Полиморфизм генов, связанных с уровнем половых гормонов, и риск развития эндометриоза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Головченко Илья Олегович

• Головченко Илья Олегович
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Головченко Илья Олегович

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Этиопатогенез эндометриоза и его факторы риска

1.2. Генетические аспекты формирования эндометриоза

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Характеристика дизайна и выборки исследования

2.2. Отбор молекулярно-генетических маркеров для исследования

2.3. Молекулярно-генетические методы

2.4. Методы статистического анализа

ГЛАВА 3. Оценка вклада полиморфизма генов половых

гормонов в формирование эндометриоза

3.1. Клинико-анамнестическая характеристика и гормональный

профиль больных эндометриозом

3.2. Анализ связей полиморфных локусов генов половых

гормонов с эндометриозом

3.3. Роль генов-кандидатов в формировании бесплодия у

пациенток с эндометриозом

3.4. Полиморфизм генов половых гормонов и развитие сочетанных пролиферативных заболеваний матки

3.5. Генетические детерминанты гормонального статуса

пациенток с эндометриозом

3.6. Функциональный потенциал полиморфных локусов генов

половых гормонов, связанных с эндометриозом

Обсуждение

Выводы

Практические рекомендации

Список сокращений

Список литературы

Электронные приложения..........................................................0,47 МЬ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Полиморфизм генов, связанных с уровнем половых гормонов, и риск развития эндометриоза»

Актуальность темы исследования

Эндометриоз - это гинекологическое заболевание, характеризующееся ростом эндометриоподобных тканей внутри и снаружи полости малого таза (Адамян Л.В. и др., 2022; Dinsdale N. et al., 2021а). Данное заболевание диагностируется примерно у 10% всех женщин репродуктивного возраста, что составляет более 170 миллионов женщин во всем мире (Delia Corte L. et al., 2020; Zubrzycka A. et al., 2020; Foster W.G. et al., 2021). Пик заболеваемости эндометриозом наблюдается в возрастной группе 25-35 лет (Coccia M.E. et al., 2022). Следует отметить, что распространенность эндометриоза достигает максимальных значений среди бесплодных женщин, у которых этот показатель может составлять 50% (Бегович Ё. и др., 2022; Оразов М.Р. и др., 2022; Варданян В.А. и др. 2024; Filip L. et al., 2020; Bonavina G. et al., 2022; Spencer S. et al., 2022). Эндометриоз затрагивает все аспекты жизни женщины (физическое, психическое здоровье, сексуальное и социальное благополучие) и значительно снижает качество ее жизни (Адамян Л.В. и др., 2022a; Сухих Г.Т. и др., 2023; van Poll M. et al., 2020; Missmer S.A. et al., 2021; Troia L. et al., 2022; Del Forno S. et al., 2024; Maulenkul T. et al., 2024). Литературные данные указывают на то, что эндометриоз может обусловливать развитие рака яичников (Адамян Л.В. и др., 2022b; Brunty S. et al., 2020; Penciu R.C. et al., 2020; Giannini A. et al., 2024; Ring K.L., 2024). В системе здравоохранения затраты на пациентку с эндометриозом составляют более 16 тысяч долларов США в год, что в 3 раза превосходит аналогичный показатель для женщины, не имеющей этого заболевания (Surrey E. et al., 2020; Darbà J. et al., 2022). Ежегодные расходы на лечение женщин с эндометриозом в США составляют около 50 миллиардов долларов (Soliman A.M. et al., 2018).

Несмотря на многочисленные фундаментальные и клинические исследования, посвященные изучению этиопатогенеза эндометриоза, на сегодняшний день причинные факторы и механизмы развития данного заболевания

остаются до конца не понятными (Адамян Л.В. и др., 2020; Оразов М.Р. и др. 2023; Cano-Herrera G et al., 2024). Согласно данным литературы, эндометриоз имеет мультифакторную природу происхождения и представляет собой результат комбинированного воздействия эмбриональных, гормональных,

иммунологических, генетических, эпигенетических и средовых факторов (Кудрявцева Е.В. и др., 2021; Адамян Л.В. и др., 2023; Lagana A.S. et al., 2019; Zubrzycka A. et al., 2020; Malvezzi H. et al., 2020; Smolarz B. et al., 2021; Lagana A.S. et al., 2023; Kobayashi H. et al., 2024).

Степень разработанности темы исследования

Генетические основы развития эндометриоза активно изучаются различными научными коллективами (Пшеничнюк Е.Ю. и др., 2017; Пономаренко И.В. и др., 2019a; Алтухова О.Б. и др., 2021; Baranov V. et al., 2018; Gallagher C.S. et al. 2019; Joseph S. et al., 2019; Matalliotaki C. et al., 2019; Vassilopoulou L. et al., 2019; Wei Z. et al., 2019; Adewuyi E.O. et al. 2020; Ponomarenko I. et al., 2020a; Adamyan L. et al., 2021; Rahmioglu N. et al., 2023; Proestling K. et al., 2024). Результаты близнецовых исследований показали, что генетические влияния на развитие эндометриоза весьма значительны и составляют около 50% (Saha R. et al., 2015). Lee et al. оценили SNP-наследуемость эндометриоза в 26% (Lee S.H. et al., 2012). GWAS-значимые полиморфизмы объясняют около 5% вариабельности эндометриоза (Sapkota Y. et al., 2017; Rahmioglu N. et al., 2023). Таким образом, показатель вклада наследственных факторов в развитие эндометриоза, полученный на основе известных GWAS-значимых полиморфизмов (-5%), почти в 10 раз меньше аналогичного показателя, полученного на основе данных близнецовых исследований (-50%). Эти данные свидетельствуют о том, что на сегодняшний день мало что известно о конкретных генетических вариантах, которые способствуют возникновению данного заболевания (90% генетических детерминант эндометриоза считаются неизвестными) (Адамян Л.В. и др., 2020; McGrath I.M. et al., 2021).

Эндометриоз - гормонозависимое гинекологическое заболевание, связанное с половыми гормонами (эстрадиол, прогестерон, фолликулостимулирующий

гормон и др.) (Dinsdale N. et al., 2021a; Dinsdale N.L. et al., 2021b; Foster W.G. et al., 2021; Zhang P. et al., 2023). Многочисленные ассоциативные исследования, включая GWAS, показали взаимосвязь между эндометриозом и полиморфизмом генов половых гормонов (FN1, FSHB, ESR1, CCDC170, LHCGR, SYNE1 и др.) (Ruth K.S. et al., 2016a; Sapkota Y. et al., 2017; Adewuyi E.O. et al., 2020; Bianco B. et al., 2021). В то же время имеются GWAS данные о связи ряда SNP с уровнем половых гормонов (эстрадиола, глобулина, связывающего половые гормоны, индекса свободных андрогенов, тестостерона, дегидроэпиандростерона, лютеинизирующего гормона, фолликулостимулирующего гормона, прогестерона) (Prescott J. et al., 2012; Wood A.R. et al., 2013; Ruth K.S. et al., 2016b; Ruth K.S. et al., 2020). Можно предположить, что GWAS-значимые полиморфизмы уровня половых гормонов могут быть вовлечены в развитие эндометриоза. Следует отметить, что в предыдущих исследованиях только для некоторых из этих полиморфных локусов, расположенных в регионе промотора гена FSHB (rs11031002 и rs11031005) и сильно связанных с ними SNP (rs74485684, rs11031010, rs10835638, rs1782507, rs555621) были продемонстрированы ассоциации с эндометриозом (Ruth K.S. et al., 2016a; Sapkota Y. et al., 2017; Adewuyi E.O. et al., 2020; Ponomarenko I. et al., 2020a; Garitazelaia A. et al., 2021). Вместе с этим, менделевский рандомизационный анализ данных GWAS по эндометриозу и половым гормонам (Ruth K.S. et al., 2016b; Sapkota Y. et al., 2017), выполненный Garitazelaia et al., не выявил достоверной связи между эндометриозом и уровнем половых гормонов (Garitazelaia A. et al., 2021). Существующая неопределенность в этом вопросе диктует необходимость продолжения исследований по данной проблеме.

Цель исследования

Изучить связь GWAS-значимых полиморфных локусов генов половых гормонов с риском развития и фенотипическими характеристиками эндометриоза у женщин Центрального Черноземья России.

Задачи исследования

1. Установить ассоциации полиморфных локусов генов половых гормонов (ге148982377 ZNF789, ^34670419 ZKSCAN5, ге11031002 FSHB, ге11031005 FSHB, rs112295236 SLC22A10, ^117585797 ANO2, rs117145500 CHD9, ^727428 SHBG, rs1641549 ТР53) с формированием эндометриоза.

2. Выявить SNPXSNP взаимодействия, определяющие подверженность к эндометриозу.

3. Оценить роль полиморфизма генов половых гормонов в развитии бесплодия при эндометриозе.

4. Провести анализ вовлеченности полиморфных локусов генов половых гормонов в формирование сочетанных пролиферативных заболеваний матки у пациенток с эндометриозом.

5. Проанализировать связи генов-кандидатов половых гормонов с гормональным профилем женщин, имеющих эндометриоз.

6. Рассмотреть функциональные эффекты полиморфных локусов генов половых гормонов, вовлеченных в развитие эндометриоза.

Научная новизна

Впервые установлены связи GWAS-значимых полиморфных локусов генов половых гормонов с развитием эндометриоза у женщин Центрального Черноземья России. Выявлена вовлеченность в формирование эндометриоза полиморфизма ^11031002 и ^11031005 гена FSHB. Определены 12 наиболее значимых межгенных взаимодействий 8 полиморфных локусов генов половых гормонов, ассоциированных с эндометриозом.

Впервые показана роль полиморфизма генов половых гормонов в формировании особенностей клинического течения эндометриоза - молекулярно-генетический маркер ^148982377 гена ZNF789 является протективным фактором развития бесплодия при эндометриозе, полиморфный локус ^117585797 гена ANO2 служит рисковым фактором формирования сочетанных пролиферативных заболеваний матки. Показана связь генов половых гормонов с гормональным

профилем (эстрадиол, лютеинизирующий гормон, прогестерон, пролактин, тестостерон) пациенток с эндометриозом.

Установлены значимые функциональные эффекты 8 SNPs генов половых гормонов, ассоциированных с развитием эндометриоза и 80 сильно сцепленных с ними SNPs по отношению к 34 генам-кандидатам, которые связаны с процессами переноса органических анионов и вторичным переносчиком транспортера.

Теоретическая и практическая значимость Результаты, полученные в ходе выполнения данной диссертационной работы, дополняют представления о молекулярно-генетических механизмах развития эндометриоза данными о роли отдельных GWAS-значимых полиморфизмов генов половых гормонов в формировании заболевания у женщин Центрального Черноземья России. Данные работы, демонстрирующие вовлеченность полиморфных локусов генов половых гормонов в клинические характеристики эндометриоза, имеют важное практическое значение. Материалы диссертации могут использоваться в практической деятельности врачей - гинекологов при диспансеризации (профосмотрах) клинически здоровых индивидуумов для установления среди них групп женщин, имеющих высокий риск возникновения эндометриоза, а также при ведении пациенток с эндометриозом - для формирования групп больных с повышенным риском развития бесплодия, а также сочетанных пролиферативных заболеваний матки. Помимо этого, результаты данной работы могут использоваться в медицинских вузах при чтении спецкурсов по медицинской и клинической генетике, гинекологии, а также повышении квалификации медработников. Результаты диссертационного исследования внедрены в практическую деятельность врачей - генетиков перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа, а также в учебный процесс ФГАОУ ВО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет».

Методология и методы исследования Диссертационное исследование выполнено в стандартном для медицинской генетики дизайне «больные-контроль» на выборке 1368 женщин (395 пациенток с

эндометриозом и 973 индивидуума контроля). С учетом современных требований осуществлен отбор SNPs для данной работы (ассоциации с уровнем половых гормонов по данным GWAS исследований, регуляторное значение, вовлеченность в регуляцию транскрипции генов и частота минорного аллеля >1%). Генотипирование отобранных для исследования локусов генов половых гормонов было выполнено в НИЛ «Молекулярной генетики человека» НИУ «БелГУ». Обработка полученных данных осуществлялась с помощью современных генетико-статистических методов (gPLINK, Haploview, MDR, MB-MDR, Quanto). Также в работе использовались современные мировые базы данных (HaploReg, GTExportal, Gene Ontology, GeneMANIA) для оценки функционального потенциала анализируемых молекулярно-генетических маркеров генов половых гормонов, связанных с формированием и клиническими особенностями эндометриоза и сильно сцепленых (r2>0,80) с ними SNPs.

Положения, выносимые на защиту

1. Полиморфизм генов половых гормонов вовлечен в формирование эндометриоза у женщин Центрального Черноземья России.

2. Гены-кандидаты половых гормонов ассоциированы с развитием бесплодия у пациенток с эндометриозом.

3. Риск возникновения сочетанных пролиферативных заболеваний матки у женщин с эндометриозом связан с генетическим полиморфизмом.

4. Гормональный профиль больных эндометриозом детерминируется полиморфными локусами генов половых гормонов.

5. Молекулярно-генетические маркеры генов половых гормонов, связанные с эндометриозом, и сильно сцепленные с ними 80 SNPs, имеют значимый функциональный потенциал и определяют вовлеченность в патофизиологию заболевания 34 генов-кандидатов.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность результатов, полученных в диссертации, подтверждается большим объёмом выборки исследования (n=1368), использованием в работе

современных генетико-статистических и биоинформатических методов исследования.

Материалы диссертационной работы были представлены на конференциях российского и международного уровней: XV Международная научно-практическая конференция молодых ученых «СОВА-2021» (Курск, 2021), III науково-практична конференщя студенев та молодих вчених з мiжнародною участю «Вщ експериментально! та китчно! патофiзюлоril до досягнень сучасно! медицини i фармаци» (Харкiв, 2021), IV Науково-практична inernet-конференщя з мiжнародною участю «Мехашзми розвитку патологiчних процесiв i хвороб та !хня фармакологiчна корекщя» (Харкiв, 2021), Международная научно-практическая конференция «Медицинская наука в эру цифровой трансформации» (Курск, 2021), VI, VII Междисциплинарный медицинский форум с международным участием «Актуальные вопросы совершенствования медицинской помощи и медицинского образования» (Белгород, 2021, 2022), IV Международный симпозиум «Innоvatiоns in life srie^es» (Белгород, 2022), 2nd International Electronic Conference on Biomedicines (Базель, 2023), Международная конференция «Gynecology & Women's Health» (Орландо, 2023).

Личный вклад

Автором сформулированы цель и задачи данного исследования, а также определены подходы для их выполнения. Соискатель ученой степени участвовал в выполнении экспериментальной (молекулярно-генетической) части исследования, обработал полученные данные с использованием современных генетико-статистических методов и обобщил полученные в ходе выполнения работы результаты. Автор лично оформил рукопись, апробировал и опубликовал результаты исследования.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, в том числе 6 статей в журналах из перечня рецензируемых научных изданий, рекомендованных ВАК РФ и включённых в мировые базы данных научного цитирования (Web of Science, Scopus), получен патент на изобретение и свидетельство на ноу-хау.

Объём и структура диссертации

Диссертационная работа представлена на 136 страницах машинописного текста и состоит из стандартных глав (введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, обсуждение, выводы, практические рекомендаций), списка литературы. К диссертации прилагается электронное приложение. Диссертация иллюстрирована 24 рисунками и 26 таблицами. Библиографический список включает 204 литературных источника, из них 29 - отечественных и 175 - зарубежных.

ГЛАВА 1. Обзор литературы 1.1. Этиопатогенез эндометриоза и его факторы риска

Эндометриоз - это гинекологическое заболевание, характеризующееся ростом эндометриоподобных тканей внутри и снаружи полости малого таза (Адамян Л.В. и др., 2020).

Несмотря на многочисленные фундаментальные и клинические исследования, посвященные изучению этиопатогенеза эндометриоза, на сегодняшний день причинные факторы и механизмы развития данного заболевания остаются до конца не понятными. Согласно данным литературы, эндометриоз имеет мультифакторную природу происхождения и представляет собой результат комбинированного воздействия эмбриональных, гормональных,

иммунологических, генетических, эпигенетических и средовых факторов (рисунок 1) (Пономаренко И.В. и др., 2019b; Глушич С.Ю. и др., 2020; Самойлова А.В. и др., 2020; Калиматова Д.М. и др., 2021; Пономарева Т.А. и др., 2024а; Lagana A.S. et al., 2019; Zubrzycka A. et al., 2020; Malvezzi H. et al., 2020).

Retrograde menstruation Metaplastic transformation

MQIIerian remnant anomalies

Lymphatic/hematogenous spread

Endometrial stem/progenitor cells

Embryonic/Fetal origin

Рисунок 1 - Основные патогенетические механизмы развития эндометриоза

(Zubrzycka A. et al., 2020)

Среди многочисленных теорий патогенеза эндометриоза одной из наиболее распространенных является имплантационная или теория ретроградной менструации. В соответствии с этой теорией, заболевание развивается вследствие выхода клеток эндометрия из матки через фаллопиевы трубы во время менструации в брюшную полость с последующей их адгезией на мезотелиальные клетки брюшины и развитием в эндометриоидные очаги. При этом, следует отметить, что ретроградная менструация встречается у 90% женщин, но только у 10% из них развивается эндометриоз (Garcia-Ibanez P. et al., 2020; Quinn M.J. 2024). Более того, есть данные о том, что у женщин с эндометриозом и без него встречаемость ретроградных менструаций не отличается (Vallvé-Juanico J. et al.,

2019) и клетки эндометрия обнаруживаются в перитонеальной жидкости во время менструации в обеих группах женщин (Tal A. et al., 2019). Наряду с этим, согласно результатов ряда исследований, пациентки с эндометриозом, как правило, имеют более продолжительные, обильные менструации и короткие интервалы между менструальными циклами (Klemmt P.A.B. et al., 2018; Tal A. et al., 2019; Maddern J. et al., 2020), что может способствовать развитию данного заболевания.

Кроме того, следует подчеркнуть, что наблюдающаяся при этом дисфункция иммунной системы и неспособность защитных сил организма эффективно очистить брюшину от эктопического «мусора» благоприятствует прикреплению и росту эктопической ткани эндометрия (Vitale S.G. et al., 2018; Vallvé-Juanico J. et al., 2019; Maddern J. et al., 2020), что играет ключевую роль в возникновении и дальнейшем прогрессировании заболевания.

Интересные данные о роли неонатального маточного кровотечения в патогенезе эндометриоза приводятся в работе Brosens I. et al. (Brosens I. et al., 2013a). Ученые предполагают, что первое ретроградное кровотечение может возникать уже у новорожденной девочки, когда она испытывает резкую гормональную депривацию - отсутствие материнского прогестерона после рождения (Bulun S.E. et al., 2019; Rolla E., 2019; Mohammed Rasheed H.A. et al.,

2020). Частота видимых вагинальных кровотечений у новорожденных девочек составляет 3-5%, тогда как скрытые кровотечения могут наблюдаются в 25-60%

случаев (Brosens I. et al., 2013b; Puttemans P. et al., 2017). Плотная внутренняя шейка матки, густая цервикальная слизь или пороки развития у новорожденных девочек могут препятствовать нормальному выходу наружу клеток эндометрия, которые Brosens I. et al. считают источником стволовых клеток, что повышает вероятность их попадания в брюшную полость (Brosens I. et al., 2013a). Эти первые «имплантаты» остаются неактивными до наступления половой зрелости из-за недостатка эстрогенов в детском возрасте (Gargett C.E. et al., 2016). Однако, следует отметить, что до настоящего времени не подтверждено наличие клеток эндометрия в брюшной полости (листки брюшины, перитонеальная жидкость) у девочек допубертатного периода (Hogg C. et al., 2020).

Еще одной достаточно известной теорией развития эндометриоза является теория целомической метаплазии. В ее основе лежит развитие заболевания в результате метаплазии клеток, выстилающих висцеральную и париетальную брюшину, висцеральную и париетальную плевру под действием различных гормональных, иммунологических и средовых факторов (Rolla E. 2019; Hirata T. et al., 2020). Согласно морфологическим данным, брюшина, плевра и мюллеровы протоки (эндометрий) имеют общее эмбриональное происхождение (относятся к целомическому эпителию), а вышеупомянутые факторы риска могут способствовать трансформации клеток брюшины и плевры в клетки эндометрия (Bulun S.E. et al., 2019). Подтверждением данной теории могут служить случаи возникновения эндометриоидных очагов в эктопических участках, например, в легких, а также выявление эндометриоза в редких случаях у мужчин (например, при длительной терапии рака предстательной железы высокими дозами эстрогенов) (Klemmt P.A.B. et al., 2018). Однако, следует отметить, что, во-первых, если клетки брюшины и плевры могут легко подвергаться метапластической трансформации под действием различных факторов, то тогда встречаемость данного заболевания у мужчин должна быть значительно выше (к настоящему времени зарегистрированы лишь единичные эпизоды эндометриоза у мужчин) (Lagana A.S. et al., 2019; Hogg C. et al., 2020). Во-вторых, у женщин локализация эндометриоидных очагов в этом случае должна быть примерно одинаковой в

брюшной и грудной полостях (Laganá A.S. et al., 2019). В-третьих, встречаемость метаплазии клеток должна увеличиваться с возрастом женщины, что не может объяснить резкое снижение частоты эндометриоза у женщин после менопаузы (Laganá A.S. et al., 2019). Выше указанные факты не позволяют однозначно принять теорию целомической метаплазии развития эндометриоза.

Сторонники еще одной общепризнанной теории возникновения эндометриоза - эмбриональной, полагают, что эндометриоидные очаги могут развиваться из клеток, оставшихся вдоль миграционного пути мюллеровых протоков в период эмбрионального развития, при действии специфического стимула (эстрогены) (Rolla E. 2019; Laganá A.S. et al., 2019). Считается, что данная теория объясняет случаи развития эндометриоза у девочек до появления менархе (Адамян Л.В. и др., 2015). Однако, следует отметить, что, во-первых, у девочек препубертатного возраста уровни эстрогенов низкие и не могут индуцировать пролиферацию клеток - «остатков» мюллеровых протоков (Rolla E. 2019; Laganá A.S. et al., 2019), и, во-вторых, эндометриоидные поражения встречаются и на других участках вне путей эмбриональной миграции мюллеровых протоков (Klemmt P.A.B. et al., 2018).

Согласно теории лимфатической и сосудистой диссеминации, метастатическое распространение клеток эндометрия осуществляется посредством лимфатической или венозной сети, что может приводить к развитию эндометриоидных очагов в практически любых органах организма, расположенных отдаленно от области малого таза (Hirata T. et al., 2020). Следует отметить, что случаи метастатического распространения очагов эндометриоза крайне редки и, следовательно, данная теория не имеет всеобъемлющего значения.

Эндометриоз связан с нарушением системы гипоталамус-гипофиз-яичники (рисунок 2), приводящей к изменению концентрации эстрадиола, прогестерона, лютеинизирующего гормона (ЛГ) и фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) в сыворотке крови, перитонеальной жидкости и фолликулярной жидкости у женщин с эндометриозом. Кроме того, они имеют более низкую концентрацию рецепторов к ЛГ (LHR) в желтом теле и фолликулах во время ранней и поздней фолликулярной

и поздней лютеиновой фазах по сравнению со здоровыми женщинами К. et а1., 2019). При тяжелом течении заболевания концентрация крайне

низкая. Также у пациенток с эндометриозом нарушается действие ФСГ, опосредованное его взаимодействием с соответствующими рецепторами (FSHR) ^а^шЫ К. et а1. 2019).

Рисунок 2 - Патогенетические механизмы развития эндометриоза (Ви1ип

S.E. et а1., 2019)

Согласно данным литературы, локальная продукция эстрогенов играет важную роль в патофизиологии эндометриоза. Эктопический и эутопический эндометрий у пациенток с эндометриозом в отличие от эндометрия здоровых женщин характеризуется высокими показателями биодоступности эстрогенов за счет более высокой продукции фермента ароматазы Р450 (обусловливает

конвертацию андрогенов в эстрогены) (Laganà A.S. et al., 2019; Yilmaz B.D. et al., 2019). В стромальных клетках эндометрия аберрантно экспрессируемая ароматаза стимулируется одним из наиболее известных медиаторов воспаления -простагландином Е2 (PGE2), через промотор II гена ароматазы, что приводит к локальному образованию эстрогенов. Поскольку эстрогены повышают активность фермента циклооксигеназы 2 (COX-2), следовательно, они стимулируют и образование PGE2, что приводит к формированию между ними положительной обратной связи (рисунок 3) (Mori T. et al., 2019; Chantalat E. et al., 2020).

Рисунок 3 - Механизм обратной связи локальной продукции эстрогенов через рецепторы эстрогенов при эндометриозе (Mori T. et al., 2019)

Эстрогены являются одними из ключевых гормонов, влияющих на инвазию, рост, ангиогенез, персистенцию эндометриоидных гетеротопий и их «уклонение» от иммунного ответа (Klemmt P.A.B. et al., 2018; Liang Y. et al., 2018; Chantalat E. et al., 2020). Также они вовлечены и в развитие воспаления, стимулируя продукцию

цитокинов, факторов роста, металлопротеиназ, простагландинов (Patel B.G. et al., 2018; Bulun S.E. et al., 2019).

Действие эстрогенов в клетках-мишенях реализуется посредством эстрогеновых рецепторов (ER-a и ER-в), выступающих в роли ядерных транскрипционных факторов (Mori T. et al., 2019; Chantalat E. et al., 2020). ER-a в основном отвечает за модуляцию эффектов генов, связанных с ростом клеток, тогда как ER-в играет важную роль в процессах пролиферации клеток и апоптозе (Liang Y. et al., 2018).

Данные литературы, свидетельствуют о более высоком уровне ER-в в (отличии от ER-a) в стромальных клетках эндометрия при эндометриозе по сравнению с эутопическими клетками эндометрия (Simmen R.C. et al., 2016). Повышенная экспрессия ER-в при эндометриозе обусловлена гипометилированием CpG-островков в промоторной области гена ESR2 (Yilmaz B.D. et al., 2019). Высокий уровень ER-B, в свою очередь, подавляет экспрессию ER-a и ответ на эстрадиол в стромальных клетках эндометрия (за счет регуляции активности альтернативных промоторов ER-a). Однако, в эндометриоидных очагах, аномально высокий уровень эстрадиола, возникающий в результате локальной гиперактивности ароматазы в дополнение к эпигенетической регуляции ER0 в стромальных клетках, может подавлять нормальный ответ, связанный с экспрессией ER-a (Szukiewicz D. et al., 2021). Пониженная экспрессия ER-a, наблюдаемая при эндометриозе, может предрасполагать к недостаточной чувствительности экспрессии рецепторов прогестерона к регуляторным влияниям эстрадиола, способствуя тем самым вторичному дефициту рецепторов прогестерона и возникновению их резистентности к прогестерону (McKinnon B. et al., 2018).

Кроме того, в эктопическом и эутопическом эндометрии у женщин с эндометриозом наблюдается сниженная экспрессия фермента 170-гидроксистероид-дегидрогеназы типа 2, приводящая к уменьшению резистентности к прогестерону и определяющая образование эстрона («слабый» эстроген) из эстрадиола («сильный» эстроген), что обусловливает в конечном итоге

увеличение локальной продукции эстрогенов (Адамян Л.В. и др., 2020; Laganà A.S. et al., 2019). Данный факт можно объяснить тем, что эндометриоидные очаги имеют как более низкую экспрессию рецепторов прогестерона, так и для них характерны различные функциональные аномалии существующих прогестероновых рецепторов (Flores V.A. et al., 2018; Marquardt R.M. et al., 2019). Одним из потенциальных механизмов снижения экспрессии рецепторов прогестерона при эндометриозе могут служить эпигенетические нарушения -гиперметилирование ДНК в области промотора гена стероидогенного фактора 1 (SF-1) (Rocha-Junior C.V. et al., 2019) и дисрегуляция определенных типов микро-РНК (miR-194-3p, miR-199a-3p, miR-1-3p, miR-146a-5p, miR-125b-5p (Pei T. et al., 2018; Antonio L.G.L. et al., 2023; Hon J.X. et al., 2024). С уменьшением резистентности к прогестерону эндометриоидных очагов связано снижение эффективности терапии заболевания на основе прогестина (Patel B.G. et al., 2017). Однако, следует отметить, что уровень прогестерона в сыворотке крови у женщин с эндометриозом и без него не отличается (Flores V.A. et al., 2018). Следует отметить, факт того, что блокирование выработки эстрогенов либо естественным (менопауза), либо фармакологическим (например, ингибирование ароматазы) путем может вызвать регресс заболевания (Streuli I. et al., 2017; Bulun S.E. et al., 2019).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Головченко Илья Олегович, 2025 год

- СС, А - CT, ■ -

Рисунок 8 - Генетические варианты гэ11031002 ( - ТТ, ■ - АА, ▲ - ТА, ■

отр. контр.)

Рисунок 9 - Генетические варианты гэ11031005 1<ЯНВ ( - ТТ, ■ - СС, А - ТС, ■

отр. контр.)

ОЕФ для Аллель 1 - РАМ

Рисунок 10 - Генетические варианты Г834670419 2К8САИ5 ( - ТТ, ■ - СС, А

GT, ■ - отр. контр.)

ОЕФ для Аллель 1 - РАМ

Рисунок 11 - Генетические варианты гэ112295236 8ЬС22А10 ( - СС,

CG, ■ - отр. контр.)

ОС, А

Рисунок 12 - Генетические варианты rsl 17145500 CHD9 ( - АА, ■ - СС, А - АС,

■ - отр. контр.)

ОЕФ для Аллель 1 - FAM

Рисунок 13 - Генетические варианты rsl 17585797 AN02 ( - АА, ■ - СС, а - СА,

■ - отр. контр.)

Рисунок 14 - Генетические варианты ге148982377 гШ789 ( - ТТ, ■ - СС, А - ТС,

■ - отр. контр.)

2.4. Методы статистического анализа

Для полученных в результате генотипирования молекулярно-генетических данных осуществлен анализ выполнения равновесия Харди-Вайнберга для всех исследуемых полиморфных локусов, произведен расчет наблюдаемой (Но) и ожидаемой (Не) гетерозиготности, а также частот редких аллелей.

Изучение ассоциаций полиморфных локусов генов половых гормонов и их гаплотипов с развитием эндометриоза, формированием бесплодия, сочетанных пролиферативных заболеваний у женщин с эндометриозом и гормональным профилем больных проводилось с помощью программного обеспечения gPLINK ^2.050) (Purcell S. et г!, 2007) методом логистического (линейного) регрессионного анализа (тестировались 4 генетические модели: аллельная, доминантная, рецессивная и аддитивная). В расчеты вводились необходимые ковариаты (возраст, индекс массы тела, наличие и количество артифициальных абортов в анамнезе,

продолжительность менструального цикла, отягощенный семейный анамнез). Адаптивный пермутационный тест (pperm) нами был использован для минимизации ложноположительных результатов (Che R. et al., 2014).

Характер установленных ассоциаций изученных молекулярно-генетических маркеров генов половых гормонов с эндометриозом оценивался на основе общепринятых в генетико-эпидемиологических исследованиях показателях OR (отношения шансов) и 95%С1 (95 процентный доверительный интервал OR). При этом, протективным фактором считался генетический вариант при значении OR меньше 1, фактором риска, когда значение OR больше 1, а при OR, равном 1 ассоциация отсутствует. Оценка мощности установленных статистически значимых ассоциаций SNPs генов половых гормонов с эндометриозом выполнялась с помощью программы Quanto (v.1.2.4) (Gauderman W.J. 2002).

Анализ межгенных взаимодействий, вовлеченных в формирование эндометриоза выполняли с помощью метода MB-MDR (Calle M.L. et al., 2008, 2010). Следует отметить, что с учетом поправки Бонферрони отбирались наиболее статистически значимые модели SNPXSNP взаимодействий (осуществлялась коррекция на возможное количество комбинаций 9 SNPs: для 2-х локусных моделей рьоП<0,05/36=1,38*10-3; для 3-х локусных моделей рьоиГ<0,05/84=5,95*10-4; для 4-х локусных моделей рьоП<0,05/126=3,97*10-4), которые тестировались с использованием пермутационного теста (n=1000 пермутаций). При значении Pperm <0,01 модели SNPXSNP взаимодействий считались статистически значимыми. Кроме того, для визуализации характера и силы межгенных взаимодействий в виде дендрограммы и графа использовали метод MDR (Пономаренко И.В., 2019d).

Далее нами анализировался функциональный потенциал молекулярно-генетических маркеров генов половых гормонов, связанных с формированием эндометриоза и сильно сцепленых (r2>0,80) с ними полиморфных локусов. С помощью программы HaploReg устанавливались SNPs, которые находятся в неравновесии по сцеплению с анализируемыми молекулярно-генетическими маркерами генов половых гормонов, вовлеченными в развитие заболевания (Ward L.D. et al., 2016). Программа PolyPhen-2 применялась для оценки связи

полиморфных локусов, определяющих подверженность к развитию эндометриоза с несинонимическими заменами (Adzhubei I.A. et all., 2010). Программа GTExportal нами использовалось для анализа ассоциаций исследуемых полиморфных маркеров с экспрессией генов (eQTL) и уровнем альтернативного сплайсинга генов (sQTL) в различных органах и тканях (http://www.gtexportal.org/).

С использованием программы Gene Ontology выполнен анализ биологических механизмов (путей) установленных в работе генов-кандидатов эндометриоза (http://geneontology.org). Программа GeneMANIA была использована для изучения генетической сети взаимодействий генов-кандидатов, связанных сформированием данного заболевания (http://genemania.org).

ГЛАВА 3. ОЦЕНКА ВКЛАДА ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ПОЛОВЫХ ГОРМОНОВ В ФОРМИРОВАНИЕ ЭНДОМЕТРИОЗА

3.1. Клинико-анамнестическая характеристика и гормональный профиль

больных эндометриозом

В данном разделе работы проведен анализ медико-биологических и клиническо-лабораторных данных пациенток с эндометриозом и женщин контрольной группы. Средний возраст больных эндометриозом составил 39,75 ± 9,01 лет, а в контрольной группе равен 40,73 ± 8,60 лет (р>0,05). Росто-весовые параметры и индекс массы тела пациенток с эндометриозом (1,65 ± 0,06 м, 72,65 ± 14,38 кг, 26,63 ± 5,31 кг/м2соответственно) статистически достоверно не отличались от женщин контроля (1,65 ± 0,06 м, 72,49 ± 13,37 кг, 26,66 ± 4,61 кг/м2 соответственно) (р>0,05). Процент замужних женщин среди группы больных составил 82,53%, а в контрольной группе данный показатель был равен 85,93% (р>0,05).

Оценка вредных привычек в анализируемых группах женщин не показала достоверных различий. Так, доля курящих и злоупотребляющих алкоголем (>7 раз в неделю) женщин в группе больных эндометриозом (18,22% и 4,05% соответственно) и контроля (17,33% и 3,06% соответственно) была одинакова (р>0,05). Обращает на себя внимание высокая частота отягощенного семейного анамнеза по гиперпластическим заболеваниям матки среди больных (6,07%) по сравнению с контролем (1,94%) (р<0,001). Удельный вес женщин, перенесших оперативное вмешательство на органах малого таза (лапароскопия и/или лапаротомия) в группе пациенток с эндометриозом (15,19%) в 1,52 раза выше в сравнении с контролем (9,99%) (р<0,001). Данные об использовании оральных контрацептив среди больных (8,10%) и контрольной группы (10,09%) не имели достоверных различий (р>0,05). При анализе возраста менархе и особенностей менструального цикла у исследуемых групп установлено, что средний возраст

наступления менархе среди пациенток с эндометриозом (13,29 ± 1,27 лет) соответствовал аналогичному показателю контрольной группы (13,27 ± 1,25 лет) (р>0,05). Продолжительность менструаций также не имела достоверных отличий между больными (5,13 ± 1,56 дней) и контролем (4,94 ± 0,94 дней) (р>0,05). При этом, у женщин, имеющих эндометриоз, среднее значение длительности менструального цикла составило 27,66 ± 2,28 дней и было статистически значимо меньшим (на 0,49 дня) по сравнению с женщинами контрольной группы, где данный показатель равнялся 28,15 ± 2,24 дней (р<0,001).

Оценка показателей реализации репродуктивной функции не выявила достоверных отличий в возрасте наступления первой беременности, а также количестве беременностей между пациентками с эндометриозом (21,25 ± 3,04 лет и 2,60 ± 2,31 соответственно) и женщинами контрольной группы (21,71 ± 3,49 лет и 2,45 ± 1,55 соответственно) (р>0,05). Однако, в группе больных было зарегистрировано меньшее число родов (1,07 ± 0,97) по сравнению с контролем (1,51 ± 0,67) (р<0,001). А количество артифициальных абортов было статистически значимо выше у женщин с эндометриозом (1,25 ± 1,61) по сравнению с женщинами группы контроля (0,67±0,99) (р<0,001). Также, среди больных процент женщин, имевших в анамнезе 2 аборта был равен 19,24%, 3 аборта составил 8,61%, 4 и более абортов - 8,35%, что достоверно выше, чем в контроле (10,40% 5,40% и 1,53%) (р<0,001). В свою очередь, группа контроля характеризуется более высокой долей женщин, имевших в анамнезе 1 аборт (23,75%) по сравнению с пациентками с эндометриозом (17,22 %) (р<0,001). Удельный вес женщин, имевших в анамнезе самопроизвольные аборты среди больных эндометриозом (15,70%) и контрольной группой (20,08%) не отличался (р>0,05). Обращает на себя внимание высокая встречаемость среди пациенток с эндометриозом бесплодия, которое составило 32,42%, что в 6,23 раза выше по сравнению с контролем (5,20%) (р<0,001).

Изучен гормональный профиль пациенток с эндометриозом, полученные данные представлены в таблице 3. Установлено, что согласно критерию Шапиро-Уилка, распределение рассматриваемых количественных показателей отличается от нормального (р<0,05). В связи с этим при дальнейшем сравнительном анализе,

связанным с изучением влияния различных факторов на уровень половых гормонов мы использовали непараметрический критерий Манна-Уитни.

Таблица 3 - Характеристика гормонального профиля исследуемой выборки больных эндометриозом ___

Показатели N Х ±SD Ме (Q1-Q3) Р (критерий Шапиро-Уилка)

Возраст, лет 103 34,19±6,42 34,00 (29,00-37,00) <0,00001

ИМТ, кг/м2 103 24,47±5,13 23,00 (21,00-27,00) <0,00001

FSH, мМЕ/мл 103 9,75±7,20 8,50 (6,30-10,43) <0,00001

LH, мМЕ/мл 101 7,75±10,65 6,20 (4,70-8,50) <0,00001

PROL, МкМЕ/мл 103 356,52±173,58 322,00 (227,10-435,90) <0,00001

ESTR, пг/мл 100 65,82±56,73 50,96 (38,30-66,08) <0,00001

PG, нмоль/л 63 9,51±16,13 1,05 (0,60-14,70) <0,00001

TEST, нмоль/л 93 0,52±0,39 0,41 (0,29-0,60) <0,00001

DHEAS, мкмоль/л 62 222,56±148,55 216,60 (147,10-261,50) 0,00011

Примечание: FSH - фолликулостимулирующий гормон, LH - лютеинизирующий гормон, PROL - пролактин, ESTR - эстрадиол, PG - прогестерон, TEST -тестостерон, DHEAS - дегидроэпиандростерон.

Далее мы оценили влияние бесплодия и коморбидности с другими гиперпластическими заболеваниями на уровень половых гормонов (таблица 4). Получено, что у пациенток с эндометриозом, имеющих бесплодие, возраст и ИМТ статистически достоверно меньше в сравнении с больными эндометриозом у которых отсутствует бесплодие (р=0,0006 и р=0,037 соответственно). Также, у женщин с изолированным эндометриозом возраст и ИМТ достоверно меньше по сравнению с пациентками, имеющими сочетанный эндометриоз с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия (р=0,009 и р=0,042 соответственно). Выявлено, что у пациенток с эндометриозом и бесплодием уровень дегидроэпиандростерона (DHEAS) меньше по сравнению с больными эндометриозом, не имеющих бесплодие (р=0,050). При анализе групп больных с изолированным эндометриозом и

Таблица 4 - Факторы, влияющие на уровень половых гормонов

Показатели Бесплодие Коморбидность с другими гиперпластическими заболеваниями матки

наличие(n=132) отсутствие (n=263) Р (критерий Манна-Уитни) изолированный эндометриоз (n=103) сочетанный эндометриоз (n=292) Р (критерий Манна-Уитни)

Возраст Х ± SD 32,25±8,74 42,03±7,13 0,0006 33,51±9,01 41,96±7,96 0,009

Ме (Q1-Q3) 34,00 (29,00-37,00) 44,00 (37,00-49,00) 31,00 (27,00-39,00) 42,00 (36,00-48,00)

ИМТ Х ± SD 24,31±4,75 27,80±5,19 0,037 25,13±5,43 27,16±5,17 0,042

Ме (Q1-Q3) 23,00 (21,00-27,00) 28,00 (24,00-31,00) 24,00 (21,00-29,00) 27,00 (23,00-30,00)

FSH Х ± SD 10,24±7,91 7,84±2,54 0,183 10,12±8,90 9,54±6,11 0,899

Ме (Q1-Q3) 8,53 (6,46-10,90) 7,30 (5,73-9,50) 8,30 (6,30-10,10) 8,53 (6,20-10,80)

LH Х ± SD 7,73±11,59 7,82±5,06 0,487 6,47±3,36 8,49±13,11 0,528

Ме (Q1-Q3) 6,15 (4,70-7,90) 7,37 (3,64-9,40) 6,20 (4,70-7,70) 6,23 (4,49-8,93)

PROL Х ± SD 337,33±141,94 419,69±244,67 0,164 325,39±120,87 374±196,62 0,340

Ме (Q1-Q3) 306,50 (227,10414,00) 373,33 (227,20552,40) 308,05 (226,80412,40) 329,80 (232,00483,20)

ESTR Х ± SD 61,08±53,55 86,06±66,50 0,123 50,45±25,31 74,47±67,01 0,097

Ме (Q1-Q3) 50,00 (37,70-64,20) 54,80 (40,00124,00) 47,60 (37,55-58,05) 52,51 (39,50-72,40)

PG Х ± SD 9,22±15,0+9 10,60±20,30 0,593 9,85±19,31 9,34±14,54 0,656

Ме (Q1-Q3) 1,00 (0,60-15,38) 5,25 (0,80-7,11) 0,93 (0,60-4,20) 1,80 (0,60-14,70)

TEST Х ± SD 0,54±0,43 0,41±0,15 0,296 0,52±0,39 0,52±0,40 0,907

Ме (Q1-Q3) 0,42 (0,30-0,60) 0,40 (0,27-0,59) 0,40 (0,31-0,60) 0,42 (0,29-0,61)

DHEAS Х ± SD 212,05±152,04 284,46±113,88 0,050 246,45±140,93 208,48±152,89 0,180

Ме (Q1-Q3) 193,00 (131,00248,30) 249,50 (221,50273,10) 221,50 (182,60332,20) 214,70 (121,80253,80)

П Примечание: FSH - фолликулостимулирующий гормон, LH - лютеинизирующий гормон, PROL - пролактин, ESTR - эстрадиол, PG -прогестерон, TEST - тестостерон, DHEAS - дегидроэпиандростерон.

сочетанным эндометриозом с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия достоверных различий уровня половых гормонов не выявлено.

Установлены прямые корреляции между возрастом женщины и уровнем пролактина ^=0,276, р=0,005) и эстрадиола ^=0,268, р=0,007) (таблица 5).

Таблица 5 - Коэффициенты корреляции Спирмена между возрастом, ИМТ и уровнем половых гормонов у женщин с эндометриозом

Гормоны Возраст ИМТ

R P R P

FSH 0,125 0,209 -0,138 0,164

LH 0,046 0,647 -0,127 0,207

PROL 0,276 0,005 -0,056 0,572

ESTR 0,268 0,007 -0,007 0,945

PG -0,061 0,637 -0,097 0,452

TEST -0,065 0,538 0,051 0,626

DHEAS -0,119 0,357 -0,091 -0,706

Примечание: FSH - фолликулостимулирующий гормон, LH - лютеинизирующий гормон, PROL - пролактин, ESTR - эстрадиол, PG - прогестерон, TEST -тестостерон, DHEAS - дегидроэпиандростерон.

Изучены корреляционные взаимосвязи между уровнем половых гормонов у больных эндометриозом (результаты представлены в таблице 6 и рисунке 15). Выявлены положительные корреляции между уровнем

фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов ^=0,346, р=0,0004). Также получены положительные корреляции между уровнем лютеинизирующего гормона и пролактина ^=0,298, р=0,003).

Таким образом, в результате проведенного анализа установлено, что женщины с эндометриозом с наличием/отсутствием бесплодия, а также с изолированными/сочетанными гиперпластическими заболеваниями отличаются по возрасту и ИМТ, но не имеют отличий по уровню половых гормонов.

Таблица 6 - Корреляционные взаимосвязи между уровнем половых гормонов у

больных эндометриозом

FSH LH PROL ESTR PG TEST DHEAS

FSH 1 0,0004 0,215 0,926 0,933 0,304 0,902

LH 0,346 1 0,003 0,643 0,093 0,224 0,821

PROL 0,126 0,298 1 0,152 0,698 0,370 0,643

ESTR -0,009 -0,047 0,147 1 0,083 0,318 0,621

PG -0,011 -0,0217 -0,050 0,222 1 0,810 0,369

TEST -0,108 -0,128 0,094 0,106 0,032 1 0,568

DHEAS -0,016 0,029 0,061 0,064 -0,152 0,075 1

Примечание: слева указаны коэффициенты корреляции Спирмена, справа приведены их уровни значимости; FSH - фолликулостимулирующий гормон, LH -лютеинизирующий гормон, PROL - пролактин, ESTR - эстрадиол, PG -прогестерон, TEST - тестостерон, DHEAS - дегидроэпиандростерон.

1 2 3 4 5 6 7

Корреляции (итого в Гормоны 7v*379c)

7

3

4

Дк-__

Рисунок 15 - Корреляционные взаимосвязи между уровнем половых гормонов у

больных эндометриозом Примечание: 1 — фолликулостимулирующий гормон (FSH), 2 - лютеинизирующий гормон (LH), 3 - пролактин (PROL), 4 - эстрадиол (ESTR), 5 - прогестерон (PG), 6 - тестостерон (TEST), 7 - дегидроэпиандростерон (DHEAS).

Кроме того, выявлены взаимосвязи между концентрацией ряда половых гормонов в сыворотке крови у женщин с эндометриозом. Так, уровень лютеинизирующего гормона имеет положительные корреляции с уровнем фолликулостимулирующего гормона и уровнем пролактина.

3.2. Анализ связей полиморфных локусов генов половых гормонов с

эндометриозом

В группах пациенток с эндометриозом и контроля распределение всех 9 молекулярно-генетических маркеров, включенных в исследование, соответствует равновесию Харди-Вайнберга (р>0,05), также частота редкого аллеля (MAF) >5%, (таблица 7). Показатели наблюдаемой гетерозиготности у пациенток с эндометриозом изменялись в диапазоне от 0,045 для ^117585797 до 0,460 для ^727428, а в контроле варьировали от 0,049 для 175857971 до 0,489 для ^727428.

Проведен анализ вовлеченности исследуемых SNPs в развитие эндометриоза с помощью логистического регрессионного анализа в рамках тестирования 4 генетических моделей: аллельной, аддитивной, доминантной и рецессивной (таблица 8). Получено, что аллели С ^11031005 и А ^11031002 ассоциированы с эндометриозом согласно аллельной (р=0,003, ррегт=0,004, OR=0,66, 95%С1 0,50-0,87 и р=0,006, ррегт=0,010, OR=0,68, 95%С1 0,52-0,90 соответственно), аддитивной (р=0,004, ррегт=0,004, OR=0,65, 95%С1 0,49-0,87, мощность ассоциации равна 87,19% и р=0,003, ррегт=0,003, OR=0,64, 95%С1 0,47-0,85, мощность ассоциации равна 89,28% соответственно) и доминантной (р=0,013, ррегт=0,013, OR=0,67, 95%С1 0,49-0,92, мощность ассоциации равна 81,34% и р=0,002, ррегт=0,002, OR=0,60, 95%С1 0,43-0,82, мощность ассоциации равна 91,98% соответственно) моделей. А в рамках рецессивной модели в формирование заболевания вовлечен генетический маркер С ге11031005 (р=0,023, ррет=0,025, OR=0,17, 95%С1 0,03-0,78, мощность ассоциации равна 79,65%).

Таблица 7 - Распределение полиморфных локусов генов половых гормонов у пациенток с эндометриозом и в группе

контроля

сы- SNP Ген Минорный аллель Частый аллель Частота минорного аллеля Число изученных хромосом Распределени е генотипов* Но Не Рн^/Е

Пациентки с эндометриозом (п=395)

7 ^148982377 2Ж789 с т 0,057 770 1/42/342 0,109 0,108 1,000

7 ге34670419 т G 0,044 768 1/32/351 0,083 0,085 0,534

11 ге11031002 FSHB А т 0,096 756 4/65/309 0,172 0,174 0,766

11 ге11031005 FSHB с т 0,094 766 2/68/313 0,177 0,170 0,557

11 ^112295236 SLC22A10 G с 0,064 768 2/45/337 0,117 0,119 0,659

12 ^117585797 ANO2 А с 0,022 758 0/17/362 0,045 0,044 1,000

^117145500 CHD9 с А 0,113 760 5/76/299 0,200 0,201 1,000

17 ге727428 SHBG т с 0,372 760 54/175/151 0,460 0,467 0,826

17 ^1641549 ТР53 т с 0,220 764 26/116/240 0,304 0,343 0,026

Группа контроля (п=973)

7 rs148982377 2Ж789 с т 0,048 1888 1/88/855 0,093 0,091 0,718

7 ге34670419 ZKSCAN5 т G 0,039 1890 2/70/873 0,074 0,075 0,650

11 rs11031002 FSHB А т 0,135 1862 17/218/696 0,234 0,234 1,000

11 rs11031005 FSHB с т 0,136 1894 20/217/710 0,229 0,235 0,488

11 ге112295236 SLC22A10 G с 0,050 1874 2/90/845 0,096 0,095 1,000

12 rs117585797 ANO2 А с 0,026 1866 1/46/886 0,049 0,050 0,462

16 rs117145500 CHD9 с А 0,097 1862 7/167/757 0,179 0,175 0,707

17 rs727428 SHBG т с 0,385 1882 132/460/349 0,489 0,473 0,335

17 ге1641549 ТР53 т с 0,241 1860 61/326/543 0,350 0,366 0,209

Примечание: * - количество гомозигот по минорному аллелю / гетерозигот / гомозигот по частому аллелю, Но -

наблюдаемая гетерозигтность, Не - ожидаемая гетерозигтность.

Таблица 8 - Ассоциации полиморфизма генов половых гормонов с эндометриозом (генетические модели: аллельная, аддитивная, доминантная и рецессивная)

сы- МЛБ п Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод. Рецес. мод.

OR 95%С1 Р OR 95%С1 Р OR 95%С1 Р OR 95%С1 Р

L95 и95 L95 и95 L95 и95 L95 и95

7 ге148982377 с 1329 1,21 0,84 1,75 0,311 1,25 0,84 1,85 0,262 1,25 0,83 1,87 0,282 2,16 0,13 34,74 0,587

7 ге34670419 Т 1329 1,14 0,75 1,72 0,545 1,18 0,77 1,82 0,437 1,20 0,77 1,89 0,421 1,08 0,10 2,04 0,952

11 ге11031002 Л 1309 0,68 0,52 0,90 0,006 0,64 0,47 0,85 0,003 0,60 0,43 0,82 0,002 0,73 0,24 2,21 0,580

11 ге11031005 с 1330 0,66 0,50 0,87 0,003 0,65 0,49 0,87 0,004 0,67 0,49 0,92 0,013 0,17 0,03 0,78 0,023

11 ге112295236 G 1321 1,29 0,90 1,84 0,159 1,40 0,96 2,04 0,078 1,04 0,95 2,07 0,093 2,52 0,31 20,17 0,384

12 ге117585797 Л 1312 0,87 0,50 1,52 0,622 0,98 0,55 1,75 0,947 0,997 0,55 1,80 0,991 0,01 0 ^ 0,999

16 rs117145500 с 1311 1,18 0,90 1,55 0,220 1,13 0,85 1,51 0,398 1,11 0,81 1,52 0,503 1,81 0,54 6,06 0,332

17 ге727428 Т 1321 0,95 0,80 1,13 0,555 0,96 0,80 1,15 0,652 0,89 0,69 1,15 0,367 1,07 0,75 1,54 0,701

17 rs1641549 Т 1312 0,89 0,73 1,09 0,250 0,89 0,72 1,09 0,266 0,83 0,64 1,08 0,164 0,99 0,60 1,65 0,979

Примечание: Результаты получены с учетом коррекции на ковариаты; МЛБ - минорный аллель; ОR - отношение шансов, 95%С1 - 95% доверительный интервал, L95 - нижняя граница 95% доверительного интервала, и95 - верхняя граница 95% доверительного интервала; Р - уровень статистической значимости (жирным выделены статистически значимые результаты с учетом адаптивного пермутационного теста), ^ - не определяется.

Установлены ассоциации гаплотипов полиморфных локусов rsl 1031002-rsl 1031005 с эндометриозом (таблица 9). Выявлено, что гаплотип ТТ встречался среди больных с эндометриозом в 1,07 раза чаще чем в контроле и являлся фактором риска развитием заболевания (p=0,000002, ррет=0,001, 0R=2,03). Наоборот гаплотипы ТС и АТ значительно чаще регистрировались в контроле по сравнению с больными (в 0,30 и 0,36 раза соответственно) и являются протективными факторами формирования эндометриоза (p=0,0002, ррет=0,001, 0R=0,16 и p=0,000001, ррет=0,001, 0R=0,09 соответственно).

Далее нами с использованием метода MB-MDR установлены 12 наиболее значимых моделей SNPXSNP взаимодействий, вовлеченных в эдометриоз (таблица 10): по 5 моделей двух- и трехлокусных взаимодействий и 2 - четырехлокусных (ррегт<0,001). Следует отметить, что 8 анализируемых SNPs входят в состав 12 наиболее значимых моделей межгенных взаимодействий, связанных с эндомериозом. При этом, полиморфный локус rs11031002 задействован в формировании всех 12 наиболее значимых моделей SNPXSNP взаимодействий, а молекулярно-генетический маркер rs11031005 входит в состав 8 моделей.

В таблице 11 представлены комбинации генотипов полиморфных локусов половых гормонов с эндометриозом в рамках 12 установленных моделей межгенных взаимодействий. Среди повышающих риск формирования заболевания наиболее статистически значимые связи с эндометриозом имеют следующие комбинации генотипов: rs11031002 TT х rs11031005 TT (beta=0,74, p=0,000002), rs11031002 ТТ х rs117585797 СС х rs11031005 ТТ (beta=0,67, p=0,000006), а протективную направленность демонстрируют такие комбинации генотипов, как: rs11031002 ТА х rs11031005 ТТ (beta =-2,36, p=0,000002), rs11031002 ТА х rs117585797 СС х rs11031005 ТТ (beta =-2,61, p=0,000002), rs11031002 ТА х rs112295236 СС х rs11031005 ТТ (beta =-3,35, p=0,000006), rs11031002 ТА х rs11031005 ТТ х rs34670419 GG (beta =-2,24, p=0,000008), rs11031002 ТА х rs117585797 СС х rs112295236 СС х rs11031005 ТТ (beta =-3,35, p=0,000006) и rs11031002 ТА х rs117585797 СС х rs11031005 ТТ х rs34670419 GG (beta =-2,49, p=0,000006).

Таблица 9 - Ассоциации гаплотипов полиморфных локусов генов половых гормонов с эндометриозом

Гаплоблок SNPs Гаплотип Частота гаплотипа OR P

Пациентки с эндометриозом (n=395) Контроль (n=973)

H1 rsl 1031002| rsl 1031005 TC 0,007 0,023 0,16 0,0002

rsl 1031002| rsl 1031005 AT 0,008 0,022 0,09 0,000001

rsl 1031002| rs11031005 TT 0,898 0,842 2,03 0,000002

ип

ЦП

Примечание: Результаты получены методом логистической регрессии с учетом коррекции на ковариаты; OR - отношение шансов; Р -уровень значимости. Выделены статистически значимые результаты с учетом пермутационного теста (выполнено 1000 пермутаций).

Таблица 10 - Наиболее значимые модели х взаимодействий полиморфизма генов половых гормонов,

ассоциированные эндометриозом

N Модели SNP х SNP взаимодействий NH betaH WH NL betaL WL Pperm

Двухлокусные модели (р<1,38х10-3)

1 rs11031002 х rs11031005 1 0,741 22,24 2,00 -2,002 32,68 < 0,001

2 rs11031002 х rs112295236 1 0,288 4,23 1,00 -0,629 12,95 0,001

3 rs117145500 х rs11031002 1 0,281 4,43 1,00 -0,660 11,68 0,003

4 rs11031002 х rs34670419 1 0,386 7,04 1,00 -0,594 11,62 0,004

5 rs11031002 х rs727428 0 - - 1,00 -0,850 12,15 0,009

Трехлокусные модели (р<5,95х10-4)

1 rs11031002 х rs117585797 х rs11031005 1 0,672 20,33 2,00 -2,377 36,04 < 0,001

2 rs11031002 х rs112295236 х rs11031005 1 0,489 12,49 2,00 -2,502 35,58 < 0,001

3 rs11031002 х rs1641549 х rs11031005 1 0,410 10,51 5,00 -1,975 31,58 < 0,001

4 rs11031002 х rs11031005 х rs34670419 1 0,582 16,53 2,00 -2,003 29,91 < 0,001

5 rs117145500 х rs11031002 х rs11031005 1 0,408 9,50 3,00 -2,001 29,71 < 0,001

Четырехлокусные модели (р<3,97х10-4)

1 rs11031002 х rs117585797 х rs112295236 х rs11031005 1 0,464 11,86 2,00 -2,884 35,70 < 0,001

2 rs11031002 х rs117585797 х rs11031005 х rs34670419 1 0,560 16,26 3,00 -2,425 33,22 < 0,001

Примечание: получены методом MB-MDR с учетом коррекции на ковариаты;

NH - количество значимых сочетаний генотипов, связанных с повышенным риском формирования эндометриоза;

beta H - коэффициент линейной регрессии для сочетаний генотипов, связанных с повышенным риском формирования эндометриоза;

WH - статистика Вальда для сочетаний генотипов, связанных с повышенным риском формирования эндометриоза;

NL - число значимых сочетаний генотипов, связанных с пониженным риском формирования эндометриоза;

beta L - коэффициент линейной регрессии для сочетаний генотипов, связанных с пониженным риском формирования эндометриоза; WL - статистика Вальда для сочетаний генотипов, связанных с пониженным риском формирования эндометриоза; Pperm - уровень значимости моделей после проведенного пермутационного теста (выполнено 1000 пермутаций).

Таблица 11 - Комбинации генотипов полиморфизма генов половых гормонов, ассоциированные с эндометриозом

N модели N комбинации Комбинации генотипов beta P Риск

Двухлокусные модели

1 1 rs11031002 ТТ х rs11031005 ТТ 0,74 0,000002 H

2 rs11031002 ТА х rs11031005 ТТ -2,36 0,000002 L

3 rs11031002 ТТ х rs11031005 ТС -1,42 0,001 L

2 3 rs11031002 ТА х rs112295236 СС -0,63 0,0003 L

4 rs11031002 ТТ х rs112295236 СС 0,29 0,039 H

3 5 rs117145500 АА х rs11031002 ТТ 0,28 0,037 H

6 rs117145500 АА х rs11031002 ТА -0,66 0,0006 L

4 7 rs11031002 ТА х rs34670419 GG -0,59 0,0006 L

8 rs11031002 ТТ х rs34670419 GG 0,39 0,008 H

5 9 rs11031002 ТА х rs727428 СТ -0,85 0,0005 L

Трехлокусные модели

1 1 rs11031002 ТТ х rs117585797 СС х rs11031005 ТТ 0,67 0,000006 H

2 rs11031002 ТА х rs117585797 СС х rs11031005 ТТ -2,61 0,000002 L

3 rs11031002 ТТ х rs117585797 СС х rs11031005 ТС -1,91 0,0008 L

2 4 rs11031002 ТА х rs112295236 СС х rs11031005 ТТ -3,35 0,000006 L

5 rs11031002ТТ х rs112295236 СС х rs11031005 ТТ 0,49 0,0004 H

6 rs11031002 ТТ х rs112295236 СС х rs11031005 ТС -1,61 0,002 L

3 7 rs11031002 ТТ х rs1641549 СС х rs11031005 ТТ 0,41 0,001 H

8 rs11031002 ТА х rs1641549 СС х rs11031005 ТТ -3,06 0,003 L

9 rs11031002 ТА х rs1641549 СТ х rs11031005 ТТ -1,97 0,003 L

10 rs11031002 ТТ х rs1641549 СС х rs11031005 ТА -1,31 0,032 L

Окончание таблицы 11

N модели N комбинации Комбинации генотипов beta P Риск

4 11 rs11031002 ТА х rs11031005 ТТ х rs34670419 GG -2,24 0,000008 L

12 rs11031002 ТТ х rs11031005 ТТ х rs34670419 GG 0,58 0,00005 H

13 rs11031002 ТТ х rs11031005 ТС х rs34670419 GG -1,56 0,003 L

5 14 rs117145500 АА х rs11031002 ТТ х rs11031005 ТТ 0,41 0,002 H

15 rs117145500 АА х rs11031002 ТА х rs11031005 ТТ -2,33 0,00003 L

16 rs117145500 АА х rs11031002 ТТ х rs11031005 ТС -1,31 0,016 L

17 rs117145500 АС х rs11031002 ТА х rs11031005 ТТ -2,39 0,034 L

Четырехлокусные модели

6 18 rs11031002 ТА х rs117585797 СС х rs112295236 СС х rs11031005 ТТ -3,35 0,000006 L

19 rs11031002 ТТ х rs117585797 СС х rs112295236 СС х rs11031005 ТТ 0,46 0,0006 H

7 20 rs11031002 ТА х rs117585797 СС х rs11031005 ТТ х rs34670419 GG -2,49 0,000006 L

21 rs11031002 ТТ х rs117585797 СС х rs11031005 ТТ х rs34670419 GG 0,56 0,00005 H

22 rs11031002 ТТ х rs117585797 СС х rs11031005 ТС х rs34670419 GG -2,18 0,0007 L

Примечание: Получены методом MB-MDR; beta - коэффициенты логистической регрессии для сочетаний генотипов; р-

уровень значимости (жирным выделена наиболее значимая ассоциация); Н -высокий риск, L - низкий риск.

В виде графа и дендрограммы (рисунок 16) нами визуализировано одно из наиболее значимых четырехлокусных З^Р^КР взаимодействий генов половых гормонов - ^11031002 х ге117585797 х ^112295236 х ^11031005 (WL=35,70, Ррегт<0,001), с формированием эндометриоза. Для этого использовалась программа МDR. Согласно данным рисунка 15, полиморфный локус ^11031005 антагонистически взаимодействует с тремя другими полиморфизмами, входящими в данную модель межлокусных взаимодействий - ^112295236, ^11031002 и ^117585797 (парные межлокусные взаимодействия детерминируют -0,28%, -0,26% и -0,19% энтропии соответственно).

На рисунках 17 и 18 представлены дендрограмма и граф ЗОТ^КР взаимодействий 8 локусов, связанных с эндометриозом. Следует отметить, что ^11031005 демонстрирует антагонистические взаимодействия с 6 локусами -ге11031002, ^727428, ге1641549, ^112295236, rs117585797 и ^117145500 (вклад в энтропию признака парных межлокусных взаимодействий варьирует от -0,19% до -0,28%). Кроме того, ^11031005 и rs11031002 проявляют максимальный уровень главных эффектов (вклад в энтропию 0,55% и 0,41%, соответственно). Выраженные синергетические взаимодействия наблюдаются между полиморфными локусами ^1641549 и ^117585797 (0,19% энтропии связано с этим межлокусным взаимодействием).

Таким образом, можно резюмировать, что 8 из 9 анализируемых полиморфных локусов генов половых гормонов определяют подверженность к эндометриозу. Два полиморфных локуса - ^11031002 и ^11031005 как самостоятельно, так и в составе гаплотипов ассоциированы с развитием заболевания. Аллельные варианты А ^11031002 и С ^11031005 имеют протективное значение для эндометриоза, а гаплотип ТТ гаплоблока 031002-^11031005 является рисковым фактором. 8 полиморфных локусов в составе 12 наиболее значимых моделей ЗКР х ЗКР взаимодействий, вовлечены в формирование эндометриоза. В состав всех 12 моделей межлокусных взаимодействий входит полиморфный локус ^11031002, а наиболее выраженные межгенные взаимодействия антогонистической направленности демонстрирует

Б

Рисунок 16 - Граф (А) и дендрограмма (Б) наиболее значимого четырехлокусного SNPxSNP взаимодействия генов половых гормонов (Ррегт<0,001), связанного с

эндометриозом (получены методом MDR) Примечание: характеризует силу и направленность влияния полиморфных локусов и их сочетаний на развитие эндометриоза (% энтропии). При обозначении полиморфизма указан ге SNP. Красный и оранжевый цвет линии указывают на выраженный и умеренный синергизм, коричневый-независимый эффект, зеленый и синий-умеренный и выраженный антагонизм соответственно.

гб34670419 гб727428 гэ117585797 гв1641549 гэ117145500 гб11031002 гв11031005 гв112295236

Рисунок 17 - Дендрограмма взаимодействий 8 SNPs, связанных с эндометриозом (получена методом MDR) Примечание: характеризует силу и направленность влияния полиморфных локусов и их сочетаний на развитие эндометриоза (% энтропии). При обозначении полиморфизма указан ге ЗКР. Красный и оранжевый цвет линии указывают на выраженный и умеренный синергизм, коричневый-независимый эффект, зеленый и синий-умеренный и выраженный антагонизм соответственно.

Рисунок 18 - Граф взаимодействий 8 бкрб, связанных с эндометриозом (получен методом MDR) Примечание: характеризует силу и направленность влияния полиморфных локусов и их сочетаний на развитие эндометриоза (% энтропии). При обозначении полиморфизма указан гб БКР. Красный и оранжевый цвет линии указывают на выраженный и умеренный синергизм, коричневый-независимый эффект, зеленый и синий-умеренный и выраженный антагонизм соответственно.

молекулярно-генетический маркер ^11031005. Наиболее значимой моделью $КРХ$КР взаимодействий генов половых гормонов является четырехлокусная модель, включающая следующие полиморфные локусы: ^11031002 х ^117585797 х rs112295236 х ге11031005.

3.3. Роль генов-кандидатов в формировании бесплодия у пациенток с

эндометриозом

В данном разделе работы проанализирована связь исследуемых полиморфных локусов генов половых гормонов с развитием бесплодия у больных эндометриозом. Для этого мы провели сравнительный анализ генетических характеристик в следующих 3 группах сравнения: «пациентки с эндометриозом, имеющие бесплодие - контрольная группа», «пациентки с эндометриозом без бесплодия - контрольная группа» и «пациентки с эндометриозом, имеющие бесплодие - пациентки с эндометриозом без бесплодия». Группа пациенток с эндометриозом, имеющих бесплодие составила 132 женщины, группа пациенток с эндометриозом без бесплодия включала 263 женщины, контрольная группа для этих 2 групп больных была одинакова и составляла 973 (женщины без эндометриоза).

При изучении распределения анализируемых 9 SNPs генов половых гормонов в группах пациенток с эндометриозом, в зависимости от наличия/отсутствия бесплодия (таблица 12) установлено, что в группе пациенток с эндометриозом без бесплодия распределение молекулярно-генетического маркера ^1641549 отклоняется от равновесия Харди-Вайнберга (р=0,001, с учетом количества тестируемых локусов (9 SNPs) рьопК0,0055 (0,05/9)). В связи с этим полиморфный локус ^1641549 был исключен из дальнейшего анализа ассоциаций. Показатели наблюдаемой гетерозиготности у пациенток с эндометриозом и бесплодием изменялись в диапазоне от 0,076 для ^148982377 до 0,434 для ^727428, а у пациенток с эндометриозом без бесплодия варьировали от 0,040 для ^117585797 до 0,474 для ^727428.

Таблица 12 - Распределение полиморфных локусов генов половых гормонов у пациенток с эндометриозом в зависимости от наличия/отсутствия бесплодия

Chr SNP Ген Минорный аллель Частый аллель Частота минорного аллеля Число изученных хромосом Распределение генотипов* Ho He Phwe

Пациентки с эндометриозом и бесплодием (n=132)

7 rs148982377 ZNF789 C T 0,038 262 0/10/121 0,076 0,073 1,000

7 rs34670419 ZKSCAN5 T G 0,038 262 0/10/121 0,076 0,073 1,000

11 rs11031002 FSHB A T 0,105 256 1/25/102 0,195 0,189 1,000

11 rs11031005 FSHB C T 0,114 262 1/28/102 0,214 0,203 1,000

11 rs112295236 SLC22A10 G C 0,046 262 0/12/119 0,092 0,087 1,000

12 rs117585797 ANO2 A C 0,027 262 0/7/124 0,053 0,052 1,000

16 rs117145500 CHD9 C A 0,103 262 1/25/105 0,191 0,185 1,000

17 rs727428 SHBG T C 0,380 258 21/56/52 0,434 0,471 0,356

17 rs1641549 TP53 T C 0,214 262 4/48/79 0,366 0,336 0,436

Пациентки с эндометриозом без бесплодия (n=263)

7 rs148982377 ZNF789 C T 0,067 508 1/32/221 0,126 0,125 1,000

7 rs34670419 ZKSCAN5 T G 0,047 506 1/22/230 0,087 0,090 0,436

11 rs11031002 FSHB A T 0,092 500 3/40/207 0,160 0,167 0,446

11 rs11031005 FSHB C T 0,083 504 1/40/211 0,159 0,153 1,000

11 rs112295236 SLC22A10 G C 0,073 506 2/33/218 0,130 0,136 0,629

12 rs117585797 ANO2 A C 0,020 496 0/10/238 0,040 0,039 1,000

16 rs117145500 CHD9 C A 0,118 498 4/51/194 0,205 0,209 0,759

17 rs727428 SHBG T C 0,368 502 33/119/99 0,474 0,465 0,892

17 rs1641549 TP53 T C 0,223 502 22/68/161 0,271 0,347 0,001

При проведении сравнительного анализа генетических характеристик пациенток с эндометриозом, имеющих бесплодие и контрольной группы в рамках 4 генетических моделей (аллельной, аддитивной, доминантной и рецессивной) статистически достоверных различий не выявлено (таблица 13). Вместе с этим установлена ассоциация гаплотипа АТ полиморфных локусов ^11031002-^11031005 с формированием эндометриоза с бесплодием, имеющая протективную направленность (р=0,031, ррегт=0,048, OR=0,11).

Сравнительный анализ генетических характеристик пациенток с эндометриозом без бесплодия и контроля (таблица 14) показал вовлеченность в развитие эндометриоза без бесплодия следующих генетических вариантов (аллелей): С ^148982377 (аддитивная модель - р=0,038, ррегш=0,034, OR=1,59, 95%С1 1,03-2,48; доминантная модель - р=0,045, ррегш=0,037, OR=1,60, 95%С1 1,012,52), А rs11031002 (аллельная модель - р=0,009, ррегш=0,011, OR=0,64, 95%С1 0,460,90; аддитивная модель - р=0,003, ррегш=0,002, OR=0,57, 95%С1 0,40-0,83; доминантная модель - р=0,001, ррегш=0,001, OR=0,52, 95%С1 0,35-0,77), С ^11031005 (аллельная модель - р=0,001, ррегш=0,002, OR=0,57, 95%С1 0,41-0,81; аддитивная модель - р=0,001, ррегш=0,001, OR=0,55, 95%С1 0,38-0,79; доминантная модель - р=0,004, ррегш=0,004, OR=0,55, 95%С1 0,37-0,83) и G rs112295236 (аллельная модель - р=0,045, ррегш=0,027, OR=1,49, 95%С1 1,01-2,21; аддитивная модель - р=0,015, ррегш=0,018, OR=1,69, 95%С1 1,10-2,60; доминантная модель -р=0,023, ррегш=0,035, OR=1,69, 95%С1 1,07-2,65). Также, нами выявлена связь гаплотипов ТС, АТ и ТТ гаплоблока ^11031002-^11031005 с развитием эндометриоза без бесплодия (р=0,001, ррегш=0,003, OR=0,03; р=0,00001, ррегш=0,001, OR=0,10 и р=0,0000007, ррегш=0,001, OR=2,62 соответственно).

При сравнении генетических характеристик 2 групп пациенток с эндометриозом, имеющими бесплодие и без него между собой (таблица 15) выявлено, что аллель С ^148982377 согласно аддитивной модели является протективным фактором при формировании бесплодия при эндометриозе (р=0,046, ррегш=0,050, OR=0,45, 95%С1 0,20-0,99). Следовательно, референсный аллель Т

Таблица 13 - Ассоциации полиморфизма генов половых гормонов с развитием эндометриоза с бесплодием (сравнение пациенток с эндометриозом, имеющих бесплодие и контрольной группы)

Chr SNP MAF n Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод. Рецес. мод.

OR 95%CI Р OR 95%CI Р OR 95%CI Р OR 95%CI Р

L95 U95 L95 U95 L95 U95 L95 U95

7 rs148982377 C 1075 0,79 0,41 1,54 0,494 0,79 0,40 1,57 0,508 0,80 0,40 1,58 0,523 0,01 0 inf 0,999

7 rs34670419 T 1076 0,97 0,50 1,91 0,938 1,00 0,51 1,96 0,997 1,03 0,52 2,06 0,927 0,01 0 inf 0,999

11 rs11031002 A 1059 0,75 0,49 1,15 0,185 0,74 0,48 1,13 0,163 0,74 0,46 1,16 0,190 0,45 0,06 3,40 0,437

11 rs11031005 C 1078 0,82 0,55 1,23 0,344 0,83 0,56 1,24 0,367 0,87 0,56 1,35 0,525 0,32 0,04 2,41 0,269

11 rs112295236 G 1068 0,91 0,49 1,68 0,761 0,95 0,51 1,77 0,875 0,97 0,52 1,83 0,928 0,01 0 inf 0,999

12 rs117585797 A 1064 1,04 0,46 2,32 0,924 1,07 0,48 2,39 0,867 1,01 0,48 2,50 0,820 0,01 0 inf 0,999

16 rs117145500 C 1062 1,07 0,70 1,63 0,766 1,05 0,70 1,62 0,825 1,05 0,66 1,67 0,820 1,07 0,13 8,86 0,947

17 rs727428 T 1070 0,98 0,75 1,28 0,881 0,97 0,74 1,28 0,844 0,86 0,59 1,26 0,438 1,19 0,72 1,98 0,490

17 rs1641549 T 1061 0,86 0,63 1,17 0,334 0,86 0,63 1,17 0,333 0,92 0,63 1,34 0,677 0,44 0,16 1,23 0,119

Примечание: Результаты получены с учетом коррекции на ковариаты; МЛБ - минорный аллель; ОR - отношение шансов, 95%С1 - 95% доверительный интервал, L95 - нижняя граница 95% доверительного интервала, и95 - верхняя граница 95% доверительного интервала; Р -уровень статистической значимости (жирным выделены статистически значимые результаты с учетом адаптивного пермутационного теста), ^ - не определяется.

Таблица 14 - Ассоциации полиморфизма генов половых гормонов с развитием эндометриоза без бесплодия (сравнение пациенток с эндометриозом без бесплодия и контрольной группы)

SNP MAF n Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод. Рецес. мод.

Chr OR 95%CI Р OR 95%CI Р OR 95%CI Р OR 95%CI Р

L95 U95 L95 U95 L95 U95 L95 U95

7 rs148982377 C 1198 1,43 0,95 2,15 0,082 1,59 1,03 2,48 0,038 1,60 1,01 2,52 0,045 3,35 0,21 53,83 0,394

7 rs34670419 T 1198 1,22 0,76 1,96 0,404 1,34 0,82 2,203 0,242 1,36 0,80 2,29 0,257 1,85 0,16 21,09 0,619

11 rs11031002 A 1181 0,64 0,46 0,90 0,009 0,57 0,40 0,83 0,003 0,52 0,35 0,77 0,001 0,96 0,27 3,35 0,945

11 rs11031005 C 1199 0,57 0,41 0,81 0,001 0,55 0,38 0,79 0,001 0,55 0,37 0,83 0,004 0,11 0,01 0,94 0,043

11 rs112295236 G 1190 1,49 1,01 2,21 0,045 1,69 1,10 2,60 0,015 1,69 1,07 2,65 0,023 4,48 0,52 38,46 0,172

12 rs117585797 A 1181 0,78 0,39 1,55 0,477 0,89 0,43 1,84 0,750 0,90 0,43 1,87 0,772 0,01 0 inf 0,999

16 rs117145500 C 1180 1,25 0,91 1,70 0,163 1,15 0,82 1,62 0,423 1,12 0,77 1,62 0,558 2,14 0,55 8,32 0,270

17 rs727428 T 1192 0,93 0,76 1,14 0,507 0,94 0,75 1,18 0,609 0,90 0,66 1,23 0,511 0,98 0,63 1,53 0,940

Примечание: Результаты получены с учетом коррекции на ковариаты; МЛБ - минорный аллель; ОR - отношение шансов, 95%С1 - 95% доверительный интервал, L95 - нижняя граница 95% доверительного интервала, и95 - верхняя граница 95% доверительного интервала; Р -уровень статистической значимости (жирным выделены статистически значимые результаты с учетом адаптивного пермутационного теста), ^ - не определяется.

^148982377 служит фактором риска развития бесплодия при эндометриозе ^=1,81).

Таким образом, согласно результатам нашего исследования, установлено, что риск развития бесплодия у пациенток с эндометриозом ассоциирован с молекулярно-генетическим маркером ^148982377 (аллель С имеет протективное значение), а генетические варианты локусов ^11031002, ^11031005 и ^112295236 вовлечены в формирование эндометриоза без бесплодия. Кроме того, следует отметить, что гаплотип АТ локусов ^11031002-^11031005 связан с развитием эндометриоза как с бесплодием, так и без бесплодия, поэтому данный гаплотип не может быть специфическим генетическим маркером наличия/отсутствия бесплодия при эндометриозе.

3.4. Полиморфизм генов половых гормонов и развитие сочетанных пролиферативных заболеваний матки

На следующем этапе нашего исследования была исследована связь полиморфных локусов генов половых гормонов с формированием сочетанных пролиферативных заболеваний матки. Выполнен сравнительный анализ генетических характеристик в следующих 3 группах сравнения: «пациентки с изолированным эндометриозом - контрольная группа», «пациентки с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия -контрольная группа» и «пациентки с изолированным эндометриозом - пациентки с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия». Группа пациенток с изолированным эндометриозом насчитывала 103 женщины, группа пациенток с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия состояла из 292 женщин, контрольная группа для этих 2 групп больных включала 973 женщины без эндометриоза.

Анализ распределения анализируемых 9 SNPs генов половых гормонов в группах пациенток с эндометриозом, в зависимости от наличия/отсутствия

Таблица 15 - Ассоциации полиморфизма генов половых гормонов с развитием бесплодия при эндометриозе (сравнение пациенток с эндометриозом, имеющих бесплодие и без бесплодия)

Chr SNP MAF n Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод. Рецес. мод.

OR 95%CI Р OR 95%CI Р OR 95%CI Р OR 95%CI Р

L95 U95 L95 U95 L95 U95 L95 U95

7 rs148982377 C 385 0,55 0,27 1,14 0,103 0,45 0,20 0,99 0,046 0,45 0,19 1,04 0,061 0,01 0 inf 0,999

7 rs34670419 T 384 0,80 0,37 1,69 0,554 0,70 0,29 1,66 0,420 0,71 0,29 1,74 0,456 0,01 0 inf 0,999

11 rs11031002 A 378 1,16 0,70 1,92 0,553 1,24 0,71 2,16 0,451 1,33 0,72 2,47 0,365 0,74 0,07 7,49 0,799

11 rs11031005 C 383 1,42 0,87 2,33 0,161 1,49 0,84 2,64 0,175 1,51 0,82 2,77 0,185 2,12 0,12 35,95 0,604

11 rs112295236 G 384 0,61 0,31 1,19 0,142 0,54 0,25 1,16 0,115 0,54 0,25 1,20 0,130 0,01 0 inf 0,999

12 rs117585797 A 379 1,33 0,50 3,55 0,562 1,11 0,34 3,60 0,861 1,11 0,34 3,60 0,861 - - - -

16 rs117145500 C 380 0,85 0,53 1,38 0,524 0,74 0,43 1,29 0,291 0,73 0,40 1,33 0,308 0,55 0,05 5,66 0,614

17 rs727428 T 380 1,05 0,77 1,43 0,760 0,97 0,61 1,38 0,863 0,82 0,50 1,36 0,450 1,28 0,65 2,55 0,474

Примечание: Результаты получены с учетом коррекции на ковариаты; МЛБ - минорный аллель; ОR - отношение шансов, 95%С1 - 95% доверительный интервал, L95 - нижняя граница 95% доверительного интервала, и95 - верхняя граница 95% доверительного интервала; Р -уровень статистической значимости (жирным выделены статистически значимые результаты с учетом адаптивного пермутационного теста), ^ - не определяется.

сочетанной патологии (таблица 16) показал, что в группе пациенток с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия распределение молекулярно-генетического маркера гб1641549 отклоняется от равновесия Харди-Вайнберга (р=0,006, с учетом количества тестируемых локусов (9 ботб) рьоп^0,0055 (0,05/9)). Вследствие чего, полиморфный локус гб1641549 из дальнейшего анализа связей был исключен. Диапазон изменения значения наблюдаемой гетерозиготности у пациенток с изолированным эндометриозом составил от 0,021 для гб117585797 до 0,480 для гб727428, а у пациенток с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия регистрировался от 0,053 для гб117585797 до 0,454 для гб727428.

При оценке вовлеченности исследуемых БКРб в развитие изолированного эндометриоза с помощью логистического регрессионного анализа в рамках тестирования 4 генетических моделей (аллельной, аддитивной, доминантной и рецессивной) (таблица 17) статистически значимых различий не выявлено. Нами установлено, что гаплотип ТТ полиморфных локусов гб1 1031002-гб1 1031005 связан с риском развития изолированного эндометриоза (р=0,030, ррегт=0,048, ОR=1,69).

В таблица 18 представлены результаты сравнительного анализа генетических характеристик пациенток с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия и женщин контроля. Получено, что генетические варианты (аллели): А гб11031002 (аллельная модель - р=0,015, ррегт=0,013, OR=0,68, 95%С1 0,50-0,93; аддитивная модель - р=0,008, ррегт=0,003, OR=0,63, 95%С1 0,45-0,89; доминантная модель - р=0,003, ррегт=0,003, OR=0,57, 95%С1 0,390,83) и С гб11031005 (аллельная модель - р=0,007, ррегт=0,008, OR=0,65, 95%С1 0,48-0,89; аддитивная модель - р=0,010, ррегт=0,013, OR=0,65, 95%С1 0,46-0,90; доминантная модель - р=0,024, ррегт=0,031, OR=0,66, 95%С1 0,46-0,95) вовлечены в формирование сочетанных пролиферативных заболеваний матки. Кроме того, нами установлена высоко статистически значимая связь гаплотипов ТС, АТ и ТТ гаплоблока гб11031002-гб1 1031005 с развитием эндометриоза в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия (р=0,0003, ррегт=0,001, OR=0,10; р=0,000002, ррегт=0,001, OR=0,06 и р=0,000006, ррегт=0,001, OR=2,21 соответственно).

Таблица 16 - Распределение полиморфных локусов генов половых гормонов у пациенток с эндометриозом в зависимости от наличия/отсутствия сочетанной патологии

сы- Ген Минорный аллель Частый аллель Частота минорного аллеля Число изученных хромосом Распределение генотипов* Но Не РHWE

Пациентки с изолированным эндометриозом (п=103)

7 ге148982377 1Ш789 с т 0,060 200 0/12/88 0,120 0,113 1,000

7 ге34670419 2КБСМ5 т G 0,045 198 0/9/90 0,090 0,087 1,000

11 ге11031002 FSHB Л т 0,097 196 0/19/79 0,194 0,175 0,593

11 ге11031005 FSHB с т 0,096 198 0/19/80 0,192 0,173 0,593

11 ге112295236 SLC22A10 G с 0,075 200 2/11/87 0,110 0,139 0,086

12 ге117585797 АЫ02 Л с 0,010 192 0/2/94 0,021 0,021 1,000

16 ге117145500 CHD9 с Л 0,097 196 0/19/79 0,190 0,175 0,593

17 ге727428 SHBG т с 0,413 196 17/47/34 0,480 0,485 1,000

17 ге1641549 ТР53 т с 0,204 196 3/34/61 0,347 0,325 0,755

Пациентки с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия (п=292)

7 ге148982377 1Ш789 с т 0,055 570 1/30/254 0,105 0,106 0,602

7 ге34670419 т G 0,044 570 1/23/261 0,081 0,084 0,423

11 ге11031002 FSHB Л т 0,096 560 4/46/230 0,164 0,174 0,303

11 rs11031005 FSHB с т 0,093 568 2/49/233 0,172 0,169 1,000

11 rs112295236 SLC22A10 G с 0,060 568 0/34/250 0,120 0,113 0,609

12 rs117585797 АЫ02 Л с 0,026 566 0/15/268 0,053 0,052 1,000

16 ге117145500 CHD9 с Л 0,119 564 5/57/220 0,202 0,209 0,566

17 rs727428 SHBG т с 0,358 564 37/128/117 0,454 0,460 0,897

17 rs1641549 ТР53 т с 0,223 568 23/82/179 0,289 0,349 0,006

Таблица 17 - Ассоциации полиморфизма генов половых гормонов с развитием изолированного эндометриоза (сравнение пациенток с изолированным эндометриозом и контрольной группы)

сы- МЛБ п Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод. Рецес. мод.

OR 95%С1 Р OR 95%С1 Р OR 95%С1 Р OR 95%С1 Р

L95 и95 L95 и95 L95 и95 L95 и95

7 ге148982377 с 1044 1,27 0,68 2,372 0,442 1,30 0,69 2,45 0,413 1,33 0,70 2,53 0,385 0,01 0 0,999

7 ге34670419 Т 1044 1,17 0,58 2,37 0,666 1,18 0,58 2,39 0,641 1,23 0,60 2,557 0,570 0,01 0 0,999

11 ге11031002 Л 1029 0,69 0,42 1,12 0,130 0,66 0,40 1,09 0,104 0,68 0,40 1,155 0,155 0,01 0 0,997

11 ге11031005 с 1046 0,68 0,41 1,10 0,116 0,67 0,41 1,10 0,111 0,70 0,42 1,19 0,191 0,01 0 0,997

11 ге112295236 G 1037 1,53 0,87 2,70 0,134 1,57 0,90 2,75 0,115 1,43 0,76 2,663 0,264 1,42 0,90 6,28 0,051

12 ге117585797 Л 1029 0,40 0,10 1,65 0,190 0,41 0,10 1,69 0,215 0,41 0,10 1,702 0,218 0,01 0 0,999

16 ге117145500 с 1029 0,99 0,61 1,64 0,990 0,98 0,59 1,63 0,940 1,02 0,60 1,74 0,926 0,01 0 0,998

17 ге727428 Т 1039 1,13 0,83 1,52 0,435 1,13 0,83 1,54 0,423 1,10 0,72 1,708 0,661 1,31 0,75 2,28 0,343

17 rs1641549 Т 1028 0,81 0,56 1,16 0,250 0,80 0,56 1,15 0,228 0,84 0,544 1,288 0,418 0,44 0,13 1,43 0,173

Примечание: Результаты получены с учетом коррекции на ковариаты; МЛБ - минорный аллель; ОR - отношение шансов, 95%С1 - 95% доверительный интервал, L95 - нижняя граница 95% доверительного интервала, и95 - верхняя граница 95% доверительного интервала; Р - уровень статистической значимости (жирным выделены статистически значимые результаты с учетом адаптивного пермутационного теста), ^ - не определяется.

Таблица 18 - Ассоциации полиморфизма генов половых гормонов с развитием эндометриоза в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия (сравнение пациенток с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия и контроля)

сы- МЛБ п Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод. Рецес. мод.

OR 95%с1 Р OR 95%с1 Р OR 95%с1 Р OR 95%с1 Р

L95 и95 L95 и95 L95 и95 L95 и95

7 ге148982377 с 1229 1,19 0,78 1,80 0,414 1,23 0,79 1,92 0,360 1,21 0,76 1,92 0,411 3,02 0,19 48,66 0,436

7 ге34670419 т 1230 1,13 0,71 1,79 0,616 1,17 0,72 1,90 0,521 1,17 0,70 1,96 0,545 1,56 0,14 17,67 0,718

11 rs11031002 Л 1211 0,68 0,50 0,93 0,015 0,63 0,45 0,89 0,008 0,57 0,39 0,83 0,003 1,09 0,36 3,31 0,884

11 rs11031005 с 1231 0,65 0,48 0,89 0,007 0,65 0,46 0,90 0,010 0,66 0,46 0,95 0,024 0,22 0,04 1,05 0,057

11 ге112295236 G 1221 1,21 0,80 1,80 0,364 1,36 0,87 2,11 0,172 1,39 0,89 2,18 0,148 0,01 0 0,999

12 rs117585797 Л 1216 1,03 0,57 1,86 0,919 1,28 0,69 2,37 0,430 1,31 0,70 2,45 0,399 0,01 0 0,999

16 rs117145500 с 1213 1,25 0,93 1,69 0,138 1,16 0,84 1,60 0,366 1,11 0,78 1,58 0,554 2,55 0,74 8,82 0,138

17 rs727428 т 1223 0,89 0,73 1,08 0,254 0,88 0,71 1,09 0,261 0,81 0,60 1,08 0,154 0,96 0,63 1,46 0,849

Примечание: Результаты получены с учетом коррекции на ковариаты; МЛБ - минорный аллель; ОR - отношение шансов, 95%С1 - 95% доверительный интервал, L95 - нижняя граница 95% доверительного интервала, и95 - верхняя граница 95% доверительного интервала; Р - уровень статистической значимости (жирным выделены статистически значимые результаты с учетом адаптивного пермутационного теста), ^ - не определяется.

Сравнительный анализ генетических характеристик 2 групп пациенток с эндометриозом, в зависимости от наличия/отсутствия сочетанной патологии между собой (таблица 19) показал, что аллель А ^117585797 согласно аддитивной модели является рисковым фактором развития сочетанных пролиферативных заболеваний матки (р=0,045, ррепп=0,050, OR=4,29, 95%С1 1,01-22,52).

Таким образом, результаты нашего исследования свидетельствуют о вовлеченности молекулярно-генетического маркера ^117585797 в формирование сочетанных пролиферативных заболеваний матки (аллель А - фактор риска). Так же, нами установлено, что гаплотип ТТ локусов ^11031002-^11031005 ассоциирован как с изолированным эндометриозом, так и с эндометриозом в сочетании с миомой матки и/или гиперплазией эндометрия, таким образом, данный гаплотип не может быть специфическим генетическим маркером изолированного эндометриоза/сочетанных пролиферативных заболеваний матки.

3.5. Генетические детерминанты гормонального статуса пациенток с

эндометриозом

На следующем этапе исследования изучены ассоциации полиморфных локусов генов половых гормонов с гормональным профилем у пациенток с эндометриозом. Результаты представлены в таблицах 20-26. С уровнем эстрадиола у пациенток с эндометриозом ассоциированы два полиморфных локуса ^148982377 и ^34670419 (таблица 21). Молекулярно-генетический маркер ^148982377 связан с концентрацией эстрадиола в рамках аллельной (в=-0,488, р=0,035, ррегш=0,050), аддитивной (в=-0,445, р=0,042, ррегш=0,050) и доминантной (в=-0,445, р=0,044, ррегш=0,050) моделей. Полиморфный локус ^34670419 также ассоциирован с уровнем эстрадиола в рамках трех моделей: аллельной (в=-0,544, р=0,026, ррегш=0,047), аддитивной (в=-0,449, р=0,050, ррегш=0,049) и доминантной (в=-0,449, р=0,050, Ррегш=0,050). Следует отметить, что минорные аллели С ^148982377 и Т ^34670419 связаны с более низкой концентрацией эстрадиола в сыворотки крови больных эндометриозом (в<0).

Таблица 19 - Ассоциации полиморфизма генов половых гормонов с риском развития сочетанных пролиферативных заболеваний матки (сравнение пациенток с эндометриозом, в зависимости от наличия/отсутствия сочетанной патологии)

сы- МЛБ п Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод. Рецес. мод.

OR 95%с1 Р OR 95%с1 Р OR 95%с1 Р OR 95%с1 Р

L95 и95 L95 и95 L95 и95 L95 и95

7 ге148982377 с 385 0,91 0,44 1,89 0,803 1,00 0,45 2,21 0,995 0,95 0,42 2,18 0,912 0,01 0 0,999

7 ге34670419 Т 384 0,86 0,37 1,99 0,723 0,99 0,38 2,57 0,992 0,99 0,38 2,57 0,992 - - - -

11 ге11031002 Л 378 1,09 0,61 1,94 0,767 0,99 0,54 1,84 0,982 0,89 0,45 1,74 0,725 0,01 0 0,999

11 rs11031005 с 383 1,13 0,64 2,00 0,670 1,13 0,60 2,13 0,711 1,08 0,56 2,10 0,808 0,01 0 0,999

11 ге112295236 G 384 0,79 0,40 1,55 0,493 0,72 0,35 1,51 0,390 0,91 0,41 2,03 0,820 0,01 0 0,999

12 rs117585797 Л 379 2,55 0,55 11,77 0,213 4,29 1,01 22,52 0,045 4,29 0,82 22,52 0,086 - - - -

16 rs117145500 с 380 1,19 0,67 2,10 0,552 1,50 0,79 2,85 0,219 1,45 0,75 2,83 0,269 0,01 0 0,999

17 rs727428 Т 380 0,78 0,54 1,11 0,162 0,82 0,55 1,21 0,318 0,85 0,49 1,48 0,561 0,64 0,30 1,36 0,250

Примечание: Результаты получены с учетом коррекции на ковариаты; МЛБ - минорный аллель; ОR - отношение шансов, 95%С1 - 95% доверительный интервал, L95 - нижняя граница 95% доверительного интервала, и95 - верхняя граница 95% доверительного интервала; Р - уровень статистической значимости (жирным выделены статистически значимые результаты с учетом адаптивного пермутационного теста), ^ - не определяется.

Таблица 20 - Ассоциации полиморфных локусов генов половых гормонов с уровнем дегидроэпиандростерона у пациенток с эндометриозом

сы- ЗКР МЛБ п Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод.

в SE Р в SE Р в SE Р

7 ге148982377 с 62 0,287 0,247 0,249 0,207 0,262 0,433 0,207 0,262 0,433

7 ^34670419 т 62 0,322 0,261 0,222 0,307 0,274 0,267 0,307 0,274 0,267

11 ^11031002 Л 59 -0,151 0,239 0,530 -0,117 0,247 0,639 -0,117 0,247 0,639

11 ^11031005 с 62 -0,239 0,225 0,294 -0,184 0,234 0,436 -0,184 0,234 0,436

11 ге112295236 G 62 -0,185 0,282 0,515 -0,203 0,285 0,480 -0,203 0,285 0,480

12 ге117585797 Л 62 0,053 0,109 0,935 0,071 0,423 0,867 0,071 0,423 0,867

16 ге117145500 с 62 -0,162 0,152 0,289 -0,205 0,158 0,201 -0,280 0,181 0,128

17 ге727428 т 60 0,064 0,113 0,573 0,083 0,120 0,490 0,222 0,186 0,237

17 ге1641549 т 62 0,031 0,122 0,879 0,049 0,153 0,749 0,046 0,185 0,804

Примечание: - результаты получены методом линейного регрессионного анализа с учетом коррекции на ковариаты; МЛБ - минорный аллель, в - коэффициент линейной регрессии (изменение трансформированного показателя уровня дегидроэпиандростерона на минорный аллель), SE - его ошибка, р - уровень значимости.

Таблица 21 - Ассоциации полиморфных локусов генов половых гормонов с уровнем эстрадиола у пациенток с эндометриозом

сы- ЗКР МЛБ п Аллел. мод. Аддит. мод. Домин. мод.