Нестабильность хромосомы 6 при плоскоклеточном раке шейки матки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Атталеб Мохаммед

• Атталеб Мохаммед
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Атталеб Мохаммед

Список основных сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы. Молекулярно-генетические аспекты патогенеза рака шейки матки.

1.1. Роль вирусов папиллом (HPV) в патогенезе рака шейки матки.

1.2. Микросателлиты, как способ исследования нестабильности генома i .3. Потеря гетерозиготности (LOH) при раке шейки матки.

Глава 2. Материалы и методы.

Список использованных растворов.

2.1 .Клинические материалы.

2.2. Выделение ДНК из опухоли шейки матки и нормальных тканей.

2.3. Тестирование клинических материалов на присутствие

ДНК HPV 16 н 18 типов.

2.4. Определение потери гетерозиготности ДНК из опухолей шейки матки.

2.4.1. Условия проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР).

2.4.2. Электрофорез продуктов ПЦР в агарозном геле.,.

2.5.Выявление продуктов амплификации путем гибридизации с радиоактивно-меченным олигонуклеотидом (СА)ц.

2.5.1. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации в денатурирующем полиахриламидном геяе.

2.52. Перенос ДНК на нейлоновую мембрану.

2.5.3. Получение меченого микросателлитного зонда.

2.5.4. Гибридизация ДНК, иммобилизованной на мембранах.

2.6. Выявление продуктов амплификации методом серебрения.,.

2.7. Анализ ДНК в препаратах рака шейки матки, подвергнутых микродиссекции,.

2.7.1 .Выделение ДНК из отдельных участков опухолей и ей к и матки.

2.7.2 Определение потери гетерозиготности в ДНК из отдельных участков опухолей шейки матки.

Глава 3. Результаты.

3.1. Определение типа НРУ в опухолях шейки матки методом ПНР.

ПЛ. Использование универсальных праймеров.,.

3,12. Использование тнпоспецифических праймеров.,.,., ,,,.,.,.,.,.,,,,, .2. Анализ аллельной нестабильности хромосомы 6 в опухолях шейки матки.

3.2.1. Выбор оптимального метода детекции потери гетерозиготности.

3.2.2, Результаты исследования короткого плеча хромосомы 6.

3.2.3, Результаты исследования длинного плеча хромосомы 6.

3.3, Выявление возможной корреляции между аллельной нестабильности и клиническими параметрами опухоли.

3.4. Анализ микросателлитной нестабильности в опухолях шейки матки.

Я.5. Исследование аллельной нестабильности в препаратах рака шейки матки с помощью микродиссекции.8!

3.5.1. Анализ частоты LOH в различных участках опухолей ¡иейкн матки, подвергнутых микродиссекции.

Я.5.2. Клональные и субклональные аллельные делеции хромосомы 6.

Глава 4. Обсуждение результатов.

Глава 5. Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Нестабильность хромосомы 6 при плоскоклеточном раке шейки матки»

Paie шейки матки занимает второе место после рака молочной железы по частоте заболеваний (500 ООО новых случаев в год) и смертности (300000 в год) от рака у женщин и поэтому является одной из наиболее актуальных проблем здравоохранения (Parkin et al., 1993; Бюллетень ВОЗ, 1996). Однако, благодаря успехам, достигнутым за последние 15-20 лет в изучении его этиологии и патогенеза, наметились реальные подходы к сокращению заболеваемости и смертности. Эти связано с тем, что твердо установлена этиологическая роль вирусов группы папиллом в возникновении рака шейки матки ( zur Hausen, 1996). Более того, именно рак шейки матки стал первой формой рака, для которой разрабатывается система мер по предотвращению заболевания путем аакцинопрофилактики.

Накоплено большое количество данных, свидетельствующих в пользу этиологической связи рака шейки матки с вирусами папиллом, а именно персистенция их ДНК в предзлокачественных поражениях шейки матки и в тканях карцином, интеграция вирусного генома в клеточную ДНК, экспрессия вирусных генов, доказан трансформирующий потенциал вирусных онкогенов в экспериментах in vitro.

Тем не менее многие вопросы возникновения и прогрессии заболевания остаются невыясненными. Длительный латентный период инфекции, продолжающийся обычно 10-20 лет, тот факт, что лишь у небольшого числа инфицированных латентная инфекция приводит к развитию рака, моноклональность опухолей, содержащих интегрированные вирусные последовательности, дает основания предполагать, что инфекция вирусом папиллом является необходимой, но не достаточной в развитии злокачественного новообразования. Это указывает на существование дополнительных генетических факторов, среди которых наиболее вероятна инактивация генов-супресеоров на разных этапах многостадийного процесса, приводящих к инвазивному раку.

Анализ потери гетерозиготности в специфических хромосомных локусах, содержащих микросателлитные повторы, является одним из эффективных методов локализации генов-супресеоров в опухолях человека.

Цель настоящей работы состояла в детальном анализе потери гетерозиготности хромосомы 6 при плоскоклеточном раке шейки матки для выявления участков возможной локализации потенциальных генов-супрессоров опухоли. Хромосома 6 является одной из наименее стабильных хромосом при различных неоплазиях, однако имеется ограниченная информация об использовании микросателлитных маркеров для ее изучения при опухолях шейки ааткн.

В результате проведенного исследования с использованием 24 микросателлитных маркеров, показано что для плоскоклеточного рака шейки матки, содержащего геном HPV, характерна высокая частота аллельных делеций а определенных локусах хромосомы 6, в частности, в районе локализации генов основного комплекса гнстосовместимости МНС (6р22-21.3) и в нескольких локусах на длинном плече хромосомы 6. Использование микродиссекции опухолей в сочетании с высокочувствительным определением LOH позволило обнаружить клональные и субклональные аллельные делеции, на основании чего определены локусы хромосомы 6, являющиеся наиболее вероятными местами локализации генов-супрессоров. Подтверждено , что микросателлитная нестабильность, проявляющаяся в результате нарушения генов системы репарации ДНК, не является характерной для рака шейки матки.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Атталеб Мохаммед

3.2.3. Результаты исследования длинного плеча хромосомы 6.

Для анализа потери гетерозиготности длинного плеча хромосомы 6 нами были использованы 11 микросателлитных маркеров: D6S284 , D6S275, D6S300, D6S262, D6S310, D6S311, D6S290, D6S305, D6S264, D6S297, D6S281. Точная локализация этих маркеров на генетической и физической карте представлена на идеограмме (рис. 5). Суммарный анализ аллельных делеций на 6q представлен в таблице 8 и рис.10.