Усовершенствование технологии изготовления и методов контроля инактивированной вакцины против классической чумы свиней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Федоров, Дмитрий Геннадьевич

• Федоров, Дмитрий Геннадьевич
• кандидат ветеринарных наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Федоров, Дмитрий Геннадьевич

Оглавление.

Список сокращений.

1 .Введение.

2,Обзор литературы.

2.1. Классическая чума свиней и средства профилактики.

2.2.Технология выращивания вирусов.

2.3.Инактиванты и их характеристики.

2.4.Адъюванты и их свойства.

2.5.3аключение по обзору литерат^р^.

3.Собственные исследования.

ЗЛ.Материалы и методы.

3.1.1.Материал ы.

3.1.1.1.Вирус ы.

3.1.1.2.Культуры клеток.

3.1.1.3.Среды и растворы.

3.1.1.4.Реактив ы.

3.1.1.5.Животны е.

3.1.1.6.0борудование.

3.1.2.Метод ы.

3.1.2.1.Выращивание культур клеток.

3.1.2.2,Обработка сыворотки крупного рогатого скота ПЭГ.

3.1.2.3.Выращивание вируса КЧС в культуре клеток.

3.1.2.4.0пределение инфекционной активности вируса.

3.1.2.5.Концентрирование вируса.

3.1.2.6.Инактивация вируса КЧС.

3.1.2.7.0пределение полноты инактивации вируса.

3.1.2.8.Выделение РНК.

3.1.2.9.Синтез кДНК.

3.1.2.Ю.Постановка ПЦР.

3.1.2.11.Рестрикционный анализ.

3.1.2.12.Приготовление инактивированной вакцины.

3.1.2.13.0ценка иммуногенности вакцины.

3.1.2.14.Статистическая обработка результатов исследований.

3.2.Результаты собственных исследований.

3.2.1.Усовершенствование технологии получения вирусного сырья.

3.2.1.1.Выбор клеточной системы и штамма вируса КЧС.

3.2.1.2.Условия выращивания вируса.

3.2.1.2.1 .Время культивирования.

3.2.1.2.2.Сыворотка крови различных видов животных.

3.2.1.2.3.Метод культивирования.

3.2.1.3.Генетическая стабильность штамма вируса.

3.2.2.Усовершенствование технологии изготовления инактивированной вакцины.

3.2.2.1.Концентрирование вируса.

3.2.2.2.Условия хранения вирусного сырья.

3.2.2.3.Кинетика инактивации вируса.

3.2.2.4.Выбор адъюванта.

3.2.2.5. Условия хранения вакцины.

3.2.3.Усовершенствование методов иммунобиологического контроля вакцины.82.

3.2.3.Юценка полноты инактивации вируса.

3.2.3.1.1 .Биологическим методом.82.

3.2.3.1 ¿.Методом ПЦР.83.

3.2.3.2. Оценка иммуногенности вакцины.89.

3.2.3.2.1.Изучение иммуногенности вакцины на свиньях.

3.2.3.2.2.Оценка иммуногенности вакцины на кроликах.

3.2.4.Разработка условий применения вакцины.

3.2.4.1.Доза и кратность применения.

3.2.4.2.Длительность иммунитета.

3.2.4.3.Влияние пассивного иммунитета на поствакцинальный.

3.2.4.4.Иммунологическая реактивность животных на введение антигена.

3.2.5,Оценка вакцины в производственных условиях.

4. Обсуждение результатов исследований.

Выводы.

Практические предложения.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование технологии изготовления и методов контроля инактивированной вакцины против классической чумы свиней»

1.1. Актуальность выбранной темы

Классическая чума свиней (КЧС) - вирусная болезнь, характеризующаяся быстрым распространением, высокой контагиозностью и смертностью среди заболевших свиней. Она наносит большой экономический ущерб, особенно в условиях промышленного свиноводства. Борьба с КЧС базируется на быстрой и точной диагностике, специфической профилактике и ветеринар-но-санитарных мероприятиях.

До настоящего времени в России и странах СНГ для специфической профилактики КЧС широко применяются три вирусвакцины из штамма "К": "АСВ", "ВГНКИ", "ЛК-ВНИИВВиМ" (Н. К. Мищенко, Н. В. Лихачев 1968 г.; В. А. Сергеев и др. 1969г.; И. Ю. Хухоров, В. В. Куриннов, И. Ф. Вишняков и др. 1992 г.). Массированное применение этих вакцин в течение 70-х начале 80-х годов, с одной стороны, позволило стабилизировать эпизоотическую ситуацию по КЧС, значительно снизить заболеваемость и потери от КЧС, с другой стороны, делает невозможным серологический мониторинг, выделение и идентификацию изолятов вируса (61).

Использование вирусвакцин небезопасно с точки зрения возможной реверсии (непредсказуемой селекции штамма в сторону усиления вирулентных свойств), контаминации материала другими биоагентами в процессе приготовления вирусного сырья, длительности вирусоносительства у вакцинированных животных и тератогенного действия, сопровождающегося высокой перинатальной смертностью, что значительно осложняет применение вирус-вакцин в репродуктивных хозяйствах для иммунизации супоросных свиноматок.

Инактивированные тканевые препараты против КЧС, используемые в прошлом, не нашли широкого применения ввиду нетехнологичности и экологической опасности производственного процесса, несовершенства методов контроля вакцин, слабого иммунологического эффекта и дороговизны получаемого препарата. Тем не менее, необходимость надежной и безопасной инактивированной вакцины против КЧС очевидна.

Во ВНИИВВиМ разработана культуральная инактивированная вакцина против КЧС, технология изготовления которой основана на использовании вирулентного вирусного штамма "Ши-Мынь" и перевиваемой культуры клеток линии РК-15 (авторы Жестерев В.И., Балышева В.И., Устаров Р.Д., Чур-банова Г.Н. 1995 г.).

Последние два обстоятельства (использование в производстве вирулентного штамма, невысокая технологичность культуры клеток) создают определенную эпизоотическую угрозу при обработке вирусного сырья и значительно усложняют (технологически и экономически) производство биопрепарата при его масштабировании.

1.2. Цель и задачи исследований

В связи с вышеизложенным целью данной работы явилось усовершенствование технологии изготовления и методов контроля инактивированной вакцины против КЧС и тактики ее применения.

Исходя из вышеперечисленного были поставлены следующие задачи:

1. Оценить существующие средства и методы процесса изготовления инактивированного препарата и выбрать технологически перспективную схему производства.

2. Усовершенствовать технологию изготовления инактивированной вакцины против КЧС для промышленного производства.

3. Усовершенствовать методы технологического контроля инактивированной вакцины против КЧС.

4. Оценить иммунобиологическую эффективность инактивированной вакцины против КЧС и разработать схему ее применения

5. Разработать научно-техническую документацию на инактивирован-ный препарат против КЧС.

1.3. Научная новизна результатов

Научная новизна работы, заключается в том, что:

•В результате проведенных исследований экспериментально обоснована и практически апробирована технология изготовления эффективной инакти-вированной вакцины против классической чумы свиней из вакцинного штамма без предварительного концентрирования вируса.

•Изучена генетическая стабильность вакцинного штамма "ЛК-К" вируса КЧС, используемого для изготовления инактивированной вакцины, на разных уровнях пассажей;

•Впервые показано, что сернокислая медь в качестве инактиванта способствует разрушению вирионной РНК до низкомолекулярных фрагментов нуклеотидов;

•Впервые разработан и предложен способ оценки полноты инактивации вируса КЧС сернокислой медью, заключающийся в определении целостности вирионной РНК амплификацией различных участков генома вируса КЧС;

•Разработана технология изготовления ВКПВ КЧС и изучены его иммунобиологические свойства в процессе длительного хранения и в составе инактивированной вакцины против КЧС;

•Впервые проведены исследования иммунореактивности трансгенных по гену соматотропного гормона свиней при вакцинации инактивированной вакциной против классической чумы свиней.

1.4. Практическая значимость результатов

•Разработана безвредная, экологически безопасная и высокоэффективная инактивированная вакцина против КЧС из вакцинного штамма "ЛК-К" вируса КЧС, позволяющая рекомендовать ее для применения в племенных и репродуктивных свиноводческих хозяйствах;

•Разработана к практическому применению НТД на инактивированную вакцину, утвержденная Департаментом ветеринарии МСХиП 28 декабря 1998г.;

•Разработана технология изготовления ВКПВ КЧС для длительного хранения и экспресс изготовления из него инактивированной вакцины;

•Экспериментально разработан и предложен экспресс-метод оценки полноты инактивации вируса с использованием метода ПЦР, позволяющий в 810 раз снизить время контроля остаточной инфекционности готового препарата;

•Изучены иммунобиологические свойства инактивированной вакцины против КЧС и предложена схема ее применения.

1.5. Апробация работы и публикация результатов исследований

Результаты исследований доложены на заседании ученого совета ВНИИВВиМ в апреле 1998г., научной конференции ВНИИВВиМ г. Покров, декабрь 1998г.

По результатам исследований опубликовано 11 печатных работ.

1.6.0сновиые положения диссертационной работы, выносимые на защиту

1. Экспериментальное обоснование перспективности использования вакцинного штамма для производства инактивированной вакцины против КЧС.

2.Технологические процессы изготовления инактивированной вакцины против КЧС и методы контроля биопрепарата.

3. Обоснование перспективности использования метода ПЦР для оценки полноты инактивации вируса КЧС.

4.Технология получения ВКПВ КЧС для длительного хранения и перспективы его использования в производстве инактивированной вакцины.

5.Схема применения инактивированной вакцины против КЧС и ее эпизоотологическая эффективность.

Работа выполнена в лаборатории "Биологии и культивирования вирусов", в выполнении отдельных фрагментов работы принимали участие сотрудники лабораторий "Биофизики" и "Гибридомной биотехнологии", за что автор выражает им свою благодарность: Балышевой В.И., Горшковой Т.Ф., Дмитриенко В.В., Закутскому Н.И., Каримовой И.Г., Мищанину В.А., Наум-киной М. А., Новикову Б.В., Рудобельскому Э.В., Селянинову Ю.О., Цыба-нову С.Ж., Чурбановой Г.Н.

Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Федоров, Дмитрий Геннадьевич

Выводы

1 .Усовершенствована технология изготовления инактивированной ГОА вакцины против КЧС, включающая в себя использование высокоактивного (6,0-6,5 1д ККИД50/см3) аттенуированного штамма "ЛК-К" вируса КЧС, перевиваемых культур клеток ПСГК-60 и ПСГК-С85, сернокио лой меди в качестве инактиванта и адъюванта - гидрата окиси алюминия.

2.Усовершенствована технология получения вируса КЧС штамма "ЛК-К", которая позволяет получать высокоактивное (6,0-6,5 1д ККИД50/см3) вирусное сырье с сохранением его генетических и иммуно-генных свойств на протяжении не менее 30 пассажей.

3.Предложена технология концентрирования вируса КЧС в 250-1 ООО раз, позволяющая сохранять его исходные иммунобиологические свойства в течение более 30 месяцев при температуре минус 40°С и использовать длительно хранившиеся концентраты вируссодержащего сырья для экспресоизготовления инактивированного препарата против КЧС.

А.Разработан и предложен для использования зкспресометод технологического контроля полноты инактивации вируса КЧС сернокио лой медью с использованием злектрофоретического анализа продуктов ПЦР. Сернокислая медь в конечной концентрации 5 тМ при температуре 37°С в течение 12 часов разрушает РНК вируса штамма "ЛК-К" КЧС до низкомолекулярных фрагментов не обладающих инфек-ционностью. Отсутствие продуктов ПЦР по сравнению с контролями позволяет судить о разрушении нуклеиновой кислоты в инактивиро-ванных ; . препаратах об отсутствии живого вируса и его полной инактивации в биоматериале. Это позволяет с помощью указанного метода в течение 2 суток определить полноту инактивации вакцины против КЧС и может служить тест-системой качества вакцинных препаратов по этому показателю.

5.Усовершенствован метод контроля иммуногенности инактивированной вакцины против КЧС, позволяющий сократить количество необходимых животных и время проведения иммунобиологического контроля.

6.Разработаны условия применения вакцины, включающие в себя двукратное внутримышечное введение препарата животным, с 1,5 месячного возраста в дозе 2,0 см3 с интервалом в 1А дней, с последующей однократной ревакцинацией через 3 месяца что обеспечивает надежную защиту животных в течение 12 месяцев (срок наблюдения) после вакцинации.

7.При проведении производственных испытаний 2-х опытно-промыш-ленных партий (1,5 и 3,0 тыс. доз, соответственно), изготовленных по предлагаемой технологии во ВНИИВВиМ, в хозяйствах Владимирской, Самарской и Волгоградской областей на 900 свиньях разных возрастов, вакцина зарекомендовала себя как безвредный и вы-сокоиммуногенный препарат, рекомендованный для применения в репродуктивных хозяйствах в угрожаемой и благополучных зонах по КЧС.

Практические предложения

Усовершенствована технология изготовления безвредной, экологически безопасной и высокоэффективной инактивированной вакцины против КЧС из аттенуированного штамма "ЛК-К" вируса КЧС, инактивированного сернокислой медью и сорбированного на ГО А, для применения в племенных и репродуктивных свиноводческих хозяйствах.

Разработана к практическому применению НТД (ТУ № 9384-00900495549-98, Наставление по применению) на инактивированную вакцину, утвержденная Департаментом ветеринарии МСХиП 28 декабря 1998 г.

Разработана технология изготовления инактивированной вакцины из ВКПВ КЧС после его длительного хранения.

Экспериментально разработан и предложен экспресс-метод оценки полноты инактивации вируса с использованием метода ПЦР, позволяющий в 8-10 раз снизить время контроля авирулентности антигена.

Экспериментально обоснована и предложена схема применения инактивированной вакцины против КЧС.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Федоров, Дмитрий Геннадьевич, 1999 год

1. Автоматизированная система управления технологическим процессом./ Рубан. Е.А., Абрамов А.Б., Назаркин Н.И. и др.// СБ. Науч. основы технол. произв. ветер, биол. препаратов: Тезисы докл. ГУВсесоюзн. конф. ВНИИПиБП, Москва, 23-25 апреля 1991, с.209.

2. Айрапетян В.Г., Хачатрян А.Б., Бояджан Г.К. Выращивание вируса чумы свиней в культуре ткани и свойства культурального вируса.// Тр. Армянского НИИ животноводства и ветеринарии, т.VI, Ереван, 1962, с. 38-41

3. Активность фосфорорганических соединений в отношении вируса болезни Ауески / Петрачева Т.К., Лагуткин H.A., Зубаиров М.М. и др.// Вопр. вет. вирусол., микробиол. и эпизоотол. : Тез. докл. науч. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1983, с. 141-143

4. Алексеев В.Ф., Лихачев Н.В., Чума свиней //Сельхозгиз 1937

5. Амфитеатров Ф.З., Гизетулина Н.К., Васюкин В.М. Инактивирование вируса ящура метилгликсаном // Ветеринария, 1963, №5, с. 64

6. Анджапаридзе О.Г., Богомолова H.H. Особенности взаимодействия вирусов и клеток в хронически инфицированных культурах // Вопр. вирусологии, 1973, N6, с. 643-649

7. Анджапаридзе О.Г., Богомолова H.H., Борискин Ю.С. Персистенция вирусов. М. : Медицина, 1984, 256 с.

8. Антигенная активность инактивированного препарата вируса болезни Тешена на свиньях в зависимости от адъюванта./ Дудников Л.А., Сергеев О.В., Алипер Т.И. и др.//"Вирусные болезни с/х животных": Тез. науч. практ. Конф., Владимир, 1995, с. 152

9. Балышева В.И. Разработка вирусвакцины против классической чумы свиней из штамма "ЛК-К" и результаты производственных испытаний // Докл. Росс, академии с/х наук , 1998, 4, с. 40-42

10. Борисов Г.Н. Формолвакцина против чумы свиней // Тр. Бурят.-Монг. Зооветинститута, 1939, вып. 1, с. 37-40

11. Бочаров А.Ф., Бочаров Е.Ф. Персистенция вирусов., Новосибирск: Наука, 1979, 150с.

12. Воробьев A.A. Механизм действия адъювантов. // Успехи современной биологии. 1969, т.68, вып 1, с. 450

13. Воробьев A.A., Васильев H.H. Адъюванты, "Медицина" Москва, 1969, 205с.

14. Гомологические, токсические и адъювантные свойства отечественного адъюванта аллохрозадина./ Кропотов В.Н.,Дудников А.И., Коропов Г.В.// Мат. семин. спец. стран СЭВ, Владимир 1980, с 35-36

15. Грачев В.П. Современные аспекты крупномасштабного культивирования клеточных субстратов и вирусов.//Тез. докл. в сб. Культивирование клеток животных и человека, Пущино, 1985, с.61-64.

16. Доел Т.Р. Биотехнология клеток животных М. 1989, 520 с.

17. Дудников А.И Перспективы использования адъювантов в противо-ящурных вакцинах.// Мат. семин. спец. стран СЭВ, Владимир 1990, с.3-6

18. Дудников А.И. Совершенствование технологии производства проти-воящурных вакцин и инактивированного вируса.// Акт. проб. вет. вирусологии, Владимир, 1976, ч.2, с. 21-23

19. Дудников А.И., Смирнов В.И„ Денисова С.А. Испытание противовирусных вакцин для иммунизации свиней. // Акт. вопросы вирусологии, Владимир, 1977, с. 70-73

20. ЖестеревВ.И. Исследование некоторых особенностей выращивания вирусов в культурах клеток // Дис.канд.биол.наук., Покров, 1970, 150с.

21. Жестерев В.И. Разработка технологии изготовления инактивирован-ных противовирусных вакцин и тактики их применения в ветеринарии // Автореферат дис.доктора ветер, наук., Покров, 1997, 49с.

22. Закутский Н.И. Разработка и совершенствование технологии изготовления инактивированной вакцины против инфекционного ринотрахеи-та крупного рогатого скота. // Дис.доктора ветер.наук., Покров, 1998, 260с.

23. Игудин Л.И., Ланская Н.И., Орлов С.Д. Применение отечественного полиэтиленгликоля для очистки сыворотки крови КРС, используемой при культивировании культур клеток // Лабораторное дело, 1983, N10, с. 55-57

24. Квасников А.К. Адаптация вируса чумы свиней к организму молодых кроликов и испытание иммуногенных свойств адаптированного вируса.// Автореф. дисс. канд., М., 1956, 25 с.

25. Классическая чума свиней/ Вишняков И.Ф., Мищенко Н.К., Куриннов В.В.//Ветеринария, 1998, 11, с. 16 22

26. Классическая чума свиней и ее искоренение. Обзор опыта США.// МСХ США, сентябрь 1981. (Перевод с английского) 10с.

27. Коломыцев A.A., Вишняков И.Ф., Куриннов В.В. 38 Международный семинар по проблемам борьбы с классической чумой свиней.// Вестник РАСХН, 1998, 3, с. 21-23

28. Коротич A.C. Вакцина против чумы свиней // Тр. ВАСХНИЛ. Проблема борьбы с чумой свиней.М., Сельхозгиз, 1939., с. 18-49.

29. Кулеско И.И. Метод вакцинации свиней против чумы, основанный на применении двух вакцин различной степени ослабления // Научн. Тр.1. УИЭВ, 1944, т.2, с.10

30. Культивирование клеток и тканей животных./ Дьяконов Л.П., Глухов В.Ф и др.// Учебно-методическое пособие, 4.1,2, Ставрополь, 1986 г., 1988г., 200 с.

31. Культура животных клеток. Методы./ Конки Д., Эрба Э., Гриффите Б. и др. // М. Мир, 1989,333с.35'. Лакин Г.Ф. Биометрия // М., Высшая школа , 1970.- С.295.

32. Леннет Э., Шмидт Н. Лабораторная диагностика вирусных и риккет-сиозных заболеваний. М. Медицина, 1974, 775 с.

33. Лихачев Н.В. Современные методы иммунизации свиней против чумы // ТР. ГНКИ, 1962, 10, с.30-40

34. Лурия С., Дарнелл Дж. Общая вирусология М., 1970, 570с.

35. Малярец П.В., Гусева Е.В., Ануфриева Т.А. Классическая чума свиней // ВНИИЗЖ ГУВ МСХ РФ. Владимир. 1995, 58с.

36. Мамков Н.С. Перспективы использования синтетических и углеводородных масел для производства универсальных вакцин. // Мат. семин. спец. стран СЭВ, Владимир 1990, с25-26

37. Материалы зарубежных публикаций по перспективным направлениям биотехнологических исследований.// Обзор №11-(Н-96), Научно-исследовательский институт Мед статистики Минздравмедпрома РФ., Москва, 1995.

38. Методы лабораторных исследований по бешенству // ВОЗ, Женева, 1975, с.192-349

39. Микроинъекция чужеродных генов, ответственных за устойчивость организма к инфекционным заболеваниям./ Эрнст JI.K., Прокофьев М.И., Дьяконов Л.П. и др.// Вестник РАСХН, 1995, 1, с.56-58

40. Михайлов В.В., Хамитов P.A., Кравцов Б.В. Иммобилизированные препараты в вирусологии и вакцинологии.// Вопросы вирусологии, №5, 1995, с. 194-197

41. Михайлов С.К. Использование культурального вируса чумы свиней для изготовления вакцины и гипериммунной сыворотки. ¡.Адаптация различных штаммов вируса. // Вопросы вет. вирусол., 1964, 1, с.233

42. Михайлов С.К., Сергеев В.А., Окунева В.В. Использование культурального вируса чумы свиней для изготовления вакцины и гипериммунной сыворотки. II. Иммуногенные свойства культурального вируса.// Вопросы вет. вирусол., 1964, 1, с.247

43. Михайлов С.К., Сорвачев Е.В., Жестерев В.И.Сергеев В.А. Иммуногенные свойства аттенуированных штаммов вируса чумы свиней, выращенных в культуре ткани. // Актуальн. вопр. вет. вирусол., 1965, 2, с.33

44. Мищенко Н.К. Выращивание лапинизированного вируса чумы свиней в культурах тканей. // Материалы науч.-произв. конф. (тезисы докладов) ГИКИ., М. 1965 , т.2, с.33

45. Мищенко Н.К. Разработка культуральной вирусвакцины для специфической профилактики классической чумы свиней // Автореф.дисс. докт. Москва, 1981, 33с.

46. Новохатский A.C. Клеточные культуры в вирусологии // Общая вирусология. Руководство, М. 1982г., Т.1, с.463-493

47. О разработке и испытаниях инактивированной вакцины против КЧС/ Соловьев В.В., А.Я. Самуйленко, Н.К. Мищенко и др.// Науч. осн. технол. пром. изготовл. вет.био. препаратов, М.,1991, с. 41.

48. Осидзе Д.Ф. Ветеринарные препараты// М. Колос., 1981, с.69

49. Осидзе Д.Ф. Получение культур клеток из тканей животных и их использование в вирусологии , М.Колос, 1975г., 320 с.

50. Погоняйло Г.Ф. Испытание лапинизированной живой вакцины против чумы свиней. // Ветеринария, 1959, 2, с. 51-55

51. Попов В.И. Опыт применения лапинизированной вирусвакцины чумы свиней (Ровак). // Ветеринария, 1959, 2, с.60.

52. Попов В.И. Разработка и усовершенствование средств и способов специфической профилактики КЧС // Дисс. док. вет. наук. Покров. -1981.-424 С.

53. Притулин П.И. Чума // Болезни свиней, М. "Колос", 1970, с. 29-4259'. Разработка инактивированной вакцины против классической чумы свиней/ Жестерев В.И., Балышева В.И., Чурбанова Г.Н. и др.// Доклады РАСХН, 1996, 4, с. 46-47

54. Савельев В.Ю., Мамков Н.С., Дудников А.И., Цветков О.Н. Основные параметры отечественных маслянных адъювантов// Мат. семин. спец. стран СЭВ, Владимир 1990, с.9-10

55. Сергеев В.А Вирусные вакцины К : Урожай, 1993, 370 с.

56. Сергеев В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных., М. Колос, 1976,304 с.

57. Сергеев В.А., Собко Ю.А. Культуры клеток в ветеринарии и биотехнологии, Киев Урожай, 1990, 152с.

58. Сергеева Т.Я., Попов В.И., Симонян Г.А. О специфической профилактике чумы свиней // Ветеринария.- 1958.- № 10.- С. 38-43.

59. Симонова Э.Г., Чермашенцев В.В., Мищанин В.А. Электронно-микроскопическое изучение морфологии вируса КЧС в культуре клеток и органах свиней // Вопр. вет. вирусол., микробиол., эпизоотол. : Мат. науч. конф. ВНИИВВиМ. Покров,часть1, 1992. С. 132-133.

60. Соломкин П.С. Чума свиней // Болезни свиней М., Сельхозгиз, 1958, с.159-154

61. Список использованной литературы 128

62. Соломкин П.С. Чума свиней М., Сельхозгиз, 1950, 105с.

63. Соломкин П.С. Чума свиней М., Сельхозгиз, 1951, 115с.

64. Соломкин П.С., Душук Р.В., Конопаткин A.A. Итоги лабораторного испытания сухой кроличьей вирусвакцины против чумы свиней из штаммов "К", АСВ и отечественного ("ВИЭВ").// Пробл. Иммунитета с-х. животных, 1966, с.335.

65. Сорокин И.В. Мероприятия по ликвидации чумы свиней. // Труды ГНКИ, 1962, т. И, с. 214-221.

66. Сорокин И.В. Мероприятия по ликвидации чумы свиней. //"Тр. ГНКИ", 1962, т. И, с. 214-221

67. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных, М. Агропромиздат, 1991, 528 с.

68. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных Москва, ВНИТИБП, 1998, 940 с.

69. Требования к перевиваемым линиям клеток, используемых для производства биологических препаратов // Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов : Серия технических докладов ВОЗ., 1988,т745, с.85-89

70. Тырков A.C. Опыт вакцинации свиней лапинизированной вирусвак-циной// Ветеринария, 1959, т.2, с.58-59

71. Улупов H.A. Изучение противоящурных вакцин из лапинизированно-го вируса, инактивированного бета-протиоплакпоном, глутаральдеги-дом, глицидальдегидом и формальдегидом // Сб. Ящур. Владимир, 1974, т.2, с.46-47

72. Улупов H.A., Михалишин В.В., Дудников А.Н., Щипилов В.И.,Лезова Т.Н. Эффективность противоящурной вакцины, содержащей двуокись кремния в качестве адсорбента адъюванта // Семин, спец. стран-членов СЭВ, Владимир, 1990, с. 11-12

73. Улучшение качества сыворотки крови животных для культивирования клеток. /Анисимова Л.И., Костина Г.А., Фурзикова Н.В. и др. // Тезисы докладов Всесоюзная конференция Кольцово, 14-17 октября 1991 Новосибирск, 1991, с.30

74. Устаров Р.Д. Разработка инактивированной вакцины против классической чумы свиней.// Диссертация канд. биолог, наук, Покров, 1993, 100 с.

75. Учитель И .Я. Механизм действия адъювантов.// "Адъюванты в вак-цинно-сывороточном деле" Тез. докл., Москва, 1975, с. 123-125

76. Хитров B.C., Алехин P.M. Противоящурная ГОА-формолвакцина с сапонином из лапинизированного вируса// Справочник по вет. биол. препаратам, Москва, Колос, 1973, с. 34-47

77. Чермашенцев В.И., Рудобельский Э.В., Сафонов Г.А. Разработка лабораторной технологии изготовления инактивированной вакцины против КЧС.// Науч. осн. технол. пром. взготовл. вет.био. препаратов, М.,1991, с.31

78. Чермашенцева H.A. Деконтаминация культуры клеток ГТПК-666 от персистирующего вируса классической чумы свиней и стабилизация свойств полученных клонов.//Диссертация канд. биолог, наук,Покров, 1995,250с.

79. Чу С., Мериган Т. Противовирусная химиотерапия // Вирусология : Т.2, М.: Мир, 1989, с. 89-144

80. Эрнст JI.K., Гольдман И.Л., Кадулин С.Г. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные сельскохозяйственные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца.// Биотехнология, 1993, 5, с. 2-15

81. A new marker vaccine against classical swine fever./ Moorman K., Hulst M., Westra D. et. al. // Annual report of the research institute for veterinary science and animal health (CDI-DLO), Netherlands, Lelystad, 1993, c.19-22

82. Anderson E. C., Masters R.C. and Mowat G.N. Immune responses of pigs to inaktivated foot-and-mouth diseases vaccines. Response to emulgion vaccines. //Rew.Vet. Sci., 1971, v. 12. p. 342-350

83. Anderson E. C., Masters R.C. and Mowat G.N. Of pigs to inaktivated foot-and-mouth diseases vaccines responses to DEAEA-dextrant and saponin adjuvanted vaccines // Rew.Vet. Sci., 1971, v. 12. p. 351-357

84. A second envelope glycoprotein mediates neutralization of a pestivirus hog cholera / E. Weiland , R. Arl, R. Stark, F. Weiland et al // J of Virol., 1992, V. 66, N6, P. 3677-3682.

85. Attenuated psevdorabies virus expressing envelop glicoprotein El of hog cholera virus protects swine against both Pseudorabies and hog cholera / Van-Zijl M., Wensvoort G.,. De-Kluyer E., Hülst M. et al. // J. of Virolody, 1991, V. 65, N5., P. 2761-276

86. Aynaud J.M. Etude des propriétés de mutants froids du virus de la Peste Porcine claasique. //Application â la vaccination. Lejolly, J.C., Bibard, C. And Galicher, C. Bull. Off. Int Epiz. 1971,75, 654-659

87. Baker I. Serial pass. Hog cholera virus in rabbits. // Proc. Soc. experiment. Biolog. A Medic. J., 1946, p.63

88. Barth R. Immunologische und diagnostische Probleme beir der Schweinepest.// Berl. Münch. Tierärztl. Wschr., 1966, 4, p. 64-69

89. Bass E.P., Ray I.D. Evaluation of tissue culture hog holera vaccine.// J. Am. Vet. Med., 1963, 142, 1112

90. Belak S., Ballagi-Pordany A. Analysis of Pestyvirus Genomes by PCR.// Proceeding of the Second Symposium on Pestyviruses, 1-3 october 1992, pp.57-60

91. Bodon L. Contamination of various hog holera virus strains with adenoviruses or virus diarrhoea virus. // Acta. Vet. Acad. Sei, Hung., 1965, 15, p.471

92. Bognar K., Meszaros J. Experiences with a lapinised hog cholera virus strain of decreased virulence // Acta Vet. Hungaricae, 1963, N 13, P. 429438.

93. Boyton W.H. Hog holera tissue vaccine (B.T.V.).// J. Amer. Vet. Med. Assoc., 1945, 104,p. 814

94. Bundesnotprogramm Schweinepest: Antragsschlub 30. November // Schweinewelt, Oktober 1994, p.20-21

95. Classification and Nomenclature of viruses; Fifth Report of the International Commitee on Taxonomy of Viruses. / R.I. Francki , C.M. Fauquet, D.L. Knudson, Brown F. and et al. // Arch.of Virol.-1991.- Suppl. 2,- P. 223-233.

96. Cole C.G., Henley R.R., Dale et al. History of hog holera research in the U.S. Dep. Argic. 1884 I960.// Argic. Inf. Bull, 1962, N241, p.33-35

97. Collet M.S., Moening V., Horzinek M.C. Recent advances in pestivirus research // J.Gen. Virol.-1989.- V. 70. P. 253-266.

98. Corbeill M., Marchessault F., Trudel M. Efficient large scale cell culture system using media circulation and roller bottle principle. // In vitro, 1977, v.13, N3, p.177109.

99. Dale C.N., Songer B.A. In vitro propagation of hog holera virus. II. Somebiological and immunological characteristics of hog holera virus grown in tissue culture.// Am. J. Vet. Res., 1959, 20, 304.

100. Dalsgaard K., Overby E. Vaccination agains hog cholera (classical swine fever) with a detergent split vaccine.// Acta. Vet. Scand., 17:465-474, 1976.

101. Dhennin L., Lareenaudie В., Remond M. Etude d'un noveau vaccin inactive contre le peste porcine classigue. // S.r.Acad. Sci. 1976 - D. 283, N.12 - p. 1457-1460

102. Dhennin L., Remond M. Procédé de preparation, d'agents immunogenes contre a peste porcine et vaccins les contenant (Agence nat. De Valorisation de la recherch). Франц. заявка, кл. A61K 39/12, С12 К5/00, N 2347051, зявл. 9.04.76, N 7610455, он. 4.11.77

103. Димитров К. Опити за определяне имунизиращите дози в една вакси-нална доза на изсушената лапинизирана к ваксина срещу чума по сви-нете. Ветер. Мед. Науки, 1976, 13, 1, 59-62

104. Dorset M., Boiton В.М., Me Bryde C.N The etiology of hog holera. // U.S. Bur. Anim. Ind. Bull, 1905, p.72

105. Doyle T.M., Wright Cristal violet swine fever vaccine. //Brit. Vet. J., 1947,103, p.406-417

106. Eugster A.K., Angulo A. The use the micromodified. // Proceedings 77 th Annual Meeting of the Uneted States Animal Heslth Assotiation. 1973,1. N.11, p.615-620.

107. Freeman M J. Heterogeneity of the antibody response of rabbits immunized with acrylic particle bovine serum albumine complexes. // Immunology, 1968, v. 15,p. 481-492.

108. Further characterization of Border Disease Virus Isolate: Evidence for the Presence of more then three species within the genus Pestiviruses/ P.Becher, M.Konig et. al.//Virology, 1995, 209, p.200-206

109. Furukawa T. Persistent infection with human cytomegjlovirus in in a lim-fablastoid cell line // Virology, 1979, Vol. 94, P.214-218

110. Fuschs F. Schweinepest, in Röhrer H. Handburg der Virusinfektionen der Tiere, Band 3III/I, VEB Fischer Verlag, Jena, 1968

111. Futamura H. Etude sur les vaccines contre la peste porcine an Japon et résultats des experiences dans la pratique. // Bull. off. int. Epizoot., 1935,v. 10, p.16-52.

112. Gallily R. and Garwey J.S. Primary stimulation of rats and mice with hemocyanin in solution and adsorbed on bentonite. // J. Immunol., 1968, v. 101, p. 924-929.

113. Gillespie I.H.,Sheffy B.E., Baker I.A. Propagation of hog holera virus in tiisue culture. //Proc. Soc. Exp. Biol. (N.Y.), 1960,105, p.679.

114. Glicoprotein El of hog cholera virus expressed in insect cells protects swine from hog cholera / M.M. Hülst, D.F. Westra, S. Wensvoort, R.J.M. Moormann // J Virol.-1993.- V. 67, N9.- P. 5435-5442

115. Heat inactivated HAsAg as a vaccine against hepatitis./ B Reeseink H.W., Reering-Brongers E.E., Brunimelhuis H.G.J, et. al. // Antiviral Res., 1981,p.13-25

116. Hudson I. Peste porcine l'adaptation du virus au lapin et l'utilisât du virus adapte pour immuniser les pores. // Bull. off. int. Epiz., 1953, p.40

117. Koprovski H., James T.R., Cox H.R. Propagation of hog cholera virus in rabbits. // Proc. Sos. exp. Biol. Med., 1946, v.63

118. Kruiningen H. J., Bartholomen R. C. Infections bovine rhinotracheitis diagnosed by Jesions in a calf.// J. Amer. Vet. Ass., 1964, v. 144, p. 10081012

119. Launais M., Aynaud J.M. , Corthier G.and Laude H. Peste Porcine cla-sique: propriétés dun clone (souche "Thiverval") isolé en culture cellulaire â basse température. Application dans la vaccinacion.// Rev. Med. Vet. 1972, 123, 1537-1554

120. Liess B. Classical swine fever virus and related viral infection // Martinus Nijheff Publishing, Boston, 1988.

121. Lignieres I. Methode de vaccination cjntre la flevre aphteuse applique a la peste porcine.//Bull. off. int. Epizoot., 1933/34, 7, 460-461.

122. Litvin S.D. and Singer J.M.The aduvant action of latex particulate carriers. // J. Immunol., 1965, v. 95, p. 1147-1152.

123. Mahnel H., Mayr A. Schweinepest. // Veb Gustav Eischer Verlag Jena, 1974, 120p.

124. Marion P., Coret P. Immunization du porc contre la peste porcine. Emploi dans la pratique du virus lapinise.// Bull. Acad. Vet. France., 1953, 26, p.509-519

125. Mc Grea J.F. Ionizing radiation and its effects on animal viruses // Ann. N.Y. Acad. Sci., 1960, v.83 p. 632-705

126. Mims C. Role of persistence in viral pathogenesis // Symp. Soc.Gen. Microbiol., 1982, Vol.33, P. 11-14i

127. Moormann R.J.M. The potential use of marker vaccines for CSF // Third ESVV Symposium on pestivirus infections., Lelystad, 1996, p. 23

128. Phillip J.H. Bovine respiratory disease is controle possible. // Vet. Rec., 1973, v. 90, N20, p. 552-555.

129. Polatnic J., Bachrach H.L. Irradiation of foot-and-mouth disease virus and its ribonucleic acid // Arch. Gesamle virus forch., 1968, v.23, p.96-104

130. Polly J.R. The use of gamma radiation for the preparetion of virus vaccines.// Can. J. Microbiol., 1962, v.8, p.455-459

131. Proteins encoded in the 5'region of the pestivirus genome cjncerning taxonomy. / H.J. Thiel , R. Stark, G. Meyers, E. Weiland et al. // Vet. Microbiol.- 1992.-V. 33.- P. 213-219.

132. Pryskoka V.A., Avdosyeva I.K., Sydorov I.V. The study of immunogenic activity of inactivated classical swine fever vaccine samples.// Third ESVV Symposium on pestivirirus infections. Abstracts. Lelystad. The Netherlands, 1996, P. 130

133. Ray I. Immunization of swine.// J. Amer. Vet. Med. Ass., 1965, 146, 323.

134. Sasahara I., Hayashi S., Konoike H., Okaniva A., Takahashi J., Takai I., Yanagisawa K., Yoda K. Potency and safety of living hog holera vaccine prepared from caprinized virus.//Nat. Inst. Anim. Hith. Quart., 1964, 4, p.40-43.

135. Sasahara J. Diagnosis and epizootology of classical swine fever. EEC Seminar, Amsterdam, 1976, pp. 67-82.

136. Shinja K., Tochihire A., Tureo M. //Femeter Kohen C., Patent N 3559304, опубл. 17.12.85

137. Spier R.E. Recent developments in the large scale cultivation of animal cells in monolayers.//ADV Biochem. Eng., 1980, v. 14, p.l 19-168.

138. Stadejek T. Rapid detection and differentiation of classical swine fever virus from other pestiviruses in tissue homogenates by RT-PCR.// PULAWY, September, 23-27, 1996, pp. 25-30

139. Stewart W.C., Carbery E.A., Kress J.I. Transplacental Hog Holera infection in immune sows. // Amer. J. Vet. Res., 1973, v.34, N.5, p. 637 640

140. Telling R.C. Foot-and-mouth disease vaccine. // Proc. Biochem, 1969, v.4, n.6, p. 49-52

141. Van Waveren G.M. Vaccination against hog cholera by use of lapinized vaccine.// Bull. off. int. Epiz., 1956, 46, p. 102-121

142. Wild T.F., Brown F. A study of physical properties of the imunising antigen of foot-and-mouth disease virus and the effect of various inactivating agents on its structure. // Arch. Gesamte Virus Forsch., 1968, v. 24, p. 86103

143. Wittman. G. , Bauer K. and Mussgay M. Experiments on vaccination of pigs with ethylethyleneimine (EEI), diethylaminoethyl dextran (DEAED) foot-and-mouth disease vaccines. // Arch. Gesamte Virus Forch., 1972, v.6, p. 251-264

144. ХиНг. А.1., \\^пег Е., Сегпек 1, Бете^ Е. 8Шс1шт уквШовй (лткеИо 1ар1ш20Уапе1ю утави.//Уе!:. Мес!., 1971, 12, 1.