Специфические антитела в препаратах крови, обработанных криорадиационным методом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Атангулова, Рамиля Гайсаровна

• Атангулова, Рамиля Гайсаровна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Атангулова, Рамиля Гайсаровна

Список сокращений.

Введение.

Обзор литературы

Глава 1. Иммунобиологические свойства антител.

1.1. Свойства и значение антител.

1.2. Авидность и аффинность как факторы, определяющие функциональные свойства антител.

1.3. Влияние некоторых физико-химических воздействий на иммунобиологическую активность антител.

Глава 2. Метод криорадиационной обработки как один из способов инактивации вирусов в донорской плазме и ее препаратах.

Собственные исследования

Глава 3. Материалы и методы.

Глава 4. Изучение специфических антител IgG класса в донорской плазме и препаратах иммуноглобулина, обработанных криорадиацион-ным методом.

4.1. Титры антител к вирусу бешенства и цитомегаловирусу

4.2. Титры антител к вирусам клещевого энцефалита и ГЛПС.

4.3. Титры антител к вирусам гепатита А и В.

4.4 Титры антител к вирусам паротита, кори и краснухи.

4.5. Титры антител к микобактериям туберкулеза и экзотоксину коклюшного микроба.

4.6. Титры антител к альфастафилолизину.

Глава 5. Изучение биологических и физико-химических свойств препаратов иммуноглобулинов, обработанных криорадиационным методом.

5.1. Определение индекса авидности и относительной аффинной величины антител в донорской плазме и препаратах иммуноглобулинов.

5.2. Титры специфических антител в донорской плазме и препаратах иммуноглобулинов в процессе хранения после криорадиационной обработки.

5.3. Исследование молекулярного состава препаратов иммуноглобулинов.

5.4. Изучение антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулина.

5.5. Электрофоретическое фракционирование препаратов иммуноглобулина

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Специфические антитела в препаратах крови, обработанных криорадиационным методом»

Актуальность проблемы. Применение в клинической практике иммунных препаратов направленного действия в настоящее время становится основным этапом развития трансфузиологии и службы крови [4, 27, 57, 59]. Увеличение объема выпуска препаратов крови достигается главным образом за счет увеличения объема перерабатываемого сырья, роста трудовых и материальных затрат и в значительно меньшей степени за счет совершенствования технологического процесса, повышения качества готовой продукции [39, 84].

Разработка и совершенствование технологий производства высокоэффективных препаратов из плазмы донорской крови, обеспечивающих вирусную безопасность и сохранение биологической активности является актуальной задачей [3, 17, 86, 148, 174, 150, 152, 180, 182, 203, 226, 227]. Одним из перспективных методов обеспечения вирусной безопасности донорской плазмы крови и ее препаратов считается способ криорадиационной обработки с программируемым замораживанием [47].

Данная работа является фрагментом исследований, проведенных по Программе Международного научно-технического центра и Консорциума наук о плазме (США) « Разработка метода и основ технологии инактивации вирусов путем радиационной обработки программно-замороженных препаратов крови».

Влияние гамма-облучения с программируемым замораживанием на структуру и свойства белков более подробно освещено в исследованиях донорской плазмы крови и ее препаратов: альбумина, концентрата фактора VIII, человеческого лейкоцитарного интерферона [22, 29, 61, 78 ].

В работах Шангареевой Р.Ф. с соавт. (2000, 2001) [12, 85] были определены основные подходы для отработки режима гамма-облучения, позволяющие сохранить нативность и физико-химические свойства белков плазмы крови. Было показано, что замораживание плазмы по специальной программе до температуры (-78) ° С с последующей радиационной обработкой в дозах 35 и 50 кГр, обеспечивающих надежную инактивацию всех возможных вирусов-контаминантов, не приводит к статистически значимым отклонениям нарушения состояния ее основных белковых фракций: альбумина, иммуноглобулинов G и А, церулоплазмина, липопротеидов высокой и низкой плотности. Установлено, что оптимальной дозой криорадиационной обработки плазмы донорской крови, при которой происходит наименьшее изменение ее основного белкового состава, является доза 35 кГр. Таким образом, влияние криорадиационной обработки на белковый состав донорской плазмы в основном изучен. Тем не менее, иммунобиологические свойства иммуноглобулина G после криорадиационной обработки оставались не исследованными.

Препараты иммуноглобулинов из крови человека и животных широко используются в медицине. Действующим началом препаратов иммуноглобулинов являются специфические антитела. Поэтому изучение влияния криорадиационной обработки на титры специфических антител, а также физико-химические свойства препаратов иммуноглобулинов представляет значительный научный и практический интерес.

Цель исследования. Оценить влияние криорадиационной обработки донорской плазмы крови и препаратов иммуноглобулинов на иммунобиологические свойства антител IgG класса.

Задачи исследования.

1. Изучить влияние криорадиационной обработки в дозах 5-50 кГр на титры антител к вирусным и бактериальным антигенам в донорской плазме крови и препаратах иммуноглобулинов человека нормального и специфических.

2. Определить влияние криорадиационной обработки на протективные вируснейтрализующие титры антител в реакции биологической нейтрализации на животных (in vivo).

3. Исследовать функциональные свойства: авидность и аффинность специфических антител в донорской плазме и препаратах иммуноглобулинов, обработанных криорадиационным методом.

4. Изучить влияние различных доз криорадиационной обработки на основные физико-химические свойства препаратов иммуноглобулинов.

5. Установить оптимальные дозы криорадиационной обработки, при которых физико-химические свойства молекул IgG соответствуют критериям качества препаратов иммуноглобулинов для внутримышечного применения.

Научная новизна.

Впервые :

- установлено, что в результате криорадиационной обработки плазмы донорской крови и препаратов иммуноглобулина в дозах 5-50 кГр статистически достоверно и дозозависимо повышаются (в 1,2 - 4,6 раза) титры специфических антител к ряду вирусных и бактериальных антигенов;

- показано, что в результате криорадиационной обработки происходит повышение (в 1,3-4,6 раза) вируснейтрализующих титров антирабических антител;

- выявлены особенности изменения функциональных свойств антител: тенденция к повышению авидности и аффинности в донорской плазме и препаратах иммуноглобулина, обработанных криорадиационным методом, установлена сильная корреляция между относительной аффинностью и титрами антител (к вирусу ГЛПС и коклюшному токсину);

- обнаружена корреляционная зависимость между содержанием димеров в препаратах иммуноглобулина человека нормального и титрами антител к вирусу клещевого энцефалита;

- установлено, что криорадиационная обработка не приводит к значительным изменениям молекулярных параметров препаратов иммуноглобулинов.

Практическая значимость работы.

По материалам исследования подана заявка №2003123647 на изобретение «Способ повышения специфической активности антител IgG класса».

Полученные результаты являются основой для создания технологии, направленной на повышение специфической активности препаратов иммуноглобулинов и антитоксических сывороток в производстве соответствующих препаратов крови. Установленная высокая корреляция между аффинностью и титрами антител позволяют рекомендовать метод криорадиационной обработки для повышения функциональной активности антител с дальнейшим использованием в качестве иммунохимических реагентов дианостических тест-систем, а также для производства специфических иммуноглобулинов, применяемых по жизненным показаниям.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Криорадиационная обработка донорской плазмы и препаратов иммуноглобулинов в дозах 5-50 кГр сопровождается повышением титров антител к ряду вирусных и бактериальных антигенов (в 1,2 - 4,6 раза), при этом уровень повышения титров антител коррелирует с дозой гамма-облучения.

2. Криорадиационная обработка препаратов антирабического иммуноглобулина в дозах 5-50 кГр приводит к повышению (в 1,3-4,6 раза) протективных вируснейтрализующих титров антирабических антител.

3. Молекулярные параметры препаратов иммуноглобулинов, обработанных криорадиационным методом, соответствуют требованиям, предъявляемым к качеству иммуноглобулинов для внутримышечного применения. Повышенный уровень титров специфических антител в процессе хранения после криорадиационной обработки сохраняется в течение 1,5 лет (срок наблюдения).

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на IV международном съезде по радиационным исследованиям (Москва, 2001), 7-ой Пущинской школе-конференции молодых ученых (Пущино, 2003), Всероссийской научной конференции, посвященной 105летию Пермского НПО «Биомед» (Пермь, 2003), научно-практической конференции «Биохимия: от исследования молекулярных механизмов - до внедрения в клиническую практику и производство» (Оренбург, 2003), II Республиканском конкурсе молодых ученых (г.Уфа, 2003), Ученых Советах ГУП «Иммунопрепарат» (2003 - 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных статей, принята заявка на изобретение Федеральным институтом патентной собственности.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований (5 глав), заключения и выводов. Материал изложен на 139 страницах текста, содержит 20 рисунков и 23 таблицы. Библиографический список включает 229 источников (87 отечественных и 142 иностранных).

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Атангулова, Рамиля Гайсаровна

Выводы

Криорадиационная обработка донорской плазмы и препаратов иммуноглобулинов в дозах 5, 15, 25, 35 и 50 кГр приводит к значительному (в 1,2-4,6 раза) повышению титров антител к ряду изученных вирусных и бактериальных антигенов.

Изменения титров антител зависят от дозы облучения, исходного уровня антител и специфичности антител.

На модели препаратов антирабического лошадиного иммуноглобулина в реакции биологической нейтрализации показано, что после криорадиационной обработки значительно повышаются титры протективных вируснейтрализующих антител (в 1,3-4,6 раза). Криорадиационная обработка сопровождается повышением индекса авидности и относительной аффинности антител.

Молекулярные параметров препаратов иммуноглобулинов после криорадиационной обработке в дозах 5-50 кГр соответствуют требованиям Фармакопейной статьи к качеству иммуноглобулинов для внутримышечного применения.

Оптимальными дозами криорадиационной обработки препаратов иммуноглобулинов для повышения титров специфических антител являются дозы 5-25 кГр.

Заключение

В последние годы все больше внимания уделяется разработке эффективных технологий инактивации патогенных агентов в плазме крови и ее препаратах, что привело к внедрению широкого диапазона процедур инактивации, которые обеспечили и биологическую полноценность препаратов. Одним из эффективных методов стерилизации препаратов крови от вирусов-контаминантов является метод криорадиационной обработки. Совместными исследованиями ученых НТЦ «Лекбиотех» (г. Москва), НПО «Иммунопрепарат» (г.Уфа) и НТЦ «Вектор» (г. Новосибирск) разработана технология криорадиационной обработки плазмы крови и получаемых из нее препаратов, обеспечивающая надежную инактивацию вирусов-контаминантов.

Анализ литературы свидетельствует, что вопросы сохранения специфической активности иммуноглобулина G, изменения титров антител при использовании методов криорадиационной обработки, практически не были изучены. Поэтому установление влияния криорадиационной обработки на титры специфических антител представляет значительный научный и практический интерес.

Проведенные нами исследования показали, что после криорадиационной обработки донорской плазмы и препаратов иммуноглобулинов в дозах 35 и 50 кГр титры антител к цитомегаловирусу, вирусам гепатита А, бешенства, к экзотоксину коклюшного микроба повышались в значительной степени. Для более детального изучения этого явления применили криорадиационную обработку в диапазоне доз облучения от 5 до 50 кГр. В результате криорадиационной обработки донорской плазмы и препаратов иммуноглобулинов установили достоверное повышение титров антител при всех испытанных дозах облучения к цитомегаловирусу, вирусам бешенства, гепатита А, клещевого энцефалита, ГЛПС, паротита, кори, а также микобактериям туберкулеза и экзотоксину коклюшного микроба.

Повышение титров специфических антител в большей степени происходило в индивидуальной донорской плазме и в меньшей степени в объединенной донорской плазме и препаратах иммуноглобулина. Так, изучение антитоксических противококлюшных антител показало, что в индивидуальной плазме при дозе 35 кГр повышение происходит на 114 %, при дозе 50 кГр на 205 %, в объединенной плазме и препаратах иммуноглобулинов повышение несколько меньше, на 50-80 % и 32-64 %, соответственно. Наибольшее повышение титров антицитомегаловирусных антител наблюдали в индивидуальной донорской плазме на 361-402 %, затем в объединенной донорской плазме на 114-204 % и в препаратах иммуноглобулина человека нормального на 135-282 %.

Исследования показали, что повышение титров антител происходит во всех исследуемых образцах, но в различной степени. Процент повышения титров антител в препаратах иммуноглобулина человека выше, чем в специфических препаратах иммуноглобулина. Наибольшее повышение титров антицитомегаловирусных антител наблюдали в препаратах иммуноглобулина человека нормального на 135-282 %, а в препаратах антицитомегаловирусного иммуноглобулина повышение отметили только на 53-88 %.

Титры антител к вирусу клещевого энцефалита в препаратах противоклещевого иммуноглобулина в результате криорадиационной обработки меняются незначительно в пределах (-13)-(+9) %, тогда как в препаратах иммуноглобулина человека нормального на 19-154 %. Титры антител к вирусу ГЛПС в антиГЛПС-иммуноглобулине повысились всего на 533 %. Специфические иммуноглобулины имеют исходный титр выше, чем в препаратах иммуноглобулина человека нормального, возможно, этим фактом объясняется менее выраженный характер повышения титров антител. Известно, что, естественные циркулирующие антитела поливалентны и обладают меньшей аффинностью [70]. Следовательно, при получении препаратов иммуноглобулина человека нормального или специфического на основе таких антител, можно предполагать их более слабый протективный эффект.

Препараты иммуноглобулинов направленного действия содержат более высокие титры специфических антител, и эти антитела обладают более высокой аффинностью, чем антитела в препаратах иммуноглобулина человека нормального. Например, антицитомегаловирусный иммуноглобулин «Меговир» имеет индекс авидности (66 %) и содержит высокоавидные антитела.

Сравнение исходных титров исследуемых образцов (до облучения) показало, что повышение титров специфических антител зависит от исходного уровня антител: чем ниже исходный титр исследуемого образца, тем большее повышение титров антител происходит при криорадиационной обработке. С целью подтверждения зависимости титров антител при криорадиационной обработке от исходного уровня антител в исследуемом образце, провели обработку индивидуальной донорской плазмы с исходным низким, средним и высоким титром антицитомегаловирусных антител. Анализ полученных данных показывает, что в индивидуальной плазме с исходным высоким уровнем антител изменения были практически не существенны в пределах от (-4,5)- (+7,9) %, а в индивидуальной плазме с исходным средним и низким титром антител повышение было в значительной степени (Р<0,05). Наибольшее повышение титров антител наблюдали в индивидуальной донорской плазме с исходным низким титром антител от 11 до 134 %. При этом повышение титров специфических антител в результате криорадиационной обработки имеет линейную зависимость «доза-эффект». Коэффициенты корреляции (г), определяющие связь между дозой облучения и титрами антител составили более 0,9 при уровне вероятности Р<0,05, то есть являются достоверными.

В препаратах иммуноглобулина человека нормального повышение титров антител к вирусу гепатита А при дозах 5, 15 и 25 кГр также имеет характер линейной зависимости «доза-эффект», но дозы 35 и 50 кГр в меньшей степени повлияли на повышение титров антител к ВГА, чем дозы 15 и 25 кГр. Титры антител к вирусу гепатита В существенно не изменились ни в индивидуальной донорской плазме, ни в объединенной донорской плазме. Но в препаратах иммуноглобулина и в объединенной плазме с исходным высоким уровнем антител к вирусу гепатита В отметили значительное понижение при дозах 35 и 50 кГр от 16 до 49 %. Незначительное влияние криорадиационной обработки наблюдали при титровании препаратов иммуноглобулина человека нормального к вирусу краснухи. Изменения титров антител были в пределах от (-1,5) до (+7,4) %. Титры антистафилококковых антител в препаратах иммуноглобулина человека нормального и специфических препаратах антистафилококкового иммуноглобулина после криорадиационной обработки также практически не изменяются.

Таким образом, криорадиационная обработка избирательно влияет на титры антител к вирусным и бактериальным антигенам, то есть титры к определенным специфическим антителам меняются значительно, а титры других видов специфических антител существенно не меняются или понижаются в значительной степени при больших дозах облучения 35 и 50 кГр.

Влияние криорадиационной обработки на протективные вируснейтрализующие антитела изучали на препаратах антирабического лошадиного иммуноглобулина в реакции нейтрализации in vivo. В реакции биологической нейтрализации вируса бешенства антирабическим лошадиным иммуноглобулином на мышах установили, что титры протективных нейтрализующих антирабических антител повысились после криорадиационной обработки в 1,3-4,6 раза. Расчеты эффективной дозы иммуноглобулина показали, что доза 2,8 мкг способствует 50 % защите животных, эта же доза облученного дозами 25 и 35 кГр иммуноглобулина защищает 70 % животных. Таким образом, выживаемость животных при всех введенных дозах антирабического иммуноглобулина, облученного дозами 25 и 35 кГр, выше на 20 % при сравнении с контролем. Наши исследования согласуются с даннымиУап§ W.P. с соавт. (1995) [229], Usinger W.R.h Lucas А.Н. (1999) [223], из которых следует: чем выше авидность антител, тем меньшее количество антител необходимо для защиты от бактерий или вирусов.

Характер повышения титров антирабических антител и в реакции нейтрализации и в ИФА показал, что доза 35 кГр в большей степени влияет на повышение титров антител. Вероятно, более высокая доза облучения 50 кГр оказывает ингибирующее воздействие на антирабические антитела.

В литературе встречаются сообщения о подобном повышении титров антител в результате физического воздействия [32, 58, 68]. Известно, что воздействие ультрафиолетового света на плазму усиливает протективную активность естественных антиэндотоксиновых антител при перитонитах по данным Аполлонина А.В. с соавт.(1994) [58]. При ультрафиолетовом облучении плазмы происходит также повышение титров антиэритроцитарных антител в 1,6-2,1 раза, титров антистафилококковых антител IgG класса в 2-16 раз и IgM антител в 2-4 раза по данным Самойловой К.А. с соавт. (1986) [68].

Далее изучали титры специфических антител в процессе хранения после криорадиационной обработки. По требованиям ФС 42-0091-02 («Плазма для фракционирования») донорскую плазму хранят при температуре минус 30 "С и ниже. Исследования показали, что после хранения при температуре минус 78 °С в течение 6, 9 и 18 месяцев повышенные титры антител к цитомегаловирусу в донорской плазме и препаратах иммуноглобулинов практически не изменились. Проведение теста на ускоренное старение препаратов иммуноглобулинов (Европейская Фармакопея, 2000) также подтвердило, что повышенный уровень титров антител к вирусу гепатита А, к вирусу клещевого энцефалита, вирусу кори и микобактериям туберкулеза сохраняется, а наблюдаемые изменения не превышают 10-17 %. Титры антистафилококковых антител в препаратах иммуноглобулина человека нормального и антистафилококкового иммуноглобулина после криорадиационной обработки при хранении 6 мес. при температуре хранения препаратов иммуноглобулинов (6±4) "С также существенно не изменились.

Как свидетельствуют литературные данные, повышение нейтрализующих титров антител происходит вследствие повышения аффинности или авидности антител [53, 113, 131, 197, 229]. Известно также, что эффективность нейтрализующей активности антител зависит от доступности и стабильности нейтрализующих эпитопов [225]. Поэтому следующим этапом наших исследований было изучение функциональных свойств антител авидности и аффинности. Результаты опытов показали тенденцию к увеличению индекса авидности и относительной аффинной величины специфических антител после криорадиационной обработки донорской плазмы и препаратов иммуноглобулинов. Данные по изучению индекса авидности антител к цитомегаловирусу показали повышение этого индекса при дозе облучения 35 кГр, а при 50 кГр в некоторых изначально высокоавидных препаратах иммуноглобулинов отмечали понижение. Как известно, специфические антитела имеют определенный «порог» авидности, и дальнейшее увеличение авидности не приводит к заметным улучшениям защитных функций [129]. Антитела к поверхностным антигенам вирусов, антитела, реагирующие с антигенами бактериальных капсул, могут не достигать высоких значений авидности, и в этих случаях их протективная функция зависит от концентрации антител [100, 223].Так, повышение индекса авидности высокоавидного антицитомегаловирусного иммуноглобулина «Меговир» наблюдали при дозах 5,15 и 25 кГр, а при дозах 35 и 50 кГр отмечали понижение индекса авидности. Следовательно, криорадиационная обработка не влияет в значительной степени на повышение аффинности высокоавидных специфических препаратов иммуноглобулинов. Повышение аффинности противококлюшных антитоксических антител и аффинности анти-ГЛПС-антител отмечали при всех дозах облучения. Кроме того, выявили достоверную высокую корреляционную связь между относительной аффинностью антител к вирусу ГЛПС, коклюшному экзотоксину и титрами этих антител.

Проведенные исследования позволяют предполагать, что одним из механизмов увеличения титров специфических антител при криорадиационной обработке является повышение аффинности этих антител. Повышение аффинности зависит от изначального уровня антител (состояния аффинности) в препаратах иммуноглобулинов или донорской плазме. Таким образом, увеличение аффинности антител является причиной повышения силы связывания антитела с антигеном и, как следствие, отмечается повышение титра антител. То есть высоко реагирующие в ИФА образцы донорской плазмы или препаратов иммуноглобулинов по сравнению со слабо реагирующими, содержат более аффинные антитела. Наши исследования по аффинности антител согласуются с экспериментально подтвержденными данными, полученными в результате химических модификаций моноклональных антител. В работах Мельниковой Я.И. с соавт. (1997,2000) [6, 81] было показано, что разные концентрации органического растворителя по-разному действуют на аффинность антител. Некоторые концентрации приводят к увеличению антигенсвязывающей активности антител, причем, максимальное увеличение происходит именно с менее аффинным антителом. Все эти изменения авторы связывали с тонкими конформационными изменениями отдельных участков антител. Вероятно такие же изменения происходят при криорадиационной обработке донорской плазмы и препаратов иммуноглобулина.

Молекулярные параметры препаратов иммуноглобулинов после криорадиационной обработки изучали методом гель-фильтрации на ультрагеле АсА34. Во всех препаратах наблюдали увеличение содержания димеров. Возможно, причиной повышения титров некоторых специфических антител после криорадиационной обработки является димеризация. Димеризация антител, как метод модифицирования АГ-АТ взаимодействий, имеет функциональное значение, так как в каждой из двух реагирующих молекул имеются два независимых мобильных сайта. Известно, что димеризация моновалентных антительных фрагментов увеличивает примерно в 100 раз константы ассоциации для взаимодействия с поливалентными антигенами по данным Jekel Р.А. (1996) [158]. Анализ, полученных нами данных, показал сильную корреляционную связь между уровнем антител к вирусу клещевого энцефалита и содержанием димеров в препаратах иммуноглобулина человека нормального (г=0,81; Р<0,05). Таким образом, повышение титров антител можно связать с димеризацией антител при криорадиационной обработке.

Образование димеров, может служить также критерием степени полезности использования препарата при лечении аутоиммунных заболеваний, так как было установлено, что препараты содержат антиидиотипические антитела [74].

С увеличением дозы облучения наблюдали тенденцию к снижению количества мономерных форм. Количество фрагментов в специфических препаратах иммуноглобулинов практически не изменилось, в препаратах иммуноглобулина человека нормального количество фрагментов понизилось. Увеличение содержания агрегатов наблюдали во всех препаратах иммуноглобулинов, но в пределах нормы (менее 10 %). Незначительная агрегация молекул IgG (до 3 %) после криорадиационной обработки подтверждается и более ранними опытами, проведенными с использованием коммерческих иммуноглобулинов на жидкостном хроматографе высокого давления HPLC[11]. Согласно требованиям Фармакопейной статьи на препараты иммуноглобулинов для внутримышечного применения [80], основная фракция мономеров вместе с димерами должна составлять не менее 85 %, полимеров не более 10 %, фрагментов не более 5 % от общего содержания белка в препарате. Следует отметить, что все указанные изменения молекулярных параметров иммуноглобулинов после криорадиационной обработки находятся в допустимых пределах, предъявляемым к качеству внутримышечных иммуноглобулинов.

Выяснили также, что антикомплементарная активность препаратов иммуноглобулина человека нормального понизилась до пределов, допускающих клиническое внутривенное применение. Возможно, при криорадиационой обработке происходит избирательная модификация Fc полисахаридной части иммуноглобулина, ответственной за связывание комплемента.

Анализ электрофоретических данных препаратов иммуноглобулина методом диск электрофореза в ПААГе не выявил значительных изменений. Полосы контрольного необлученного иммуноглобулина соответствуют фракциям облученного иммуноглобулина, хотя фракции иммуноглобулина при дозах 35 и 50 кГр, имеют более размытый вид. При электрофоретическом разделении на ацетат целлюлозных пластинах с увеличением дозы облучения отметили тенденцию к уменьшению у-фракции препаратов иммуноглобулина, эти изменения носили статистически значимый характер при дозах 25, 35 и 50 кГр. На электрофореграмме (рис.19) отмечаются следы концентрации иммуноглобулина на месте нанесения препаратов иммуноглобулина, вероятно, это связано с частичной агрегацией IgG при высоких дозах облучения 35 и 50 кГр. По требованиям Фармакопейной статьи, содержание у-фракции должно быть не менее 97 % общего белка. Следовательно, дозы 35 и 50 кГр более значительно влияют на структуру молекулы IgG в препаратах иммуноглобулинов, а дозы 5-25 кГр являются оптимальными дозами криорадиационной обработки препаратов иммуноглобулинов.

Ранее в исследованиях Шангареевой Р.Ф. с соавт. (2000, 2001) [12, 85], Гелич JI.B. с соавт. (2002) [13] было показано, что криорадиационная обработка дозами 35 и 50 кГр не оказывает значительных изменений на конформационную структуру молекулы иммуноглобулина G в донорской плазме. Полученные нами данные, при изучении общепринятыми методами исследований также свидетельствуют об отсутствии значительных изменений в конформационной структуре молекулы иммуноглобулина после криорадиационной обработки.

В исследованиях Купцова А.Х. (1985) [61] было показано, что при криорадиационной обработке в дозах 35 и 50 кГр не происходит заметного нарушения молекулярной структуры альбумина. Подобное суждение может быть верным и для молекулы IgG. Тем не менее, некоторые изменения при больших дозах облучения (35 и 50 кГр), в частности снижение у-фракции и более высокий процент понижения титров антител к вирусу гепатита В ( 38-49 %) позволяют предположить, что при этих дозах происходит частичная денатурация молекулы иммуноглобулина в препаратах иммуноглобулина. Таким образом, для повышения специфической активности антител целесообразно проводить криорадиационную обработку донорской плазмы индивидуальной или объединенной), но не готовых препаратов иммуноглобулинов.

Как правило, эффекты модификации структуры белков с помощью химических агентов или физических факторов представляют собой частичную или полную потерю биологической активности. Литературные данные об активации функциональных свойств белковых молекул ограничены. Неизвестны иммунохимические характеристики специфических антител [144, 215]. Поэтому весьма ограниченный объем имеющихся на сегодня данных о механизмах конформационных перестроек в иммуноглобулинах, не позволяют однозначно объяснить результаты наших исследований, и выяснение механизмов повышения титров антител требует дальнейших углубленных исследований.

Таким образом, полученные результаты позволили заключить, что при криорадиационной обработке донорской плазмы и препаратов иммуноглобулинов происходит значительное повышение титров специфических антител к цитомегаловирусу, к вирусам гепатита А, ГЛПС, бешенства, клещевого энцефалита, кори, паротита, а также к микобактериям туберкулеза и коклюшному экзотоксину. При этом изученные режимы обработки не влияют в значительной степени на молекулярные параметры препаратов иммуноглобулинов.

На сегодняшний момент отсутствует валидация методов контроля изменений биологических свойств антител в донорской плазме или препаратах иммуноглобулинов при вирусной инактивации, и наши исследования в этой области приближают к решению этих вопросов. Анализ, полученных нами результатов и актуальность проблемы обосновывают необходимость создания производственной технологии, направленной на повышение специфической активности препаратов иммуноглобулинов и антитоксических сывороток в производстве соответствующих препаратов крови, а также методов контроля возможных изменений антител в процессе инактивации вирусов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Атангулова, Рамиля Гайсаровна, 2004 год

1. Авидиость антител — важный показатель состояния иммунитета при хронической респираторной инфекции / И.К. Малашенкова, Н.А. Дидковский, Гевондян B.C. и др // 7 Нац. конгр. по болезням органов дыхания. Москва, 2-5 июля, 1997. С. 142.

2. Алейник М.Д. Гуморальный иммунитет к вирусу гепатита А и условия его формирования / М.Д. Алейник, Т.Н. Быстрова, Е.О. Копнина // Вирусные гепатиты: Сб. науч. тр. Ин-та вирусологии им. Д.И. Ивановского АМН СССР.-М., 1987.-С. 33-36.

3. Алсынбаев М.М. Состояние проблемы вирусологической безопасности некоторыхпрепаратов крови / М.М. Алсынбаев, А.Г. Исрафилов, Т.Г. Нигматуллин // Актуал. вопр. прикл. биох. и биотехн. Мат. конф. биохимиков Урала и Западной Сибири. Уфа. 1998. - С. 141-147.

4. Анастасиев В.В. Применение иммуноглобулинов / В.В. Анастасиев // Иммуноглобулины. Сб.науч. тр. Н. Новгород: НГМИ, 1992. С. 14-41.

5. Антитела к токсину Pseudomonas Aeruginosa в препаратах нормального иммуноглобулина человека / М.Н. Янишевская, Н.С. Кузьмина, JTP. Кутимова, М.Н. Ленц и др. // Журн. микробиол., эпидем. и иммунобиол.- 1983. №6. -С. 100-102.

6. Антигенсвязывающая активность монокпональных антител после инкубации органическими растворителями / Я.И. Мельникова, С.Г. Одинцов, З.И. Кравчук, С.П. Марцев//Биохимия. 2000. - т. 65-№ 11.-С. 1488-1499.

7. Афанасьева О.И. Высокотитражные иммуноглобулины направленного действия в терапии острых респираторных вирусных инфекций у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук / О.И. Афанасьева. СПб., 1999. -20 с.

8. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев // Л. 1962. - С. 13 - 15

9. Бобровник С.А. Липид-белковые взаимодействия и конформация белковых макромолекул / С.А. Бобровник // Украинский биохимический журнал.-2000.-№2. С. 100-104.

10. Богдашина Е.В. Опыт получения специфического иммуноглобулина человека для терапии осложненных форм эпидемического паротита / Е.В. Богдашина, Н.Б. Альбицкая, Л.Г. Щипкова // Иммуноглобулины. Сб. науч. тр., Нижний Новгород: НГМИ, 1992. С. 84-88.

11. Биохимические свойства иммуноглобулина G, полученного хроматографическим методом из плазмы крови человека, обработанной криорадиационным методом / Р.Г. Хубатулин, Т.Г. Нигматуллин, А.Г. Исрафилов //Оренбург. 2003.- С.473-476.

12. Влияние криорадиационной обработки донорской плазмы крови на ее белковый состав / Р.Ф. Шангареева, М.М. Алсынбаев, А.Д. Сагадатова и др. // Проблемы гематологии и переливания крови.-2001. №3. - С.63.

13. Герасимова J1.M. Изменение молекулярного состава иммуноглобулинов в процессе хранения / JI.M. Герасимова // Иммуноглобулины. Сб.науч. тр. Н. Новгород: НГМИ, 1992. с. 41-44.

14. Государственная Фармакопея, XI изд., вып. 2, с. 19, 24.

15. Гриневич А.С. Структурно-функциональные особенности углеводов иммуноглобулинов в норме и при патологии / А.С. Гриневич, И.В. Андреев, А.И. Мартынов//Иммунология. 1994.-№3.-С. 10-15.

16. Зубкова Н.В. Применение сольвент-детергентного метода для инактивации вирусов при получении иммуноглобулина/ Н.В. Зубкова // Проблемы гематологии и переливания крови. 2001. - № 3. - С.51-52.

17. Изучение возможности получения отечественного препарата антицитомегаловирусного иммуноглобулина/В.В. Хабибуллина, А.Г. Исрафилов, Г.Б. Кудашева, М.М. Алсынбаев // Инфекционные болезни:

18. Диагностика, лечение, профилактика. Тез. докл. IV Российско-Итальянской научной международной конференции. Санкт-Петербург, 2000. - С. 272.

19. Изучение аффинности естественных антител сыворотки крови человека к компоненту клеточной стенки бактерий / А.В. Кулаков, С.В. Климова, Д.А. Ярилин и др. // Иммунология. 1997. - №1. - С. 21-25.

20. Исследование кроличьего IgG, модифицированного карбоксикарбоновым ангидридом диэтилентриаминпентауксусной кислоты/ Н.М. Кириллова, О.В. Жоров, В.А. Прейгерзон, С.П. Марцев // Биохимия.-1991. -т. 56.- вып.б.-С. 1057-1067.

21. Карсонова М.И. Изучение некоторых особенностей иммунного статуса при хроническом фурункулезе / М.И. Карсонова, Я.И. Тельнюк, Сетдикова Н.Х. // Иммунопат., аллерг., инфектол. 2002.- №3.- С.67-71.

22. Климович В.Б. Регуляторные эффекты иммуноглобулинов / В.Б. Климович// Иммунология,-1998.- №6.-С. 16-17.

23. Комарова Т.Н. Получение, физико-химические и биологические свойства иммуноглобулина против вируса простого герпеса / Т.Н. Комарова // Иммуноглобулины. Сб. науч. тр. Нижний Новгород: НГМИ, 1992. С. 92-95.

24. Кострова О.М. Иммуноглобулины для профилактики и лечения вирусных инфекций / О.М. Кострова, В.А. Алешкин // Иммунология.-1995.-№6.- С.6-11.

25. Коротяев Ф.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / Ф.И. Коротяев, С.А. Бабичев. СПб.- 1998.- С.592.

26. Лебедев К.А. Иммунограмма в клинической практике / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина М.: Наука, 1990. - 223 с.

27. Марчук А.И. Ультрафиолетовое облучение крови / А.И. Марчук // Вестник службы крови. 1999. - №2 - С.34-37.

28. Методические указания по определению антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов / Т.А. Крайнова, В.В. Анастасиев, Т.В. Короткова, Т.Б. Значинская // Москва.- 1997. 16 с.

29. Методические указания по определению антиальфастафилолизина в сывороточных препаратах крови человека и животных / Ф.Ф. Резепов, Л.В. Минакова, А.А. Уланова, Н.Е. Смирнова// Москва. 1984. - 20 с.

30. Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям // МУК 4.1/4.2.588-96.-128 с.

31. Методы лабораторных исследований по бешенству. ВОЗ, 1975.

32. Методические рекомендации по определению агрегатов и фрагментов в препаратах иммуноглобулина. Москва, 1998.

33. Методические указания по лабораторной диагностике бешенства животных./ Н.А. Хисматуллина, Р.Х. Юсупов, М.А. Селимов, С.Р. Янбарисова //Казань.- 1997.

34. Минакова J1.B. Состояние проблемы производства и качества нормального и специфических иммуноглобулинов из крови человека / J1.B. Минакова, JI.K. Лаптева // Иммуноглобулины. Н. Новгород: Изд-во. НГМУ, 1993.-С. 4-14.

35. Нго Т.Т. Иммуноферментный анализ / под ред. Т. Т. Нго, Н.М. Ленкофф.- М.: Мир, 1988. 446 с.

36. Новиков Д.К. Антибактериальный иммунитет / Д.К. Новиков // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2002.- № 2.- С.7-12.

37. Новиков Д.К. Противовирусный иммунитет / Д.К. Новиков // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2002.- №1.- С.5-15.

38. Особенности диагностики клещевого энцефалита / Информ. бюлл. «Новости «Вектор-Бест».- 1999.- №11.

39. Особенности гуморального антибактериального иммунитета у часто и длительно болеющих людей / С.В. Климова, Б.В. Пинегин, А.В.Кулаков, И.А. Комарова // Иммунология. -1997. №3. - С.50-52.

40. Опыт применения индуктора интерфероногенеза и специфического иммуноглобулина для профилактики гепатита А / А.Ф. Фролов, В.А. Гураль, С.Б. Степанчук и др.// Итоги науки и техники. Серия: Вирусология. — М., ВИНИТИ. - 1990.-Т.22. - С.24.

41. Остерман JI.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот / JI.A. Остерман-М.: Наука, 1985.- 536 с.

42. Патент РФ 2000109454/13, МПК А 61 L 2/08, опубл.17.04.2000.

43. Патент США 5362442, МПК А 61 L 2/08, опубл. 08.11.94.

44. Патент США 3672823, МПК 6 А 61 L 2/02; 2/08, опубл. 27.06.72.

45. Патент Великобритании 2222081, МПК 6 А 61 К 41/00, опубл. 1990.

46. Перспективы получения иммунной плазмы с антибактериальной активностью без намеренной иммунизации доноров / В.Н. Мельникова, А.И. Смирнова, J1.K. Николаева и др. // Гемат. и трансф. — 1989. № 7. - С. 52-54.

47. Петров Р.В. Иммунодиагностика иммунодефицитов/ Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология.-1997.- №4. С.4 - 7.

48. Пинегин Б.В. Иммунодиагностика и иммунотерапия хирургических инфекций / Б.В. Пинегин, Т.М. Андронова, Т.И. Юдина // International Jornal of Immunorehabilitation.- 1998.- № 10. С. 86-99.

49. Пол У. Иммунология / под ред. У. Пола.-М.: Мир, 1987. т.1- 476 с

50. Полак Д. Введение в иммуноцитохимию: Современные методы и проблемы / Д. Полак, С. Ван Норден М.: Мир. - 1987. - С.74.

51. Правильное использование иммуноглобулинов человека в клинической практике: выводы и рекомендации совещания МСИО/ВОЗ/Бюл. ВОЗ. -1982.-Т.60.- №1. С.20-24.

52. Проблемы и задачи производственной трансфузиологии в России/ Е.А. Селиванов, Е.В. Белов, Т.Н. Данилова, Н.П. Спивакова Тезисы докладов научно-практической конференции на рубеже XXI века. Н. Новгород, 1999. С.23-24.

53. Пшеничнов В.А. Иммуноглобулины в вирусологических исследованиях и при профилактике некоторых инфекций / В.А. Пшеничнов, В.П. Краснянский, В.В. Михайлов//Вопр. вирусол.-1992. № 4. - С.178-180.

54. Пыпа Л.В. Авидность антител класса IgG для Toxoplasms gondii -новый серологический показатель активного токсоплазмоза / Л.В. Пыпа, О.А.Яворский, Е.Н. Базилевич // Лаб. диагностика. 2001. - №2.- С.46-48.

55. Радиационная устойчивость препаратов альбумина / А.Х. Купцов, Г.А. Львова, Н.Н. Соболева, В.И. Трофимова // Химико-фармацевтический журнал.-1985.- №1. С.90-94.

56. Разработка специфического иммуноглобулина против вируса гепатита А/ А.Ф. Фролов, В.А. Степанчук, Л.Ф. Шевченко и др.// Вирусные гепатиты: СБ. науч. тр. Ин-та вирусологии им. Д.И. Ивановского АМН СССР. — М., 1984. — С. 46-49.

57. Разработка экспресс-методов иммунологического мониторинга при бешенстве / Н.А. Хисматуллина, Р.Х. Юсупов, М.А. Селимов, С.Р. Янбарисова // Вопр. вирусологии. 2001. - №6. - С.23-26.

58. Рекомбинантные антитела к вирусу клещевого энцефалита/ Г.Н. Николенко, Е.В. Протопопова, А.А. Ильичев и др.// Вопр. вирусол. 2002. - №5. - С.31-35.

59. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл М.: Мир, 2000. - 528 с.

60. Савинская С.С. Антитела к вирусу гепатита А у здорового населения Москвы/ С.С.Савинская, М. С. Балаян // Ж. Микроб. 1982. -№ 5. - С. 34-37.

61. Самойлова К.А. Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных / К.А. Самойлова, Р.А. Арцишевская, Л.Г. Григорьева // Сб. науч. тр. Л.: Наука. 1986. - С. 226-237.

62. Самойлова Р.С. В-клеточный иммунитет / Р.С. Самойлова, В.М. Машко // Гематол. и трансфузиолог. 1990- т.35 - №8. - С.31-34.

63. Санин А.В. Неспецифический иммунитет / А.В. Санин, В.М. Машко // Гематол. и трансфузиол.-1990.- №7.- С.30-34.

64. Содержание специфических антител к антигену гепатита В в препаратах иммуноглобулина / Т.В. Голосова, А.Н. Марголин, Сомова А.В., Минакова Л.В.// Журн. Микр., эпидем. и иммунобиол.- 1981. -№2. С. 105-106.

65. Состояние заболеваемости вирусными гепатитами и пути совершенствования профилактики этих инфекций среди населения страны / М.И. Наркевич, Г.Г. Онищенко, И.В. Шахгильдян и др. // Ж. Микробиол. -1989.-№5.-С. 34-37.

66. Сравнительное изучение количественного содержания антител к вирусу гепатита А в сырье и в препаратах иммуноглобулина/ В.Н. Мигунов, Н.В. Дорошенко, В.А. Ананьев и др. // Иммуноглобулины. Сб. науч. тр., Нижний Новгород: НГМИ, 1992. С.50-54.

67. Специфические антитела разной авидности у больных ГЛПС, обусловленной вирусами Хантаан и Сеул/ Г.Г. Компанец, Р.А. Слонова, И.Г. Максема и др.// Эпидемиол. и инфекц. Болезни. 2000. - №1. - С. 58-60.

68. Специфический иммунитет у детей дошкольного возраста в условиях высокого риска инфицирования вирусом гепатита А / Н.В. Дорошенко, Э.И. Счастный, В.Н. Ягодовский и др.// Вопр. вирусол. 1990. - №1. - С.26-28.

69. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова // М.: Высш.шк., 1991. 288 с.

70. Тюрикова Ю.Л. К вопросу о вирусной безопасности плазмы для фракционирования/ Тюрикова Ю.Л., Клюева Е.А.// Материалы научно-практической конф.на рубеже XXI века. Н. Новгород, 1999. С.55-56.

71. Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиолог. препаратов. ФС-42-3874-99.

72. Функциональная активация антител при модификации N-оксисукцинимидным эфиром РО(П)-коропорфирина I / Я.И. Мельникова, З.И. Кравчук, В. А. Прейгерзон и др. // Биохимия-1997. т. 62 - № 8. - С. 1077-1081.

73. Хаитов P.M. Оценка иммунной системы человека: современное состояние вопроса, сложности и достижения/ P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, А.Н. Чередеев // Иммунология. 1998. - №6. - С.8-10.

74. Хисматуллина Н.А. ТУ 9388-083-00008064-98 к "Набору препаратов для лабораторной диагностики бешенства методом иммуноферментного анализа (ИФА)" / Н.А. Хисматуллина, Р.Х. Юсупов.

75. Шабапин В.Н. Вопросы донорства плазмы крови и клиническое применение иммунных препаратов / В.Н. Шабалин // Л. 1982. - С.37-39.

76. Шторх X. Вирусологическая безопасность клеточных и плазменных компонентов крови / X. Шторх // Ж-л Гем. и трансф. 1997-T.42- №1 - С.4-6.

77. Эффективность метода тепловой инактивации вирусов в производстве внутривенного иммуноглобулина/ Н.В. Зубкова, В.В. Анастасиев, В.Н. Мазепа, К.А. Орлова// Вестник службы крови России.-2002. №1. - С. 31-35.

78. Ability of 3 different meningoccal С conjugate vaccines to induce ^ immunologic memory after a single dose in UK toddlers / P. Richmond, R. Borrow,

79. D. Goldblatt et al. //J. Infect. Dis. 2001. - Vol. 183. - P. 160-163.

80. Anticytomegalovirus immunoglobulin G avidity in iidentification of pregnant women at risk of transmitting congenital CMV infection / T. Lasarotto, P. Spezzacatena, S. Varani et al.//Clin. Diag. Lab. Imm. 1999.-Vol. 10.-P. 127-129.

81. Antiviral activity of commercial immunoglobulin preparations / B. Litwinska, B. Bucholo, W. Sadowski, M. Kantoch //J. Med. Dosw. Microbiol.-1990.• Vol. 72, №2. - P. 207-210.

82. Amir J. Variability in the functional activity of vaccine-induced antibody to Haemophilus influezae type В / J. Amir, X. Liang, D.M. Granoff // Pediatr. Res.-1990 .- Vol. 27. P. 358-364.

83. Avidity determination: Utilization of a basic imunological mechanism allows improvement of the serodiagnosis of infection / T. Wolter, C. Gassmann, V. Vetter,G.Bauer//Clin.Lab.-1997.-Vol.3.-P. 125-135.

84. Affinity maturation of antibodies in vivo and in vitro. / M. Сага, H. Kim, W. Greg et al.// Acta crisstallogr. A. 1996. -52, Suppl. - P.213.

85. Avidity of anty -P. aeruginosa antibodies during chronic infection in patients with cystic fibrosis/ O. Ciofu, T.D. Petersen, P. Jensen, N. Hoiby // Thorax. -1999.-Vol. 54, №2.-P. 141-144.

86. Antibody avidity and immunoglobulin G isotope distribution following A immunization with a monovalent meningococcal В outer membrane vesicle vaccine /

87. C.L. Vermont, H.H. van Dijken, C.J.P. van Limpt et al.// Infection and Immunity. -2002.-Vol. 70, № 2. P.584-590.

88. A high-affinity human antibody that targets tumoral blood vessels / L. Tarli, E. Balza, F. Viti et al.// Blood. 1999. - Vol.94, № 1. - P. 192-198.

89. An investigation of the high-avidity antibody response to glycoprotein 120 of human immunodeficiency virus type 1/ J.M. Binley, H. Arshad H., T.R. Fouts, J.P. Moore//Aids Research and Human Retroviruses.-1997.-Vol.l3.-№ 12.- P. 1007-1015.

90. Bachmann M.F. The role antibody concentration and avidity in antiviral protection / M. F. Bachmann, U. Kalinke // Science. -1997. Vol. 276. P. 2024.

91. Berhringwerke A. G. Stellungnahme der Berhringwerke AG «Beriplex HS» 01.11.1994.

92. BurnoufT. Reducing the risk of infection from plasma products: specific preventative strategies/ T. Burnouf, M. Radosevich // Blood Reviews. 2000.-Vol.l4.-№2.-P.94-110.

93. Bottiger B. Maturation of rubella IgG avidity over time after acute rubella infection/ B. Bottiger, I. P. Jensen //Clinical and Diognostic Virology. 1997.-Vol.8, №2.-P. 105-111.

94. Bodeus M. Ability of three IgG-avidity assays to exclude recent cytomegalovirus infection /М. Bodeus, D. Beulne, P. Goubau // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. -2001. Vol. 20. - P. 248-252.

95. Bodeus M. Predictive value of maternal-IgG avidity for congenital human cytomegalovirus infection / M. Bodeus, P. Goubau // J. Clinic. Virology. -1999.-Vol. 12.-P. 3-8.

96. Burton D.R. Aspects of the molecular structure of IgG subclasses/ D. R. Burton, L. Gregory, Jeffleris // Monogr. Allergy. 1986. - Vol. 19, №7.- P.7-35.

97. Centers for Disease Control and Prevention (CDC)// J. Amer. Med. Assoc. 1994. - Vol. 172. - P. 424-425.

98. Comparison of two different methods for inactivation of viruses in serum / Preuss Т., Kamstrup S., Kyvsgaard N.C. et al.// Clin. Diagn. Lab. Immunol. -1997.-Vol.4.-№.5.-P.504-512.

99. Dorner F. At what stage should virus inactivation be carried out?/ F. Dorner, P.N. Barrett, J. Eibl // Dev. Biol. Stand. 1993. - Vol.81. - P. 137-143.

100. Drescher J. Influence of the amino acid defferences between the hemagglutinin HA1 domains of influenza virus H1N1 strains on their reaction with antibody/J. Drescher, R. Aron //J. Med. Virol. -1999. Vol.4. P. 397-404.

101. Design and application of diabodiies, triabodies and tetrabodies for cancer targeting /А. Todorovska, R. C. Roovers, O. Dolezal et al.// J. Immunological Methods.-2001. Vol.248. - P.47-66.

102. Do IgA, IgE, and IgG avidity tests have any value in the diagnosis of toxoplasma infection in pregnancy? / D. Ashburn, A. WL. Joss, Т. H. Pennington, D.O. Ho-Yen // Journal of Clinical Pathology. Vol.51, №4. - P. 312-315.

103. DeNoon D. J. Technique vastly enhances antibody affinity/ D. J. DeNoon, К. K. Key// Infectioous Disease Weekly. -01/02/96. P. 13-16.

104. Determination of anti Toxoplasma gondii immunoglobulin G avidity: Adaptation to the vidas system (bioMerieux)/ H. Pelloux, E. Brun, G. Vernet // Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. -1998. -Vol. 32, №2. P. 69-73.

105. Dengue virus type 1 DNA vaccine induces protective immune responses in rhesus macaques / K. Raviprakash, K.R. Porter, T.J. Kochel et al. // J. Gen. Virol.-2000. Vol.81, №7. p.1659-1667.

106. Dynamic study of anti-VIH antibodies avidity with cellular immune restoration under Haart / M. Riou, G. Renier, S. Mattman, // Annales De Biologie Clinique.-2000. Vol.58, № 6. - P.715-720.

107. Dynamics of serum immunoglobulin G avidity for Porphyromonas gingivalis in adult periodontitis / J.Takashi, A. Saito, T. Nagawa et al. // J. of Periodontology.-1998. Vol. 69, №3. - P.367-373.

108. Differential maturation of avidity of IgG antibodies to gp41, p24 and pl7 following infection with HIV-1 / H.I.J. Thomas, S. Wilson, C.M. OToole et al. // Clinical and Experimental Immunology. 1996.- Vol.103, №2. - P. 185-191.

109. Engval E. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunonoglobulin G / E. Engvall, P.Pelmann // Immunochemistry.-1971.-Vol.8, № 9. P.871.

110. Enhancement in the safety of immune globulins prepared from high-risk plasma/ F.Gao, A.M. Prince, D. Pascual, B. Horovitz // Vox Sang.-1993.-Vol.64.-№.4.- P.204-209.

111. FDA. Irradiation in the production, processing and handling of food. -1997.- Federal Register 62(232):64107-64121.

112. FDA approves alternative to fresh frozen plasma /FDA Talk Paper-1998.-May 6.

113. Foote J. Kinetic and affinity limits on antibodies produced during immune responses/ J. Foote, H.N. Elisen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1995. -Vol. 92. -P. 1254-1256.

114. Gassmann C. Avidity determination of IgG directed against tick-borne encephalitis virus improves detection of current infectious/ C. Gassmann, G. Bauer //J. of Medical Virology.-1997.-Vol.51, №3 P.242-251.

115. Getzoff E.D. The chemistry and mechanism of antibody binding to protein antigens/ E.D. Getzoff, J.A. Tainer, R.A. Lerner // Adv. Immunol. 1998 - Vol. 43, №1.- P. 1988.

116. Goldblatt D. Antibody avidity as a surrogate marker of successful priming by Haemophilus influenzae type В conjugate vaccines following infant immunization /D. Goldblatt, P. Vaz, E. Miller//J. Infect. Dis.-1998.-Vol. 177. -P.l 112-1115.

117. Granoff D.M. Laboratory correlates of protection Haemophilus influezae type В disease: importance of assessment of antibody avidity and immunologic memory / D.M. Granoff, A.H. Lucas // Ann. N/W. Acad. Sci. -1995.- Vol. 754. P. 278-288.

118. Grangeot-Keros L. Diagnosis and prognostic markers of HCMV infection/ L. Grangeot-Keros, D. Cointe // J. Clin. Virol. 2001. -Vol. 21. - P. 213-221.

119. Hammarstrom L. IgG subclass changes in response to vaccination / L. Hammarstrom, C.I. Smith // Monogr. Allergy. 1986.- Vol.19. - P.241-252.

120. Hammarstrom L. IgG subclasses in bacterial infections / L. Hammarstrom , C.I. Smith//Monogr. Allergy.- 1986. Vol.19. - P. 122-133.

121. Henderson C.W. Successful completion of antibody optimization announced / C.W. Henderson // Blood Weekly. 10.19.2000-10.26.2000. - P.13.

122. Herrne V. Immunoglobulin G avidity in the serodiagnosis of congenital rubella syndrome / V. Herrne, K. Hedman, P. Reedik // European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. -1997.-Vol. 16, №10.- P. 763-766.

123. High-avidity human IgG kappa monoclonal antibodies from a novel strain of minilocus transgenic mice/ D.M. Fishwild, S.L. O'Donnell, T. Bengechea et al. // Nature Biotechnology.-1996.-Vol. 14, №7.- P. 845-851.

124. House C. Inactivation of viral agents in bovine serum by gamma irradiation/ C. House, J.A. House, R.J. Yedloutschnig //Can. J. Microbiol.-1990.-Vol. 36.-№.10.-P.737-740.

125. Humoral immune responses to Porphyromonas gingivalis before and following therapy in rapidly progressive periodontitis patients/ H.A. Chen, B.D. Johnson, T.J. Sims // J. Periodontol.- 1991 .-Vol.62. P. 781 -791.

126. Hashido M. Differentiation of primary from nonprimary genital Herpes infections by a HSV- specific IgG avidity assay/ M. Hashido, S. Inouye, T. Kawana//J.Clin.Microbiol.- 1997.-Vol. 35, №7. P. 1766-1768.

127. High-affinity anti-DNA antibody parallels clinical course of immunoadsorption therapy for systemic lupus erythematosus / M. Funachi, S. Icoma, H. Enomoto et al.// Internal Medicine.-l996.-Vol.35, № 5. P. 367-372.

128. High-affinity induced by immunization with a synthetic peptide is associated with protection of cattle against foot-and-mouth disease / M.W. Steward, C.M. Stanley, R. Dimarchi et al. //Immunology.-1991.-Vol.72. P.99-103.

129. IgG subclass-associated affinity differences of specific antibodies in humans / M.A. Persson, S.E.Brown, M.W. Steward et al. // J. Immunol.-1988.-Vol.140. P.3875-3879.

130. Inactivation of human immunodeficiency virus by gamma radiation and its effect on plasma and coagulation factors / H. Hiemistra, M. Tersmette, A.H. Vos et al.// Transfusion.-1991 .-Vol.31 .-№ 1. P.32-39.

131. Inactivation of lipid-enveloped viruses in labile blood derivates byunsaturated fatty acids/ B. Horovitz, M.P. Piet, A.M. Prince et al.// Vox Yang.-1988.-Vol.54.-№.l. P. 14-20.

132. Improvement of virus safety of a S/D -treated factor VIII concentrate by additional dry heat treatment at 100 degrees С./ H. Dichtelmuller, D. Rudnick, B. Breuer et al. // Biologicals. 1996. - Vol.24.-№.2. - P. 125-130.

133. Issues in the development of medical products based on human plasma/ D. Josic, P. Schulz, L. Biesert, L. Hoffer et al. //J. of Chromatography.-1997.-Vol.694.1. P.253-269.

134. Inactivation and elimination of viruses during the fraction of an intravenous immunoglobulin preparation: Liquid heat treatment and polyethylene glycol frationaionation/ Y. Uemura, K. Uriyu, Y. Hirao et al. // Vox Sang.-1989.-Vol.56.-№ 3. P. 155-161.

135. Immunoglobulin Preparation: Safe from Virus Transmission?/ Y. Uemura, K.Yokoyama, M. Nishida, T. Suyama //Vox Sang.-1989.-VoI.57. № 1. - P. 1-3.

136. Ф 153. Inactivation of the Hutchinson strain of non-A, non-B hepatitis virus bycombined use of beta-propiolactone and ultraviolet irradiation/ A.M. Prince, W. Stephan, H. Dichtelmuller et al.//J. Med. Virol. -1985.-Vol. 16. -№.2. P.l 19-125.

137. Inactivation of lymphadenopathy-associated virus by heat, gamma rays, and ultraviolet light/B. Spire, D. Dormont, F. Barre-Sinoussi et al. // Lancet.-1985.-P.875-877.

138. Increased avidity of mutant IgM antibodies caused by the mu H chain / R. Ф Bazin, A. Darveau, A. Pelletier et al. // The Journal of Immunology. 1992. - Vol.149, №12.-P. 3889.

139. Increased binding and valence of recombinant antibody fragments lead to improved targeting of tumoral angiogenesis / F. Viti, L. Tarli, L. Giovannoni, L. Zardi et al. // Cancer Research. -1999.-Vol.59, №2. P. 347-352.

140. Initial serum antibody titer to Porphyromonas gingivalis influences development of antibody avidity and success of therapy for chronic periodontitis / J.

141. Mooney, E. Adonogianaki, M.P. Riggio et al. // Infection and Immunity.-1995.-Vol.63, №9.-P.3411-3416.

142. Jekel P. A. Dimerization of an antigenic peptide leads to strong interaction with its antibody / P.A. Jekel, F.G. Perton, J. J. Beintema // Biochimica et Biophysica Acta.-1996.-Vol. 1291.-P. 195-198.

143. Kamyshny A. Chemically modified human immunoglobulin G: hydrophobicity and surface activity at air/solution interface / A. Kamyshny, S. Magdassi, P. Relkin//J. of colloid and interface science. -1999.- Vol. 212. P. 74-80.

144. Kuijama T. Chronic glomtrunephritis induced by prolonged immunization in the rabbit / T. Kuijama // Lab. Invest. 1973. - Vol. 28. - P. 224.

145. Luxton R.W. Affinity distributions of antigen-specific IgG in patients with multiple sclerosis and in patients with viral encephalitis / R.W. Luxton, E.J. Thompson // J. of Immunological Methods.-1990. Vol. 131.- P.277-282.

146. Lelie P.N. Inactivation of 12 viruses by heating steps applied during manufacture of a hepatitis В VACCINE/ P.N. Lelie, H.W. Reesink, C.J. Lucas // J. Med. Virol.-1987.-Vol. 23.-№ 3. P.297-301.

147. Lawrence J.E. Affinity chromatography to remove viruses during preparation of plasma derivatives/ J.E. Lawrence // Dev. Biol. Stand.-1993 .-Vol.81.-P. 191-197.

148. Maternal IgG avidity and IgM detection by blot as diagnostic tools to identify pregnant women at risk of transmitting cytomegalovirus / T. Lazzarotto,

149. S. Varani, P. Spezzacatena et al.//Veral. Immunol.-2000.-Vol. 13, № 1. P. 137-141.

150. Macdonald R.A. The measurement of relative antibody affinity by ELISA using thiocyanate elution / R.A. Macdonald, C.S. Hoscing, C. L. Jones // J. Immunol. Methods.-1988.-Vol. 106. P. 191-194.

151. Magdassi S. Surface activity of proteins: chemical and physicochemical modification / S. Magdassi, A. Kamyshny. New York: 1996. - P.l.

152. Multicenter evalution of a rapid and convenient method for determination of cytomegalovirus immunoglobulin G avidity/ M. Baccard-Longere, F. Freymuth, D. Cointe et al. // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology.-2001.-Vol.8, № 2.-P.429-431.

153. Measurement of serum IgA and IgG activities to dietary antigens. A prospective study of the diagnostic usefulness in adult celiac disease / H. Scott, O. Fausa, J. Ek et al. // Scand. J. Gastroenterol.-1990.-Vol. 25. P.287-292.

154. New advances in the diagnosis of congenital cytomegalovirus infection / T. Lasarotto, S. Varani, L. Gabrielli et al.// Intervirology. -1999. -Vol. 42. P. 390397.

155. New methods for inactivation of lipid-enveloped and non-enveloped viruses/ S.I. Miekka, T. F. Busby, B. Reid et al. // Haemophlia.-1998.-Vol.4.-№ 4. -P. 402-408.

156. Nietert W.C. DNA-protein complexes produced by a carcinogen, beta-propiolactone/ W.C. Nietert, L.M. Kellicutt, H. Kubinski // Cancer.- 1974.-Vol.34.-№.4. P.859-864.

157. On the mutagenisity and immunogenicity of a beta-propiolactone-treated therapeutic IgG-preparation/ J.H. Pincus, K. Mortelmans, W. Tanaka et al. //Arzneimittelforschung.-1981. Vol.31. - № 1. - P. 1924-1932.

158. Olszewska W. Protection against measles virus-induced encephalitis by anti-mimotope antibodies: the role of antibody affinity / W. Olszewska, O.E. Obeid, M.W. Steward // Virology.-2000. Vol.272. - P.98-105.

159. Position effects of variable region carbohydrate on the affinity and in vivo behavior of an anti-(l-6) dexstran antibody/ M. J. Coloma, R.K. Trinh, A.R. Martines, S.L. Morrison // J. Immunol. 1999. - Vol. 162- №4. - P. 2162-2170.

160. Placental transfer favours avidity IgG antibodies/ M. A. Avanzini, P. Pignatty, G. Chirico // Acta Pediatrica. -1998. -87, №2. P. 180-185.

161. Pressure cycling technology: a novel approach to virus inactivation in plasma/ D.W. Bradley, R.A. Hess, F. Tao et al. // Transf.-2000.-VoI.40.-№.2. P. 193200.

162. Potential contribution of mild pepsin treatment at pH 4 to the viral safety of human immunoglobulin products/ K.G. Reid, B. Cuthbertson, A.D. Jones, R.V. Mcintosh // Vox Sang. -1988. Vol.55.- №.2. - P.75-80.

163. Prince A.M. Beta propiolactone/ultraviolet irradiation: a review of its effectieness for inactivation of viruses in blood derivates/ A.M. Prince, W. Stephan, B. Brotman // Rev. inf. Dis.-1983.-Vol.5. P. 92-107.

164. Pharmokinetics and antitumor activity of a bivalent disulfide-stabilized Fv immunotoxin with improved antigen binding to erbB2 / Т.К. Bera, J. Viner, M. Brinkmann, I. Pastan // Cancer Research.-1999.-Vol.59, №16 P.4018-4022.

165. Pharmeuropa decembre.-2000.-V.6.20.5.

166. Pat. 1033136 ЕПВ, МПК 7 A61K 39/395, A61L 2/04/, № 99926233.0; 21.06.99.

167. Pat. US 5811524. Neutralising high affinity human monoclonal antiebodies specific to RSV F- protein and methods for their manufacture and therapeutic use their. CO07K016/00, A61K039/395. Publication date 1998-03-22.

168. Pat. US 4703003. Monoclonal antibody with a high affinity for digoxin. C12P021/00. Publication date 1987-10-27.

169. Pat. US 5714350. Increasing antibody affinity by altering glycocosylation in the immunoglobulin variable region. A61K039/395. Publication date 1998-02-03.

170. Pat. US 6051225. Family of high affinity, modified antibodies for canger tretmant. A61K039/375. Publication date 2000-04-18.

171. Pat. WO 9113166. Antibody constructs with enhanced binding affinity. A61K39/395. Publication date 1991-09-05.

172. Paul M. Immunoglobulin G avidity in diagnosis of toxoplasmic lymphadenopathy and ocular toxoplasmosis / M. Paul //Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology.-1999.-Vol.6, №4. P.514-518.

173. Protective efficacy of IgM monoclonal antibodies in experimental group В streptococcal infection is a function of antibody avidity / S.H.Pincus, A.O. Shigeoka, A.A. Мое et al. // J. Immunol.-1988. -Vol. 140. P. 2779-2785.

174. Power B.E. Synthesis of high avidity antibody fragments (scFv multimers) for cancer imaging / B.E. Power, P.J. Hudson //J. of Immunol. Methods. -2000.-Vol.242.- №1-2.- P. 193-204.

175. Pullen G.P. Antibody avidity determination by ELISA using thiocionate elution / G.P. Pullen, M.G. Fitzerald, C.S. Hosking // J. Immunol. Methods. -1986. -Vol.86.-P. 83-87.

176. Rossi C.L. A simple, rapid enzyme-linked immunosorbent assay for evaluating immunoglobulin g antibody avidity in toxoplasmosis / C.L. Rossi // Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. -1998. -Vol. 30, №1.- P.25-30.

177. Role of antigenic charge and antibody avidity on the glomerular immune complex localization in serum sickness of mice / Koyama A., Inage H., Kobayashi M. et al. // Clin. Exp. Immunol.- 1986. -Vol. 64. P. 606.

178. Relationship of the quality and quantity of circulating anti-BSA antibodies to the severety of glomerunephritis in rats with chronic serum sickness / B. Noble, M.W. Stewart, A. Vladutiv, R.J. Brentjens // Clin. Exp. Immunol.- 1987-Vol. 67-P. 277.

179. Structural requirements of the major protective antibody to Haemophilus influenzae type Ы L. Hougs, L. Juul, A. Sveijgaard, T. Barington // J. Infect. Immun. 1999. - Vol. 67, №5 - P.2503-2517.

180. Serum bactericidal activity and isotype distribution of antibodies in toddlers and school children after vaccination with RIVM hexavalent Por A vesicle vaccine / E.D. Kleijn, L. van Eijndhoven, C.L.Vermont // Vaccine. 2001. -Vol. 20.-P.352-358.

181. Solvent/detergent-treated plasma: a virus-inactivated substitute for fresh frozen plasma/ B. Horovitz, R. Onomo, A.M. Prince et al. // Blood.-1992.-Vol.79.-№.3. P.826-831.

182. Streptabody, a high avidity molecule made by tetramerization of in vivo biotinylated, phage display-selected scFv fragments on streptavidin / S.M. Cloutier, S. Couty, A. Terskikh et. al. // Molecular Immunology.-2000.-Vol.37, №17. P. 10671077.

183. Standartization of an opsonophagocytic assay for the measurement of ^ functional antibody activity against Streptococcus pneumoniae using differentiated

184. HL-60 cells / Romero-Steiner S., Libutti D., Pais L.B. et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. -1997.-Vol.4. P. 415-422.

185. Schlesinger Y. Avidity and Bactericidal activity of antibody elicited by different Haemophilus influenzae type b conjugate vaccines / Y. Schlesinger, D.M. Granoff //JAMA.-1992.-Vol. 267. P. 1489-1494.

186. Schofield D.J. Determination of affinities of a panel of IgGs and Fabs for ® whole enveloped (influenza A) virions using surface plasmon resonance / D.J.

187. Schofield, N.J. Dimmock// J. of Virological Methods.-1996.-Vol.62, №1. P. 33-42.

188. Scott N. J. Hepatitis A antibody in blood donors in North East Thames region/N.J. Scott //Epid.Inf. 1989.- V. 103. - P. 377-382.

189. Sun Y. Avidity, potency, and cross-reactivity of monoclonal antibodies to Pneumococcal Capsular Polisaccharide serotype 6B / Y. Sun, Hwang Young-Il, M.H. Nanhm // Infect. And Immun. -2001. -Vol.69, № 1.- P. 336-344.

190. Selection and analisis of an optimized anti-VEGF antibody: Crystal structure of an affinity-matured Fab in complex with antigen/ Y. Chen, C. Wiesmann,

191. Щ G. Fuh, H.W. Christinger et al.// J. of Molecular Biology.-1999.-Vol.293, №5. P. 865-881.

192. Transport of cationized anti-tetanus Fab ' 2 fragments across an in vitro blood-brain barrier model: Involvement of the transcytosis pathway/ J. Girod, L. Fenart, A. Regina et al. //J. of Neurochemistry.-1999.-V.5 P.2002-2008.

193. Tumor cell killing in vitro affinity-matured recombinant human monoclonal antibodies / G. Huls, D. Gestel, J. Linden et al. // Cancer Immunology Immunotherapy.-2001.-50 (3). P. 163-171.

194. The affinity of IgG antibodies to gag p24 and pi7 in HIV-1-infected ^ patients correlates with disease progression / D. Chargeleque, C.M. Stanley, C.M.

195. O'Toole // Clin. Exp. Immunol.-1995-Vol. 99. P. 175-181.

196. Treatment of human immunodeficiency virus-infected lymfocytes with cationized human immunoglobulins / W.M. Pardridge, J. Buciak, J. Yang et al. // J. Infect. Dis.-1994.- Vol.170, №3. P.563-569.

197. Toxoplasmosis-IgG avidity: What is its importance in pregnancy / B.J. Suter, S. Blatter, M. Bittar, E.H. Viollier // Schweizerische Medizinische• Wochenschrift. -1999.-Vol.129, №49.- P. 1938-1941.

198. Togashi T. Analisis of mumps vaccine failure by of avidity testing for mumps virus-specific immunoglobulin G / T. Togashi // Clinical and Diagnosticlaboratory Immunology. -1998.-Vol.5, № 6. P.799-803.

199. The role of monoclonal antibpdy affinity in tumor immunotherapy evaluated in in vivo models for minimal residual disease / M.P. Velders, C.M. van Rhijn, I.M.H.A. Cornelissen et al. // J. of Immunotherapy.-1996.-Vol. 19, №4. -P.245-256.

200. The impact of antigen density and antibody affinity on antibody-dependent cellular cytotoxicity: relevance for immunotherapy of carcinomas / M.P.

201. Щ Velders, C.M. van Rhijn, E. Oscam et al. // British Journal of Cancer. -1998.-Vol.78, №4. P.478-483.

202. Thomas F.C. Inactivation by gamma irradiation of animal viruses in simulated laboratory effluent/ F.C. Thomas, T. Ouwerkerk, P. McKercher // Appl. Environ. Microbiol.- 1982,- Vol.43.-№.5. P.1051-1056.

203. Usinger W.R. Avidity as a determinant of the protective efficacy of human antibodies to pneumococcal capsular polysaccharides / W.R. Usinger, A.H.

204. Lucas // Infect. Immun. -1999.-Vol. 67, № 5. P.2366-2370.

205. Use of thiocyanate elution to estimate relative avidity of allergen specific IgE antibodies/ Poirier M.P., S. Ahlstedt, J. Ford, Dolen W.K.// Allergy and Astmha Proceedings.-1997.-Vol. 18.-№ 6. P.359-362.

206. Van Noorden S. Immunocytochemistry today: Techniques and practice / S.Van Noorden, J.M. Polak // Immunocytochemistry. Practical application in pathology and biology. Bristol etc.: Wright. - 1983. - P. 11-42.

207. Viral safety of blood derivatives by immune neutralization/ H. Rollag, B.G. Solheim, Svennevig J.L.//Vox Sang.-1998.-Vol.74.-№l.- P. 213-220.

208. Virus safety of human immunoglobulins: efficient inactivation of hepatits С and other human pathogenic viruses by the manufacturing procedure/ T. Nowak, J.P. Gregersen, U. Klockmann et al. //J. Med. Virol.-1992.-Vol.36.-N. 3.-P.209-216.

209. Viral safety of solvent-detergent treated blood products/ B. Horovitz, A.M. Prince, M.S. Horowitz, C. Watklevicz // Dev. Biol. Stand.-1993.-Vol.81.-P.147-161.

210. Weissbrich B. The use of semi-automated EBV IgG avidity determination for the diagnosis of infectious mononucleosis / B. Weissbrich // J. of Medical Virology. -1998.-Vol. 54, №2. P. 145-153.

211. Yang W.P. CDR walking mutagenesis for the affinity maturation of a potent human anti-HIV-1 antibody into picomolar range / W.P. Yang, C. F. Barbas. // J. of Molecular Biology. 1995. -Vol. 254, №3. - P. 392-403.