Bot. Ges. 1883, № 1. - S. 286-308.

34. Lee H.Y., Aronson J.M. Composition of cellulin, the unique chitin glucan granules of the fungus Apodachlya sp. // Arch. Microbiol. - 1975. - V. 102. - P. 203-208.

35. Michalenko G.O, Hohl H.R., Dora Rast. Chemistry and architecture of the mycelial wall of Agaricus bisporus. // J. Gen. Microb. 1976. - V. 92, № 2,- P. 251-262.

36. Wessels J.G.H., Kreger D.R., Marchant R. et. al. Chemical and morphlogical characterization of the hyphai wall surface of the basidiomycete Schizophyllum commune. //Biochim. etbiophys. acta. 1972. - V. 273. - P. 346-358.

37. Kollar R., Petrakova E., Arhwell G. et al. Architecture of the yeast cell wall. The linkage between chitin and ß (l-3)-glucan. // J. Biol. Chem. 1995. V.159, №3.-P. 1170-1178.

38. De Vries O.M.H., Fekkes P.F., Wösten H.A.B., Wessels J.G.H. // Arch. Microbiol. 1993. - V. 159. - P. 330-335.

39. Siestma I.H., Wessel J.G.H. Chemical analysis of the hyphai wall of Schizophyllum commune. // Biochim. et biophys. acta. 1977. - V. 196. - P. 225-239.

40. Hunt S., Hixon M. Comparative study of protein composition in the chitinprotein complexes of cephalopod. // Comp. Biochem. Physiol. 1981. V. 68 B, №4.-P. 535-546.

41. Blackwell J., Weih M.A. // Chitin in Nature and Technology / Eds. Muzzarelli R., Jeuniaux C., Gooday G.W. N.-Y.: Plenum Press, 1996. P. 23-28.

42. Hackett C.J., Kuo-Chum Chen. Quantitative isolation of native chitin from resistant structure of Sordaria and Ascaris species. // Anal. Biochem.- 1978. V. 89,- P. 487-500.

43. Austin P.R. Purification of chitin. Pat. 3.879.377 (USA), 1965.

44. Лазурьевский Г.В., Терентьева И.В., Шамшурин А.А. Практические работы по химии природных соединений. М.: Высшая школа 1961. -193с.

45. Нието-Акоста О.М., Энрике Родригес Р.Д., Витовская Г .А., Блинов Н.П. Изучение хитина из скелета лангустов Panulirus argus // Приклд. биохим. и микроб,- 1977,- Т. 13, № 6. С. 782-785.

46. Takeda Н., Katsuura Н. Purification of king crab chitin. // Suisan Daigaku Kenkyu Hukoku. 1964. - V. 13. - P. 109-116.

47. Takeda M. Abe E. Isolation of crustacean chitin. .// Norisho Suisan Koshusho Kenkyu Hokoku. 1962. - V. 11. - P. 339-406.

48. Peniston Q.P. Method of recovering chitosan and ather by products from sheefish waste and the like. - US Pat., 3862122,1975.

49. Braconnot H. Sur la nature des champignons. // Ann. Chim. Phys. -1811. V. 79,№2.-P. 265-304.

50. Феофилова Е.П., Немцев Д.В., Терешина B.M., Козлов В.П. Полиаминосахариды мицелиальных грибов: новые биотехнологии и перспективы практического использования. // Прикл. биохимия и микробиология. 1996. - Т. 32, № 5. - С.483-492.

51. Патент, Великобритания № 9218243.5, кл. С 08 В 37/08. Способ получения хитина/хитозана. РЖХим. 1994 2 О 145П.

52. Tsezos М., Volevsky В. The mechanism of biosorption by Rhizopus arrhizus. //Bio technol. and Bioengng. 1982. - V. 14, № 3. - P. 385-401.

53. Letourneau D.R., Deven J.M., Manocha M.S., Structure and composition of the wall of Choanephora cucurbitarum. // Canad. J. Microbiol. 1976. - V. 22. - P. 486-494.

54. Нудьга JI.A., Плиско E.A., Данилов C.H. Получение хитозана и изучение его фракционного состава. // Ж. общ. химии. -1971. Т. 41, №11. - С. 2555-2558.

55. Бао Чи-Мин. Использование хитина для производства искусственного волокна. Химическое волокно. 1960, № 3. - С. 39-41.

56. Broussignag P. Un haut polymere naturel peu connu dans l'industrie Le Chitosane. // Chim. et Ind. Genie Chim. 1968. - V. 99, № 9 - P. 1241-1247.

57. Патент, Россия № 2021285, кл. С 08 В 37/08. Способ получения хитозана.

58. Заявка, Франция № 2701029, кл. С 08 В 37/08. Proce'de pour l'obtention de chitine ef lou de chitosane. РЖХим. 1195 17 Ф 38П.

59. Патент, Россия № 2073017, кл. С 08 В 3/ 08, С 01 J 20/30. Способ получения хитозана.

60. Авт. св. СССР, № 730695, кл. С08 В 37/08. Способ получения хитозана.

61. Pelleteir A., Lemire I., Sygush J., Chornet E. Chitin / chitosan transformation by thermo-mechanochemical treatment including characterization by enzymatic depolymerization. //Biotechnol. andBioeng. -1990. V. 36, № 3. - P. 310-315.

62. Патент, Россия № 1760749, кл. С 08 В 37/08. Способ получения хитозана.

63. Патент, Россия № 2067588, кл. С 08 В 37/08. Способ получения хитозана.

64. Batista J., Roberts George A.F. A novel, facide ledunique for deacety lating chitin. // Makromol. Chem. -1990. V. 191, № 2. - P. 429-434.

65. Заявка Франция № 2650282, кл. С 08 В 37/08. Procede'de preparation de chitosan par N-desacetylation de chitine.

66. Авт. св. СССР, № 1821471, кл. С 08 В 37/08. Способ получения хитозана.

67. Bartnicki-Garcia S. Cell wall chemistry, morphogenesis and taxonomy of fungi. // Ann. Rev. Microbiol. 1968. - V.22. - P. 87-108.

68. Shimahara K., Takiguchi Y., Kobayaschi T. Et al // Proc. from 4-th Int. on Chitin and Chitosan / Eds. Skjak-Braek G., Anthousea Т., Saedfod P. London; N.-Y.: Elsevier Appl. Sei., 1989. P. 171.

69. Miyoshi H., Shimura K., Watanabe K., Onodera K. Characterization of some fungal chitosans. //Biosci. Biotech. Biochem. 1992. - V. 56, № 12. - P. 18011805.

70. White S. A., Farina P.R. Prodaction and isolation of chitosan from Mucor rouxii. // Appl. Environ. Microbiol. 1979. - V. 32, № 2. - P. 323-328.

71. Muzarelli R.A.A., P. Ilari, R. Tarsi, B. Dubini, Xia W.S. Chitosan from Absidia coerulea. // Carbohydr. Polym. 1994. - V. 25, № 1. - p. 45-50.

72. Патент, Россия 2117673, кл. С 08 В 37/08. Способ получения хитозана. РЖХим. 1999 7 Ф 47П.

73. Tsipos J., Martinoou A., Chrisodoulidou А. et al. / Abstracts Book EUCHISS'95. 1st Int. Conf. of the European Chitin soc. / Brest; France: 1995. Р. 7.

74. Ганичева С.И., Нудьга Л.А., Быстрова Е.С., Львова Е.Б., Николаев А.Ф. Термические свойства хитин-глюкановых комплексов. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Тез.докл. пятой конф. М.: Изд-во ВНИРО, 1999. С. 222-224.

75. Немцов Д.В., Козлов В.П., Терешина В.М., Меморская A.C., Феофилова Е.П. Изменения в составе структурных компонентов клеточной стенки

76. Aspergillus niger в зависимости от условий культивирования. // Прикл. биохимия и микробиология. 1998. - Т. 34, № 1. - С. 95-98.

77. Патент ФРГ № 2923802, кл. С 08В 37/08 Chitosan-Glucan Komplex und Verfahren zu diesen Herstellung.

78. Патент, Россия № 2043995, кл. С 08 В 37/08, С 12 Р 19/04. Способ получения глюкан-хитозанового комплекса.

79. Velichikov A.D., Nikolova S.F., Veljanov D.K. // Докл. Болг. АН. 1990.- Т. 43,-№ 10,- С. 69-71.

80. Патент, США № 4806474, кл. С 12 Р 19/04, С 12 R 1/685. Приготовление фракций мицелиального хитозана и глюкана из микробной биомассы. РЖФизико-химическая биология и биотехнология 1990 2 Е 373П.

81. Патент, Россия № 1575552, кл. С 08 В 37/08. Способ получения хитинсодержащего волокнистого материала.

82. Феофилова Е.П., Терешина В.М. Перспективные источники получения хитина из природных объектов. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Тез. докл. пятой конф. М.: Изд-во ВНИРО, 1999. С. 76-78.

83. Cieniewska М. Wykorzystanie zamorzonych poczwarek jedwabnika morwowego jako surowca do uzyskania chityny i chitozanu stosowanego w produkcji wlokkin. // Techn. wlok. 1983. V. 32, № 4. - P. 105-106, 97. РЖХим. 1984. 5 T 3172.

84. Eds Ainswort G.C. and al. The Fungi. // Academic Press, London 1965. P. 46-76.

85. Dweltz N. E. The structure of a-chitin. // Biochim. et biophys. acta. 1961.51,- P. 283-294.

86. Hackman R.H., Goldberg M. Studies on chitin. The nature of a-, ß-, y-chitins. // Austral. J. Biol. Sei.- 1965,- 18,- P. 935-936.

87. Muzzarelli R.A.A. Nature chelating polymers. Oxford: Pergamon press.- 1973. 253 p.

88. Rudall K.M., Kenchington W. The chitin system. // Biol. Rev. 1973. - V. 49. -P. 597-636.

89. Blackwell J., Parker K.D., Rudall K.M. Chitin fibres of the diatoms Thalassiosira fluviatilis and Cyclotella cryptica. // J. Mol. Biol.- 1967,- 28,- P. 383.

90. Darmon S.B., Rudall K.M. Infrared and X-ray studies of chitin. // Discuss. Faraday Soc. 1950,- 9,- P. 251-260.

91. Fray R. Chitin und Zellulose in Pilzzellwanden. // Ber. Schweiz. Bot. Ges. -1950.-60.

92. Pearson F.G., Marchessault R.M., Liag C.Y. Infrared spectra of crystalline polysaccharides, v. Chitin. // J. Polym. Sei.- 1960,- V. 43, № 141.- P. 101-116.

93. Michell A.J., Scurfield G. An assessment of infrared spectra as indication of fungal cell composition. //Austral. J. biol. Sei. 1970,- 23.- P. 345-360.

94. Galat A., Popowicz J. Study of the infrared spectra of chitin. // Bull. Acad. pol. sei. Ser. sei. Biol. 1978. - V. 26, № 5. - P. 295-300. РЖБиологическая химия 1979 1 Ф 92.

95. McLachlam J., Craigie J.S. Chitin fibres in Cyclotella cryptica and growth of Cyclotella cryptica and Thalassiosira fluviatilis. // Some Contemp. Stud. Mar. Sei.- 1966. P. 511-517.

96. Феофилова Е.П., Марьин А.П., Ушакова A.E., Синько Н.И., Гопенгауз Ф.Л. Сорбционные свойства и термическая деструкция хитинов и хитозанов, полученных из беспозвоночных и грибов. // Изв. АН. СССР. Сер. биол.- 1982, №. 3.- С. 361-369.

97. Феофилова Е П., Терешина В.М., Иванова Н.И., Генин Я.В., Гопенгауз Ф.Л. Физико-химические свойства хитина крабов и некоторых микроскопических грибов. // Прикладная биохимия и микробиология. -1980,- Т. 16, вып. 3,- С. 377-382.

98. Сазанов Ю.Н., Федорова Г.Н., Плиско Е.А., Нудьга Л.А. Изучение термостабильности хитина, хитозана и некоторых его производных методом ДТА и ДТГ // Журн. прикл. химии. 1980. - Т. 53, № 9,- С. 21432146.

99. Николаев А.Ф., Прокопов А.А., Шульгина Э.С. Термические и деформационные свойства хитозановых пленок. // Журн. прикл. химии. -1985. -Т. 58, № 8. С. 1870-1874.

100. Кайминь И.Ф., Озолиня Г.А., Плиско Е.Л. Исследование температурных переходов хитозана. // Высокомол. соед. Сер. А. 1980. - Т. 22, № 1,-С. 151-156.

101. Марьин А.П., Шляпников Ю.А. Термическая и термоокислительная деструкция хитина. // Высокомолек. соед. Сер. А. 1980,- Т. 22, № 3.- С. 589-594.

102. Николаев А.Ф., Быстрова Е.С., Ганичева С. И., Львова Е.Б., Петрова В.А., Нудьга Л.А. Сравнительный термический анализ хитинов различного происхождения. // Ж. прикл. химии. 1999. - Т. 72, № 7. - С. 1185-1186.

103. Марьин А.П., Феофилова Е.П., Генин Я.В., Шляпников Ю.А., Писарев И.В. Влияние кристалличности на сорбционные и термические свойства хитина и хитозана. // Высокомолек. соед. Сер. Б. 1982. - Т. 24, № 9. - С. 652-658.

104. Феофилова Е.П., Марьин АН, Терешина В.М. Сорбция ионов свинца Aspergillus niger. Влияние предварительной обработки мицелия. // Приклад, биохимия и микробиология. 1994. - Т. 30, вып. 1. - С. 149-155.

105. Терешина В.М., Марьин А.П., Косяков В.Н., Козлов В.П., Феофилова Е.П. Различная способность полисахаридов клеточной стенки Aspergillus niger к сорбции металлов. // Приклад, биохимия и микробиология. 1999. -Т. 35, № 4. - С. 432-436.

106. Горовой Л.Ф. Хитинсодержащие материалы «Микотон», получаемые из грибной биомассы. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Тез. докл. пятой конф. М.: Изд-во ВНИРО, 1999. С. 130-133.

107. Патент, Российская Федерация № 2073015 кл. С 08 В 37/08. Способ получения хитинсодержащего материала. РЖХимия 1998 13 Ф ЗП.

108. Siestma I.H., Wessel J.G.H. Solubility of (l-3)-/?-D-glucan in fungal walls: importance of presumed linkage between glucan and chitin. // J. Gen. Microboil.- 1981,- V. 125, № 1,- P. 209-212.

109. Bull A.T. Environmental factors influencing the synthesis and excretion of exocellular maeromolecules. // J. Appl. Chem. and Biotechnol. 1972. - 22. - P. 261-292.

110. Jones R.V. Process for production of chitin sulfate/ US pat., № 2689244, 1954.

111. Pollack J., Lange С., Hashimoto Т. «Nonfibrillar» chitin associated with walls and setra of Trichophyton mentagrophytes arthrospores. // J. Bacteriol. -1983. V. 154, № 2. - P. 965-975.

112. Быков В.П. Состояние и перспективы развития производства хитина, хитозана и продуктов на их основе из панциря ракообразных. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Тез. докл. пятой конф. М.: Изд-воВНИРО, 1999. С. 15-18.

113. Патент ФРГ № 856146 Verfahren zur Herstellug von Chitinxathogenat

114. Muzzarelli R.A.A., Tanfani F.E.M. The chelating ability of chitinous from Streptomyces, Mucor rouxii, Phycomyces blakesleeanus and Choanephora cucurbitarum. // J. Appl. Biochem. 1981. - V. 3, № 4. - P. 322-327.

115. Brierley J.A., Brierley C.L. Biological accumulation of some heavy metal-bioteschnological application. Biomineralization and biological metal accumulation. P.Westbrock and E.W. de Jong (eds.), 1983, p. 492-509, D.Retdel Publishing Company.

116. Galun M., Keller P., Malki D. et al. Removal of uranium from solution of fungal biomass and fungal wall related biopolymer. // Science. - 1983. - V. 219,№4583.-P. 215.

117. Косяков B.H., Яковлева Н.Г., Велешко И.Е., Горовой Л.Ф. Сорбция актиноидов на хитиновых сорбентах волокнистой структуры. // Радиохимия. 1997. - Т. 39, № 6. - С. 540-543.

118. Прилуцкий А.И., Земсков B.C., Горовой Л.Ф., Бурдюкова Л.И. Антимикробные свойства нового хитинового препарата «Микотон». // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Тез. докл. пятой конф. М.: Изд-во ВНИРО, 1999. С. 181-186.

119. Сенюк О.Ф., Горовой Л.Ф., Трутнева И.А. Использование хитинового препарата «Микотон» в качестве радиопротектора. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Тез. докл. пятой конф. М.: Изд-во ВНИРО, 1999. С. 193-197.

120. Benderliev К.М., Ivanow N.I. Chitin-glucan as a flocculant for microalgal suspension-effect of deacetylation tmperature and chitosan content. Хидробиология. 1987. - 29. - С. 37-40. РЖФизико-химическая биология и биотехнология 1987 7 Е 137.

121. Muzzarelli R.A.A., Tanfani F., Scarpini G. Chelating, film-forming and coaqulating ability of the chitosan-glucan complex from Aspergillus niger industrial wastes. //Biotechnol. and Bioengng. -1980. V. 7. - P. 885-896.

122. Заявка Германия, № 19704651 С 08 В 37/08, С 07 Н 5/06. РЖХим. 1999 9 О 213П.

123. Шеттле И., Ключкин Н. Сравнительная этерификация целлюлозы и гидрат- целлюлозы. // Журнал прикладной химии. 1936,- Т.9, № 9. - С. 1626-1633.

124. Филиппович Ю.Б., Бюрова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по общей биохимии. М.: Изд-во МГУ, 1982,- 78 с.

125. Шабрукова Н.В., Прошина М., Гамаюрова B.C. Экспресс-метод количественного определения D-глюкозамина в хитин-глюкановыхкомплексах. // Тезисы докладов конф. молодых ученых «Пищевые технологии». Казань, 22-23 декабрь 1998. С. 13 .

126. Смирнов В.А. Пищевые кислоты. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983, 264с.

127. Никифорова Т.А., Лернер Р.Б. Производство пищевой лимонной кислоты в России. // Пищевая промышленность. 1994. - № 6. - С. 10-11.

128. Карклиныш Р.Я., Лиепиныш Г.К. Микробный биосинтез лимонной кислоты. Рига: Зинатне, 1983, - 240с.

129. Никифорова Т.А., Щербакова Е.Я. Продуценты пищевой лимонной кислоты для культивирования в глубинных условиях. М.: АгроНИИТЭИПП, 1995, сер. 22, вып. 2. 20с.

130. Львова Е.Б., Галкин A.B. и др. Биологически ценные добавки из отходов производства лимонной кислоты. // Веер. Науч. техн. конф. Тез. докл. Углии, 1996. - С. 390.

131. Новинюк Л.В., Галкин A.B., Лермер Отходы производства пищевой лимонной кислоты и их переработка. М.: АгроНИИТЭИПП, 1997. 44с.

132. Наканиси К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений, М.: Мир, 1965.- 209 с.

133. Беллами Л. Инфракрасные спектры сложных молекул, М.: ИЛ, 1963. -590 с.

134. Беллами Л. Новые данные по ИК-спектрам сложных молекул. М.: Мир, 1971.-318 с.

135. Данилов С.Н., Плиско Е.А. Изучение хитина. П1 Оксиэтиловые и этиловые эфиры хитина. //ЖОХ,- Т. 28.-№ 8. С. 2217-2223.

136. Роговин З.А. Химия целлюлозы. М.: Химия, 1972. 520 с.

137. Данилов С.Н., Плиско Е.А., Пяйвинен Э.А. Эфиры и реакционная способность целлюлозы и хитина. // Изв. АН. СССР. ОТ. хим. н. 1961. -№ 8.-С. 1500-1506.

138. Климова О.М., Кацизно И.А. // ЖПХ. 1956. - Т. 29. - № 10. - С. 15501555

139. Schorigin P.P., Makarova-Semljanskaja N.N. Uber die Methylather des Chitin (Vorlaufig. Mitteil.). Ber. 1935. 68, № 5. - S. 969-971.

140. Бендикене В.Г., Песлякас И.-Г. И., Веса B.C. Хроматография сериновых протеаз на хитине и его производных. // Приют, биохим. и микробиол. 1981. - Т.17, вып 3. - С. 441-447.

141. Schorigin, Haït E.W. Uber die Acetylierung des Chitin (Vorlaufig. Metteil)/ Ber. 1935. - 68. - S. 971-973.

142. Meyer K.H., Wehrly H. // Helv. Chim. Acta. 1937. 20, 353.

143. Патент, США, № 4857403 кл. D 02 G 3/06 High strength fibers from chitin derivatives.

144. Плиско E.A., Данилов C.H. Химия и обмен углеводов, М: «Наук». С. 142.

145. Зиновьева М.Е., Качалова Н.В., Гамаюрова B.C. Методы иммобилизации глюкозоизомеразы. // Биотехнология. -1997, № 6. С.47-50.

146. Усов А.И. Олигосахарины новый класс сигнальных молекул в растениях. // Успехи химии. - 1993. - Т. 62, № И. - С. И19-1144.

147. Пл^л. , продуцента лимонном кислоты и отхода ее

148. В опытном цехе АО Шй в период с 14.04.37 г. по 16.06.97"г. выпущены две опытных партии грибного хитина из биомассы гриба йпроизводства.

149. Содержание основного вещества 49,5%

150. Содержание основного вещества 52,9$

151. Зам. директора п< работе АО1. Технолог опытног1. Зав.кафедрой ПБТ, ^

152. Научный сотр. каф.ПБТ, к.х.н.1. ЧШ* ХЩ пнтнога- цеха1.1. Г.А.Кутырев1. A.С.Касимов

153. B.С.Гамаюрова Н.В.Шабрукова

154. ЭКОНОМИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРОИЗВОДСТВА ХИТИН-ГЛЮКАНОВОГО КОМПЛЕКСА

155. Расчет капитальных вложений и амортизации основных фондов