Многоцелевая химическая модификация поверхностных антигенов вируса гриппа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Зайцева Елена Сергеевна

• Зайцева Елена Сергеевна
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Зайцева Елена Сергеевна

АНТИГЕНОВ ВИРУСА ГРИППА

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.1 ВИРУС ГРИППА

1.2 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ ГРИППА В РОССИИ И МИРЕ

1.3 ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА, СОВРЕМЕННЫЕ ВАКЦИННЫЕ ПРЕПАРАТЫ ПРОТИВ ВИРУСА ГРИППА И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ

1.4 ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ПРИ ПОМОЩИ ПОЛИМЕРОВ

2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 ОБОРУДОВАНИЕ

2.2 МАТЕРИАЛЛЫ И МЕТОДЫ

2.2.1 МАТЕРИАЛЛЫ

2.2.2 ХИМИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВААНИЯ

2.2.3 БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

3.1 МОДИФИКАЦИЯ АМИНОКИСЛОТ

3.2 ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ ГЛИКОПРОТЕИНОВ ВИРУСА ГРИППА В/Ыопёа/04/2006, А/БпвЬапе/59/2007/Н1Ш и A/Ca1ifornia/07/2009/H1N1

3.3 ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ ГЕМАГГЛЮТИНИНОВ ВИРУСА ГРИППА ВМопёа/04/2006 В ПРИСУТСТВИИ ДОПОЛНИТЕЛЬНОГО КОЛИЧЕСТВА АМИНОКИСЛОТ

3.4 ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ГЕМАГГЛЮТИНИНОВ ВИРУСА ГРИППА

3.4.1 ВЛИЯНИЕ СТЕПЕНИ МОДИФИКАЦИИ ГЕМАГГЛЮТИНИНОВ ВИРУСА ГРИППА НА ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

3.4.2 ПОДБОР ОПТИМАЛЬНОГО СОСТАВА КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ АНТИГЕН-ПОЛИСАХАРИДНОГО КОМПЛЕКСА

3.4.3 ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ НАНОКОНСТРУКЦИЙ

4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Приложение

Копия свидетельства к золотой медали за Инновационную биотехнологическую разработку «Молекулярные конструкции, предназначенные для создания нового поколения противовирусных вакцин»

Приложение

Копия диплома за победу в конкурсе лучших инновационных проектов в сфере науки и высшего профессионального образования Санкт-Петербурга в 2014 г

Приложение

Пример расчета концентрации гемагглютинина методом ОРИД

Продолжение Приложения

Продолжение Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Многоцелевая химическая модификация поверхностных антигенов вируса гриппа»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В современном мире имеется значительное количество терапевтических препаратов против вируса гриппа. Такие препараты, как «Арбидол», «Гриппферон», «Виферон» и Озельтамивир широко применяются при вирусных заболеваниях и обеспечивают специфическую защиту организма человека от вируса гриппа. Наиболее эффективным профилактическим методом защиты от гриппозной вирусной инфекции, а также от возникновения потенциально серьёзных осложнений остаётся прививка [1, 2, 3, 4].

Производство вакцинных препаратов против вируса гриппа из куриных эмбрионов весьма материало и трудозатратно [5], а также требует постоянного совершенствования [6]. Применение адъювантов в составе вакцин, чаще всего приводит к повышению иммуногенности, и как следствие, снижению себестоимости вакцины. Адъювантным действием обладают некоторые соли алюминия и кальция, липосомальные соединения и синтетические поли ионные соединения, такие как полиоксидоний. К адъювантам применяют жёсткие требования, они не должны вызывать побочных иммунных реакций, не должны вызывать аутоиммунных заболеваний, они должны легко метаболизироваться и выводиться из организма. Поэтому выбору адъювантов и вспомогательных веществ уделяется особое внимание. В настоящее время актуальным является вопрос выбора и целесообразности применения различных адъювантов в составе готового лекарственного препарата.

Результатом введения адъюванта может быть снижение иммунизирующей дозы антигенного компонента вакцинного препарата против вируса гриппа, что в свою очередь может позволить получить значительно большее количество иммунизирующего компонента при незначительном повышении трудозатрат.

В настоящей работе реализована идея создания антиген-полисахаридной конструкции, в которой антигены вируса гриппа «сшиты» посредством образования ковалентной связи с жесткоцепным полимером микробного происхождения и дополнительно «нагружены» молекулами аминокислот. Таким

образом, получена молекулярная конструкция, которая одновременно состоит из антигенной и полисахаридной составляющей, причём полисахаридная составляющая связана с аминокислотными остатками, что должно обеспечивать распределение полиионного эффекта по всей молекулярной конструкции. В качестве высокомолекулярного полимера выбран декстран, он выпускается промышленностью России в виде 6 % раствора для инфузий и является полифункциональным плазмозаменящим раствором.

В данной работе в качестве объектов исследования выбраны поверхностные антигены (гемагглютинины) вирусов гриппа штаммов B/Florida/04/2006, A/Brisbane/59/2007/H1N1 и A/California/07/2009/H1N1, представляющие собой очищенные концентраты субъединиц вируса гриппа (КСЕ вируса гриппа) полученные при производстве субъединичной вакцины против гриппа с применением куриных эмбрионов. В результате химической модификации антигенов ^г) вируса гриппа, использованных в работе штаммов, посредством взаимодействия с окисленным декстраном в присутствии различных аминокислот происходит образование антиген-полисахаридных наноконструкций с прочной ковалентной связью между свободными аминогруппами гемагглютинина, аминокислоты и карбонильными группами окисленного декстрана. Такое взаимодействие представляет собой способ создания наноконструкций на основе протективных антигенов вируса гриппа, а именно гемагглютинина и жесткоцепного полимера декстрана. Актуальным представляется рассмотреть как в теоретическом, так и в практическом плане возможность создания полимер-субъединичных вакцин на основе синтезированных наноконструкций и изучить биологические свойства синтезированных антиген-полисахаридных конъюгатов.

Степень разработанности. В результате успешного развития биотехнологических приёмов получены ферментные лекарственные препараты и созданы различные противовирусные вакцинные препараты. Успешно развиваться направление, посвящённое моделированию новых молекулярных конструкций на основе имеющихся противовирусных вакцинных препаратов. Одним из направлений создания конъюгатов является химическая модификация антигенов

вируса гриппа с помощью полимеров различной структуры. На Российском фармацевтическом рынке уже имеется ряд вакцинных противогриппозных препаратов на основе конъюгатов, образованных посредством йонной связи между антигенным компонентом и полийонной структурой вспомогательного компонента. В представленной работе использован приём химической модификации антигенов вируса гриппа с помощью полимера полисахаридной структуры - декстрана с добавлением аминокислот в структуру, полученных антиген-полисахаридных конъюгатов.

Цели и задачи.

Цель исследования - создать антигенный противовирусный материал с повышенной иммуногенностью и рекомендовать такой материал и способ его получения для разработки вакцины против гриппа.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1 Изучить возможность получения противовирусного материала с повышенной иммуногенной активностью путем проведения многоцелевой химической модификации антигенов вируса гриппа (поверхностных гликопротеинов - гемагглютининов) на примере штаммов BMorida/04/2006, A/Brisbane/59/2007/ШШ, A/CaHfornia/07/2009/ШN1 с помощью окисленного декстрана и последующего химического связывания промежуточного продукта с аминокислотами (в-аминокапроновой кислотой, L-аргинином, L-тирозином).

2 Получить образцы антигенов вируса гриппа (гемагглютинина), модифицированных окисленным декстраном;

3 Изучить физико-химические, биохимические и иммуногенные свойства полученных конъюгатов;

4 Рекомендовать предложенный и изученный метод синтеза полимерных наноконструкций из антигенов (гемагглютинина) вируса гриппа, химически связанных с декстраном в присутствии некоторых аминокислот как одно из направлений создания новых эффективных противогриппозных вакцин.

Научная новизна. В ходе проведения исследований предложена схема синтеза новых молекулярных конструкций.

• Впервые проведена химическая модификация антигенов (гемагглютинина) вируса гриппа различных штаммов при помощи полисахарида микробного происхождения - декстрана с молекулярной массой (60±10) кДа и аминокислот таких как е-аминокапроновая кислота, L-лизин, L-аргинин, L-тирозин;

• Впервые на лабораторных животных показан высокий уровень антигенной активности образцов конъюгатов, полученных в результате химической модификации антигенов вируса гриппа (гемагглютинина). Показанные результаты являться основанием рекомендовать молекулярные наноконструкции, полученные в результате изученной химической модификации антигенов вируса гриппа, для разработки новых вакцинных препаратов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты данной работы имеет чётко выраженную прикладную направленность и могут быть использованы для получения вакцин нового поколения. Предложен метод получения антиген-полисахаридных конъюгатов с антигенной активностью в 2,53,5 раза превышающей аналогичные показатели для очищенных антигенов вируса гриппа без модификации. Разработка сезонной гриппозной инактивированной вакцины на основе наноконструкций поверхностных гликопротеинов (гемагглютинина) вируса гриппа и жесткоцепного полисахарида - декстрана позволяет снизить иммунизирующую дозу антигенного компонента в вакцинных препаратах. Такой подход позволяет получать в 2-3 раза большее количество доз вакцин против вируса гриппа и как следствие сократить расходы на единицу выпускаемой продукции, что может иметь высокую значимость при производстве стратегически важных вакцин от пандемических штаммов. Работа отмечена золотой медалью Министерством образования и науки РФ на конкурсе лучших инновационных проектов в сфере науки и высшего профессионального образования Санкт-Петербурга в 2014 г. (Приложение 1 и 2).

Методология и методы исследования. Изучена зависимость степени

связывания использованных в работе аминокислот и антигенов (гемагглютининов) вируса гриппа в реакции с окисленным декстраном молекулярной массой (60±10) кДа от соотношения концентрации карбонильных групп окисленного декстрана и аминогрупп взаимодействующих аминокислот и антигенов вируса гриппа (гемагглютинина). Образцы, полученных конъюгатов на основе использованных аминокислот и окисленного декстрана, исследованы методом гелевой хроматографии. Проведено подтверждение образования высокомолекулярных структур, полученных на основе антигенов вируса гриппа (Аг) и полимера декстрана, методом электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) 12 %. Иммуногенная активность полученных антиген-полисахаридных конъюгатов определена на беспородных белых мышах весом 10-12 грамм на 21 день после двукратной иммунизации с интервалом 7 дней. Титр специфических антител к гемагглютинину определяли в сыворотке крови животных в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Подробное описание этапов и методик проведения экспериментов отражено в разделе «Материалы и методы».

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработан метод химической модификации поверхностных гликопротеинов (гемагглютинина) вируса гриппа окисленным декстраном, с последующим химическим присоединением некоторых аминокислот.

2. Многоцелевая химическая модификация поверхностных гликопротеинов (гемагглютинина) вируса гриппа в присутствии аминокислот с помощью окисленного декстрана приводит к получению водорастворимых наноконструкций, подобных по гидродинамическим свойствам и размерам исходному вирусу гриппа.

3. Образование ковалентной связи между антигеном вируса гриппа, использованными в исследовании аминокислотами и декстраном приводит к образованию антиген-полисахаридных конъюгатов «нагруженных» дополнительным количеством аминокислот, обладающих повышенной иммуногенной активностью, доказанной на мышах.

4. Введение аминокислот в синтезированную структуру антиген-

полисахаридного комплекса выполняет функцию адъюванта и усиливает иммунный ответ.

Степень достоверности и апробация результатов. В работе использованы современные методы исследования, сертифицированные реагенты и лабораторное оборудование. Сформулированные в работе выводы вытекают из экспериментов, научно обоснованы и находятся в соответствии с современными представлениями о химической науке.

Апробация результатов. Основные результаты диссертационной работы представлены на следующих конференциях:

1. XII Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности», СПб., 8-10 декабря 2011 г.

2. II Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Современная наука глазами молодых исследователей», Красноярск, 19 февраля 2012 г.

3. Научной конференции молодых ученых в ФГБУ «НИИВС им. И.И. Мечникова» РАМН 16-18 апреля 2012 г.

4. III Международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине», СПб., 26-28 апреля 2012 г.

5. VI Международной научной конференции «Applied and Fundamental Studies», St. Louis, Missouri. USA, USA, 30-31 августа 2014 г.

6. II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновации в здоровье нации», СПб., 17 ноября 2014 г.

7. VIII Международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине», С-Пб., 20-22 мая 2015 г.

8. Научно-Практическая конференция-биеннале «Грипп: вирусология, эпидемиология, профилактика», СПб., 27-28 октября 2016 г.

9. XII Евразийская научная конференция «Биологический фактор и микробиологическая диагностика при формировании здорового образа жизни» 1516 декабря 2016 г.

10. XXIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва 10-13 апреля 2017 г.

11. V Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Инновации в здоровье нации», СПб., 8-9 ноября 2017 г.

12. VI Всероссийская конференция молодых ученых «Вирусные инфекции - от диагностики к клинике», посвященная 80-летию со дня рождения академика РАН О.И. Киселева, Санкт-Петербург, 10-11 апреля 2025 года.

13. VI Международный форум «Дни вирусологии 2025», Санкт-Петербург, 22-23 сентября 2025 г.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.1 ВИРУС ГРИППА

Вирус гриппа относится к семейству Orthomyxoviridae. Размеры частиц вируса варьируют в интервале от 80 до 120 нм, чаще всего имеют сферическую форму. Снаружи частицы покрыты липидной мембраной, в которую включены поверхностные белки - гликопротеины гемагглютинин и нейраминидаза, они представляют собой основные антигенные детерминанты вируса гриппа [7, 8, 9]. На рисунке 1 представлена модель вируса гриппа, разработанная группой учёных компании Visual Science [10].

Рисунок 1 - Модель вируса гриппа На рисунке можно наблюдать условное изображение в разрезе частицы вируса гриппа. В мембране вируса так же содержится матричный белок М2, который образует каналы необходимые для распаковки вируса внутри клетки -мишени. Под мембраной находится слой матрикса, образованный белком М1. В центре частицы располагается РНК вируса соединенная со структурным белком -нуклеопротеидом № и полимеразным комплексом.

1.2 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ ГРИППА В РОССИИ И МИРЕ

В июне 2009 года Всемирная организация здравоохранения официально объявила о введении шестого, максимального уровня угрозы пандемии вируса гриппа. Пандемия 2009 года была вызвана штаммом вируса гриппа Л/СаИ/огп1а/07/2009/Н1Ы1, в просторечии названным «свиным гриппом» [11, 12]. За сезон 2009-2010 гг. количество летальных исходов в результате осложнений увеличилось в три раза по сравнению с предыдущими годами [13]. По данным научно-практической конференции-биеннале «Грипп: вирусология, эпидемиология, профилактика и лечение» ФГБУ «НИИ Гриппа» Минздрава России в 2013-2016 гг. на территории Санкт-Петербурга циркулировали 2 штамма вируса гриппа линии А и два штамма вируса гриппа линии В [14]. При этом в эпидемический сезон 2015-2016 гг. было отмечено, что около 80 % диагностированных вирусов гриппа составил пандемический штамм Л/СаН/огта//07/2009/НШ. Развитие эпидемической ситуации могло быть вызвано ослаблением социальной политики поддержки вакцинации, а также признанием эффективности терапии гриппа такими препаратами, как «Гриппферон», «Реаферон-ЕС-Липинт», «Арбидол», «Амиксин», «Циклоферон», «Полиоксидоний», «Анаферон» [15-18].

В 2020 году период пандемии коронавирусной инфекции Российскими учеными было успешно разработано и зарегистрировано несколько вакцинных препаратов против коронавирусной инфекции [15-18] .

В текущем сезоне 2025 - 2026 года наблюдается резкое возросший уровень заболеваемости ОРВИ Максимальный уровень заболеваемости гриппом ожидается в декабре 2025 - январе 2026 г.

Таким образом, разработка и производство новых вакцинных препаратов против вируса гриппа, особенно в случае возникновения опасности пандемии, заслуживает особого внимания [19].

1.3 ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА, СОВРЕМЕННЫЕ ВАКЦИННЫЕ ПРЕПАРАТЫ ПРОТИВ ВИРУСА ГРИППА И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ

За последние 10-15 лет методы исследований по созданию новых молекулярных конструкций биологически активных веществ интенсивно развиваются. Разработаны принципиально новые вакцины и совершенствуются уже имеющиеся формы препаратов для профилактики гриппа. Безопасность и эффективность - два основных требования, которым должны соответствовать современные вакцины. В идеале вакцинный препарат должен обеспечивать пожизненный иммунитет у 100 % привитых пациентов при однократном введении. Единственной вакциной, отвечающей указанным требованиям, можно считать вакцину против полиомиелита [19].

В настоящее время существует три типа вакцинных препаратов против гриппа.

Вакцины первого поколения - это цельновирионные и живые вакцины, они формируют стойкий специфический иммунный ответ. Самые первые вакцины содержали в своем составе цельные вирусные частицы, как живые, так и инактивированные. Живые вакцины против гриппа были разработаны А.А. Смородинцевым путем длительного пассирования вирулентных штаммов вируса гриппа в куриных эмбрионах [21]. В 1950 г Джонатаном Солком была получена инактивированная вакцина, с выращиванием вируса гриппа в куриных эмбрионах [22]. Вакцина показала до 80 % эффективности у иммунизированных лиц. Цельновирионная вакцина индуцирует защитный уровень нейтрализующих антител скорее всего за счет адъювантного эффекта содержащейся в ней РНК [23]. Однако, вакцина содержала живые ослабленные вирусы гриппа и обладала низкой степенью очистки, в результате чего имели место побочные эффекты в виде воспалений, сопровождающихся повышением температуры. Живые противогриппозные вакцины представляют собой аттеннуированный вирус гриппа, полученный из вируссодержащей аллантоисной жидкости куриных эмбрионов, очищенный методом ультрацентрифугирования. Живая вакцина, как и

инактивированная цельновирионная, до сих пор характеризуется высокой реактогенностью из-за недостаточной степени очистки [24].

Вакцины второго поколения - сплит-вакцины, получены расщеплением мембраны вирионов вируса на части с помощью органических растворителей или детергентов. Такие вакцины содержат все вирионные белки, то есть не только поверхностные гликопротеины, но и внутренние антигены. За счет высокой степени очистки в вакцине отсутствуют липиды клеточной стенки вируса и овальбумин - белок куриного эмбриона. Такие вакцины характеризуются значительно меньшим риском побочных реакций, предположительно, в связи с разрушением пространственной структуры вируса. При доказанной одинаковой иммуногенности сплит-вакцины обладают меньшей реактогенностью, чем цельновирионные. На фармацевтическом рынке сплит-вакцины представлены такими препаратами, как Ваксигрип (Франция), Бегривак (Германия), Флюарикс (Англия) [25].

Ваксигрипп - выпускается компанией «Авентис Пастер» (Франция) и представляет собой тривалентную вакцину, которая содержит вирусы гриппа трех серотипов A/H1N1, A/H3N2 и B, актуальных для предстоящего эпидемического сезона и рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения. В одной дозе препарата (0,5 мл) содержится по 15 мкг гемагглютинина от каждого серотипа вируса гриппа [25, 26].

Бегривак - выпускается компанией «Новартис Вакцинс энд Диагностикс ГмбХ и Ко КГ» (ранее - компания «Кайрон Беринг ГмбХ и Ко» (Германия)), одна доза вакцинного препарата содержит по 15 мкг гемагглютинина, а также нейраминидазу и компоненты внутренних структур вируса гриппа [26].

Флюарикс - выпускается компанией «Глаксо Смит Кляйн» (Англия) одна доза вакцинного препарата содержит по 15 мкг антигенов вируса гриппа актуальных штаммов. Препарат разрешен для профилактики гриппа у детей с 6 месяцев и взрослых [26, 27].

Вакцины третьего поколения - субъединичные вакцины, создание которых основано на предположении того, что значимыми для защиты против вируса гриппа являются специфические антитела против поверхностных гликопротеинов вируса (гемагглютинина и нейраминидазы), а не против внутренних белков вируса (нуклеопротеида, матриксного белка и др.) [28]. Первая субъединичная вакцина была создана в 1980 году. Благодаря высокой эффективности и низкой реактогенности такая вакцина может быть использована для детей, начиная с 6-месячного возраста. Состав вакцин меняется каждый год для того, чтобы обеспечить максимальную защиту от штаммов «дикого» вируса.

Основным преимуществом вакцин третьего поколения является низкая реактогенность. Это обусловлено тем, что основу таких вакцин составляют максимально очищенные антигены оболочки вируса гриппа, а именно -поверхностные гликопротеины гемагглютинин и нейраминидаза. В таких вакцинах отсутствуют внутренние белки вириона, нуклеиновые фрагменты и липиды клеточной стенки, что достигается благодаря технологии отделения поверхностных гликопротеинов без разрушения структуры оболочки вируса.

В литературе описан целый ряд вакцин против вируса гриппа, относящихся к третьему поколению, однако описание носит в основном патентный и технический характер [29]. К ним относятся зарегистрированные на территории России вакцинные препараты: «Агриппал», и «Инфлювак».

Агриппал 81 производится компанией «Новартис энд Диагностикс Гмбх и Ко» (ранее - компания «Кайрон Беринг Гмбх и Ко Германия»). Препарат содержит по 15 мкг поверхностных гликопротеинов вирусов гриппа А и В в одной дозе. В ней также находятся остаточные количества (примеси) формальдегида, цетилтриметиламмония бромида (ЦТАБ) и полисорбата-80, которые могут служить причиной осложнений при применении. Тем не менее, вакцина разрешена для применения детям от 6 месяцев до 3 лет [25, 26].

Инфлювак производится фирмой «Солвей Фарма» (Нидерланды). В ней присутствуют в остаточных количествах формальдегид, полисорбат-80, гентамицин. В состав её входят фосфаты, хлориды. Вакцину разрешено вводить

детям от 6 месяцев. Одна доза вакцины содержит по 15 мкг гемагглютинина и нейраминидазы трёх актуальных штаммов вируса гриппа [25, 26].

На основе субъединичных вакцин созданы полимер-субъединичные вакцины, которые, по мнению некоторых исследователей-иммунологов, можно отнести к четвертому поколению вакцин против вируса гриппа. В России зарегистрированы, разрешены к применению и промышленному выпуску полимер-субъединичные вакцины против вируса гриппа - Гриппол плюс [25] и Совигрипп [30].

Гриппол плюс - это сезонная противовирусная вакцина, зарегистрированная компанией «Петровакс» в России и выпускается в Московской области в соответствии с международными стандартами GMP и ISO представляет собой конъюгат поверхностных гликопротеинов вируса гриппа (гемагглютинина и нейраминидазы) и синтетического полиэлектролита - полиоксидония. Настоящая вакцина разрешена для применения детям с 6 месяцев и взрослым без ограничения по возрасту. Выпускается в индивидуальной шприц дозе.

Совигрипп - противовирусная вакцина, зарегистрированная ФГУП «НПО «Микроген» в России. Препарат содержит по 5 мкг гемагглютинина вирусов гриппа А (H1N1), А (H3N2) и 15 мкг гемагглютинина вируса гриппа В и 500 мкг синтетического сополимера - совидон, который представляет собой сополимер

N-винилпирролидона и 2-метил-5- винилпиридина. Настоящая вакцина разрешена для применения детям с 6 месяцев и взрослым без ограничения по возрасту. Выпускается в индивидуальной шприц дозе.

Отечественные вакцины отличается от зарубежных субъединичных вакцин сниженным количеством вирусных белков в иммунизирующей дозе (15-20 мкг гемагглютинина суммарно для трех подтипов вируса) [29]. Содержание иммуномодуляторов - полиоксидония или совидона составляет 500 мкг на одну дозу препарата, что в 25 раз превышает количество основного действующего компонента вакцинного препарата - гемагглютинина.

В результате вышесказанного, открываются перспективы разработки высоко иммуногенных препаратов на основе изолированных поверхностных антигенов вируса гриппа, используемых в низкой концентрации.

В будущем, благодаря успехам молекулярной биологии, мы можем оказаться на рубеже создания противогриппозных вакцин путем генной инженерии генов вируса гриппа. Были проведены попытки разработать ДНК - вакцины против вируса гриппа [31]. Разработка таких вакцин ведется по пути активации толлподобных рецепторов (Toll - Line Receptors - TLR) клеток иммунной системы. Такие рецепторы расположены на дендритных клетках, макрофагах, эозинофилах, эпителии слизистых оболочек и кожи [32-34]. В испытаниях на животных ДНК -проявила слабую иммуногенность даже после повторного введения. Ограниченные клинические испытания ДНК - вакцин показали низкую иммуногенность в отношении выработки антигемагглютинирующих антител при дозе 1 мг с адъювантом [354]. В настоящее время ученые признают, что генно-инженерные вакцины не пригодны для активации клеточного иммунитета [36]. Можно предположить, что при применении ДНК - вакцин парентерально может произойти внедрение этой ДНК в ДНК клеток человека, что в свою очередь может повлечь изменение функций хромосомы, а возможно и злокачественное перерождение клетки [37]. Поэтому для вакцинации людей ДНК - вакцины пока не применяют. Однако принцип создания вакцинных препаратов на основе создания композиции, вызывающей активацию толлподобных рецепторов иммунной системы, и как следствие формирование клеточного иммунитета, использован в проведенной работе.

1.4 ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ПРИ ПОМОЩИ ПОЛИМЕРОВ

В середине прошлого столетия в связи с успешным развитием науки появился большой интерес к химии полимеров, в том числе биополимеров. Белковые вещества составляют обширный ряд биологически активных веществ

(БАВ). Наибольшее значение среди БАВ приобрели ферменты, которые в те годы позволили зародиться самостоятельному направлению - медицинской энзимологии.

Ферменты, как большинство белков, являются лабильными веществами и, кроме того, проявляют сильно выраженные антигенные свойства, поэтому существует потребность в их модификации. Необходимо добиться такого изменения строения фермента, которое при минимальном влиянии на энзиматическую активность, обеспечивает стабилизацию фермента, и к тому же устраняет или уменьшает его вредное воздействие.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Зайцева Елена Сергеевна, 2026 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Петров, Р.В. Иммуногены и вакцины нового поколения / Р.В. Петров, Р.М. Хаитов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. - 608 с.

2. Грипп в северном полушарии вернулся / Ведомственные новости -[Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://www.who .int/news/item/14-10-2022-influenza-in-the-northern-hemisphere-is-back

3. Киселев, О.И. Прогресс в создании пандемических противогриппозных вакцин и технологий их производства // Биотехнология. -Санкт-Петербург, 2010. - №2. - С. 8-24.

4. Khan. R. Impact of influenza vaccine in reduction of incidence and severity of influenza-like illness [Электронный ресурс] // R. Khan, A. Ahmed, R. Zeitounie, R. Khandekar. // East Mediterr Health - 2021. - Sep 21. 27(9) - P. 884-891. - Режим доступа: https://applications.emro.who.int/EMHJ/V27/09/1020-3397-2021-2709-884-891-eng.pdf

5. Медуницин, Н.В. Покровский В.И. Основы иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных болезней: учебное пособие / Н.В. Медуницин, В.И. Покровский. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 512 с.

6. Киселева И.В. Разработка реассортантных гриппозных вакцин: классическое скрещивание или обратная генетика? [Электронный ресурс] / Киселева И.В., Руденко Л.Г. // Инфекции и иммунитет - 2023. -Т. 13. № 2. -С209-218. - Режим доступа: https://iimmun.ru/iimm/issue/view/62

7. Air, G.M. and Laver W. G. / The neuraminidase of influenza virus / Air G.M. and Laver W.G. // Proteins. - 1989. - № 6. - P.341-356.

8. David, A. Studies using double mutants of the conformational transitional transitions in influenza hemagglutinin required for its membrane fusion activity // PNAS. - 1996. - V.93, № 11. - P.12873-12878.

9. Киселев О.И. Пандемии начала XXI века. Грипп птиц и пандемия «свиного» гриппа H1N1 209 года / О.И. Киселев - СПб. : Фолиант, 2016. - 368 с.

10. Иллюстрация вируса гриппа A/H1N1. Visual science [Электронный ресурс] - Режим доступа: https://visual-science.com/

11. Осидак, Л. В. Грипп типа А (H1N1) 2009 в России [Электронный ресурс] / Л. В. Осидак, М. Ю. Еропкин, М. К. Ерофеева // Terra medica nova. - 2009.

- №4-5. - Режим доступа: http://www.terramedica.spb.ru/archive/terra/publication/94

12. ВОЗ не рекомендовала закрывать границы из-за пандемии [Электронный ресурс] // Взгляд. Деловая газета. Инт-т изд. 2009 г. 11 июля. -Режим доступа: https: //vz.ru/news/2009/6/11/296682. html

13. Караулов, А.В. Современные подходы к вакцинопрофилактике гриппа / А.В. Караулов, И.В. Евстигнеева // Вакцинация. - 2011. - Т. 1. - № 1. - С.43-52.

14. Петрова, П.А. Антигенное разнообразие вирусов гриппа, выделенных от детей в 2013-2016 гг. / П.А. Петрова, Н.И. Коновалова // Научно-практическая конференция - биеннале «Грипп: вирусология, эпидемиология, профилактика и лечение»: Сб. тез. докл. - СПб., 2016 г. - С. 23-24.

15. Осидак, Л.В., Гриппферон как средство лечения и профилактики гриппа / Л.В. Осидак, В.П. Дриневский, Е.В. Образцова // Terra Medica nova. - 2009.

- №1. - С.12-16.

16. Волчек, И.В. Эффективность иммунотропных противовирусных препаратов для профилактики гриппа и ОРЗ у взрослых и детей. / И.В. Волчек // Terra Medica Nova. - 2006. - №4 (36). - С. 3-6.

17. Лобзин, Ю.В. «Реаферон-ЕС-Липинт» в профилактике и лечении гриппа и других ОРЗ / Ю.В. Лобзин, М.К Ерофеева, Н.И. Львов // Terra Medica nova.

- 2004. - №1 (33). - С. 9-10.

18. Волчек, И.В. Арбидол как средство профилактики и лечения гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций / И.В. Волчек // Terra Medica nova. - 2004. - №1 (33). - С. 11-12.

19. Koutsakos M., Kedzierska K., Subbarao K. Immune Responses to Avian Influenza Viruses. J. Immunol. 2019;202:382-391. doi: 10.4049/jimmunol.1801070.

20. Медуницин, Н.В. Основы иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных болезней: учебное пособие // Н.В. Медуницин, В.И. Покровский. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - С. 252.

21. Смородинцев, А.А. Принципы поиска, изучения новых противовирусных химиопрепаратов и место химиопрофилактики гриппа в системе противогриппозных мероприятий / А.А. Смородинцев // Химиопрофилактика и химиотерапия гриппа. - Л., 1972. - С. 11-18.

22. Шамшаева, О.В. Отечественная вакцина нового поколения для профилактики гриппа / Вакцинопрофилактика. - 2015. - № 1. - С. 13-16.

23. Geeraedts, F. Superiori immunogenicity of inactivated whole virus H5N1 influenza vaccine is primarily controlled by Toll-like receptor signaling. / Geeraedts F., Goutagny N., Hornung V. et al. // PLoS Pathog. - 2008. - V.358. - P.2573-2584.

24. Петров, Р.В. Иммуногены и вакцины нового поколения / Р.В. Петров, Р.М. Хаитов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. - С.162-164.

25. Беляев, А.Л. Слепушкин А.Н. Современное состояние проблем вируса гриппа и острых респираторных заболеваний (ОРЗ) / А.Л. Беляев, А.Н. Слепушкин // VIII съезд Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: Сб. материалов конф. - М., 2000. - Т.2. - С.232.

26. Ерофеева, М.К. Современные проблеммы гриппа и его специфической профилактики / М.К. Ерофеева И.Ю. Никоноров // Terra Medica Nova. - 2009. - .№2. - С. 3-9.

27. Государственный реестр лекарственных средств [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https: //www. rlsnet. ru/drugs/flyuariks-9236

28. Соколов, Б.П. Белки вирусов гриппа А / Соколов Б.П. // Успехи современной биологии. - 1984. - Т.97. - №1. - С. 131-145.

29. Киселев, О. И. Пандемия начала XXI века. Грипп птиц и пандемия «свиного гриппа» / О.И. Киселев - СПб.: Фолиант, 2016. - С. 230-254.

30. Государственный реестр лекарственных средств [Электронный ресурс]. - Режим доступа:

http://grls.rosminzdrav.ru/GRLS.aspx?RegNumber=%D0%9B%D0%9F-001836&order=RegDate

31. Лебедев, Л.Р. Экспериментальные препараты на основе рекомбинантных ДНК и белков для лечения и профилактики инфекционных заболеваний: дис... д-ра мед. наук: 03.02.02. / Лебедев Леонид Рудольфович. -Кольцово, 2010 г. - 195 с.

32. Beutler, B. TLRs and innate immunity. Blood. 2009. - V. 11, № 113 (7); -Р. 1399-1407 [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http: //www. bloodj ournal. org/content/bloodj ournal/113/7/1399. full. pdf

33. Medzihinov, R. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity [Электронный ресурс] / Medzihinov R., Preston -Huriburt P., Janeway C. // Nature. - 1997. - №388. - Р. 394 - 397. - Режим доступа: https://www.nature.com/articles/41131

34. Mogensen, T. Pathogen recognition and inflammatory signaling in innate immune defenses [Электронный ресурс] // Clin. Microbiol. Rev. - 2009; - V. 22. - P. 240-273. - Режим доступа: http: //cmr. asm. org/content/22/2/240. full

35. Smith, L.R. Phase 1 clinical trials of the safety and immunogenicity of adjuvanted plasmid DNA vaccines encoding influenza A virus H5 hemagglutinin / L.R. Smith, M.K. Wloch, M. Ye et al. // Vaccine - 2010. - 28.2565 -72.

36. Петров, Р.В. Иммуногены и вакцины нового поколения / Р.В. Петров, Р.М. Хаитов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. - С.191-192.

37. Гендон, Ю.З. Высокая эффективность и безопасность вирусных вакцин и бездоказательная критика // Вопросы вирусологии. - М., - 2013. - № 6. - Т. 58. -С. 5-13.

38. Березина, И.В. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы / И.В. Березина, В.К. Антонова, К. Мартинена; под ред. Березина. М.: МГУ., 1976. - Т. 1. - 296 с., Т. 2. - 358 с.

39. Березина, И.В. Введение в прикладную энзимологию / И.В. Березина, К. Мартинена. - М.: МГУ, 1982. - 383 с.

40. Zuza, M. Immobilization of modified penicillin G acylase on Sepabeads carriers / Zuza M., Milosavic N. Knezevic-Jugovic Z. // Chemical Papers. - 2009. -V.63.(2). - P.117-124.

41. Kobayashi, M. Cross-linked stabilisation of trypsin with dextran-dialdehyde // Kobayashi, M., Takatsu K., Biosci., Biotechnol., Biochem. - 1994. - V.58. (№ 2). -Р. 275-278.

42. Kobayashi, M., Covalent modification of serine proteinase from Aspergillus sojae by dextran-dialdehyde / Kobayashi, M., Yamaguchi M., Yamagata Y., Ichishima E. // Oyo Toshitsu Kagaki. - 1995. - V.42. - № 2. - Р. 115-120.

43. Москвичев, Б.В. Многоцелевая модификация биологически активных веществ в биоинженерии / Б.В. Москвичёв // Иммобилизованные ферменты в медицине и медицинской промышленности: сб. научн. трудов ВНИТИАФ. - Л., 1982. - 137 с.

44. Линденбаум, Г.М. Химическая модификация террилитина водорастворимыми окисленными декстранами / Г.М. Линденбаум, М.Д. Яковлева, О.А. Миргородская // Прикл. биохим. и микробиол. - 1982. - Т. 18. - № 2. - С. 212220.

45. Иванова, Г.П. Иммобилизация трипсина на минеральной матрице / Г.П. Иванова [и др.] // Приклад. биохим. и микробиол. - 1978. - Т. 14. - №4 - С. 543547.

46. Москвичев, Б.В. Стрептокиназа / Б.В. Москвичев, Г.А. Михайлец // Перспективы создания лекарственных средств методами биологического и химического синтеза. - М., 1990. - С. 149-158.

47. Тенникова, Т.Б. Изучение физико-химических свойств протеолитического фермента террилитина, модифицированного сополимером на основе винилпирролидона / Т.Б. Тенникова [и др.] // Биохимия. - 1980. - Т. 45, Вып. 3. - С. 438-448.

48. Таратина, Т.М. Изучение конформационных свойств и конформацонной стабильности стрептокиназы и ее полимерного производного /

Т.М. Таратина, Н.Г. Илларионова, Б.В. Москвичев // Биохимия. - 1985. -Т.50. -№8. - С. 1313-1317.

49. Капуцкий, Ф.Н. Лекарственные препараты на основе производных целлюлозы / Ф.Н. Капуцкий, Т.Л. Юркштович. - Минск, 1989. - 111 с.

50. Глинка, Л.А. Синтез и свойства гидрогелей на основе модифицированных крахмалов / Л.А. Глинка, В.И. Кузнецова, Г.В. Ракова // Полимеры-90. Сб. тр. юбил. конфер. отд. полимеров и композиц. материалов ИХФ АН СССР. АН СССР 1991 г. - Черноголовка, 1991. - Т.2 - С. 117-120.

51. Платэ, Н.А. Физиологически активные полимеры / Н.А. Платэ, А.Е. Васильев. - М.: Химия, 1986. - 294 с.

52. Leza, M.L., Guzman G.M. Transformaciones en celulosa / M.L. Leza, G.M. Guzman // Rev. Plast. mod. - 1991. - V.42. - № 415. - P. 59-69.

53. Trindade, T. Nanocomposite particles for bio-application. Materials and Biointerface / Trindade T. Ana L.D. da Silva // Pan Stanford. Publishing, 2012. - 287 c.

54. Jeong, Y. Synthesis of Dextran Methoxy Poly(ethylene glycol) Block Copolymer [Электронный ресурс] / Y. Jeong, D.G. Kim, D.H. Kang // Journal of Chemistry. - 2013. - Режим доступа: http://dx.doi.org/10.1155/2013/414185

55. Гришина, Г.В. Современные кровезаменители при кровопотере и геморрагическом шоке [Электронный ресурс] / Г.В. Гришина // Вестник службы крови. №4 - 2013. - Режим доступа: http ://www. fskl. ru/wp-content/uploads/2013/12/vestnik 4 sverka2.pdf

56. Платэ, Н.А. Физиологически активные полимеры / Н.А Платэ, А.Е. Васильев. - М.: Химия, 1986. - 294 с.

57. Роговин, З.А. Химические превращения и модификация целлюлозы / З.А. Роговин, Л.С. Гольбрайх. - М.: Химия, -1979. 208 с.

58. Corfield, A.P., The specificity of viral sialidases. The use of oligosaccharide substrates to probe enzyme characteristics and strain specific differences // A.P. Corfield, M. Wember, R. Schauer, R. Rott // Eur J. Biochem. - 1982. - V.124. - Р. 521-525.

59. Meibohm, B. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of biotech drugs. Principles and case studies in drug development / Edited by Meibohm B.- Weinheim, Germany.: WILEY-VCH. - 2006. - P. 279-282.

60. Moriyama, K., Regulated insulin release from biodegradable dextran hydrogels, containing poly(ethylenglycol) // K. Moriyama, N. J. Yui Controlled Release. - 1996. - V.42. - № 3. - P.237-248.

61. Torchilin, V.P. Study of modified sephadex bound insulin in dog experiments / V.P. Torchilin, E.V. LL'ina, A.V. Mazaev, B.S. Lebedev, V.N. Smimov, Chasov E.I. // J. Solid-Phase Biochem. - 1978. - V. 2. - № 3. - P. 187-193.

62. Odya, С.Е. Soluble dextran complexes of kallikrein, bradykinin and enzyme inhibitors / С.Е. Odya, Y. Levin, E.G. Erdos // Bioehem. Pharmacol. - 1973. - V. 27. -№ 2. - P. 173-179.

63. Larionova, U.Ig. Modification of trypsin pancreatic inhibitor by polysaccharides for prolongation of therapeutic effects / U.Ig Larionova, I.Y. Sakharov, N.F. Kazanekaya // Ens. Eng./Eds. L. Wingard, I. Berezin, A. Klyosov N.Y. and L.: Plenum Press. - 1980. - P. 241-255.

64. Study of the structure of streptokinase conjugates with a hydrophilic vinylpyrrolidone copolymer / T.M. Taratina, V.Ye. Potapenko, S.I. Klenin, S.P. Bartoshevich, L.A. Volkova, I.G. Denisov, B.V. Moskvichev [Электронный ресурс] // Biophysical Chemistry. All-Union Research Tehnology Institute of Antibiotics and Medical Enzymes. Leningrad. - 1990. - V. 38. - P. 1-10 - Режим доступа: http://europepmc.org/abstract/MED/2085644

65. Максименко, А. В. Вариации разработок и применения терапевтических белковых конъюгатов нацеленного действия / А.В. Максименко // Ж. Рос.хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. - 2012. - T. 56. - № 3-4. - С. 89-96.

66. Yasukawa, T. Targeting of Interferon to Choroidal Neovascularization by Use of Dextran and Metal Coordination / T. Yasukawa, H. Kimura, Y. Tabata, H. Kamizuru // Invest. Ophtalmol. Vis. Sci. - 2002. - V. 4. - № 3. - P. 842-848.

67. Shuvaev, V.V. PECAM-targeted delivery of SOD inhibits endothelial inflammatory response / V.V. Shuvaev, J. Han, K.J. Yu, S. Huang [Электронный

ресурс] // The FASEB J. - 2011. - V. 25. - P. 348-357 - Режим доступа: http: //www. ncbi. nlm. nih. gov/pmc/articles/PMC3005426/

68. Айсина, Р.Б. Коньюгаты стрептокиназа - полиэтиленгликоль с повышенной стабильностью и сниженными побочными эффектами / Р.Б. Айсина, Л.И. Мухаметова, и др. / Биоорганическая химия. - 2014 г. - Том 40. - №2 5. - С. 560570.

69. Interaction mechanism of mono-PEGylated proteins in electrostatic interaction chromatography / Abe Mitsuyo, Parvin Akbarzaderaleh, Masataka Hamachi, Noriko Yoshimoto and Shuichi Yamamoto [Электронный ресурс] // Biotechnol. J. -2010. - V.5. - P.477-483. - Режим доступа: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/biot.201000013/epdf

70. Effects of protein conformational change on separation performance in electrostatic interaction chromatography: Unfolded proteins and PEGylated proteins / S. Yamamoto, S. Fujii, N. Yoshimoto, P. J. Akbaruzadehlaleh // Biotechnol. - 2007. -V. 132. - Р. 196-201.

71. Цхоу Вайдог, Ксиао Квингджианг, Сун Ли [и др.] Интерферон альфа-2В-модифицированный полиэтиленгликолем, получение препарата и его использование (Патент РФ 2485134) / Официальный бюллетень изобретения. Полезные модели. - 2013. - № 17. - 32 с.

72. Inada, Y. Polyethylene Glycol(PEG)-Protein Conjugates: Application to Biomedical and Biotechnological Processes / Y. Inada с соавт. // J. Bioactive and Compatible Polymers. - 1990. - V. 5. - Р. 343-364.

73. Davis Frank F., Placzuk Nicholas C., Van Es. Theodorus Non-immunogenic polypeptides /; applicant and patentee (Pat. USA 4179337). - 1977. published 18.

74. Ивашкин, В.Т. Эффективность и безопасность первого отечественного препарата пегилированного интерферона альфа -2b «ПегАльтевир» у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С: предварительные результаты клинического исследования III фазы / В.Т. Ивашкин, Е.Н. Бессонова, П.О. Богомолов и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - М.: Издательский дом "М-Вести". - 2014. - T. 24. - № 1. - С.47-55.

75. Savoka, K. Preparation of non-immunogenic arginase by the covalent attachment of polyethylene glycol / K. Savoka, A. Abuchowski, T.V. Es // BBA. - 1979.

- V. 578. - № 1. - P. 47-53.

76. Растворы высокомолекулярного модифицированного гемоглобина, их физико-химические характеристики и биологическая оценка / Л.Г. Богомолова, Г.В. Самсонов, М.М. Щерба, Т.В. Знаменская // Пробл. гематол. и переливания крови. - 1979. - № 8. - С. 10-14.

77. Modification of E. coli L-asparaginase with polyethylene glycol disappearance of binding ability to anti-asparaginase serum / Y. Ashihara, T. Kono, S. Yamasaki, Y. Inada // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1978. - V. 83. - № 2. -P. 385-391.

78. Lainka, E. Polyethylene Glycol-Conjugated Adenosine Deaminase (ADA) Therapy Provides Temporary Immune Reconstitution to a Child with Delayed-Onset ADA Deficiency [Электронный ресурс] // Elke Lainka, Michael S. Hershfield, Ines Santisteban, Pawan Bali, et al. Clin Diagn Lab Immunol. - 2005. - V. 12. -№7. - P. 861866. - Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih. gov/pmc/articles/PMC 1182205/

79. Pinherio, J.P. Pharmacology of PEG-asparaginase in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL) / Pinherio J.P., Lanvers C. Wurthwein G., Boos J. [Электронный ресурс] // J. Blood. - 2002. - V. 100 (5) - P. 1923-1925. - Режим доступа: http ://www. bloodj ournal. org/content/100/5/1923? sso-checked=true

80. Иммобилизация фермента L-аспарагиназы E. Coli на полисахаридах. Ковалентное связывание с растворимой КМ-целлюлозой / О.Б. Кинстлер, А.С. Карсакевич, С.Я. Шумченко, Р.А. Жагат // Химия природн. соед. - 1979. - № 3.

- С. 383-388.

81. Package Insert PEG-IntronTM (Peginterferon alfa-2b) Powder for Injection, Schering Corporation. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda docs/label/2001/pegsche080701lb.htm

82. Package Insert PEGASYS® (peginterferon alfa-2a) Hoffmann-La Roche Inc. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda docs/label/2002/pegihof101602lb.htm

83. G. Ginger, A.N. Mather Pat., МПК / Streptokinase chemically bonded to a carbohydrate matrix (US 3639213) 1972. - published 20. A61K38/16, C12N11/10.

84. G. Ginger, A.N. Mather; applicant and patentee Baxter Laboratories INC / Methods of dissolving blood clots and the like with streptokinase chemically bonded to a carbohydrate matrix (Pat. US 3980772, МПК A61K38/16; C12N11/10). -1976. -published 14.

85. Голиков, А.П. Системная тромболитическая терапия при инфаркте миокарда / А.П. Голиков, Т.В. Зверева, Н.Г. Кузина // Кардиология. - 1985. - № 10.

- С. 34-39.

86. Влияние стрептодеказы у больных острым инфарктом миокарда / А.П. Голиков, Т.В. Зверева, Т.К. Платонова, В.Б. Хватов // Клиническая медицина. -1984. - № 1. - С. 37-41.

87. Мазаев, А.В. Влияние стрептодеказы с гепарином на состояние гемостаза у больных острым инфарктом миокарда / А.В. Мазаев, Л.А. Суворова, Н.Г. Барьбакарь // Кардиология. - 1984. - № 7. - С. 62-65.

88. Миррахимов, М.М. Клинический опыт применения стрептодеказы на догоспитальном этапе лечения острого инфаркта миокарда / М.М. Миррахимов, Т.В. Балтабаев, Н.Л. Цой // Кардиология. - 1987. - № 2. - С. 21-24.

89. Таратина, Т.М. Синтез и свойства полимерных производных стрептокиназы: дис. ... канд. биол. наук: 03.00.23 / Таратина Татьяна Михайловна.

- Л., 1985. - 195 с.

90. Синтез водорастворимых производных декстрана, содержащих химически присоединенные антибиотики / В.А. Снежко, В.П. Комар, К.П. Хомяков, А.Д. Вирник, Р.Г. Жбанков, Г.Я. Розенберг, Э.А. Рогозин // Высокомол. Соед. - 1974. - Т. 16 А. - № 10. - С. 2233-2239.

91. Reiner, R.R. Surface modification of proteins / R.R. Reiner, H. Doring // Ens. Eng. - 1978. - V. 4. - P. 111-116.

92. Полякова, И.Н. Химическая модификация биологически активных веществ с целью создания новых лекарственных форм. - дис. ... канд. хим. наук: 02.00.10 / Полякова Ирина Николаевна. - СПб., 2012. - 129 с.

93. Полякова, И.Н. Изучение химической модификации ремантадина с помощью полисахаридов / И.Н. Полякова, Б.В. Москвичев, А.И. Гинак // Известия Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета). СПбГТИ (ТУ). - 2009. - №6 (32) - С. 57-59.

94. Шкурупий, В.А. Туберкулезный гранулематоз. Цитофизеология и адресная терапия. - М., - 2007 г. - С. 109-150.

95. Ida Y., Kitamura M., Chikamori I., Okamura Y. Urokinase derivative and its preparation / applicant and patentee Green Cross Corp. (Pat. JPS 54113488 (A), МПКA61K38/46; C12N9/72). -1978.

96. Бухаров, С.В. Химия и технология продуктов тонкого органического синтеза / С.В. Бухаров, Г.Н. Нугумова. - Казань. - 2013. - С. 123-124.

97. Москвичев, Б.В. Стрептодеказа / Б.В. Москвичев, Г.А. Михайлец // Перспективы создания лекарственных средств методами биологического и химического синтеза: сб. науч. тр. ВНИТИАФ. - М. - 1990. - С. 149-158.

98. Москвичев, Б.В., Таратина Т.М., Иванова Г.П. и др. Способ получения иммобилизованной стрептокиназы. (Авторское свидетельство № 1371004 (СССР), кл. С12 к 5). Офиц. Бюлл. «Открытия, изобретения, промышленные образцы, товарные знаки». - 1987.

99. Клинико-биологическое изучение нового тромболитического препарата - «стрептодеказа» / Е.И. Чазов, А.В. Мазаев, Л.А. Суворова, Ю.И. Воронов, В.П. Торчилин, В.Н. Смирнов, А.П. Голиков, Т.В. Зверева // Иммобилизованные ферменты в медицине и медицинской промышленности: сб. науч. статей. - Л. - 1982. - С. 21-37.

100. Шальнев, В.И. Опыт применения стрептодеказы в остром периоде инфаркта миокарда / В.И. Шальнев, Г.И. Дерягина // Клиническая медицина. -1986. - № 7. - С. 41-45.

101. Применение стрептодеказы в лечении больных инфарктом миокарда / Н.А. Гватуа, В.А. Шумаков, И.Ф. Ленчевская, И.Э. Малиновская, Л.В. Шкляр, Л.К. Иванова, Б.Г. Насалык, Н.Л. Гущенко // Врачебное дело. - 1984. - №2 10. - С. 48-51.

102. Тромболизирующая терапия при инфаркте миокарда / В.Ф. Кубышкин, Д.В. Зяблов, О.Т. Лагкути, Л.Н. Чернышова, А.И. Зеликман // Советская медицина. - 1988. - № 1. - С. 56-58.

103. Терридеказа - усовершенствованная лекарственная форма протеолитического фермента, продуцируемого Aspergillus terrícola / И.В. Нынь, Я.Б. Москвичева, Г.П. Иванова, Т.М. Таратина / Журнал Поликлиника. - 2007. -№ 6. - С. 87-89.

104. Фаль, Н.И. Влияние террилитина и его иммобилизованной формы на активность некоторых антибиотиков / Н.И. Фаль, И.Е. Райко, Г.Ф. Карпенко // Ж. ушн., нос. и горл. болезней. - 1986. - № 1. - С. 53-56.

105. Поляк, М.С. Экспериментальное изучение лечебных свойств иммобилизованного террилитина / М.С. Поляк, Л.А. Бухалова, Л.М. Павлова // Иммобилизованные ферменты в медицине и медицинской промышленности: сб. науч. ст. ВНИТИАФ. - Л. - 1982. - С. 92-99.

106. Песчанская, И.Н. Применение нативного и иммобилизованного террилитина в комплексной терапии внелегочного туберкулеза в эксперименте и клинике / И.Н. Песчанская, Р.К. Ягафарова, Л.И. Фатеева // IV Всесоюзный симпозиум по медицинской энзимологии: Сб.тез.докл. - Алма-Ата, 1983. - С. 207208.

107. Снежко, В.А. Влияние типа химической связи между производными декстрана и антибиотиком на бактериостатическую активность полимерного соединения // Антибиотики. - 1972. - Т.71. - № 1. - С. 48-52.

108. Снежко, В.А. Синтез водорастворимых производных декстрана, содержащих химически присоединенные антибиотики // Снежко, В.А. и др. Высокомол. соед. сер. А. - 1974. - Т.16, № 10. - С. 2233-2239.

109. Хомяков, К.П. и др. Синтез водорастворимых производных декстрана, содержащих химически присоединенный антибиотик гентамицин // Изв. ВУЗов, Хим. и хим. техн. - 1979. - Т.20. - № 10. - С. 1267-1271.

110. Arnon, R., Hurwitz E. - In.: Targeted Drugs / Ed. E.P. Goldberg. Wiley, N.J - Chichester etc. - 1983. - P. 23-25.

111. Arnon R., Sela M. // Immonol. Rev. - 1982. - V.62. - № 1. - Р. 5-27.

112. Hurwitz // Biopolymers - 1983. - V.22, № 11. - Р.557-567.

113. Полякова, И.Н. Изучение химической модификации ремантадина с помощью полисахаридов / И.Н. Полякова, Б.В. Москвичев, А.И. Гинак // «Известия» Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета). СПбГТИ (ТУ). - 2009. - № 6 (32). - С. 57-59.

114. Нынь, И.В. Изучение процесса химической модификации соединений, содержащих первичные аминогруппы, под воздействием окисленных декстранов / И.В. Нынь, А.И. Гинак, И.Н. Полякова, Е.С. Зайцева // Актуальные проблемы химии, биологии и медицины: монография Кн. 3. / Красноярск: Научно-инновационный центр. - 2011. - С. 154-176.

115. Полякова, И.Н. Химическая модификация ремантадина с помощью полисахаридов и свойства полученного продукта / И.Н. Полякова, А.И. Гинак, Б.В. Москвичев, Г.С. Шитикова // Известия Волгоградского государственного технического университета. Серия Химия и технология элементоорганических мономеров и полимерных материалов. - Волгоград. - 2011. - № 2 (75). - С. 99-102.

116. Полякова, И.Н. Биополимерная форма ремантадина и ее противовирусная активность на модели герпетической инфекции / И.Н. Полякова, Г.С. Шитикова, И.В. Нынь // XII международная научно-практическая конференция «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности». Высокие технологии, исследования, промышленность. Сб. тез. докл. под ред. А.П. Кудинова. - СПб. 2011. - С. 234-236.

117. Полякова, И.Н. Биополимерная форма ремантадина и ее противовирусная активность на модели клещевого энцефалита / И.Н. Полякова,

Г.С. Шитикова, И.В. Нынь // II международная научно-практическая конференция «Высокие технологии, фундамендальные и прикладные исследования в физиологии, фармакологии и медицине». Сб. тез. докл. под ред. А.П. Кудинова, Б.В. Крылова. - СПб.: Изд-во Политехн. ун-та. - 2011. - Т.1. - С. 49-51.

118. Басин, В.Н. Экономический эффект от использования новых лекарственных препаратов / В.Н. Басин, В.П. Карливан, Н.А. Соколова // Методы получения и анализа биохимических реактивов / Тез. Докл. III Всесоюзная Научная конференция. Сб. тез. докл. - 1979. - С. 5-6.

119. Хаитов, Р.М. Вакцины нового поколения и проблемы биобезопасности / Р.М. Хаитов // Цитокины и воспаление. - 2005. - № 3.

120. Переверзев, А.Д. Факторы влияющие на адъювантные свойства производных хитозана, при парентеральном введении инктивированных гриппозных вакцин // А.Д. Переверзев, С.М. Шинкарев, С.Г. Маркушин и др.// Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2012. - №4 - С.80-86.

121. Чернова, Т. М., Противовирусные препараты при лечении гриппа / Т.М. Чернова, В.Н. Тимченко // Terra Medica. - 2011. - №1. - С. 10-14.

122. Еженедельный эпидемиологический бюллетень Гриппозные вакцины: документ по позиции ВОЗ, [Электронный ресурс]. - 2012.- №47. - С.461-476. -Режим доступа: http: //www. who. int/wer/2012/wer8747/en/

123. World Health Organization. Initiative for Vaccine Reserch (IVR). Options for Live Attenuated Influenza Vaccines (LAIV) In the Control of Epidemic and Pandemic Influenza [Электронный ресурс]. 12-13 June 2007. - Режим доступа http://www.who.int/vaccine resherch/diseases/influenza/meeting 120707/en/index.html

124. Патент РФ 1580617 А1, 10.02.1997 / Способ получения вакцины против вируса гриппа. Заявка №4441018/14 // Р.В. Петров, Р.М. Хаитов, А.В. Некрасов, С.Я. Мельников [и др.]; заявитель и патентообладатель Институт иммунологии. -заявл. 13.05.1988; опубл. 10.02.1997.

125. Патент РФ 2164148 С1, 20.03.2001 / Вакцина против вируса гриппа и способ ее получения. Заявка №2000120902 // Р.В. Петров, Р.М. Хаитов, А.В. Некрасов, Н.Г. Пучкова, А.С. Иванова. - заявл. 20.03.2001; опубл. 20.03.2001.

126. Патент РФ 2446824 / Вакцина против гриппа и способ ее получения // М.М. Алсынбаев, Н.В. Загидуллин, С.А. Кедик. - заявл. 20.07.2010; опубл. 10.04.2012.

127. Патент РФ 2000004 / Сополимеры 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона, обладающие иммуностимулирующим действием // С.А. Кедик, Е.К. Федоров, В.И. Свергун [и др.]. - заявл. 16.07.1992; опубл. 15.02.1993.

128. Патент РФ 2217162 / Вакцина против вирусных инфекций // Л.Р. Лебедев, Л.И. Карпенко, А.А. Ильичев; заявитель и патентообладатель Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор». - заявл. 10.04.2000; опубл. 27.11.2003.

129. Таблетка с микрочипом от Novartis уже сертифицирована в Европпе [Электронный ресурс]//Клиническая фармация. - 2012. - Режим доступа: http://clinical-pharmacy.ru/digest/new-lecarstva/1584-tabletka-s-ikrochipomot-novartis-uzhe-sertificirovana-v-evrope. html

130. Демина, Н.Б. Биофармация - путь к созданию инновационных лекарственных средств [Электронный ресурс]. / Демина Н.Б. // Фармжурнал 2013. - № 1(2). - Режим доступа: http: //www.pharmj ournal .ru/articles/stati/biofarmacziya-put-k-sozdaniyu-innovaczionnyix-lekarstvennyix-sredstv

131. Патент РФ 2480480 С2 / Способы применения модифицированного вируса гриппа // Э. Хоффманн, А.С. Липатов, Р.Г. Уэбстер, Р.Д. Уэбби, Е.А. Говоркова; заявитель и патентообладатель Ст. Джуд Чилдрен'с Рисёч Хоспитал. - заявл. 28.07.2006; опубл. 27.04.2013.

132. Патент РФ 2420535 С2 / Модифицированный вирус гриппа, предназначенный для мониторинга и повышения эффективности вакцины // Э. Хоффманн, А.С. Липатов, Р.Г. Уэбстер, Р.Д. Уэбби, Е.А. Говоркова; заявитель и патентообладатель Ст. Джуд Чилдрен'с Рисёч Хоспитал. - заявл. 10.09.2009; опубл. 10.06.2011.

133. Патент РФ 2008107875 А / Модифицированный вирус гриппа, предназначенный для мониторинга и повышения эффективности вакцины // Э. Хоффманн, А.С. Липатов, Р.Г. Уэбстер, Р.Д. Уэбби, Е.А. Говоркова; заявитель и

патентообладатель Ст. Джуд Чилдрен'с Рисёч Хоспитал. - заявл. 10.09.2009; опубл. 10.06.2011.

134. ОФС 1.3.001.15 «Реактивы. Индикаторы» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 1375-1759. - Режим доступа: https: //femb.ru/record/pharmacopea14

135. ОФС 1.3.002.15 «Титрованные растворы» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] -Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 1760-1794. - Режим доступа: https: //femb .ru/record/pharmacopea14

136. ОФС 1.3.003.15 «Буферные растворы» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 1795-1814. - Режим доступа: https: //femb.ru/record/pharmacopea14

137. ОФС 1.2.1.1.0003.15 «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 749-758. - Режим доступа: https: //femb.ru/record/pharmacopea 14

138. Roe, J.H. The determination of dextran in blood and urine with anthrone reagent / J.H. Roe // J. Biol. Chem. - 1954. - Vol. 208. - № 2. - Р. 889-896.

139. ОФС 1.2.3.0019.15. «Определение сахаров спектрофотометрическим методом» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 1079-1083. - Режим доступа: https ://femb. ru/record/pharmacopea14

140. ОФС 1.2.3.0012.15 «Определение белка» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 1029-1031. - Режим доступа: https: //femb. ru/record/pharmacopea 14

141. Snyder, S. L. Convenient TNBS method for determination of amines/ S.L. Snyder, P.Z. Sobocinski // Analyt. Biochemistry. - 1975. - Vol. 64. - №2. - Р. 284-288.

142. Fields, R. Maesurdesement of Amino Groups in Proteins and Peptides / R. Fields // Biochem. J. - 1971. -Vol. 124. - P. 581-590.

143. ОФС 1.2.3.0011.15 «Определение азота в органических соединениях методом Къельдаля Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 1019-1025. - Режим доступа: https: //femb. ru/record/pharmacopea 14

144. Остерман, Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот / Л.А. Остерман. - М.: Наука, 1985. - 536 с.

145. Линденбаум, Г.М. Исследование химической модификации некоторых протеолитических ферментов водорастворимыми декстранами: дисс. ... канд. хим. наук. / Линденбаум, Г.М. - Л., 1978. - 196 с.

146. Guthrie, R. The «Dialdehydes» from periodate oxidation of carbohydrates / R.Guthrie // Adv. in Carbohydr. Chem., 1961. -Vol.16. - P.105-158.

147. Rutherford, H. Oxydation of cellulose: the reaction with periodic acid / H. Rutherford, F. Minor, A. Martinh // J. Res. Nat. Bur. Stand., 1942. - Vol. 29. - № 12.

- P. 131-141.

148. ОФС 1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатов химического эксперимента» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека.

- С. 289-318. - Режим доступа: https: //femb. ru/record/pharmacopea14

149. ОФС 1.2.1.0023.15. «Электрофорез в полиакриламидном геле» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 1. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 650-669. - Режим доступа: https: //femb. ru/record/pharmacopea 14

150. ОФС 3.3.1.0028.15. «Вакцина гриппозная инактивированная» Государственная фармакопея Российской Федерации издание XIV Том 4. [Электронный ресурс] - Федеральная электронная медицинская библиотека. - С. 5402 - 5418. - Режим доступа: https ://femb.ru/record/pharmacopea14

151. МУ 3.3.2.1758-03 Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа //

государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича.

152. Иванова, Г.П. Иммобилизация трипсина на минеральной матрице / Г.П. Иванова, Л.А. Зайцева, О.А. Миргородская // Приклад. биохим. и микробиол. -1978. - Т. 14, № 4 - С. 543-547.

153. Суворова, О.Б. Исследование реакции полисхаридальдегидов с С- и N-нуклеофилами с целью создания новых биологически активных веществ. - дис. ... канд. фарм. наук: 15.00.02 / Суворова Ольга Борисовна. - СПб, 1999. - 172 с.

154. Guthrie, R. The «Dialdehydes» from periodate oxidation of carbohydrates / R. Guthrie // Adv. in Carbohydr. Chem. - 1961. - Vol.16. - P. 105-158.

155. Rutherford, H. Oxydation of cellulose: the reaction with periodic acid / H. Rutherford, F. Minor, A. Martin // J. Res. Nat. Bur. Stand. - 1942. - Vol. 29. - № 12. -P. 131-149.

156. Зайцева, Е.С. Изучение процесса химической модификации соединений, содержащих первичные аминогруппы, под воздействием окисленных декстранов с различной степенью окисления // XII международная научно -практическая конференция «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности» под ред. А.П. Кудинова. Сб. тез. докл. - СПб., Изд-во Политехн. ун-та., 2011. - Т. 1. - С. 212-216.

157. Зайцева, Е.С. Изучение процесса химической модификации соединений, содержащих первичные аминогруппы, под воздействием окисленных декстранов / И.В. Нынь, А.И. Гинак, И.Н. Полякова, Е.С. Зайцева // Коллективная монография «Актуальные проблемы химии, биологии и медицины» - Красноярск, Изд-во Научно-инновационный центр, 2011. - Т. 3. - С. 154-176.

158. Зайцева, Е.С. Изучение модификации антигена вируса гриппа B/Florida/04/2006 окисленным декстраном / Е.С. Зайцева, О.Ю. Талалаева, Т.Г. Титова, И.Н. Полякова // II Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов «Современная российская наука глазами молодых исследователей». Сб. тез. докл. - Красноярск, 2012. - Т. 3. - С. 88-91.

159. Мухленов, И.П. Общая химическая технология / И.П. Мухленов. - М.: Высшая школа, 1984. - С. 41-41.

160. Inflluenza Research Database [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http: //www.fludb.org/

161. Yuan, Lu Swartz Production and stabilization of the trimeric influenza hemagglutinin stem domain for porentially broadly protective influenza vaccines [Электронный ресурс] / Yuan Lu, John P. Welsh, James R. // PNAS. - Vol. 111. - 2014. - P.125-130. - Режим доступа: http://www.pnas.org/content/111/1/125.full?sid=0a163317-e906-4fd9-8e4e-ce9f6528c7a5

162. Цыбалова, Л.М. Универсальные вакцины против гриппа. Разработки, перспективы использования [Электронный ресурс] / Л.М. Цыбалова, О.И. Киселев // Вопросы вирусологии. с 2012. - №1. - Режим доступа: http://cyberleninka.ru/article/n7universalnye-vaktsiny-protiv-grippa-razrabotki-perspektivy-ispolzovaniya

163. Зайцева, Е.С. Спектрофотометрическое определение L-тирозина в наноконструкциях на основе субъединиц вируса гриппа B/Florida/04/2006 и биоразлагаемого полимера декстрана / Е.С. Зайцева, И.Н. Полякова, А.И. Гинак // Известия ВУЗОВ. Прикладная химия и биотехнология. - 2018. - №8(3). - С. 48-54.

164. Zaytseva, E.S. Molecular structures suitable for the development of antiviral new generation vaccines // Applied and Fundamental Studies. Proceeding of the 6th International Conference. St. Louis, Missouri, USA. - 2014. - P. 75-78.

165. Зайцева, Е.С. Молекулярная конструкция на основе антигенов вируса гриппа / Е.С. Зайцева, В.П. Трухин, Б.В. Москвичев // «В мире научных открытий». - Красноярск, Научно-инновационный центр. - 2016.- С. 103-119.

166. Cole S.L., Cybulski V.A., Whitacre M., Lathrop S.K., Bazin-Lee H., Burkhart D., Evans J.T. Influenza vaccines using liposomal formulations of toll-like receptor (TLR) 7/8 and 4 agonists as adjuvants. J. Immunol. - 2020. - V.204. - P. 212245.

167. GoffP.H., Hayashi T., Martínez-Gil L., Corr M., Crain B., Yao S., Cottam H.B., Chan M., Ramos I., Eggink D., et al. Synthetic Toll-Like Receptor 4 (TLR4) and TLR7 Ligands as Influenza Virus Vaccine Adjuvants Induce Rapid, Sustained, and Broadly Protective Responses. J. Virol. - 2015. - V.89. - P. 3221-3235/ doi: 10.1128/JVI.03337-14.

168. Сергеева, М.В. Вакцины против высоко патогенных вирусов гриппа птичьего происхождения / М.В. Сергеева, Ю.Р. Романова // Вопросы вирусологии. - 2013. - № 58(4) - С.4-9.

169. Зайцева, Е.С. Изучение модификации антигена вируса гриппа B/Florida/04/2006 окисленным декстраном в присутствии различных первичных аминов / Зайцева Е.С., Титова Т.Г., Полякова И.Н. // III Международная научно-практическая конференция «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» под ред. А.П. Кудинова: Сб. тез. докл. -СПб., Изд-во Политехн. ун-та. - 2012. - Т. 1. - С. 130-131.

170. Изучение структуры антигенов вируса гриппа методом химической модификации / Е.С. Зайцева, В.П. Трухин, Т.Г. Титова, О.А. Анисенкова // VIII Международная научно-практическая конференция «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» под ред. А.П. Кудинова: Сб. тез. докл. - СПб., Изд-во Политехн. ун-та. - 2015. - Т. 1. - С. 40-44.

171. Иммуногенность химически модифицированных полисахаридами антигенов вируса гриппа / Е.С. Зайцева, О.Ю. Талалаева, Я.Б. Москвичева, И.В. Нынь, А.И. Гинак // Известия Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета). - 2012. - №15. - С. 7578.

172. Зайцева, Е.С. Полимерные наноконструкции антигенов вируса гриппа / Е.С. Зайцева, Т.Г. Титова, С.В. Петровский, Б.В. Москвичев // Сборник статей IV Московского Международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». - М., ЗАО «Экспо-биохим-технологии» РХТУ им. Д.И. Менделеева. - 2013. - Т. 1. - С. 128-129.

173. Титова, Т.Г. Модификация антигенов вируса гриппа биоразлагаемым полимерным носителем / Т.Г. Титова, Е.С. Зайцева, В.П. Трухин // Сборник материалов II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновации в здоровье нации»: Сб. тез. докл. - СПб. -2014. - С. 605-608.

174. Зайцева, Е.С. Повышение иммуногенности субъединичной гриппозной вакцины с помощью конъюгирования поверхностных антигенов вируса гриппа с окисленным декстраном // Научно-практическая конференция-биеннале «Грипп: Вирусология, эпидемиология, профилактика и лечение»: Сб. тез. докл. - СПб. -2016. - С. 40-43.

175. Зайцева, Е.С. Новый способ повышения иммуногенной активности вакцинных препаратов против гриппа // XII Евразийская научная конференция «Донозология®-2016», «Биологический фактор и микробиологическая диагностика при формировании здорового образа жизни»: Сб. тез. докл. - СПб. -2016. - С. 143-146.

176. Комплексаная химическая модификация антигенов вируса гриппа / Зайцева, Е.С. Аракелов, С.А., Москвичев, Б.В., Гинак, А.И. // Известия Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета. - 2024. - №69(95). - С. 69-73.

177. Xаитов, Р.М. Иммунология / Р.М. Xаитов и др. - М.: Медицина, 2000.

- 431 с.

178. Meng S., Liu Z., Xu L., Li L., Mei S., Bao L., Deng W., Li L., Lei R., Xie L., et al. Intranasal Immunization with Recombinant HA and Mast Cell Activator C48/80 Elicits Protective Immunity against 2009 Pandemic H1N1 Influenza in Mice. PLoS ONE.

- 2011. - V.6. - P.19863. doi: 10.1371/journal.pone.0019863.

179. Pharmacopeia article of manufacturer P N003224/01 - 270313. Intranasal allantoic live influenza vaccine. 2013. (in Russian).

180. Пустыльников, С.В. Декстран повышает соотношение ИФН-у/ИЛ-10 в макрофагах человека, зараженных микобактериями туберкулеза [Электронный

ресурс] / С.В. Пустыльников // Медицина и образование в Сибири. №4 - 2015 г. -Режим доступа: http: //ngmu.ru/cozo/mos/article/text full .php?id= 1842

181. Kasturi S.P., Skountzou I., Albrecht R.A., Koutsonanos D.G., Hua T., Nakaya H.I., Ravindran R., Stewart S., Alam M., Kwissa M., et al. Programming the magnitude and persistence of antibody responses with innate immunity. Nat. Cell Biol. -2011. - V. 470. - P.543-547. doi: 10.1038/nature09737.

182. Торшин ИЮ, Громова ОА, Лила АМ и др. Толл-подобные рецепторы как компонент патофизиологии остеоартрита: противовоспалительное, анальгетическое и нейропротекторное действие. Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. - 2021. - 13(4). - С. 123-129. doi: 10.14412/2074-2711-2021-4-123129.

183. Cole S.L., Cybulski V.A., Whitacre M., Lathrop S.K., Bazin-Lee H., Burkhart D., Evans J.T. Influenza vaccines using liposomal formulations of toll-like receptor (TLR) 7/8 and 4 agonists as adjuvants. J. Immunol. - 2020. - V.204. - P. 212245.

184. Van Hoeven N., Fox C.B., Granger B., Evers T., Joshi S.W., Nana G.I., Evans S.C., Lin S., Liang H., Liang L., et al. A Formulated TLR7/8 Agonist is a Flexible, Highly Potent and Effective Adjuvant for Pandemic Influenza Vaccines. Sci. Rep. - 2017. - V.7. - P.46426. doi: 10.1038/srep46426.

185. GoffP.H., Hayashi T., Martinez-Gil L., Corr M., Crain B., Yao S., Cottam H.B., Chan M., Ramos I., Eggink D., et al. Synthetic Toll-Like Receptor 4 (TLR4) and TLR7 Ligands as Influenza Virus Vaccine Adjuvants Induce Rapid, Sustained, and Broadly Protective Responses. J. Virol. - 2015. - V.89. - P. 3221-3235. doi: 10.1128/JVI.03337-14.

186. Pena ES, Batty CJ, Hendy DA, Yang S, Ontiveros-Padilla L, Stiepel RT, Ting JP, Ainslie KM, Bachelder EM. Comparative study of acetalated-dextran microparticle fabrication methods for a clinically translatable subunit-based influenza vaccine. Int J Pharm. - 2024. - Mar 5. - P.652-123836. doi: 10.1016/j.ijpharm.2024.123836. Epub 2024 Jan 22. PMID: 38266940; PMCID: PMC10923012.

187. Зайцева, Е.С. Применение метода молекулярного конструирования для создания противогриппозных вакцин нового поколения / Е.С. Зайцева // V Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Инновации в здоровье нации»: Сб. тез. докл. - СПб. - 2017. - С. 169-172.

188. Зайцева, Е.С. Наноконструкции на основе антигенов вируса гриппа для создания новых противогриппозных вакцин / Е.С. Зайцева, И.Н. Полякова, А.И. Гинак // Известия Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета. - 2017. - №41(67). - С. 89-92.

189. Масляков, Д.А. Современные представления о биологическом действии препаратов полисахаридной природы / Д.А. Масляков, К.А. Эймонт, Н.Е. Максимович / Медицинские новости. - 2000. - №5.

190. Зайцева, Е.С. Повышение иммуногенности субъединичных вакцин путем конъюгирования с окисленным декстраном / Е.С. Зайцева, А.И. Гинак // XXIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сб. тез. докл. -М., 2017. - С. 11.

191. Ichinohe T., Tamura S.-I., Kawaguchi A., Ninomiya A., Imai M., Itamura S., Odagiri T., Tashiro M., Takahashi H., Sawa H., et al. Cross-Protection against H5N1 Influenza Virus Infection Is Afforded by Intranasal Inoculation with Seasonal Trivalent Inactivated Influenza Vaccine. J. Infect. Dis. - 2007. - V. 196. - P. 1313-1320. doi: 10.1086/521304.

192. Renu S., Feliciano-Ruiz N., Ghimire S., Han Y., Schrock J., Dhakal S., Patil V., Krakowka S., Renukaradhya G.J. Poly (I:C) augments inactivated influenza virus-chitosan nanovaccine induced cell mediated immune response in pigs vaccinated intranasally. Veter Microbiol. - 2020. - V.242. - P. 108611. doi: 10.1016/j.vetmic.2020.108611.

193. Kim E.-D., Han S.J., Byun Y.-H., Yoon S., Choi K.S., Seong B.L., Seo K.Y. Inactivated Eyedrop Influenza Vaccine Adjuvanted with Poly(I:C) Is Safe and Effective for Inducing Protective Systemic and Mucosal Immunity. PLoS ONE. - 2015. V.10, - P. 0137608. doi: 10.1371/journal.pone.0137608.

194. Zhang A., Lai H., Xu J., Huang W., Liu Y., Zhao D., Chen R. Evaluation of the Protective Efficacy of Poly I:C as an Adjuvant for H9N2 Subtype Avian Influenza Inactivated Vaccine and Its Mechanism of Action in Ducks. PLoS ONE. - 2017. - V.12. doi: 10.1371/journal.pone.0170681.

Приложение 1.

Копия свидетельства к золотой медали за Инновационную биотехнологическую разработку «Молекулярные конструкции, предназначенные для создания нового

поколения противовирусных вакцин».

С®* ® С* БИОИНДУСТРИЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 11-13 ОКТЯБРЯ 2012

СВИДЕТЕЛЬСТВО

К ЗОЛОТОЙ МЕДАЛИ

НАГРАЖДАЕТСЯ

СПбНИИ вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов ФМБА, Санкт-петербург__

ЗА ИННОВАЦИОННУЮ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКУЮ РАЗРАБОТКУ Молекулярные конструкции, предназначенные для создания нового поколения противовирусных вакцин

Зыставка-конференция инновационных решении для воспроизводства, функционирования и целесообразного развития живых организмов и среды их обитания «БИОИНДУСТРИЯ 2012»

гпРптной комиссии

И. А Тихонови;

Председатель экспертной комисси! Конкурса инновационных биотехнологических решений, научный руководитель выставки-конференции «БИОИНДУСТРИЯ 2012»

С. Г. Воронков Исполнительный директор ЗАО «Экспофорум»

ЕХРОРСЖиМ

организаторы: МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ, МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ,

ЗАО «ЭКСПОФОРУМ»

Приложение 2.

Копия диплома за победу в конкурсе лучших инновационных проектов в сфере науки и высшего профессионального образования Санкт-Петербурга в 2014 г.

Приложение 3.

Пример расчета концентрации гемагглютинина методом ОРИД.

СГАНДАГТ-КСЕ Сгя=1.00 Р*1!>. ПРОБА1-КСЕ НШ1 20.12.13., С5=421,86 мкг/мл Р*6 ПРОЕА2- КС:Е Н1М 20.12.li. Сб=421,86 чпУмл Р-8 Детергент 1 % (ла>рилслркошнат)

ПР1 _ПР1____ПР2_ПР2 _ср ПР2

1:0 28.6000 36,4146 28,6000 36.4146 28,6000 33,2315 34,3868 26,7500 34.0592

3:1 33,2315 33,2315 26.1000 24,9000 31,7037 31,7037 24.9000 31,7037

1:1 25,4643 20,0000 25.4648 20,0000 22,5000 28,6479 29,9211 23,0000 29.2Е45

1:3 17,1000 21,7724 21,8997 17,1500 24.4462 19,2000 24,4462 19,2000 24.4462

шяч от 12.11.13. стандарт-КСЕ ср стандарт

1:0 27,0000 34,3775 29,0000 36,9239 28,0000 35.6507

3:1 30,4304 24,9000 31,7037 24.4000 31.0670

1:1 18.5000 23,5549 25.7194 24.6372

1:3 18,3500 23,3639 25,3375 24.3507

Прооа Разб. Проба

1:3 1:1 3:1 1:0

0,25 0,5 0,75 1

2 В с1>ПР2 24,4462 29,2845 31,7037 34.0592

3 0

4 0

5

6

7

ст. 19,000 ст. 24.3507 24,6372 31,0670 35,6507

Продолжение Приложения 3.

стандарт

¥ X коэф а коэф Ь 17 13,125

24,5 0,375

33 0,875

| образец 1 |

¥ X коэф а коэф Ь 21 15,125

24 0,375

34,5 0,875

образец 2

V X коэф а коэф Ь 13 21,625

26,5 0,375

33 0,875

Продолжение Приложения 3.

Уравнение линии тренда 0.25 1 средняя линик при значении 0,25 отношение в значении 1 ГА в исследуемой пробе мкг/ыл

стандарт 22.3750 35,1250

1 21.3750 37,1250 21,8750 1.1509 69.0566

2 30,1000 39.7000 26,2375 1,5143 73,3290

значение стандарта ГА, мкг/мп

190

1л Ьст

1 15,2500 13,2500

2 23,4375 23,9375

3 13.4625 8.3375