Возрастные особенности фракционного состава сывороточных белков и гемоглобина печорской семги (Salmo salar L.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.08, кандидат биологических наук Захаров, Александр Борисович

• Захаров, Александр Борисович
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Захаров, Александр Борисович

ВВЕДЕНИЕ.стр. 4

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.стр. 9

1. Сывороточные белки крови рыб.стр. 9

2. Гемоглобин крови рыб .стр.31

Глава П. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ . стр.42

1. Место и время сбора материала .стр.42

2. Методы исследования и обработка результатов . стр.45-

Глава Ш. ФРАКЦИОННЫЙ СОСТАВ СЫВОРОТОЧНЫХ БЕЛКОВ

И ГЕМОГЛОБИНА .стр.53

1. Сывороточные белки.стр.53

1.1. Возрастные изменения фракционного состава сыворотки крови атлантического лосося . . . стр.58

1.2. Изменения фракционного состава сывороточных белков в летне-осенний период .стр.73

1.3. Изменение фракционного состава сывороточных белков печорской семги в период созревания гонад.стр.83

1.4. Изменение белкового состава сыворотки крови семги в период смолтификации.стр.93

2. Гемоглобин печорской семги.стр.96

2.1. Возрастные изменения гемоглобина.стр.97

2.2. Фракционный состав гемоглобина печорской семги в период смолтификации.с тр. 102

2.3. Фракционный состав гемоглобина молоди семги в летне-осенний период.стр.105

Глава 1У. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛБТАТОВ . . стр.114

I. Сывороточные белки.стр.114

1.1. Возрастные изменения.с тр. 117

1.2. Изменение фракционного состава оывороточных белков в летне-осенний период .стр.129

1.3. Изменение фракционного состава сыворотки крови в период созревания гонад .стр.136

1.4. Изменение фракционного состава сыворотки крови лососей в связи с смолтификацией. . . стр.149

2. Гемоглобин.стр. 152

2.1. Возрастные изменения фракционного состава гемоглобина . .стр?155

2.2. Фракционный состав гемоглобина семги в период смолтификации .стр.161

2.3. Изменения фракционного состава гемоглобина в летне-осенний период.стр. 164

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Возрастные особенности фракционного состава сывороточных белков и гемоглобина печорской семги (Salmo salar L.)»

Устойчивое снижение запасов атлантического лосося несомненно является следствием постоянного выпадения из воспроизводства отдельных локальных популяций или резкого уменьшения их численности в результате нерационального промысла и ухудшения гидрологических и гидробиологических условий в нерестовых реках под влиянием хозяйственной деятельности человека. Печорская семга, несмотря на значительное сокращение ее добычи в последние 10 лет,, продолжает занимать ведущее место в промысле на Европейском Севере СССР. Согласно принятому проекту по переброске части стока северных рек в бассейн Волги, значительная часть нерестовых угодий выпадает из ареала естественного воспроизводства печорской популяции се.л?и. Поэтому перед рыбным хозяйством бассейна Печоры со всей остротой встает проблема сохранения численности и дальнейшего увеличения запасов печорского лосося. Успешное решение этой проблемы немыслимо без создания управляемых лососевых рыбоводных хозяйств. Однако осуществление зтого мероприятия затруднено отсутствием опыта заводского выращивания такой популяции, включающей по крайней мере несколько локальных популяций. Учитывая эти. обстоятельства, особое значение приобретают исследования субпопуляций лосося,, приуроченных к генеративно изолированным нерестовым притокам Печоры, сохранивших свое естественное состояние. Поэтому йизиолого-бюхимическая оценка молоди в сравнении с ее эталоном - природной молодью - является весьма важным элементом физиологических исследований (Карзинкин с соавт., 1967).

Нам известен ряд работ,, посвященных изучению, главным образом, : биологии, экологии воспроизводства,, формирования численности поколений, питания и роста,, а также фрагменты физиологических исследований печорской семги (Сидоров с соавт., 1877, 1982;. Мартынов, 1979; Рубан, 1979). Однако, разработка вопросов, предъявляемых биотехникой лососвводетва, требует проведения комплексных эколого-физиологических и биохимических исследований, охватывающих все периода онтогенеза, особенно его ранние этапы,, поскольку без знания биохимических и. физиологических основ жизнедеятельности рыб невозможно осуществлять, их эффективное выращивание. Организация управления процессами созревания, размножения, развития и роста рыб также базируется на результатах эколого-физиологических и биохимических исследований на уровнях особи и популяции в целом (Шатуновский, 1980).

Важное место в биохимических исследованиях занимают' сыворо- ( точные белки и гемоглобин. Интерес исследователей к этим, важней- 1 шим. биохимическим системам крови вполне закономерен, учитывая не только многогранную, физиологическую роль белков, но ж. их способность оперативно отражать особенности функционального состояния организма в различные периоды жизни. Хотя к настоящему времени накоплена довольно значительная литература по сывороточным белкам, разных по высоте и организации групп рыб,- однако в большинстве этих работ использован электрофорез на бумаге или агаре с присущей им. низкой разрешающей способностью, а исследования выполнялись на взрослых, рыбах. Большие возможности дает исследователям метод электрофореза в полиакриламидном геле. Применение этого [ метода позволяет с новых позиций подойти к изучению возрастных особенностей фракционного состава сывороточных белков и гемоглобина, степени его сформированности у различных возрастных: групп печорской популяции атлантического лосося, что послужило необходимой предпосылкой для наших исследований, учитывая особенности: экологии и биологии печорской семги.

В настоящее время известно значительное количество работ выполненных с помощью физиолого-биохимических методов где исследованы те или иные стороны обменных процессов атлантического лосося (Остроумова, 1967, 1969; Клявсонс, 1970; Баранникова, 1975; Рыжков, 1976; Сидоров, 1983 и др.). В то не время более интенсивное использование электрофореза, как одного из биохимических методов, изучение качественных и количественных изменений злектро-фореграмм белков различных возрастных групп лосося позволило бы | получить дополнительные ценные сведения биохимии, и физиологии он- | тагенеза лососевых рыб*

В связи с этим целью данной работы ставится: с помощью метода ддскзлектрофореза в полиакрдламидном. геле исследовать фракционный состав сывороточных белков и гемоглобина крови печорской семги в разные периода онтогенеза.

При выполнении работы были поставлены следующие задачи:

1. дать сравнительную характеристику и описать динамику отдельных фракций белков сыворотки, крови и гемоглобина различных возрастных групп семги.

2, Получить представление о степени сформированности белкового состава сыворотки крови и гемоглобина в онтогенезе семги.

3. Оценить влияние изменений в характере обмена веществ семги. (в периоды смолтификации, нерестоЕой миграции, созревания половых продуктов и нереста) на изменения белкового состава и соотношения отдельных фракций белков сыворотки крови и гемоглобина. 4. Исследовать динамику белковых фракций сыворотки крови и гемоглобина разновозрастных неполовозрелых пестряток в течение нагульного периода и дать ее качественную и. количественную характеристику.

5. Выявить возможность использования данных по фракционному составу сывороточных белков и гемоглобина семги для индикации физиологического состояния молоди и Езрослых рыб и. для прогнозирования сроков наступления смолтификации и нереста.

Для решения поставленных задач в период с 1377 по 1980гг„ исследовались электрофореграммы белков сыворотки крови и гемоглобина печорской семги разных возрастных групп в период нагула (молодь) и в зависимости от физиологического состояния во время анадромноп миграции и подготовки к нересту (взрослые рыбы).

На основании собранно "тгериала рассмотрено формирование и динамика изменении белкового состава сыворотки крови в онтогенезе печорской семги. Изучена и дана оценка изменении белкового состава сыворотки в зависимости от физиологического состояния рыб в периоды смолтификации, анадромной миграции, созревания гонад и. нереста. Обнаружено появление нового белкового комплекса в сыворотке созревающих самок атлантического лосося и: дана его количественная характеристика в зависимости от стадии зрелости икры., Исследована сложная электрофоретическая структура гемоглобина печорской семги и показана динамика относительного количества отдельных его фракций в онтогенезе. Установлены два „типа гемоглобина характерных взрослым, рыбам и разновозрастным пестряткам. Обнаружено существование "переходных" типов гемоглобина свойственных только смолтиФицирующейся молоди семги - покатникам и изучено появление их в процессе ската. За весь период работы было обработано 597 проб сыворотки и 360 образцов гемоглобина молоди возрастом I - 4+ и взрослых производителей.

Работы проводились на базе стационарных исследований Коми филиала АН СССР на р.Л(угор (правый приток Печоры) и на промысловом заграждении в низовье р.Печоры (г.Нарьян-Мар)» Большую помощь в проведении исследований оказали сотрудники лаборатории экологид к генетики ;::ивотных ХСогли филиала АН СССР, лаборатории физиологии и биохимии рыб Центрального научно-исследовательского института осег.рового хозяйства, лаборатории экологической биохимии Института биологии внутренних вод АН СССР, за что автор выражает всем искреннюю благодарность. Автор сердечно благодарит также сотрудников лаборатории экологии низших позвоночных ИЗМЭНТ за ряд ценных замечаний и пожеланий.

Заключение диссертации по теме «Зоология», Захаров, Александр Борисович

8. Результаты исследования фракционного состава сывороточных белков и гемоглобина рекомендуется использовать для оценки физиологического состояния молоди и взрослых рыб, для прогнозирования сроков смолтификации и нереста семги в естественных условиях и при разработке биотехники заводского выращивания печорской семги.

-.170> ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Методом, дискэлектрофореза в полиакриламидном геле: сывороточные белки печорской семги удается разделить на 18-23 компонента, что свидетельствует о высокой гетерогенности этой группы белков, соответствующей таковой теплокровных животных. Подтверждена высокая изменчивость белкового состава, сыворотки крови в зависимости от меняющегося физиологического- состояния рыб. Наиболее выраженные изменения соотношения фракций у печорской семги, наблюдается в периода смолтификации и созревания половых продуктов. В период созревания гонад в сыворотке крови самок лосося в зоне тяжелых А -глобулинов появляется новый белковый компонент, предположительно; липовителлин., В начала нерестовой миграции количество его невелико, около 4$ общего белка. Наибольшее содержание липовителлина 35-45$ общего белка имеет место у самок ЗУ-Ш стадии; зрелости половых продуктов.

В процессе созревания икры в сыворотке крови самок происходит.1 заметное уменьшение содержания альбуминов, .у. -глобулинов и практически, полное исчезновение белковых компонентов УП и; УШ в зоне об -глобулинов.

У взрослых самцов также как и. у самок в период подготовки « к нересту отмечено, резкое уменьшение содержания Л -глобулинов а снижение уровня белка в зоне р-ж $ -глобулинов. В то же время количество белка в зоне трансферринов у самцов резко возрасг-тает (с 35$ - суша компонентов IX и X, у рыб на стадии: зрелости П-Ш до 60$ общего^ бежа, у рыб на 1У и У стадиях зрелости).

У карликошх самцов в процессе активного сперматогенеза происходят изменения белкового состава сыворотки подобные тем, которые выявлены у взрослых самцов семги: уменьшение удельного веса о1 -глобулинов (более чем в 2 раза), некоторых компонентов зоны, fi -глобулинов и увеличение уровня альбуминов и белков зоны трансферринов.

Установлены закономерные изменения соотношения белковых фракций в сыворотке неполовозрелой сех^ги в вегетационный период, наиболее выражены по альбуминам, d -глобулинам, трансферринам и; jf -глобулинам. Соотношение белковых фракций мсжет. служить хорошим. биохимическим, индикатором, физиологического состояния рыбы в определенные периоды жизни,г а уровень об-глобулинов (компонент УШ) для оценки степени готовности мэлоди; семги к зимнему периоду жизни.

Исследование возрастных особенностей фракционного состава сывэроточных белков крови у печорской семги показало, что степень его гетерогенности не претерпевает существенных изменений а исследованный период онтогенеза, однако, соотношение между отдельными фракциями, меняется. Наиболее значительные возрастные изменения наблюдаются в содержании альбуминов, имеющих тенденцию к снижению, концентрации с возрастом, X -глобулинов (компонент УШ), содержание которого у молоди значительно выше чем у взрослой рыбы и белков зоны трансферринов — закономерное нарастание от младших возрастных групп к старшим. Количественное содержание быстрых оС -глобулинов (компоненты У1 и УП) и минорных компонентов зоны ß -глобулинов остается сравнительно стабильным у всех исследованных групп; молоди в речной период жр13ни* Но в процессе смолтификации происходят четко выраженные изменения белкового состава сыворотки крови семги.

Гемоглобин печорской семги в полиакриламидном деле делится на две группы множественных компонентов: быстродвижущуюся(Б,Щ>) и медленнодвижущуюся (МДй) фракцию» Выявлены, два типа фракционного состава гемоглобина характерных дум молоди и взрослых рыб.

У взрослых рыб Sip представлена семью компонентами, Щф - четырьмя компонентами. У молоди представлена одним компонентом, а фракция МДЁ тремя компонентами гемоглобина.

Процесс подготовки рыб к морскому периоду жизни сопровождается появлением новых промежуточных „ типов фракционного состава гемоглобина, свойственных только смолтифицирущейся молоди. На гемоглобинограммах покатников в это время обнаруживаются новые компоненты в зоне ДЩ>„ Относительное содержание белка этих компонентов невелико (1-4$), но они выявляются регулярно у по-катной молоди. Установлено повышение содержания гемоглобина, "быстрой" фракции с возрастом и снижение относительного содержания "медленной" фракции. Количество гемоглобина фракции БДФ изменяется обратно пропорционально содержанию гемоглобина фракции ВДВ» Эти данные, согласуются с имеющимся в литературе указаниями; о том, что. "быстрый"1 гемоглобин, лососей работает в морской воде, а "медленный" в речной.

Обнаруженные нами промежуточные типы гемоглобина у смолтифицирущейся молоди, имеет не только теоретический интерес, но и практическую значимость, так как они могут служить биохимическим. критерием готовности молоди, семги к смене среды обитания река-море.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Захаров, Александр Борисович, 1984 год

1. Адамова Л.Г., Новиков Г.Г» Исследование белкового состава сыворотки крови растительноядных рыб (Научн„докл.высш. школы)* Биологические науки, 1973, & 5 (113) с.44-49.

2. Алтухов Ю»П. Популяционная генетика рыб* М» Лшцев»пром-ть. 1974, 247с.3» Балахнин: И. А.Соломатина В »Д. Типы трансферрина; и их связь с некоторыми показателями интерьера у карпа., Гидробиол.ж. 1970, т»6, J& 6, с.56-62.

3. Балахнин И»А», Галаган Н»П. Типы трансферринов Cyprinus carpió. Гидробиол.ж., 1972, т.»8, 6, с.108-110.

4. Ю.А. Ихтипатология. М., Пищев.пром-ть, 1977, с.430.,1.. Белчева Р.Г., Христов Д.И. Сравнительное электрофор ети-ческое и иммуноэлэктрофоретическое иссяедование сывороточных белков костистых рыб. Зоолог, журн., 1972, т.,ы , вып.5,. с.199-201.

5. Берг Л.С» Материалы, по биологии семги. Всес.науч-но-исслед.ин-та озерного и речного рыб.хоз. 1935, т.ХХ, с.3-113.

6. Велдра Л.А.Велдре И.Р. О сывороточных белках и гемоглобине шпрота различных районов Балтийского моря Рыбохоз.ис-след» в бассейне Балт.моря (Рига), 1982, të 17, 82-106.

7. Галасун П.Т., Шемчук В.Р. Зависимость состава белков сыворотки крови радужной форели от экологичесрсих и других факторов. Рыбное хоз-во, 1971,, вып. 13, с.74-79.

8. Гераскин ÏÏ.ÏÏ.,, Лукьяненко В.,И. Видоспецифичность фракционного состава гемоглобина крови осетровых рыб., Журн.общей биологии„ 1972,, т.32* № 4, с.478^84.

9. Головко H.I'U Злектрофоретическое исследование белков- ;Г80 сыворотки крови "крупной" и "малкой" ставрид Черного моря. Труды АзЧерНИЮ, 1964, вып.22, с.73-93.

10. Гордеева Л.А. 0 сезонных соотношениях белковых фракций в сыворотке крови донской тарани:. В сб.научн.труды, Донск.с.-х. ин-та, 1970, т.6, }£ 4, с.212-214.

11. Груздев А.Н,, Сидоров B.C., Смирнов Ю.А. Применение метода диск-электрофореза в полиакриламидном. геде для изучения сывороточных белков лососевых рыб. В сб.: Лососевые (Salmonoidae) Карелии. Петрозаводск, 1972, вып.1, с.127-136.

12. Джабаров М.И. Электрофоретическое исследование белков сыворотки крови шемаи Chalcalburnus chalcoides (Güid.) и судака Lucioperca lucioperca (L.); Вбпр.ихтиолшгии, 1976, т.16, вып.6 (101), с.1088-1096.

13. Дэброволов И.,., Пешев И.\ Электрофоретичес.кий анализ гемоглобина усачей (род. Barbus Cuvier ) из рек Дунай и Камчиа. Изв.Народния музей Варна, 1972, В 8, с.294-297.

14. Дубасова Л.,И. Гемоглобин и; белковый спектр, плазмы крови леща Кушского: залива. Автореф. канд.дис., Калининград, 1970, 21 с.

15. Дэвени; Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды, и белки. Изд-во: Мир,, M.,. 1976, 364 с.

16. Ермоленко Л,Н.,: Викторовский P.Ivî. Электрофоретическое исследование гемоглобинов рыб подсемейства Coregoninae Згология и систематика пресноводных организмов Дальнего Востока., Владивосток, 1983, I2I-I25.

17. Жалюнене А. Трансферрины производителей карпов селекционно-племенного хозяйства "Шилавотас". Кнтенсифик. прудов, рыбовод.Литвы. Селекц. племен.работа. Поликультура. Вильнюс, 1983,, 31-36.

18. Задворчнов С.Ф., Сорвачев К.Ф. Злектрофоретическое исследование белковых фракций сыворотки крови иммунизированных карпов производителей и их потомства. Биохимия, 1959, т.24, J£5, с»811-817.

19. Захаров А.Б. Возрастные особенности фракционного состава гемоглобина атлантического лосося. Тез.докл., 1У Всес.конф»по эколог, и: физиолог, и биохимии; рыб» Астрахань, 1979, т.1, с»80-81.

20. Захаров А»Б» Формирование гемоглобина у атлантического лосося в онтогенезе» IX симпозиум. Биологические проблемы; Севера Сыктывкар, 1981,. т.2,, с.85»

21. Ирискин Н„Т. Электрофоретический анализ белков сыворотки крови пеляди, чира, муксуна„ акклиматизируемых в Ленинградской области. В сб.Рыбохоз. изуч* внупр.водоемов. Л.1972, НО, с.8-12.

22. Картавцев Ю.Ф. Сравнительно -электрофоретический анализ гемоглобинов,, водорастворимых белков мышц и хрусталиков глаза пяти видов бычков семейства Cottidae. В кн. Биолог.моря, 1975, В 2, с.31-38.

23. Квасова И.П. 0 белковой системе сыворотки крови налима. В сб„: Эколого-физиологические особенности крови рыб. M.,, Наука, 1968r C.II0-II5.

24. Кирсипуу А.П. О белковых фракциях сыворотки крови некоторых прошсловых рыб Эстонии. Автореф. канд.диссерт. Тарту, 1965, 23с.,

25. Кирсипуу А.П., Пиху Э.Р., 0 связи между половым циклом и белковой системой сыворотки крови некоторых пресноводных рыб. В сб. Теоретические основы рыбоводства. М., 1965, с.49-52*

26. Кирсипуу А.П. О связи белковой системы сыворотки крови с обменом, веществ у некоторых пресноводных рыб. Тез.докл. ХШ научной конференции по изучению внутренних водоемов Прибалтики в Таллине. Изд-во Тарту, 1966, с.

27. Кирсипуу А.П. ^uriher separation of paper electropheretic blood, serum protein fractions of the carp (Cyprinus carpió) by disc electrophoresis in polyacrilamide gel. ••Эст. АН СССР, 1975 „ т.24, Биология, № 3„ c.237-239.

28. Кирсипуу А.П» 0 связанной с созреванием икры, электрофо-ретичес.кой белковой фракции; в сыворотке крови. Изв. АН СССР,. Биология,, 1977, т.26, В 4Г с.284-291.

29. Клявсонс; Ю.А. Физиологические показатели, разновозрасг.-яых особей балтийского лосося в период анадромной миграции. Тез. докл* Всес»конф. по экологической физиологии рыб. М., 1973,82с.

30. Ковалева. И.П. О некоторых биохимических свойствах крови налима* Автореферат1 канд. диссер. Калининград,, 1968, 23с.

31. Козловская 3.И., Новичкова Н.С., Флеров Б„А. Изменение б ежового сосг ава сыворотки крови карпа при отравлении хлорофосом и полихлорпиненом. Тр. Ин-та биологии Вн. вод* Физиологияи. паразитология пресноводных животных. 1979, вып.38(41), с.42-48.

32. Коржуев П.А., Гемоглобин. М., Наука, 1964,. 261с.

33. Королева. Н.В., Изменение содержания бежа в снворотке крови радужной форели в зависимости от возраста и питания. Докл. АН СССР, 1963, т. 149, № 5," с.1022-1024.

34. Крачанов В.М., Леонтьев С,А., Солеустойчивость и фракционная структура гемоглобина у молоди белорыбицы. Stenodus 1еисхс^ьуз бшлепа-ьги-ь. Вопросы ихтиолог. 1981, 21, $ 6, 10971103.

35. Кузьмина В.В* Электрофоретическое изучение бежов сыворотки крови рыб при длительном голодании» Гидробиол.журн., 1966,: т.*2, й 4, с.74-77*

36. Лукьяненко В.И., Попов A.B. Белковый состав сыворотки крови двух аляопатрических популяций сибирсго го осетра Acipenserbaeri Brandt. Докл. АН СССР, 1969, т.186, Л I, с.233-235.

37. Лукьяненко В.И» Иммунобиология рыб. М.,'Пищевая промышленность, 1971, с.363.

38. Лукьяненко В.И., Гераскин Я»П. Видоспецифичность фракционного; состава гемоглобина крови осетровых рыб. Журн- общей биологии, 1972, 33, В 4, с.478-483.

39. Мацук В.Е., Новиков Г.Г» Динамика белкового и липид-ного состава крови радужной форели Salmo gairdneri Rich. . Вопросы ихтиологии, 1978, т.18, вып.2 (109), с.329-341»

40. Маурер Г» Дискэлзктрофорез» М., г.щр, 1971, 247с»

41. Недина Н.С. Белковый состав сыворотки крови тарани (ßutiius rutilus hecbeli Horm. ) Азовского моря в зависимостиот пола, возраста, времени года и места обитания. Тр. Упр. кадров и учебн. заведений м-ва рыб. хоз-ва СССР., 1971, вып.30, с.35-41.

42. Ненашев Г.А., Рыбаков Ф.Ю. Генетическое, разнообразие трансферрина и его связь с хозяйственно ценными признаками белого и пестрого толстолобиков. Изв. ГосНИИ озерн. и речи., рыбн. хоз-ва,, 1978,. В 130, с.112-118.

43. Новиков Г.Г., Решетников Ю.С, Исследование белкового состава сыворотки крови, лососевых рыб, Вопросы ихтиологии» 1969, т.9, вып.1 (54), с.163-171.

44. Омельченко В,Т., Болконская Л.Г., Викторовский Р.м» О сходстве электрофореграмм гемоглобинов некоторых лососевых* Науч. сообщен» Ин-та биологии моря АН СССР Дальневост* научн. центра* 1971, вып.2, с.176-177.

45. Омельченко В.Т» Электрофор ет иче с.кое исследование гемоглобинов рыб Дальнего Востока,, Генетикаr 1974,, т.Х, №9, с. 3542.

46. Омельченко В.Т., О полиморфизме гемоглобина минрая. В сб. Биология моря. 1975, № 5, с.72-73.

47. Остроумова И.Н» Белковый состав сыворотки крови лососевых рыб. Тез* докл., Всес.совещания по экологической физиологии рыб» М.» 1966, с.103-104.

48. Остроумова К.Н., Белковый состав сыворотки крови лососевых рыб, В сб. Обмен веществ и биохимия рыб. М., 1967, с,283-289.

49. Панкова Т.А., Сержант JI.A* Полиморфизм белков сыворотки крови сазанов я карпов краснодарского края. Тез» докл. 1У Всес. конф» по эколог; физиол. и биохим» рыб. Астрахань,, 1979, т»2, с.231-232.

50. Паюсова А»Н., Злектрофоретический анализ сыворотки крови двух видов иссык-кульских ельцов Leuciscus Schmid-fci (Herz.) и L.bsrgi kaschkarovBonpoc ихтиологии, 1978,. т»18, вып.5 (112)с»900-907.

51. Попов A.B. Полиморфизм альбуминов трех популяций волжской стерляди. Рац. основы ведения осетр, х-ва. Тез.докл. Науч,-практ.конф. Волгоград, 1981, 206-207,

52. Пучков Н.В. Физиология рыб. М., Пищепромиздат, 1954,369с.

53. Решетников Ю.С.,, Параншкина Л.П.,, Кияшко В.И. Сезонные изменения белкового состава сыворотки крови и жирности сигов. Вопр. ихтиологии, 1970т.Ю, вып.6 (65), с.1065-1078.

54. Седов С.И., Лукьяненко В.И. 0 половом, диморфизме белкового^ состава сыворотки крови руссюго осетра Acipenser gulden-schtedti. Журн. эволюц. биохим* и физиолог., 1969, т.5, № I, с.24-29.

55. Сенкевич. Н.К.Куликова Н.И. Внутривидовая дифференци-ровка белков сыворотки крови черноморских кефалей,. Вопр. ихтиологии, 1970,, 10, }í> 4, с.724-732.

56. Сидоров Г.П., Шубина В.Н.,; Мартынов В.Г., Рубан А.К. Биология атлантического лосося ( Salmo salar L. ) на этапе речной жизни. Серия препринтов Научные доклады. Коми филиала АН СССР,; Сыктывкар, 1977, вып.35, с.46.

57. Сидоров Г.П. Возрастная, половая структура и ростмолоди семга р.Щугор В сб.: Печорский-лосось Тр. Коми филиала АН СССР Сыктывкар, 1979, № 40, с.33-56»

58. Силкин H.Ö» Сезонные изменения белков сыворотки крови леща Рыбинского водохранилища. Биолог, внутр. вод.,, информ. бюлл., 1977, №34, с.60-63.

59. Шатуновский М.Й., Сорвачев К.Ф., Исаев Ф.А. Некоторые результаты электрофоретического исследования белков и липопроте-идов сыворотки крови наваги и трески Белого моря. Вестник МГУ, 1967,. сер»У1, № 3, с. 3-10*.

60. Шульман Г.Е., Куликова. H. О. О специфичности белкового состава сыворотки крови рыб. Успехи современной биологии, 1966, T.62I вып.1(4), с.42-60.,

61. Хайлов К.М„ Электрофоретические исследования белков плазмы крови тресковых рыб. Тр. Мурманского морск. биол.Ин-та, 1962„ вып.4(8), с.202-207.

62. Хлобыстов В JB., Костенко С.Г. Полиморфные белки в генетике и селекции карповых рыб. Ростов.-н/Д. ун-т. Ростов н/Д, 1982, Зс (Рукопись, деп. в ВИНИТИ 27 июля 1982 г;, № 4039-82Деп).

63. Христофоров О.Л., Мурза И.Г., Стасюк Е.В., Особенности гонадотропной функции гипофиза у лососавых в связи с экологией размножения. В сб. Н* тр. ГосНИОРх Особен, биологии и разведения лососевых рыб. Ленинград,, 1981,, вып. 163„ с.70-83.

64. Чихачев A.C. Использование биохимических маркеров в осетровом, хозяйстве Азовского бассейна. Ростов н/Д. ун-т.Ростов ц/Д, 1982. 5с. (рукопись деп. в ВИНИТИ 19 июля 1982 г. г В 384582 Деп.).

65. Фам-Тхе. олектрофоретические исследования белковых фракций у годовиков и двухлетних карпов. Животяоводни науки,. 1975, т.12, té 5, c.96:-I00.

66. Яблокоз А „Г., Варзегова С.А. Оценка шестилетних производителей радужной форели по некоторым белкам сыворотки крови. Сб. науч. тр. НИИ оз. и реч.рыб. х-ва, 1982, Jë 188, 39-52,.

67. Adinolfi M., Chief fi G., Larval and adult hemoglobins of the cyclostome Petromyaon planeri. Nature. Lond., I95Ö, 162, p.730.

68. Determination of allogeneic and xenogeneic markers in the genus of Tilapia. II identification pf T. aurea, T. vul-cani and T. nilotio« ^ ^lectrophoretic analisis of their serum proteins. "Aguaculture", 1976, 7» N 5» p.255-265*

69. BAGLIOHI C., SPARKS C.E. A study of haemoglobin differentiation in Rana catesbeiana. Devi. Biol., 196?, N 8, p.272-285.

70. BALSAETO J.S., RASCH E. Biochemical and citogenetic studies vof Poecilia from eastern Mexica. I. Comparative microelectrophoresis of plasma proteins of seven species. Rev. biol. trop. Univ. Costa Rica, 1973, v. 21, IT 2:, p.229-257.

71. BARRET J., TSUYUKI N. Serum transferrin polymorphism insame scombreid fishes. Copeia, 1967, N 3, p.551-557*

72. BERGSTROM E., KOCH H.J.A., Influence of the type food onhaemoglobin pattern of young salmon. Rep. Swedish, salmon Res. Inst. 1969, N 9, P*I-7*

73. BOUCK G.R., BALL R.C. Influence of capture methods on bloodcharacteristics and mortality in rainbow trout (Salmo gairdneri). Trans. Am; Fish. Soc. 1966, v. 95, N 2:, p.I70-176.

74. Science, N.Y., 1959, v. 129, p.899-900.

75. BUHLER D.R. Studies on fish hemoglobins. Chinock salmonand rainbow trout. J. Biol. Chem. 1963, v. 238, N 5, p. I665-I674-.

76. CALLEGARINI C. Le emoglobine di alcuni teleostei nostranidi acgua dolce. Studio elettroforetico. Ric. Sci., 1966, v.'36, p.59-64.

77. CAMPBELL C.M., JALABERT B. Selective proteine incorporation by vitellogenic Salmo gairdneri oocytes in vitro. Ann. biol. anim., biochim., biophys., 1979, v.19, N 2A, p.429-437.

78. CARBERY J.T. Studies on the electrophoretic pattern of serum proteins of Atlantic salmon Salmo salar L. Res. Ve-terin. Sci. 1969, 10, N 3, p.295-296.

79. CARDWELL R., SADDLER J., SMITH L. Hematological effect of

80. Dennison tagging upon juvenile pink salmon (Oneorchnchus gorbuscha). Comp. Biochem. and Physiol., 1971, A 38, N 3, p.497-508.

81. CHANDRASEKHAR N. Blood proteines of some Indian Freshwater

82. Fishes. Proc. Indian Acad. Sci., 1959, B.49, 6, p. 377385.

83. CHILD A.R., BURNELL C.M., WILKINS N.P. The existence oftwo races of Atlantic salmon (salmo salar L.) in the Britich Isles J. Pish Biol. 1976, 8, II, p.35-43.

84. CREYSSEL R., RICHARD G.B., SILBERZAHN P. Transferrin variants in carp serum. Nature, 1966, 212, 1362, p.70I. 159» DAYIS b.j. Disc electrophoresis. II Method and applicationto human serum proteins. Annals N.Y. Acad. Sci., 1964, v.121, N 2, p.404-427.

85. DEUTSCH H.F., MCSHAN W.H. Biophysical studies of bloodplasma proteins. XII Electrophoretic studies of the blood serum proteins of some lower animals. J. Biol. Ohem. 1949, V.I80, N I, p.219-234.

86. DOBSON G.P., BALDWIN J, Regulation of blood oxygen affini- (/'ty in the Australlian blackfish Gadopsis marmoratus. II. Thermal acclimation. J. Exp. Biol.; 1982, 99, 245-254.

87. DRILHON A. Etude des lipoproteides serigues chez guelgues poissons au moyen de l'electrophorese sur papier. C.Rend. Acad. Sci., 1954, 238, p.940-942.

88. DRILHON A. Biological study of serum protein of blood ofseveral fishes by electrophoresis of paper. Compt. Rend. Soc. Biol., 1954, v.I48, N 13-14, p.1218-1219.

89. DRILHON A., FINE I.M. Dimorphisme sexuel dans les proteinsserique de Salmo salar L. Etude electrophoretigue. Compt. Rend. Soc. Biol., 1963, v.I57, N II, p.1897-1900.

90. DRILHON A., FINE I.M. Importance de 1«etude des transferines serigues dans le genus anguilla. Experientia, 1968, v.24, N 6, p.555-557.

91. ETESSAMI S., F. LE MENN. Modifications hepatiques et elaboration des proteines vitellines, au cours de la vitel-'.197 logenese a la suite des traitements hormonaux chez Spon-dyliosoma cantharus L. C.R.SocBiol., 1978, v. 172, N I, p.43-46.

92. EVERAATS I.M. The haemoglobins of the herring, glupea harengus. Neth.I.Sea Res., 1978, v.12, N I, p.1-57.

93. FLETCHER J., HUMS E.R. Function of Transferrin. Nature,1968, v.2I8, n 29, p.I2II-I2I4.

94. FYHN U.E.H., FYHN H.J., DAVIS B.J., POV/ERS D.A., FINK W.L.,

95. GARLICK R.L. Haemoglobin heterogeneity in amazonia fishes. Comp. Biochem. and Physiol., 1979, A62, N I, 39-66.

96. GILES M.A., VANSTONE W.E. Ontogenetic variation in themultiple hemoglobins of coho salmon (Oncorchynchus ki-sutch) and effect of enveromental factors on their expression. J.Fish Res.Bd.Can., 1976, v.33, N 5, p.II44-II49.

97. GRANT B.F., MCHIRLE P.M. Serum characteristics of spawningpadfishes. Comp. Biochem. and Physiol. 1970, v.37, N 3, p.321-330.

98. GRARIOSI G., DE CRISTINI F. Clupeoid fishes in the northern adriatio sez: II Haemoglobin polymorphism in Clupea sprattus L. Boll.zool., 1974, v.41, N I, p.47-5I.

99. GRATZER W.B., ALLISON A.C. Multiple haemoglobins. Biol.

100. Rev., I960, N 35, p.459-506.

101. GROSS T.F., PAYNE R.H. Geographical variation in atlanticcod, Gadus morhua, of eastern north america: a biochemical systematics approach. J.Fish Res. Board Can., 1978,v.35, N I, p.117-123.

102. GUNTER G., SULYA L.L., BOX B.E. Some evolutionary in fishes blood. Biol, bull., 1961, v.I2I, p.302-306.

103. HAEN P.I., O'ROURKE F.I. Proteins and haemoglobins of sal- 198-1morL — trout hybrids. Nature, Lond., 1968, v.217, N 5123» p.65-67.

104. HAIDER G. Alters und saisonbedingte Veränderungen im serumeiwei bild der Regenbogenforelle (Salmo gaidneri Rich.) Z.Fisherei, 1970, v.I8, N 1-2, p.107-124.

105. HASHIMOTO K., MATSUURA F. Two haemoglobins in chum salmon. Nature., Lond., 1959, v.184, N 4696, p.1418.

106. HASHIMOTO K., MATSUURA F. Multiple hemoglobins in fishe.

107. Bull. Jap. Sec.scient.Fish., 1959, v.24, N 9, p.719-723» 182:. HITRON I.W. Serum transferrin phenotypes in striped bass. Morone saxatilis from the Hudson River.Chesapeake Sei., 1974, V.I5, N 4, p.246-24-7.

108. HOMBRADOS ISABELLE, RODEWALD KARIN, NEUZIL EUGENE,

109. BRAUNITZER GERHARD. Haemoglobins, LX. Primary structure of the major haemoglobin of the sea lamprey Petromyzon marinus (var. Garonne, Loire). Biochimie, 1983, 65, N 4-5, 245-257.

110. HOUSTON A.H., THREADGOLD L.T. Body fluid regulation insmolting Atlantic salmon. J. Fish.Res.Bd.Can., 1963, V.20, N II, p.1355-1369.

111. HOUSTON A.H., CYR D. Thermoacclimatory variation the haemoglobin systems of goldfish (Cyprinus auratus) and rainbow trout (Salmo gairdneri). J.Exp.biol., 1974, v.61, N 2, p.455-461.

112. IUCHI I., IAMAGAMI K. Electrophoretic pattern of larvalhaemoglobins of the salmonid fish (Salmo gairdneri iri-deus). Compar.Biochem. and Physiol., 1969, v.28, N 2, p.977-979.

113. INGERMANN ROLF L. Physiological significance of root effect- 199 ^зt — -—'hemoglobins in trout. Respirât. Physiol., 1982, 49, N I, p.I-IO.

114. INGERMANN ROLF L., TERV/ILLIGER ROBERTS C. Presence andpossible function of root effect hemoglobins in fishes lacking functional swim bladders. J. Exp. Zool., 1982, 220, N 2, I7I-I77.

115. IUCHI I., SUZUKI R., YAMAGAMI K. Ontogenetic exprossion oflarval and adult hemoglobin phenotypes in the intergene-ric salmonid hybrids. J.Exp.Zool.? 1975, v.192:, N I, p. 57-64.

116. JAMIESON A., THOMPSON D. Blood proteins in North Sea cod

117. Gadus morhua L.), 12 Evrop.Conf Animal.Blood Group and Biochim. Polymorphism, Budapest, 1970, Budapest, 1972, p.585-591.

118. KIRSIPUU A. Seasonal cycle of changes in the blood serumprotein fractions in bream. E.N.S.V. Tead.Akad.toimetised, Biologia, Изв. Эст. АН СССР, Биология, т.20, № 2, с. 133-140.

119. KITCHEN е., PUTNAM Р., TAILOR W.J. Hemoglobin polymorphismin white tailed deer, subunit basis. Blood 29, 1967» P-867-877.

120. KOCH H.I.A., BERGSTROM, EVA+EVANS I. The microelectropho-retic separation on starch gel of the haemoglobins of Salmo salar L. Mededel.Vlaamse Acad.Kl.Wet., 1964, v.26, N 9, p.1-32.

121. KOCH HJ: I.A., BERGSTOM, EVA+EVANS I. A size correlatedshift in the proportion of the haemoglobin components of the Atlantic salmon (Salmo salar L.) and of the sea trout (Salmo trutta L.). Mededel Vlaamse Acad.Kl.Wet., 1966,v.28, N II, p.I-20.

122. KOCH H.I.A., WILKIUS N.P. , BERGSTROM E., EVANS I. C.

123. Further studies on the multiple components of the haemoglobins of Salmo salar L. Mededel Vlaamse Acad.Kl.Wet•,1967, v.29, N 7, p.I-16.

124. KOCH H.I.A., BERGSTROM EVA, BODABiE SCHMITZ, ELFRIEDE

125. LANA H.C. The response of the haemoglobin system of fedand starved rainbow trout, Salmo gairdneri Richardson, to bleeding. J.Fish Biol., 1980, 16, N 4, 405-411.

126. LANGHOLZ H.I., KEESE A. Die zuchterische Bedeutung von Populations differenzierungen deutscher Forellenherkünfte mit Hilfe der Serumproteinaufternning. Arb.Dtsch.Fisch -Ver, 1976, s.a. N 16, p.64-73.

127. LAUVER A.V., SELLERS C.M. An investigation of plasma protein alteration in response to chlorine exposure of rainbow trout (Salmo gairdneri). Va I.Sei., 1977» v.28, N 2, p.64-65.

128. LE МЕШ F., LAMI M.M. Proteines vitellines seriques et heparatiques chez un poison teleosteen (Gobius niger L.), soumis a des traitments hormonaux? Etude par electrophore-se en gel de polyacrylamidae. Bordeaux med., 1977» v.10, N 4, p.213-216.

129. LE MENN F. Some aspects of vitellogenesis in a tellosteanfish: Gobius niger L. Comp.Biochem. and Physiol., 1979»-~2DI v. A 62:, N 2., p.4-95-499.

130. LEPKOVSKYS. The distribution of serum and plasma proteins vof fish. J.Biol.Chem., 1930, v.85, p.667.

131. LYSAK A., WOJCIK K. Electrophoretic Investigations on the

132. Blood of Carp fed with Food containing various Protein Amounts. Acta hydrobiologica, I960, v.2, Fasc. N I, p. 71-77.

133. MAJMELL C. Ontogeny of haemoglobin in the skate Raja binoculata. Science, N.Y., 1958, v.128, p.419-420.

134. MANWELL C., BAKER A., CHILDERS W. The genetics of hemoglobin in hybrids. I. A molecular basis for hybrid vigor. Comp.Biochim.Physiol., 1963, v.10, p.103-120.

135. MCIKMZIE I.A., PAIM U. Variations in the plasma proteinsof Atlantic salmon (Salmo salar L.) Canada J.Zool., 1969, v.47, N 5, p.759-761.

136. MC1KENSIE I.A., MARTIN C. Transferrin polymorphism inblueback herring, Alosa aestivalis (Mitchill). Can. J. Zool., 1975, v.53, N II, P.I479-I4S2-.

137. MOLLER D. Transferrin polymorhism in Atlantic salmon

138. Salmo salar L.). J.Fish Res. Board Can., 1970, v.27, -N 9, p.1617-1625.

139. MOLLER D. Polymorphism of serum transferrin in Atlanticsalmon. I.C.N.A.F. Res. Doc., 1970, 70/56, N 2391, p. I-12.

140. MORGAN R.P., K00 TED S.J., KRANTS G. Albumin polymorphism in the white perch. Chesapeake Sci, 1972, v.I3, N I, p.66-68.•

141. NYMAN O.L. Geographic variation in Atlantic salmon (Salmo salar L.). Rep.Swed. Salmon Res. Inst., 1966, N 3, p. 1-6.

142. NYMAN O.L., PIPPT I.H.C. Differences in Atlantic salmon,

143. Salmo salar, from North America and Europe. J.Fish.Res. Bd. Canada, 1972, v.29, S2, p.179-185»

144. PAINE R.H., CHILD A.R., FORREST A. Geographical variation /in the Atlantic salmon. Nature, Lond., 1971, 231, N 5, 500, 250-252.

145. PAYNE R.H. Transferrin variations in North American popu- ulations of the Atlantic salmon Salmo salar L. J.Fish Res. Bd. Canada, 1974-, v.31, N 6, p.I037-I04I.

146. PEREZ I.E., MOLEAN N. Ontogenetic changes in haemoglobins vin roach (Rutilus rutilus) and rudd (Scardinius erythrop-talmus). J.Fish Biol., 1974, v.6, N 4, p.479-482.

147. EESCH G. Plasma, protein variation in a winter flounder

148. Pseudopleuronectes americanus) population. J.Fish.Res. Board Can., 1970, v.27, N 5, p.951-954. 222. POLUHOYICH I.I. An electrophoretic comparison of hemoglo- v bins from American and European eels. Comp.Biochem. and

149. Physiol., 1970, v.34, N 3, p.739-74-3.

150. POHDUS MARIA ISABEL G., DONALD ELBA LUCY, FOCESI JR ALBO. I/

151. Hemoglobinas em silurideos da Amaz6nia Central: I. Ana-lise eletroforetica dos hemolisados. Acta amozon. 1982., 12, N 4, 707-711.

152. POTTER I.C., BROUN I.D. Changes in haemoglobin electropho- 4/regrams during the life cycle of two closely related lamprey. Comp.Biochem. and Physiol., 1975» В 51» N 4, p.517-519.

153. RAIL D., SCHWAB P., ZUBROD CH. Alteration of Plasma Proteins at Metamopphosis in the Lamprey (Petromyzon mari-nus dofeatus). Science, 1961, v. 133, И 344-3, p.279-280.

154. RONALD A.P., TSUTUKI H. The subunit structures, and the mole- ^cular basis of the multiple hemoglobins of two species of trout, Salmo gairdneri and S. clarki. Comp.Biochem. and Physiol., 1971, В 59» N 2, p.195-202.

155. SAITO K. Biochemical studies on the fish blood X. On thesesonal variation of serum protein components of cultured fish. Bull.Japan. Soc.Sci.Fish., 1957, v.22., N 12, p.768-772.

156. SALIBLAN A. Electrophorese en gel de polyacrilamidae des proteines seriques chez quelques poissons teleosteens. Сотр. rend. Soc.biol., 1967, v.161, N 3, p.7I7-720.- 204

157. SCHUMANN" G.O. An electrophoretic survey of multiple haemoglobins in some fresh-water fisheis. Rep.Inst.Freshwat.Res. Drottningholm, 1959, N 40, p.176-197.

158. SICK K. Haemoglobin polymorphism in fishes. Nature, Lond.,1.61, v.I92, N 4805, p.894.

159. SICK K. Haemoglobin polymorphism of cod in the Baltic and

160. Danish Belt Sea. Hereditas, 1965, 54, p.19-48.

161. SMIHIE3 0. Zone electrophoresis, in starch gels: group variation in the serum proteins of normal healthy adults. Biochem. J., 1955, v.61, p.629-641.

162. SULYA L.L., BOX B.E., GUNTER G. Plasma proteins in theblood of fishes from the Gulf of Mexico. Amer. J. Physiol., I961, 200, p.152-154.

163. THURSTON R.V. Electrophoretic patterns of blood serum proteins from rainbow trout (Salmo gairdneri). J.Fish Res. Bd. Canada, 1967, v224, N 10, p.2169-2188.

164. TSUYUKI H., GADD R.E. The multiple hemoglobins of sememembers of the Salmonidae- famely. Biochem.biophys.Acta, 1963, v.7I, p.2I9-22I.

165. TSUYUKI H., ROBERTS E. Zone electrophoretic Comparison of

166. TSUYUKI H., RONALD A.P. Molecular basis for multiplicity of

167. Pacific salmon hemoglobins: evidance for in vivo exis-tense of molecular species with up to four different polypeptides. Comp.Biochem.Physiol., 1971» v.39» N 3B, p.503-522.

168. UTHE, TSUYUKI H. Comparative zone electrophoregramms ofmuscle myogens and blood proteins of adalt and ammocoe-te lamprey. J.Pish.Res.Board Canada., 1967» v.24, IT 6,p.1269-1273.

169. UTTER P.M., AMES W.E., HODGINS H. Transferrin polimorphism in coho salmon. J.Pish.Res.Board Canada, 1970, v.27, N 12, p.2371-2373.

170. VAN WREN I.H., HATTING I. Seasonal changes in the haemoglobins of freshwater fish in their natural environment. Comp.Biochem. and Physiol., 1978, A60, IT 3, p.265-268.

171. VANSTONE W.E., CHUNG WAI HO P. Plasma Proteins of Coho

172. Salmon Oncorhynchus kisutch as Separated by zone electrophoresis. J.Pish.Res.Board Canada, 1961, v.18, N 3, p.393.395.- 206

173. VANSTONE W.E., ROBERTS E., TSUYUKI H. Changes in the multiple hemoglobin patterns of some Pacific salmon, genus Oncorhynchus, during parr-smolt transformation. Canadion J.Physiol. Pharm., 1964, v.42, p.697-703.

174. WENSTEIN M., IERGER R. Electrophoretic investigation ofsubpopulations of the spotted seatrout C. neb. in the gulf of Mexico and atlantic coast of Florida. Сотр. Biochem. and Physiol., 1976, B54, N I, p.97-102.

175. WESTERHEIM S.J., TSUYUKI H. Sebastodes reedi, a new scorpaenidfish in the northeast Pacific Ocean. J. Fish.Res. Board Canada, 1967, v.24, p.1945-1954.

176. WESTMAN K. Hemoglobin polymorphism and ontogeny in searun- 17ning and landlocked Atlantic salmon (Salmo salar L.). Suomalais, tiedeakat, Toimituks, Ser. A.I.V., 1970, N 170, 28pp.

177. WILKINS Xi.P. Multiple haemoglobins of the Atlantic salmon (Salmo salar L.). J.Fish Res.Board Canada, 1968,v.25, N 12, p.265I-2663.

178. WILKINS N.P. Biochemical geneties of the Atlantic salmon

179. Salmo salar L.). II The significance of recent studies and their application in population identification. J. Fish.Biolog., 1972, N 4, p.505-517.

180. YAMANAKA H., YAMAGUCKL K., HASHIMOTO K., MAISUURA F.

181. Stapch-gel electrophoresis of fish hemoglobins. Ill Salmonid fishes. Bull. Jap. Soc. scient.Fish., 1967,v.33, N 3, p.195-203.

182. YOSHIYASU KATSUHIKO, Starch-gel electrophoresis of hemoglobins of fresh-water salmonid fishes im Southwest1.pan II Genus Oncorchynchus (Salmon). hHXoh oyiiCaH raKKfifiCHV Bull. Jap.Soc.Sci.Fish, 1973, v.39, N I, p. 97-H4.