Влияние минорных модификаций первичной структуры на физико-химические свойства и шапероноподобную активность бета-казеина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.02, кандидат биологических наук Коннова, Татьяна Анатольевна

• Коннова, Татьяна Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2012

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние минорных модификаций первичной структуры на физико-химические свойства и шапероноподобную активность бета-казеина»

Молекула бета-казеина - одного из самых распространенных представителей молочных белков - в отличие от типичных глобулярных белков обладает слабо выраженными элементами вторичнойктуры [Creamer et al, 1981; Caessens et al., 1999]. Все полярные и заряженные остатки сконцентрированы на N-конце цепи, в то время как остальная ее часть состоит преимущественно из остатков неполярных аминокислот и содержит большое количество пролиновых остатков [Swaisgood, 1992, 1993, 2003]. В первичной последовательности бета-казеина отсутствует цистеин, что исключает возможность образования внутри- и межмолекулярных дисульфидных связей. Сочетание амфифильного характера и высокой гибкости полипептидной цепи приводит к ассоциации белка в водной среде с образованием наноразмерных коллоидных агрегатов - мицелл [Schmidt, Payens, 1972; Niki et al, 1977; Evans et al, 1979; Swaisgood, 2003]. Именно коллоидные свойства различных казеинов и бета-казеина в частности определяют многие функциональные свойства молока, например, аккумуляция и перенос ионов металлов и белков.

Бета-казеин является удобной моделью для изучения различных аспектов строения коллоидной системы молока и связанных с ней функций. Свойства бета-казеина, как природного поверхностно-активного вещества, активно используются производителями пищевых продуктов. Имеется множество работ фармакологической направленности в области инженерии молочных белков, целью которых является конструирование белков, выполняющих функции целевой сорбции, концентрирования и доставки продуктов, необходимых для лечения ряда серьезных заболеваний.

Строение поверхности коллоидных агрегатов, где гидрофильные участки перемежаются с гидрофобными, их высокая связывающая способность по отношению к гидрофобным соединениям и возможность адаптации геометрии поверхности под связываемый лиганд в последние годы вызвали интерес к шапероноподобной функции бета-казеина [Bhattacharyya, 1999; Morgan et ah, 2005; Barzegar et ah, 2008; Hassanisadi et ah, 2008; Yousefi et ah, 2009]. Коллоидные свойства и шапероноподобная активность бета-казеинов имеют и коммерческий интерес, благодаря их способности стабилизировать белки, микроэмульсии и эмульсии, что определяет текстуру и вкусовые качества пищевых продуктов.

Одним из возможных подходов для получения бета-казеина с новыми физико-химическими и функциональными свойствами является изменение структуры и амфифильных свойств белковой молекулы и, как следствие, свойств образующихся мицеллярных агрегатов. Процесс самоорганизации природного бета-казеина чрезвычайно чувствителен к физико-химическим свойствам среды (полярности и вязкости растворителя, температуре, рН и т.п.), что влияет на размер, структуру и сорбционные свойства его коллоидных агрегатов [Schmidt, 1982; Leclerc, Calmettes, 1997; De Kruif, Grinberg, 2002; Mikheeva et ah, 2003; O'Connell et ah, 2003]. Кроме того, было показано, что точечное введение цистеиновых остатков в полипептидную цепь этого белка приводит к образованию димерных или олигомерных комплексов и значительно изменяет свойства мицеллярных агрегатов (размер, форму, температуру перехода мономер-мицелла, устойчивость к изменению рН и пр.) [Gaudin et ah, 2009, Yousefi et ah, 2009]. При этом вероятно, могут происходить изменения функциональных свойств бета-казеина, в частности его шапероноподобной активности. Вместе с тем, к настоящему времени работ по исследованию взаимосвязи структурных и функциональных особенностей бета-казеина немного и нет ясности в какой степени структура белка определяет эти свойства.

Таким образом, основной целью настоящей работы было выявление вклада структурных особенностей бета-казеина в его ассоциативные, коллоидные и шапероноподобные свойства. В рамках данного исследования использовалось два способа модифицирования свойств белка: введение тиольной группы, то есть дополнительной ковалентной внутри- или межмолекулярной связи, и варьирование полярности растворителя с помощью внесения различных концентраций этанола в раствор белка.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Получить очищенные препараты рекомбинантного бета-казеина дикого типа и его модифицированных форм, содержащих цистеиновые остатки в различных участках полипептидной цепи белка.

2. Охарактеризовать структуру и процессы самоассоциации рекомбинантных бета-казеинов методами динамического светорассеяния, флуоресценции, кругового дихроизма (КД) и инфракрасной спектроскопии (ИК).

3. Проанализировать влияние температуры и состава растворителя на структуру и свойства бета-казеина.

4. Охарактеризовать шапероноподобную активность природной и рекомбинантных форм бета-казеина по отношению к термо-индуцированной агрегации ряда целевых белков.

Научная новизна работы. Впервые с применением комплекса взаимодополняющих физических методов исследована взаимосвязь структурного состояния рекомбинантных бета-казеинов с цистеиновыми остатками, введенными в различные участки полипептидной цепи белка, с их ассоциативными и шапероноподобными свойствами.

Впервые выполнен всесторонний анализ структурных данных и самоассоциации бета-казеина в смешанном растворителе вода-этанол. Показана корреляция между микрофазным разделением водно-спиртовых растворов, вторичной структурой белка и строением мицелл бета-казеина.

Впервые установлено наличие верхней и нижней границ температурного интервала самоассоциации бета-казеина, при этом увеличение концентрации спирта вызывает понижение как верхней, так и нижней температур мицеллообразования.

Впервые аргументировано, что высокая стабильность вторичной структуры бета-казеина в условиях повышения температуры является кажущейся и обусловлена ограничениями методов разложения спектров КД в приложении к нативно-неупорядоченным белкам.

Впервые исследована шапероноподобная активность бета-казеина в отношении каталитического действия фермента в условиях действия повышенной температуры.

Научно-практическая значимость работы. Полученные результаты уточняют границы коллоидного состояния бета-казеина и дополняют имеющиеся данные о механизмах мицеллообразования белка. Понимание механизмов самоассоциации и взаимодействия бета-казеина с целевыми белками на молекулярном уровне, открывает перспективы для создания белковых препаратов медицинского назначения, исследования и лечения ряда заболеваний, известных как «конформационные болезни». Результаты работы могут быть использованы для прогнозирования влияния температуры и состава растворителя на структуру и функции бета-казеина и других нативно неупорядоченных белков, а также для направленного получения белков с новыми физико-химическими свойствами для пищевой промышленности и биотехнологии.

Полученные экспериментальные данные и методические приемы, изложенные в работе, могут быть использованы в учреждениях биологического, медицинского, биотехнологического, физико-химического профилей, занимающихся исследованием взаимосвязи структуры и функций биомакромолекул, динамики белков в водно-органических средах, а также в учебном процессе при чтении курсов лекций по биохимии, биофизике, физической и органической химии, и молекулярной биологии в ВУЗах.

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора в исследования. Исследования проводились в соответствии с планом научных исследований КИББ КазНЦ РАН по теме «Межмолекулярные взаимодействия и молекулярная динамика как факторы регуляции функциональной активности белков» (номер госрегистрации №0120.0

803026) и поддержаны грантом правительства Франции для обучения в совместной аспирантуре, грантами РФФИ, а также грантом Президиума РАН (программа «Молекулярная и клеточная биология»). Научные положения и выводы диссертации базируются на результатах собственных исследований автора.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были представлены на 12-ой Международной школе-конференции молодых ученых: «Биология - наука XXI века» (Пущино, Россия, 2008), IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, Россия, 2008), IV Российском симпозиуме "Белки и пептиды" (Казань, Россия, 2009), 34-ом конгрессе FEBS «Life's Molecular Interaction» (Прага, Чехия, 2009), Российской школе-конференции молодых ученых "Актуальные проблемы современной биохимии и молекулярной биологии» (Казань, Россия, 2010), V Российском симпозиуме "Белки и пептиды" (Петрозаводск, Россия, 2011), 3-м Международном симпозиуме «Клеточная сигнализация у растений» (Казань, Россия, 2011), I Российском симпозиуме по поверхностно-активным веществам «От коллоидных систем к нанохимии» (Казань, Россия, 2011), 36-ом конгрессе FEBS «Biochemistry for Tomorrow's Medicine» (Турин, Италия, 2011), VII Съезде Общества физиологов растений России «Физиология растений - фундаментальная основа экологии и инновационных биотехнологий» (Нижний Новгород, Россия, 2011), Конференции молодых ученых в области науки о жизни (Париж, Франция, 2012); на семинарах лаборатории функциональных взаимодействий белков НИАИ (Нант, Франция, 2008 - 2011).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 17 работ; из них 2 статьи в рецензируемых журналах.

Благодарности. Автор выражает искреннюю благодарность и глубокую признательность за ценные советы, неоценимую помощь и всестороннюю поддержку при выполнении диссертационной работы научным руководителям - доктору химических наук, профессору Юрию Федоровичу Зуеву и профессору Томашу Эртле.

Особую благодарность автор выражает научному сотруднику лаборатории биофизической химии наносистем КИББ КазНЦ РАН, к.б.н. Джигангиру Асхатовичу Файзуллину за помощь в проведении экспериментов, анализе и обсуждении данных КД-спектрометрии и инфракрасной спектроскопии. Автор выражает глубокую благодарность Наталье Евгеньевне Гоголевой (лаборатория молекулярной биологии КИББ КазНЦ РАН) за внимание к работе, обсуждение результатов, ценные советы и моральную поддержку. Автор благодарит к.б.н. Наталью Леруновну Захарченко (лаборатория биофизической химии наносистем КИББ КазНЦ РАН) за помощь в постановке кинетических исследований и проведении анализа данных.

Автор выражает благодарность всем сотрудникам и аспирантам лабораторий биофизической химии наносистем и молекулярной биологии КИББ КазНЦ РАН, лаборатории функциональных взаимодействий белков Национального института агрономических исследований (Нант, Франция) за теплую рабочую атмосферу.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 158 страницах машинописного текста, содержит 49 рисунков и 4 таблицы. Список литературы включает 290 источников, из них 271 зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Коннова, Татьяна Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. Структура и ассоциативные свойства модифицированных форм бета-казеина существенно зависят от места локализации введенного цистеинового остатка. Мицеллярные ассоциаты мономерных форм, содержащих цистеин в начале полипептидной цепи, оказываются менее устойчивыми к температурному воздействию, тогда как мицеллы, образованные олигомерными формами модифицированных бета-казеинов сохраняют стабильность при высоких температурах.

2. Точечное введение цистеина способствует росту внутренней упорядоченности белка, при этом наибольшее влияние на вторичную структуру оказывают замены, затрагивающие гидрофобный домен пептидной цепи бета-казеина.

3. Изменения вторичной структуры и ассоциативных свойств бета-казеина в водно-этанольных растворах определяются структурой растворителя, которая зависит от его состава и температуры. Содержание элементов вторичных структур и размеры мицелл бета-казеина коррелируют с концентрационными границами существования различных микрогетерогенных структур в смешанном растворителе. Показано наличие верхней и нижней границ температурного интервала самоассоциации бета-казеина. В отличие от существующего мнения о спирализации бета-казеина при высоких температурах, достоверно установлено, что увеличение температуры приводит к росту содержания неупорядоченной структуры.

4. На модельных системах (тепловая денатурация алкогольдегидрогеназы, каталазы, иммуноглобулина О) установлено защитное действие бета-казеина, направленное на торможение процесса агрегации и сохранение частичной ферментативной активности целевого белка. Показано, что шапероноподобная активность рекомбинантных бета-казеинов существенно зависит от места локализации цистеинового остатка и структурного состояния белка.

5. Впервые показано, что в условиях температурного стресса все олигомерные формы бета-казеина в молекулярном состоянии проявляют значительный шапероноподобный эффект по отношению к каталитической активности алкогольдегидрогеназы, а в мицеллярной форме этого эффекта не наблюдается.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одной из фундаментальных задач биоинженерии и молекулярной биологии является установление связи пространственной организации биомакромолекул с их функциональными свойствами, а также структурой и физико-химическими свойствами индивидуальных растворителей для направленного получения белков с заданными характеристиками.

В настоящей работе для исследования структуры и агрегационных свойств рекомбинантных и нативного бета-казеинов в водных и водно-этанольных растворах применен комплекс физико-химических методов (динамическое светорассеяние, флуоресцентная и инфракрасная спектроскопии, спектроскопия кругового дихроизма). Исследована шапероноподобная активность бета-казеинов по отношению к термо-индуцированной агрегации ряда целевых белков.

Обнаружено, что образование внутри- и межмолекулярных дисульфидных связей, помимо влияния на вторичную структуру, оказывает воздействие на ассоциативные свойства бета-казеина, а также на его способность взаимодействовать с различными белками-субстратами. Точечное введение цистеина в полипептидную цепь бета-казеина способствует росту упорядоченности его вторичной структуры. Наибольшее влияние оказывают замены, затрагивающие гидрофобный домен. Дисульфидные связи, в особенности между гидрофобными участками полипептидной цепи, и, как следствие, димеризация и олигомеризация способствуют самоассоциации рекомбинантных белков.

Показано влияние микрогетерогенности структуры смешанного растворителя на вторичную структуру белка и его коллоидное состояние. В исследуемом интервале концентраций спирта (0 - 50% v/v) бета-казеин претерпевает переход между различными структурными состояниями. Наблюдаемые переходы коррелируют с изменениями в характере межмолекулярных взаимодействий в бинарном растворителе. В области низких концентраций спирта основным фактором, определяющим структуру

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Коннова, Татьяна Анатольевна, 2012 год

1. Бурштейн, Э.А. Собственная люминесценция белка (природа и применение): Итоги науки и техники. Сер. Биофизика / Э.А. Бурштейн -М.: ВИНИТИ, 1977. Т. 7. - 190 с.

2. Бучаченко, A.JI. Химия на рубеже веков: свершения и прогнозы / A.JI. Бучаченко // Успехи химии. 1999. - Т.68, № 2. - С.85-102.

3. Векшин, H.JI. Флуоресцентная спектроскопия биополимеров / H.JI. Векшин Пущино: Фотон-век, 2006. - 168с.

4. Клонирование ДНК: Методы. / Под ред. Д. Гловера. М.: Мир, 1988. -538 с.

5. Зацепина, Г.Н. Свойства и структура воды / Т.Н. Зацепина Москва: Изд-во Московского университета, 1974. - 167 с.

6. Колесниченко, A.B. Белки низкотемпературного стресса растений / A.B. Колесниченко, В.К. Войников Иркутск: Арт-Пресс, 2003. - 196 с.

7. Курганов, Б.И. Оценка активности молекулярных шаперонов в тест-системах, основанных на подавлении агрегации белков / Б.И. Курганов // Успехи биол. химии. 2002. - Т. 42. - С. 89-138.

8. Курганов, Б.И. Кинетика тепловой агрегации белка оболочки вируса табачной мозаики / Б. И. Курганов, Э. Р. Рафикова, Е. Н. Добров // Биохимия. 2002. - Т. 67(5). - С. 525-533.

9. Курочкина, Л.П. Фолдинг белка в клетке / Л.П. Курочкина, В.В. Месянжинов // Успехи биол. химии. 1996. - Т. 36. - С. 49-86.

10. Маниатис, Т. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрис, Дж. Сэмбрук М.: Мир, 1981.-361 с.

11. Маркосян, К. А. Фолдинг, неправильный фолдинг и агрегация. Образование телец включения и агресом / К. А. Маркосян, Б. И. Курганов // Биохимия. 2004. - Т. 69(9). - С. 971-984.

12. Остерман, Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот:

13. Электрофорез и ультрацентрифугирование: практическое пособие / J1.A. Остерман М.: Наука, 1981. 443 с.

14. Панасенко, О.О. Структура и свойства малых белков теплового шока / О.О. Панасенко, М.В. Ким, Н.Б. Гусев // Успехи биол. химии. 2003. -Т.43.-С. 59-98.

15. Патрушев, Л.И. Искусственные генетические системы / Л.И. Патрушев // М.: Наука, 2004. С. 273-302.

16. Привалов, П.Л. Стабильность белков и гидрофобные взаимодействия / П.Л. Привалов // Биофизика. 1987. Т.32. №.5. С.742-758.

17. Сердюк, И. Методы в молекулярной биофизике: структура, функция, динамика: учеб. пособие / И. Сердюк, Н. Заккаи, Дж. Заккаи. М: КДУ, 2009. - 568 с.

18. Смирнов, А.Н. Супранадмолекулярные комплексы воды / А.Н. Смирнов, А.В. Сыроешкин // Российский химический журнал. 2004. -Т. XLVIII. № 2. - С.125-135.

19. Финкельштейн, А.В. Физика белка: Курс лекций с цветными и стереоскопическими иллюстрациями / А.В. Финкельштейн, О.Б. Птицын М.: Книжный дом "Университет", 2002. - 376 с.

20. Эйзенберг, Д. Структура и свойства воды / Д. Эйзенберг, В. Кауцман -Ленинград: Гидрометеоиздат, 1975. 280 с.

21. Small heat shock proteins prevent aggregation of citrate synthase and bind to the N-terminal region which is absent in thermostable forms of citrate synthase / E. Ahrman, N. Gustavsson, C. Hultschig et al. // Extremophiles. -2007.-V. 11.-P. 659-666.

22. АН, E.A. Influence of storage of milk on casein distribution between the micellar and soluble phases and its relations hip to cheese making parameters / E.A. АН, T.A. Anthony, C.C. Gordon // J. Dairy Res. - 1980. -V. 47.-P. 393-400.

23. Clustering and microimmiscibility in alcohol-water mixtures: Evidence frommolecular-dynamics simulations / S.K. Allison, J.P. Fox, J.P. Hargreaves, S.P. Bates // Phys. Rev. B. 2005. - V. B71. - P. 024201.

24. The conformation and aggregation of bovine /?-casein A. I Molecular aspects of thermal aggregation / A. L. Andrews, D. Atkinson, M. T. A. Evans et al. // Biopolymers. 1979. - V. 18.-P. 1105-1121.

25. Effects of whey preparation processes and heat treatment on bovine colostrum antibody activity / K. Ando, M. Koujiya, A. Suzuki et al. // Milchwissenschaft. 2005. - V. 60. - P. 67-71.

26. Arima, S. Structure of beta-casein / S. Arima, R. Niki, K. Takase // J. Dairy Res. 1979. - V. 46(2). - P. 281-282.

27. Direct binding of ethanol to bovine serum albumin: a fluorescent and 13C NMR multiplet relaxation study / N.A. Avdulov, S.V. Chochina, V.A. Daragan et al. // Biochemistry. 1996. - V. 35. - P. 340-347.

28. Banipal, T.S. Thermodynamic study of solvation of some amino acids, diglycine and lysozyme in aqueous and mixed aqueous solutions / T.S. Banipal, G. Singh // Thermochim. Acta. 2004. - V. 412. - P. 63-83.

29. Basha, E. Small heat shock proteins and alpha-crystallins: dynamic proteins with flexible functions / E. Basha, H. O'Neill, E. Vierling // Trends Biochem. Sci. 2012. - V. 37. - P. 106-117.

30. Bech, A.M. Milk protein polymorphism in Danish dairy cattle and the influence of genetic variants on milk yield / A.M. Bech, K.R. Kristiansen // J. Dairy Sci. 1990. - V. 57. - P. 53-63.

31. Bell, S. Health implications of milk containing beta-casein with the A2 genetic variant / S. Bell, G. Grochoski, A. Clarke // Crit Rev Food Sci Nutr. -2006.-V. 46.-P. 93-100.

32. Bellissent-Funel, M.C. Hydration Processes in Biology: Theoretical and Experimental Approaches / M.C. Bellissent-Funel // NATO science series: Life sciences. Editor: M.C. Bellissent-Funel. Amsterdam: IOS Press. -1999.-V. 305.-P. 430.

33. Bellotti, V. Biological activity and pathological implications of misfolded proteins / V. Bellotti, P. Mangione, M. Stoppini // Cell. Mol. Life Sei. -1999.-V. 55.-P. 977-991.

34. Small heat shock protein activity is regulated by variable oligomeric substructure / J.L. Benesch, M. Ayoub, C.V. Robinson, J.A. Aquilina // J. Biol. Chem. 2008. - V. 283. - P. 28513-28517.

35. Berry, G.P. The association of bovine b-casein. The importance of the C-terminal region / G.P. Berry, L.K. Creamer // Biochemistry. 1975. - V. 14, № 16. -P. 3542-3545.

36. Bhattacharyya, J. Molecular chaperone-like properties of an unfolded protein, as-casein / J. Bhattacharyya, K.P. Das // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. P. 15505-15509.

37. Conformational changes of lysozyme in water-ethanol mixtures / A. Bonincontro, A. De Francesco, M. Matzeu et al. // Colloids Surf., B. 1997. -V. 10.-P. 105-111.

38. Bradford, M. A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding / M. Bradford // Anal. Biochem. 1976. - V. 72. - P. 248-254.

39. Brinkmann, U. High-level expression of recombinant genes in Escherichia coli is dependent on the availability of the dnaY gene product / U. Brinkmann, R.E. Mattes, P. Buckel // Gene. 1989. - V. 85. - P. 109-114.

40. Brule, G. The casein micelle and milk coagulation / G. Brule, J. Lenoir, F. Remeuf // Cheese making: From Science to Quality Assurance, 2nd edn. / Editors: A. Eck, J. Gillis // Paris: Lavoisier Publishing, 2000. pp. 7-40.

41. Brunner, J.R. Milk proteins / J.R. Brunner // Food Proteins / Editors: J.R.

42. Whitaker, S.R. Tannenbaum // Connecticut: AVI Publishing Company, Inc., 1977.-pp. 175-208.

43. Bu, H. Comparison of native and recombinant nonphosphorylated human beta-casein: further evidence for a unique beta-casein folding pattern / H. Bu, S.M. Sood, C.W. Slattery // Arch. Biochem. Biophys. 2003. - V. 415. - P. 213-220.

44. Bu, H. The effect of conserved residue charge reversal on the folding of recombinant non-phosphorylated human b-casein / H. Bu, S.M. Sood, C.W. Slattery // Arch. Biochem. Biophys. 2003. - V. 419. № 2. - P. 244-250.

45. Buchheim, W. On the size of monomers and polymers of beta-casein / W. Buchheim, D.G. Schmidt // J. Dairy Res. 1979. - V. 46(2). - P. 277-280.

46. Buchner, J. Supervising the fold: Functional principles of molecular chaperones / J. Büchner // FASEB J. 1996. - V. 10. - P. 10-19.

47. Byler, D.M. Raman Spectroscopic Study of Casein Structure / D.M. Byler, H.M.Jr. Farrell, H. Susi // J. Dairy Sei. 1988. - V. 71. - P. 2622-2629.

48. Small heat-shock proteins and clusterin: intra- and extracellular molecular chaperones with a common mechanism of action and function? / J.A. Carver, A. Rekas, D.C. Thorn, M.R. Wilson // IUBMB Life. 2003. - V. 55. - P. 661-668.

49. Cassiano, M. M. Study of bovine b-casein at water/lipid interface by molecular modeling / M. M. Cassiano, J. A. G. Areas // J. Mol. Struct. 2001. -V. 539(1-3).-P. 279-288.

50. Cassiano, M. M. Dependence of the interfacial behavior of b-casein on phosphoserine residues / M. M. Cassiano, J. A. G. Arêas // J. Dairy Sei. -2003. -V. 86(12). P. 3876-3880.

51. Cayot, P. Effets des technologies sur la structure des proteines du lait. In: Structure et technofonction des proteines du lait / P. Cayot, D. Lorient // Paris: Arilait Recherches. Techniques et documentation-Lavoisier. 1998. - P. 105203.

52. Chebotareva, N.A. Biochemical Effects of Molecular Crowding / N.A. Chebotareva, B.I. Kurganov, N.B. Livanova // Biochemistry (Moscow, Russ. Fed.). -2004. V. 69. № 11.-P. 1239-1251.

53. Chebotareva, N.A. Effect of Molecular Crowding on the Enzymes of Glycogenolysis / N.A. Chebotareva // Biochemistry (Moscow, Russ. Fed.). -2007. V. 72. № 13. - P. 1478-1490.

54. Cheftel, J.C. Propriétés fonctionnelles des protéines / J.C. Cheftel, J.L. Cuq, D. Lorient // Paris: Les protéines alimentaires. Techniques et documentation-Lavoisier. 1985. - P. 70-79.

55. Chen, C.C. Effect of thermal protectants on the stability of bovine milk immunoglobulin G / C.C. Chen, H.M. Chang // J. Agric. Food Chem. -1998. V. 46. - P. 3570-3576.

56. Chen, C.C. Thermal stability of bovine milk immunoglobulin G (IgG) and the effect of added thermal protectants on the stability / C.C. Chen, Y.Y. Tu, H.M. Chang // J. Food Sei. 2000. - V. 65. - P. 188-193.

57. Chen, L. Food protein-based materials as nutraceutical delivery systems / L. Chen, G.E. Remondetto, M. Subirade // Trends Food Sei. Technol. 2006. -V. 17.-P. 272-283.

58. Chobert, J.-M. Specific limited hydrolysis and phosphorylation of food proteins for improvement of functional and nutritional properties / J.-M. Chobert., M.Z. Sitohy, J.R. Whitaker // J. Am. Oil Chem. Soc. 1987. - V. 64.-P. 1704-1711.

59. Choi, B.K. Cation-exchange purification of mutagenized bovine beta-casein expressed in transgenic mouse milk: its putative Asn68-linked glycan is heterogeneous / B.K. Choi, G.T. Bleck, R. Jimenez-Flores // J. Dairy Sci. -2001 A. V. 84. № 1. - p. 44-49.

60. Choi, B.K. Expression and purification of glycosylated bovine beta-casein (L70S/P71S) in Pichia pastoris / B.K. Choi, R. Jiménez-Flores // J. Agrie. Food Chem. 2001B. - V. 49. № 4. - P. 1761-1766.

61. Cinelli, S. Effect of 1-alcohols on micelle formation and protein folding / S. Cinelli, G. Onori, A. Santucci // Colloids Surf., A. 1999. - V. 160. - P. 3-8.

62. Cinelli, S. Effect of aqueous alcohol solutions on the thermal transition of lysozyme: A calorimetric study / S. Cinelli, G. Onori, A. Santucci // J. Phys. Chem. B. 1997. - V. 101.-P. 8029-8034.

63. Clare, D. A. Bioactive milk peptides: a prospectus / D. A. Clare, H. E. Swaisgood // J. Dairy Sci. 2000. - V. 83. - P. 1187-1195.

64. Creamer, L.K. Secondary structure of bovine aSl- and b-casein in solution / L.K. Creamer, T. Richardson, D.A.D. Parry // Arch. Biochem. Biophys. -1981. V. 211. № 2. - P. 689-696.

65. D'Angelo, M. Self-association of monohydric alcohols in water: Compressibility and infrared absorption measurements / M. D'Angelo, G. Onori, A. Santucci // J. Chem. Phys. 1994. - V. 100. - P. 3107-3114.

66. Dalgleish, D.G. Food emulsions—their structures and structure-forming properties / D.G. Dalgleish // Food Hydrocolloids. 2006. - V. 20. - P. 415422.

67. Dephosphorylation-induced structural changes in beta-casein and its amphiphilic fragment in relation to emulsion properties / M. Darewicz, J. Dziuba, P.W.J.R. Caessens, H. Gruppen // Biochimie. 2000. V. 82. - P. 191-195.

68. Davies, D.T. Variation in the protein composition of bovine casein micelles and serum casein in relation to micellar size and milk temperature / D.T.

69. Davies, A.J.R. Law // J. Dairy Res. 1983. - V. 50. - P. 67-75.

70. The supramolecular organisation of ß-casein: effect on interfacial properties / S. Dauphas, N. Mouhous-Riou, B. Metro et al. // Food Hydrocolloids. -2005. V. 19, No. 3. - P. 387-393.

71. De Gennes, P.G. Polymer solutions near an interface. Adsorption and depletion layers / P.G. De Gennes // Macromolecules. 1981. - V. 14. - P. 1637-1644.

72. De Kruif, C.G. Micellisation of b-casein / C.G. De Kruif, V.Y. Grinberg // Colloids Surf., A. 2002. - V. 210. - P. 183-190.

73. De Kruif, C.G. Casein micelle structure, functions and interactions / C.G. De Kruif, C. Holt // Advanced dairy chemistry, 3rd ed. / Editors: P.F. Fox, P.L.H. McSweeney. New York: Kluwer Academic/Plenum Publishers, 2003. - V. 1. Proteins.-P. 213-276.

74. Demchenko, A.P. Protein folding with molecular chaperones / A.P. Demchenko // Comments Mol. Cel. Biophys. 1999. - V. 9. - P. 219-260.

75. Dickinson, E. Caseins in emulsions: interfacial properties and interactions / E. Dickinson // Int. Dairy J. 1999. - V. 9. - P. 305-312.

76. Dickinson, E. Interfacial, emulsifying and foaming properties of milk properties / E. Dickinson // Advanced Dairy Chemistry. New York: Kluwer Academic/Plenum Publishers, 2003. - V. 1. - P. 1229-1260.

77. Effect of pH on antigen-binding activity of IgG from bovine colostrum upon heating / E. Dominguez, M.D. Perez, P. Puyol et al. // J. Dairy Res. 2001. -V. 68.-P. 511-518.

78. Dong, C. Characterization of a Non-electrophoretic Genetic Variant of ß-Casein by Peptide Mapping and Mass Spectrometric Analysis / C. Dong, K.F. Ng-Kwai-Hang // Int. Dairy J. 1998. - V. 8. - P. 967-972

79. Solvent molecules bridge the mechanical unfolding transition state of a protein / L. Dougan, G. Feng, H. Lu, J.M. Fernandez // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 2008.-V. 105.-P. 3185-3190.

80. Intrinsic disorder and protein function / A.K. Dunker, C.J. Brown, J.D. Lawson, L.M.Z. Iakoucheva // Biochemistry. 2002. - V. 41. - P. 6573-6582.

81. Dziuba, J. Physico-chemical characteristics of different genetic variants of bovine (3-casein modified covalently by glucose, galactose and lactose / J. Dziuba, M. Darewicz, H. Mioduszewska // Pol. J. Food Nutr. Sci. 1998. -V. 7. №48.-P. 166-171.

82. Ethanol-perturbed amyloidogenic self-assembly of insulin: looking for origins of amyloid strains / W. Dzwolak, S. Grudzielanek, V. Smirnovas et al. // Biochemistry. 2005. - V. 44. - P. 8948-8958.

83. Mimicking phosphorylation of alphaB-crystallin affects its chaperone activity / H. Ecroyd, S. Meehan, J. Horwitz et al. // Biochem. J. 2007. - V. 401.-P. 129-141.

84. Ecroyd, H. Crystallin proteins and amyloid fibrils / H. Ecroyd, J. A. Carver // Cell. Mol. Life Sci. 2009. - V. 66. - P. 62-81.

85. Egashira, K. Low-frequency Raman spectroscopy of ethanol-water binary solution: evidence for self-association of solute and solvent molecules / K. Egashira, N. Nishi // J. Phys. Chem. B. 1998. - V. 102. - P.4054-4057.

86. Ehrnsperger, M. Small Heat-Shock Proteins / M. Ehrnsperger, J. Buchner // Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine. 2002. - V. 5. - P. 2931-2934.

87. Ehrnsperger, M. Structure and function of small heat shock proteins / M. Ehrnsperger, J. Buchner, M. Gaestel // New York: Molecular Chaperones in the Life Cycle of Proteins, 1998. P. 533-575.

88. Nomenclature of Proteins of Cow's Milk: Fifth Revision / W.N. Eigel, J.E. Butler, C.A. Ernstroem et al. //J. Dairy Sci. 1984. -V. 67. - P. 1599-1631.

89. Ellis, R.J. Discovery of molecular chaperones / R.J. Ellis // Cell Stress

90. Chaperones.- 1996.-V. 1(3).-P. 155-160.

91. Cross-linking of adsorbed casein films with transglutaminase / M. . Faergemand, B. S. Murray, E. Dickinson, K. B. Qvist // Int. Dairy J. 1999.1. V. 9(3-6).-P. 343-346.

92. Nomenclature of the proteins of cows' milk-sixth revision / Jr.H.M. Farrell, R. Jimeniz-Flores, G.T. Bleck et al. // J. Dairy Sci. 2004. - V. 87. - P. 1641-1674.

93. Fasman, C. D. Circular Dichroism and the Conformational Analisys of Biomolecules / Editor: C. D. Fasman // New York: Plenum Press, 1996. pp. 738.

94. Feder, M.E. Heat-shock proteins, molecular chaperones and the stressresponse: Evolutionary and ecological physiology / M.E. Feder, G. Hofmann // Annu. Rev. Physiol. 1999. - V. 61. - P. 243-82.

95. Mass spectrometry-based procedure for the identification of ovine casein heterogeneity / P. Ferranti, R. Pizzano, G. Garro et al. // J. Dairy Res. -2001.-V. 68.-P. 35-51.

96. FitzGerald, R.J. Exploitation of casein variants / R.J. FitzGerald // Milk composition, Production and Biotechnology / Editors: R.A.S Welch, D.J.W. Burns, S.R. Davis, A.I. Popay, C.G. Prosser. New York: CAB International, 1997.-V.10.-P. 153-172.

97. Milk proteins, general and historical behavior // Advanced dairy chemistry. 3rd ed. / Editors: P.F. Fox, P.L.H. McSweeney. New York: Kluwer Academic/Plenum Publishers, 2003. - V. 1 Proteins. - p. 1- 48.

98. Dairy Chemistry and Biochemistry. First edition / Editors: P.F. Fox, P.L.H. McSweeney. New York: Thomson Science, 1998. - P. 396.

99. Fraunfelder, H. The Energy Lanscapes and Motions of Proteins / H. Fraunfelder, S.G. Sligar, P.G. Wolynes // Science. 1991. - V. 254. - P. 1598-1603.

100. Interactions between small heat shock protein subunits and substrate in small heat shock protein-substrate complexes / K.L. Friedrich, K.C. Giese, N.R. Buan, E. Vierling // J. Biol. Chem. 2004. - V. 279. - P. 1080-1089.

101. Freeman, B.C. The human cytosolic molecular chaperones hsp90, hsp70 (hsc70) and hdj-1 have distinct roles in recognition of normative protein and protein refolding / B.C. Freeman, R.I. Morimoto // EMBO J. 1996. - V.15. № 12. - P. 2969-2979.

102. Frydman, J. Chaperones get in touch: the Hip-Hop connection / J. Frydman, J. Hohfeld // Trends Biochem. Sci. 1997. - V. 22(3). - P. 87-92.

103. Modifications of the charges at the N-terminus of bovine beta-casein: Consequences on its structure and its micellisation / S. Gangnard, Y. Zuev, J.-C. Gaudin et al. // Food Hydrocolloids. 2007. -V. 21. - P. 180-190.

104. Gamier, J. Conformation of beta-casein in solution. Analysis of a thermal transition between 5 and 40 degrees C / J. Gamier // J. Mol. Biol. 1966. - V. 19(2).-P. 586-590.

105. Gamier, J. Analysis of the accuracy and implications of simple methods for predicting the secondary structure of globular proteins / J. Gamier, D.J. Osguthorpe, B. Robson // J. Mol. Biol. 1978. - V. 120. - P. 97-120.

106. Engineering of caseins and modulation of their structures and interactions / J.-C. Gaudin, A. Le Pare, B. Castrec et al. // Biotechnol. Adv. 2009. - V. 27. №6.-P. 1124-1131.

107. Giese, K.C. Changes in oligomerization are essential for the chaperone activity of a small heat shock protein in vivo and in vitro / K.C. Giese, E. Vierling // J. Biol. Chem. 2002. - V. 227. - P. 46310^6318.

108. Giese, K.C. Mutants in a small heat shock protein that affect the oligomeric state. Analysis and allele-specific suppression / K.C. Giese, E. Vierling // J. Biol. Chem. 2004. - V. 279. - P. 32674-32683.

109. Determination of the phosphorylation level and deamidation susceptibility of equine P-casein / J-M. Girardet, L. Miclo, S. Florent et al. // Proteomics. -2006.-V. 6.-P. 3707-3717.

110. Gobetti, M. Angiotensin I-converting-enzyme-inhibitory and antimicrobial bioactive peptides / M. Gobetti, F. Minervini, C. G. Rizzello // Int. J. Dairy Technol. 2004. - V. 57. - P. 173-188.

111. Graham, E.R.B. On the isolation and conformation of bovine P-casein Al / E.R.B. Graham, G.M. Malcolm, H.A. McKenzie // Int. J. Biol. Macromol. -1984.-V. 6.-P. 155-161.

112. Greenberg, R. Human P-casein: amino acid sequence and identification of phosphorylation sites / R. Greenberg, M. L. Groves, H. J. Dower // J. Biol. Chem. 1984.-V. 259.-P. 5132-5138.

113. Chaperone-like activity of tubulin / S. Guha, T.K. Manna, K.P. Das, B. Bhattacharyya // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - P. 30077-30080.

114. Molecular structure of alcohol-water mixtures / J.H. Guo, Y. Luo, A. Augustsson et al. // Phys. Rev. Lett. 2003. - V. 91. - P. 157401.

115. Han, S.K. Biochemical, molecular and physiological characterization of a new beta-casein variant detected in Korean cattle / S.K. Han, Y.C. Shin, H.D. Byun // Anim. Genet. 2000. - V. 31. - P. 49-51.

116. Hartl, F. U. Molecular chaperones in cellular protein folding / F. U. Hartl // Nature (London). 1996. -V. 381. - P. 571-580.

117. Some like it hot: the structure and function of small heat-shock proteins / M. Haslbeck, T. Franzmann, D. Weinfurtner, J. Buchner // Nat. Struct. Mol. Biol. -2005. V. 12.-P. 842-846.

118. Chemometric study of the aggregation of alcohol dehydrogenase and its suppression by beta-caseins: a mechanistic perspective / M. Hassanisadi, A. Barzegar, R. Yousefi et al. // Anal. Chim. Acta. 2008. - V. 613. - P. 40-47.

119. Hegyi, H. Intrinsically disordered proteins display no preference for chaperone binding in vivo / H. Hegyi, P. Tompa // PLoS Comput. Biol. -2008.-V. 4. el000017.

120. Hendrick, J.P. Molecular chaperone functions of heat-shock proteins / J.P. Hendrick, F.U. Hartl // Annu. Rev. Biochem. 1993. - V. 62. - P. 349-384.

121. Herskovits, T.T. On the conformation of caseins. Optical rotatory properties / T.T. Herskovits // Biochemistry. 1966. - V. 5(3). - P. 1018-1026.

122. Extent of N-terminal methionine excision from Escherichia coli proteins is governed by the side-chain length of the penultimate amino acid / P. H. Hirel, M. J. Schmitter, P. Dessen et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. - V. 86.-P. 8247-8251.

123. Structure and stability of bovine casein micelles / C. Holt, C.B. Anfinsen, J.T. Edsall et al. San Diego: Academic Press. Adv. Prot. Chem., 1992. - V. 43.-P. 63-151.

124. Holt, C. Caseins as rheomorphic proteins: Interpretation of primary and secondary structures of the asl-, beta- and kappa-caseins / C. Holt, L. Sawyer

125. J. Chem. Soc., Faraday Trans. 1993. - V. 89. - P. 2683-2692.

126. Holt, C. Primary and predicted secondary structures of the caseins in relation to their biological functions / C. Holt, L. Sawyer // Protein Eng. 1988. - V. 2(4).-P. 251-259.

127. Home, D. S. Casein structure, self-assembly and gelation / D. S. Home // Curr. Opin. Colloid Interface Sci. 2002. - V. 7. - P. 456-461.

128. Home, D. S. Steric effects in the coagulation of casein micelles by ethanol / D. S. Home // Biopolymers. 1984. - V. 23. - P. 989-993.

129. Home, D.S. Casein interactions: casting light on black boxes, the structure of dairy products / D. S. Home // Int. Dairy J. 1998. - V. 8. - P. 171-177.

130. Home, D.S. Ethanol stability / D.S. Home // Advanced dairy chemistry. 2nd ed. Editor: P.F. Fox. London: Elsevier Applied Science, 1992. - V. Proteins l.-P. 657-681.

131. Hwang, D.S. Aggregated dnaA protein is dissociated and activated for DNA replication by phospholipase and dnaK protein / D.S. Hwang, E. Crooke, A. Komberg // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265. - P. 19244-19248

132. Clusterin has chaperone-like activity similar to that of small heat shock proteins / D.T. Humphreys, J.A. Carver, S.B. Easterbrook-Smith, M. R. Wilson // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. - P. 6875-6881.

133. Huppertz, T. Biocompatible micro-gel particles from cross-linked casein micelles / T. Huppertz, M.A. Smiddy, C.G. De Kruif // Biomacromolecules. -2007.-V. 8.-P. 1300-1305.

134. Jakob, U. Assisting spontaneity: the role of Hsp90 and small Hsps as molecular chaperones / U. Jakob, J. Buchner // Trends Biochem. Sci. 1994. -V. 19(5).-P. 205-211.

135. Janes, RW. Bioinformatics analyses of circular dichroism protein reference databases / RW. Janes // Bioinformatics. 2005. - V. 21, № 23. - P. 42304238.

136. Jenness, R. Comparative aspects of milk proteins / R. Jenness // J. Dairy Res.- 1979. V. 46.-P. 197-210.

137. Jeschke, M. Multi-resolution Spatial Simulation For Molecular Crowding / M. Jeschke, A.M. Uhrmacher // Proceedings of the Winter Simulation Conference / Editors: S.J. Mason, R.R. Hill, L. Moench, O. Rose. 2008. - P. 1384-1392.

138. Johnson, W.C.Jr. Protein secondary structure and circular dichroism: A practical guide / W.C.Jr. Johnson // Proteins: Struct., Funct., Genet. 1990. -V. 7.-P. 205-214.

139. Johnson, J. L. Protein folding in vivo: unraveling complex pathways / J. L. Johnson, E. A. Craig // Cell (Cambridge). 1997. - V. 90. - P. 201-204.

140. Micellar structure of beta-casein observed by small-angle X-ray scattering / K. Kajiwara, R. Niki, H. Urakawa et al. // Biochim. Biophys. Acta. 1988. -V. 955.-P. 128-134.

141. Kane, J.F. Effects of rare codon clusters on high-level expression of heterologous proteins in Escherichia coli / J.F. Kane // Curr. Opin. Biotechnol.- 1995. V. 6. № 5. p. 494-500.

142. Novel role for mitochondria: protein kinase Ctheta-dependent oxidative signaling organelles in activation-induced T-cell death / M. Kaminski, M. Kiessling, D. Suss et al. // Mol. Cell. Biol. 2007. - V. 27. - P. 3625-3639.

143. Kane, J.F. Effects of rare codon clusters on high-level expression of heterologous proteins in Escherichia coli / J.F. Kane //Curr. Opin. Biotechnol.- 1995.-V. 6.-P. 494-500.

144. Kegeles, G. Shell-model for size distribution in micelles / G. Kegeles // J. Phys. Chem. 1979. - V. 83 (13). - P. 1728-1732.

145. Kegeles, G. The critical micelle condition revisited / G. Kegeles // Indian J.

146. Biochem. Biophys. 1991. - V. 29. - P. 97-102.

147. Kelly, S. M. The application of circular dichroism to studies of protein folding and unfolding / S. M. Kelly, N. C. Price // Biochim. Biophys. Acta. -1997.-V. 1338.-P. 161-185.

148. Kelly, S. M. The use of circular dichroism in the investigation of protein structure and function / S. M. Kelly, N. C. Price // Curr. Protein Pept. Sci. -2000.-V. l.-P. 349-384.

149. Kim, S. H. Surface active properties of protein: effects of progressive succinylation on film properties and foam stability of glycinin / S. H. Kim, J. E. Kinsella // J. Food Sci. 1987. - V. 52. - P. 1341-1345.

150. Kim, D. A. Effect of thermal treatment on interfacial properties of lactoglobulin / D. A. Kim, M. Cornec, G. Narsimham // J. Colloid Interface Sci. 2005. - V. 285. - P. 100-109.

151. Kinsella, J.E. Proteins in whey: chemical, physical, and functional properties / J.E. Kinsella, D.M. Whitehead // Adv. Food Nutr. Res. 1989. - V. 33. - P. 343^38.

152. Kumosinski, T.F. Three-dimensional molecular modeling of bovine caseins: an energy-minimized beta-casein structure / T.F. Kumosinski, E.M. Brown, H.M.Jr. Farell // J. Dairy Sci. 1993. - V. 76. - P. 931-945.

153. Kurganov, B.I. Kinetics of Protein Aggregation. Quantitative Estimation of the Chaperone-Like Activity in Test-Systems Based on Suppression of Protein Aggregation / B.I. Kurganov // Biochemistry (Moscow, Russ. Fed.). -2002. V. 67. - P. 409-422.

154. Kurland, C. Errors of heterologous protein expression / C. Kurland, J. Gallant // Curr. Opin. Biotechnol. 1996. - V. 7. - P. 489-493.

155. Kyte, J. A simple method for displaying the hydropathic character of a protein / J. Kyte, R.F. Doolittle // J. Mol. Biol. 1982. - V. 157. - P. 105132.

156. Lakowicz, J. R. Principles of fluorescence spectroscopy, 2nd edition ed. / J.

157. R. Lakowicz // New York: Kluwer Academic/Plenum Publishers, 1999.

158. Larkin, J. A. Thermodynamic properties of aqueous non-electrolyte mixtures I. Excess enthalpy for water + ethanol at 298.15 to 383.15 K / J.A. Larkin // J. Chem. Thermodyn. 1975. -V. 7. - P. 137-148.

159. Laugesen, M. Ischaemic heart disease, Type 1 diabetes and cow milk A1 B-casein / M. Laugesen, R. Elliot // N. Z. Med. J. 2003. - V. 116. - P. 1-19

160. Leclerc, E. Structure of b-casein micelles / E. Leclerc, P. Calmettes // Physica B (Amsterdam, Neth.). 1997. - V. 241-243. - P. 1141-1143.

161. Li, S.Q. Effects of pulsed electric fields and heat treatment on stability and secondary structure of bovine immunoglobulin G / S.Q. Li, J.A. Bomser, H.Q. Zhang // J. Agric. Food Chem. 2005. - V. 53. - P. 663-670.

162. Stability of bovine immunoglobulins to thermal treatment and processing / E. Li-Chan, A. Kummer, J.N. Losso et al. // Food Res. Int. 1995. - V. 28. -P. 9-16.

163. Li-Chan, E. Enzymic dephosphorylation of bovine casein to improve acid clotting properties and digestibility for infant formula / E. Li-Chan, S. Nakai // J. Dairy Res. 1989. - V. 56(3). - P. 381-390.

164. The effect of heat treatment on bovine immunoglobulins / P. Lindstrom, M. Paulsson, T. Nylander et al. // Milchwissenschaft. 1994. - V. 49. - P. 6771.

165. Livney, Y. D. A study of beta-casein tertiary structure by intramolecular crosslinking and mass spectrometry / Y. D. Livney, A. L. Schwan, D. G. Dalgleish // J. Dairy Sci. 2004. - V. 87(11). - P. 3638-3647.

166. Effect of alcohols on aqueous lysozyme-lysozyme interactions from staticlight-scattering measurements / W. Liu, D. Bratko, J.M. Prausnitz, H.W. Blanch // Biophys. Chem. 2004. - V. 107. - P. 289-298.

167. Lopez-Fandino, R. Functional improvement of milk whey proteins induced by high hydrostatic pressure / R. Lopez-Fandino // Crit. Rev. Food Sci. Nutr.- 2006.-V. 46(4).-P. 351-363.

168. Lubas, B. Proton nuclear magnetic resonance study of the association of monovalent and divalent alcohols with bovine serum albumin / B. Lubas, M. Soltysik-Rasek, I. Lesniewska // Biochemistry. 1979. - V. 18. - P. 49434951.

169. Kinetic and thermodynamic parameters for heat denaturation of bovine milk IgG, IgA and IgM / G. Mainer, L. Sanchez, J.M. Ena, M. Calvo // J. Food Sci.- 1997. V. 62. - P. 1034-1038.

170. Maubois, J.L. Separation, extraction and fractionation of milk protein components / J.L. Maubois // Lait. 1984. -V. 64. - P. 485.

171. McGowen, J. C. Relationship between the solubility of amino acids / J. C. McGowen, A. Mellors // J. Appl. Biochem. 1979. - V. 1. - P. 423-428.

172. McHaourab, H.S. Structure and mechanism of protein stability sensors: chaperone activity of small heat shock proteins / H.S. McHaourab, J.A. Godar, P.L. Stewart // Biochemistry. 2009. - V. 48. - P. 3828-3837.

173. McMahon, D.J. Rethinking casein micelle structure using electron microscopy / D.J. McMahon, W.R. McManus // J. Dairy Sci. 1998. - V. 81. -P. 2985-2993.

174. Meisel, H. Biofunctional peptides from milk proteins. Mineral binding and cytomodulatory effects / H. Meisel, R. J. FitzGerald // Curr. Pharm. Des. -2003.-V. 9.-P. 1289-1295.

175. Meisel, H. Biochemical properties of peptides encrypted in bovine milk protein / H. Meisel // Curr. Med. Chem. 2005. - V. 12. - P. 1905-1919.

176. Mercier, J.C. Primary structure of bovine caseins. A review / J.C. Mercier, F. Grosclaude, B. Ribadeau-Dumas // Milchwissenschaft. 1972. - V. 27.1. P. 402^12.

177. Messens, W. The use of high pressure to modify the functionality of food proteins / W. Messens, J. Van Camp, A. Huyghebaert // Trends Food Sei. Technol. 1997. - V. 8. - P. 107-112.

178. The primary structure of a low-Mr multiphosphorylated variant of ß-casein in equine milk / L. Miclo, J.-M. Girardet, A. S. Egito et al. // Proteomics. -2007.-V. 7.-P. 1327-1335.

179. Thermodynamics of Micellization of Bovine beta-Casein Studied by High-Sensitivity Differential Scanning Calorimetry / L.M. Mikheeva, N.V. Grinberg, V.Ya. Grinberg et al. // Langmuir. 2003. - V. 19. - P. 2913-2921.

180. Miyoshi, D. Molecular crowding effects on structure and stability of DNA /

181. D. Miyoshi, N. Sugimoto // Biochimie. 2008. - V. 90. - P. 1040-1051.

182. Small heat shock proteins, ClpB and the DnaK system form a functional triade in reversing protein aggregation / A. Mogk, E. Deuerling, S. Vorderwulbecke et al. // Mol. Microbiol. 2003A. - V. 50. - P. 585-595.

183. Refolding of substrates bound to small Hsps relies on a disaggregation reaction mediated most efficiently by ClpB/DnaK / A. Mogk, C. Schlieker, K.L. Friedrich et al. // J. Biol. Chem. 2003E. - V. 278. - P. 31033-31042.

184. Casein proteins as molecular chaperones / P.E. Morgan, T.M. Treweek, R.A. Lindner et al. // J. Agric. Food Chem. 2005. - V. 53. - P. 2670-2683.

185. Murphy, J. M. Fractionation of sodium caseinate by ultrafiltration / J. M. Murphy, P. F. Fox // Food Chem. 1991. - V. 39. - P. 27-38.

186. Nakai, S. Chemical and enzymatic modification of milk proteins / S. Nakai,

187. E. Li-Chan // Developments in Dairy Chemistry / Editor: P. F. Fox. // London, Elsevier, 1982. V. 4, Functional Milk Proteins.

188. Nakai, S. Structure modification and functionality of whey proteins: quantitative structure-activity relationship approach / S. Nakai, E. Li-Chan // J. Dairy Sei. 1985. - V. 68. - P. 2763-2772.

189. Netzer, W.J. Protein folding in the cytosol: Chaperonin-dependent andindependent mechanisms / W.J. Netzer, F.U. Hartl // Trends Biochem. Sci. -1998.-V. 23.-P. 68-73.

190. Ng-Kwai-Hang, K.G. Genetic polymorphism of milk proteins / K.G Ng-Kwai-Hang, F. Grosclaude // Advanced Dairy Chemistry. / Editor: P.F. Fox. -London: Elsevier Science Publishers, 1992. P. 405-455.

191. Niki, V. R. On the shape and size of temperature-dependent /?-casein aggregates / Niki, V. R., K. Takase, S. Arima // Milchwissenschaft 1977. -V. 32. - P. 577-582. (In German).

192. Hydrogen Bonding Cluster Formation and Hydrophobic Solute Association in Aqueous Solution of Ethanol / N. Nishi, S. Takahashi, M. Matsumoto et al. // J. Phys. Chem. 1995. - V. 99. - P.462-468.

193. Noelken, M. Conformation of beta-casein B / M. Noelken, M. Reibstein // Arch. Biochem. Biophys. 1968. - V. 123. - P. 397.

194. O'Connell, J.E. Association behavior of b-casein / J.E. O'Connell, V.Y. Grinberg, C.G. De Kruif // J. Colloid Interface Sci. 2003. - V. 258. - P. 3339.

195. Onori, G. Adiabatic compressibility and structure of aqueous solutions of ethyl alcohol / G. Onori // J. Chem. Phys. 1988. - V. 89. - P. 4325^332.

196. Onori, G. Dynamical and structural properties of water/alcohol mixtures / G. Onori, A. Santucci // J. Mol. Liq. 1996. - V. 69. - P. 161-181.

197. Preferential solvation of lysozyme in water/ethanol mixtures / M.G. Ortore, P. Mariani, F. Carsughi et al. // J. Chem. Phys. 2011. - V. 135. - P. 245103.

198. Looking for the best experimental conditions to detail the protein solvation shell in a binary aqueous solvent via small angle scattering / M.G. Ortore, R. Sinibaldi, F. Spinozzi et al. // J. Phys.: Conf. Ser. 2009. - V. 177. - P.012007.

199. Solvation in protein (un)folding of melittin tetramer-monomer transition /

200. C.M. Othon, O. Kwon, M.M. Lin, A.H. Zewail // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.-2009.-V. 106.-P. 12593-12598.

201. Park, S.H. The role of PII conformations in the calculation of peptide fractional helix content / S.H. Park, W. Shalongo, E. Stellwagen // Protein Sci. 1997. - V. 6. - P. 1694-1700.

202. Parodi, R.M. Thermodynamics of unfolding of lysozyme in aqueous alcohol solutions / R.M. Parodi, E. Bianchi, A. Ciferri // J. Biol. Chem. 1973. - V. 248.-P. 4047-4051.

203. Paulsson, M. Thermal Denaturation of Whey Proteins in Mixtures with Caseins Studied by DSC / M. Paulsson, P. Dejmek // J. Dairy Sci. 1990. - V. 73.-P. 590-600.

204. Payens, T. A. J. Casein micelles and micelles of |3- and K-casein / T. A. J. Payens, H. Vreeman // Solution Behaviour of Surfactants / Editors: K. L. Mittal, E. J. Fendler // New York: Plenum Publishing, 1982. V. 1. - P. 543571.

205. Payens, T. A J. Self-association in non-ideal systems. Combined light scattering and sedimentation measurements in (3-casein solutions / T. A J. Payens, J. A Brinkhuis, B. W. Van Markwijk // Biochim. Biophys. Acta. -1969.-V. 175.-P. 434.

206. Phillips, L.G. Structure-function properties of food proteins / L.G. Phillips,

207. D.M. Whitehead, J. Kinsella // Academic Press San Diego, 1994. P. 34-51.

208. Self-assembly of bovine beta-casein below the isoelectric pH /1. Portnaya, E. Ben-Shoshan, U. Cogan et al. // J. Agric. Food Chem. 2008. - V. 56. - P.2192-2198.

209. Pozani, S. Functionality of lupin seed protein isolate in relation to its interfacial behavior / S. Pozani, G. Doxastakis, V. Kiosseoglou // Food Hydrocolloids. 2002. - V. 16. - P. 241-247.

210. Provencher, S.W. Estimation of globular protein secondary structure from circular dichroism / S.W. Provencher, J. Glockner // Biochemistry. 1981. -V. 20.-P. 33-37.

211. Qi, P.X. Thermal and Alkaline Denaturation of Bovine (3-Casein / P.X. Qi, E.D. Wickham, H.M.Jr. Farrell // Protein J. 2004. - V. 23. № 6. - P. 389402.

212. Implication of C-Terminal Deletion on the Structure and Stability of Bovine b-casein / P.X. Qi, E.D. Wickham, E.G. Piotrowski et al. // Protein J. 2005. - V. 24. № 7-8. - P. 431-444.

213. Interface characterization and aging of bovine serum albumin stabilized oil-in-water emulsions as revealed by frontsurface fluorescence / V. Rampon, L. Lethuaut, N. Mouhous-Riou, C. Genot // J. Agric. Food Chem. 2001. - V. 49.-P. 4046-4051.

214. Raschke, T.M. Water structure and interactions with protein surfaces / T.M. Raschke // Curr. Opin. Struct. Biol. 2006. - V. 16. - P. 152-159.

215. Ratajczak, E. Distinct activities of Escherichia coli small heat shock proteins IbpA and IbpB promote efficient protein disaggregation / E. Ratajczak, S. Zietkiewicz, K. Liberek // J. Mol. Biol. 2009. - V. 386. - P. 178-189.

216. Primary structure of bovine beta casein. Complete sequence / B. Ribadeau-Dumas, G. Brignon, F. Grosclaude, J.C. Mercier // Eur. J. Biochem. 1972. -V. 25.-P. 505-514.

217. Molecular modeling and genetic engineering of milk proteins / T. Richardson, S. Oh, R. Jimenez-Flores et al. // Advanced dairy chemistry / Editor: P. F. Fox // London, New York: Elsevier Applied Science, 1992. V. 1, Proteins.-P. 545-577.

218. Rollema, H.S. Casein association and micelle formation / H.S. Rollema // Advanced Dairy Chemistry: Proteins. / Editor: P.F. Fox. London: Elsevier Science Publishers, 1992.-P. 111-141.

219. A Molecular Dynamics Study of Aggregation Phenomena in Aqueous n-Propanol / A.B. Roney, B. Space, E.W. Castner et al. // J. Phys. Chem. B. -2004.-V. 108.-P. 7389-7401.

220. Rosenthal, I. Thermal denaturation of immunoglobulins in bovine milk as a heat treatment indicator / I. Rosenthal, S. Bernstein, U. Merin // Milchwissenschaft. 1999. - V. 54. - P. 367-368.

221. Sasahara, K. Effect of ethanol on folding of hen egg-white lysozyme under acidic condition / K. Sasahara, K. Nitta // Proteins. 2006. - V. 63. - P. 127135.

222. Conformational changes in the unfolding process of lysozyme in water and ethanol/water solutions / P. Sassi, G. Onori, A. Giugliarelli et al. // J. Mol. Liq. -2011. V. 159.-P. 112-116.

223. Milk protein structure what can it tell the dairy industry?: A Review / L. Sawyer, P.N. Barlow, M.J. Boland et al. // Int. Dairy J. - 2002. - V. 12. - P. 299-310.

224. Sawyer, L. The secondary structure of milk proteins and their biological function / L. Sawyer, C. Holt // J. Dairy Sei. 1993. - V. 76. - P. 3062 -3078.

225. Schellman, J.A. Destabilization and stabilization of proteins / J.A. Schellman // Q. Rev. Biophys. 2005. - V. 38. - P. 351-361.

226. Schmidt, D.G. Association of caseins and casein micelle structure / D.G. Schmidt // Developments in Dairy Chemistry. London, 1982. V. 1. - P. 61

227. Schmidt, D.G. The evaluation of positive and negative contributions to the second virial coefficient of some milk proteins / D.G. Schmidt, T.A.J. Payens // J. Colloid Interface Sei. 1972. - V. 39. - P. 655-662.

228. Mitochondrial and cytosolic ATP/ADP ratios in rat liver in vivo / W.-D. Schwenke, S. Soboll, H. J. Seitz, H. Sies // Biochem. J. 1981. - V. 200. - P. 405-408.

229. Skowyra, D. The E. coli dnaK gene product, the hsp70 homolog, can reactivate heat-inactivated RNA polymerase in an ATP hydrolysis-dependent manner / D. Skowyra, C. Georgopoulos, M. Zylicz // Cell. 1990. - V. 62(5). -P. 939-944.

230. Shewry, P.R. Disulphide bonds in wheat gluten proteins / P.R. Shewry, A.S. Tatham // J. Cereal Sei. 1997. V. 25. -P. 207-227.

231. Overproduction of bovine b-casein in Escherichia coli and engineering of its main chymosin cleavage site / G. Simons, W. Vandenheuvel, T. Reynen, et al. // Protein Eng. 1993. - V. 6(7). - P. 763-770.

232. Preferential hydration of lysozyme in water/glycerol mixtures: a small-angle neutron scattering study / R. Sinibaldi, M.G. Ortore, F. Spinozzi et al. // J. Chem. Phys. -2007. V. 126.-P. 235101.

233. Sitohy, M. Susceptibility to trypsinolysis of esterified milk proteins / M. Sitohy, J.-M. Chobert, T. Haertle // Int. J. Biol. Macromol. 2001. - V. 28(4).-P. 263-271.

234. Slattery, C.W. Hydrophobic interactions in human casein micelle formation: Beta-casein aggregation / C.W. Slattery, S.M. Sood, P. Chang // J. Dairy Res. -1989.-V. 56.-P. 427-433.

235. Excess entropy in alcohol-water solutions: a simple clustering explanation / A.K. Soper, L. Dougan, J. Crain, J.L. Finney // J. Phys. Chem. 2006. - V. 110.-P. 3472-3476.

236. Temperature-induced extended helix/random coil transitions in a group 1 late embryogenesis-abundant protein from soybean / J. L. Soulages, K. Kim, C. Walters, J. C. Cushman // J. Plant Physiol. 2002. - V. 128. - P. 822-832.

237. Microcalorimetric study of thermal unfolding of lysozyme in water/glycerol mixtures: an analysis by solvent exchange model F./ Spinozzi, M.G. Ortore, R. Sinibaldi et al. // J. Chem. Phys. 2008. - V. 129. - P. 035101.

238. Sreerama, N. Estimation of protein secondary structure from circular dichroism spectra: comparison of CONTIN, SELCON, and CDSSTR methods with an expanded reference set / N. Sreerama, R. W. Woody // Anal. Biochem. 2000. - V. 287. - P. 252-260.

239. Sreerama, N. A self-consistent method for the analysis of protein secondary structure from circular dichroism / N. Sreerama, R.W. Woody // Anal. Biochem. 1993. - V. 209. - P. 32^14.

240. Stevenson, E. M. Heat-induced aggregation of whey proteins enhanced by addition of thiolated b-casein / E. M. Stevenson, A. J. R. Law, J. Leaver // J. Agric. Food Chem. 1996. - V. 44(9). - P. 2825-2828.

241. Sundd, M. Alcohol-induced conformational transitions in ervatamin C. An alpha-helix to beta-sheet switchover / M. Sundd, S. Kundu, M.V. Jagannadham // J. Protein Chem. 2000. - V. 19. - P. 169-176.

242. Suresh, S. J. Theory of dielectric constant of aqueous solutions / S. J. Suresh, V.M. Naik // J. Chem. Phys. 2002. - V. 116. - P. 4212-4220.

243. Swaisgood H.E. Chemistry of caseins / H.E. Swaisgood // Advanced Dairy

244. Chemistry. 1992. - V. 1 Proteins. - P. 63-110.

245. Swaisgood, H.E. Review and update of casein chemistry / H.E. Swaisgood // J. Dairy Sci. 1993. - V. 76. - P. 3054-3061.

246. Swaisgood, H.E. Chemistry of caseins / H.E. Swaisgood // Advanced Dairy Chemistry 3rd ed. / Editors: P.F. Fox, P.L.H. McSweeney NY: Kluwer Academic/Plenum Publishers, 2003. - V. 1. Proteins - pp. 139-202.

247. A Raman optical activity study of rheomorphism in caseins, synucleins and tau. New insight into the structure and behaviour of natively unfolded proteins / C. D. Syme, E. W. Blanch, C. Holt et al. // Eur. J. Biochem. 2002. - V. 269.-P. 148-156.

248. Tai, M. A micelle model for the sedimentation behavior of bovine beta-casein / M. Tai, G. Kegeles // Biophys. Chem. 1984. - V. 20(1-2). - P. 8187.

249. A casein variant in cow's milk is atherogenic / K.A. Tailford, C.L. Berry, A.C. Thomas, J.H. Campbell // Atherosclerosis. 2003. - V. 170. - P. 13-19.

250. Handbook of milk composition. International Series. / Editor: S.L. Taylor. -Academic Press, 1995. p. 944.

251. Milk proteins: from expression to food // Food Science and Technology, International Series. / Editors: A. Thompson, M. Boland, H. Singh. Elsevier Inc., 2009.-p. 561.

252. Thurn, A. Structure of casein micelles I. Small angle neutron scattering and light scattering from /?- and ^-casein / A. Thurn, W. Burchard, R. Niki // Colloid Polym. Sci. 1987. - V. - 265. - P. 653-666.

253. Timasheff, S. N. Protein-solvent preferential interactions, protein hydration, and the modulation of biochemical reactions by solvent components / S. N. Timasheff// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2002. - V. 99. - P. 9721-9726.

254. Timasheff, S.N. Part B. In Vivo Pathways of Degradation and Strategies for Stabilization / Timasheff, S.N. // Stability of Protein Pharmaceutical. / Editors: T.J. Ahern, M.C. Manning. New York: Plenum, 1992. - p. 265.

255. Tompa, P. Intrinsically unstructured proteins / P. Tompa // Trends Biochem. Sci. 2002. - V. 27. - P. 527-533.

256. Thompson, M.P. a- and 3-caseins / M.P. Thompson // Milk proteins: chemistry and molecular biology / Editors: H.A. McKenzie. New York: Academic Press, 1971.-V. 2.-P. 117-174.

257. Toumadje, A. Systemin has the characteristics of a poly(L-proline) II type helix / A. Toumadje, W. C. Jr. Johnson // J. Am. Chem. Soc. 1995. - V. 117.-P. 7023-7024.

258. Treweek, M.T. Intracellular protein unfolding and aggregation: the role of small heat-shock chaperone proteins / M.T. Treweek, A.M. Morris, J.A. Carver // Aust. J. Chem. 2003. - V. 56. - P. 357-367.

259. Effect of heat and high-pressure treatments on microbiological quality and immunoglobulin G stability of caprine colostrum / A.J. Trujillo, N. Castro, J.M. Quevedo et al. // J. Dairy Sci. 2007. - V. 90(2). - P. 833-839.

260. Tuinier, R. Stability of casein micelles in milk / R. Tuinier, C.G. DeKruif // J. Chem. Phys. 2002. - V. 117. - P. 1290-1295.

261. Uversky, V.N. Conformational constraints for amyloid fibrillation: the importance of being unfolded / N. Uversky, A.L. Fink // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - V. 1698.-P. 131-153.

262. Uversky, V.N. Natively unfolded proteins / V.N. Uversky // Unfolded proteins: from denatured to intrinsically disordered. / Editor: T.P. Creamer. -Inc. NY: Nova Science Publishers, 2008. P.23 7-294.

263. Uversky, V.N. What does it mean to be natively unfolded? / N. Uversky // Eur. J. Biochem. 2002. - V. 269. - P. 2-12.

264. Van Hekken, D. L. Functional properties of dephosphorylated bovine whole casein / D. L. Van Hekken, E. D. Strange // J. Dairy Sci. 1993. - V. 76(11). -P. 3384-3391.

265. Van Montfort, R. Structure and function of the small heat shock protein/alpha-crystallin family of molecular chaperones / R. Van Montfort, C.

266. Slingsby, E. Vierling // Adv. Protein Chem. 2001 A. - V. 59. - P. 105-156.

267. Crystal structure and assembly of a eukaryotic small heat shock protein / R.L. Van Montfort, E. Basha, K.L. Friedrich et al. // Nat. Struct. Biol. -2001B. V. 8. - P. 1025-1030.

268. Visser, S. Phenotyping of bovine milk proteins by reversed-phase highperformance liquid chromatography / S. Visser, C. J. Slangen, H.S. Rollema // J. Chromatogr. 1991. -V. 548. - P. 361-370.

269. Wakisaka, A. Phase separation of water-alcohol binary mixtures induced by the microheterogeneity / A. Wakisaka, T. Ohki // Faraday Discuss. 2005. -V. 129.-P. 231-245.

270. Wakisaka, A. Microheterogeneity of ethanol-water binary mixtures observed at the cluster level / A. Wakisaka, K. Matsuura // J. Mol. Liq. -2006.-V. 129.-P. 25-32.

271. Wallace, B.A. Modern techniques for circular dichroism and synchrotron radiation circular dichroism spectroscopy / B.A. Wallace, R.W. Janes // Advances in biomedical spectroscopy. IOS Press, 2009. - V.l. - pp. 244.

272. Protein composition of milk / Editors: P. Walstra, R. Jenness // Dairy Chemistry and Physics / New York: Wiley, 1984. p. 467

273. Westh, P. Intermolecular interactions of lysozyme and small alcohols: A calorimetric investigation / P. Westh, Y. Koga // J. Phys. Chem. B. 1997. -V. 101.-P. 5755 -5758.

274. Proteins of milk // Fundamental of Dairy Chemistry. / Editor: R.M. Whitney. New York: Van Nostrand Reinhold, 1988. - P. 81-169.

275. Whitmore, L. Protein secondary structure analyses from circular dichroism spectroscopy: methods and reference databases / L. Whitmore, B.A. Wallace

276. Biopolymers. 2008. - V. 89. - P. 392-400.

277. Wilson, M. R. Clusterin is a secreted mammalian chaperone / M. R. Wilson, S. B. Easterbrook-Smith // Trends Biochem. Sci. 2000. - V. 25. - P. 95-98.

278. Proteins of Milk // Fundamental of Dairy Chemistry 3rd ed. / Editors: N.P. Wong, R. Jenness, M. Keeney, E.H. Marth. NY: Van Nostrand Reinhold, 1988.-P. 481^492.

279. Wong, D.W.S. Structures and functionalities of milk proteins / D.W.S. Wong, W.M. Camirand, A.E. Pavlath // Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 1996. -V. 36.-P. 807-844.

280. Woody, R.W. Circular dichroism and conformation of unordered polypeptides / R.W. Woody // Adv. Biophys. Chem. 1992. - V. 2. - P. 3779.

281. Xie, D. Calorimetric determination of the energetics of the molten globule intermediate in protein folding: apo-alpha-lactalbumin / D. Xie, V. Bhakuni, E. Freire // Biochemistry. 1991. - V. 30(44). - P. 10673-10678.

282. Yan, S. B. Neoglycoproteins: in vitro introduction of glycosyl units at glutamines in beta-casein using transglutaminase / S. B. Yan, F. Wold // Biochemistry. 1984. - V. 23. - P. 3759-3765.

283. Yasar, F. The investigation of the secondary structures of various peptide sequences of b-casein by the multicanonical simulation method / F. Yasar, S. Celik, H. Koksel // Physica A. 2006. - V. 363. - P. 348-358.

284. Yamamoto, T. Infrared studies on thermally-induced conformational changes of ribonuclease A by the methods of difference-spectrum and self-deconvolution / T. Yamamoto, M. Tasumi // Can. J. Spectroscopy. 1988. -V. 33 (5).-P. 133-137.

285. Chaperone-Like Activities of Different Molecular Forms of b-casein. Importance of Polarity of N-Terminal Hydrophilic Domain / R. Yousefi, Yu.Y. Shchutskaya, J. Zimny et al. // Biopolymers. 2009. - V. 91. - P. 623632.

286. Yun, S.-E. Role of beta-caseirrin milk curdling / S.-E. Yun, K. Ohmiya, S. Shimizu // Agric. Biol. Chem. 1982. - V. 46 (2). - P. 443-449.

287. Zhang, C. Molecular dynamics simulation of ethanol/water mixtures for structure and diffusion properties / C. Zhang, X. Yang // Fluid Phase Equilib. -2005. V. 231.-P. 1-10.