Природные каталитические антитела человека и синтетические аналоги активного центра РНКазы А как инструменты исследования структуры РНК тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат химических наук Власов, Александр Валентинович

• Власов, Александр Валентинович
• кандидат химических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат химических наук Власов, Александр Валентинович

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. РИБОНУКЛЕАЗЫ ЧЕЛОВЕКА (Обзор литературы)

1.1. Введение В

1.2. РНК-гидролизующие ферменты

1.2.1. Семейство РНКазы А

1.2.1.1. Субстратная специфичность РНКаз

1.2.1.2. Деполимеризация РНК и расщепление циклофосфатов

1.2.1.3. Биологические функции

1.2.2. РНКазаН

1.2.3. РНКаза Ь

1.2.4. Лактоферрин

1.2.5. РНКаза, специфично гидролизующая двуцепочечные РНК

1.2.6. РНКазаР

1.2.7. РНКаза Т84

1.2.8. РНКаза, специфично гидролизующая поли(А) 23 1.2.9.1-РНКаза 24 1.2.10. Каталитические антитела

1.3. Использование РНКаз в диагностике и терапии

1.4. Заключение

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

2.2. МЕТОДЫ

2.2.1. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови

2.2.2. Электрофоретический анализ белков

2.2.3. Тестирование нуклеазной активности в полиакриламидном геле, содержащем субстрат

2.2.4. Введение [32Р] метки в РНК

2.2.5. Расщепление РНК и ДНК препаратами антител

2.2.5.1. Гидролиз тРНК препаратами и РНКазами

2.2.5.2. Гидролиз ДНК плазмиды рВК-322 препаратами 1§0

2.2.5.3. Гидролиз тРНК имидазолом

2.2.5.4. Гидролиз тРНК синтетическими соединениями, моделирующими активный центр рибонуклеазы А

2.2.6. Фракционирование антител и РНКазы А на фильтрах СепШсоп-100

2.2.7. Определение термостабильности антител и РНКазы А

3. ПРИРОДНЫЕ КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА

И СИНТЕТИЧЕСКИЕ АНАЛОГИ АКТИВНОГО ЦЕНТРА РНКазы А

КАК ИНСТРУМЕНТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ РНК

(Результаты и их обсуждение)

3.1. АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА, ОБЛАДАЮЩИЕ

РИБОНУКЛЕАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

3.1.1. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови человека

3.1.2. РНК- и ДНК- гидролизующая активность препаратов антител

3.1.3. Доказательство РНК-гидролизующей активности антител

3.1.3.1. Фракционирование антител и РНКазы А на фильтрах СеШпсоп-100

3.1.3.2. Термическая денатурация антител

3.1.3.3. Тестирование РНК- гидролизующей активности препаратов иммуноглобулинов после электрофоретического разделения в

полиакриламидном геле, содержащем субстрат

3.1.4. Многообразие рибонуклеазных активностей препаратов антител

3.1.5. Влияние ионной силы, катионов двухвалентных металлов и рН на РНК-гидролизующую активность антител

3.1.6. Структурная специфичность РНК-гидролизующей активности антител

37

38

38

39

39

40 40

3.2. СИНТЕТИЧЕСКИЕ МОЛЕКУЛЫ, ИМИТИРУЮЩИЕ АКТИВНЫЙ ЦЕНТР РНКазы А, КАК ИНСТРУМЕНТЫ

ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ РНК

3.2.1. Имидазол как простейшая модель активного центра РНКазы А

3.2.1.1. Исследование расщепления имидазолом тРНКА8р

3.2.1.2. Исследование расщепления имидазолом тРНКРЬе

3.2.1.3. Исследование расщепления имидазолом тРНКРЬе в комплексе

с олигонуклеотидами

3.2.2. Исследование расщепления РНК конъюгатами на основе олиголизина и гистидина

75

5. ВЫВОДЫ

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Трис трис (гидроксиметил) аминометан

вББ додецилсульфат натрия

ЭДТА этилендиамин тетраацетат

ПААГ полиакриламидный гель

СКВ системная красная волчанка

иммуноглобулин класса О

Сложные природные функции РНК реализуются за счет специфических взаимодействий этих молекул с белками и нуклеиновыми кислотами, в которых главную роль играет трехмерная структура молекул, формирующаяся благодаря образованию специфических водородных связей, координации поливалентных катионов и стэкинга гетероциклических оснований. Знание пространственных структур РНК необходимо для понимания механизмов их функционирования, для конструирования полинуклеотидов с заданными свойствами, выбора оптимальных олигонуклеотидных зондов, праймеров и антисмысловых олигонуклеотидов для манипулирования с определенными РНК и воздействия на их функции. С помощью методов рентгеноструктурного анализа и ЯМР в настоящее время определены трехмерные структуры ряда малых РНК. Однако эти методы неприменимы для изучения наиболее важных объектов - высокомолекулярных РНК и сложных РНК-белковых комплексов, поскольку для них требуются большие количества высокоочищенных РНК и кристаллы высокого качества, которые вырастить трудно, а в ряде случаев невозможно. В настоящее время основными методами изучения биологически активной структуры РНК, которая реализуется в растворах определенного состава и для существования которой иногда требуются специфические белковые факторы, являются методы химической и ферментативной модификации в комбинации с теоретическими методами и филогенетическими исследованиями, позволяющими предсказывать варианты укладки РНК. Информативность этих методов определяется набором доступных химических реагентов и рибонуклеаз, обладающих чувствительностью к определенным элементам структуры РНК. Поиск новых химических и ферментативных зондов является актуальной задачей для расширения арсенала средств изучения РЖ в растворе. Наиболее перспективными из таких зондов являются те, которые способны в физиологических условиях расщеплять РНК по участкам, обладающим определенными свойствами, так как расщепление - наиболее легко регистрируемый вид модификации РНК. Проведенные в последние годы исследования привели к появлению двух новых классов соединений, расщепляющих РНК, потенциально пригодных для использования в качестве зондов для структурных исследований.

Недавно в сыворотке крови больных различными аутоиммунными заболеваниями были обнаружены иммуноглобулины, способные расщеплять РНК и ДНК. Предполагается, что это антиидиотипические антитела к первичной сети антител, направленных против различных антигенов-нуклеаз. В соответствии с гипотезой их образования, такие антитела должны имитировать активный центр соответствующих нуклеаз и они могут проявлять различные

виды субстратной специфичности. В последнее время появились работы, направленные на конструирование органических молекул, содержащих ключевые фрагменты каталитических центров рибонуклеаз. Среди синтезированных веществ обнаружены соединения, способные эффективно катализировать расщепление РНК в физиологических условиях.

Целью настоящей работы являлось исследование возможности применения каталитических антител человека и минимальных по размеру аналогов каталитического центра рибонуклеазы в качестве зондов для изучения структуры РНК в растворе. В ходе ее выполнения были выделены и охарактеризованы РНК-гидролизующие антитела из сыворотки крови больных различными заболеваниями. Было обнаружено, что среди них встречаются антитела, обладающие уникальной чувствительностью к структуре РНК-субстрата. Также исследованы простейшие аналоги каталитического центра рибонуклеазы -имидазол и синтетические конструкции на основе остатков Ь-лизина. Показано, что эти конструкции могут быть использованы для получения информации о вторичной структуре РНК.

1. РИБОНУКЛЕАЗЫ ЧЕЛОВЕКА (Обзор литературы)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Природные каталитические антитела человека и синтетические аналоги активного центра РНКазы А как инструменты исследования структуры РНК»

1.1. Введение

Большой интерес к специфическим ферментам нуклеинового обмена обусловлен исключительной важностью их субстратов, играющих ключевую роль в процессах воспроизведения и реализации генетической информации. Важным семейством ферментов нуклеинового обмена являются рибонуклеазы, катализирующие расщепление фосфодиэфирных связей в РНК. Каждая молекула РНК претерпевает некоторые превращения, требующие участия фермента - РНКазы. Такие превращения можно разделить на две категории: (1) реакции процессинга РНК и (2) реакции, которые приводят к деградации РНК. Большое число различных реакций первой категории должно обеспечиваться набором высокоспецифичных РНКаз для того, чтобы процессинг проходил с необходимой точностью. Для второй категории реакций, вероятно, требуется только небольшое число неспецифичных ферментов.

Рибонуклеазной активностью обладает широкий спектр белков, причем для одних РНКаз эта активность является единственной известной функцией, а для других известно несколько видов биологической активности. Помимо пищеварительных панкреатических РНКаз, функция которых очевидна, в организме имеется ряд рибонуклеаз, участвующих в процессах репликации и транскрипции, ответственных за посттранскрипционные превращения РНК, играющих важную роль в механизмах противовирусного ответа клетки. Ингибиторы и активаторы этих ферментов, а также сами ферменты рассматриваются в настоящее время как перспективные терапевтические препараты для лечения ряда заболеваний. В настоящем обзоре приводятся данные о распределении в организме, каталитических свойствах и структурных особенностях РНКаз человека. Кратко рассмотрены данные о их биологических функциях и применении.

1.2.1. Семейство РНКазы А

Большинство известных внеклеточных рибонуклеаз высших организмов образует семейство ферментов, наиболее изученным представителем которого является бычья панкреатическая рибонуклеаза (РНКаза А) [1, 2]. РНКазы этого семейства являются пиримидин-специфичными ферментами, имеют различную степень гомологии с РНКазой А и различаются между собой по массе, заряду, специфичности, антигенным детерминантам и ряду других свойств. Внеклеточные рибонуклеазы являются продуктами шести различных генов, находящихся в 14-й хромосоме [3], однако во всех случаях активный центр ферментов инвариантен. На данный момент установлены аминокислотные последовательности РНКаз из многих видов и изучена их молекулярная эволюция [4]. Многообразие членов суперсемейства РНКазы А является результатом дупликаций общего гена-предка и последующих мутаций, что подтверждает проведенный анализ аминокислотных и нуклеотидных последовательностей [5]. Гены РНКаз человека имеют сходную структурную организацию - некодирующий экзон 1/ интрон/ кодирующий экзон 2. Экспрессия РНКаз человека регулируется взаимодействием промотора с энхансером, расположенным в интроне [6].

В соответствии с популярной до недавнего времени системой классификации [7] пиримидин-специфичные РНКазы млекопитающих подразделяли на два класса: секреторные и несекреторные. Находящиеся в секреторных органах РНКазы проявляют оптимальную активность при рН 8.0 и с большей скоростью гидролизуют поли(С), чем поли(Ц). Типичными ферментами этого класса являются панкреатические РНКазы млекопитающих. Несекреторные рибонуклеазы расщепляют РНК наиболее эффективно при рН 6.5-7.0 и находятся, главным образом, в печени, селезенке и лейкоцитах. Они расщепляют поли(и) с большей скоростью, чем поли(С). Ионы металлов, такие, как Си2+ и 2п2+, эффективно ингибируют секреторные РНКазы, но слабо влияют на несекреторные ферменты.

Вышеупомянутая классификация рибонуклеаз оказалась неудачной, поскольку выяснилось, что в некоторых несекреторных тканях (мозг [8], почки [9]) экспрессируется в основном РНКаза секреторного типа. Современная классификация РНКаз основывается на других принципах - сходстве аминокислотных

последовательностей и каталитических свойств [10]. РНКазы, имеющие аминокислотную последовательность и каталитические свойства, сходные с РНКазой А [2], было предложено назвать ферментами панкреатического типа (птРНКазы). РНКазы, имеющие аминокислотную последовательность и каталитические свойства, сходные с РНКазой К2 из почек быка [11], было рекомендовано назвать ферментами непанкреатического типа (нптРНКазы). Рибонуклеазы, которые структурно более сходны с птРНКазами [12-16], но проявляют каталитические свойства, сходные с таковыми и птРНКаз, и нптРНКаз [13-19], было предложено назвать ферментами смешаного типа (пт-нптРНКазы).

В настоящее время детально исследовано пять рибонуклеаз человека.

Аминокислотная последовательность птРНКазы 1 на 70% идентична последовательности РНКазы А (структуры РНКаз приведены на рис. 1) и большинство аминокислотных замен являются консервативными [12, 36]. У этого фермента в зависимости от источника выделения по-разному гликозилированы три сайта Авп-Хаа-ТЬг/Бег (Азп-34, Азп-76 и А$п-88) [12, 36, 37]. Распределение РНКаз в различных органах и тканях человека приведено в табл. 1.

нптРНКаза 2 (ЕБЫ), выделенная из разных тканей, имеет сходный характер гликозилирования [38]. В ее последовательности имеется пять позиций (17, 59, 65, 84, 92), в которых аспарагин модифицирован остатками сахара [39]. Структура этих 14-гликанов [38] отличается от структуры гликанов в птРНКазе 1 [37]. Недавно была обнаружена посттрансляционная модификация данного фермента по второму положению индольного кольца Тгр-7 [40]. Степень гомологии нптРНКазы 2 и птРНКазы 1 составляет лишь 35%. Основными отличиями (по системе нумерации РНКазы А) являются:

1) инсерция 2, 2 и 9 аминокислотных остатков в трех наружних петлях молекулы, соответственно;

2) делеция шести аминокислотных остатков в положениях 17-22 в районе, соответствующем Б - петле РНКазы А;

3) добавление трех аминокислотных остатков на Ы-конце.

Несколько аминокислотных остатков, которые считаются важными для функционирования птРНКаз млекопитающих, такие, как С1у-2, Ьув-бб, Ьуэ-7, А^-Ю, РЬе-120 и Авр-14, замещены неконсервативно. Однако в ферменте сохранены ключевые аминокислоты активного центра: Ив-12, £[¡8-119, Ьуз-41, и ряд аминокислот, которые считаются ответственными за правильную укладку белка [39].

РНКаза А РНКаза 1 РНКаза 2 РНКаза 3 РНКаза 4 РНКаза 5 РНКаза Кб

РНКаза А РНКаза 1 РНКаза 2 РНКаза 3 РНКаза 4 РНКаза 5 РНКаза Кб

РНКаза А РНКаза 1 РНКаза 2 РНКаза 3 РНКаза 4 РНКаза 5 РНКаза Кб

РНКаза А РНКаза 1 РНКаза 2 РНКаза 3 РНКаза 4 РНКаза 5 РНКаза Кб

1 О

901 2345678 ЕРОНМОЗЗТБ ОРОНМОЗОЗв

Р Р

7

2 3 4

1 2 3 4 5 6 7 8 - КЕТАААКР -КЕБРАККР Р О Р Т\Л/А С1\Л/Р РОРТРА СШР

- - оовмуарр

-ООЫЗРУТНР РКЯЬТКАНУР 3 о

890123456789 М0ММКЗРМ1-ТК0РСКР\^ МОМИРКРИМТОвРСКРУИ Т N А М О V I ММУОРЯСКМС^ Т I А М И А I ЫМУЯУУРСК^М МЬММОРРКМПУНСКИРМ Ев I МРРРв ЦБР ■ СКй I N N Я А М Э вIММУТОНСКНС^

6 0 7 0 6 78901234567890

кУсвокнмьскыоат

МУСРОЕКУТСКМСОб МУСбКРММТСРБМКТ N V С й N <2 гIРСРНИРТ Э I С Э Т Т N I оскискм МКМСМСРНЯЕ -ИБ I V С К N Я Я -9 О

7 8 9 0 1 - -Т в 5 Э К - -т n в б и - -Т Т Р Б Р О N I N Р О А О N

0СК0Т688Р--ТСК1 НбвБР - -й С Я 1_ Т - - Б С

2 О

9 0 1 2 3 4 5 6 ААЗЭЗМУС РЗвгвТУС

ЕОН^МТЭОО......С

ЮН i БЬМРРК......С

РОНУНРЕЕТСО-Э О Я У С ТОНУОАКРОбЯ-Б О Я У С

I ОН I ОРЭРЮ......с

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Власов, Александр Валентинович, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Barnard, Е. A. Biological function ofpancreatic ribonuclease (1969) Nature, 221, 340-344.

2. Blackburn, P., Moore, S. Pancreatic ribonuclease (1982) The Enzymes (3rd edn.), 15, 317433, Academic Press, New York.

3. Mastrianni, D. M., Eddy, R. L., Rosenberg, H. F., Corrette, S. E., Shows, Т. В., Tenen, D. G., Ackerman, S. J. Localization of the human eosinophil Charcot-Leyden crystal protein (lysophospholipase) gene (CLC) to chromosome 19 and the human ribonuclease 2 (eosiniphil-derived neurotoxin) and ribonuclease 3 (eosinophil cationic protein) genes (RNS2 and RNS3) to chromosome 14 (1992) Genomics, 13, 240-242.

4. Beintema, J. J., Schuller, C., Irie, M., Carsana, A. Molecular evolution of the ribonuclease superfamily (1988) Progr. Biophys. Mol. Biol., 51, 165-192.

5. Hamann, K. J., Barker, R. L., Loegering, D. A., Pease, L. R., Gleich, G. J. Sequence of human eosinophil-derived neurotoxin cDNA: identity of deduced amino acid sequence with human nonsecretory ribonucleases (1989) Gene, 83, 161-167.

6. Tiffany, H. L., Handen, J. S., Rosenberg, H. F. Enhanced expression of the eosinophil-derived neurotoxin ribonuclease (RNS2) gene requires interaction between the promoter and intron (1996) J. Biol. Chem., 271, 12387-12393.

7. Sierakowska, H., Shugar, D. Mammalian nucleolytic enzymes (1977) Prog. Nucl. Acid Res. Mol. Biol., 20, 59-130.

8. Yasuda, Т., Nadano, D., Takeshita, H., Kishi, K. Two distinct secretory ribonucleases from human cerebrum: purification, characterization and relationships to other ribonucleases (1993) Biochem. J., 296, 617-625.

9. Mizuta, K., Awazu, S., Yasuda, Т., Kishi, K. Purification and characterization of three ribonucleases from human kidney: comparison with urine ribonucleases (1990) Arch. Biochem. Biophys., 281, 144-151.

10. Sorrentino, S., Libonati, M. Structure-function relationships in human ribonucleases: main distinctive features of the major RNase types (1997) FEBS Lett., 404, 1-5.

11. Irie, M., Nitta, R., Ohgi, K., Niwata, Y., Watanabe, H., Iwama, M., Beintema, J. J., Sanda, A., Takizawa, Y. Primary structure of a non-secretory ribonuclease from bovine kidney (1988) J. Biochem. (Tokyo), 104, 289-296.

12. Beintema, J. J., Wietzes, P., Weickman, J. L., Glitz, D. G. The amino acid sequence of human pancreatic ribonuclease (1984) Anal. Biochem, 136, 48-64.

13. Hofsteenge, J., Matthies, R., Stone, S. R. Primary structure of a ribonuclease from porcine liver, a new member of the ribonuclease superfamily (1989) Biochemistry, 28, 9806-9813.

14. Vicentini, A. M., Hemmings, B. A., Hofsteenge, J. Residues 36-42 of liver RNase PL3 contribute to its uridine-preferring substrate specificity. Cloning of the cDNA and site-directed mutagenesis studies (1994) Protein Sci., 3, 459-466.

15. Shapiro, R., Fett, J. W., Strydom, D. J., Vallee, B. L. Isolation and characterization of a human colon carcinoma-secreted enzyme with pancreatic ribonuclease-like activity (1986) Biochemistry, 25, 7255-7264.

16. Zhou, H.-M., Strydom, D. J. The amino acid sequence of human ribonuclease 4, a highly conserved ribonuclease that cleaves specifically on the 3' side of uridine (1993) Eur. J. Biochem., 217, 401-410.

17. Sorrentino, S., Glitz, D. G., Hamann, K. J., Loegering, D. A., Checkel, J. L., Gleich, G. J. Eosiniphil-derived neurotoxin and human liver ribonuclease. Identity of structure and linkage of neurotoxicity to nuclease activity (1992) J. Biol. Chem., 267, 14859-14865.

18. Weickmann, J. L., Elson, M., Glitz, D. G. Purification and characterization of human pancreatic ribonuclease (1981) Biochemistry, 20, 1272-1278.

19. Sorrentino, S., Libonati, M. Human pancreatic-type and nonpancreatic-type ribonucleases: a direct side-by-side comparison of their catalytic properties (1994) Arch. Biochem. Biophys., 312, 340-348.

20. Iwama, M., Kunihiro, M., Ohgi, K., Irie, M. Purification and properties of human urine ribonucleases (1981) J. Biochem. (Tokyo), 89, 1005-1016.

21. De Prisco, R., Sorrentino, S., Leone, E., Libonati, M. A Ribonuclease from human seminal plasma active on double-stranded RNA (1984) Biochim. Biophys. Acta, 788, 356-363.

22. Ramaswamy, H., Swamy, C. U., Das, M. R. Purification and characterization of a high molecular weight ribonuclease from human milk (1993) J. Biol. Chem., 268, 4181-4187.

23. Yasuda, T., Mizuta, K., Kishi, K. Purification and characterization of two ribonucleases from human erythrocytes: immunological and enzymological comparison with ribonucleases from human urine (1990) Arch. Biochem. Biophys., 279, 130-137.

24. Akagi, K., Murai, K., Hirao, N., Yamanaka, M. Purification and properties of alkaline ribonuclease from human serum (1976) Biochim. Biophys. Acta, 442, 368-378.

25. Blank, A., Dekker, C.A. Ribonucleases of human serum, urine, cerebrospinal fluid, and leukocytes. Activity staining following electrophoresis in sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gels (1981) Biochemistry, 20, 2261-2267.

26. Yasuda, Т., Mizuta, К, Sato, W., Kishi, K. Purification and characterization of a ribonuclease from human spleen. Immunological and enzymological comparison with nonsecretory ribonucleasesfrom human urine (1990) Eur. J. Biochem., 191, 523-529.

27. Frank, J. J., Levy, С. C. Properties of a human liver ribonuclease. Inhibition by polynucleotides and specificity for phosphodiester bond cleavage to yield purine nucleotides at the 5' termini (1976) J. Biol. Chem., 251, 5745-5751.

28. Sorrentino, S., Tucker, G. K., Glitz, D. G. Purification and characterization of a ribonuclease from human liver (1988) J. Biol. Chem., 263, 16125-16131.

29. Shapiro, R., Vallee, B.L. Interaction of human placental ribonuclease with placental ribonuclease inhibitor (1991) Biochemistry, 30, 2246-2255.

30. Gleich, G. J., Loegering, D. A., Bell, M. P., Checkel, J. L., Ackerman, S. J., McKean, D. J. Biochemical and functional similarities between human eosinophil-derived neurotoxin and eosiniphil cationic protein: homology with ribonuclease (1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 3146-3150.

31. Shapiro, R., Strydom, D. J., Olson, K. A., Vallee, B. L. Isolation of angiogenin from normal human plasma (1987) Biochemistry, 26, 5141-5146.

32. Strydom, D. J., Fett, J. W., Lobb, R. R., Alderman, E. M., Bethune, J. L., Riordan, J. F., Vallee, B. L. Amino acid sequence of human tumor derived angiogenin (1985) Biochemistry, 24, 5486-5494.

33. Fett, J. W., Strydom, D. J., Lobb, R. R., Alderman, E. M., Bethune, J. L., Riordan, J. F., Vallee, B. L. Isolation and characterization of angiogenin, an angiogenic protein from human carcinoma cells (1985) Biochemistry, 24, 5480-5486.

34. Колбановская, E. Ю., Морозов, H. Ю., Гаврюшов, С. А., Ильин, В. А., Байнтема, Д., Влодавер, А., Карпейский, М. Я. Структурно-функциональный анализ рибонуклеазы А и родственных белков (1993) Мол. Биол., 27, 1315-1334.

35. Rosenberg, Н. F., Dyer, К. D. Molecular cloning and characterization of a novel human ribonuclease (RNase k6): increasing diversity in the enlarging ribonuclease gene family (1996) Nucl. Acids Res., 24, 3507-3513.

36. Beintema, J. J., Blank, A., Schieven, G. L., Dekker, C. A., Sorrentino, S., Libonati, M. Differences in glycosylation pattern of secretory ribonucleases (1988) Biochem. J., 255, 501505.

37. Ribo, M., Beintema, J. J., Osset, M., Fernandez, E., Bravo, J., De Llorens, R., Cuchillo, С. M. Heterogeneity in the glycosylation pattern of human pancreatic ribonuclease (1994) Biol. Chem. Hoppe Seyler, 375, 357-363.

38. Lawrence, С. W., Little, P. A., Little, B. W., Glushka, J., van Halbeek, H., Alhadeff, J. A Human non-secretory ribonucleases. II. Structural characterization of the N-glycans of the kidney, liver and spleen enzymes by NMR spectroscopy and electrospray mass spectrometry (1993) Glycobiology, 3, 249-259.

39. Beintema, J. J., Hofsteenge, J., Iwama, M., Morita, Т., Ohgi, K., Irie, M., Sugiyama, R. H., Schieven, G. L., Dekker, C. A., Glitz, D. G. Amino acid sequence of the nonsecretory ribonuclease of human urine (1988) Biochemistry, 27, 4530-4538.

40. Hofsteenge, J., Muller, D. R., De Beer, Т., Loffler, A., Richter, W. J., Vliegenthart, J. F. New type of linkage between a carbohydrate and a protein: c-glycosylation of a specific tryptophan residue in human RNase Us (1994) Biochemistry, 33, 13524-13530.

41. Barker, R. L., Loegeringer, D. A., Ten, R. M., Hamann, K. J., Pease, L. R., Gleich, G. J. Eosinophil cationic protein cDNA. Comparison with other toxic cationic proteins and ribonucleases (1989) J. Immunol., 143, 952-955.

42. Sorrentino, S., Glitz, D. G. Ribonuclease activity and substrate preference of human eosinophil cationic protein (ECP) (1991) FEBS Lett., 288, 23-26.

43. Saxena, S. K., Rybak, S. M., Davey, R. Т., Youle, R. J., Ackerman, E. J. Angiogenin is a cytotoxic, tRNA-specific ribonuclease in the RNase A superfamily (1992) J. Biol. Chem., 267, 21982-21986.

44. Shapiro, R., Riordan, J. F„ Vallee, B. L. Characteristic ribonucleolytic activity of human angiogenin (1986) Biochemistry, 25, 3527-3532.

45. deLlorens, R., Arus, C., Pares, X., Cuchillo, С. M. Chemical and computer graphics studies on the topography of the ribonuclease A active site cleft. A model of the enzyme-pentanucleotide substrate complex (1989) Protein Eng., 2, 417-429.

46. Thompson, J. E., Venegas, F. D., Raines, R. T. Energetics of catalysis by ribonucleases: fate of the 2', 3 '-cyclic phosphodiester intermediate (1994) Biochemistry, 33, 7408-7414.

47. delCardayre, S. В., Raines, R. T. A residue to residue hydrogen bond mediates the nucleotide specificity of ribonuclease A (1995) J. Mol. Biol., 252, 328-336.

48. Libonati, M., Sorrentino, S. Revisiting the action of bovine ribonuclease A and pancreatic-type ribonucleases on double-stranded RNA (1992) Mol. Cell. Biochem., 117, 139-151.

49. Яковлев, Г. И., Моисеев, Г. П., Бочаров, А. А. Исследование механизма гидролиза двуспиральных полирибонуклеотидов циклизующими РНКазами (1987) Биоорг. химия, 13, 189-197.

50. Pares, X., Noues, М. V., de Llorens, R, Cuchillo, С. M. Structure and function of ribonuclease A binding sub sites (1991) Essays Biochem., 26, 89-103.

51. Yakovlev, G., Moiseyev, G. P., Sorrentino, S., De Prisco, R., Libonati, M. Single-strand-preferring RNases degrade double-stranded RNs by destabilizing its secondary structure (1997) J. Biomol. Struct. Dyn., 15, 243-250.

52. Opitz, J. G., Ciglic, M. I., Haugg, M., Trautwein-Fritz, K., Raillard, S. A., Jermann, Т. M., Benner, S. A. Origin of the catalytic activity of bovine seminal ribonuclease against double-stranded RNA (1998) Biochemistry, 37, 4023-4033.

53. Gotte, G., Testolin, L., Costanzo, C., Sorrentino, S., Armato, U., Libonati, M. Cross-linked trimers of bovine ribonuclease A: activity on double-stranded RNA and antitumor action (1997) FEBS Lett., 415, 308-312.

54. Карпейский M. Я., Моисеев Г. П., Бочаров А. Л., Богданова Г. А., Михайлов С. Н. Топохимические аспекты пиримидиновой специфичности рибонуклеазы А (1983) Биоорг. химия, 9, 803-814.

55. Wodak, S. Y. The structure of cytidul (2\ 5') adenosine when bound to pancreatic ribonuclease S (1977) J. Mol. Biol., 116, 855-875.

56. Mosimann, S. C., Newton, D. L., Youle, R. J., James, M. N. X-ray crystallographic structure of recombinant eosinophil-derived neurotoxin at 1.83 A resolution (1996) J. Mol. Biol., 260, 540-552.

57. Terzyan, S. S., Peracaula, R., de Llorens, R., Tsushima, Y., Yamada, H., Seno, M., Gomis-R, F. X., Coll, M. The three-dimentional structure of human RNase 4, unliganded and complexed with d(Up), reveals the basis for its uridine selectivity (1999) J. Mol. Biol., 285, 205-214.

58. Hofsteenge, J., Vicentini, A., Zelenko, O. Ribonuclease 4, an evolutionary highly conserved member of the superfamily (1998) Cell Mol. Life Sci., 54, 804-810.

59. Sorrentino, S. Human extracellular ribonucleases: multiplicity, molecular diversity and catalytic properties of the major RNase types (1998) Cell Mol. Life Sci., 54, 785-794.

60. Beintema, J. J. Presence of a basic amino acid residue at either position 66 or 122 is a condition for enzymatic activity in the ribonuclease superfamily (1989) FEBS Lett., 254, 1-4.

61. Iwahashi, K., Nakamura, K., Mitsui, Y., Ohgi, K., Irie, M. Further evidence for the existence of the pO site in the active site of ribonuclease. The binding of thymidine 3\ 5 '-diphosphate to ribonuclease (1981) J. Biochem. (Tokyo), 90, 1685-1690.

62. Brunger, А. Т., Brooks, C. L. 3d, Karplus, M. Active site dynamics of ribonuclease (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 8458-8462.

63. Lin, M. C., Gutte, В., Caldi, D. G., Moore, S., Merrifield, R. B. Reactivation ofdes (119-124) ribonuclease A by mixture with synthetic COOH-terminal peptides; the role of phenylalanine-120 (1972) J. Biol. Chem, 247, 4768-4774.

64. Boix, E., Wu, У., Vasandani, V. M., Saxena, S. К., Ardelt, W., Ladner, J., Youle, R. J. Role of the N terminus in RNase A homologues: differences in catalytic activity, ribonuclease inhibitor interaction and cytotoxicity (1996) J. Mol. Biol., 257, 992-1007.

65. Trautwein, K., Holliger, P., Stackhouse, J., Benner, S. A. Site-directed mutagenesis of bovine pancreatic ribonuclease: lysine-41 andaspartate-121 (1991) FEBS Lett., 281, 275-277.

66. Umeyama, H., Nakagawa, S., Fujii, T. Simulation of the charge relay structure in ribonuclease A (1979) Chem. Pharmacol. Bull. (Tokyo), 27, 974-980.

67. Niwata, Y., Ohgi, K., Sanda, A., Takizawa, Y., Irie, M. Purification and properties of bovine kidney ribonucleases (1985) J. Biochem. (Tokyo), 97, 923-934.

68. Cuchillo, C. A., Pares, X., Guash, A., Barman, Т., Travers, F., Nogues, M. V. The role of 2', 3 '-cyclic phosphodiesters in the bovine pancreatic ribonuclease A catalyzed cleavage of RNA: intermediates or products? (1993) FEBS Lett., 333, 207-210.

69. Thompson, J. E., Venegas, F. D., Raines, R. T. Energetics of catalysis by ribonucleases: fate of the 2', 3 '-cyclic phosphodiester intermediate (1994) Biochemistry, 33, 7408-7414.

70. Harper, J. W., Auld, D. S., Riordan, J. F., Vallee, B. L. Enzymatically active angiogenin/ribonuclease A hybrids formed by peptide interchange (1988) Biochemistry, 27, 219-226.

71. Breslow, E., Girotti, A. W. The interaction of ribonuclease with metal ions. I. Studies of cupric and zinc ions and the effect of cytidylic acid (1966) J. Biol. Chem, 241, 5651-5660.

72. Reddi, К. K. Nature and possible origin of human serum ribonuclease (1975) Biochem. Biophys. Res. Commun., 67, 110-118.

73. Bartholeyns, J. A., Peeters-Joris, C. A., Baudhuin, P. Hepatic nucleases. Extrahepatic origin and association of neutral liver ribonuclease with lysosomes (1975) Eur. J. Biochem., 60, 385-393.

74. Rosenberg, H. F., Dyer, K. D. Human ribonuclease 4 (RNase 4): coding sequence, chromosomal localization and identification of two distinct transcripts in human somatic tissues (1995) Nucl. Acids Res., 23, 4290-4295.

75. Tharun, S., Sirdeshmukh, R. Specific endonucleolytic cleavages of mouse albumin mRNA and their modulation during liver development (1995) Nucl. Acids Res., 23, 641-646.

76. Безбородова, С. И. Рибонуклеазы и родственные им белки, а также ингибиторы рибонуклеаз белковой природы (1991) Прикл. Биохим. Микробиол., 27, 308-329.

77. Nadano, D., Yasuda, Т., Takeshita, Н., Uchide, К., Kishi, К. Purification and characterization of human brain ribonuclease inhibitor (1994) Arch. Biochem. Biophys., 312, 421-428.

78. Strydom, D. J. The angiogenic (1998) Cell Mol. Life Sei., 54, 811-824.

79. Benner, S. A., Allemann, R. K. The return of pancreatic ribonucleases (1989) Trends Bioch. Sei., 14, 396-397.

80. Benner, S. A. Extracellular 'communicator RNA' (1988) FEBS Lett., 233, 225-228.

81. Eder, P. S., Walder, J. A. Ribonuclease H from K562 human erythroleukemia cells. Purification, characterization, and substrate specificity (1991) J. Biol. Chem., 266, 64726479.

82. Eder, P. S., Walder, R. Y., Walder, J. A. Substrate specificity of human RNase HI and its role in expression repair of ribose residues misincorporated in DNA (1993) Biochimie, 75, 123126.

83. Frank, P., Albert, S., Cazenave, C., Toulme, J. J. Purification and characterization of human ribonuclease HII (1994) Nucl. Acids Res., 22, 5247-5254.

84. Busen, W., Peters, J. H., Hausen, P. Ribonuclease H levels during response of bovine lymphocytes to concanavalin A (1977) Eur. J. Biochem., 74, 203-208.

85. Busen, W., Hausen, P. Distinct ribonuclease H activities in calf thymus (1975) Eur. J. Biochem., 52, 179-190.

86. Kane, C. M. Renaturase and ribonuclease H: a novel mechanism that influences transcript displacement by RNA polymerase II in vitro (1988) Biochemistry, 27, 3187-3196.

87. Dong, B., Xu, L., Zhou, A., Hassel, B. A., Lee, X., Torrence, P. F., Silverman, R. H. Intrinsic molecular activities of the interferon-induced 2-5A - dependent RNase (1994) J. Biol. Chem., 269, 14153-14158.

88. Carroll, S. S., Chen, E., Viscount, T., Geib, J., Sardana, M. K., Gehman, J., Kuo, L. C. Cleavage of oligoribonucleotides by the 2',5'- oligoadenylate-dependent ribonuclease L (1996) J. Biol. Chem., 271, 4988-4992.

89. Naik, S., Paranjape, J. M., Silverman, R. H. RNase L dimerization in a mammalian two-hybrid system in response to 2\5'~ oligoadenylates (1998) Nucleic Acids Res., 26, 1522-1527.

90. Silverman, R. H. Fascilitation with 2-5A - dependent RNase: a unique enzyme that functions in interferon action (1994) J. Interferon Res., 14, 101-104.

91. Lengyel, P. Tumor-suppressor genes: news about the interferon connection (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90, 5893-5895.

92. Cole, J. L., Carroll, S. S., Kuo, L. C. Stoichiometry of 2',5'- oligoadenylate-induced dimerization of ribonuclease L. A sedimentation equilibrium study (1996) J. Biol. Chem., 271, 3979-3981.

93. Bisbal, C., Martinand, C., Silhol, M., Lebleu, B., Salehzada, T. Cloning and characterization of a RNase L inhibitor. A new component of the interferon-regulated 2-5A pathway (1995) J. Biol. Chem., 270, 13308-13317.

94. Zhou, A., Hassel, B. A., Silverman, R. H. Expression cloning of 2-5A dependent RNase: a uniquelly regulated mediator of interferon action (1993) Cell, 72, 753-765.

95. Levay, P. F., Viljoen, M. Lactoferrin: a general review (1995) Haematologica, 80, 252-267.

96. Lonnerdal, B., Iyer, S. Lactoferrin: molecular structure and biological function (1995) Annu. Rev. Nutr., 15, 93-110.

97. Furmanski, P., Li, Z. P., Fortuna, M. B., Swamy, C. V., Das, M. R. Multiple molecular forms of human lactoferrin. Identification of a class of lactoferrins that possess ribonuclease activity and lack iron-binding capacity (1989) J. Exp. Med., 170, 415-429.

98. Wu, H., MacLeod, A. R., Lima, W. F., Crooke, S. J. Identification and partial purification of human double strand RNase activity. A novel terminating mechanism for oligoribonucleotide antisense drugs (1998) J. Biol. Chem., 273, 2532-2542.

99. Bartkiewicz, M., Gold, H., Altman, S. Identification and characterization of an RNA molecule that copurifles with RNase P activity from HeLa cells (1989) Genes Dev., 3, 488-499.

100. Yuan, Y., Altman, S. Substrate recognition by human RNase P: identification of small, model substrates for the enzyme (1995) EMBO J., 14, 159-168.

101.Przewlocki, G., Lipecka, J., Edelman, A., Przykorska, A. New sequence-specific human ribonuclease: purification and properties (1998) Nucleic Acids Res., 26, 4047-4055.

102.Astrom, J., Astrom, A., Virtanen, A. In vitro deadenylation of mammalian mRNA by a HeLa 3' exonuclease (1991) EMBO J., 10, 3067-3071

103. Astrom, J., Astrom, A., Virtanen, A. Properties of a HeLa cell 3' exonuclease specific for degrading poly (A) tails of mammalian mRNA (1992) J. Biol. Chem., 267, 18154-18159.

104.Scadden, A. D., Smith, C. W. A ribonuclease specific for inosine-containing RNA: a potential role in antiviral defence? (1997) EMBO J., 16, 2140-2149.

105.Pauling, L. Molecular basis of biological specificity (1948) Am. Sci., 36, 51.

106. Jencks, W. Catalysis in chemistry and enzymology (1969) N.Y.: McGraw-Hill, 289.

107.Tramontano, A., Janda, K. D., Lerner, R. A. Catalytic antibodies (1986) Science, 234, 15661570.

108.Pollack, S. J., Jacobs, J. W., Schultz, P. G. Selective chemical catalysis by an antibody (1986) Science, 234,1570-1573.

109.Lerner, R. A., Benkovic, S. J., Schultz, P. G. At the crossroads of chemistry and immunology: catalytic antibodies (1991) Science, 252, 659-667.

llO.Benkovic, S. J. Catalytic antibodies (1992) Annu. Rev. Biochem., 61, 29-54.

lll.Schultz, P. G., Lerner, R. A. From molecular diversity to catalysis: lessons from the immune system (1995) Science, 269, 1835-1842.

112. Went worth, P., Janda, K. D. Catalytic antibodies (1998) Curr. Opin. Chem. Biol., 2, 138-144.

113. Went worth, P., Liu, Y., Wentworth, A. D., Fan, P., Foley, M. J., Janda, K. D. A bait and switch hapten strategy generates catalytic antibodies for phosphodiester hydrolysis (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 5971-5975.

114.Fletcher, M. C., Kuderova, A., Cygler, M., Lee, J. S. Creation of a ribonuclease abzyme through site-directed mutagenesis (1998) Nature Biotechnol., 16, 1065-1067.

115.Paul, S., Voile, D. J., Beach, С. M., Johnson, D. R., Powell, M. J., Massey, R. J. Catalytic hydrolysis of vasoactive intestinal peptide by human autoantibody (1989) Science, 244, 11581162.

116.1Цуров, Д. В. Каталитические антитела (1997) Мол. Биол., 31, 5-15.

117.Генералов, И. И., Новиков, Д. К. Политональные каталитические антитела и их возможное биологическое значение (1998) Успехи Совр. Биол., 118, 178-193.

118.Shuster, А. М., Gololobov, G. V., Kvashuk, О. A., Bogomolova, А. Е., Smirnov, I. V., Gabibov, A. G. DNA hydrolyzing autoantibodies (1992) Science, 256, 665-667.

119.Бунева, В. Н., Андриевская, О. А., Романникова, И. В., Гололобов, Г. В., Ядав, Р. П., Ямковой, В. И., Невинский, Г. А. Взаимодействие каталитически активных антител с олигорибонуклеотидами (1994) Мол. Биол., 28, 738-743.

120.Барановский, А. Г., Матюшин, В. Г., Власов, А. В., Забара, В. Г., Наумов, В. А., Жьеже, Р., Бунева, В. Н., Невинский, Г. А. ДНК- и РНК- гидролизующие антитела из крови больных различными формами вирусного гепатита (1997) Биохимия, 62, 1598-1607.

121.Андриевская, О. А., Бунева, В. Н., Забара, В. Г., Наумов, В. А., Ямковой, В. И., Невинский, Г. А. Иммуноглобулины класса М из сыворотки крови больных системной красной волчанкой эффективно расщепляют РНК (1998) Мол. Биол., 32, 908-915.

122.Шустер, А. М., Гололобов, Г. В., Квашук, О. А., Габибов, А. Г. Антиидиотипические и природные каталитически активные антитела (1991) Мол. Биол., 25, 593-602.

123.Schourov, D. V., Gololobov, G. V., Makarevich, О. I., Yadav, R. P., Chernova, E. A., Nevinsky, G. A., Prokaeva, Т. В., Alekberova, Z. S., Gabibov, A. G. DNA-hydrolyzing autoantibodies in autoimmune pathologies (1995) Ann. N. Y. Acad. Sci., 750, 255-264.

124.Барановский, А. Г., Канышкова, Т. Г., Могельницкий, А. С., Наумов, В. А., Бунева, В. Н., Гусев, Е. И., Бойко, А. Н., Заргарова, Т. А., Фаворова, О. О., Невинский, Г. А.

Политональные антитела из крови и спинномозговой жидкости больных рассеянным склерозом эффективно гидролизуют ДНК и РНК (1998) Биохимия, 63, 1459-1469.

125.Андриевская, О. А., Канышкова, Т. Г., Ямковой, В. И., Бунева, В. Н., Невинский, Г. А. Моноклональные антитела к ДНК лучше гидролизуют РНК, чем ДНК (1997) Доклады Акад. Наук, 355, 401-403.

126.Канышкова, Т. Г., Семенов, Д. В., Власов, А. В., Хлиманков, Д. Ю., Барановский, А. Г., Шипицын, М. В., Ямковой, В. И., Бунева, В. Н., Невинский, Г. А. ДНК- и РНК-гидролизующие антитела из молока человека и их возможная биологическая роль (1997) Мол. Биол., 31, 1082-1091.

127.Albanese, A. A., Lorenze, Е. J., Orto, L. A., Wein, Е. Н., Zavattaro, D. N., DeCarlo, R. Nutrition and metabolic effects of some newer steroids. VI. Serum ribonuclease (1972) N. Y. State J. Med., 72, 1595-1600.

128.Hubbell, H. R., Kariko, K., Suhadolnik, R. J., Brodsky, I. RNase L and increased endoribonuclease activities in the mononuclear cells of patients with chronic myelogenous leukemia (1994) Anticancer Res., 14, 341-346.

129. Suhadolnik, R. J., Reichenbach, N. L., Hitzges, P., Sobol, R. W., Peterson, D. L., Henry, В., Ablashi, D. V., Muller, W. E., Schroder, H. C., Carter, W. A. Upregulation of the 2-5A synthetase/RNase L antiviral pathway associated with chronic fatigue syndrome (1994) Clin. Infect. Disease Suppl., 18, S96-104.

130.Tomassini, M., Magrini, L., Bonini, S., Lambiase, A., Bonini, S. Increased serum levels of eosinophil cationic protein and eosinophil-derived neurotoxin (protein x) in vernal keratoconjunctivitis (1994) Ophthalmol., 101, 1808-1811.

131.Allinquant, В., Musenger, C,, Schuller, E. Intrathecal origin of CSF ribonuclease. Differences between infectious processes of the nervous system and multiple sclerosis (1984) Acta Neurol. Scand., 70, 12-19.

132.Naskalski, J. W. Determination of ribonuclease activity of patients with pancreatic necrosis. An attempt of extending the enzyme diagnosis of acute pancreatitis (1989) Z. Med. Lab. Diagn, 30, 425-430.

133.Sznajd, J., Magdon, M., Naskalski, J. W., Uracz, R., Wojcikiewicz, O. Serum ribonuclease activity in acute myocardinal infarction (1981) Cor. Vasa., 23, 241-247.

134.Chu, Т. M., Wang, M. C., Kuciel, R., Valenzuela, L., Murphy, G. P. Enzyme markers in human prostatic carcinoma (1977) Cancer Treat. Rep., 61, 193-200.

135.Reddi, К. К Serum ribonuclease of normal persons and patients with renal impairment (1978) Clin. Biochem., 11, 133-134.

136.Schein, C. H. From housekeeper to microsurgeon: the diagnostic and therapeutic potential of ribonucleases (1997) Nature Biotechnol., 15, 529-536.

137.Hatzelmann, A., Tenor, H., Schudt, C. Differential effects of non-selective and selective phosphodiesterase inhibitors on human eosinophil functions (1995) Br. J. Pharmacol, 114, 821-831.

138.Bufe, A., Spangfort, M. D., Kahlert, H., Schlaak, M., Becker, W. M. The major birch pollen allergen, Bet v 1, shows ribonuclease activity (1996) Planta, 199, 413-415.

139.Bufe, A., Schramm, G., Petersen, A., Schlaak, M., Becker, W. M. The function of allergens may determine allergenicity (1996) Adv. Exp. Med. Biol., 409, 399-402.

140.Mitra, A., Higgins, D. W., Langenberg, W. G., Nie, H., Sengupta, D. N., Silverman, R. H. A mammalian 2-5A system functions as an antiviral pathway in transgenic plants (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 6780-6785.

141.Diaz-Guerra, M., Rivas, C., Esteban, M. Inducible expression of the 2-5A synthetase/RNase L system results in inhibition of vaccina virus replication (1997) Virology, 227, 220-228.

142.Sobol, R. W., Henderson, E. E., Kon, N., Shao, J., Hitzges, P., Mordechai, E., Reichenbach, N. L., Charubala, R., Schirmeister, H., Pfleiderer, W., Suhadolnik, R. J. Inhibition of HIV-1 replication and activation of RNase L by phosphorothioate/phosphodiester 2\5' -oligoadenylate derivatives (1995) J. Biol. Chem., 270, 5963-5978.

143.Fingerote, R. J., Cruz, B. M., Gorczynski, R. M., Fung, L. S., Hubbell, H. R., Suhadolnik, R. J., Levy, G. A. A 2',5'- oligoadenylate analogue inhibits murine hepatitis virus strain 3 (MHV-3) replication in vitro but does not reduce MHV-3 -related mortality or induction of procoagulant activity in susceptible mice (1995) J. Gen. Virol., 76, 373-380.

144.Ushijima, H., Rytik, P. G., Schacke, H., Scheffer, U., Muller, W. E., Schroder, H. C. Mode of action of the anti-AIDS compound poly (I)-poly(C12U) (Ampligen): activator of 2\5'-oligoadenylate synthetase and double-stranded RNA-dependent kinase (1993) J. Interferon Res., 13, 161-171.

145.Suhadolnik, R. J., Reichenbach, N. L., Hitzges, P., Adelson, M. E., Peterson, D. L., Cheney, P., Salvato, P., Thompson, C., Loveless, M., Muller, W. E. Changes in the 2-5A synthetase/RNase L antiviral pathway in a controlled clinical trial with poly (I)-poly (C12U) in chronic fatigue syndrome (1994) In Vivo, 8, 599-604.

146.Maitra, R. K., Silverman, R. H. Regulation of human immunodeficiency virus replication by 2 ',5'- oligoadenylate-dependent RNase L (1998) J. Virol., 72, 1146-1152.

147.Glukhov, B. N., Jerusalimsky, A. P., Canter, V. M., Salganik, R. I. Ribonuclease treatment of tick-borne encephalitis (1976) Arch. Neurol., 33, 598-603.

148.Liao, Y. D., Huang, H. C., Chan, H. J., Kuo, S. J. Large-scale preperation of a ribonuclease from Rana catesbeiana (bullfrog) oocytes and characterization of its specific cytotoxic activity against tumor cells (1996) Prot. Express Purif., 7, 194-202.

149.Griffiths, S. J., Adams, D. J., Talbot, S. J. Ribonuclease inhibits Kaposi's sarcoma (1997) Nature, 390, 568.

150.Giles, R. V., Spiller, D. G., Tidd, D. M. Detection of ribonuclease H-generated mRNA fragments in human leukemia cells following reversible membrane permeabilization in the presence of antisense oligodeoxynucleotides (1995) Antisense Res. Devel., 5, 23-31.

151.Augustyns, K., Godard, G., Hendrix, C., Van Aerschot, A., Rozenski, J., Saison-Behmoaras, T., Herdewijn, P. Hybridization specificity, enzymatic activity and biological (Ha-ras) activity of oligonucleotides containing 2,4-dideoxy-beta-D-erythro-hexopyranosyl nucleosides (1993) Nucl. Acids Res., 21, 4670-4676.

152.Giles, R. V., Ruddell, C. J., Spiller, D. G., Green, J. A., Tidd, D. M. Single base discrimination for ribonuclease H-dependent antisense effects with intact human leukaemia cells (1995) Nucl. Acids Res., 23, 954-961.

153.Nakai, C., Konishi, A., Komatsu, Y., Inoue, H., Ohtsuka, E., Kanaya, S. Sequence-specific cleavage ofRNA by a hybrid ribonuclease H (1994) FEBS Lett., 339, 67-72.

154.Liu, F., Altman, S. Inhibition of viral gene expression by the catalytic RNA subunit of RNase P from Escherichia coli (1995) Genes Dev., 9, 471-480.

155.Zewe, M., Rybak, S. M., Dubel, S., Coy, J. F., Welschof, M., Newton, D. L., Little, M. Cloning and cytotoxicity of a human pancreatic RNase immunofusion (1997) Immunotechnology, 3, 127-136.

156.Jinno, H., Ueda, M., Ozawa, S., Kikuchi, K., Ikeda, T., Enomoto, K., Kitajima, M. Epidermial growth factor receptor-dependent cytotoxic effect by an EGF-ribonuclease conjugate of human cancer cell lines - a trial for less immunogenic chimeric toxin (1996) Cancer Chemother. Pharmacol., 38, 303-308.

157.Newton, D. L., Xue, Y., Olson, K. A., Fett, J. W., Rybak, S. M. Angiogenin single-chain immunofusions: influence of peptide linkers and spacers between fusion protein domains (1996) Biochem., 35, 545-553.

158.Helm, M., Brule, H., Degoul, F., Cepanec, C., Leroux, J.-P, Giege, R., Florentz, C. The presence of modified nucleotides is requiredfor clover leaffolding of a human mitochondrial tRNA (1998) Nucleic Acids Res., 26, 1636-1643.

159.Perret, V., Garcia, A., Puglisi, J. D., Grosjean, H., Ebel, J.-P., Florentz, C., Giege, R. Conformation in solution of yeast tRNAAsp transcripts deprived of modified nucleotides (1990) Biochimie, 72, 735-744.

160.3арытова, В. Ф., Иванова, Е. М., Романенко, В. П. Синтез олигонуклеотидов в хлороформе триэфирным методом (1985) Биоорг. Химия, 11, 815-820.

161.Konevetz, D., Beck, I., Beloglazova, N., Sulimenkov, I., Sil'nikov, V., Zenkova, M., Shishkin, G., Vlassov, V. Artificial ribonucleases: synthesis and RNA cleaving properties of cationic conjugates (1999) Tetrahedron, 55, 503-512.

162. Ждан, H. С., Кузнецова, И. JI., Власов, А. В., Сильников, В. Н., Зенкова, .М. А., Власов, В. В. Синтетические рибонуклеазы. 1. Синтез и свойства конъюгатов, содержащих РНК-связывающий фрагмент на основе остатков лизина и РНК-гидролизующий фрагмент, несущий остаток имидазола (1999) Биоогран. Химия, принято к печати.

163.Laemmli, U. К. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriofage T4 (1970) Nature, 227,680-685.

164.Suelter, C. U. A practical guide to enzymology (1985) Biochemistry: a series of monographs, 164-166.

165.Merril, C. R., Goldman, D., Van Keuren, M. L. Gel protein stains: silver stain (1984) Methods Enzymol., 104, 441-447.

166. Vlassov, V. V., Zuber, G., Felden, В., Behr, J.-P., Giege, R. Cleavage of tRNA with imidazole and spermine imidazole constructs: a new approach for probing RNA structure (1995) Nucleic Acids Res., 23, 3161-3167.

167.Kronvall, G., Messner, R. P., Williams, R. C. Jr. Immunochemical studies on the interaction between staphylococcal protein A and gamma-G globulin (1970) J. Immunol, 105, 1353-1359.

168.Gololobov, G. V., Chernova, E. A., Schourov, D. V., Smirnov, I. V., Kudelina, I. A., Gabibov, A. G. Cleavage of supercoiled plasmid DNA by autoantibody Fab fragment: application of the flow linear dichroism technique (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 92, 254-257.

169.Rosenqvist, E., Jossang, Т., Feder, J. Thermal properties of human IgG (1987) Mol. Immunol., 24, 495-501.

170.Liao, Y.-D. Determination of base specificity of multiple ribonucleases from crude samples (1995) Mol. Biol. Rep., 20, 149-154.

171.Breslow, R., Huang, D.-L., Anslyn, E. On the mechanism of action of ribonucleases: dinucleotide cleavage catalyzed by imidazole andZn2+ (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 1746-1750.

172.Moras, D., Comarmond, M.-B., Fischer, J., Weiss, R., Thierry, J.-C., Ebel, J.-P., Giege, R. Crystal structure of yeast tRNAAsp{1980) Nature, 288, 669-674.

173.Romby, P., Moras, D., Bergdoll, M„ Dumas, P., Vlassov, V. V., Westhoff, E., Ebel, J.-P., Giege, R. Yeast tRNAÄsp tertiary structure in solution and areas of interaction of the tRNA with aspartyl-tRNA synthetase. A comparative study of the yeast phenylalanine system by phosphate alkylation experiments with ethylnitrosourea (1985) J. Mol. Biol., 184, 455-471.

174.Garcia, A., Giege, R., Behr, J.-P. New photoactivatable structural and affinity probes of tKNAs: specific features and applications for mapping of spermine binding sites in yeast tRNAAsp and interaction of this tRNA with yeast aspartyl-tRNA synthetase (1990) Nucleic Acids Res., 18, 89-95.

175.Holmes, С. E., Abraham, А. Т., Hecht, S. M., Florentz, C., Giege, R. Fe.bleomycin as a probe of RNA conformation (1996) Nucleic Acids Res., 24, 3399-3406.

176.Florentz, C., Brule, H., Helm, M., Giege, R. Structure of human mitochondrial tRNALys in vitro transcripts - wild type and mutants (1999) In Lestienne, P. (ed.), Mitochondrial Diseases. Springer Verlag, Heidelberg, in press.

177.Lestienne, P. Mitochondrial DNA mutations in human diseases: a review (1992) Biochimie, 74, 123-130.

178.Wallace, D. C. Diseases of the mitochondrial DNA (1992) Ann. Rev. Biochem., 61, 11751212.

179.Ehresmann, С., Baudin, F., Mougel, M. Probing the structure of RNAs in solution (1987) Nucleic Acids Res., 15, 9109-9128.

180.Sigman, D., Chen, C. Chemical nucleases: new reagents in molecular biology (1990) Annu. Rev. Biochem., 59, 207-236.

181.Власов, В. В., Сильников, В. Н., Зенкова, М. А. Химические рибонуклеазы (1998) Мол. Биология, 32, 62-71.

182.Breslow, R., Labelle, М. Oligonucleotide hydrolysis in concentrated imidazole buffer (1986) J. Am. Chem. Res., 108, 2655-2659.

183.Westhof, E., Dumas, P., Moras, D. Loop stereochemistry and dynamics in transfer RNA (1983) J. Biol. Struc. Dyn., 1, 337-355.

184.Kumazawa, Y., Yokogawa, Т., Tsurui, H. Effect of the high-order structure of tRNAs on the stability of hybrids with oligodeoxyribonucleotides: separation of tRNA by an efficient solution hybridization (1992) Nucleic Acids Res., 20, 2223-2232.

185.Podyminogin, M. A., Vlassov, V. V., Giege, R. Synthetic RNA-cleaving molecules mimicking ribonuclease A active center. Design and cleavage of tRNA transcripts (1993) Nucleic Acids Res., 21, 5950-5956.

186.Коневец, Д. А., Зенкова, M. А., Сильников, В. Н., Власов, В. В. Синтетические конструкции, катализирующие гидролиз РНК (1998) Доклады АН, 360, 554-558.

187.Kierzek, R. Hydrolysis of oligonucleotides: influence of sequence and length (1992) Nucleic Acids Res., 20, 5073-5077.

Автор глубоко признателен В. Н. Буневой, О. А. Андриевской, А. Г. Барановскому, В. Н. Сильникову, Д. В. Коневцу, Н. С Ждан (НИБХ СО РАН), А. А. Бреусову, В. А. Наумову (333 ОВГ, Новосибирск), Р. Жьеже, К. Флоренц, М. Хельму, Ж. Кайту, А. Теобальд-Дитриш, Б. Лорберу, Е. Виентгесу (R Giege, С. Florentz, М. Helm, G. Keith, A. Theobald-Dietrich, Я Lorber, J. Wientges - IBMCdu CN.R.S., Strasbourg, France) за оказанную в работе помощь.