Обнаружение бактерий в жизнеспособном некультивируемом состоянии в объектах ветеринарного надзора тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Валитова Румия Камилевна

• Валитова Румия Камилевна
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Валитова Румия Камилевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Микроорганизмы в жизнеспособном некультивируемом состоянии, контаминирующие пищевые продукты

1.2 Понятие о жизнеспособных некультивируемых клетках микроорганизмов

1.3 Проблема безопасности пищевых продуктов, контаминированых бактериями в некультивируемом состоянии

1.4 Условия перехода клеток бактерий в жизнеспособное некультивируемое состояние

1.5 Механизм образования некультивируемых клеток бактерий

1.6 Реверсия клеток из некультивируемого состояния

1.7 Выявление некультивируемых клеток микроорганизмов

Глава 2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Материалы и методы исследования

2.1.1 Объекты исследования

2.1.2 Методы световой и люминесцентной микроскопии

2.1.3 Методы микробиологического культивирования

2.1.4 Методы определения фагочувствительности выделенных культур

2.1.5 Методика получения некультивируемых клеток микроорганизмов

2.1.6 Мониторинг микробиологических исследований сырья и готовых продуктов

2.1.7 Санитарно-микробиологический контроль объектов ветеринарного надзора

2.1.8 Методы выявления жизнеспособных некультивируемых клеток в колбасных изделиях

2.2 Статистические методы

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Динамика перехода микроорганизмов в жизнеспособное некультивируемое состояние в условиях стрессов

3.2 Ростовые свойства популяций микроорганизмов в условиях реверсии из некультивируемого состояния

3.3 Параметры размножения у условно-патогенной микробиоты после выхода клеток из некультивируемого состояния

3.4 Оценка влияния питательных сред на реверсию ЖНК бактерий

3.5 Микробиологический мониторинг контаминации сырья и пищевых продуктов

3.6 Жизнеспособность некультивируемых клеток в смывах с объектов ветеринарного надзора

3.7 Результаты определения жизнеспособных некультивируемых клеток в колбасных изделиях

3.8 Определение активности коммерческих бактериофагов на клетках бактерий, находившихся в некультивируемом состоянии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Обнаружение бактерий в жизнеспособном некультивируемом состоянии в объектах ветеринарного надзора»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В истории микробиологии особый интерес представляют микроорганизмы, которые напрямую влияют на здоровье человека животных. При этом важным вопросом является микробиологическая экспертиза продуктов питания, при которой могут быть выявлены возбудители пищевых токсикозов и токсикоинфекций.

До введения такого понятия, как жизнеспособные некультивируемые клетки (ЖНК или VBNC (Viable but nonculturable) у микроорганизмов [147] наличие и жизнеспособность бактерий приравнивались к их способности расти на рутинных питательных средах. Сейчас становится все более очевидным, что потенциальная угроза, которую представляет собой тот или иной бактериальный патоген, при его культивируемости на искусственных средах, проявляется не полностью [112].

Переход в жизнеспособное некультивируемое состояние рассматривается как реакция бактерий на внешний стресс. Что еще более важно, многие возбудители пищевых инфекций в объектах ветеринарного надзора могут переходить в жизнеспособное некультивируемое состояние под влиянием таких стрессовых факторов как дезинфекция помещений и оборудования, обработка сырья и продуктов (высокой температурой и давлением, консервированием поваренной солью, использовании пищевых добавок, низкотемпературном хранении и др.) [11]. Так, обработка монохлорамином, который используется для стерилизации питьевой воды, приводит к появлению ЖНК у L. pneumophila, как и длительная инкубация в водопроводной воде [85]. У M. tuberculosis образование ЖНК происходит в условиях гипоксии, которое, как предполагается, является стрессом, с которым бактерия сталкивается внутри туберкулезных бугорков-носителей M. tuberculosis [45]. Патоген пищевого происхождения - V. vulnificus переходит в состояние ЖНК при низких температурах [112].

Также было обнаружено, что лимонная кислота, широко используемая при производстве безалкогольных напитков и конфет, может привести к переходу S. aureus в жизнеспособное некультивируемое состояние через 18 дней воздействия раствора лимонной кислоты [151]. В исследованиях некоторых авторов, уксусная

кислота, еще одна распространенная кислота, применяемая в объектах ветеринарного надзора и пищевых продуктах, использовалась для изучения влияния кислоты на образование ЖНК S. aureus. Исследователи выявили, что S. aureus может переходить в состояние ЖНК при высокой кислотности и нормальном питании, что особенно актуально для продуктов с добавками кислот. В то же время, в экстремально кислой среде и недостатке питательных веществ клетки погибали, не достигая состояния ЖНК. Кроме того, об индукции в ЖНК микроорганизмов сообщалось также при появлении новых нетепловых технологий обработки сырья и продуктов, включая обработку CO2 под высоким давлением, электролизованной водой, импульсным электрическим полем, импульсным светом, нетепловой плазмой, и термосоникацией. Поддержание или даже повышение патогенности микроорганизмов в состоянии ЖНК еще больше увеличивает риски для безопасности пищевых продуктов и здоровья населения. Так, ЖНК Vibrio vulnificus обладали устойчивостью к различным стрессам, таким как антибиотики (ампициллин, хлорамфеникол), тяжелые металлы (Zn, Cu), окислители (перекись водорода), тепло, осмолярность (NaCl), кислотность и щелочность [50]. Кроме того, сообщалось, что выделение токсинов сохраняется у некоторых патогенов ЖНК. Было обнаружено, что индуцированные хлором ЖНК Listeria monocytogenes по-прежнему обладают способностью инфицировать Caenorhabditis elegans, как и культивируемые [120].

Как обсуждалось выше, на сегодняшний день были выявлены различные факторы, вызывающие жизнеспособное некультивируемое состояние клеток различных бактерий, в т.ч. пищевых патогенов. Исследования состояния ЖНК все еще находятся на начальных этапах исследования, и, по всей вероятности, существует еще много стрессов, которые могут вызывать некультивируемое состояние и которые еще предстоит идентифицировать.

Хотя эти стрессы могут возникать в естественной среде, еще большую озабоченность вызывают стрессы, вызванные антимикробной терапией лекарственными препаратами, используемыми людьми для лечения инфекций, получения безопасных продуктов питания и источников воды, а также

обеззараживанием окружающей среды дезинфицирующими средствами. Они могут спровоцировать переход бактерий в жизнеспособное некультивируемое состояние, особенно при неадекватном количественном использовании. Несоблюдение режима и дозы приема лекарств было определено как одна из причин появления штаммов бактерий с множественной лекарственной устойчивостью, и это вполне может быть пусковым механизмом для перехода в состояние ЖНК у некоторых патогенов, таких как, например, M. tuberculosis [83].

По данным литературных источников, некоторые бактерии, способные переходить в некультивируемое состояние (НС), распределены филогенетически: алъфапротеобактерии (6 родов, 8 видов), бетапротеобактерии (5 родов, 6 видов), гаммапротеобактерии (23 рода, 53 вида), эпсилонпротеобактерии (4 рода, 8 видов), бактероидеты (1 род, 1 вид), актинобактерии (5 родов, 12 видов) и фирмикуты (6 родов, 13 видов). Большинство из них (76 видов) — грамотрицательные бактерии (относящиеся к типам протеобактерий и бактероидов), хотя 25 видов — это грамположительные неспорообразующие бактерии (относящиеся к типам актинобактерий или фирмикутов). Некоторые грамположительные бактерии, в частности отдельные виды бацилл и клостридий, могут образовывать экзо- и эндоспоры, что является первым зарегистрированным состоянием выживания бактерий [64]. Кроме того, показано, что цисты представляют собой ещё одно состояние выживания, которое можно наблюдать у некоторых грамотрицательных бактерий (например, Azotobacter spp.) [77].

Независимо от роли некультивируемого состояния в жизненном цикле бактерий, доказано, что многие виды микроорганизмов, особенно патогенные для человека, могут осуществлять эту стратегию выживания. ЖНК сохраняют свои клеточные структуры и биологические функции, такие как клеточное дыхание и непрерывная экспрессия генов, имея возможность выходить и возвращаться в это состояние, пригодное для культивирования, когда условия становятся более благоприятными. Несмотря на успехи, достигнутые за последние тридцать лет, исследование физиологии, биохимии и генетики этого состояния остается до сих пор сложной задачей, поскольку неизвестно, какие гены непосредственно

участвуют в контроле утраты и восстановления культивируемости [2, 6, 9,10 25, 30].

Более того, изучение механизмов перехода в некультивируемое состояние может стать ключом к разработке новых методов культивирования бактерий, обитающих в окружающей среде, которые до сих пор не поддаются культивированию. Невозможность культивировать микроорганизмы представляет собой серьёзный барьер на пути к точной диагностике заболеваний и эффективному лечению. Это также создаёт значительные трудности для выявления патогенов не только в окружающей среде, но и в продуктах питания и источниках воды. В результате, потенциально опасные микробные загрязнения могут оставаться незамеченными [143].

Диагностика заболеваний и идентификация этиологических агентов были и остаются, в значительной степени, зависимыми от методов культивирования. Поэтому, успешное обнаружение в разных субстратах (клинический материал, пищевые продукты, объекты окружающей среды, биологические препараты и т.д.) некультивируемых микроорганизмов, способных вызвать инфекционные заболевания, изучение факторов индукции или ингибиции роста ЖНК, особенностей их перехода в это состояние и реверсии являются практически и научно-значимыми вопросами медицинской, санитарной и сельскохозяйственной микробиологии [1, 2, 4, 9, 10, 32, 71, 147, 151].

Таким образом, актуальность выбранной темы обусловлена тем, что необходимо дальнейшее изучение способов выявления некультивируемых микроорганизмов, так как традиционные методы не позволяют выявить ЖНК, которые могут представлять опасность, сохраняя патогенные свойства. Это подчеркивает потребность в понимании механизмов их образования и реверсии к культивируемой форме, а также оценки влияния биологических антимикробных средств на состояние ЖНК.

Степень разработанности темы исследования

Несмотря на многолетние накопленные сведения о ЖНК [4-7, 110-112, 124127, 147-149, 152], многие вопросы о их физиологических, метаболических,

генетических, микроэкологических, эпидемиологических и других свойствах остаются до сих пор малоизученными. Поэтому возникла необходимость дополнить сведения об индукторах перехода клеток в некультивируемое (дормантное) состояние, реверсии жизнеспособных некультивируемых клеток в вегетативное состояние в условиях такой активации, провести поиск эффективных антимикробных средств и методов дезинфекции на предприятиях АПК с целью обеспечения биобезопасности и предотвращения возможного возникновения пищевых отравлений.

Цель исследования

Оценить способность факторов различной природы к ингибированию перехода микроорганизмов в некультивируемое состояние, реверсии ЖНК в вегетативную форму, а также определить способность коммерческих бактериофагов лизировать бактерии, выделенные с объектов ветеринарного надзора для обеспечения биобезопасности на предприятиях АПК. Задачи исследования

- изучить динамику перехода в жизнеспособное некультивируемое состояние микроорганизмов разных таксономических групп, контаминирующих пищевые продукты в условиях многомесячного трофического и осмотического стрессов;

- оценить уровень реверсии и определить ключевые показатели размножения ЖНК на полноценной и обедненной средах, а также на питательных агарах на основе оригинального гидролизата коллагена трески;

- провести мониторинговые исследования биологической безопасности пищевого сырья по микробиологическим показателям;

- определить наличие ЖНК санитарно-показательных микроорганизмов в производственной среде предприятий АПК и в колбасных изделиях при длительном хранении, а также разработать методические рекомендации для обнаружения ЖНК в сырье и пищевых продуктах для практического применения на предприятиях АПК;

- оценить способность бактериофагов лизировать ЖНК гомологичных бактерий, выделенных с объектов ветеринарного надзора.

Научная новизна работы

Впервые определена динамика образования жизнеспособных некультивируемых клеток после длительного пребывания в условиях трофического и осмотического стрессов.

Получены данные по реверсии ЖНК с использованием сред с разной питательной ценностью: полноценного и 10-кратно обедненного питательных агаров, а также на экспериментальных питательных средах на основе оригинальных гидролизатов коллагена из трески.

Впервые определены основные физиологические показатели популяции бактерий такие, как абсолютная (V) и относительная (ц) скорости роста, время и количество генераций (п) после выхода из некультивируемого состояния.

Впервые в смывах с поверхностей производственных объектов и технологического оборудования пищевого производства и в колбасных изделиях установлено наличие ЖНК санитарно-показательных микроорганизмов, не обнаруживаемых традиционными методами микробиологического контроля.

Разработаны методические рекомендации для обнаружения ЖНК в сырье и пищевых продуктах для практического применения на предприятиях АПК.

Впервые изучено воздействие коммерческих бактериофагов на ЖНК пищевых патогенов и выявлена потеря чувствительности ЖНК к гомологичным бактериофагам.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Полученные сведения об особенностях образования ЖНК и их реверсии к вегетативной форме позволят дополнить существующие неполные представления о некультивируемом (дормантном) состоянии жизнеспособных микроорганизмов, контаминирующих сырье и пищевую продукцию. Проведенные исследования показали динамику образования жизнеспособных грамотрицательных и грамположительных некультивируемых клеток при длительном пребывании в условиях трофического и осмотического стрессов.

Теоретическое значение также имеют данные по реверсии популяций с применением поэтапного снятия стрессов с помощью нормального 0,9%

физиологического раствора, а также изучение взаимодействия специфичных бактериофагов с ЖНК.

В процессе подготовки работы многократно апробированы совместно с другими авторами методы выявления ЖНК и их реверсии к исходной форме. Практическая значимость методики по успешному обнаружению ЖНК пищевых микробных контаминантов была протестирована на примере отбора смывов с объектов ветеринарного надзора на предприятиях АПК, а также были утверждены методические рекомендации по обнаружению жизнеспособных некультивируемых клеток в сырье и пищевых продуктах. Результаты исследования используются в учебно-методических материалах при подготовке студентов (бакалавров, специалистов, магистров) и аспирантов на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы и биологической безопасности.

Методология и методы исследования

Диссертационные исследования проводились с помощью специально разработанных методов по получению и детекции жизнеспособных некультивируемых клеток микроорганизмов, которые позволили получить оригинальные сведения о переходе бактерий в состояние ЖНК, их реверсии, а также изучить показатели размножения клеток с применением математических формул, и выявить чувствительность бактерий в некультивируемом состоянии к гомологичным бактериофагам. Одновременно с применением методов микробиологического исследования объектов внешней среды на предприятиях АПК были выделены патогены пищевых продуктов в смывах производственных объектов ветеринарного контроля.

Положения, выносимые на защиту

1. Динамика образования ЖНК пищевых патогенов при длительном нахождении в условиях трофического и осмотического стрессов.

2. Реверсии ЖНК в пролиферативное состояние на обедненной среде, а также на экспериментальных питательных средах на основе оригинальных гидролизатов коллагена из трески.

3. Показатели абсолютной и удельной скоростей роста, времени и количества генераций бактерий после длительного стресса при их реверсии из ЖНК.

4. Микробиологический мониторинг образцов пищевого сырья, готовых продуктов и исследования смывов с поверхностей производственных помещений на предприятиях АПК.

5. Воздействие коммерческих бактериофагов на жизнеспособные некультивируемые бактерии, выделенные с объектов ветеринарного надзора.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность результатов обусловлена значительным объемом проведенных исследований в лабораторных условиях. Полученные данные обрабатывались при помощи программы Microsoft Excel 2007 с использованием параметрических критериев, таких как: t-критерий Фишера-Стьюдента, уровень достоверности p<0,05; предел колебаний средней арифметической X±I95 и методов корреляционного анализа различий (коэффициент корреляции г).

Апробация работы проводилась поэтапно с демонстрацией результатов исследований на Всероссийских, Национальных и Международных конференциях:

- Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов-2020» в 2022, 2024, 2025.

- «Первом Российском конгрессе по медицинской микробиологии и инфектологии» Москва, 2023; «Втором Российском конгрессе по медицинской микробиологии и инфектологии», Москва, 2024.

- Международной конференции молодых ученых «New approaches in the field of microbiology, virology, immunology and epidemiology», Москва, в 2023, 2024.

- Научно-практической конференции «Научно-исследовательская работа студентов и аспирантов: состояние и перспективы», Москва, 2023.

- Всероссийской научно-практической конференции с международным участием: «Актуальные вопросы лабораторного контроля при ветеринарно-санитарной экспертизе пищевого сырья и кормов», Москва, 2023.

- Национальной научно-практической конференции преподавателей, аспирантов и студентов «Диагностика, терапия и профилактика болезней животных», Москва, 2023.

- Научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Ветеринария, зоотехния, биотехнология и продовольственная безопасность -науке и практике АПК», Москва, 2024.

- Научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветеринарно-санитарной экспертизы и биологической безопасности сельскохозяйственной продукции» под девизом «Здоровое животное - безопасная пища - здоровый человек», Москва, 2022, 2023, 2024, 2025.

Публикации

Основные материалы диссертационной работы опубликованы в 38 научных работах, в том числе 4 - в изданиях, включенных в перечень ведущих рецензируемых научных журналов рекомендованных ВАК Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 3 - Scopus, 1 монография, 1 Методические рекомендации, утвержденные Отделением сельскохозяйственных наук РАН.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 1 40 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, заключение, библиографический список, приложения.

Список литературы включает 153 наименований, в том числе 109 зарубежных авторов. Работа содержит 25 таблиц и 17 рисунков.

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Микроорганизмы в жизнеспособном некультивируемом состоянии, контаминирующие пищевые продукты

Контаминация продуктов питания является серьезной проблемой общественного здравоохранения во всем мире, приводящей к заболеваниям пищевого происхождения человека [2]. Загрязнение микроорганизмами может происходить на всех этапах производства, обработки и хранения сырья и готовых продуктов. В условиях производственных лабораторий определение контаминации затруднено из-за наличия жизнеспособных, но некультивируемых микроорганизмов, не выявляемых при классических исследованиях, проводимых в производственных лабораториях. Поэтому эффективный контроль требует соблюдения санитарных норм и применения современных методов обнаружения патогенов на предприятиях АПК [1, 15, 16].

Известно, что большинство пищевых продуктов служат наилучшей средой для роста различных микроорганизмов. Эти микроорганизмы могут вызывать изменения внешнего вида, вкуса, запаха и других характеристик, а также структурные изменения, такие как гниение, брожение и прогоркание. В дополнение к таким процессам, отдельные микроорганизмы также синтезируют вещества (пигменты и слизь), которые также вызывают негативные изменения в продукте [2, 20].

Загрязнение пищевых продуктов происходит с помощью различных механизмов и факторов. Такими факторами, которые могут вызвать заболевания пищевого происхождения, являются температура хранения и приготовления пищи, недостаточное мытье рук и отходы жизнедеятельности животных. Микробы могут попасть в пищу от людей, систематически не моющих руки. Большинство кухонных инструментов и их поверхностей загрязнены сырыми пищевыми продуктами [20].

Факторами порчи в продуктах, прошедших тепловую обработку, являются, прежде всего, спорообразующие группы бактерий, которые также способны

переходить в жизнеспособное некультивируемое состояние. Известно, что споры бактерий могут выживать даже при высоких температурах. Грамположительные бактерии могут расти в аэробной и анаэробной среде. Они также склонны к росту при высоких температурах до 55 °C [88]. В этом контексте некоторые группы анаэробных бактерий выделяют опасный сероводород во время роста в консервированных или герметично закрытых продуктах, хранящихся при высоких температурах. Группы бактерий, которые могут расти при комнатной температуре, являются причиной различных видов порчи продуктов. К таким порчам относятся гниение консервированных продуктов, преждевременное размягчение сыра, образование масляной кислоты в консервированных овощах и фруктах [16, 25]. Микроорганизмы, которые могут выживать при низких температурах, способны выделять газ и неприятные запахи в охлажденных мясных изделиях, маринованных и сушеных продуктах. Грамположительные бактерии, которые признаны пищевыми патогенами во всем мире, - это Staphylococcus spp., Clostridium spp., Bacillus spp. и Listeria spp. и др. Грамотрицательные бактерии Salmonella spp., Campylobacter spp., Escherichia spp., Shigella spp., Yersinia spp., Vibrio spp., Aeromonas spp. и Cronobacter spp. и др. известны как пищевые патогены [45, 46, 62, 106]. Пищевой продукт и окружающая его среда представляют собой сложную систему, в которой физико-химические характеристики (pH, и химический состав), а также факторы окружающей среды (температура и время хранения, обеззараживающие процедуры, упаковка в модифицированной атмосфере) одновременно воздействуют на пищевые патогены, создавая условия для перехода в жизнеспособное некультивируемое состояние [107]. Например, Nicolo M.S. и другими авторами было продемонстрировано, что охлажденный пастеризованный грейпфрутовый сок индуцировал состояние ЖНК у E. coli O157: H7 и S. typhi в течение 24 часов после инкубации. В своих научных публикациях, Gunasekera T. S. и др. сообщили, что «в пастеризованном молоке, прошедшем термическую обработку, бактерии-контаминанты, такие как E. coli и Pseudomonas putida, переходят в состояние ЖНК, но сохраняют функции транскрипции и трансляции». В Японии зарегистрировано несколько вспышек пищевого

происхождения, вызванных такими патогенами, как Salmonella enterica [77] и E. coli O157 в состоянии ЖНК. ЖНК также влияют на определение сроков годности и микробиологической стерильности пищевых продуктов и напитков. Например, уксуснокислые и молочнокислые бактерии перешли в состояние ЖНК в вине из-за анаэробных условий и присутствия диоксида серы [152].

Патогены пищевого происхождения могут переходить в состояние ЖНК во время обработки продуктов питания, например, при высокой температуре, высоком давлении, дезинфекции, консервации и низкотемпературном хранении, и они являются потенциально опасными для пищевых продуктов. ЖНК патогенных бактерий пищевого происхождения не выявляются при выращивании в чашках с традиционными средами и могут при определенных условиях сохранять патогенность. Поэтому исследования, посвященные изучению пищевых патогенов в состоянии ЖНК очень важны, а создание быстрого и эффективного метода обнаружения бактерий в популяциях ЖНК может быть ключом к решению вопросов безопасности пищевых продуктов [50, 107, 110, 112].

Присутствие клеток ЖНК в пищевых продуктах широко документировано [129]. Пищевые продукты часто подвергается воздействию сложной экологической системы, в которой физико-химические характеристики (pH, воздействие дезинфицирующих средств и химических веществ) и факторы окружающей среды (высокое давление, наличие CO2, повышение или понижение температуры, время хранения, деконтаминационная обработка, пастеризация и упаковка в модифицированной атмосфере) действуют одновременно на контаминирующие бактерии, приводя к состоянию ЖНК. Это также представляет значительный риск для здоровья населения и безопасности пищевых продуктов, поскольку эти бактерии невозможно обнаружить с помощью общепринятых методов. Этот риск еще более возрастает в связи с тем, что клетки ЖНК могут реанимироваться в организме человека [93]. Более того, исследования доказали, что клетки ЖНК патогенов пищевого происхождения сохраняют активность факторов вирулентности в пищевых продуктах [152].

Lactobacillus brevis является значимой и наиболее часто обнаруживаемой бактерией порчи пива и может производить конечные или побочные продукты ферментации углеводов, включая молочную и уксусную кислоты, которые влияют на вкус пива, а также биогенные амины, вызывающие пищевые отравления, гипертонию, мигрень, дистонию, болезнь Паркинсона, шизофрению, наркоманию, психические расстройства и нейродегенеративные заболевания. В ходе исследования геномный анализ хмелеустойчивого штамма Lactobacillus brevis, вызывающего порчу продуктов питания, выявил способность переходить в состояние ЖНК. В ходе данного исследования была получена грубая последовательность генома L. brevis BM-LB13908, выделенного из готового образца пива. Это исследование может способствовать дальнейшему изучению L. brevis и других бактерий, вызывающих порчу пива, а также профилактике и борьбе с его порчей, вызванной микроорганизмами [149].

Также наблюдалось, что большое количество E. coli переходила в жизнеспособное некультивируемое состояние после УФ-обработки, и у некоторых из них наблюдалась потеря метаболизма и повреждение клеточной стенки. Все эти результаты подтверждают идею о том, что различные виды физических стрессовых факторов во время обработки пищевых продуктов могут побудить патогенные микроорганизмы пищевого происхождения перейти в состояние ЖНК [151].

Употребление сырых или недостаточно приготовленных морепродуктов является наиболее распространенным способом заражения V. parahaemolyticus. В США наиболее распространенным носителем патогена являются сырые устрицы. При микробиологическом исследовании устриц, собранных в водах США, уровень заражения V. parahaemolyticus был неизменно выше, чем V. vulnificus. Неправильно приготовленные моллюски могут содержать небольшое количество выживших вибрионов, как и продукты питания, загрязненные морской водой на судах. V. parahaemolyticus может быстро размножаться и достигать большого количества колоний в зараженных продуктах, хранящихся при температуре окружающей среды в течение нескольких часов. Это, очевидно, способствует высокой частоте возникновения эпидемической вспышки с общим источником инфекции [103].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Валитова Румия Камилевна, 2025 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Абдуллаева А. М., Блинкова Л. П., Валитова Р. К., Амбражеевич Ю. В. Выявление жизнеспособных некультивируемых клеток в пищевых продуктах // DISCOVERY SCIENCE RESEARCH : сборник статей VI Международной научно-практической конференции, Петрозаводск, 24 декабря 2020 года. - Петрозаводск: Международный центр научного партнерства «Новая Наука» (ИП Ивановская Ирина Игоревна), 2020. - С. 232-238. - EDN SKCEKL.

2. Абдуллаева А. М., Блинкова Л. П., Пахомов Ю. Д. Значение жизнеспособных некультивируемых бактерий для безопасности пищевых продуктов // Российский журнал Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2019. - № 2(30). - С. 183-189. - DOI 10.25725/vet.san.hyg.ecol.201902012. - EDN FDXQTR.

3. Абдуллаева А. М., Блинкова Л. П., Ю. Д. Пахомов, Валитова Р. К. Микробиологические принципы работы с жизнеспособными некультивируемыми микроорганизмами // Издательский дом "Научная библиотека", Москва - 2023. -160 с. - ISBN 978-5-907672-64-2. - DOI 10.36871/978-5-907672-64-2. - EDN NHMOVC.

4. Аляпкина Ю.С., Романова Ю.М. Разработка количественного варианта ПЦР и применение его для оценки экспрессии генов: дис. канд. биол. наук: 03.00.07 // Генетика, 2000. Т. 36, №7. с. 994-999.

5. Блинкова, Л. П. Обнаружение некультивируемых форм бактерий в лиофилизированных препаратах пробиотиков / Л. П. Блинкова, Ю. Д. Пахомов, О. В. Дмитриева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2013. - № 3. - С. 83-88. - EDN TMKGFR.

6. Блинкова Л. П., Крылов В. Н., Пахомов Ю. Д., Плетенева Е.А., Коровенкова Н.В., Шабурова О.В. Сохранение жизнеспособности Pseudomonas aeruginosa в морской воде // Инфекция и иммунитет. - 2017. - № S. - С. 904. - EDN XVJZDF.

7. Блинкова Л.П., Пахомов Ю.Д., Стоянова Л.Г. Свойства некультивируемых и покоящихся форм микроорганизмов // Иммунопатология, аллергол, инфектол. - 2010; - № 3 - 67-75.

8. Блинкова Л. П., Спиридонов А. В., Ю. Д. Пахомов, М. Л. Альтшулер / Живые, но некультивируемые клетки эукариотических грибов // Успехи медицинской микологии. - 2014. - Т. 12. - С. 12-14. - EDN TFXKIJ.

9. Буторина Н.Н. Разработка методических приемов повышения гигиенической надежности санитарно-бактериологических методов анализа воды: дис. канд. биолог. наук:14.02.01 // Буторина Н. Н.; УРАМН НИИЭЧиГОС им. А.Н.Сысина. -М., 2010. -217с.

10. Бухарин О.В. Гинцбург Г.А., Романова Ю.М., Эль-Регистан Г.И. Механизмы выживания бактерий. М.: Медицина.2005, - 367 с.

11. Гинцбург А.Л., Литвин В.Ю., Пушкарева В.И., Романова Ю.М. Обратимый переход патогенных бактерий в покоящееся (некультивируемое) состояние: экологические и генетические механизмы // Вестн. РАМН. - 2000 - № 1 - С. 7-13.

12. Гольдфарб Д. М. Бактериофагия. М. : Медгиз, 1961, 49 с.

13. ГОСТ Р 54354-2011. Национальный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Общие требования и методы микробиологического анализа" (утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 12.07.2011 N 180-ст)

14. ГОСТ 26669-85Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов. (утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 04.12.1985 N 3810), (ред. от 01.09.1989)

15. ГОСТ 23670-2019. Межгосударственный стандарт. Изделия колбасные вареные мясные. Технические условия" (введен в действие Приказом Росстандарта от 19.02.2019 N 34-ст).

16. ГОСТ 9792-73. Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб. (утв. и введен в действие Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР 21.05.73 N 1291).

17. Гриневич А.И. Исследование свойств покоящихся форм микроорганизмов и разработка методик их определения в молочной продукции с длительными сроками годности: дис. канд. техн. наук: 05.18.04 // Гриневич А. И.; МГУПП. - М., 2014. - 146 с.

18. Демкина Е.В., Сонина В.С., Эль-Регистан Г.И., Звягинцев Д.Г. Репродуктивные покоящиеся формы Arthrobacte rglobiformis// Микробиология, -2000. - Т.69. - №3. - с. 382.

19. Карачина Т.А., Блинкова Л.П., Абдуллаева А.М., Валитова Р.К., Пахомов Ю.Д. Действие фагов на бактерии в некультивируемом состоянии // Проблемы медицинской микологии. 2021. Т. 23. N. 2. С. 85-86.

20. Козак, С. С. Научное обоснование микробиологической безопасности продукции при производстве мяса птицы / С. С. Козак. - Москва: Издательский дом «НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА», 2024. - 360 с. - ISBN 978-5-907823-85-3. - EDN DIXPXK.

21. Козак, С. С. Совершенствование методов выявления сальмонелл и Staphylococcus aureus в мясе птицы, субпродуктах и полуфабрикатах из мяса птицы / С. С. Козак // Мировое и российское птицеводство: динамика и перспективы развития - научные разработки по генетике и селекции сельскохозяйственной птицы, кормлению, инновационным технологиям производства и переработки яиц и мяса, ветеринарии, экономики отрасли : Материалы XXI Международной конференции, Сергиев Посад, 23-25 сентября 2024 года. - Сергиев Посад, 2024. -С. 793-797. - EDN SRQFVA.

22. Козак, Ю. А. Определение сальмонелл в мясе птицы, субпродуктах и полуфабрикатах из мяса птицы с использованием системы Petrifilm®SALX / Ю. А. Козак, С. С. Козак // Мировое и российское птицеводство: динамика и перспективы развития - научные разработки по генетике и селекции сельскохозяйственной птицы, кормлению, инновационным технологиям производства и переработки яиц и мяса, ветеринарии, экономики отрасли : Материалы XXI Международной конференции, Сергиев Посад, 23-25 сентября 2024 года. - Сергиев Посад, 2024. -С. 806-811. - EDN BWCYWU.Колпаков А.И., Ильинская О.Н. Стабилизация

ферментов аутоиндукторами анабиоза как один из механизмов устойчивости покоящихся форм микроорганизмов // Микробиология - 2000. - Т.69. - №2. - с. 224-230.

23. Лабинская А.С., Блинкова Л.П., Ещина А.С. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований. // «Лань», 4-е изд. СПб. - 2020 -588 с.

24. Ленченко, Е. М. Индикация биопленок и некультивируемых микроорганизмов при мониторинге биологической безопасности пищевого сырья / Е. М. Ленченко, Н. Ю. Сысоева, Д. А. Блюменкранц // Health, Food & Biotechnology. - 2019. - Т. 1, № 3. - С. 35-46. - DOI 10.36107/hfb.2019.i3.s260. - EDN PKVXUS.

25. Ленченко Е.М., Павлова И.Б., Удавлиев Д.И. Способы индикации некультивируемых жизнеспособных микроорганизмов при контроле критических точек технологии животноводства, птицеводства и пищевых производств // Российский журнал «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии». 2021. № 4 (40). С. 441-447. doi: 10.36871/vet.san.hyg. ecol.202104010

26. Методические рекомендации "МР 4.2.0220-20. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Методы санитарно-бактериологического исследования микробной обсемененности объектов внешней среды. Методические рекомендации" утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 04.12.2020

27. Николеишвили Л.Р. Переход холерных вибрионов в некультивируемое состояние под влиянием некоторых абиотических факторов. // Фундаментальные исследования. -2004. - №2. - с. 18-21.

28. Новиков В. Ю., Рысакова К. С., Шумская Н. В., Мухортова А. М. Экстракция и фракционирование ферментов с разной субстратной специфичностью из гепатопанкреаса Paralithodes camtschaticus// Наука и образование - 2022 : Материалы Всероссийской научно-практической конференции, Мурманск, 01-09 декабря 2022 года. - Мурманск: Мурманский арктический университет, 2024. - С. 260-268. - EDN TLTSPW.

29. Павлова И. Б. Закономерности развития популяций бактерий в окружающей среде (Электронно-микроскопическое исследование): специальность 16.00.06 : диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук / Павлова Инна Борисовна. - Москва, 1999. - 59 с. - EDN QDAZTL.

30. Пахомов Ю. Д., Блинкова Л. П.. Биоопасность жизнеспособных некультивируемых микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии - 2019, - № 3 - с. 83-91.

31. Пиядина А. Ю., Пахомов Ю. Д., Блинкова Л. П., Фельдман Н. Б. Образование и реверсия некультивируемых клеток Salmonella enterica typhimurium // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2016. - Т. 18, № S2. - С. 35. - EDN XSRPDD.

32. Полоцкий Ю.Е., Бондаренко В.М., Линде К. Морфологическая оценка безвредности и протективной активности вакционного штамма Salmonella Ttyphimurium 274 // Ж. Микробиол., 1992. №4. с. 33-37.

33. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора (утв. Минсельхозом России 15 июля 2002 г. N 13-5-2/0525)

34. Распоряжение Правительства РФ от 29.06.2016 №1364-р «Об утверждении Стратегии повышения качества пищевой продукции в Российской Федерации до 2030 года».

35. Романова Ю.М. Горячев С.Н. Современный взгляд на экологию бактерий: некультивируемые форы, персистеры, биоплёнки. М:АР-Консалт, 2017, 85 с.

36. Романова Ю.М., Чегаева Е.В., Гинцбург А.Л. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий: известные и возможные факторы индукции обратимого процесса // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1998, № 3, С. 3.

37. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Гинцбург А.Л. Идентификация генов, контролирующих переход бактерий Salmonella Typhimurium в некультивируемое состояние. // Генетика, 1996. Т. 32, №9. с. 1184-1190.

38. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Гинцбург А.Л. Изучение особенностей перехода в некультивируемое состояние штаммов Salmonella Typhimuriumс мутациями, нарушающими синтез пуриновых оснований // Молекул. Генетика, 1996а. №1. с.26-28.

39. Рысакова, К. С. Получение ферментативных гидролизатов коллагена морских беспозвоночных Баренцева моря и их использование в качестве основ для микробиологических сред / К. С. Рысакова, В. Ю. Новиков, Н. В. Шумская // Актуальные проблемы освоения водных биологических ресурсов Российской Федерации : Материалы всероссийской конференции ученых и специалистов, посвященной 160-летию Н.М. Книповича, Мурманск, 27-28 октября 2022 года / Отв. редактор К.М. Соколов. - Мурманск: Полярный филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Всероссийский научно -исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии", 2023. - С. 521526. - EDN MAVJSU.

40. Скородумов Д. И., Родионова В. Б., Костенко Т. С., Денисенко Т. Е., Ярыгина Е. И. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии: Учебное пособие для вузов — 4-е изд., стер. — Санкт-Петербург : Лань, 2023. — 336 с. — ISBN 978-5-507-47839-2.

41. Соколенко А. В. Некультивируемые формы бактерий: распространение в природе, индукторы не культивируемого состояния и реверсии // Современные наукоемкие технологии. - 2006. - № 2. - С. 11-15. - EDN IJJEKJ.

42. Соколенко А. В., Мухина Т. Н. Сравнительная характеристика некоторых форм выживания патогенных бактерий // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2006. - № 3. - С. 54-58. - EDN HTVTYT.

43. Шепелин А.П., Полосенко О.В., Марчихина И.И., Шолохова Л.П. Дятлов И.А. Питательные среды для выявления стафилококков в клинической и санитарной микробиологии // Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2015. N 4. С. 39-43

44. Шлеева М.О. Образование "некультивируемых" клеток Mycobacterium tuberculosis и их оживление. / Шлеева М.О., Мукамолова Г.В., Телков М.В. и соавт. // Микробиология. - 2003. - Т. 72(1). с. 76-83.

45. Adams M.R, Moss M.O. Bacterial agents of foodborne illness // In Food Microbiology - 2000. - p. 184-271.

46. Allos B.M. Association between Campylobacter infection and Guillain-Barre syndrome // Journal of Infectious Diseases - 1997. - 176(Supplement_2). - p. 125128.

47. Aurass, P., Prager, R., and Flieger, A . EHEC/EAEC 0104:H4 strain linked with the 2011 German outbreak of haemolytic uremic syndrome enters into the viable but non-culturable state in response to various stresses and resuscitates upon stress relief // Environ. Microbiol. - 2011. - Vol. 13. - p. 3139-3148.

48. Ayrapetyan M. Interspecific quorum sensing mediates the resuscitation of viable but nonculturable vibrios / M. Ayrapetyan, T. C. Williams, J. D. Oliver // Applied and Environmental Microbiology - 2014 - Vol. 80(8) - P. 2478-2483.

49. Ayrapetyan, M. Resuscitation of vibrios from the viable but nonculturable state is induced by quorum-sensing molecules. / M. Ayrapetyan, T. C. Williams, J. D. Oliver // In F. J. de Bruijn (Ed.), Stress and environmental regulation of gene expression and adaptation in bacteria - 2016 - P. 1329-1337. Hoboken NJ: Wiley-Blackwell.

50. Ayrapetyan, M., and Oliver, J. D. The viable but non-culturable state and its relevance in food safety // Curr. Opin. Food Sci. -2016. - Vol.8. - p. 127-133.

51. Azevedo M.-M., Carvalho A., Pascoal C., Rodrigues F., Cassio F. Responses of antioxidant defenses to Cu and Zn stress in two aquatic fungi // Science of the Total Environment. -2007. - Vol. 377. - p.233-243.

52. Babu D., Kushwaha K., Juneja V.K.. Viable but Nonculturable // Encyclopedia of Food Microbiology (Second Edition). - 2014. -p.686-690.

53. Baffone, W., Campylobacter jejuni loss of culturability in aqueous microcosms and ability to resuscitate in a mouse model. / W. Baffone, A. Casaroli, B. Citterio, L. Pierfelici, R. Campana, E. Vittoria, E. Guaglianon, G. Donelli // International Journal of Food Microbiology - 2006 - Vol. 107 - P. 83-91. ма.

54. Bintsis T. Foodborne pathogens. // AIMS microbiology. - 2017. - 3(3) - p.

55. Boaretti M, Lleo MM, Bonato B, Signoretto C, Canepari P. Involvement of rpoS in the survival of Escherichia coli in the viable but nonculturable state // Environ. Microbiol. - 2003. - Vol. 5. - p. 986-996.

56. Bode G.. Mauch F., Malfertheiner P. The Coccoid Forms of Helicobacter pylori. Criteria for Their Viability // Epidemiology and Infection. - 1993. - Vol. 111(3). - p. 483-490.

57. Brenzinger, S., van der Aart, L. T., van Wezel, G. P., Lacroix, J.-M., Glatter, T., and Briegel, A. Structural and proteomic changes in viable but non-culturable Vibrio cholera // bioRxiv. - 2018.

58. Bridier, A., Hammes, F., Canette, A., Bouchez, T., and Briandet, R. Fluorescence-based tools for single-cell approaches in food microbiology // Int. J. Food Microbiol. - 2015. -Vol. 213. -p. 2-16.

59. Capozzi V., Di Toro M. R., Grieco F., Michelotti V., Salma M., Lamontanara A., Russo P., Orru L., Alexandre H., Spano G.. Viable But Not Culturable (VBNC) state of Brettanomyces bruxellensis in wine: New insights on molecular basis of VBNC behaviour using a transcriptomic approach. // Food Microbiology. - 2016. - Vol. 59. - p. 196-204.

60. Castellini, C., et al. Qualitative Attributes and Consumer Perception of Organic and Free-Range Poultry Meat. // World's Poultry Science Journal. - 2008. - 64. -p. 500-512.

61. Cellini L. Allocati, D. Angelucci, et al. Coccoid Helicobacter pylori Not Culturable in Vitro Reverts in Mice // Microbiol. Immunol. - 1994. - Vol. 38(11). - p. 843-850.

62. Chaiyanan, S., Chaiyanan, S., Grim, C., Maugel, T., Huq, A., and Colwell, R. R. Ultrastructure of coccoid viable but non-culturable Vibrio cholera // Environ. Microbiol. -2007. - Vol. 9. - p. 393-402.

63. Chang, C. W. (2017). Optimization of PMA-qPCR for Staphylococcus aureus and determination of viable bacteria in indoor air. / C. W. Chang, M. H. Lin // Indoor Air -Vol. 28 - P. 64-72. https://doi.org/10.1111/ina.12404

64. Colwell R. R., Brayton P., Herrington D., Tall B., Huq A., Levine M. M.. Viable but non-culturable Vibrio cholerae O1 revert to a cultivable state in the human intestine. // World Journal of Microbiology and Biotechnology. - 1996. - Vol. 12. - N1.-p. 28-31.

65. Colwell R.R., Almagro-Moreno S. Identical or different: viable but nonculturable, persister, strategic and/or dormant// Book of abstracts of V How dead id dead? International conference. -2017. - p. 4.

66. Combarros, R. Toxicity of titanium dioxide nanoparticles on Pseudomonas putida. / R. Combarros, S. Collado, M. Díaz // Water Research -2016 - Vol. 90 - P. 378386. https: //doi. org/ 10.1016/j. watres.2015.12.040

67. Coutard, F., Lozach, S., Pommepuy, M., and Hervio-Heath, D. (2007). Realtime reverse transcription-PCR for transcriptional expression analysis of virulence and housekeeping genes in viable but nonculturable Vibrio parahaemolyticus after recovery of culturability. Appl. Environ. Microbiol. 73, 5183-5189. doi: 10.1128/aem.02776-06

68. Cronquist, A. B., Mody, R. K., Atkinson, R., Besser, J., D'Angelo, M. T., Hurd, S., et al. (2012). Impacts of culture-independent diagnostic practices on public health surveillance for bacterial enteric pathogens. Clin. Infect. Dis. 54, S432-S439. doi: 10.1093/cid/cis267

69. Darcan C., Ozkanca R., Idil O., Flint K.P. Viable but non-culturable state (VBNC) of Escherichia coli related to EnvZ under the effect of pH, starvation and osmotic stress in sea water // Polish journal of microbiology. - 2009. - Vol. 58 (4). -p.307-317.

70. Day, A. P., and Oliver, J. D. Changes in membrane fatty acid composition during entry of Vibrio vulnificus into the viable but non-culturable state // J. Microbiol. -2004. - Vol. 42. -p. 69-73.

71. Dong K., Induction, detection, formation, and resuscitation of viable but non-culturable state microorganisms. / K. Dong, H. Pan, D. Yang, L. Rao, L. Zhao, Y. Wang, X. Liao // Compr Rev Food Sci Food Saf. 2020 - Vol. 19 - P. 149-183.

72. Fakruddin Md., Mannan K.S., Andrews S. Viable but Nonculturable Bacteria: Food Safety and Public Health Perspective // Microbiol. - 2014. -p. 55-70.

73. Ferro S., Amorico T., Deo P. Role of food sanitising treatments in inducing the 'viable but nonculturable' state of microorganisms. // Food Control. Volume 91, September 2018, Pages 321-329.

74. Ganesan B. Carbohydrate Starvation Causes a Metabolically Active but Nonculturable State in Lactococcus lactis. / Ganesan B., Stuart M.R., Weimer B.C. // Appl. Environ. Microbiol. - 2007. - Vol. 73(8). - p. 2498-2512.

75. Gangaiah D, Kassem II, Liu Z, Rajashekara G. Importance of polyphosphate kinase 1 for Campylobacter jejuni viable-but-nonculturable cell formation, natural transformation, and antimicrobial resistance // Appl Environ Microbiol. - 2009.- Vol. 75.- p. 7838-7849.

76. Havelaar, A.H., et al. World Health Organization Global Estimates and Regional Comparisons of the Burden of Foodborne Disease in 2010. // PLoS Medicine. -2015. - 12. -e1001923.

77. Hutchison EA, Miller DA, Angert ER (2014) Sporulation in bacteria: beyond the standard model. Microbiol Spectr 2:TBS-0013-2012

78. Imazaki, I. Temperature-upshift-mediated revival from the sodium-pyruvate-recoverable viable but nonculturable state induced by low temperature in Ralstonia solanacearum: Linear regression analysis. / I. Imazaki, K. Nakaho // Journal of General Plant Pathology - 2009 - Vol. 75 - P. 213-226. https://doi.org/10.1007/s10327-009-0166-0

79. Jackson, S. E., Hall, N. C., Rowe, P., and Daniels, L. M.. Getting the job: attributional retraining and the employment interview. // J. Appl. Soc. Psychol.- 2009, -Vol. 39. - p. 973-998.

80. Jiang W, Saxena A, Song B, Ward BB, Beveridge TJ, Myneni SC. Elucidation of functional groups on gram-positive and gram-negative bacterial surfaces using infrared spectroscopy // Langmuir .- 2004. - 20(26). - p.11433-11442.

81. Jones, D., Anderson, K. and Guard, J. Prevalence of Coliforms, Salmonella, Listeria, and Campylobacter Associated with Eggs and the Environment of Conven-tional Cage and Free-Range Egg Production. // Poultry Science. - 2012. - 91. - p. 1195-1202.

82. Jones, D., Anderson, K. and Musgrove, M. Comparison of Environmental and Egg Microbiology Associated with Conventional and Free-Range Laying Hen Management. // Poultry Science. - 2011. - 90. - p. 2063-2068.

83. Karsdal, M.A., Leeming, D.J., Henriksen, Kim & Bay-Jensen, A.-C. Biochemistry of Collagens, Laminins and Elastin: Structure, Function and Biomarkers. 2016. Amsterdam Academic Press. 240 p.

84. Kibbee, R. J. Development of a sensitive and false-positive free PMA-qPCR viability assay to quantify VBNC Escherichia coli and evaluate disinfection performance in wastewater effluent. / R. J. Kibbee, B. Ormeci, // Journal of Microbiological Methods - 2017 - Vol. 132 - P. 139-147. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2016.12.004

85. Klancnik A., Vuckovic D., Jamnik P., Abram M., Mozina SS. Stress response and virulence of heat-stressed Campylobacter jejuni // Microbes and environments.- 2014. - p. ME14020.

86. Kogure, K., Simidu, U., and Taga, N. A tentative direct microscopic method for counting living marine bacteria // Can. J. Microbiol. - 1979. - Vol. 25, - p. 415-420.

87. Kong I.-S. The role of reactive oxygen species in the viable but nonculturable state in Vibrio vulnificus. / I.S. Kong, A. Hülsmann, T.C. Bates, J.D. Oliver // FEMS Microbiol. Ecol. - 2004. - Vol. 50. - P. 133-142.

88. Koukkidis, G. Salad leaf juices enhance Salmonella growth, fresh produce colonisation and virulence. / G. Koukkidis, R. Haigh, N. Allcock, S. Jordan, P. Freestone, // Applied Environmental Microbiology - 2017 - Vol. 83(1) - P. 1-13

89. Krebs S. J., and Taylor, R. K. Nutrient-dependent, rapid transition of Vibrio cholerae to coccoid morphology and expression of the toxin co-regulated pilus in this form // Microbiology.- 2011.- Vol. 157. - p. 2942-2953.

90. Kusumoto A., Asakura H., K. Kawamoto. General stress sigma factor RpoS influences time required to enter the viable but non-culturable state in Salmonella enterica // Microbiol Immunol. - 2012. - Vol. 56(4). - p. 228-37.

91. Lemke M. J. Culturability of stream bacteria assessed at the assemblage and population levels. / Lemke, L. G. Leff, // Microbial Ecology - 2006 - Vol. 51 - P. 365374. https://doi.org/10.1007/s00248-006-9026-z

92. Léonard L., Bouarab Chibane L., Ouled Bouhedda B., Degraeve P., Oulahal N. Recent advances on multi-parameter flow cytometry to characterize antimicrobial treatments // Front. Microbiol. - 2016. - Vol. 7. - p. 1225.

93. Li L, Mendis N, Trigui H, Oliver JD and Faucher SP (2014) The importance of the viable but non-culturable state in human bacterial pathogens. Front. Microbiol. 5:258. doi: 10.3389/fmicb.2014.00258

94. Liao, H. Induction of a viable but non-culturable state in SalmonellaTyphimurium by thermosonication and factors affecting resuscitation. / H. Liao, L. Jiang, R. Zhang, // FEMS Microbiology Letters - 2018 - Vol. 365(2), fnx249. https://doi.org/10.1093/femsle/fnx249

95. Lleo, M., Bonato, B., Tafi, M., Signoretto, C., Boaretti, M., and Canepari, P. Resuscitation rate in different enterococcal species in the viable but non-culturable state // J. Appl. Microbiol. - 2001.- Vol. 91, - p. 1095-1102.

96. M. Ordax, E. G. Biosca, S. C. Wimalajeewa, M. M. López, and E. MarcoNoales, "Survival of Erwinia amylovora in mature apple fruit calyces through the viable but nonculturable (VBNC) state," Journal of Applied Microbiology, vol. 107, no. 1, pp. 106-116, 2009.

97. Masmoudi S. Inactivation of the gene katA or sodA affects the transient entry into the viable but non-culturable response of Staphylococcus aureus in natural seawater at low temperature / S. Masmoudi, M. Denis, S. Maalej // Marine Pollution Bulletin -2010 - Vol. 60 - P. 2209-2214

98. Masuda Y. Resuscitation of Tenacibaculum sp., the causative bacterium of spotting disease of sea urchin Strongylocentroutus intermedius from viable but non-

culturable state. / Y. Masuda, K. Tajima, Y. Ezura Y. // Fisheries Science. - 2004. - Vol. 70(2). - P. 277-284.

99. Mathur H., Rea M., Fallico V., Cotter P., Hill C., and Ross P. Flow cytometry as a tool to study the effects of bacteriocins on prokaryotic and eukaryotic cells. // J. Mol. Biomark. Diagn. - 2016. - p.S8:013.

100. McKay A.M. Nonviable bacterial pathogens. // Lett. Appl. Microbiol.- 1992. - Vol. 14. - p. 129-135.

101. Mizoguchi K., Hase M., Harima H., Nakashima S., Sakai K. Dynamics of coherent phonons in bismuth generated by ultrashort laser pulses. // Physical Review B.-1998.- Vol. 58 (9). - p. 5448-5452.

102. Moreira-Silva I., Diogo G.S., Marques A.Z.P., Silva T.H., Reis R.L. Marine collagen isolation and processing envisaging // Biomedical Applications Biomaterials from Nature for Advanced Devices and Therapies, First Edition. / ed. by Neves N.M., Reis R.L. / New Jersey: John Wiley & Sons 2016. P. 16-36 https://doi.org/10.1002/9781119126218.ch2

103. Morishige, Y., Fujimori, K., and Amano, F. Differential resuscitative effect of pyruvate and its analogues on VBNC (Viable But Non-Culturable) Salmonella // Microbes Environ. - 2013. - Vol. 28. - p. 180-186.

104. Mukamolova. On resuscitation from the dormant state of Micrococcus luteus. / G. V. Mukamolova, N. D. Yanopolskaya, D. B. Kell, A. S. Kaprelyants // Antonie Van Leeuwenhoek - 2018 -Vol. 73 - P. 237-243. https://doi.org/10.1023/A:1000881918216

105. Neill M. A., Carpenter C.C.J.. Other Pathogenic Vibrios // Mandell, Douglas, and Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases (Eighth Edition). - 2015. -Vol. 2.- p. 2480-2484.

106. Nicolo, M. S. (2012). Viable but nonculturable bacteria in food / M. S. Nicolo, S. P. P. Guglielmino, // in Public Health-Methodology, Environmental and Systems Issues, ed.J. Maddock (Rjeka: InTech) - P. 189-216. doi: 10.5772/38118

107. Nicolo, M. S., Gioffre, A., Carnazza, S., Platania, G., Silvestro, I. D., and Guglielmino, S. P. (2010). Viable but nonculturable state of foodborne pathogens in

grapefruit juice: a study of laboratory. Foodborne Pathog. Dis. 8, 11-17. doi: 10.1089/fpd.2009.0491

108. Nocker, A., and Camper, A. K. Novel approaches toward preferential detection of viable cells using nucleic acid amplification techniques. FEMS // Microbiol. Lett. - 2009. - Vol. 291. - p. 137-142.

109. Oh, E. Impact of oxidative stress defense on bacterial survival and morphological change in Campylobacter jejuni under aerobic conditions. / E. Oh, L. McMullen, B. Jeon // Front. Microbiol - 2015 - Vol. 6 - Article 295. doi: 10.3389/fmicb.2015.00295

110. Oliver J.D. Induction of Escherichia coli and Salmonella Typhimurium into viable but nonculturable state following chlorination of wastewater. / J.D. Oliver M. Dagher, K. Linden // J. Water Health. - 2005. - Vol. 3. - p. 249-57.

111. Oliver J.D. Recent findings on the viable but nonculturable state in pathogenic bacteria. FEMS Microbial Rev. - 2010. - Vol. 34(4). - p. 415-425.

112. Oliver J.D. The Viable but Nonculturable State in Bacteria / J.D. Oliver // J. Microbiol. - 2005. - Vol. 43(S). - p. 93-100.

113. Pan H., Dong K., Rao L., Zhao L., Wu X., Wang Y., Liao X. .Quantitative detection of viable but nonculturable state Escherichia coli O157H7 by ddPCR combined with propidium monoazide. // Food Control. - 2020. - Vol. 112.- p. 107140.

114. Pasquaroli S.. Zandri, C. Vignaroli, et al. Antibiotic pressure can induce the viable but non-culturable state in Staphylococcus aureus growing in biofilms // J. Antimicrob. Chemother. - 2013. - Vol. 68(8). - p. 1812-1817.

115. Pazos-Rojas, L.A.; Cuellar-Sánchez, A.; Romero-Cerón, A.L.; Rivera-Urbalejo, A.; Van Dillewijn, P.; Luna-Vital, D.A.; Muñoz-Rojas, J.; Morales-García, Y.E.; Bustillos-Cristales, M.d.R. The Viable but Non-Culturable (VBNC) State, a Poorly Explored Aspect of Beneficial Bacteria. Microorganisms 2024, 12, 39. https://doi.org/10.3390/ microorganisms12010039

116. Philipp, A. (2011). EHEC/EAEC O104:H4 strain linked with the 2011 German outbreak of haemolytic uremic syndrome enters into the viable but nonculturable state in response to various stresses and resuscitates upon stress relief. / A.

Philipp, P. Rita, F. Antje // Environmental Microbiology - 2011 - Vol. 13 - P. 3139-3148. https://doi.org/ 10.1111/j. 1462-2920.2011.02604.x

117. Pinto D., Almeida V., Almeida Santos M., Chambel L. Resuscitation of Escherichia coli VBNC cells depends on a variety of environmental or chemical stimuli // Appl.Microbiol. - 2011. - Vol. 110. - p. 1601-1611.

118. Pinto D., Santos M. A., Chambel, L. Thirty years of viable but nonculturable state research: Unsolved molecular mechanisms // Crit. Rev. Microbiol. - 2015.- Vol. 41.

- p. 61-76.

119. Pinto, D. Characterization of two resuscitation promoting factors of Listeria monocytogenes. / D. Pinto, C. Saojose, M. A. Santos, L. Chambel, // Microbiology - 2013

- Vol 159 - P. 1390-1401. doi: 10.1099/mic.0.067850-0

120. Postgate J.R. Accelerated death of Aerobacter aerogenes starved in the presence of growth-limiting substrates. / J.R.Postgate, J.R. Hunter // J . Gen. Microbiol.

- 1964.- Vol. 34(3). - P. 459-473.

121. Rahman I. Potential virulence of viable but nonculturable Shigella dysenteriae Type I. / I. Rahman, M. Shahamat, M.A. Choudhury, R.R. Colwell // Appl. Environ. Microbiol. - 1996. - Vol. 62(1). - P. 115-120.

122. Rawat S. Food Spoilage: Microorganisms and their prevention. // Asian Journal of Plant Science and Research. - 2015. - 5(4). - p. 47-56.

123. Reissbrodt, R. Resuscitation by ferrioxamine E of Stressed Salmonella enterica serovar Typhimurium from soil and water microcosms. / R. Reissbrodt, H. Heier, H. Tschape, R. A. Kingsley, P. H. Williams // Applied and Environmental Microbiology

- 2000 - Vol. 66 - P. 4128-4130. https://doi.org/10.1128/AEM.66.9.4128-4130.2000

124. Roszak D.B. Survival strategies of bacteria in the natural environment. / D.B. Roszak, R.R. Colwell // Microbiol. Rev. - 1987. - Vol. 51(3). - p. 365-379.

125. Roszak D.B., Colwell R.R. Metabolic activity of bacterial cells enumerated by direct viable count // Appl. Microbiol.- 1987. - Vol. 53. - p. 2889-2893.

126. Roszak, D. B., Grimes, D. J., Colwell, R. R. Viable but nonrecoverable stage of Salmonella enteritidis in aquatic systems / D. B. Roszak, D. J. Grimes, R. R. Colwell

// Canadian Journal of Microbiology - 1984 - Vol. 30 - P. 334-338. https: //doi.org/10.1139/m84-049

127. Roszak, D., Grimes, D., and Colwell, R. Viable but nonrecoverable stage of Salmonella enteritidis in aquatic systems //Can. J. Microbiol. - 1984. - Vol. 30.- p.334-338.

128. Rouger, A., Tresse, O. and Zagorec, M. Bacterial Contaminants of Poultry Meat: Sources, Species, and Dynamics. // Microorganisms. - 2017. - 5. - p. 50.

129. Rowan, N. J. Viable but non-culturable forms of food and waterborne bacteria: quo vadis? / N. J. Rowan, //Trends Food Sci. Technol. - 2004 - Vol. 15 - P. 462-467. doi: 10.1016/j.tifs. 2004.02.009

130. Sabarinath, A., et al. Bacterial Contamination of Commercial Chicken Eggs in Grenada, West Indies. // West Indian Veterinary Journal. - 2009. - 9. - p. 4-7.

131. Sahin, O., Morishita, T.Y. and Zhang, Q. Campylobacter Colonization in Poultry: Sources of Infection and Modes of Transmission. // Animal Health Research Reviews. - 2002. - t 3. - p.95-105.

132. Scheutz, F., Nielsen, E. M., Frimodt-Moller, J., Boisen, N., Morabito, S., Tozzoli, R., et al. (). Characteristics of the enteroaggregative Shiga toxin/verotoxin-producing Escherichia coli O104:H4 strain causing the outbreak of haemolytic uraemic syndrome in Germany, May to June 2011 // Euro Surveill.- 2011. - Vol.16. - p. 19889.

133. Semenyhcheva L.L., Valetova N.B., Chasova V.O., Podguskova M.V., Zakharicheva N.S., Egorikhina M.N., Asatanina M.V., Kuznetsova Yu.I. Molecular weight parameters of collagen from different feedstock and dynamics of their change upon Enzymatic Hydrolysis by Pancreatin // Polymer Science, Series D. 2020. Vol. 13. p. 235-239. https://doi.org/10.1134/S1995421220020203

134. Senoh M., Conversion of viable but nonculturable Vibrio cholerae to the culturable state by co-culture with eukaryotic cells. / J. Ghosh-Banerjee, T. Ramamurthy, T. Hamabata, T. Kurakawa, M. Takeda, R.R. Colwell, G.B. Nair, Y. Takeda // Microbiology and Immunology. - 2010. - Vol. 54(9). - P. 502-507.

135. Sheridan, G. E. C., Masters, C. I., Shallcross, J. A., and Mackey, B. M. (). Detection of mRNA by reverse transcription-PCR as an indicator of viability in Escherichia coli cells //Appl. Environ. Microbiol. -1998.- Vol. 64. - p. 1313-1318.

136. Shleeva M.O., Mukamolova G.V., Young M. Formation of «non-culturable» cells of Mycobacterium smegmatis in stationary phase in response to growth under suboptimal conditions and their Rpf-mediated resuscitation // Microbiology. - 2004. -Vol.150(6). - p.1687-1697.

137. Signoretto, C., Lleo, M. M., Tafi, M. C., and Canepari, P. Cell wall chemical composition of Enterococcus faecalis in the viable but nonculturable state. Appl. Environ. Microbiol. - 2000.- Vol.66.- p. 1953-1959.

138. Sperandio, V. Bacteria-host communication: the language of hormones. / V. Sperandio, A.G. Torres, B. Jarvis, J.P. Nataro, J.B. Kaper, // Proceedings of the National Academy of Sciences - Vol. 100(15) - P. 8951-8956

139. Strandwitz P. Neurotransmitter modulation by the gut microbiota // Brain Res. - 2018.- 1693 (Pt B). - p. 128-133.

140. Su C-P. Changes of ultrastructure and stress tolerance of Vibrio parahaemolyticus upon entering viable but nonculturable state. / C-P. Su, W-N. Jane, H-C. Wong // International Journal of Food Microbiology. - 2013. - Vol. 160(3). - P. 360-366.

141. F. Sun F., Chen J., Zhong L.et al., "Characterization and virulence retention of viable but nonculturable Vibrio harveyi," FEMS Microbiology Ecology, vol. 64, no. 1, pp. 37-44, 2008

142. Trevors, J. T. Viable but non-culturable (VBNC) bacteria: gene expression in planktonic and biofilm cells // J. Microbiol. Methods. -2011.- Vol. 86. - p. 266.

143. Ultee E., Ramijan K., Dame R. T., Briegel A., Claessen D. Stress-induced adaptive morphogenesis in bacteria // Advances in Microbial Physiology. - 2019. - Vol. 74. - p. 97-141.

144. Vilhena F.V., Silva C.E., Levy F.M., Pela V.T., Inhesta A.V. Percep?ao de professores e gestores em rela?ao a saude bucal por meio de Grupos Focais // Anais. -2018.

145. Whiley H. and Ross K. Salmonella and Eggs: From Production to Plate. International. // Journal of Environmental Research and Public Health. - 2015. - 12. - p. 2543-2556.

146. Whitesides M.D. Resuscitation of Vibrio vulnificus from the viable but nonculturable state. / M.D Whitesides., J.D. Oliver // Appl. Environ. Microbiol. - 1997.

- Vol. 63(3). - P. 1002-1005.

147. Xu H. -Sh., Roberts N., Singleton F.L. et al. Survival and viability of nonculturable Escherichia coli and Vibrio cholerae in the estuarine and marine environment // Microb. Ecol. - 1982. - Vol 8. - p. 313-323.

148. Xu L. Mechanisms of ultraviolet disinfection and chlorination of Escherichia coli: Culturability, membrane permeability, metabolism, and genetic damage. / L. Xu, C. Zhang, P. Xu, X. C. Wang, // Journal of Environmental Sciences - 2018 - Vol. 65 - P. 356-366. https://doi.org/10.1016/jjes.2017.07.006

149. Xua Z., Xu R., Soteyome T., Deng Y., Chen L., Liang Y., Bai C., Huang T., Liu J., M.Harro J., V. Kjellerup B. Genomic analysis of a hop-resistance Lactobacillus brevis strain responsible for food spoilage and capable of entering into the VBNC state. Microbial Pathogenesis // Journal Pre-proof. - 2020.- p. 104186.

150. Yang, W., Alvarado, A., Glatter, T., Ringgaard, S., and Briegel, A.. Baseplate variability of Vibrio cholera chemoreceptor arrays // Proc. Natl. Acad. Sci.-2018- Vol. 57.- p. 201811931.

151. Zhang X.H., Ahmad W., Zhu X.Y. et al. Viable but nonculturable bacteria and their resuscitation: implications for cultivating uncultured marine microorganisms. Mar Life Sci Technol 3, 189-203 (2021). https://doi.org/10.1007/s42995-020-00041-3

152. Zhao F. Induction of Viable but Nonculturable Escherichia coli O157:H7 by High Pressure CO2 and Its Characteristics / F. Zhao, X. Bi, Y. Hao, X. Liao // PloS One

- 2013 - Vol. 8(4) - e2388.

153. Zhao X, Zhong J, Wei C, Lin C-W and Ding T. Current Perspectives on Viable but Non-culturable State in Foodborne Pathogens // Front. Microbiol. - 2017. -Vol 8. - p. 580.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

ь МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИНЦИПЫ I РАБОТЫ С ЖИЗНЕСПОСОБНЫМИ

,г~ J *

УДК 579 ББК 28.4 М 59

DOI: 10.36871/978-5-907672-64-2

Рецензенты:

Альтшулер M.JJ., канд. биол. наук, научн. сотр. ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Горячева М.М., канд. вет. наук, доцент кафедры «Ветеринарная медицина» ФГБОУ ВО РОСБИОТЕХ

М 59 Абдуллаева A.M., Блинкова Л.П.,Пахомов Ю.Д., Валитова Р.К. Микробиологические принципы работы с жизнеспособными некультивируемыми микроорганизмами: монография - М.: Издательский дом «НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА», - 2023. - 160 с.

ISBN 978-5-907672-64-2

В книге приведены материалы по жизнеспособным некульти-вируемым бактериям-контаминантам, не выявляемым в пищевых продуктах с помощью общепринятых методов микробиологического контроля, которые могут размножаться до опасного количественного уровня и вызвать заболевания пищевого происхождения.

Цель книги - помочь студентам самостоятельно освоить теоретические и экспериментальные вопросы микробиологического контроля пищевой продукции согласно действующим на территории нашей страны нормативным документам: TP ТС, СанПиН. Материалы могут быть использованы специалистами, бакалаврами, магистрантами и аспирантами при подготовке курсовых и выпускных квалификационных работ, магистерских и кандидатских диссертаций.

ISBN 978-5-907672-64-2

© A.M. Абдуллаева, Л.П. Блинкова, Ю.Д. Пахомов, Валитова Р.К. 2023 © Издательский дом «НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА», 2023

ЗОЛОТАЯ ОСЕНЬ 2023

XXV РОССИЙСКАЯ АГРОПРОМЫШЛЕННАЯ ВЫСТАВКА

ДИПЛОМ

НАГРАЖДАЕТСЯ СЕРЕБРЯНОЙ МЕДАЛЬЮ

ФГБОУ ВО РОСБИОТЕХ, г. Москва

За разработку инновационной технологии получения жизнеспособных некультивируемых микроорганизмов

МИНОБРНАУКИ РОССИИ

Проректор по образовательной деятельности ФГБОУ ВО

югический

федеральное государственное бюджетное

образовательное учреждение

высшего образования

ршсиТрГ (РрИЯЮТЕХ)»

Даньшина

«Российский биотехнологический

университет (РОСБИОТЕХ)» (ФГБОУ ВО «РОСБИОТЕХ»)

Волоколамское шоссе, дом 11, Москва,

125080

Тел. [phone] (доб. 65-67) Е-таЛ: infofflVoshiotex.ru: web: rosbiolex.ru ОКПО 02068634; ОГРН 1037739533699 ИНН/КПП 7712029651/774301001

«_»

СПРАВКА

об использовании в учебном процессе материалов диссертационнои работы на тему «Обнаружение бактерий в жизнеспособном некультивируемом состоянии в объектах ветеринарного надзора»

Материалы диссертационной работы соискателя ФГБОУ ВО «РОСБИОТЕХ» Валитовой Румии Камилевны по экспериментальному проведению анализа динамики образования и реверсии жизнеспособных некультивируемых клеток микроорганизмов, изучению влияния бактериофагов на гомологичные бактерии в некультивируемом состоянии и исследований по обнаружению ЖНК патогенов в объектах ветеринарного надзора ииспользуются в учебном процессе при подготовке ветеринарных врачей, бакалавров и магистров ветеринарно-санитарной экспертизы на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы и биологической безопасности ФГБОУ ВО «Российский биотехнологический университет» по дисциплинам «Микробиология», «Ветеринарная микробиология», «Санитарная микробиология», «Микробиологическая безопасность сельскохозяйственной продукции».

«УТВЕРЖДАЮ»

Проректор по науке и инновациям ФГБОУ ВО '<Московско\гос>дарственной академии ветеринарной медицины и биотехншвгии-МВА нмеф К- И. Скрябина» A.A. ДЙ

СПРАВКА О ВНЕДРЕНИИ в учебный процесс

Выдана Валитовой Румие Камилевне для гтредостаатения в диссертационный совет и свидетельствующая о том, что материалы диссертационной работы на тему: «Обнаружение бактерий в жизнеспособном некультивируемом состоянии в объектах ветеринарного надзора» используются в учебном процессе при подготовке ветеринарных врачей, бакалавров и магистров ветеринарно-санитарной экспертизы на кафедре паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы по дисциплинам ветеринарно-санитарная экспертиза, биобезопасность сырья и продуктов животного происхождения при болезнях разной этиологии, ветеринарно-санитарный регламент утилизации отходов.

Заведующий кафедрой паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы, д.в.н.

академик РАН, профессор

Ф.И. Василевич

Россельхознадзор

федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

микрорайон Юрьевец, город Владимир, Владимирская область, Россия, 600901 тел.: [phone], т./ф.: [phone] e-mail: [e-mail],cailT: www.arriah.ru (ЖПО: 00495527170001, ОГРН: 1023301283720, ИНН/КПП: 3327100048/332701001

На №_ от

О подтверждении использования в учебном процессе материалов диссертационной работы на тему: «Обнаружение бактерий в жизнеспособном некультивируемом состоянии в объектах ветеринарного надзора».

Результаты диссертационной работы соискателя ФГБОУ ВО «РОСБИОТЕХ» Валитовой Р. К. по экспериментальному проведению анализа динамики образования и реверсии жизнеспособных некультивируемых клеток микроорганизмов, находившихся длительное время в условиях трофического и осмотического стресса; изучению влияния бактериофагов на гомологичные бактерии в некультивируемом состоянии; а также выполнению исследований по обнаружению ЖНК патогенов в объектах ветеринарного надзора используются в учебном процессе при подготовке ветеринарных врачей отделов ветеринарно-санитарной экспертизы, областных, региональных лабораторий и референтных центров на курсах повышения квалификации.

СПРАВКА

Заместитель директора

Н.В. Лебедев

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК

Отделение сельскохозяйственных наук

Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии - филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко Российской Академии Наук»

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Обнаружение бактерий в жизнеспособном некулыивируемом состоянии в мясном сырье и пищевых продуктах животного происхождения

«УТВЕРЖДАЮ»

Заместитель академика-секретаря Отделения сельскохозяйственных наук РАН -

™и и ветеринарии

Н.А. Зиновьева 2025 г.

Москва - 2025

Методические рекомендации «Обнаружение бактерий е жизнеспособном в еку лыив нру емом состоянии в мясном сырье н пищевых проектах ;кнвогного происхождения» разработаны учеными ФГБОУ ВО «РОСБИОТЕХ» (заведующая кафедрой ветеринарно-санитарнон экспертизы и оно логической безопасности ЩСЗвБЕХ д.б.н. Абдуллаева А.М.: аспиранты Валитова Р.К., КйИбвВШ, Е-А-= т А =

научный консультант академик РАН З^д&Б.В.); ФГБНУ НИИ ваклин и сыЕороток им. И.И. Мечникова (заведующая лабораторией микробиологических питательных сред: gj^g, проф. Л.П. Блинков а: старший научный сотрз'дннк, к.б.н. Пахомов Ю.Д.7 академик РАН Зверев В.В.Г член-корр. РАН O.A.) и ВНИИВСГЭ - фнжал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ

РАН (руководитель института, главный научный сотрудник лаборатории ветеринарно-санитарнон экспертазьг fljJÄ Попов П.А.).

Рецензенты:

Стоянова Л.Г. - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова»

Барановин Е. С. - кандидат ветеринарных наук доцент Российского государственного аграрного университета — МСХА имени К. А. Тимирязева.

«Методические рекомендации по обнаружению бактерий в жизнеспособном некулыивнруемом состоянии в мясном сырье и пищевых продуктах ;кнвогного происхождении;- рассмотрены и одобрены научной методической комиссией ВНИИВСГЭ - филиал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН {протокол № 1 от 30.01.2025 г.), учёным советом ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (протокол № 1 от 04.02.2025 г.): рассмотрены на научном совете

секции зоотехнии и ветеринарии РАН и рекомендованы к применению (протокол №_

от_г.).

Оглавление

1. Область применения...........................................................................................4

2. Нормативные документы...................................................................................4

3. Введение..............................................................................................................5

4. Сущность метода................................................................................................6

5. Материалы, оборудование и инвентарь.........................................................7

6. Условия выполнения измерений.......................................................................9

7. Проведение исследования...............................................................................9

8. Обработка результатов.....................................................................................11

9. Требования безопасности................................................................................13

10. Персонал. Распределение ответственности..............................................14

Список рекомендуемых источников...................................................................15