Вирусная доставка гена трансглутаминазы 1 в эпидермис: оценка эффективности и безопасности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Пономарев Алексей Сергеевич

• Пономарев Алексей Сергеевич
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Пономарев Алексей Сергеевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общее представление о генодерматозах

1.2 Генетические и молекулярные основы АРВИ

1.2.1 Генетические варианты АРВИ

1.2.2 Мутации гена ТОМ1, ассоциированные с АРВИ

1.2.3 Роль трансглутаминазы 1 в патогенезе заболевания

1.3 Клиническая характеристика и диагностика АРВИ

1.3.1 Клинические проявления и молекулярно-генетическая диагностика

1.3.2 Перспективные биомаркеры заболевания

1.4 Моделирование АРВИ

1.5 Современные подходы к лечению АРВИ

1.5.1 Симптоматическая терапия

1.5.2 Кожная трансплантация

1.5.3 Заместительная ферментная терапия

1.5.4 Генная терапия

1.6 Заключение по обзору литературы

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Разработка конструкции и кодонная оптимизация гена ТОМ1

2.2 Рестрикционный анализ плазмидных конструкций

2.3 Получение рекомбинантного ААУ и характеристика вирусных частиц

2.3.1 Получение и концентрирование вирусных частиц

2.3.2 Просвечивающая электронная микроскопия

2.4 Трансфекция и трансдукция культур клеток

2.5 Анализ экспрессии и ферментативной активности TGM1

2.5.1 Вестерн-блот анализ

2.5.2 Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

2.5.3 Иммуноцитохимический анализ

2.5.4 Оценка ферментативной активности TGM1

2.6 Оценка жизнеспособности клеток

2.7 Анализ цитокинового профиля кондиционированной среды культур клеток

2.8 Работа с лабораторными животными

2.8.1 Лабораторные животные, группы и содержание

2.8.2 Определение лейкоформулы и биохимических показателей крови

2.8.3 Определение клеточности органов иммунной системы крыс

2.8.4 Иммунофлуоресценция

2.8.5 Патогистологический анализ

2.9 Статистический анализ

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Разработка плазмидного вектора pAAV-TGM1

3.2 Анализ функциональности AAV2-TGM1 in vitro

3.3 Анализ функциональности и безопасности AAV2-TGM1 у крыс

3.4 Анализ функциональности и безопасности AAV2-TGM1 на свиньях

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АЛТ аланинаминотрансфераза

АОТФ аденовирус-опосредованная трансферрин-инфекция

АРВИ аутосомно-рецессивный врожденный ихтиоз

АСТ аспартатаминотрансфераза

ББП белки, богатые пролином

БОЕ бляшкообразующая единица

БСА бычий сывороточный альбумин

ВИЭ врожденная ихтиозиформная эритродермия

ИА ихтиоз Арлекина

ИПСК индуцированная плюрипотентная стволовая клетка

киРНК короткая интерферирующая РНК

ЛИ ламеллярный ихтиоз

мРНК матричная РНК

НВИЭ небуллезная врождённая ихтиозиформная эритродермия

ОКО ороговевшая клеточная оболочка

оРНК общая РНК

пДНК плазмидная ДНК

ПЦР-РВ полимеразная цепная реакция в режиме реального времени

Тх17 T-хелпер 17-го типа

ФСБ фосфатно-солевой буфер

ФСБ-Т фосфатно-солевой буфер с Твин-20

ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота

AAV аденоассоциированный вирус

bFGF основной фактор роста фибробластов

CCL20 лиганд 20 хемокина (мотив C-C)

COL7A1 коллаген VII-го типа, альфа

CpG цитозин-фосфат-гуанин

CTACK хемокин, привлекающий T-клетки кожи

CXCL1 лиганд 1 хемокина (мотив C-X-C)

DAPI 4',6-диамидино-2-фенилиндол

DPBS фосфатно-солевой буферный раствор Дульбекко

FDA Управление по санитарному надзору за качеством пищевых

продуктов и медикаментов США

FITC флуоресцеин-5-изотиоцианат

GFP зелёный флуоресцентный белок

HGF фактор роста гепатоцитов

HRP пероксидаза хрена

HSV вирус простого герпеса

IL интерлейкин

IP10 индуцируемый интерфероном гамма белок

ITR инвертированный концевой повтор

MCP-1 моноцитарный хемотаксический белок

MFI среднее арифметическое интенсивности флуоресценции

PHF первичные фибробласты человека

TALEN эффекторная нуклеаза, подобная активатору транскрипции

TGM1 трансглутаминаза

TNF-a фактор некроза опухоли a

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Вирусная доставка гена трансглутаминазы 1 в эпидермис: оценка эффективности и безопасности»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

Ихтиозы представляют собой гетерогенную группу дерматологических заболеваний, включающую как наследственные (аутосомно-доминантные, аутосомно-рецессивные и X-сцепленные формы), так и приобретенные состояния, объединённые общим патогенетическим механизмом - нарушением процессов кератинизации [Oji et al. 2010]. Клинически эти заболевания проявляются генерализованным гиперкератозом с образованием крупнопластинчатых чешуек, выраженным ксерозом и нарушением барьерной функции кожи. Согласно современным данным, патогенез ихтиозов может быть связан с широким спектром патологических состояний, включая злокачественные новообразования, аутоиммунные заболевания, метаболические и эндокринные нарушения, а также инфекционные процессы [Mohamad et al., 2021]. Особую группу составляют наследственные формы ихтиозов, обусловленные моногенными дефектами, которые приводят к нарушению формирования рогового слоя эпидермиса.

Среди наследственных ихтиозов ламеллярный ихтиоз (ЛИ) занимает особое положение как наиболее тяжёлая форма несиндромальных кератинизационных нарушений, характеризующаяся высокой перинатальной летальностью (до 20% случаев). Молекулярной основой заболевания в большинстве случаев являются мутации в гене фермента трансглутаминазы 1 (англ. transglutaminase 1, TGM1), который играет важнейшую роль в процессах поперечного сшивания белков рогового слоя [Ebrahimi Samani et al., 2024]. Дефицит этого фермента приводит к выраженному пролиферативному гиперкератозу и нарушению формирования корнеоцитов. Основным патогенетическим механизмом ЛИ является комплексное нарушение липидного метаболизма в дифференцированных кератиноцитах, что вызывает дефекты формирования внеклеточного матрикса рогового слоя и существенно нарушает барьерную функцию кожи [Elias et a!., 2012].

Клиническая картина ЛИ характеризуется выраженным полиморфизмом. Наиболее критичным является неонатальный период, когда у 90% пациентов развивается так называемая коллодиевая мембрана - специфическая

пергаментоподобная оболочка, покрывающая всю поверхность тела [Cordisco et al., 2024]. Это состояние сопровождается грубыми нарушениями терморегуляции, значительными потерями жидкости и нарушениями электролитного баланса, а также высокой вероятностью развития септических осложнений. В последующем заболевание проявляется формированием крупных пластинчатых чешуек темно -коричневого цвета с характерными поверхностными трещинами между ними. Сопутствующими проявлениями служат дистрофические изменения ногтевых пластин, очаговая алопеция, поражения органов зрения различной степени выраженности (эктропион, кератит), а также возможен выворот слизистых оболочек [Moustaine et al., 2022].

Современные терапевтические подходы к лечению ЛИ носят исключительно симптоматический характер и включают применение системных ретиноидов, интенсивную эмолентную терапию и профилактику вторичных инфекций [Mazereeuw-Hautier et al., 2019]. Особое значение поддерживающая терапия приобретает в первые месяцы жизни пациентов, когда риск летальных осложнений достигает максимальных значений. Вместе с тем существующие методы лечения не способны воздействовать на основную причину заболевания - дефицит TGM1, что обуславливает необходимость разработки принципиально новых этиотропных подходов терапии [Chulpanova et al., 2022].

Перспективным направлением в лечении ЛИ представляется генная терапия с использованием вирусных векторов для доставки функциональных копий гена TGM1. Среди различных векторных систем рекомбинантные аденоассоциированные вирусы (англ. adeno-associated virus, AAV) демонстрируют ряд уникальных преимуществ, включая низкую иммуногенность, отсутствие интеграции в геном хозяина и способность обеспечивать длительную (до нескольких лет) экспрессию трансгена [Wang et al., 2024]. Особый интерес представляет серотип AAV2, который показал высокую эффективность трансдукции кератиноцитов в экспериментальных моделях. Важным доказательством данного подхода стали исследования, демонстрирующие возможность коррекции ферментативного дефицита при синдроме Шёгрена-

Ларссона путем доставки гена жирной альдегиддегидрогеназы FALDH с использованием АЛУ2-вектора [Haug, Braun-Falco, 2005].

Однако существующие векторные системы требуют существенной оптимизации, особенно в аспектах: повышения эффективности трансдукции эпидермальных стволовых клеток; обеспечения стабильной долговременной экспрессии трансгена; минимизации потенциальных иммунных реакций и разработки эффективных методов доставки в кожные покровы [Ain et al., 2021].

Цель работы: создать и охарактеризовать рекомбинантный аденоассоциированный вирус, экспрессирующий ген трансглутаминазы 1 (TGM1) человека, и оценить его эффективность и безопасность при доставке в эпидермис лабораторных животных с использованием внутрикожного и аппликативного путей введения.

Задачи исследования:

1. Разработать генетическую конструкцию, кодирующую оптимизированную по кодонному составу нуклеотидную последовательность кДНК гена TGM1 человека и проанализировать ее функциональность в культуре клеток in vitro.

2. Получить рекомбинантный аденоассоциированный вирус 2 серотипа, кодирующий оптимизированную по кодонному составу нуклеотидную последовательность кДНК гена TGM1 человека (AAV2-TGM1), и проанализировать его эффективность для повышения экспрессии TGM1 в культуре клеток.

3. Определить чистоту и цитотоксичность препарата рекомбинантного аденоассоциированного вируса 2 серотипа, кодирующего оптимизированную по кодонному составу нуклеотидную последовательность кДНК гена TGM1 человека.

4. Оценить уровень экспрессии TGM1 в эпидермисе, провести патогистологический анализ органов и тканей, определить показатели биохимии и лейкоформулы крови и клеточности органов иммунной системы крыс после внутрикожного и аппликативного введения AAV2-TGM1.

5. Проанализировать экспрессию TGM1 в эпидермисе, провести патогистологический анализ органов и тканей свиней и определить показатели биохимии крови после внутрикожного введения AAV2-TGM1.

Научная новизна работы

Впервые разработан рекомбинантный вектор на основе AAV2, содержащий оптимизированную по кодонному составу нуклеотидную последовательность кДНК гена TGM1 (AAV2-TGM1, получен патент на изобретение РФ №2821567). Показана его эффективность в отношении увеличения ферментативной активности трансглутаминазы 1, а также безопасность в культуре клеток in vitro и на лабораторных крысах и свиньях in vivo.

Впервые обнаружено, что AAV2 менее эффективно трансдуцирует перевиваемые кератиноциты по сравнению с неэпителиальными клетками. Впервые установлено, что внутрикожная инъекция и аппликативное применение AAV2-TGM1 с гелем-эксцепиентом повышали уровень белка TGM1 в коже крыс и свиней, при этом не оказывали существенного влияния на биохимические показатели крови, лейкоформулу, количество жизнеспособных клеток в органах иммунной системы и не приводили к повреждению кожи и внутренних органов.

Теоретическая и практическая значимость работы

Теоретическая значимость работы заключается в расширении представления о возможности использования вирусных методов доставки генетического материала в эпидермис. Впервые проведено комплексное исследование эффективности и безопасности использования рекомбинантного вектора AAV2-TGM1 in vitro и in vivo.

Установлены особенности экспрессии трансгена в различных клеточных моделях и тканях животных, а также проанализировано влияние трансдукции на жизнеспособность клеток и цитокиновый профиль. Проведена оценка доставки кодон-оптимизированной последовательности гена TGM1 в эпидермис лабораторных животных, включающая анализ экспрессии мРНК и белка трансглутаминазы 1 и безопасности биохимическими и гистологическими методами. Полученные данные углубляют понимание механизмов локальной генной коррекции дефектов

ороговения кожи и демонстрируют перспективность использования рекомбинантного AAV для дермального применения. Работа также вносит вклад в разработку подходов оценки безопасности генно-инженерных конструкций в условиях доклинических исследований на мелких и крупных лабораторных животных.

Практическая значимость полученных данных заключается в разработке генной терапии для лечения ламеллярного ихтиоза на основе вектора AAV2. Разработанная конструкция AAV2-TGM1 показала способность эффективно повышать экспрессию и ферментативную активность TGM1 in vitro и in vivo при локальном введении, обеспечивая восстановление барьерной функции кожи без существенного влияния на биохимические и структурные показатели. Полученные результаты подтверждают возможность доставки терапевтического гена в эпидермис аппликативным и внутрикожным методами применения. Разработанная платформа может быть использована как основа для создания персонализированных генно-терапевтических препаратов для пациентов с наследственными нарушениями кератинизации, включая другие формы аутосомно-рецессивных ихтиозов. Кроме того, предложенный подход обладает потенциалом для расширения на другие кожные моногенные заболевания, требующие локальной заместительной терапии дефицитных белков.

Методология и методы исследования

В работе использован комплекс молекулярно-генетических, биохимических, клеточных, иммунологических и гистологических методов. Для получения рекомбинантной генетической конструкции, кодирующей ген TGM1, применяли технологии кодонной оптимизации и молекулярного клонирования. Экспрессию трансгена и его распространение анализировали с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ), целевого белка с помощью вестерн-блоттинга, а также иммунофлуоресцентного и ферментативного анализов. Размер и количество полных и пустых капсидов анализировали с использованием просвечивающей электронной микроскопии. Для изучения локализации TGM1 применяли иммуноцитохимию в сочетании с лазерной конфокальной

микроскопией. Оценку индукции апоптоза, некроза и воспалительных процессов исследуемых клеток проводили методами проточной цитофлуориметрии и мультиплексного анализа цитокинов/хемокинов. Изменения морфологии тканей органов оценивали по результатам окрашивания гематоксилин-эозином и по Маллори.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработан рекомбинантный аденоассоциированный вирусный вектор, несущий кодон-оптимизированную последовательность гена TGM1 человека и обеспечивающий повышение уровня экспрессии при генетической модификации клеток почки HEK293, кератиноцитов HaCaT, нейробластомы SH-SY5Y и первичных фибробластов человека in vitro.

2. Аппликативное применение рекомбинантного аденоассоциированного вируса, кодирующего ген TGM1, приводит к повышению экспрессии TGM1 в эпидермисе крыс и не вызывает патологических изменений в органах, изменения клеточности органов иммунной системы и отклонений в гематологических показателях крови.

3. В нормальной (физиологической) модели на свиньях внутрикожная инъекция аденоассоциированного вируса, кодирующего ген TGM1, приводит к увеличению экспрессии TGM1 в эпидермисе и не вызывает изменений структуры органов и биохимических показателей крови.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность результатов подтверждена применением современных методик, стандартизированных протоколов, высококачественных реактивов и международно признанного оборудования. Все эксперименты проводились в нескольких биологических повторностях и сопровождались необходимыми контролями. Для статистической обработки всех экспериментальных данных использовалось программное обеспечение GraphPad Prism; статистически значимыми считались различия при p < 0,05. Полученные данные сравнивались с ранее опубликованными работами по теме исследований и подтверждены сериями независимых экспериментов.

Основные результаты работы представлены на следующих международных и всероссийских конгрессах и конференциях: Всероссийская школа-конференция «Материалы и технологии XXI века» (Казань, Россия, 2023-2025), Current Challenges in Biomedicine and Biotechnology II OIC Youth Scientific Congress (дистанционно,

2023), 77-я Международная школа-конференция молодых ученых «Биосистемы: организация, поведение, управление» (Н. Новгород, Россия, 2024), VI Международная конференция «Постгеном» (Казань, Россия, 2024), VI Национальный конгресс по регенеративной медицине (Санкт-Петербург, Россия,

2024), XIII International Conference on Chemistry for Young Scientists «Mendeleev 2024» (Санкт-Петербург, Россия, 2024), Meeting on cancer and immunity (Казань, Россия, 2023), Всероссийская мультимедийная конференция с международным участием Генная терапия: настоящее и будущее (Москва, Россия, 2025), Итоговая научно-образовательная конференция студентов КФУ (Казань, Россия, 2024-2025).

Место выполнения работы и личный вклад диссертанта

Работа выполнена в НИЛ «OpenLab Генные и клеточные технологии» научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины Института фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета (2021-2025 гг.). Автором самостоятельно проанализированы отечественные и зарубежные публикации по теме диссертации. Диссертант принимал участие в планировании и осуществил экспериментальную и аналитическую часть работы. Все этапы исследования на клеточных культурах и на лабораторных животных автором выполнены лично. Диссертантом проведен анализ полученных результатов, обсуждены результаты и сформулированы выводы. Автором самостоятельно написаны текст диссертации, публикации подготовлены совместно с научными сотрудниками лаборатории, которые являются их соавторами.

Связь работы с базовыми научными программами

Работа выполнена в рамках программы стратегического академического лидерства Казанского (Приволжского) федерального университета (КФУ) (ПРИ0РИТЕТ-2030), средств субсидии, выделенной КФУ для выполнения

государственного задания в сфере научной деятельности (проект №FZSM-2023-0011), Республиканского конкурса инновационных идей и научных исследований молодых ученых в медицине AMTEC и гранта Фонда содействия инновациям студенческого стартапа №СтС-1683ГССС15-Ь, а также стипендии Президента Российской Федерации для аспирантов и адъюнктов, проводящих научные исследования в рамках реализации приоритетов научно-технологического развития Российской Федерации от 19.06.2024.

Публикация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ, в том числе 4 статьи в научных журналах, индексируемых в международных базах данных Scopus и Web of Science, 1 патент на изобретение РФ и 12 тезисов докладов на международных и всероссийских конференциях и конгрессах.

Структура и объем диссертационной работы

Материалы диссертационный работы изложены на 132 страницах машинописного текста. Работа содержит 28 рисунков и 2 таблицы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Библиография включает 207 источников, среди которых 25 отечественных и 1 82 зарубежных источников.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общее представление о генодерматозах

Генодерматозы представляют собой большую и разнообразную группу наследственных заболеваний кожи, проявляющихся как в изолированных формах, ограниченных только кожей, так и в синдромных вариантах, сопровождающихся поражением других органов [Chulpanova et а1., 2022]. Эти состояния отличаются высокой клинической и генетической гетерогенностью, что существенно осложняет диагностику и лечение [1уапепко е! а1., 2022]. Ихтиоз (синоним -сауриаз) является собирательным термином, включающим широкий спектр генодерматозов, общими признаками которых служат сухость, утолщение и патологическое шелушение кожи, поражающее значительные участки тела. В ряде случаев заболевание может быть приобретенным и ассоциировано со злокачественными новообразованиями, аутоиммунными, метаболическими, эндокринными или инфекционными заболеваниями [Моггеп et а1., 2021].

История изучения ихтиозов насчитывает более двух веков: первые описания относятся к работам АНЬег! (1806) и Wi11an (1808) [АНЬей, 1825; Wi11an, НиЬЬаМ, 1809]. В дальнейшем предпринимались многочисленные попытки классификации этих заболеваний, сначала - на основе фенотипических различий (мелкие серебристые чешуйки или крупные тёмные пластинчатые), а позднее - по типу наследования (аутосомно-доминантный, аутосомно-рецессивный, сцепленный с Х-хромосомой). Современное понимание классификации ихтиозов сформировалось на 1-й международной консенсусной конференции по ихтиозам (Сорез, Франция, 2009), где была предложена гармонизированная номенклатура [Lefëvгe е! а1., 2006; Oji е! а1., 2010]. Впоследствии, она дополнялась данными о мутациях, описанными после 2010 года.

В настоящее время чаще выделяют несиндромные (генетически полиморфные и ограниченные поражением кожи) [М^егееи^^Наи^ег е! а1., 2019] и синдромные формы (моногенные заболевания с мультисистемными проявлениями, в том числе с внекожными патологиями, затрагивающими несколько органов) [Oji е! а1., 2010]; по типу наследования - Х-сцепленный доминантный, Х-сцепленный рецессивный,

аутосомно-доминантный и аутосомно-рецессивный, по тяжести проявления -тяжелая (фетальная) форма, приводящая к гибели новорожденного; средняя степень, совместимая с жизнью; поздняя форма, дебют которой приходится на второй месяц жизни ребенка [Сукало и др., 2013]. Синдромные формы ихтиоза (Нетертона, Рефсума, Попова, Руда, Юнга-Вогеля, Чанарина-Дорфмана, Шегрена-Ларсона и др.) чаще наследуются по аутосомно-рецессивному типу, они малоизучены и диагностируются намного реже, чем несиндромные [Алексеева и др., 2020].

Союз педиатров России разработал отечественные клинические рекомендации по оказанию медицинской помощи детям с ихтиозом, где ограничился двумя большими группами изолированного ихтиоза - врожденный и неврожденный [Союз педиатров России].

К группе неврожденного (общего) ихтиоза относят аутосомно-доминантный вульгарный/обыкновенный дерматоз и Х-сцепленный рецессивный (чернеющий) ихтиоз) [Дворянкова и др., 2019]. Первый обусловлен мутациями в гене профилаггрина ГЬО, приводящими к дефициту белка филаггрина и повышенной сухости кожи, второй - делецией в гене стероидной сульфатазы БГБ, что вызывает накопление холестерина сульфата в эпидермисе и чрезмерную кератинизацию. Оба состояния относительно лёгкие и поддаются терапии местными средствами [Тальникова и др., 2016].

К врождённым ихтиозам относят аутосомно-рецессивные формы (ламеллярный ихтиоз (ОМ1М: 601277), небуллезная врождённая ихтиозиформная эритродермия (НВИЭ, ОМ1М: 242100, 606545, 612281, 615024, 604777), буллезные ихтиозы (буллезная эритродермия, ихтиоз буллезный Сименс, ихтиоз иглистый Курта-Маклина), а также редкие подтипы (ихтиоз Арлекина (ИА, ОМ1М: 242500), синдром отслаивающейся кожи). Врожденный ихтиоз представляет собой большую и крайне гетерогенную группу редких патологий (Таблица 1), возникающих вследствие дефектов более чем в 50 генах и включающих около сотни различных клинических форм [БюгеШ е1 а1., 2024].

Таблица 1 - Современная классификация форм врождённого ихтиоза (адаптировано из [Мурашкин и др., 2022])

Тип Заболевание

Синдромальный ихтиоз

Х-сцепленный доминантный тип (XD) CHILD-синдром Синдром Конради - Хюнермана - Гаппла (CHH)

X-сцепленный рецессивный тип (XR) Фолликулярный ихтиоз с атрихией и фотофобией (IFAP)

Аутосомно-рецессивный тип (AR) Синдром Нетертона (NS) KLICK-синдром CEDNIK-синдром KIDAR-синдром MEDNIK-синдром NISCH-синдром ARC-синдром Синдром Чанарина-Дорфмана (CDS) Сидром Шегрена-Ларссона (SLS) Синдром ихтиоза с гипотрихозом (IHS) Синдром ихтиоза недоношенности (IPS) Классическая (взрослая) форма болезни Рефсума (ARD) Множественная сульфатазная недостаточность (MSD) Болезнь Гоше, тип II, перинатально-летальная форма (PLGD)

Аутосомно-доминантный тип (AD) KID-синдром

Несиндромальный ихтиоз

Аутосомно-рецессивный врожденный ихтиоз (ARCI) Ламеллярный ихтиоз (LI) Ихтиоз Арлекина (HI) Врожденный ихтиозиформная эритродермия (CIE)

Плеоморфный ихтиоз (PI) Самовосстанавливающийся коллодийный плод (SHCB/SICI) Самовосстанавливающийся акральный ихтиоз (AcSHCB) Ихтиоз по типу «купального костюма» (BSI)

Х-сцепленный рецессивный ихтиоз (RXLI) Х-сцепленный рецессивный ихтиоз (RXLI)

17

Тип Заболевание

Кератинопатический ихтиоз Аутосомно-доминантный тип

(KPI) Эпидермолитический ихтиоз (EI)

Поверхностный эпидермолитический ихтиоз (SEI)

Кольцевидный эпидермолитический ихтиоз (AEI)

Иглистый ихтиоз Курта-Маклина (ICM)

Лорикриновая кератодермия (LK)

Вариабельная эритрокератодермия (EKV)

Врожденная ретикулярная ихтиозиформная эритродермия

(CRIE)/(IWC)

Аутосомно-рецессивный тип

Аутосомно-рецессивный эпидермолитический ихтиоз (AREI)

Синдром отслаивающейся кожи/пилинг-сидном типа B (PSD)

Эпидермолитический невус (EN)

Вульгарный ихтиоз (IV) Аутосомно-доминантный с неполной пенетрантностью

Аутосомно-рецессивный врожденный ихтиоз (АРВИ) выделяется как отдельная группа, объединяющая широкий набор клинических форм, возникающих вследствие мутаций как минимум в десяти различных генах. Среди них ALOX12B, ALOXE3, N^¿4, PNPLA1 и CYP4F22, ассоциированные с НВИЭ, а также АВСА12, мутации в котором обусловливают ИА или ламеллярный ихтиоз в зависимости от характера дефекта. Ряд редких форм, таких как самоизлечивающийся коллодиевый ихтиоз, также связан с мутациями в ALOX12B, ALOXE3 и ГОЫ1. Наиболее частой причиной АРВИ являются мутации в гене ГОЫ1, на которые приходится от 32 до 68% случаев, при этом до 90% являются причиной ЛИ [Pigg et а1., 2016]. На сегодняшний день описано более 115 вариантов мутаций в гене ГОЫ1 у пациентов разных этнических групп. Предполагается, что галицийская мутация возникла около тысячи лет назад и впоследствии распространилась в Эквадоре, где также встречается высокая частота заболевания [7ашЬгапо е1 а1., 2014].

Ген ГОЫ1 локализован на хромосоме 14q11.2 ^епБапк ММ_000359.3) и кодирует фермент трансглутаминазу-1 с молекулярной массой около 90 кДа. ГОЫ1 экспрессируется в кератиноцитах эпидермиса и клетках эпителия эктодермального

происхождения, где катализирует образование поперечных связей между белками-предшественниками ороговевшей клеточной оболочки (ОКО), такими как лорикрин и инволюкрин. Эта структура выполняет роль каркаса для последующего закрепления липидов, формирующих барьерный роговой слой кожи. Нарушение функции TGM1 приводит к дефектам межклеточных липидных слоёв и потере барьерной функции, что лежит в основе клинических проявлений ЛИ и других форм АРВИ [Akiyama, 2011].

Степень тяжести заболевания коррелирует с уровнем активности фермента: тяжелая дисфункция TGM1 приводит к классическому фенотипу ЛИ, частичная потеря активности - к легкому ЛИ или НВИЭ. После TGM1 наиболее частыми причинами АРВИ являются мутации в ALOXE3 и ALOX12B (17-30%), NIPAL4 (1016%), CYP4F22 (8-10%) и ABCA12 (около 5%). В 15-22% случаев мутации остаются неидентифицированными [Simpson et al., 2020]. Современные классификации и методы диагностики базируются на сочетании клинического анализа, определения типа наследования и молекулярно-генетического тестирования, что позволяет установить точный диагноз и прогноз заболевания.

1.2 Генетические и молекулярные основы АРВИ

1.2.1 Генетические варианты АРВИ

Аутосомно-рецессивный врожденный ихтиоз представляет собой группу тяжелых наследственных заболеваний кератинизации, характеризующихся генерализованным шелушением кожи. Большинство исследователей признают эту форму наиболее тяжелой и неизлечимой разновидностью ихтиоза. Несмотря на значительную генотипическую и фенотипическую гетерогенность, эти нарушения объединены под общим термином «ламеллярные ихтиозы» [Fischer et al., 2023].

Первые описания симптомов ЛИ, известного ранее как «эпидермальная десквамация новорожденных», приведены в работе E. Seligmann (1841) [Seligmann, 1841]. Термин «ламеллярный ихтиоз» был введен в дерматологическую практику I. Gross и L. Torok в 1895 году [Gross, Török, 1895]. Существенный вклад в понимание клинических особенностей АРВИ внесли работы Frost и van Scott (1966), которые впервые четко дифференцировали этот тип заболевания от

аутосомно-доминантного эпидермолитического гиперкератоза [Frost, Van Scott, 1966].

Современная классификация АРВИ, согласно последней версии Сорезской системы, включает три основных подтипа: ИА, ЛИ и врожденную ихтиозиформную эритродермию (ВИЭ). Кроме того, выделяют группу редких патовариантов, включая самовосстанавливающийся «коллодийный плод», самовосстанавливающийся акральный ихтиоз и ихтиоз «купального костюма».

Врожденная ихтиозиформная эритродермия представляет собой тяжелую форму АРВИ. В ее основе лежат мутации в генах, участвующих в липидном обмене и дифференцировке эпидермиса, таких как ALOX12B, ALOXE3, NIPAL4, PNPLA1 и CYP4F2 [Liu et al., 2024в; Shwayder et al., 2019].

Ихтиоз Арлекина характеризуется аутосомно-рецессивным наследованием с полной пенетрантностью мутантного гена ABCA12, локализованного на хромосоме 2q35 [Beck, Blanpain, 2013]. Этот ген играет критическую роль в транспорте липидов в кератиноцитах эпидермиса. Заболевание проявляется внутриутробно, и 80-90% детей рождаются в виде «коллодийного плода». Летальность при этой форме чрезвычайно высока [Lo et al., 2024].

Ламеллярный ихтиоз представляет наиболее тяжелую форму несиндромального ихтиоза, ассоциированную со значительной перинатальной заболеваемостью и смертностью. В основе патогенеза лежит недостаточность TGM1, приводящие к глубокому нарушению барьерной функции кожи [Cordisco et al., 2024].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Пономарев Алексей Сергеевич, 2026 год

с. с.

Общий биллирубин

Вес

3

ю О

1.0

0.5

0.0

5.0

4.5

О 4.00) m

3.5-

3.0-

Контроль AAV2-TGM1

0 сутки 7 сутки 28 сутки

-1-1-1-

0 сутки 7 сутки 28 сутки

Рисунок 28 - Оценка биохимических показателей крови и веса свиней на 0, 7, 28

сутки после внутрикожного введения AAV2-TGM1. Показатели АЛТ -аланинаминотрансфераза, АСТ - аспартатаминотрансфераза. Данные получены

на биохимическом анализаторе ChemWell 2900 (США) и представлены как среднее значение 5-ти биологических повторов ± С.О. Статистический анализ выполнен с использованием множественного теста Стьюдента и с апостериорным анализом (тест Холм-Шидак). ** - p < 0,01 (адаптировано из [Ponomarev et al.,

2025])

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Ламеллярный ихтиоз относится к группе тяжелых наследственных генодерматозов. Мутация в гене TGM1, влияющая на ороговение кожи, вызывает серьезную дисфункцию ее барьерной роли. Лечение ихтиозов в настоящее время носит лишь симптоматический характер. В то же время генетическое разнообразие ихтиозов, моногенная природа и доступность тканей кожи, позволяет развивать генно-инженерные и клеточные подходы для изучения патогенеза и создавать технологии специфического воздействия на мутации [Иваненко и др., 2022]. Учитывая мультисистемный характер нарушений при целом ряде генодерматозов, ранее считавшихся неизлечимыми, разработка новых этиотропных подходов и совершенствование методов доставки терапевтических агентов приобретает особое значение.

На данный момент генная терапия кожных заболеваний изучается преимущественно в рамках доклинических исследований. Фактически, из 1052 клинических испытаний, включающих генную терапию, только 23 исследования посвящены кожным патологиям [Ain et al., 2021]. Кожа представляет собой перспективную цель для генной терапии по ряду причин. Эпидермис вовлечён во множество моногенных заболеваний, его можно воспроизводить в лабораторных условиях и проводить с ним манипуляции ex vivo с возможностью контроля терапевтического эффекта. Кроме того, современные методы культивирования позволяют выращивать кератиноциты, включая стволовые кератиноциты in vitro. [Jayarajan et al., 2021].

Топическое использование, внутривенные или внутрикожные инъекции терапевтических векторов непосредственно в кожу представляют собой перспективный подход к лечению генодерматозов. Для лечения рецессивного дистрофического буллезного эпидермолиза и аутосомно-рецессивного врожденного ихтиоза было разработано несколько локальных подходов к генной терапии с использованием модифицированного HSV-1, несущего гены дикого типа, такие как коллаген VII типа, альфа-1 и трансглутаминазы 1 (англ. collagen, type VII, alpha 1, COL7A1, TGM1). Результаты фазы 1 исследований по местной

доставке генной терапии in vivo оказались многообещающими, хотя экспрессия терапевтических генов в коже была временной из-за неинтегрирующего характера HSV-1, что делает необходимым многократное введение вектора [Freedman et al., 2021; Jayarajan et al., 2021]. Учитывая отсутствие эффективных вариантов коррекции для пациентов, страдающих от АРВИ, а также потенциальные ограничения и риски, выявленные при использовании ранее предложенных в доклинических исследованиях подходов заместительной терапии Plank et al., 2019], существует значительная потребность в разработке неинвазивного и масштабируемого геннотерапевтического препарата, основанного на платформе с доказанным профилем безопасности для человека.

Эти результаты определили направление исследования, ориентированного на изучение молекулярных механизмов восстановления ферментативной активности трансглутаминазы 1 с помощью рекомбинантного аденоассоциированного вируса для генной терапии ламеллярного ихтиоза.

В рамках настоящей работы была проведена комплексная оценка функциональности и безопасности применения рекомбинантного AAV2-TGM1. На первом этапе нами был разработан дизайн и синтезирована плазмидная генетическая конструкция (pAAV-TGM1), предназначенная для сборки рекомбинантного аденоассоциированного вируса.

На следующем этапе был проведен анализ функциональности вектора, несущего кДНК гена TGM1, и охарактеризован уровень экспрессии целевого белка в культуре клеток человека. Ранее несколько исследовательских групп изучали методы адресной доставки нуклеиновых кислот и белков для устранения патологического фенотипа в клетках кожи, лишенных функционального фермента. К ним относятся как вирусные методы доставки генов [Choate et al., 1996], так и невирусные, например, доставка очищенного рекомбинантного белка TGM1 с использованием липосом [Aufenvenne et al., 2013]. Хотя эти методы успешно обеспечивают стойкую коррекцию ключевых признаков заболевания в доклинических исследованиях, ни один из них не был внедрен в клиническую практику.

Результаты наших исследований показали, что при трансфекции различных клеточных линий pAAV-TGM1 успешно повышала экспрессию мРНК, белка и ферментативной активности TGM1. При этом наблюдались различные уровни ферментативной активности в клетках HEK293 - на 67% выше по сравнению с клеточной культурой кератиноцитов HaCaT, что связано с высокой пермиссивностью клеток HEK293.

После подтверждения функциональности pAAV-TGM1 на основе данной плазмиды получен рекомбинантный AAV2-TGM1. Мы оценили функциональность AAV2-TGM1 in vitro с помощью иммунофлуоресцентного анализа в эпидермальных и контрольных клеточных линиях. В клетках HaCaT наблюдалась эндогенная экспрессия TGM1, что согласуется с данными Protein Atlas [Cell line -TGM1 - The Human Protein Atlas]. Вестерн-блот анализ подтвердил экспрессию TGM1 в генетически модифицированных AAV2-TGM1 клетках HEK293. Это подтверждается также на уровне анализа мРНК гена TGM1 методом ПЦР-РВ. С применением антител представлялось возможным оценить уровень белка только относительно контрольной группы, с учетом уровня эндогенной экспрессии, при этом использование праймеров на кодон-оптимизированную последовательность позволили оценить количество рекомбинантной мРНК гена TGM1.

Одной из серьезных проблем вирус-опосредованной генной терапии является недостаточная доза AAV для восстановления нормального уровня экспрессии гена, что связано с ограничением дозы токсичностью, или падением уровня экспрессии со временем. Последнее может иметь различные причины: обновление целевых клеток или их естественная гибель, иммунный ответ организма, транскрипционный сайленсинг трансгена и др. [Егорова и др., 2024].

Оценка ферментативной активности и уровня белка TGM1 дополнительно подтвердила функциональную экспрессию трансгена. В культуре клеток HEK293 после трансфекции плазмидой pAAV-TGM1 ферментативная активность TGM1 возрастала в 5,7 раза, а в клетках HaCaT - в 2,15 раза по сравнению с нативными клетками. Аналогичные результаты были получены при вирусной трансдукции: активность TGM1 в клетках HEK293 возрастала в 16,3 раза, а в HaCaT - в 2,19 раза

по сравнению с контролем. Важно отметить, что повышение активности фермента сопровождалось ростом экспрессии мРНК и синтезом белка TGM1, что подтверждается данными ПЦР-РВ. Детекция специфической белковой полосы ожидаемой молекулярной массы (-89 кДа) методом вестерн-блот анализа только в трансдуцированных клетках доказывает специфичность экспрессии целевого гена. Существенное увеличение активности фермента после трансдукции AAV2-TGM1 коррелировало с результатами иммунофлуоресцентного анализа. Полученные нами экспериментальные данные показали, что рекомбинантный вектор AAV2-TGM1 способен доставлять, экспрессировать и обеспечивать функциональную активность TGM1 в различных типах клеток.

Несмотря на различия в эффективности трансдукции AAV2 между клеточными линиями, даже частичное восстановление ферментативной активности TGM1 может быть клинически значимым. В литературе отмечается, что при ламеллярном ихтиозе достаточно повысить уровень до 10-15% от нативного уровня активности TGM1 для улучшения барьерной функции кожи и снижения тяжести симптомов [Plank et al., 2019]. В этом контексте увеличение ферментативной активности в клетках HaCaT более чем в два раза по сравнению с нативными клетками представляет собой обнадеживающий результат, особенно учитывая низкий базовый уровень экспрессии и сложности трансдукции кератиноцитов.

Кроме того, важно отметить, что измеренная активность TGM1 в генетически модифицированных клетках HEK293 и HaCaT сопоставима с уровнями, ранее описанными в работах по экзогенной доставке белка TGM1 с использованием липосом [Aufenvenne et al., 2013], что подчеркивает потенциал использования AAV-платформы в качестве альтернативы заместительной терапии. Эти данные указывают на то, что вектор AAV2-TGM1 способен индуцировать биологически релевантные уровни экспрессии даже при относительно низкой концентрации вирусного вектора - 105 in vitro или 1010 гк/кг in vivo, что снижает риски, связанные с цитотоксичностью и иммуногенностью. Это позволяет рассматривать разработанную генетическую конструкцию как перспективную основу для

проведения дальнейших исследований, направленных на получение генотерапевтических препаратов при заболеваниях кожи, ассоциированных с дефицитом TGM1.

Количество полных капсидов составило около 80% как у образца AAV2-TGM1, так и у образца AAV2-GFP, а размер вирусных частиц 21,5 нм. Исследование эффективности трансдукции используемых клеточных линий HEK293, HaCaT, PHF, SH-SY5Y, показал низкий уровень трансдукции клеток HaCaT, что подтверждалось визуально и с помощью проточного цитофлуориметра.

Согласно литературным данным установлено, что трансдукция натуральных кератиноцитов AAV2 не превышала 5%. Авторы изучили наличие рецепторов у натуральных кератиноцитов и выяснили, что несмотря на то, что клетки экспрессируют рецепторы интернализации AAV2, avP5 и a5pi интегрины, но не имеют гепарансульфатпротеогликана, который служит рецептором прикрепления ААV [Sallach et al., 2014]. На эфективность трансдукции также может влиять плотность адгезии клеток или состояние дифференцировки, когда происходит утолщение клеточной стенки - процесс ороговения.

Долгосрочная экспрессия трансгена, ограниченная цитотоксичность и способность эффективно трансдуцировать как делящиеся, так и неделящиеся клетки, являются факторами, подтвержденными в клинических исследованиях AAV, что делает эти векторы перспективными инструментами для широкого спектра применений в генной терапии у людей [Balaji et al., 2013; Berry, Asokan, 2016]. Обнаружено множество серотипов AAV как у человека, так и у приматов, каждый из которых обладает уникальным профилем трансдукции и тропизмом. Доказано, что AAV эффективно инфицируют клетки различных органов, включая печень, лёгкие, глаза и скелетные мышцы, при этом эффективность тканевой трансдукции определяется как характеристиками капсида, так и методом введения вектора [Muraine et al., 2020]. Одновременно с трансдукцией целевых клеток вирусный капсид и терапевтический ген могут попадать в нецелевые ткани и органы, провоцируя развитие побочных реакций [Егорова и др., 2024].

В нашем исследовании, было показано, что трансдукция с помощью AAV2-TGM1 снижала жизнеспособность клеток HEK293 к 7 суткам на 8%. Также была проведена оценка влияния трансфекции с помощью pAAV-TGM1 и трансдукции с помощью AAV2-TGM1 на изменение цитокинового профиля клеток HaCaT и PHF. Плазмидный вектор pAAV-TGM1 продемонстрировал умеренное влияние на провоспалительные (IL-1a, MCP-1) маркеры и факторы роста (bFGF, HGF), тогда как AAV2-TGM1 усиливал эти эффекты, особенно в первичных фибробластах человека, что может провоцировать более выраженное воспаление. Отсутствие изменений в ключевых маркерах (IP10, CTACK), связанных с противовирусным иммунитетом, и миграцией Т-лимфоцитов в кожу является благоприятным фактором для применения вектора в генной терапии [Homey et al., 2000; Luster, Ravetch, 1987].

Потенциал генной терапии при дефиците TGM1 также изучался группой Freedman, которая разработала вектор, предназначенный для доставки функционального человеческого гена TGM1 непосредственно в кожу [Freedman et al., 2021]. Данный вектор создан на основе HSV-1, обладающего естественной тропностью к наружному слою эпителия и способного проникать в клетки кожи эффективнее многих других вирусных векторов. Вектор был оценен in vitro на культуре кератиноцитов, полученных от пациентов, а также in vivo на мышах с моделью нарушенной проницаемости кожи, созданной с помощью соскоба липкой лентой или обработки ацетоном [Ekanayake-Mudiyanselage et al., 1998]. Авторы показали, что HSV-1-TGM1 увеличивает экспрессию TGM1 в коже мышей при дозе 1,07 х 109 бляшкообразующих единиц (БОЕ), при этом не было выявлено побочных эффектов [Freedman et al., 2021].

Неинтегрирующиеся векторы, такие как вирус простого герпеса 1-го типа, не встраиваются в геном хозяина и, следовательно, не нарушают функцию каких-либо генов хозяина и не представляют канцерогенных рисков, связанных с таким нарушением (например, по сравнению с ретровирусными векторами). Сравнение различных вирусных систем, применяемых для генной терапии кожи, подчеркивает уникальные особенности каждого подхода. HSV-1 обладает высокой эффективностью инфицирования эпидермальных клеток, включая кератиноциты и

эпителиальные стволовые клетки, и способен переносить большие вставки (до 3040 т.п.н.), что делает его подходящим для доставки объемных терапевтических кассет. Однако он характеризуется высокой иммуногенностью, необходимостью удаления патогенных генов из вирусного генома и ограниченной продолжительностью экспрессии из-за неинтегрирующего характера и выраженного иммунного ответа [Le Hars et al., 2025].

Хотя AAV не обладает естественными механизмами проникновения через роговой слой, он все же может трансдуцировать клетки кожи. Структуроне нарушение, физическое повреждение или воспаление могут нарушить этот барьер, облегчая доступ к кератиноцитам базального слоя и дермальным фибробластам [Keswani et al., 2012]. Кроме того, некоторые серотипы и сконструированные капсиды (например, AAV5, AAV8, AAV-DJ) демонстрируют повышенную эффективность трансдукции в клетках кожи [Sallach et al., 2014], а высокие локальные концентрации, достигаемые путем внутрикожной инъекции или скарификации, могут еще больше усилить этот эффект.

Рекомбиннтный AAV2 демонстрирует преимущества в контексте длительности экспрессии и иммунной безопасности. В частности, AAV2 обеспечивает эписомальную (внехромосомную) экспрессию, которая может сохраняться в тканях до нескольких месяцев, как показано в клинических исследованиях офтальмологических и мышечных заболеваний [Mingozzi, High, 2011]. Это особенно важно при терапии хронических кожных заболеваний, где длительная экспрессия может сократить количество повторных введений генно терпевтического препарата.

Также рассматривались лентивирусные векторы, обладающие высоким потенциалом интеграции в геном стволовых клеток базального слоя, что обеспечивает стабильную экспрессию при регенерации эпидермиса. Однако их интегративная природа сопряжена с потенциальными рисками инсерционного мутагенеза и требует более строгого контроля безопасности [Di et al., 2013].

Из-за того, что гомозиготная делеция гена TGM1 у мышей вызывает неонатальную летальность [Matsuki et al., 1998], использование модели с полным

отключением эндогенного TGM1 оказалось невозможным для проведения доклинических исследований. Таким образом, нами были выбраны классические мелкие (крысы) и крупные (свиньи) лабораторные животные для исследования функциональности и оценки острой токсичности AAV2-TGM1.

Выбор моделей лабораторных животных был обусловлен необходимостью комплексной оценки как локальных, так и системных эффектов рекомбинантного AAV2-TGM1. Крысы линии Вистар широко применяются в доклинических исследованиях благодаря высокой воспроизводимости данных, наличию валидированных аналитических методов и доступности информации о физиологических параметрах. Эта модель позволила оценить локальные гистологические изменения, биохимические показатели крови, клеточность органов иммунной системы и потенциальную токсичность в условиях стандартного метаболизма млекопитающих [Hasan et al., 2018; Arunsi et al., 2020; Ofori et al., 2025].

Использование свиней обусловлено тем, что кожа этих животных анатомически и физиологически ближе к человеческой: по толщине эпидермиса и дермы, плотности сосудистой сети, наличию волосяных фолликулов и скорости регенерации. Кроме того, свиньи имеют иммунный ответ, приближенный к человеческому, что делает их подходящей моделью для оценки безопасности и эффективности генной терапии кожи. Таким образом, применение двух видов животных позволило обеспечить перекрестную валидацию результатов и повысить потенциальную доклиническую значимость полученных данных [Kong, Bhargava, 2011; Sullivan et al., 2001].

Токсичность в более поздние периоды не исследовалась в связи с появлением векторного иммунитета при повторном введении рекомбинантного AAV. Возникающие в результате адаптивного гуморального иммунитета нейтрализующие антитела к капсиду и вирусному геному, значительно снижают эффективность работы вирусного вектора без использования иммуносупрессии [Weber, 2021].

Следующей задачей нашего исследования стала разработка и экспериментальная оценка различных вариантов доставки генетической

конструкции, направленных на обеспечение эффективной экспрессии гена TGM1 и восстановления ферментативной активности трансглутаминазы 1.

Экспрессия гена TGM1 в коже была подтверждена как у крыс, так и у свиней, что свидетельствует о функциональности рекомбинантного AAV2-TGM1 in vivo и о его способности обеспечивать трансдукцию клеток эпидермиса у мелких и крупных лабораторных животных. Эффективность доставки оценивали по уровню экспрессии трансгена и повышению уровня трансглутаминазы 1, что позволило сопоставить функциональные характеристики различных методов введения. При аппликативном введении крысам наблюдалось увеличение сигнала флуоресценции TGM1 в 1,41 раза. В тоже время, у свиней при внутрикожной инъекции сигнал флуоресценции увеличивался в 4,21 раз по сравнению с контролем. Уровни экспрессии гена TGM1 были выше, чем в работе Freedman с соавт. (2021), где локальное введение HSV-1-TGM1 у мышей вызывало достоверное повышение уровня белка на фоне отсутствия токсичности. Однако это может быть связано с особенностями проведения анализа и с разными объектами исследования (мыши и свиньи), и выбранными вирусными системами [Freedman et al., 2021]. В нашем исследовании экспрессия TGM1 у свиней снижалась к 7 суткам, что согласуется с данными Jayarajan et al. (2021), где описывается транзиторная экспрессия при неинтегрирующей доставке в кожу вектора, основанного на HSV-1 [Jayarajan et al., 2021]. Тем не менее, известно, что восстановление ферментативной активности TGM1 даже на ограниченное время может существенно улучшить барьерные функции кожи, что подтверждено экспериментами с заместительной терапией у животных с моделями ихтиоза [Aufenvenne et al., 2013; Plank et al., 2019].

При оценке эффективности вирусного вектора in vivo выявлен ряд ограничений, связанных с количественной оценкой. Во-первых, как внутрикожное, так и аппликативное локальное применение достаточно тяжело детектируется иммунофлуоресцентным методом. Во-вторых, наблюдается перекрестная реактивность на уровне белка с нативной TGM1. В-третьих, наблюдается значительная вариабельность результатов исследования, что связано с влиянием множества факторов, включая неоднородность кожных покровов, различия в их

толщине, иммунный ответ организма, а также пол экспериментальных животных [Curtis et al., 2011].

Биохимический анализ крови показал умеренное и обратимое повышение билирубина и креатинина у крыс, преимущественно на 21 сутки, что может свидетельствовать о легкой нагрузке на печень и почки. Похожие изменения наблюдались у свиней на 7 сутки, но к 28 дню показатели нормализовались. Эти данные находятся в пределах ожидаемых физиологических колебаний, аналогичных описанным в доклинических исследованиях генной терапии [Borges et al., 2024; Mücke et al., 2024]. Исследование клеточности органов иммунной системы у крыс выявила умеренное снижение жизнеспособности клеток тимуса в инъекционных группах, что согласуется с сообщениями о локальном стресс-ответе после трансдукции AAV [Ertl, 2022], однако отсутствие изменений в костном мозге и лимфоузлах свидетельствует о минимальной системной иммунотоксичности.

Гистологический анализ кожи как у крыс, так и у свиней не выявил признаков воспалительной инфильтрации, некроза или утолщения эпидермиса. Это согласуется с результатами Aufenvenne с соавт. (2013), где локальное применение белка TGM1, загруженого в липосомы и введенного гуманизированным мышам также не вызывало структурных нарушений в коже. Наблюдаемая интактность дермы и эпидермиса, а также отсутствие патологической васкуляризации, подтверждают безопасность как аппликативного, так и инъекционного введения [Aufenvenne et al., 2013].

Патогистологическая оценка внутренних органов и ЦНС как у крыс, так и у свиней не выявила существенных различий между опытными и контрольными животными. Отсутствие дегенеративных изменений, воспаления или нейротоксичности соответствует наблюдениям [Mullagulova et al., 2023], указывающим на благоприятный профиль безопасности AAV2-TGM1 при периферической доставке. При этом в исследовании биораспределения на крысах удалось детектировать незначительную экспрессию трансгена при внутрикожном и аппликативном применении в печени, почках и сердце. Полученные данные дополняют существующую литературу по использованию AAV в качестве

платформы для генной терапии кожных моногенных заболеваний, дополняя оценку риска системной токсичности.

Таким образом, AAV2-TGM1 демонстрирует потенциал для восстановления барьерной функции кожи, но требует оптимизации доставки в целевые клетки, например, с использованием ткане-специфичного промотора или модификации капсида. Повышение эффективности трандукции клеток вектором позволит снизить используемую концентрацию вектора, что может улучшить результаты цитотоксичности и иммуногенности. Вектор демонстрирует способность повышать экспрессию in vivo, при этом незначительно, но изменяя показатели биохимии крови и лейкоформулы, однако, требуются дальнейшие исследования, направленные на верификацию точности оценки его эффективности.

В связи с тем, что в исследовании использовались животные дикого типа, для объективной оценки терапевтического потенциала предложенной стратегии генной терапии требуется проведение экспериментов на модельных животных системах, имитирующих ламеллярный ихтиоз.

Проведенное исследование позволило впервые комплексно оценить эффективность и безопасность AAV-опосредованной доставки гена TGM1 в кожу. Полученные результаты показали, что данный подход способен обеспечивать экспрессию трансгена в эпидермальных и дермальных клетках, что подтверждает перспективность AAV как инструмента для генной терапии кожных заболеваний. При этом выявленные ограничения в отношении длительности экспрессии и преодоления барьеров кожи подчёркивают необходимость дальнейших разработок. Представленные данные создают важную основу для оптимизации векторных систем, включая как усовершенствование AAV, так и изучение альтернативных подходов, с использованием других вирусных векторов.

104

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В рамках настоящей работы была проведена комплексная доклиническая оценка возможности применения рекомбинантного аденоассоциированного вируса серотипа 2 для доставки гена TGM1 в кожу с целью восстановления ферментативной активности трансглутаминазы 1 при ламеллярном ихтиозе. Учитывая отсутствие этиотропных методов лечения данного заболевания и ограничения существующих симптоматических и заместительных подходов, разработка геннотерапевтической стратегии, ориентированной на локальном и безопасном воздействии, представляется актуальной и социально значимой задачей.

В ходе исследования была разработана и охарактеризована генетическая конструкция pAAV-TGM1, на основе которой получен рекомбинантный вектор AAV2-TGM1. Показано, что как плазмидная трансфекция, так и вирусная трансдукция обеспечивают экспрессию мРНК, синтез белка TGM1 и восстановление его ферментативной активности в различных клеточных линиях человека. Несмотря на ограниченную эффективность трансдукции кератиноцитов, достигнутые уровни активности трансглутаминазы 1 сопоставимы с биологически значимыми значениями, ранее описанными как достаточные для частичного восстановления барьерной функции кожи.

Исследования in vivo на мелких (крысы) и крупных (свиньи) лабораторных животных подтвердили функциональность рекомбинантного AAV2-TGM1. Было показано, что рекомбинантный AAV2-TGM1 обеспечивает экспрессию TGM1 в коже крыс и свиней при аппликативном и внутрикожном способе доставки. Повышение уровня транскрипции мРНК TGM1 и белка TGM1 подтверждено методами ПЦР-РВ и иммунофлуоресценции.

Оценка безопасности показала, что применение AAV2-TGM1 не сопровождалось выраженной цитотоксичностью, системной иммунотоксичностью или морфологическими повреждениями кожи, внутренних органов и центральной нервной системы. При этом гистологическая структура кожи, паренхиматозных органов и ЦНС сохранялась, признаков острой токсичности не выявлено.

Выявленные изменения биохимических показателей крови и клеточности иммунных органов носили умеренный и обратимый характер и находились в пределах ожидаемых физиологических колебаний. Полученные данные свидетельствуют о допустимом профиле безопасности АЛУ2-ТОМ1 для кожного применения. Изменения билирубина, креатинина и жизнеспособности клеток носили транзиторный характер и не сопровождались выраженным воспалением.

Таким образом, проведенное исследование впервые продемонстрировало возможность безопасной и функционально значимой АЛУ-опосредованной доставки гена ТОЫ1 в кожу. Полученные данные подтверждают перспективность векторной конструкции AAV2-TGM1 для генной терапии кожных заболеваний, однако высокая вариативность экспрессии, ограниченное время действия и необходимость многократного введения при наличии векторного иммунитета указывают на необходимость дальнейшей оптимизации конструкции, способа доставки и перехода к модельным животным с дефицитом ТОЫ1 для более объективной оценки терапевтической эффективности. Полученные результаты формируют экспериментальную основу для дальнейших исследований с использованием моделей аутосомно-рецессивного врожденного ихтиоза и могут рассматриваться как шаг к созданию перспективного геннотерапевтического подхода для лечения моногенных заболеваний кожи.

106 ВЫВОДЫ

1. Разработана генетическая конструкция pAAV-TGM1, содержащая кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность кДНК гена трансглутаминазы-1 (TGM1) человека. Установлена экспрессия TGM1 in vitro: в генетически модифицированных pAAV-TGM1 целевых клетках продемонстрированы наличие специфической мРНК и синтез рекомбинантного белка TGM1, обладающего ферментативной активностью, в 2,15 раз превышающей уровень в нативных клетках.

2. Получен рекомбинантный аденоассоциированный вирус 2 серотипа, содержащий кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность кДНК гена TGM1 человека (AAV2-TGM1). Установлена эффективность AAV2-TGM1 in vitro: в трансдуцированных AAV2-TGM1 клетках отмечены повышение уровня экспрессии мРНК и синтез рекомбинантного белка TGM1 с ферментативной активностью, в 2,19 раз превышающей активность в нативных клетках.

3. Полученный препарат аденоассоциированного вируса 2 серотипа, кодирующий ген TGM1, содержит около 80% полных капсидов, без примесей клеточного дебриса, агрегатов вирусных частиц и белков. При трансдукции клеток вирусный препарат приводит к незначительному снижению жизнеспособности и изменению провоспалительных (IL-1a, MCP-1) и регенеративных (bFGF, HGF) маркеров.

4. Аппликативное применение AAV2-TGM1 приводит к повышению уровня белка TGM1 в 1,41 раза в эпидермисе крыс относительно контрольной группы. Патогистологический анализ не выявил существенных отклонений в структуре эпидермиса, паренхиматозных органов и центральной нервной системы. Внутрикожное и аппликативное введение AAV2-TGM1 не вызывает значимых изменений клеточности органов иммунной системы, биохимических показателей крови и лейкоформулы подопытных крыс.

5. Внутрикожное введение AAV2-TGM1 свиньям приводит к увеличению уровня белка TGM1 в эпидермисе в 4,21 раза по сравнению с контрольной группой. Патогистологический анализ не выявил существенных изменений в структуре

эпидермиса, паренхиматозных органов и центральной нервной системы, биохимические показатели крови оставались в пределах нормы.

108

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аветисян, К.О. Особенности клеточного иммунитета у детей с врожденным ихтиозом и их роль в стратегии патогенетической терапии заболевания / К.О. Аветисян, Н.Н. Мурашкин, С.Г. Макарова, С.С. Петричук, Д.Г. Купцова // Вопросы современной педиатрии. - 2023. - Т. 22. - № 5. - С. 415-424.

2. Амелина, С.С. Нозологический спектр генодерматозов в 12 районах Ростовской области и популяциях европейской части России / С.С. Амелина, Е.В. Дегтерева, М.А. Амелина, Н.В. Ветрова, Т.И. Пономарева, Р.А. Зинченко // Медицинская генетика. - 2017. - Т. 16. - № 8. - С. 20-26.

3. Бейлин, А.К. Методы генной терапии для лечения врожденного буллезного эпидермолиза / А.К. Бейлин, Н.Г. Гурская, Е.А. Воротеляк // Вестник Московского университета. Серия 16. Биология. - 2018. - № 4. - С. 233-241.

4. Бейлин, А.К. Реконструированный эпидермис человека in vitro — модель для фундаментальных и прикладных исследований кожи человека / А.К. Бейлин, А.Л. Риппа, В.И. Шаробаро, Н.Г. Гурская, Е.А. Воротеляк // Вестник дерматологии и венерологии. - 2020. - Т. 97. - № 2. - С. 24-34.

5. Вассерман, Н.Н. Спектр мутаций при аутосомно-рецессивном врожденном ихтиозе у больных в Российской Федерации / Н.Н. Вассерман, Г.М. Баязутдинова, С.И. Браславская, Н.В. Ряднинская, А.Л. Чухрова, А.В. Поляков // Медицинская генетика. - 2015. - Т. 14. - № 11. - С. 23-28.

6. Воротеляк, Е.А. Регенерация кожи: очевидные модели и неочевидные результаты / Е.А. Воротеляк [и др.] // Гены и клетки. - 2022. - Т. 17. - № 3. - С. 4757.

7. Гаранин, А.А. Эпонимический справочник по синдромной патологии / А.А. Гаранин, Э.М. Гильмияров, О.Б. Калинкина, А.В. Колсанов, И.И. Лосев [и др.] // Самара: ИПК «Самарская губерния» - 2015. - 784 с.

8. Дворянкова, Е.В. Ихтиоз. Что важно знать специалисту / Е.В. Дворянкова, О.О. Мельниченко, В.Н. Красникова, И.М. Корсунская // РМЖ. Медицинское обозрение. - 2019. - Т. 3. - № 12. - С. 25-30.

9. Егорова, Т.В. Генная терапия наследственных заболеваний на основе аденоассоциированных вирусных векторов: современные проблемы применения и пути их решения / Т.В. Егорова, А.А. Пискунов, Д.А. Потеряев // БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2024. - Т. 24. - № 2. - С. 123-139.

10. Иванов, В.А. Ихтиоз Арлекина / В.А. Иванов, А.И. Ефремова // Интегративные тенденции в медицине и образовании. - 2023. - Т. 3. - С. 66-69.

11. Иваненко, А.В. Геномное редактирование в терапии наследственных заболеваний кожи / А.В. Иваненко, Н.А. Евтушенко, Н.Г. Гурская // Молекулярная биология. - 2022. - Т. 56. - № 6. - С. 990-1013.

12. Карамова, А.Э. Эффективность живого эквивалента кожи в терапии врожденного буллезного эпидермолиза / А.Э. Карамова, А.А. Кубанов, Е.А. Воротеляк [и др.] // Вестник дерматологии и венерологии. - 2023. - Т. 99. - № 6. -С. 29-36.

13. Лебедева, Ю.Н. Создание клинических и производственных биобанков кожи и ее продуктов в системе здравоохранения Российской Федерации / Ю.Н. Лебедева, Ю.В. Суханов, Е.М. Фоминых [и др.] // Трансплантология. - 2025. - Т. 17. - № 1. - С. 90-107.

14. Мельниченко, О.О. К вопросу об эпидемиологии врожденного ихтиоза в Москве / О.О. Мельниченко, О.В. Жукова, О.Л. Новожилова, И.М. Корсунская //Медицинский алфавит. - 2021. - № 18. - С. 59-62.

15. Муллагулова, А.И. Модуляция ферментативной активности арилсульфатазы A с помощью рекомбинантного аденоассоциированного вируса: дис. ... канд. биол. наук / А.И. Муллагулова. - Казань, 2024. - 128 с.

16. Мурашкин, Н.Н. Врожденный ихтиоз: клинико-генетические характеристики заболевания / Н.Н. Мурашкин, К.О. Аветисян, Р.А. Иванов, С.Г. Макарова // Вопросы современной педиатрии. - 2022. - Т. 21. - № 5. - С. 362-377.

17. Очоа Лусуриага, Д. Врожденная ихтиозиформная эритродермия / Д. Очоа Лусуриага, А.С.М. Аргуета Матуте, А.Я. Инаури, Н.Г. Короткий, Э.А. Баткаев // Вестник последипломного медицинского образования. - 2021. - № 2. - С. 14-19.

18. Пономарев, А.С. Способ повышения экспрессии трансглутаминазы 1 в эпидермисе кожи с использованием рекомбинантного аденоассоциированного вируса: пат. 2821567 Рос. Федерация / А.С. Пономарев, В.В. Соловьева, А.А. Ризванов; заявитель и патентообладатель ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет». - Опубл. 25.06.2024. - Бюл. № 18.

19. Пузырев, В.П. Наследственные болезни у якутов / В.П. Пузырев, Н.Р. Максимова (Ноговицына) // Генетика. - 2008. - Т. 44. - № 10. - С. 1317-1324.

20. Соловьева, В.В. Применение рекомбинантного гистона H1.3 для вирусного и невирусного переноса нуклеиновых кислот в культуре клеток: дис. ... канд. биол. наук / В.В. Соловьева. - Казань, 2014. - 138 с.

21. Союз педиатров России: клинические рекомендации [Электронный ресурс]. - URL: https://www.pediatr-russia.ru/information/klin-rek (дата обращения: 29.08.2025).

22. Сукало, А.В. Врожденный ихтиоз у детей / А.В. Сукало, Л.Б. Жидко, Е.А. Лазарь. - Минск: Беларуская навука, 2013. - 70 с.

23. Тальникова, Е.Е. Ихтиоз: к вопросу наследования / Е.Е. Тальникова, В.Н. Шерстнева, А.В. Моррисон, С.Р. Утц // Саратовский научно-медицинский журнал. - 2016. - Т. 12. - № 3. - С. 513-517.

24. Фоминых, Е.М. Трансплантация тканевых эквивалентов в лечении некоторых повреждений кожи / Е.М. Фоминых, В.Н. Митрофанов, О.П. Живцов [и др.] // Вестник трансплантологии и искусственных органов. - 2020. - Т. 22. - № 1. - С. 165-173.

25. Шаймарданова, А.А. Восстановление активности ß-гексозаминидазы A с помощью генетически модифицированных клеток: дис. ... канд. биол. наук / А.А. Шаймарданова. - Казань, 2023. - 148 с.

26. Agarwal, P. 263 First in human use of a novel in vivo gene therapy for the treatment of autosomal recessive congenital ichthyosis: Results of a phase I/II placebo controlled trial / P. Agarwal, B. Agostini, A.C. L'Hortet, P. Zhang, S. Krishnan, A. Paller // J. of Inv. Derm. - 2020. - V.140. - P. 263.

27. Ain, Q.U. Gene Delivery to the Skin - How Far Have We Come? / Q.U. Ain, E.V.R. Campos, A. Huynh, D. Witzigmann, S. Hedtrich // Tr. in Biotech. - 2021. - V. 39, № 5. - P. 474-487. 29.

28. Akiyama, M. Compound heterozygous ABCA12 mutations including a novel nonsense mutation underlie harlequin ichthyosis / M. Akiyama, K. Sakai, T. Sato, J.R. McMillan, M. Goto, D. Sawamura, H. Shimizu // Dermatology. - 2007. - V. 215, № 2. - P. 155-159.

29. Akiyama, M. Mutations in lipid transporter ABCA12 in harlequin ichthyosis and functional recovery by corrective gene transfer / M. Akiyama, Y. Sugiyama-Nakagiri, K. Sakai, J.R. McMillan, M. Goto, K. Arita, Y. Tsuji-Abe, N. Tabata, K. Matsuoka, R. Sasaki, D. Sawamura, H. Shimizu // The J. of Clin. Invest. -2005. - V. 115, № 7. - P. 1777-1784.

30. Akiyama, M. Severe congenital ichthyosis of the neonate / M. Akiyama // Int. J. of Derm.. - 1998. - V. 37, № 10. - P. 722-728.

31. Akiyama, M. The clinical spectrum of nonbullous congenital ichthyosiform erythroderma and lamellar ichthyosis / M. Akiyama, D. Sawamura, H. Shimizu // Clin. and Exp. Derm. - 2003. - V. 28, № 3. - P. 235-240.

32. Akiyama, M. Updated molecular genetics and pathogenesis of ichthiyoses / M. Akiyama // Nagoya J. of Med. S.- 2011. - V. 73, № 3-4. - P. 79-90.

32. Alibert, J.-L.-M. Description des maladies de la peau: observées à l'Hôpital Saint-Louis, et exposition des meilleures méthodes suivies pour leur traitement. Description des maladies de la peau / J.-L.-M. Alibert. - Bruxelles : Wahlen, 1825. -664 p.

33. Allen, A. Significant absorption of topical tacrolimus in 3 patients with Netherton syndrome / A. Allen, E. Siegfried, R. Silverman, M.L. Williams, P.M. Elias, S.K. Szabo, N.J. Korman // Arch. of Derm. - 2001. - V. 137, № 6. - P. 747-750.

34. Arunsi, U.O. Evaluation of the biochemical, haematological and histopathological parameters of female Wistar rats fed with aqueous and ethanol extracts of Aspilia africana leaves. / U.O. Arunsi, G.C. Chinyere, K.O. Ngwogu, A.C. Ngwogu,

O.C. Atasie, U.A. Oti, J.K. Akujuobi, C. Udeogu, C. Ibe // J. of Herb. Pharm. - 2020. -V. 9, № 3. - P. 257-267.

35. Aufenvenne, K. Long-term faithful recapitulation of transglutaminase 1-deficient lamellar ichthyosis in a skin-humanized mouse model, and insights from proteomic studies / K. Aufenvenne, R.H. Rice, I. Hausser, V. Oji, H.C. Hennies, M.D. Rio, H. Traupe, F. Larcher // The J. of Inv. Derm. - 2012. - V. 132, № 7. - P. 1918-1921.

36. Aufenvenne, K. Topical enzyme-replacement therapy restores transglutaminase 1 activity and corrects architecture of transglutaminase-1-deficient skin grafts / K. Aufenvenne, F. Larcher, I. Hausser, B. Duarte, V. Oji, H. Nikolenko, M. Del Rio, M. Dathe, H. Traupe // Am. J. Hum. Genet. - 2013. - V. 93, № 4. - P. 620-630.

37. Balaji, S. Pseudotyped adeno-associated viral vectors for gene transfer in dermal fibroblasts: implications for wound-healing applications / S. Balaji, A. King, Y. Dhamija, L.D. Le, A.F. Shaaban, T.M. Crombleholme, S.G. Keswani // The J. of Surg. Res. - 2013. - V. 184, № 1. - P. 691-698.

38. Bassotti, A. Successful treatment with topical N-acetylcysteine in urea in five children with congenital lamellar ichthyosis / A. Bassotti, S. Moreno, E. Criado // Ped. Derm. - 2011. - V. 28, № 4. - P. 451-455.

39. Beck, B. Unravelling cancer stem cell potential / B. Beck, C. Blanpain // Nat. Rev. Cancer. - 2013. - V. 13, № 10. - P. 727-738.

40. Beilin, A.K. Signatures of dermal fibroblasts from RDEB pediatric patients / A.K. Beilin, N.A. Evtushenko, D.K. Lukyanov, N.N. Murashkin, E.T. Ambarchian, A.A. Pushkov, K.V. Savostyanov, A.P. Fisenko, O.S. Rogovaya, A.V. Vasiliev, E.A. Vorotelyak, N.G. Gurskaya // Int. J. of Mol. Sci.- 2021. - V. 22, № 4. - P. 1792.

41. Berry, G.E. Cellular transduction mechanisms of adeno-associated viral vectors / G.E. Berry, A. Asokan // Cur. Op. in Vir. - 2016. - V. 21, P. 54-60.

42. Borges, B. Prenatal AAV9-GFP administration in fetal lambs results in transduction of female germ cells and maternal exposure to virus / B. Borges, A. Varthaliti, M. Schwab, M.T. Clarke, C. Pivetti, N. Gupta, C.R. Cadwell, G. Guibinga, S. Phillips, T. Del Rio, F. Ozsolak, D. Imai-Leonard, L. Kong, D.J. Laird, A. Herzeg, C.J.

Sumner, T.C. MacKenzie // Mol. Ther. Meth. & Clin. Dev. - 2024. - V. 32, № 2. -P. 101263.

43. Bosko, C.A. Skin Barrier Insights: From Bricks and Mortar to Molecules and Microbes / C.A. Bosko // J. of dr. in derm. - 2019. - V. 18, Skin Barrier Insights. -№ 1. - P. 63-67.

44. Braun-Falco, M. Efficient gene transfer into human keratinocytes with recombinant adeno-associated virus vectors / M. Braun-Falco, A. Doenecke, H. Smola, M. Hallek // Gene Therapy. - 1999. - V. 6, № 3. - P. 432-441.

45. Candi, E. The cornified envelope: a model of cell death in the skin / E. Candi, R. Schmidt, G. Melino // Nat.Rev. Mol. Cell Biol. - 2005. - V. 6, № 4. - P. 328340.

46. Cell line - TGM1 - The Human Protein Atlas [Электронный ресурс]. -URL: https://www.proteinatlas.org/ENSG00000092295-TGM1/cell+line (дата обращения: 30.08.2025).

47. Chacon-Camacho, O.F. High TGM1 allelic heterogeneity causing lamellar ichthyosis in a small geographic area in South Mexico: Another example of the «Réunion Paradox» / O.F. Chacon-Camacho, M.C. Astiazaran, G. Vera-Duarte, H. Gutiérrez-Mùgica, N. Macriz-Romero, E.O. Graue-Hernandez, J.C. Zenteno // Eu. J. of Med. Gen. - 2023. - V. 66, № 10. - P. 104842.

48. Cheng, R. Next-generation sequencing through multi-gene panel testing for diagnosis of hereditary ichthyosis in Chinese / R. Cheng, J. Liang, Y. Li, J. Zhang, C. Ni, H. Yu, X. Kong, M. Li, Z. Yao // Clin. Gen. - 2020. - V. 97, № 5. - P. 770-778.

49. Chermnykh, E.S. Transglutaminase 3: the involvement in epithelial differentiation and cancer / E.S. Chermnykh, E.V. Alpeeva, E.A. Vorotelyak // Cells. -2020. - V. 9, № 9. - P. 1996.

50. Chiramel, M.J. Genotype of autosomal recessive congenital ichthyosis from a tertiary care center in India / M.J. Chiramel, L. Mathew, R. Athirayath, A. Chapla, D. Sathishkumar, T. Mani, S. Danda, R. George // Ped. Derm. - 2022. - V. 39, № 3. - P. 420-424.

51. Choate, K.A. Corrective gene transfer in the human skin disorder lamellar ichthyosis / K.A. Choate, D.A. Medalie, J.R. Morgan, P.A. Khavari // Nat. Med. - 1996. - V. 2, № 11. - P. 1263-1267.

52. Choate, K.A. Transglutaminase 1 delivery to lamellar ichthyosis keratinocytes / K.A. Choate, T.M. Kinsella, M.L. Williams, G.P. Nolan, P.A. Khavari // Hum. Gene. Ther. - 1996. - V. 7, № 18. - P. 2247-2253.

53. Chulpanova, D.S. Current Strategies for the Gene Therapy of Autosomal Recessive Congenital Ichthyosis and Other Types of Inherited Ichthyosis / D.S. Chulpanova, A.A. Shaimardanova, A.S. Ponomarev, S. Elsheikh, A.A. Rizvanov, V.V. Solovyeva // Int. J. of Mol. Sci. - 2022. - V. 23, № 5. - P.2506.

54. Cordisco, A. Prenatal ultrasound detection of collodion membrane in association with an autosomal recessive congenital ichthyosis due to transglutaminase 1 deficiency / A. Cordisco, V. Lozza, C. Di Marco, A. Cecconi, E. Pisaneschi, S.F. Berti, L. Adamo, I. Lori, G. Belli, B. Gambi // Ped. Derm. - 2024. - V. 41, № 3. - P.512-514.

55. Cottle, D.L. Fetal inhibition of inflammation improves disease phenotypes in harlequin ichthyosis / D.L. Cottle, G.M.A. Ursino, S.C.I. Ip, L.K. Jones, T. Ditommaso, D.F. Hacking, N.E. Mangan, N.A. Mellett, K.J. Henley, D. Sviridov, C.A. Nold-Petry, M.F. Nold, P.J. Meikle, B.T. Kile, I.M. Smyth // Hu. Mol. Gen. - 2015. - V. 24, № 2. -P. 436-449.

56. Craiglow, B.G. Ichthyosis in the newborn / B.G. Craiglow // Sem. in Perinat. - 2013. - V. 37, № 1. - P. 26-31.

57. Cuggino, J.C. Thermosensitive nanogels based on dendritic polyglycerol and N-isopropylacrylamide for biomedical applications / J.C. Cuggino, M.C. Strumia, P. Welker, K. Licha, D. Steinhilber, R.-C. Mutihac, M. Calderón // Soft Matter. - 2011. -V.7, № 23. - P. 11259-11266.

58. Cunha, D.L. hiPSC-derived epidermal keratinocytes from ichthyosis patients show altered expression of cornification markers / D.L. Cunha, A. Oram, R. Gruber, R. Plank, A. Lingenhel, M.K. Gupta, J. Altmüller, P. Nürnberg, M. Schmuth, J. Zschocke, T. Saric, K.M. Eckl, H.C. Hennies // Int. J. of Mol. Sci. - 2021. - V. 22, № 4. - P. 1785.

59. Curtis, A. Temporal Variations of Skin Pigmentation in C57B1/6 Mice Affect Optical Bioluminescence Quantitation / A. Curtis, K. Calabro, J.-R. Galarneau, I.J. Bigio, T. Krucker // Mol. Im. and Bio. - 2011. - V. 13, № 6. - P. 1114-1123.

60. Dang, L. Correction of the pathogenic mutation in TGM1 gene by adenine base editing in mutant embryos / L. Dang, X. Zhou, X. Zhong, W. Yu, S. Huang, H. Liu, Y. Chen, W. Zhang, L. Yuan, L. Li, X. Huang, G. Li, J. Liu, G. Tong // Mol. Ther. -2022. - V. 30, № 1. - P. 175-183.

61. Dang, L. Correction of the pathogenic mutation in TGM1 gene by adenine base editing in mutant embryos / L. Dang, X. Zhou, X. Zhong, W. Yu, S. Huang, H. Liu, Y. Chen, W. Zhang, L. Yuan, L. Li, X. Huang, G. Li, J. Liu, G. Tong // Mol. Ther. -2022. - V. 30, № 1. - P. 175-183.

62. Das, S. Maternal skin allograft for cicatricial ectropion in congenital icthyosis / S. Das, S.G. Honavar, N. Dhepe, M.N. Naik // Opht. Pl. and Rec. Surg. - 2010.

- V. 26, № 1. - P. 42-43.

63. Di, W.-L. Generation and clinical application of gene-modified autologous epidermal sheets in Netherton Syndrome: Lessons learned from a phase 1 trial / W.-L D h gp. // Hu. Gene Ther. - 2019. - V. 30, № 9. - P. 1067-1078.

64. Di, W.L. Phase I study protocol for еx vivo lentiviral gene therapy for the inherited skin disease, netherton syndrome / W.L. Di, J.E. Mellerio, C. Bernadis, J. Harper, A. Abdul-Wahab, S. Ghani, L. Chan, M. Martinez-Queipo, H. Hara, A.M. McNicol, F. Farzaneh, J. McGrath, A. Thrasher, W. Qasim // Hu. Gene Ther. Clin. Dev.

- 2013. - V. 24, № 4. - P. 182-190.

65. Diociaiuti, A. Cross-sectional study on autosomal recessive congenital ichthyoses: Association of genotype with disease severity, phenotypic, and ultrastructural features in 74 Italian patients / A. Diociaiuti, M. Corbeddu, S. Rossi, E. Pisaneschi, C. Cesario, A.G. Condorelli, T. Samela, S. Giancristoforo, A. Angioni, G. Zambruno, A. Novelli, R. Alaggio, D. Abeni, M. El Hachem // Dermatology. - 2024. - V. 240, № 3. -P. 397-413.

66. Diociaiuti, A. Role of molecular testing in the multidisciplinary diagnostic approach of ichthyosis / A. Diociaiuti, M. El Hachem, E. Pisaneschi, S. Giancristoforo, S. Genovese, P. Sirleto, R. Boldrini, A. Angioni // Orph. J. of R. Dis. - 2016. - V. 11. - P. 4.

67. Ebrahimi Samani, S. Transglutaminase 1: Emerging functions beyond skin / S. Ebrahimi Samani, H. Tatsukawa, K. Hitomi, M.T. Kaartinen // Int. J. of Mol. Sci. -2024. - V. 25, № 19. - P. 10306.

68. Eckert, R.L. Transglutaminase regulation of cell function / R.L. Eckert, M.T. Kaartinen, M. Nurminskaya, A.M. Belkin, G. Colak, G.V.W. Johnson, K. Mehta // Phys. Rev. - 2014. - V. 94, № 2. - P. 383-417.

69. Eckhart, L. Cell death by cornification / L. Eckhart, S. Lippens, E. Tschachler, W. Declercq // Bioch. Et Bioph. Acta. - 2013. - V. 1833, № 12. - P. 34713480.

70. Ekanayake-Mudiyanselage, S. Expression of epidermal keratins and the cornified envelope protein involucrin is influenced by permeability barrier disruption / S. Ekanayake-Mudiyanselage, H. Aschauer, F.P. Schmook, J.M. Jensen, J.G. Meingassner, E. Proksch // The J. of Invest. Derm. - 1998. - V. 111, № 3. - P. 517-523.

71. Elias, P.M. Abnormal barrier function in the pathogenesis of ichthyosis: Therapeutic implications for lipid metabolic disorders / P.M. Elias, M.L. Williams, K.R. Feingold // Clin. in Derm. - 2012. - V. 30, № 3. - P.311-322

72. Ertl, H.C.J. Immunogenicity and toxicity of AAV gene therapy / H.C.J. Ertl // Front. in Immun. - 2022. - V. 13, P. 975803.

73. Farasat, S. Novel transglutaminase-1 mutations and genotypephenotype investigations of 104 patients with autosomal recessive congenital ichthyosis in the USA / S. Farasat, M.H. Wei, M. Herman, D.J. Liewehr, S.M. Steinberg, S.J. Bale, P. Fleckman, J.R. Toro // J. of Med. Gen. - 2009. - V. 46, № 2. - P. 103-111.

74. Fioretti T. Comprehensive molecular analysis of disease-related genes as first-tier test for early diagnosis, classification, and management of patients affected by nonsyndromic ichthyosis / T. Fioretti h gp. // Biomedicines. - 2024. - V. 12, № 5. -P. 1112.

75. Fioretti, T. Multi-Gene next-generation sequencing for molecular diagnosis of autosomal recessive congenital ichthyosis: A genotype-phenotype study of four Italian patients / T. Fioretti, L. Auricchio, A. Piccirillo, G. Vitiello, A. Ambrosio, F. Cattaneo, R. Ammendola, G. Esposito // Diagnostics. - 2020. - V. 10. - № 12. - P. 995.

76. Fischer, J. Autosomal recessive congenital ichthyosis / J. Fischer // The J. of Invest. Derm. - 2009. - V. 129, № 6. - P. 1319-1321.

77. Fischer, J. Syndromic ichthyoses / J. Fischer, A. Hotz, K. Komlosi // Med. Gen. - 2023. - V. 35, № 1. - P. 23-32.

78. Freedman, J.C. Preclinical evaluation of a modified Herpes simplex virus type 1 vector encoding human TGM1 for the treatment of autosomal recessive congenital ichthyosis / J.C. Freedman, T.J. Parry, P. Zhang, A. Majumdar, S. Krishnan, L.K. Regula, M. O'Malley, S. Coghlan, S.D. Yogesha, S. Ramasamy, P. Agarwal // J Inv. Derm. -2021. - V. 141, № 4. - P. 874-882.

79. Freiberg, R.A. A model of corrective gene transfer in X-linked ichthyosis / R.A. Freiberg, K.A. Choate, H. Deng, E.S. Alperin, L.J. Shapiro, P.A. Khavari // Hu. Mol. Gen. - 1997. - V. 6, № 6. - P. 927-933.

80. Frost, P. Ichthyosiform dermatoses. Classification based on anatomic and biometric observations / P. Frost, E.J. Van Scott // Arch. of Derm. - 1966. - V. 94, № 2. - P. 113-126.

81. Gagnoux-Palacios, L. Assessment of optimal transduction of primary human skin keratinocytes by viral vectors / L. Gagnoux-Palacios, C. Hervouet, F. Spirito, S. Roques, M. Mezzina, O. Danos, G. Meneguzzi // The J. of Gene Med. - 2005. - V. 7, № 9. - P. 1178-1186.

82. Gatzka, M. T-cell plasticity in inflammatory skin diseases--the good, the bad, and the chameleons / M. Gatzka, K. Scharffetter-Kochanek // J. of the Germ. Soc. of Derm. - 2015. - V. 13, № 7. - P. 647-652.

83. Ghosh, S. Viral vector systems for gene therapy: A Comprehensive literature review of progress and biosafety challenges / S. Ghosh, A.M. Brown, C. Jenkins, K. Campbell // J. of the Am. Bio. Safe. Assoc. - 2020. - V. 25, № 1. - P. 7-18.

84. Ginn, S.L. Gene therapy clinical trials worldwide to 2023-an update / S.L. Ginn, M. Mandwie, I.E. Alexander, M. Edelstein, M.R. Abedi // The J. of Gene Med. -2024. - V. 26, № 8. - P. e3721.

85. Gorell, E. Gene therapy for skin diseases / E. Gorell, N. Nguyen, A. Lane, Z. Siprashvili // Cold Spring Harbor Persp. in Med. - 2014. - V. 4, № 4. - P. a015149.

86. Gross, J. Un cas d'exfoliation lamelleuse des noubeaunes / J. Gross, L. Török // Ann. de dermat. et syph. - 1895. - V. 3. - P. 1041.

87. Guide, S.V. Trial of Beremagene Geperpavec (B-VEC) for dystrophic epidermolysis bullosa / S.V. Guide, M.E. Gonzalez, I.S. Bagci, B. Agostini, H. Chen, G. Feeney, M. Steimer, B. Kapadia, K. Sridhar, L. Quesada Sanchez, F. Gonzalez, M. Van Ligten, T.J. Parry, S. Chitra, L.A. Kammerman, S. Krishnan, M.P. Marinkovich // New Eng. J. of Med. - 2022. - V. 387, № 24. - P. 2211-2219.

88. Gülnerman, E.K. Novel compound heterozygous mutations of TGM1 Gene identified in a Turkish collodion baby diagnosed with non-bullous congenital ichthyosiform erythroderma / E.K. Gülnerman, N. Hanedan, M. Akillioglu, G. Kayhan, E. Adi§en, Ö. Erdem, Í.M. Hirfanoglu, E. Ergenekon, E.E. Önal, C. Türkyilmaz, E. Ko? // Ann.of Der. - 2023. - V. 35, № 2. - P. S234-S238.

89. Gutiérrez-Cerrajero, C. Ichthyosis / C. Gutiérrez-Cerrajero, E. Sprecher, A.S. Paller, M. Akiyama, J. Mazereeuw-Hautier, A. Hernández-Martín, R. González-Sarmiento // Nat. Rev. Dis. Prim- 2023. - V. 9, № 1. - P. 2.

90. Halverstam, C.P. Cushing syndrome from percutaneous absorption of 1% hydrocortisone ointment in Netherton syndrome / C.P. Halverstam, A. Vachharajani, S.B. Mallory // Ped. Derm. - 2007. - V. 24, № 1. - P. 42-45.

91. Hasan, K.Md.M. Biochemical and histopathological profiling of Wistar rat treated with Brassica napus as a supplementary feed / K.Md.M. Hasan, N. Tamanna, Md.A. Haque // Fd. Sc. and Hu. Well. - 2018. - V. 7, № 1. - P. 77-82.

92. Haug, S. Adeno-associated virus vectors are able to restore fatty aldehyde dehydrogenase-deficiency. Implications for gene therapy in Sjogren-Larsson syndrome / S. Haug, M. Braun-Falco // Arch. of Derm. Res. - 2005. - V. 296, № 12. - P. 568-572.

93. Haug, S. Restoration of fatty aldehyde dehydrogenase deficiency in Sjögren-Larsson syndrome / S. Haug, M. Braun-Falco // Gene Therapy. - 2006. - V. 13, № 13. - P. 1021-1026.

94. Hengge, U.R. Adeno-associated virus expresses transgenes in hair follicles and epidermis / U.R. Hengge, A. Mirmohammadsadegh // Molecular Therapy: The J. of the Am. Soc. of Gene Ther. - 2000. - V. 2, № 3. - P. 188-194.

95. Herman, M.L. Transglutaminase-1 gene mutations in autosomal recessive congenital ichthyosis: Summary of mutations (including 23 novel) and modeling of TGase-1 / M.L. Herman, S. Farasat, P.J. Steinbach, M.H. Wei, O. Toure, P. Fleckman, P. Blake, S.J. Bale, J.R. Toro // Hu. Mut. - 2009. - V. 30, № 4. - P. 537-547.

96. Hernández-Martín, A. Prevalence of autosomal recessive congenital ichthyosis: A population-based study using the capture-recapture method in Spain / A. Hernández-Martín, I. Garcia-Doval, B. Aranegui, P. De Unamuno, L. Rodríguez-Pazos, M.A. González-Enseñat, A. Vicente, A. Martín-Santiago, B. Garcia-Bravo, M. Feito, E. Baselga, S. Círia, R. De Lucas, M. Ginarte, R. González-Sarmiento, A. Torrelo // J. of the Am. Ac. of Derm. - 2012. - V. 67, № 2. - P. 240-244.

97. Hirsch, T. Adenoviral gene delivery to primary human cutaneous cells and burn wounds / T. Hirsch, S. von Peter, G. Dubin, D. Mittler, F. Jacobsen, M. Lehnhardt, E. Eriksson, H.-U. Steinau, L. Steinstraesser // Mol. Med. - 2006. - V. 12, № 9-10. -P. 199-207.

98. Hitomi, K. Transglutaminases in skin epidermis / K. Hitomi // Eu. J. of derm. - 2005. - V. 15, № 5. - P. 313-319.

99. Hohl, D. In vitro and rapid in situ transglutaminase assays for congenital ichthyoses--a comparative study / D. Hohl, D. Aeschlimann, M. Huber // The Journal of Invest.e Derm. - 1998. - V. 110, № 3. - P. 268-271.

100. Homey, B. Cutting edge: the orphan chemokine receptor G protein-coupled receptor-2 (GPR-2, CCR10) binds the skin-associated chemokine CCL27 (CTACK/ALP/ILC) / B. Homey, W. Wang, H. Soto, M.E. Buchanan, A. Wiesenborn, D. Catron, A. Müller, T.K. McClanahan, M.C. Dieu-Nosjean, R. Orozco, T. Ruzicka, P.

Lehmann, E. Oldham, A. Zlotnik // J. of Immun. (Baltimore, Md.: 1950). - 2000. -V. 164, № 7. - P. 3465-3470.

101. Huber, L.A. Mapping cells and sub-cellular organelles on 2-D gels: «new tricks for an old horse» / L.A. Huber // FEBS Letters. - 1995. - V. 369, № 1. - P. 122-125.

102. Huber, M. Efficient in vitro transfection of human keratinocytes with an adenovirus-enhanced receptor-mediated system / M. Huber, A. Limat, E. Wagner, D. Hohl // The J. of Invest. Derm.. - 2000. - V. 114, № 4. - P. 661-666.

103. Huber, M. Mutations of keratinocyte transglutaminase in lamellar ichthyosis / M. Huber, I. Rettler, K. Bernasconi, E. Frenk, S.P. Lavrijsen, M. Ponec, A. Bon, S. Lautenschlager, D.F. Schorderet, D. Hohl // Science - 1995. - V. 267, № 5197.

- P. 525-528.

104. Hwang, J.-H. Ex vivo live full-thickness porcine skin model as a versatile in vitro testing method for skin barrier research / J.-H. Hwang, H. Jeong, N. Lee, S. Hur, N. Lee, J.J. Han, H.W. Jang, W.K. Choi, K.T. Nam, K.-M. Lim // Int. J. of Mol. Sci. -2021. - V. 22, № 2. - P. 657.

105. Itoh, M. Generation of 3D skin equivalents fully reconstituted from human induced pluripotent stem cells (iPSCs) / M. Itoh, N. Umegaki-Arao, Z. Guo, L. Liu, C.A. Higgins, A.M. Christiano // Pl. One. - 2013. - V. 8, № 10. - P. e77673.

106. Ivanenko, A.V. Genome editing in therapy of genodermatoses / A.V. Ivanenko, N.A. Evtushenko, N.G. Gurskaya // Mol. Bio. (Mos.). - 2022. - V. 56, № 6. -P. 921-941.

107. Jayarajan, V. Ex vivo gene modification therapy for genetic skin diseases

- recent advances in gene modification technologies and delivery / V. Jayarajan, E. Kounatidou, W. Qasim, W.L. Di // Exp. Derm. - 2021. - V. 30, № 7. - P. 887-896.

108. Jensen, T.G. Correction of steroid sulfatase deficiency by gene transfer into basal cells of tissue-cultured epidermis from patients with recessive X-linked ichthyosis / T.G. Jensen, U.B. Jensen, P.K. Jensen, H.H. Ibsen, F. Brandrup, A. Ballabio, L. Bolund // Exp. Cell Res. - 1993. - V. 209, № 2. - P. 392-397.

109. Joosten, M.D.W. New developments in the molecular treatment of ichthyosis: review of the literature / M.D.W. Joosten, J.M.K. Clabbers, N. Jonca, J. Mazereeuw-Hautier, A.H. Gostynski // Orph. J. of R. Dis. - 2022. - V. 17, № 1. - P. 269.

110. Joussain, C. Gene therapy of neurological and non-neurological diseases using herpes simplex virus vectors / C. Joussain, A.L. Epstein // Med. Res. Arch. - 2024. - V. 12, № 7. - P. 135.

111. Keswani, S.G. Pseudotyped adeno-associated viral vector tropism and transduction efficiencies in murine wound healing / S.G. Keswani, S. Balaji, L. Le, A. Leung, F.-Y. Lim, M. Habli, H.N. Jones, J.M. Wilson, T.M. Crombleholme // Wo. Rep. and Reg. - 2012. - V. 20, № 5. - P. 592-600.

112. Khan, A. Revolutionary breakthrough: FDA approves Vyjuvek, the first topical gene therapy for dystrophic epidermolysis bullosa / A. Khan, R. Riaz, S. Ashraf, A. Akilimali // Ann. of Med. and Surg. - 2023. - V. 85, № 12. - P. 6298-6301.

113. Khan, N. Biallelic mutations in FLG, TGM1, and STS genes segregated with different types of ichthyoses in eight families of Pakistani origin / N. Khan, K. Shah, F. Fozia, S.A. Khan, N. Muhammad, A. Nasir, I. Ahmad, Z.U. Rehman, A. Jan, N. Muhammad, S. Khan // Int. J. of Derm. - 2023b. - V. 62, № 5. - P. 672-680.

114. Khavari, P.A. Cutaneous gene therapy / P.A. Khavari, G.G. Krueger // Derm. Clin. - 1997. - V. 15, № 1. - P. 27-35.

115. Kong, R. Characterization of porcine skin as a model for human skin studies using infrared spectroscopic imaging / R. Kong, R. Bhargava // The Analyst. - 2011. -V. 136, № 11. - P. 2359-2366.

116. Koutsoukos, S.A. Highlights of gene and cell therapy for epidermolysis bullosa and ichthyosis / S.A. Koutsoukos, G. Bilousova // Derm. and Ther. - 2024. -V. 14, № 9. - P. 2379-2392.

117. Kuramoto, N. Development of ichthyosiform skin compensates for defective permeability barrier function in mice lacking transglutaminase 1 / N. Kuramoto, T. Takizawa, T. Takizawa, M. Matsuki, H. Morioka, J.M. Robinson, K. Yamanishi // The J. of Clin. Invest. - 2002. - V. 109, № 2. - P. 243-250.

118. Laiho, E. Clinical and morphological correlations for transglutaminase 1 gene mutations in autosomal recessive congenital ichthyosis / E. Laiho, K.M. Niemi, J. Ignatius, J. Kere, A. Palotie, U. Saarialho-Kere // Eu. J. of Hu. Gen. - 1999. - V. 7, № 6. - P. 625-632

119. Le Hars, M. Non-replicative herpes simplex virus genomic and amplicon vectors for gene therapy - an update / M. Le Hars, C. Joussain, T. Jégu, A.L. Epstein // Gene Ther. - 2025. - V. 32, № 3. - P. 173-183.

120. Lee, M.Y. Allele-specific small interfering RNA corrects aberrant cellular phenotype in keratitis-ichthyosis-deafness syndrome keratinocytes / M.Y. Lee, H.-Z. Wang, T.W. White, T. Brooks, A. Pittman, H. Halai, A. Petrova, D. Xu, S.L. Hart, V.A. Kinsler, W.-L. Di // The J. of Inv. Derm. - 2020. - V. 140, № 5. - P. 1035-1044.

121. Lefèvre, C. Mutations in a new cytochrome P450 gene in lamellar ichthyosis type 3 / C. Lefèvre, B. Bouadjar, V. Ferrand, G. Tadini, A. Mégarbané, M. Lathrop, J.-F. Prud'homme, J. Fischer // Hu. Mol. Gen. - 2006. - V. 15, № 5. - P. 767-776.

122. Li, S. A case of skin autograft for skin ulcers in ichthyosis / S. Li, X. Yang, L. Liu, X. Tang // Zhong Nan Da Xue Xue Bao. Yi Xue Ban / J. of Cent. South Uni. Med. Sci. - 2017. - V. 42, № 10. - P. 1239-1240.

123. Lilly, E. Congenital Ichthyosis: A practical clinical guide on current treatments and future perspectives / E. Lilly, C.G. Bunick // Clin., Cosm. and Invest. Derm. - 2023. - V. 16, P. 2473-2479.

124. Lima Cunha, D. hiPSC-Derived Epidermal Keratinocytes from Ichthyosis Patients Show Altered Expression of Cornification Markers / D. Lima Cunha, A. Oram, R. Gruber, R. Plank, A. Lingenhel, M.K. Gupta, J. Altmüller, P. Nürnberg, M. Schmuth, J. Zschocke, T. Saric, K.M. Eckl, H.C. Hennies // Int. J. of Mol. Sci. - 2021. - V. 22, № 4. - P. 1785.

125. Limmer, A.L. Management of Ichthyosis: A Brief Review / A.L. Limmer, C.E. Nwannunu, R.R. Patel, U.N. Mui, S.K. Tyring // Sk. ther. letter. - 2020. - V. 25, № 1. - P. 5-7.

126. Lin, Y.C. Tofacitinib ameliorates skin inflammation in a patient with severe autosomal recessive congenital ichthyosis / Y.C. Lin, Y.K. Hong, W.F. Aala, K. Hitomi,

M. Akiyama, J.A. McGrath, C.K. Hsu // Clin. and Exp. Derm. - 2024. - V. 49, №№ 8. - P. 887-892.

127. Liu, D. Adeno-associated virus therapies: Pioneering solutions for human genetic diseases / D. Liu, T. Li, L. Liu, X. Che, X. Li, C. Liu, G. Wu // Cyt. & Grow. Fact. Rev. - 2024. - V. 80. - P. 109-120.

128. Liu, J.-W. Compound heterozygous ABCA12 variants identified in a Chinese patient with congenital ichthyosiform erythroderma: Advancing genotype-phenotype correlations and literature review / J.-W. Liu, K. Guo, R. Zhang, R. Wang, D.-L. Ma, X. Zhang // Mol. Gen. & Genom. Med. - 2024. - V. 12, № 5. - P. e2431.

129. Lo, S.-C. Management of collodion baby with ABCA12 gene mutation and harlequin ichthyosis / S.-C. Lo, H.-C. Lin, X.-A. Wang // ^SPftl^. - 2024. - V. 35, № 1. - P. 43-47.

130. Louhichi, N. Congenital lamellar ichthyosis in Tunisia is caused by a founder nonsense mutation in the TGM1 gene / N. Louhichi, I. Hadjsalem, S. Marrakchi, F. Trabelsi, A. Masmoudi, H. Turki, F. Fakhfakh // Mol. Biol. Rep. - 2013. - V. 40, № 3.

- P. 2527-2532.

131. Luster, A.D. Biochemical characterization of a gamma interferon-inducible cytokine (IP-10) / A.D. Luster, J.V. Ravetch // The J. of Exp. Med. - 1987. - V. 166, №№ 4.

- P. 1084-1097.

132. Malik, K. Ichthyosis molecular fingerprinting shows profound TH17 skewing and a unique barrier genomic signature / K. Malik, H. He, T.N. Huynh, G. Tran, K. Mueller, K. Doytcheva, Y. Renert-Yuval, T. Czarnowicki, S. Magidi, M. Chou, Y.D. Estrada, H.-C. Wen, X. Peng, H. Xu, X. Zheng, J.G. Krueger, A.S. Paller, E. Guttman-Yassky // The J. of All. and Clin. Immun. - 2019. - V. 143. № 2. - P. 604-618.

133. March, O.P. Gene Editing-Mediated Disruption of Epidermolytic Ichthyosis-Associated KRT10 Alleles Restores Filament Stability in Keratinocytes / O.P. March, T. Lettner, A. Klausegger, M. Ablinger, T. Kocher, S. Hainzl, P. Peking, N. Lackner, N. Rajan, J.P. Hofbauer, C. Guttmann-Gruber, A. Bygum, U. Koller, J. Reichelt // The J. of Inv. Derm.

- 2019. - V. 139, № 8. - P. 1699-1710.

134. Maritska, Z. Genetics of lamellar ichthyosis / Z. Maritska, S. Sandria, N. Noviyanti, U.M. Lubis, M.W. Astria, M.A. Prastika, P.A. Chandra, R.S.S. Chandra // Eg. J. of Derm. and Ven. - 2024. - V. 44, № 2. - P. 69.

135. Matsui, T. Dissecting the formation, structure and barrier function of the stratum corneum / T. Matsui, M. Amagai // Int. Imm. - 2015. - V. 27, № 6. - P. 269-280.

136. Matsuki, M. Defective stratum corneum and early neonatal death in mice lacking the gene for transglutaminase 1 (keratinocyte transglutaminase) / M. Matsuki, F. Yamashita, A. Ishida-Yamamoto, K. Yamada, C. Kinoshita, S. Fushiki, E. Ueda, Y. Morishima, K. Tabata, H. Yasuno, M. Hashida, H. Iizuka, M. Ikawa, M. Okabe, G. Kondoh, T. Kinoshita, J. Takeda, K. Yamanishi // Pro. of the Nat. Ac. of Sci. of the Un. St. of Am. - 1998. - V. 95, № 3. - P. 1044-1049.

137. Mazereeuw-Hautier, J. Management of congenital ichthyoses: European guidelines of care, part two / J. Mazereeuw-Hautier, A. Hernández-Martín, E.A. O'Toole, A. Bygum // The Br. J. of Derm. - 2019. - V. 180, № 3. - P. 484-495.

138. Mildner, M. Gene silencing in a human organotypic skin model / M. Mildner, C. Ballaun, M. Stichenwirth, R. Bauer, R. Gmeiner, M. Buchberger, V. Mlitz, E. Tschachler // Biochem. and Bioph. Res. Commun. - 2006. - V. 348, № 1. - P. 76-82.

139. Mingozzi, F. Therapeutic in vivo gene transfer for genetic disease using AAV: progress and challenges / F. Mingozzi, K.A. High // Nat. Rev. Gen. - 2011. - V. 12, № 5. - P. 341-355.

140. Mohamad, J. Molecular epidemiology of non-syndromic autosomal recessive congenital ichthyosis in a Middle-Eastern population / J. Mohamad, L. Samuelov, N. Malchin, T. Rabinowitz, S. Assaf, L. Malki, K. Malovitski // Exp. Derm. -2021. - V. 30, № 9. - P. 1290-1297.

141. Morren, M.-A. Challenges in Treating Genodermatoses: New Therapies at the Horizon / M.-A. Morren, E. Legius, F. Giuliano, S. Hadj-Rabia, D. Hohl, C. Bodemer // Front. in Pharm. - 2021. - V. 12. - P. 746664.

142. Moustaine, M.O. Severe Bilateral Ectropion in Lamellar Ichthyosis: A Case Report / M.O. Moustaine, M. Frarchi, M. Haloui, F.Z. Chabbab // The Am. J. of Case Rep. - 2022. - V. 23. - P. e935544.

143. Mücke, M.M. Adeno-associated viruses for gene therapy - clinical implications and liver-related complications, a guide for hepatologists / M.M. Mücke, S. Fong, G.R. Foster, D. Lillicrap, W. Miesbach, S. Zeuzem // J. of Hep. - 2024. - V. 80, № 2. - P. 352-361.

144. Mullagulova, A. Safety and Efficacy of Intravenous and Intrathecal Delivery of AAV9-Mediated ARSA in Minipigs / A. Mullagulova, A. Shaimardanova, V. Solovyeva, Y. Mukhamedshina, D. Chulpanova, A. Kostennikov, S. Issa, A. Rizvanov // Int. J. of Mol. Sci. - 2023. - V. 24, № 11. - P. 9204.

145. Muraine, L. Transduction Efficiency of Adeno-Associated Virus Serotypes After Local Injection in Mouse and Human Skeletal Muscle / L. Muraine, M. Bensalah, J. Dhiab, G. Cordova, L. Arandel, A. Marhic, M. Chapart, S. Vasseur, S. Benkhelifa-Ziyyat, A. Bigot, G. Butler-Browne, V. Mouly, E. Negroni, C. Trollet // Hum. Gene Ther.

- 2020. - V. 31, № 3-4. - P. 233-240.

146. Murase, Y. Reduced stratum corneum acylceramides in autosomal recessive congenital ichthyosis with a NIPAL4 mutation / Y. Murase, T. Takeichi, A. Kawamoto, K. Tanahashi, Y. Okuno, H. Takama, E. Shimizu, J. Ishikawa, T. Ogi, M. Akiyama // J. of Derm. Sci. - 2020. - V. 97, № 1. - P. 50-56.

147. Murrell, D.F. Phase IIb randomized CONTROL study demonstrates a novel topical isotretinoin formulation, TMB-001, is safe and effective in participants with either recessive X-linked or autosomal recessive lamellar congenital ichthyosis / D.F. Murrell, J.M.C. Teng, S. Guenthner, K. Marathe, S. Kempers, K. Eads, L. Castelo-Soccio, A.M. Mendelsohn, J. Raiz, C.G. Bunick // Clin. and Exp. Derm. - 2023. - V. 48, №№ 6. - P. 623630.

148. Naso, M.F. Adeno-Associated Virus (AAV) as a Vector for Gene Therapy / M.F. Naso, B. Tomkowicz, W.L. Perry, W.R. Strohl // Biodrugs. - 2017. - V. 31, № 4.

- P. 317-334.

149. Naso, M.F. Adeno-Associated Virus (AAV) as a Vector for Gene Therapy / M.F. Naso, B. Tomkowicz, W.L. Perry, W.R. Strohl // Clin. Immun., Biopharm. and Gene Ther. - 2017. - V. 31, № 4. - P. 317-334.

150. O'Donnell, J. Adeno-associated virus-2 and its primary cellular receptor--Cryo-EM structure of a heparin complex / J. O'Donnell, K.A. Taylor, M.S. Chapman // Virology. - 2009. - V. 385, № 2. - P. 434-443.

151. Ofori, S.A. Hematological, biochemical, and histopathological changes in laboratory rats naturally infected with gastrointestinal parasites / S.A. Ofori, P.K. Amissah-Reynolds, A.K. Addo, O. Kyeremeh, J. Dwomoh, D.T. Gyasi // Disc. Anim. -2025. - V. 2, № 1. - P. 19.

152. Oji, V. Revised nomenclature and classification of inherited ichthyoses: Results of the First Ichthyosis Consensus Conference in Soreze 2009 / V. Oji h gp. // J. of the Am. Ac. of Derm. - 2010. - V. 63, № 4. - P. 607-641.

153. Oji, V. Ichthyoses: Differential diagnosis and molecular genetics / V. Oji, H. Traupe // Eu. J. of Derm. - 2006. - V. 16, № 4. - P. 349-359.

154. Oji, V. Ichthyosis: Clinical manifestations and practical treatment options / V. Oji, H. Traupe // Am. J. of Clin. Derm. - 2009. - V. 10, № 6. - P. 351-364.

155. Okuyama, T. Japan Elaprase Treatment (JET) study: idursulfase enzyme replacement therapy in adult patients with attenuated Hunter syndrome (Mucopolysaccharidosis II, MPS II) / T. Okuyama, A. Tanaka, Y. Suzuki, H. Ida, T. Tanaka, G.F. Cox, Y. Eto, T. Orii // Mol. Gen. and Met. - 2010. - V. 99, № 1. - P. 1825.

156. Paller, A.S. An IL-17-dominant immune profile is shared across the major orphan forms of ichthyosis / A.S. Paller, Y. Renert-Yuval, M. Suprun, H. Esaki, M. Oliva, T.N. Huynh, B. Ungar, N. Kunjravia, R. Friedland, X. Peng, X. Zheng, Y.D. Estrada, J.G. Krueger, K.A. Choate, M. Suarez-Farinas, E. Guttman-Yassky // The J. of Allerg. and Clin. Immun. - 2017. - V. 139, № 1. - P. 152-165.

157. Pan, C. Superior COL7A1 and TGM1 gene expression in difficult-to-transfect skin cell mediated by highly branched poly(ß-amino esters) through stepwise fractionation / C. Pan, C. Wang, Y. Zhao, T. Bo, L. Han, D. Yao, Y. Wang, X. Wang, L. Shi, A. Zhao, Q. Cao, F. Chen, W. He, Y. Ye, S. Zhang, M. Li // J. of Contr. Rel. - 2024. - V. 370. - P. 82-94.

158. Peña-Corona, S.I. Advances in the treatment of autosomal recessive congenital ichthyosis, a look towards the repositioning of drugs / S.I. Peña-Corona, S.C. Gutiérrez-Ruiz, M. de los D.C. Echeverría, H. Cortés, M. González-Del Carmen, G. Leyva-Gómez // Front. in Pharm. - 2023. - V. 14. - P. 274248.

159. Pfützner, W. Vectors for gene therapy of skin diseases / W. Pfützner // J. of the Germ. Soc. of Derm. - 2010. - V. 8, № 8. - P. 582-591.

160. Pigg, M. Strong founder effect for a transglutaminase 1 gene mutation in lamellar ichthyosis and congenital ichthyosiform erythroderma from Norway / M. Pigg, T. Gedde-Dahl, D. Cox, I. Haußer, I. Anton-Lamprecht, N. Dabi // Eu. J. of Human Gen. - 1998. - V. 6, № 6. - P. 589-596.

161. Pigg, M.H. Spectrum of Autosomal Recessive Congenital Ichthyosis in Scandinavia: Clinical Characteristics and Novel and Recurrent Mutations in 132 Patients / M.H. Pigg, A. Bygum, A. Gánemo, M. Virtanen, F. Brandrup, A.D. Zimmer, A. Hotz, A. Vahlquist, J. Fischer // Acta Derm.-Ven. - 2016. - V. 96, № 7. - P. 932-937.

162. Pillai, S. Epidermal Barrier / S. Pillai, M. Manco, C. Oresajo, N. Baalbaki // Cosm. Derm. - 2022. - P. 1-15.

163. Piñón Hofbauer, J. Challenges and progress related to gene editing in rare skin diseases / J. Piñón Hofbauer, C. Guttmann-Gruber, V. Wally, A. Sharma, I.K. Gratz, U. Koller // Adv. Drug Del. Rev. - 2024. - V. 208. - P. 115294.

164. Plank, R. Transglutaminase 1 Replacement Therapy Successfully Mitigates the Autosomal Recessive Congenital Ichthyosis Phenotype in Full-Thickness Skin Disease Equivalents / R. Plank, G. Yealland, E. Miceli, D. Lima Cunha, P. Graff, S. Thomforde, R. Gruber, V. Moosbrugger-Martinz, K. Eckl, M. Calderón, H.C. Hennies, S. Hedtrich // J. of Inv. Derm. - 2019. - V. 139, № 5. - P. 1191-1195.

165. Ponomarev, A.S. Emerging gene therapy approaches in the management of spinal muscular atrophy (SMA): an overview of clinical trials and patent landscape / A.S. Ponomarev, D.S. Chulpanova, L.M. Yanygina, V.V. Solovyeva, A.A. Rizvanov // Int. J. Mol. Sci. - 2023. - V. 24. - P. 13743

166. Ponomarev, A. Evaluation of the efficacy of transglutaminase 1 gene delivery by adeno-associated virus into rat and pig skin and safety of ARCI gene therapy

/ A. Ponomarev, I. Ganiev, A. Aimaletdinov, M. Mansurova, A. Titova, A. Rizvanov, V. Solovyeva // Int. J. of M. Sci. - 2025. - V. 26, № 19. - P. 9976.

167. Rasheed, M. Novel TGM1 mutation in a Pakistani family affected with severe lamellar ichthyosis / M. Rasheed, N. Karim, F.A. Shah, M. Naeem // Ped. and Neo. - 2018. - V. 59, № 6. - P. 628-629.

168. Richard, G. Autosomal Recessive Congenital Ichthyosis / G. Richard, M.P. Adam, J. Feldman, G.M. Mirzaa, R.A. Pagon, S.E. Wallace, A. Amemiya // GeneReviews. - 1993.

169. Richard, G. Management of ichthyosis and related conditions gene-based diagnosis and emerging gene-based therapy / G. Richard, K. Choate, L. Milstone, S. Bale // Derm. Ther. - 2013. - V. 26, № 1. - P. 55-68.

170. Rodriguez, F. Characteristics and Outcomes for Hispanic/Latinx Participants With Statin Intolerance Receiving Bempedoic Acid / F. Rodriguez, L. Cho, J. Foody, A.M. Lincoff, L. Lei, S.J. Nicholls, S.E. Nissen, H.A. Powell, J. Plutzky // J. of the Am. Coll. of Card. - 2024. - V. 83, № 21. - P. 2130-2132.

171. Russell, L.J. Mutations in the gene for transglutaminase 1 in autosomal recessive lamellar ichthyosis / L.J. Russell, J.J. DiGiovanna, G.R. Rogers, P.M. Steinert, N. Hashem, J.G. Compton, S.J. Bale // Nat. Gen. - 1995. - V. 9, № 3. - P. 279-283.

172. Rybarova, N. Sight-threatening Complication of Cicatricial Ectropion in a Patient with Lamellar Ichthyosis - Case Report / N. Rybarova, B. Pinkova, H. Doskova, E. Vlkova // Act. Derm. Croat. - 2020. - V. 28, № 1. - P. 29-33.

173. Sachslehner, A.P. The Evolution of Transglutaminases Underlies the Origin and Loss of Cornified Skin Appendages in Vertebrates / A.P. Sachslehner, M. Surbek, K.B. Holthaus, J. Steinbinder, B. Golabi, C. Hess, L. Eckhart // Mol. Bio. and Evo. - 2024. - V. 41, № 6. - P. 100-121.

174. Sallach, J. Tropism-modified AAV vectors overcome barriers to successful cutaneous therapy / J. Sallach, G. Di Pasquale, F. Larcher, N. Niehoff, M. Rübsam, A. Huber, J. Chiorini, D. Almarza, S.A. Eming, H. Ulus, S. Nishimura, U.T. Hacker, M. Hallek, C.M. Niessen, H. Büning // Mol. Ther.: The J. of the Am. Soc. of Gene Ther. -2014. - V. 22, № 5. - P. 929-939.

175. Sarkar, T. Gene Therapy and its Application in Dermatology / T. Sarkar, S. Sarkar, D.N. Gangopadhyay // Ind. J. of Derm. - 2020. - V. 65, № 5. - P. 341-350.

176. Schaefer, R.M. Enzyme Replacement Therapy for Fabry Disease / R.M. Schaefer, A. Tylki-Szymanska, M.J. Hilz // Drugs. - 2009. - V. 69, № 16. - P. 2179-2205.

177. Seligmann, E. De epidermidis, imprimis neonatorum, desquamatione / E. Seligmann // Nietack. - 1841. - 34 p.

178. Sercia, L. A cellular disease model toward gene therapy of TGM1-dependent lamellar ichthyosis / L. Sercia, O. Romano, G. Marini, E. Enzo, M. Forcato, L. De Rosa, M. De Luca // Mol. Ther. Meth. & Clin. Dev. - 2024. - V. 32, № 3. -P. 101311.

179. Shaimardanova, A.A. Metachromatic Leukodystrophy: Diagnosis, Modeling, and Treatment Approaches / A.A. Shaimardanova, D.S. Chulpanova, V.V. Solovyeva, A.I. Mullagulova, K.V. Kitaeva, C. Allegrucci, A.A. Rizvanov // Front. in Med. - 2020. - V. 7. - P. 576221.

180. Shwayder, T. Longitudinal Observation of Pediatric Dermatology Patients / T. Shwayder, S. Schneider, D. Icecreamwala, M. Jahnke. - Cham: Springer Int. Pub., 2019. - 290p.

181. Simpson J.K. Genotype-phenotype correlation in a large English cohort of patients with autosomal recessive ichthyosis / J.K. Simpson h gp. // The Br. J. of Derm. - 2020. - V. 182, № 3. - P. 729-737.

182. Singh, N.N. Spinal muscular atrophy: Broad disease spectrum and sex-specific phenotypes / N.N. Singh, S. Hoffman, P.P. Reddi, R.N. Singh // Biochim. Bioph. Act. Mol. Basis. Dis. - 2021. - V. 1867, № 4. - P. 166063.

183. Sitek, J.C. Whole-exome sequencing for diagnosis of hereditary ichthyosis / J.C. Sitek, M.A. Kulseth, K.B. Rypdal, T. Skodje, Y. Sheng, L. Retterst0l // J. of the Eu. Ac. of Derm. and Vener. - 2018. - V. 32, № 6. - P. 1022-1027.

184. Solovyeva, V.V. New Approaches to Tay-Sachs Disease Therapy / V.V. Solovyeva, A.A. Shaimardanova, D.S. Chulpanova, K.V. Kitaeva, L. Chakrabarti, A.A. Rizvanov // Front. in Phys. - 2018. - V. 9. - P. 1663.

185. Srivastava, A. Adeno-associated virus-mediated gene transfer / A. Srivastava // J. of Cell. Bioch. - 2008. - V. 105, № 1. - P. 17-24.

186. Subramanian, N. Combined medical and surgical management for cicatricial ectropion in lamellar ichthyosis: A report of three cases / N. Subramanian, P.D. Nivean, M.S. Alam // Ind. J. of Ophth. - 2020. - V. 68, № 11. - P. 2615-2617.

187. Sulák, A. Phenotypic diversity of the recurrent p.Val379Leu missense mutation of the TGM1 gene / A. Sulák, K. Tripolszki, K. Farkas, M. Széll, N. Nagy // Derm. Sin. - 2018. - V. 36, № 2. - P. 89-92.

188. Sullivan, T.P. The pig as a model for human wound healing / T.P. Sullivan, W.H. Eaglstein, S.C. Davis, P. Mertz // Wound Rep. and Reg. - 2001. - V. 9, № 2. -P. 66-76.

189. Sun, Q. The Genomic and Phenotypic Landscape of Ichthyosis: An Analysis of 1000 Kindreds / Q. Sun, N.M. Burgren, S. Cheraghlou, A.S. Paller, M. Larralde, L. Bercovitch, J. Levinsohn // JAMA derm. - 2022. - V. 158, № 1. - P. 16-25.

190. Surbek, M. Cornification of keratinocytes is associated with differential changes in the catalytic activity and the immunoreactivity of transglutaminase-1 / M. Surbek, T. Van de Steene, A.P. Sachslehner, B. Golabi, J. Griss, S. Eyckerman, K. Gevaert, L. Eckhart // Sci. Rep. - 2023. - V. 13, № 1. - P. 21550.

191. Tabri, F. Lamellar ichthyosis: One Case Report / F. Tabri // Int. J. of Med. Rev. and Case Rep. - 2019. - V. 3, № 5. - P. 270-270.

192. Tadini, G. Efficacy of topical 10% urea-based lotion in patients with ichthyosis vulgaris: a two-center, randomized, controlled, single-blind, right-vs.-left study in comparison with standard glycerol-based emollient cream / G. Tadini, S. Giustini, M. Milani // Curr. Med. Res. and Op. - 2011. - V. 27, № 12. - P. 2279-2284.

193. Takhtarova, T.G. Ichthyosis (concept, pathohistology, clinical picture, treatment) / T.G. Takhtarova, Z.R. Khismatullina, L.D. Panova, A.N. Panova // Vest. Derm. i vener. - 2021. - V. 97, № 3. - P. 6-13.

194. Tanaka, N. Initiation of enzyme replacement therapy for an adult patient with asymptomatic type 1 Gaucher's disease / N. Tanaka, H. Saito, T. Ito, K. Momose, F. Ishida, K. Hora, K. Kiyosawa, H. Ida // Int. Med. - 2001. - V. 40, № 8. - P. 716-721.

195. Thein, D. Prevalence of ichthyoses in Denmark: a nationwide registry-based study / D. Thein, J.-T. Maul, P. Schmid-Grendelmeier, J.P. Thyssen, A. Egeberg // The Br. J. of Derm. - 2024. - V. 191, № 2. - P. 305-306.

196. Uthoff, D. Cicatricial ectropion in ichthyosis: a novel approach to treatment / D. Uthoff, M. Gorney, C. Teichmann // Ophth. Pl. and Rec. Surg. - 1994. - V. 10, № 2.

- P. 92-95.

197. Vahlquist, A. Inherited Nonsyndromic Ichthyoses: An Update on Pathophysiology, Diagnosis and Treatment / A. Vahlquist, J. Fischer, H. Törmä // Am. J. of Clin. Derm. - 2018. - V. 19, № 1. - P. 51-66.

198. Wang, J.-H. Adeno-associated virus as a delivery vector for gene therapy of human diseases / J.-H. Wang, D.J. Gessler, W. Zhan, T.L. Gallagher, G. Gao // Sig. Trans. and Targ. Ther. - 2024. - V. 9, № 1. - P. 78.

199. Weber, T. Anti-AAV Antibodies in AAV Gene Therapy: Current Challenges and Possible Solutions / T. Weber // Front. in Immun. - 2021. - V. 12. - P. 658399.

200. Wells, R.S. Clinical features of autosomal dominant and sex-linked ichthyosis in an English population / R.S. Wells, C.B. Kerr // Br. Med. J. - 1966. - V. 1, № 5493. - P. 947-950.

201. Willan, R. On cutaneous diseases: containing: ord. I. Papulae, ord. II. Squamae, ord. III. Exanthemata, ord. IV. Bullae / R. Willan // Kimber and Conrad, 1809.

- 420 p.

202. Yamasaki, K. Efficacy and safety of brodalumab in patients with generalized pustular psoriasis and psoriatic erythroderma: results from a 52-week, open-label study / K. Yamasaki, H. Nakagawa, Y. Kubo, K. Ootaki, Japanese Brodalumab Study Group // The Br. J. of Derm. - 2017. - V. 176, № 3. - P. 741-751.

203. Yang, C.S. Comparing histopathology from patients with X-linked recessive ichthyosis and autosomal recessive congenital ichthyosis with transglutaminase 1 mutation: A report from the National Registry for Ichthyosis and Related Skin Disorders / C.S. Yang, H. Pomerantz, K.A. Mannava, J. Corwin, M.A. Weinstock, P. Fleckman, J.J. DiGiovanna, L. Robinson-Bostom // J. of the Am. Ac. of Derm. - 2016. - V. 74, № 5. -P. 1008-1010.

204. Yogarajah, J. Efficacy and safety of secukinumab for the treatment of severe ABCA12 deficiency-related ichthyosis in a child / J. Yogarajah, C. Gouveia, J. Iype, S. Hafliger, A. Schaller, J.M. Nuoffer, M. Fux, M. Gautschi // Sk. Heal. and Dis. -2021. - V. 1, № 2. - P. e25.

205. Zambrano, H. Mutations in TGM1 in Ecuadorians with autosomal recessive congenital ichthyosis / H. Zambrano, M. Montalvan, J. Cabezas, Y. Lu, C.S. Yang, L.M. Milstone, K. Choate // Int. J. of Derm. - 2014. - V. 53, № 4. - P. 312-313.

206. Zhao, L. Recombinant adeno-associated virus 8 vector in gene therapy: Opportunities and challenges / L. Zhao, Z. Yang, M. Zheng, L. Shi, M. Gu, G. Liu, F. Miao, Y. Chang, F. Huang, N. Tang // Gen. & Dis. - 2024. - V. 11, № 1. - P. 283-293.

207. Zhou, X.-J. Prenatal diagnosis of harlequin ichthyosis by ultrasonography: a case report / X.-J. Zhou, Y.-J. Lin, X.-W. Chen, J.-H. Zheng, Y.-J. Zhou // Ann. of Trans. Med. - 2021. - V. 9, № 2. - P. 183.