ЗНАЧЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК ВИРУСА ГЕПАТИТА В И РНК ВИРУСА ГЕПАТИТА С СРЕДИ ЛИЦ РАЗЛИЧНОЙ ЭТНИЧЕСКОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ И БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ В И С тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат медицинских наук Авад, Бин Саад Адель Жуман (Йемен)

• Авад, Бин Саад Адель Жуман (Йемен)
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Авад, Бин Саад Адель Жуман (Йемен)

Список сокращений. 2 стр.

Введение. 6 стр.

Глава 1. Эпидемиология вирусных гепатитов ВиС. 11 стр. в Российской Федерации

1.1. Эпидемиология вирусного гепатита В в Российской Федерации 11 стр.

1.2. Эпидемиология вирусного гепатита С в Российской Федерации .20 стр.

Глава 2. Определение вирусной нагрузки ВГВ при гепатите В. 32 стр.

2.1. Вирусная нагрузка ВГВ при разных формах ВГВ-инфекции. 32 стр.

2.2. Значение определения концентраций ДНК ВГВ при гепатите В 33 стр.

Глава 3. Определение вирусной нагрузки ВГС при гепатите С. 45 стр.

Глава 4. Количественные методы выявления ДНК ВГВ И РНК ВГС 60 стр.

1.1. Амплификационные методы выявления ДНК ВГВ и РНК ВГС. 61 стр.

1.2. Методы выявления ДНК-ВГВ и РНК-ВГС, основанные на гибридизации без амплификации нуклеиновых кислот.67 стр.

Глава 5. Материалы и методы исследования.73 стр.

1. Описание групп пациентов.73 стр.

1.1. Пациенты с гепатитами В и С из гиперэндемичного региона (Республики Тыва). 73 стр.

1.2. Пациенты с ГВ и ГС из региона со средним уровнем заболеваемости (г. Москва). 74 стр.

2. Методы выявления маркеров ГВ и ГС.77 стр.

2.1. Серологические маркеры ВГВ и ВГС.77 стр.

2.2. Молекулярные маркеры ВГВ и ВГС.77 стр.

3. Проведение сравнительных испытаний двух наборов для количественного определения ДНК ВГВ - "VERSANT HBV 3.0" «Биотитр-В». 79 стр.

4. Методы статического анализа результатов исследований.81 стр.

Глава 6. Результаты и обсуждение.82 стр.

6.1 .Сравнительная характеристика двух тестов, предназначенных для количественного определения ДНК ВГВ в сыворотке крови и плазме, основанных на применении двух разных методов детекции. 82 стр.

6.2. Уровни вирусной нагрузки ВГВ и ВГС у пациентов в регионах с умеренным и высоким уровнями эндемичности. 89 стр.

6.3. Клиническая характеристика пациентов и течение ХГВ и ХГС 94 стр.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «ЗНАЧЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК ВИРУСА ГЕПАТИТА В И РНК ВИРУСА ГЕПАТИТА С СРЕДИ ЛИЦ РАЗЛИЧНОЙ ЭТНИЧЕСКОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ И БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ В И С»

В 2004-2007 гг. проявления эпидемического процесса гепатита В (ГВ) и гепатита С (ГС) в Российской Федерации приобрели принципиально новый качественный характер: продолжающееся снижение заболеваемости острыми формами сочетается с увеличением регистрации клинически выраженного хронического ГВ (ХГВ) и ГС(ХГС) и сохранением высокого уровня и активно выявляемых скрытых форм инфекции. Важнейшим из маркеров является вирусная нагрузка вирусов ГВ и ГС в плазме или сыворотке крови пациентов [9,126]. Определение вирусной нагрузки вирусов гепатита В и С (ВГВ и ВГС), то есть концентрации вирусной ДНК и РНК в плазме или сыворотке крови, крайне важно в клинической практике [22,131], поскольку широкомасштабные когортные исследования показали роль высоких значений вирусной нагрузки ВГВ и ВГС как прогностического маркера неблагоприятного исхода заболевания — цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы [25,29,71,113,132]. Количественное определение ДНК ВГВ и РНК ВГС, наряду с биохимическими показателями, является основным инструментом мониторинга противовирусной терапии и оценки ее эффективности [34,74], а также прогноза успеха лечения [84]. Величина вирусной нагрузки ВГВ и ВГС также является важным фактором, определяющим риск перинатальной передачи этих вирусов [119] и критерием допуска инфицированных медицинских работников к инвазивным процедурам [19]. Учитывая важность определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС в клинической практике, одним из основных требований к диагностикам для количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС является точность и воспроизводимость анализа. В лабораторной практике используется целый ряд тестов для количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС, преимущественно основанных на методе полимеразной реакции (ПЦР) в реальном времени и методе разветвленных цепей ДНК (рДНК). Однако не установлен единый алгоритм определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС с помощью данных тестов. Вирусная нагрузка при ГВ и ГС является важнейшим вирусологическим показателем, позволяющим прогнозировать исход заболевания и ответ на противовирусную терапию. Показано, что заболеваемость циррозом печени (ЦП) и гепатоцеллюлярной карциномой (ГЦК) у лиц, проживающих в гиперэндемичных по ВГВ и ВГС территориях, значительно превышает аналогичные показатели в общей популяции. Так, среди коренного населения Аляски заболеваемость ГЦК в 5 раз превышала заболеваемость среди белого населения США [89]. Более высокие уровни заболеваемости ЦП и ГЦК связаны с высокой распространенностью ВГВ и ВГС в данных популяциях, при этом установлено, что с повышенным риском карциногенеза связаны определенные факторы организма и вируса — генотип вируса, возвращение к HBeAg-позитивному статусу после периода сероконверсии по анти-НВе и старший возраст [82]. Однако недоказанным остается предположение о том, что с повышенным риском развития ЦП и ГЦК при ГВ и ГС могут быть связаны определенные генетические факторы. Учитывая, что связь между высокими значениями вирусной нагрузки ВГВ и ВГС и риском развития ЦП и ГЦК в настоящее время подтверждена, вполне возможным представляется существование различий между уровнями вирусной нагрузки ВГВ и ВГС среди инфицированных этими вирусами лиц, принадлежащих к различным генетическим группам и проживающих в регионах с разными уровнями эндемичности по ВГВ и ВГС.

Цели и задачи исследования

Целью настоящего исследования являлось определение значимости количественного выявления ДНК ВГВ и РЕК ВГС в регионах с различными уровнями эндемичности по ГВ и ГС.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. сравнить методы и диагностические препараты для количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС;

2. разработать алгоритм применения тестов для определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС;

3. определить уровни вирусной нагрузки ВГВ и ВГС в разных группах населения - у пациентов с ХГВ и ХГС, проживающих в регионах с умеренным (Московская область) и высоким (Республика Тыва) уровнями эндемичности;

4. проанализировать клиническое значение количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС.

Научная новизна работы

1. Впервые показана более высокая воспроизводимость результатов определения вирусной нагрузки, полученных методом анализа разветвленных цепей ДНК (рДНК) по сравнении с методом ПЦР в реальном времени.

2. Впервые в России предложен алгоритм определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС, основанный на последовательном применении иммунологических и молекулярно-биологических тестов.

3. Впервые в России показано отсутствие значимых различий между средними значениями вирусной нагрузки ВГВ и ВГС и долей лиц с высокими и низкими уровнями виремии среди пациентов с хроническими гепатитами В и С, проживающими в регионах с высокой и низкой степенью эндемичности по данным инфекциям.

4. Впервые в России на основании когортного исследования и разбора клинических случаев установлена роль уровней виремии ВГВ и ВГС в прогрессировании заболевания печени и их влиянии на степень гистологической активности при ВГВ- и ВГС-ассоциированном хроническом гепатите.

Практическая значимость полученных новых научных знаний

1. Предложенный алгоритм определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС может применяться как в клинической практике, так и при исследованиях, посвященных значимости определения вирусной нагрузки при вирусных гепатитах В и С.

2. Установленное влияние уровней виремии ВГВ и ВГС на степень гистологической активности при ВГВ- и ВГС-ассоциированном хроническом гепатите и на прогрессирование заболевания печени доказывает необходимость применения тестов для количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС в клинической практике.

3. Доказанное отсутствие влияния на уровни вирусной нагрузки ВГВ и ВГС генетического фактора — этнической принадлежности и эпидемиологического фактора — степени эндемичности территории проживания по ГВ и ГС позволяют унифицировать подходы к мониторингу вирусной нагрузки у пациентов с ГВ и ГС, что имеет большое значение для клинической практики.

Апробация работы и публикации по теме диссертации

Основные положения, выводы и практические рекомендации представлены на V Конференции молодых ученых; России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», Москва, 2006 г.; VII Российской международно-практической конференции с международным участием «Вирусные гепатиты - эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика», Москва, 2007 г.; IV съезде российского общества биохимиков и молекулярных биологов, Новосибирск, 2008 г. Апробация работы проведена на заседании отдела вирусных гепатитов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН.

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, из них статей в центральной печати - одна, тезисов — четыре.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, собственных результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 12 источников отечественных и

Заключение диссертации по теме «Генетика», Авад, Бин Саад Адель Жуман (Йемен)

ВЫВОДЫ

1. Показана высокая специфичность тест-систем для определения вирусной нагрузки вируса гепатита В - "VERSANT HBV 3.0" (метод разветвленных цепей ДНК) и «Биотитр-В» (метод ПЦР в реальном времени) и согласованность результатов, полученных с помощью данных тестов.

2. Показано отсутствие значимых различий между средними значениями вирусной нагрузки ВГВ и ВГС и долей лиц с высокими и низкими уровнями виремии среди пациентов с хроническими гепатитами В и С, проживающими в регионе с высокой степенью эндемичности (Республике Тыва) и регионе с низкой степенью эндемичности (Московская область).

3. Для теста "VERSANT HBV 3.0" (метод разветвленных цепей ДНК) установлена более высокая степень воспроизводимости результатов по сравнению с тестом «Биотитр-В» (метод ПЦР в реальном времени), максимальное значение коэффициента вариации для двух тест-систем составило 2,79% и 10,69% соответственно.

4. Установлено, что такой генетический фактор, как этническая принадлежность, и такой эпидемиологический фактор, как проживание на территории с высокой или низкой степенью эндемичности по гепатиту В и С, не оказывают влияние на уровни виремии этих вирусов.

5. Анализ клинического значения количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС, проведенный среди пациентов с ХГВ и ХГС, показал отсутствие статистически значимой взаимосвязи между биохимическими показателями и уровнями виремии ВГВ и ВГС, однако была выявлена тенденция к повышению уровней активности АЛТ и ACT у пациентов с высокой вирусной нагрузкой ВГВ и ВГС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оптимизации количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС в образцах сыворотки и плазме крови рекомендуется соблюдать последовательность действий, включающую тестирование серологических маркеров ГВ (HBsAg) и ГС (анти-ВГС), детекцию ДНК ВГВ и РНК ВГС в качественном ПЦР-тесте с чувствительностью не менее 100 копий/мл с последующей оценкой уровня виремии.

2. Выявленная взаимосвязь между уровнем вирусной нагрузки и степенью активности некровоспалительного процесса печени свидетельствует о необходимости осуществления клинико-вирусологического обследования больных с вирусными гепатитами В и С в динамике с целью своевременного выявления прогрессирования заболевания.

3. Отсутствие влияния генетических и эпидемиологических факторов на уровни виремии ВГВ и ВГС подтверждает целесообразность проведения универсального вирусологического мониторинга вне зависимости от этнической принадлежности пациентов и распространенности вирусных гепатитов на территориях их проживания.

117

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Авад, Бин Саад Адель Жуман (Йемен), 2008 год

1. Блюгер А. Ф., Залцман В.К., Картманова О.Я. Ультраструктурная патология печени. Рига: «Зинатне», 1989.

2. Гурская Т.Ю., Никитин И.Г., Размахнина Н.И., Попединский Н.М. К вопросу о вертикальной передаче HCV-инфекции // Мир вирусн. гепат. 2005. - № Ю. - С. 2 - 5.

3. Жебрун А.Б., Шляхтенко Л.И., Мукомолов С.Л. Вирусные гепатиты в Российской Федерации. Аналитический обзор, 6 выпуск СПб., - 2006. -С. 11-27.

4. Казанцев А.П., Зубик Т.М. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней М.ЮОО «МИА», 1999.- С. 482.

5. Кюрегян К.К., Геворкян М.Г. Метод разветвленных цепей ДНК (bDNA) для обнаружения ДНК вируса гепатита В и РНК вируса гепатита С // Мир вирусных гепатитов. 2005. - № 9. - С. 2 - 4.

6. Лакина Е.И., Масалова О.В., Абдулмеджидова А.А., Кущ А.А. Вирусная нагрузка и тяжесть заболевания гепатитом С: есть ли связь? // Бюллетень НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН М., 2001. -С. 24-36.

7. Михайлов М.И. Вирусы гепатитов // Сб. тр. ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН: Мед. вирусол. М., 2007. - Т. XXIV. - С. 205-223.

8. Морозов И.А., Княженцева А.К., Ильченко Л.Ю., Гордейчук И.В.

9. Электронная микроскопия в диагностике латентных (скрытых) форм HBV-инфекции // Мат. 14 РГН в РЖГГК / Прилож. к журн. РЖГГК. № 32. - С. 96.

10. Хлопова И. Н., Самохвалов Е. И. Частота обнаружения РНК вируса гепатита G у больных вирусными гепатитами // Гепатит В, С, D и G: проблемы изучения, диагностики, лечения и профилактики: Тезисы докл. II Российск. конф. М., 1997. - С. 234.

11. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика).- М.: ФГОУ «ВУНМЦ Роздрава», 2003. С. 22-27.

12. Adinolfi L.E, Andreana A., Utili R. HCV RNA levels in serum, liver, and peripheral blood mononuclear cells of chronic hepatitis С patients and their relationship to liver injury // Am. J. Gastroenterol. 1998. - Vol. 93. - P. 2162-2166.

13. Adinolfi L.E., Utili R., Andredna A. Serum HCV RNA Levels Correlate with histological liver damage and concur with steatosis in progression of chronic hepatitis С // Dig. Dis. Sci. 2001. - Vol. 46. - P. 1677-1683.

14. Arase Y., Chayama K., Murashima N. Fluctuation patters of HCV-RNA serum level in patients with chronic hepatitis С // J. Gastroenter. 2000. -Vol. 35.-P. 221-225.

15. Ballardini G., Manzin A., Giostra F. Quantitative liver parametrs of HCV infection relation to HCV genotypes, viremia and response to interferon treatment // J. Hepat. - 1997. - Vol. 26. - P. 779-786.

16. Banerjee K., Sarin S.K, Naik S.R. et al. Polymerase chain reaction based diagnostic assay for identification of hepatitis В virus // Indian. J. Med. Res. 1992.-Vol. 95.-P. 173 - 178.

17. Birkenmeyer L.G. Detection of hepatitis А, В and D virus by the polymerase chain reaction // J. Virol. Methods. 1994. - Vol. 49. - P. 101 -112.

18. Caspari G., Gerlich W. Mandatory hepatitis В virus testing for doctors // Lancet 1998. - Vol. 352. - P. 991.

19. Castera L., Vergniol J., Foucher J. Prospective comparison of transient elastography, Fibrotest, APRI, and liver biopsy for the assessment of firsis in chronic hepatitis С // Gastroenter. 2005. - Vol. 128. - P. 343-350.

20. Carbonell N., Thiers V., Pol S. et al. Non А, В, C, D chronic hepatitis (CH): natural history, HGV prevalence // J. Hepatol. 1997. - Vol. 26. - P. 196.

21. Chang Т., Gish R., De Man R. et al. A comparison of entecavir and lamivudine for HBeAg-positive chronic hepatitis В // N. Engl. J. Med. -2006. Vol. 354. - P. 1001-1010.

22. Chen G., Lin W., Shen F. et al. Past HBV viral load as predictor of mortality and morbidity from HCC and chronic liver disease in a prospective study //Am. J. Gastroenterol. 2006. - Vol. 101. - P. 1797-1803.

23. Chen С J., Yang H.I, Su J. Risk of Hepatocellular Carcinoma Across a Biological Gradient of Serum Hepatitis В virus DNA Level // JAMA. -2006.-Vol. 295.-P. 65-73.

24. Chien R.N., Liaw Y.F. Chien R.N., Liaw YF. Short-term lamivudine therapy in HBeAg-negative chronic active hepatitis В in Taiwan // Antivir. Ther. 2006. Vol. 11. - P. - 947-952.

25. Chevalie S., Pawlotsky J. Hepatitis С virus Serological and virological tests and clinical diagnosis of HCV-Related Liver Disease // Int. J. Med. Sci.2006.-Vol.3.-P. 35-40.

26. Chu C.J, Hussain M., Lok A.S. Quantitative serum HBV DNA levels during different stages of chronic hepatitis В infection // Hepat. 2002. -Vol. 36. - P. 1408-1415.

27. Cho S.W., Hwang S.G., Han D.S. In situ detection of hepatitis С virus RNA in liver tissue using a digoxigenin-labeled probe created during a polimerase chain reaction // J. Med. Virol. -1996. Vol. 48, N 3. - P. 327-333.

28. Coelho-Little M.E., Jeffers L.J., Bernstein D.E. et al. Hepatitis С virus in alcoholic patients with and without clinically apparent liver disease // Alcohol. Clin. Exp. Res. 1995. - Vol. 19. - P. 1173-1176.

29. Colombatto P., Randone A., Civico G. et al. Hepatitis G virus RNA in the serum of patients with elevated gamma glutamyl transpeptidase and alkaline phosphatase: a specific liver disease // J. Viral. Hepatitis. 1996. - Vol. 3. - P. 301-306.

30. Colonno R.J., Rose R.E., Baldick C.J. et al. Entecavir resistance is rare invnuclroside naive patients with hepatitis В IIJ. Hepatol. 2007. - Vol. 44. - P. 1656-1665

31. Cooksley W.G. Treatment of hepatitis В with interferon and combination therapy // Clin. Liv. Dis. 2004. - Vol. 8. - P. 353-370.

32. Corey L., Gretch D., Wilson J. Acessment of hepatitis С virus RNA levels by quantitative competitive RNA polymerase chain reaction: high-titer viremia correlates with advanced stage of disease // J. Infect. Dis. -1994. -Vol. I 69.-P. 1219-1225.

33. Dalgard O., Bj0ro K., Helium K.B. Treatment with pegylated interferon and ribavirin in HCV infection with genotype 2 or 3 for 14 weeks: a pilot study // Hepat. 2004. - Vol. 40. - P. 1260-1265.

34. Davis G.L., Lau J.Y. Factors predictive of a beneficial response to therapy of hepatitis С // Hepat. 1997. - Vol. 26. - P. 122-127.

35. Davis G.L., Wong J.B., McHutchison J.G. Early virologic response treatment with peginterferon alfa-2b plus ribavirin in patients with chronichepatitis С // Hepat. 2003. - Vol. 38. - P. 645-652.

36. De Moliner L., Pontisso P., De Salvo G.L. Serum and liver HCV RNA levels in patients with chronic hepatitis C: correlation with clinical and histological features // Gut 1998. - Vol. 42. - P. 856-860.

37. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. Classification of chronic hepatitis: diagnosis, grading and staging. // Hepat. -1994. Vol. I 9. - P. 1513-1520.

38. Deutsche Vereinigung zur Bekampfung der Viruskrankheiten. Empfehlungen zur Verhutung der Ubertragung von Hepatitis-B-Virus durch infiziertes Personal im Gesundheitsdienst // Epid. Bull. 1999. -Vol. 30. - P. 222-223.

39. Di Bisceglie A.M., Chung Y.W., Dailey P.J. et al. Hepatitis С Viral (HCV) markers in serum and Liver of chronically infected patients // Hepatol. -1994.-Vol. 20.-P. 236A.

40. Di Martino V., Saurini F., Samuel D. Long-term longitudinal study of intrahepatic hepatitis С virus replication after liver transplantation // Hepatol. 1997. - Vol. 26. - P. 1343-1350.

41. Dries V., von Both I., Muller M. Detection of hepatitis С virus in paraffin-embedded liver biopsies of patients negative for viral RNA in serum //! Hepat. 1999. - Vol. 28. - P. 223-229.

42. EASL Jury. EASL International Consensus Conference on Hepatitis B. 1314 September, 2002: Geneva, Switzerland. Consensus statement (short version) // J. Hepatol. 2003. - Vol. 39. - P. 3-25.

43. Erker J. C., Leary T. P., Desialet S. M. et al. Analyses of TT virus full-length genomic sequences // J. Gen. Virol. 1999. - Vol. 80. - P. 1743 - 1750.

44. Esteban J.I., Cordoba J., Sauleda S. The clinical picture of acute and chronic hepatitis C// Hepatitis С Virus / Ed.W. Reesink, Basel, Switzerland: Karger, 1998.-P.102-118.

45. Fabrizi F., Mangano S., Alongi G. Influence of hepatitis В virus virema upon serum aminotransferase activity in dialysis population // Int. J. Artif.

46. Organs. 2003. - Vol. 26. - P. 1048-1055.

47. Fattovich G. Natural history and prognosis of hepatitis В // Semin. Liv. Dis. -2003.-Vol. 23.-P. 47-58.

48. Feray C., Samuel D., Thiers V. Reinfection of liver graft by hepatitis С virus after liver transplantation // J. Clin. Invest. 1992. - Vol. 89. - P. 13611366.

49. Fried M.W., Shiftman M.L., Reddy K.R. Peginterferon alfa-2a plus ribavirin for chronic hepatitis С virus infection // N. Engl. J. Med. 2002. -Vol. 347. - P. 975-982.

50. Ghany M., Liang T.J. Drug targets and molecular mechanisms of drug resistance in chronic hepatitis В // Gastroenterol. 2007. - Vol. 132. - P. -1574-1585.

51. Gil В., Quian C., Riezu-Boj J.I. Hepatic and extra-hepatic HCV RNA strands in chronic hepatitis C: different patterns of response to interferon treatment // Hepat. 1993. - Vol. 18. - P. 1050-1054.

52. Gosalvez J., Rodriguez-Inigo E., Ramiro-Dias J. Relative quantification and mapping of hepatitis С virus by in situ hybridization and digital image analysis // Hepatol. 1998. - Vol. 27. - P. 1428-1434.

53. Gretch D., Corey L., Wilson J. et al. Acessment of hepatitis С virus RNA levels by quantitative competitive RNA polymerase chain reaction: high-titer viremia correlates with advanced stage of disease // J. Infect. Dis. -1994.-Vol. 169.-P. 1219-1225.

54. Halfon P., Bourliere M., Raab J. et al. Molecular analysis of sexual or intrafamilian transmission of hepatitis-G virus in HCV-infected couplies // J. Hepatol. 1997. - Vol. 26. - P. 1694-1696.

55. Hassoba H. M., Terrault N. A., el-Gohary А. М. Antibody to GBV-C second envelope glycoprotein (anti — GBV-C E2): is it a marker for immunity? // J. Med. Virol. 1997. - Vol. 53. - P. 354-360.

56. Hepatitis В infected health care workers. Health Service Circular, 2000. -http://www.doh.gov.uk/.

57. Heringlake S., Ockenda J., Tillmann H. L. et al. GB virus C/hepatitis G virus infection: a favorable prognostic factor in human immunodeficiency virus-infected patients? // J. Infect. Dis. 2003. - Vol. 187. - P. 504-507.

58. Heyward W.L., Lanier A.P., Bender T.R. et al. Primary hepatocellular carcinoma in Alaskan natives, 1969-1979 // Int. J. Cancer. 1981. - Vol. 28. - P. 47-50.

59. Hillemanns P., Dannecker C., Kimmiq R. Obstetric risks and vertical transmission of hepatitis С virus infection in pregnancy // Acta Obstet. Gynecol. Scand. 2000. - Vol. 79. - P. 543-547.

60. Hoofngale J. H., Di Biscegli A. M. Serologic diagnosis of acute and chronic viral hepatitis // Semin. Liver. Dis. 1991. - Vol. 11. - P. 73-83.

61. Hu K.Q. A Practical Approach to Management of Chronic Hepatitis // Int. J. Med. Sci. 2005. - Vol. 2. - P. 17-23.

62. IGZ bulletin Preventie Iatrogene Hepatitis B, 2002. -www.igz.nl/32601/2002bulletinpreventie

63. Iloeje U., Yang H., Jen C. Risk and Predictors of Mortality Associated With Chronic Hepatitis В Infection // Clin. Gastroenter. Hepatol. 2005. - Vol. 5. -P. 921-931.

64. Iloeje U.H., Yang H., Su J. Baseline HBV viral load and excess mortality associated with chronic hepatitis В infection: The REVEAL-HBV study // 57th AASLD October 27- 31, 2006, Boston. - A 949.

65. Jamal M.M., Soni A., Quinn P.G. Clinical features of hepatitis C-infected patients with persistently normal alanine transaminase levels „ in the Southwesten United States //Hepat. -1999. Vol. 30. - P. 1307-1311.

66. Kaneko S., Kobayashi K., Miller R.H. Detection of hepatitis В virus DNA using the polymerase chain reaction technique // J. Clin. Lab. Anal. 1990. -Vol. 4. - P. 479-482.

67. Keeffe E.B., Dieterich D.T., Han S-H.B. et al. A treatment algorithm for the management of chronic hepatitis В virus infection in the United States: an update // Clin. Gastroenterol. Hepatol. 2006. - Vol. 4. - P. 1-27.

68. Keeffe E.B., Zeuzem S., Koff R.S. et al. Report of an international workshop: roadmap for management of patients receiving oral therapy for chronic hepatitis В // Clin. Gastroenterol. Hepatol. 2007. - Vol. 5. - . 890897.

69. Knodell R.G., Ishak K.G., Black W.C. et al. Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis // Hepatol. 1981. - Vol. 1. - P. 431

70. Langley D.R., Walsh A.W., Baldick C.J. Inhibition of hepatitis В virus polymerase by entecavir // J. Virol. 2007. - Vol. 81. - P. 3992-4001.

71. Lai C.L., Shouval D., Lok A.S. et al. Entecavir versus lamivudine for patients with HBeAg-negative chronic hepatitis В // N. Engl. J. Med. 2006. -Vol. 354.-P. 1011-1026.

72. Lau G.K.K., Fang J.V.C., Wu P.S. Detection of hepatitis С virus genome in formalin-fixed parafin-embedded liver tissue by in situ reverse transcription polymerase chain reaction // J. Med. Virol. 1994. - Vol. 44, N 5. - P. 406409.

73. Lau J.Y., Davis G.L., Kniffen J. et al. Significance of serum hepatitis С virus RNA levels in chronic hepatitis С // Lancet. 1993. - Vol. 41. - P. 501-504.

74. Le Guen В., Squadrito G., Nalpas B. Hepatitis С virus Genome Complexity correlates with response to interferon therapy: a study in French patients with chronic hepatitis С // Hepat. 1997. - Vol. 25. - P. 1250-1253.

75. Livingston S.E., Simonetti J.P., McMahon B.J. et al. Hepatitis b virus genotypes in Alaska native people with hepatocellular carcinoma: preponderance of genotype F // J. Infect. Dis. - 2007. - Vol. 195. - P. 5-11.

76. Lok A.S., Chien D., Choo Q.L. Antibody response to core, envelope and nonstructural hepatitis С virus antigens: comparison of immunocompetent and immunosuppressed patients // Hepat. 2003. - Vol. 18. - P. 497-502.

77. Lok A.S-F. Navigating the maze of hepatitis В treatments // Gastroenterol. -2007. Vol. 132. - P. 1586-1594.

78. Manns M.P., McHutchison J.G., Gordon S.C. Peginterferon alfa-2b plus ribavirin compared with interferon alfa-2b plus ribavirin for initial treatment of chronic hepatitis C: a randomised trial // Lancet 2001. - Vol. 358. - P. 958-965.

79. Martin J., Navas S., Quiroga J. A. Quantification of hepatitis С virus in liverand peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis С virus infection // J. Med. Virol. 1998. - Vol. 54. - P. 265-270.

80. Martin I., Poljak M., Seme K. et al. Comparative evaluation of semiautomated COBAS AMPLICOR HBV Monitor Test and manual microwell plate-based AMPLICOR HBV MONITOR Test // J. Clin. Microbiol. 2001. - Vol. 2. - P. 758-761.

81. Marzano A., Gaia S., Ghisetti V. Viral load at the time of liver transplantation and risk of hepatitis В virus recurrence // Liver Transpl. -2005.-Vol. 11.-P. 402-409.

82. McHalon BJ, Hoik P, Bulkow L et al. Serologic and clinical outcomes of 1536 Alaska natives chronically infected with hepatitis В virus // Ann. Intern. Med. 2001. - Vol. 35. - P. 759-768.

83. McGuinnes PH., Bishop G.A., Painter D.M. Intrahepatic hepatitis С RNA levels do not correlate with degree of liver injury in patients with chronic hepatitis С // Hepat. 1996. - Vol. 23. - P. 676-687.

84. McMahon В J. The natural history of chronic hepatitis В virus infection // Semin. Liv. Dis. 2004. - Vol. 24. - P. 17-21.

85. Mellor J., Haydon G., Blair C. Low level or absent in vivo replication of hepatitis С virus and hepatitis G virus / GB virus С in peripheral blood mononuclear cells // J. Gen. Virol. 1998. - Vol. 79. - P. 705-714.

86. Mizokami M., Nakano Т., Orito E. Hepatitis В virus genotype assignment using restrction fragment lengh polymorphism patterns // FEBS Lett. 1999. -Vol. 450.-P. 66-71.

87. Moaven L.D., Tennakoon P.S., Badwen D.S. et al. Mother-to-baby transmission of hepatitis G virus // Med. J. Aust. 1996. - Vol. 165. - P. 8485.

88. Morozov I. A., Knjazhentseva A.K. Hepatocyte ultrastructure and virus-dependent lesions under chronic HBV hepatitis // Falk symp. 167, 20-21 Sept. 2008, Mainz.-A. 81.

89. Mushahwar I. K.5 Erker J. C.5 Muerhoff A. S. et al. Molecular and biophysical characterization of TT virus: Evidence for a new virus family infecting humans // P.N.A.S. USA - 1999. - Vol. 96. - P. 3177-3182.

90. Negro F., Giostra E., Krawczynski K. Detection of intrahepatic hepatitis С virus replication by strand-specific semi-quantitative RT-PCR: preliminary application to the liver transplantation model // J. Hepatol. 1998. - Vol. 29. -P. 1-11.

91. NIH Consensus Statemet on Management of Hepatitis C: 2002 // NIH Consens State Sci Statements. 2002. - Vol. 19. - P. 1-46.

92. Ohno Т., Mizokami M. Genotyping with type-specific primers that can type HCV types 1-6. Methods in molecular medicine // Hepatitis С protocols. 1998. - Vol. 19. - P. 159-164.

93. Okumura A., Yoshioka K., Aiyama T. Different constitution of hepatitis С virus population in peripheral blood mononuclear cells and plasma in patients with type С chronic liverdisease // Dig. Dis. Sci. 1998. - Vol. 43. -P. 377-383.

94. Onto E., Mizokami M., Nakano T. et al. Serum hepatitis С virus RNA level as a predictor of subsequent response to interferon alpha therapy in Japanese patients with chronic hepatitis С // J. Med. Virol. 1994. - Vol. 44.-P. 410-414.

95. Pawlotsky J-M. Use and interpretation of virological tests for hepatitis С // Hepat. 2002. - Vol. 36. - P. 65-73.

96. Pawlotsky J-M., Ben Yahia M., Andre C. et al. Immunological disorders in С virus chronic active hepatitis: a prospective case-control study // Hepatol. 1994. - Vol. 19. - P. 841 - 848.

97. Persico M., Persico E., Gesue L. et al. Etiology and clinical relevance of hepatitis G virus in viral hepatitis // J. Hepatol. 1997. - Vol. 26 (Suppl.l). -P. 201.

98. Poynard Т., Imbert-Bismut F., Munteanu M. FibroTest-FibroSURE: towards a universal biomarker of liver fibrosis? // Expert. Rev. Mol. Diagn. 2005. - Vol. 5. - P. 15-21.

99. Poynard Т., McHutchison J., Manns M. Impact of pegylated interferon alfa-2b and ribavirin on liver fibrosis in patients with chronic hepatitis С // Gastroenter. 2002. - Vol. 122. - P. 1303-1313.

100. Rapti B.I., Dimou E., Mitsoula P., Hadziyannis S.J. Adding-on versus switching-to adefovir therapy in lamivudine-resistant HBeAg-negative chronic В // Hepatol. 2007. - Vol. 45. -P. 266-268.

101. Reddy K.R., Wright T.L., Pockros P. Efficacy and safety of pegylated (40-kd) interferon alpha-2a compared with interferon alpha-2a in noncirrhotic patients with chronic hepatitis С // Hepat. 2001. - Vol. 33. - P. 433-438.

102. Rey D., Fraize S., Vidnic J. et al. High prevalence of GB virus C/hepatitis G virus RNA in patients infected with human immunodeficiency virus // J. Med. Virol. 1999. - Vol. 57. - P. 75-79.

103. Robinson D.M., Scott L.J., Plosker G.L. Entecavir. A review of its use in chronic hepatitis В // Drugs 2006. - Vol. 66. - P. 1605-1622.

104. Rodriguez-Inigo E., Bartolome J., de Lucas S. Histological damage in chronic hepatitis С is not related to the extent of infection in the liver // Am. J. Pathol. 1999. - Vol. 54. - P. 1877-1881.

105. Sato S., Yamada M., Miyazaki Y. et al. Relationship between molecular state of serum HBV DNA and clinical features of hepatitis В virus carriers // Tohoku J. Exp. Med. 1993. - Vol. 171. - P. 309-317.

106. Seidi S., Koenig В., Reinhardt G. Higher detection rate of hepatitis G and С virus RNA in liver tissue than in serum of deceased injection drug users // Int. J. Legal. Med. 1999. - Vol. 112. - P. 35-38.

107. Shaw Т., Bartholomeusz A., Locarnini S. HBV drug resistance: Mechanisms, detection and interpretation // Hepatol. 2006. - Vol. 44. - P. 593-606.

108. Shibuya A., Tareuchi A., Kamata K. et al. Prevalence of hepatitis G virus RNA and anti — E2 in a Japanese haemodialysis population // Nephrol. Dial. Transplant. 1998. - Vol. 13. - P. 2033-2036.

109. Soderstrom A., Norkrans G., Lindh M. Hepatitis В virus DNA during pregnancy and post partum: aspects on vertical transmission // Scand. J. Infect. Dis.-2003.-Vol. 11-12. P. 814-819.

110. Sugano M., Hayashi J., Joon S. Quantification of hepatitis С viral RNA in liver and serum samples using competitive polymerase chain reaction // J. Clin. Pathol. 1995. - Vol. 48. - P. 820-825.

111. Tanaka E., Alter H. J., Nakatsuji Y. et al. Effect of hepatitis G virus infection on chronic hepatitis С // Ann. Int. Med. 1996. - Vol. 125. - P. 740-743.

112. Terrault N.A., Dailey P.J., Ferrell L. et al. Hepatitis С virus: quantitation and distribution in liver // J. Med. Virol. 1997. - Vol. 51. - P. 217-224.

113. Terrdult N.A., Pawlotsky J-M., McHutchison J. Clinical utility of Viral Load Measurements in individuals with Chronic Hepatitis С infection on antiviral therapy // J. Vir. Hepat. 2005. - Vol. 12. - P. 465-472.

114. Tillmann H.L. Antiviral therapy and resistance with hepatitis В virus infection. World J. Gastroenterol. 2007. - Vol. 13. - P. 125-140.

115. Tillmann H. L., Heiken H., Knapik-Botor A. et al. Infection with GB virus С and reduced mortality among patients with HIV infection // N. Engl. J. Med. 2001. - Vol. 345. - P. 715-724.

116. Tram T.T, Martin P. Hepatitis B: epidemiology and natural history // Clin. Liver Dis. 2004. - Vol. 8. - P. 255-266.

117. Wejstal R., Manson A. Perinatal transmission of Hepatitis G Virus and Hepatitis С Virus infections // Clin. Infect. Dis. 1999. - Vol. 28. - P. 816837.

118. Wilber J.C., Urdea M.S. Quantification of HCV RNA in clinical specimens by branched DNA(bDNA) technology // Methods in Molecular Medicine Hepatitis C. 1998. - Vol. 19. - P. 71-78.

119. Xiang J., Wunschmann S., Dickema D. J. et al. Effect of coinfection with GB virus С on survival among patients with HIV infection // N. Engl. J. Med. 2001. - Vol. 345. - P. 707-714.

120. Yeo W., Mo F.K., Chan S.L. et al. Hepatitis В viral load predicts survival of HCC patients undergoing systemic chemotherapy // Hepatol. 2007. -Vol. 45.-P. 1382-1389.

121. Young K.C., Chang T.T, Liou T.C. Detection of hepatitis С vims RNA in peripheral blood mononuclear cells and in saliva. // J. Med. Virol. 1993.1. Vol. 41.-Р. 55-60.

122. Zeuzem S. Overview of commercial HBV Assay Systems. Methods in molecular Medicine // Hepatitis В and D Protocols 2004. - Vol. 95. - P. 313.

123. Zeuzem S., Buti M., Ferenci P. Efficacy of 24 weeks treatment with peginterferon alfa-2b plus ribavirin in patients with chronic hepatitis С infected with genotype 1 and low pretreatment viremia // J. Hepatol. 2006. -Vol. 44.-P. 97-103.

124. Zignego A.L., De Carli M., Monti M. Hepatitis С vims infection of mononuclear cells from peripheral blood and liver infiltrates in chronically infected patients // J. Med. Virol. 1995. - Vol. 47. - P.58-64.