Изучение каталитических свойств липаз, иммобилизованных в гидрофобных средах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат химических наук Горохова, Ирина Викторовна

• Горохова, Ирина Викторовна
• кандидат химических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат химических наук Горохова, Ирина Викторовна

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИПАЗ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

2.1 Структура липаз

2.2 Активация липаз на поверхности раздела фаз б

2.3 Физико-химические свойства липаз

2.4 Катализируемые липазами реакции

2.5 Иммобилизация в приложении к липазам

2.5.1 Методы иммобилизации ферментов

2.5.2 Факторы, влияющие на активность иммобилизованного препарата

2.6 Изучение липаз методом монослоев

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

3.1 Получение и свойства копреципитатов липазы с гидрофобными соединениями

3.1.1 Получение и свойства коприципитатов липазы с гидрофобными соединениями с одинаковой длиной гидрофобного радикала

3.1.2 Получение и свойства коприципитатов липазы с гидрофобными соединениями с разной длиной гидрофобного радикала

3.2 Изучение взаимодействия липазы с гидрофобными соединениями методом монослоев

3.2.1 Изучение взаимодействия липазы с гидрофобными соединениями с одинаковой длиной гидрофобного радикала

3.2.1.1. Изучение поверхностных свойств гидрофобных соединений

3.2.1.2 Изучение сорбции липазы на монослои ПАВ

3.2.1.3 Изучение активности фермента в смешанных монослоях липаза - ПАВ

3.2.1.4. Изучение структуры смешанного монослоя липаза - ПАВ

3.2.1.5 Изучение электрических свойств смешанных монослоев липаза-ПАВ 73 3.2.2. Изучение взаимодействия липазы с соединениями с различной длиной гидрофобного радикала

3.2.2.1 Изучение взаимодействия липазы с N-алкилацетамидами

3.2.2.2 Изучение взаимодействия липазы с первичными аминами 82 3.2.3 Корреляция между поверхностными свойствами смешанных монослоев липаза - ПАВ и каталитическими свойствами преципитатов липазы с ПАВ

3.3 Иммобилизация липазы на твердых носителях

3.3.1 Физическая сорбция липазы на носитель Celite

3.3.2 Ковалентное связывание липазы с носителем Eupergit C250L

3.3.3 Получение препаратов иммобилизованной липазы на основе твердых композиционных сорбентов

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

4.1 Материалы

4.2 Методы исследования

5. ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение каталитических свойств липаз, иммобилизованных в гидрофобных средах»

Иммобилизация ферментов представляет собой одно из важнейших направлений современной прикладной биохимии и биотехнологии и активно развивается уже как минимум четыре десятилетия. Тонкий органический синтез лекарственных препаратов и их компонентов, высокоселективная химическая модификация и протеолиз белков, иммуноаналитические методы и создание высокочувствительных биосенсеров - все эти области науки, техники и медицины используют иммобилизованные ферменты. Известно что в иммобилизованном состоянии ферменты часто приобретают такие важные свойства как повышенная термостабильность, устойчивость к денатурирующим агентам и возможность выделения из реакционной смеси для повторного использования. Несмотря на то, что на сегодняшний день разработано множество методов иммобилизации различных ферментов, потребность в создании стабильных высокоселективных ферментных препаратов по-прежнему возникает довольно часто и поток научных публикаций на эту тему отнюдь не иссякает.

В ряду гидролитических ферментов, используемых как катализаторы органо-химических превращений, липазы (КФ 3.1.1.3) занимают особое место ввиду возможности их использования как в реакциях гидролиза липидов и сложных эфиров, так и в реакциях энантиоселективной этерификации и переэтерификации в органических растворителях или в водно-органических системах. В настоящее время интенсивно изучаются различные методы иммобилизации липаз, такие как физическая сорбция на гидрофобных адсорбентах, включение в гидрофобные гели и обработка фермента синтетическими липидоподобными реагентами. Различные методы иммобилизации дают возможность получать катализаторы с широко варьируемыми свойствами. Применение иммобилизованных липаз в энантиоселективном синтезе органических соединений обусловлено необходимостью получения широкого спектра хиральных органических соединений с высокой степенью оптической чистоты. К таким соединениям относятся, в частности, некоторые лекарства и их составляющие, а так же различные биохимические реагенты.

В данной работе исследована возможность получения высокоэффективных препаратов иммобилизованной липазы как путем включения фермента в копреципитаты ряда гидрофобных соединений, так и сорбцией белка на твердые носители при различных условиях, а также разработаны твердые композиционные сорбенты для получения высокоактивных и стабильных препаратов иммобилизованной липазы для катализа в водных средах и в органическом растворителе. Для понимания поведения липазы на поверхности раздела фаз вода - органический растворитель и изучения взаимодействия липазы с гидрофобными соединениями несубстратной природы был впервые использован метод монослоев.

Задачи данной работы были следующими: 1) изучение условий включения липазы из Pseudomonas fluorescens в копреципитаты ряда гидрофобных соединений; 2) изучение влияния природы гидрофобных соединений на каталитические свойства копреципитатов; 3) изучение методом монослоев взаимодействия липазы с гидрофобными соединениями на молекулярном уровне; 4) поиск корреляции между каталитическими свойствами преципитатов и характеристиками монослоев гидрофобных соединений до и после встраивания фермента; 5) разработка и получение высокоэффективных препаратов иммобилизованной липазы на основе твердых композиционных сорбентов.

В обзоре литературы изложено современное состояние исследований структуры и свойств липаз, а также содержатся сведения об иммобилизации липаз различными методами и влияния различных факторов на активность и стабильность иммобилизованных препаратов.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Горохова, Ирина Викторовна

5. ВЫВОДЫ

1. Предложен новый метод иммобилизации липазы из Pseudomonas fluorescens путем ее включения в копреципитаты ряда соединений (ПАВ), содержащих N-алкильный радикал длиной С12-С18 и концевую полярную группу. Найдены оптимальные соотношения компонентов, обеспечивающие высокую эффективность включения фермента в копреципитаты.

2. Установлено, что в составе копреципитатов липаза проявляет высокую каталитическую активность и стереоселективность в реакции этерификации 1-(118)-фенилэтанола в органическом растворителе. Активность иммобилизованной липазы возрастает до 12.5 раз по сравнению с активностью исходного фермента. Различия в активности препаратов обусловлены механизмом взаимодействия липазы с фазой соосадителя, а также различной смачиваемостью копреципитатов.

3. Изучен механизм взаимодействия липазы с монослоями ПАВ, в копреципитатах которых фермент показывает высокую каталитическую активность. Определены параметры монослоев гидрофобных соединений до и после встраивания фермента.

4. Найдена корреляция между параметрами активации фермента в копреципитатах и характеристиками смешанных монослоев липаза -гидрофобное соединение. Для получения высокоактивных преципитатов липазы существенно наличие жидкорастянутого состояния я-А-изотерме монослоя ПАВ и тенденция к расширению этого монослоя при адсорбции фермента.

5. Доказано, что иммобилизация липазы в присутствии гидрофобных соединений на твердых носителях Се1ке 545 и Еире^к С250Ь позволяет увеличить активность иммобилизованного фермента.

6. Получены твердые композиционные сорбенты с привитой фазой поли-М-цетилакриламида, полимерного аналога И-цетилацетамида - наиболее эффективного соосадителя липазы. На основе этих носителей получены механически прочные, высокоактивные и стабильные препараты липазы для катализа в водных средах и в органических растворителях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Горохова, Ирина Викторовна, 2003 год

1. White, J.S. and White, D.C., eds (1997) Source Book of Enzymes, CRC Press

2. Winkler, F.K., D'Arcy, A. & Hunziker, W. Structure of human pancreatic lipase Nature . 1990, 343, 771-774

3. Guidoni,A., Benkouka, F., Caro, J.,Rovery, M. Characterization of the serine reacting with diethyl-p-nitrophenylphosphate in porcine pancreatic lipase Biochim. Biophys. Acta 1981, 660, 148-150

4. Ben-Zeev,0., Ben-Avram, C.M., Wong, H„ Nikazy,J„ Shively, J.E. and Dchotz, M.C. Hepatic lipase: a member of a family of structurally related lipases Biochim. Biophys. Acta 1987, 919, 13-20

5. Nardini, M., Lang, D.A., Liebeton, K., Jaeger, K.E., Dijkstra, B.W. Crystal Structure of Pseudomonas aeruginosa Lipase in the Open Conformation.The Prototype for family 1.1 of bacterial lipases Journal of Biological Chemistry 2000, 275, 31219-31225

6. Kugimiya,W., Otani, Y., Hashimoto, Y. And Takagi, Y. Molecular cloning and nucleotide Sequence of the lipase gene from Pseudomonas fragi Biochimical Biophysical Research Communications 1986, 141, 185-190

7. Boel, E., Huge-Jensen, В., Christensen, M., Thim, L. and Fiil, N.P. Phizomucor miehei Triglyceride Lipase Is Synthesized as a Precursor Lipids 1988, 23, 701-706

8. Antonian, E. Recent Advances in the Purification, Characterization and Structure Determination of Lipases Lipids (1998) 23, 1101-1106

9. Semeriva, M., Dufour, C, Desnuelle,P. On the probable involvant of a histidine residue in the active site of pancreatic lipase Biochemistry, 1971, 10, 2143-2149

10. Purdy, R.E. and Kolattukudy, P.E. Hydrolysis of Plant Cuticle by Plant Pathogens. Properties of Cutinase I, Cutinase II, and a Nonspecific Esterase Isolated from Fusarhim solani pisi Biochemistry, 1975, 14, 2832-2840

11. Chapus, C. and Semeriva, M., Mechanism of pancreatic lipase action. Catalytic properties of modified lipases Biochemistry 1976,15,4988-4991

12. Maylie, M.F., Charles,M., Sarda, L. And Desnuelle, P. Action of organophosphates on pancreatic lipase J. Biochim. Biophys. Acta 1969, 178, 196-198

13. Антонов B.K., Гинодман Л.М., Ротанова Т.В., Нуцубидзе Н.Н. Связь между «центром активации» и каталитическим центром в панкреатической липазе Биоорганическая химия 1978, 4, 276-277

14. Ротанова Т.В., Клаус Р., Иванова А.Г., Гинодман Л.М., Антонов В.К. Изучение топографии активного центра панкреатической липазы методомбифункционального обратимого ингибирования борорганическими кислотами Биоорганическая химия 1976, 2, 837-845

15. Brady, L A serine protease triad forms the catalytic center of a triacylglycerol lipase Nature 1990, 343, 767-770

16. Winkler, F.K., d'Arcy, A. And Hunziker, W. Structure of human pancreatic lipase Nature 1990 343, 771-774

17. Isobe, M. And Sugiura, M. Studies on the Lipase of Cromobacterium viscosum. Physical and Chemical Properties of the Lipase Chemical Pharmaceutical Bulletin 1977, 25 (8),1980-1986

18. Twu, J.S., Garfinkel, A.S. and Schotz, M.C. Hepatic lipase: Purification and Characterization Biochim. Biophys. Acta 1984, 792,330-337

19. Tyski,S., Hryniewicz, W. and Jeljaszewicz, J. Purification and some properties of the staphylococcal extracellular lipase Biochim. Biophys. Acta 1983, 749, 312-317

20. Fielding, P.E., Shore, V.G. and Fielding, C. J. Lipoprotein Lipase: properties of the Enzyme Isolated from Post-Heparin Plasma Biochemistry 1974, 13, 4318-4323

21. Iwai, M., Okumura, S. and Tsujisaka, Y. Agricultural and Biological Chemistry 1975, 39, 1063-1070

22. Sugiura, M., Oikava, Т., Hirano, K., Inukai, T. Purification, crystallization and properties of triacylglycerol lipase from Pseudomonas fluorescens J. Biochimica et Biophysica Acta 1977, 488, 353-358

23. Verger, R. in Lipases (Borgstroem, В and Brockman, H.L., eds) Elsevier, Amsterdam, 1984, 505-523

24. Willstaetter, R., Waldschmidt-Leitz, E. Z.Physiol.Chem. 1924, 138, 247 (цит. no 25)

25. Sarda, L., Marchis-Mouren, G., Desnuelle, P. Sur les interactions de la lipase pancreatique avec les triglycerides J. Biochim. Biophys. Acta 1957, 24, 425-427

26. Sarda, L., Desnuelle, P. Action de la lipase pancreatique avec les esters en emulsion Biochim. Biophys. Acta 1958, 30, 513-521

27. Holverda, K, Verkade, P.E., de Willingen, A.H.A Reel. Trav. Chim. Pays-Bas 1936, 55, 43 (цит. no 28)

28. Brockman, H.L., Law, J.H., Kezdy, F.J. Catalysis by adsorbed enzymes. The hydrolysis of tripropionin by pancreatic lipase adsorbed to siliconized glass beads J.Biol.Chem., 1973, 248, 4965-4970

29. Bosiey, Y.A., Clayton, J.C. Blueprint for a lipase support: use of hydrophobic controlled-pore glasses as model systems Biotechnology and Bioengineering 1994, 43, 93-938

30. Wang, X., Ruckenstein, E. Preparation of porous polyurethane particles and their use in enzyme immobilization Biotechnology Progress 1993, 9, 661-665

31. Hayashi,T., Ikada,Y. Lipoprotein lipase immobilization onto polyacrolein microsheres Biotechnology and Bioengineering 1990, 36, 593-600

32. Х.Брокерхоф, Р.Дженсен Липолитические ферменты М. Мир 1978

33. Brockerhoff, Н. L., Law, J., Kezdy,F. Catalysis by Adsorbed Enzymes. The hydrolysis of tripropionin by pancreatic lipase adsorbed to siliconized glass Journal of Biological ChemistryBiol.Chem 1973, 248 (14), 4965-4970

34. Verger, R., Mieras, M.C.E., de Haas, G.H. Action of phosholipase Аг at interfases J.Biol.Chem 1973,248,4023-4034

35. Bailey, J.E. and Ollis, D.F. Biochemical Engineering Fundamentals McGraw-Hill Book Co., New York, 1986, 135-152

36. Olivecrona, T. and Bengtsson,G. In Lipases (Borgstroem, B. and Brockman, H.L.) Elsevier, Amsterdam, 1984, 205-261

37. Schmid, R.D. and Verger R. (1998) Lipases: interfacial enzymes with attractive applications Angewange Chemistry Int.Ed. 37, 1609-1633

38. Miled, N., Beisson, F., de Caro, J., de Caro, A., Arondel, V.,Verger, R Interfacial catalysis by lipases Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2001, 14, 165-171

39. Malcata, F.X., Reyes, H.R., Garcia, H.S., Hill, C.G., Amundson, C.H. Kinetics and mechanisms of reactions catalysrd by immobilized lipases Enzyme Microbial technology 1992, 14 (6), 426-446

40. Malcata, F.X., Hill, C.G., Amundson, C.H. Use of a lipase Immobilized in a Membrane Reactor to Hydrolyze the Glycerides of Butter oil Biotechnology. Bioengineering 1991, 38 (8), 853-868

41. Siquira, M., Isobe, M. Studies on the mechanism of the lipase reaction Biochim. Biophys. Acta 1975, 397, 412-417

42. Verger, R., Mieras, M.C.E. and Haas,G.H Action of Phospholipase A at Interfaces Journal of Biological Chemistry 1973, 248 (11), 4023-4034

43. Brockerhoff, H. Chemistry Physics Lipids 1973, 10, 215-222

44. Desnuelle, P.,Sarda, L and Ailhaud, G. Inhibition de la lipase pancreatique par le diethyl-p-nitrophenyl phoshate Biochim. Biophys. Acta 1960, 37, 570-571

45. Dawson, R.M. Enzymatic Hydrolysis of Monomolecular Layers of Lipids Methods Enzymology 1969, 14, 633-648

46. Березин И.В., Мартинек К. основы физической химии ферментативного катализа М., Высшая школа, 1977, 56

47. Kilara Arun Enzyme-modified lipid food ingredients Process Biochemistry 1985, 20, 3545

48. D.M.Adams, T.G.Brawley Factors Influencing the Heat Resistance of a Heat-Resistant Lipase of Pseudomonas. Factors Influencing the Activity of a Heat-Resistant Lipase of Pseudomonas Journal of Food Science 1981, 46 (3), 673-680

49. Xiu-Gong Gao, Shu-Gui Cao, Ke-Chang Zhang Ptoduction, properties and application to nonaqueous enzymatic catalysis of lipase from a newly isolated Pseudomonas strain Enzyme and Microbial Technology 2000, 27, 74-82

50. М.М.Рахимов, Н.Р.Джанбаева, И.В.Березин Субстратная специфичность иммобилизованных липаз Доклады Академии наук СССР 1976, 229 (6), 1481-1484

51. Kannappan Veraragavan A Simple and Sensitive Method for the Estimation of Microbial Lipase Activity Analytical Biochemistry 1990, 186, 301-305

52. A.Zaks and A.M.Klibanov Enzymes-catalyzed processes in organic solvents Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1985, 82 №10, p.3192.

53. A.Zaks and A.M.Klibanov Enzymatic catalysis in organic media at 100 С Science. 1984, 224,1249-1251.

54. K.Martinek, A.V.Levashov, Yu.L.Khmelnitsky, N.L. Klyachko, I.V.Berezin Colloidal Solution of Water in Organic Solvents: A Microheterogeneous Medium for Enzymatic Reaction Science. 1982, 218 №4575, p.889.

55. Benzonana, G. and Esposito, S. On the positional and chain specificities of Candida cylindracea lipase Biochim. Biophys. Acta 1971, 231, 15-22

56. Okumura, S., Iwai, M. and Tsujisaka, Y. Agricultural and Biological Chemistry 1976, 40, 655-660

57. Desnuelle, P. Adv.Enzymol. 1961, 23, 129-160

58. Sonnet, P.E. Lipase Selectivities Journal of American Oil Chemists' Society 1988, 65, 900-904

59. Jensen, R.G., Galluzzo, D R. and Bush, V. J. Biocatalysis 1990, 3, 307-316

60. Brockerhoff, H. Substrate specificity of pancreatic lipase. Influence of the structure of fatty acid on the reactivity of esters Biochim. Biophys. Acta 1970, 212, 92-101

61. Moskowitz, G.J., Cassaigne, R., West, I.R., Shen, T. and Feldman, L.I. Hydrolysis of Animal Fat and Vegetable Oil with Mucor miehei Esterase. Properties of the Enzyme Journal of agricultural and Food Chemistry, 1977, 25, 1146-1150

62. Malcata, F.; Reyes, H.; Garcia, H.; Hill, C., Amundson, Jr., C. Kinetics and mechanisms of reactions catalysed by immobilized lipases Enzyme Microb. Technol. 1992. 14. 426446

63. Jaeger, K-E. And Reetz, M.T. Microbial lipases form versatile tools for biotechnology Trends in Biotechnology 1998, 18, 396-403

64. Rubin, B. And DennisE.A., eds 1997 Methods in Enzymology: Lipases, Part A. Biotechnology (vol.284), Academic Press

65. Rubin, B. and DennisE.A., eds 1997 Methods in Enzymology: Lipases, Part B. Enzyme Characterization and Utilization (Vol.286) Academic Press

66. Drauz, K. and Waldmann, H., eds 1995 Enzyme Catalysis in Organic Synthesis, VCH

67. Faber, K. 1997 Biotransformations in Organic Chemistry (3rd edn), Springer, Stecher, H. and Faber, K. 1997 Synthesis 1-16

68. Erdmann,H., Fritsche,K., Kordel, M., Lang, S., Lokotsch, W., Markweg, M., Schneider, M., Ausgewaehlte Beispile fuer die Anvendung von Lipasen in der organisch praparativen Chemie Jarbuch Biotechnologiel986/1987, 353-379

69. Я. Халгаш Биокатализаторы в органическом синтезе, Москва, "Мир", 1991

70. Retey Y.,Robinson Retey Y., Robinson Y.A., Stereospecificiti in organic chemistry and enzymology. Weinheim, Verlag Chemie, 1982

71. V.B.Balcao, A.L.Paiva, F.X.Malcata Bioreactors with immobilized lipase: State of the art Enzyme and Microbial Technology 1996, 18, 392-416

72. A.E.Ivanov, M.P.Schneider Methods for the immobilization of lipases and their use for ester synthesis Journal of Molecular Catalysis B:Enzymatic 1997, 3, 303-309

73. E.Wehtje, P.Adlercreutz, B.Mattiasson Improved Activity Retention of Enzymes Deposited on Solid Supports Biotechnology and Bioengineering 1993, 41, 171-178

74. R.Rosu, Y.Iwasaki, T.Yamane Repeated use of immobilized lipase for monoacylglycerol production by solid phase glycerolysis of olive oil Enzyme Microbiologic. Technology 1995, 17, 578-586

75. T.Yamane, T.Ichiryu, M.Nagata, A.Ueno and S.Shimizu Intramolecular Esterification by Lipase Powder in Microaqueous Benzene: Factors Affecting Activity of Pure Enzyme Biotechnology and Bioengineering 1990, 36, 1063-1069

76. T.N.B.Kaimal and M.Saroja Selective removal of linolenic acid from soybean oil by lipase-catalyzed interesterification at low temperature Biotechnology letters 1988, 10, 337-340

77. T.N.B.Kaimal and M.Saroja Enhancement of catalytic activity of porcine pancreatic lipase by reductive allcylation Biotechnology letters 1989, 11, 31-36

78. Maj-Britt Stark and Krister Holberg Covalent immobilization of lipase in organic solvents Biotechnology and Bioengineering 1989,34, 942-950

79. Yamanaka S., Tanaka T., Regiospecific interification of triglyceride with celite adsorbed lipase Methods in Enzymology 1987, 136, 404-411

80. Z.Knezevic, L.Mojovic, B.Adnadjevic Palm oil hydrolysis by lipase from Candida cylindracea immobilized on zeolite type Y Enzyme and Microbial Technology 1998, 22, 275-280

81. H.Gunnlangsdottir, K.Wannerberger, B.Silk Alcoholysis and glyceride synthesis with immobilized lipase on controlled-pore glass of varying hydrophobicity in supercritical carbon dioxide Enzyme and Microbial Technology 1998, 22, 360-367

82. M.Norin, J.Boutelje, E.Holmberg and K.Hult Lipase immobilized by absorption Effect of support hydrophobicity on the reaction rate of ester synthesis in cyclohexane Applied and Microbiology Biotechnology 1998, 28, 527-530

83. R.Fernandez-Lafuente, P.Armisen, P.Sabuquino, G.Fernandez-Lorente, J.M.Guisan Immobilization of lipases by Selective adsorption on hydrophobic supports Chemistry and Physics of Lipids 1998, 93, 185-197

84. R.Rosu, Y.Iwasaki, N.Shimizu, N.Doisaki, T.Yamane Interification of lipase performance in a transesterification reaction by immobilization on CaC03 powder Journal of Biotechnology 1998, 66, 51-59

85. E.Katchalski-Katzir, D.M.Kraemer Eupergit C, a carrier for immobilization of enzymes of industrial potential Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2000, 10, 157-176

86. Burg,K., Mauz,0., Noetzel,S, Sauber,K„ Neue synthetische Traeger zur Fixierung von Enzymen Die Angewandte Macromolekulare Chemie 1988, 157, 105-121

87. B.Wirz, R.Barner, J.Huebscher Study of immobilized on Eupergit® lipases stability Journal of American Chemical Society 1993, 58, 3980-3984

88. E.Katchalski-Katzir, D.M.Kraemer Eupergit C, a carrier for immobilization of enzymes of industrial potential Journal of Molecular Catalysis B:Enzymatic 2000, 10, 157-176

89. Sang-Woo Cho, Joon Shick Rhee Immobilization of Lipase for Effective Interesterification of Fats and Oils in organic Solvent Biotechnology and Bioengineering 1993, 41, 204-210

90. Kaetsu I., Kimamura M., Fuyimura T., Yoshida M., Asano M., Kasai N., Tamada M. Studies of the immobilization of bioiunctional components by radiation polymerization and their application Radiation Physics and Chemistry 1986.,27 (4), 245

91. Mas.Goto, H.Kameyama, Mun.Goto, M.Miyata, F.Nakashio Design of surfactants suitable for surfactant-coated enzymes as catalysts in organic media Journal of chemical engineering of Japan 1993, 26,109-111

92. Mas.Goto, Mun.Goto, N.Kamiya, F.Nakashio Enzymatic interesterification of triglyceride with surfactant-coated lipase in organic media Biotechnology and Bioengineering 1995, 45, 27-32

93. S.Y.Huang, H.L.Chang, M.Goto Preparation of surfactant-coated lipase for the esterification of geraniol and acetic acid in organic solvents Enzyme and Microbial Technology 1998, 22, 552-557

94. Okahata Y.,Hatano A., Ijiro K., Enhancing Enantioselectivity of a Lipid-coated Lipase via Imprinting Methods for Esterification in Organic Solvents, Tetrahedron: Azymmetry, 1995, 6, 1311-1322

95. Y.Okahata, T.Mori Lipid-coated enzymes as efficient catalysts in organic media Trends in Biotechnology 1997,15, 50-54

96. T.Yoshimoto, K.Takahashi, H.Nishimura, A.Ajima, Y.Tamaura, Y.Inada Modified lipase having high stability and various enzymic activities in benzene, and its re-use recovering from benzene solution Biotechnology Letters 1984,6, 337-340

97. K.Takahashi, A.Ajima, T.Yoshimoto, M.Okada, Amatsushima, Y.Tamaura, Y.Inada Chemical reactions by polyethylene Glycol modified enzymes in chlorinated hydrocarbons Journal of Organic Chemistry of American Chemical Society 1985, 50, 3414-3415

98. K.Fukunaga, N.Minamijima, Y.Sugimura, Z.Zhang, K.Nakao Immobilization of organic solvent-soluble lipase in nonaqueous conditions and properties of the immobilized enzymes Journal of Biotechnology 1996, 52, 81-88

99. J.Partidge, P.J.Halling, B.D.Moore Practical route to high activity enzyme preparations for synthesis in organic media Chemical Communication 1998, 7, 841-82

100. Doctoral Dissertation Raul J.Barros Influence of Internal Diffusional Limitations on the Performance of an Immobilized Enzyme in Organic Medium Department of Biotechnology Lund University, Sweden, 1999

101. R.J.Barros, E.Wehtje, F.A.P.Garcia and P.Adlercreutz Physical characterization of porous materials and correlation with the activity of immobibilized enzyme in organic medium Biocatalysis and Biotransformation 1998, 16,67-85

102. S.Sato, T.Murakata, T.Suzuki and Y.Goto Comparative Study of Esterificatio Activity in Organic Medium between Adsorptively Immobilized and Covalently Immobilized Lipase Journal of Chemical Engineering of Japan, 1999, 32 №3, 350-353

103. Barros R.J., Wehtye E., Adlercreutz P., Effect of Enzyme Loading on Immobilized a-Chymotrypsin Activiti in Organic Medium, sigillum Biotrans'95 (1995)

104. D.Costes, E.Wehtje, P.Adlercreutz Hydroxynitrile lyase-catalyzed synthesis of cyanohydrins in organic solvents Parameters influencing activity and enantiospecificity Enzyme Microb Techlology 1999, 25, 384-391

105. R.J.Barros, E.Wehtje, P.Adlercreutz Effect of mass-transfer limitation on selectivity of immobilized a-chymotrypsin biocatalysts prepared for use in organic medium Biotechnology and Bioengeneering 1998, 59, 364

106. T.Yamane, T.Ichiryu, M.Nagata, A.Ueno, S.Shimizu Intermolecular esterification by lipase powder in microagueous benzene: factors affecting activity of pure enzyme Biotechnology and Bioengineering 1990, 36, 1063-1069

107. A.O.Triantafyllou, E.Wehtje, P.Adlercreutz, B. Mattiasson Effects of sorbitol on the action of free and immobilized hydrolytic enzymes in organic media Biotechnology and Bioengineering 1995, 45, 406-414

108. S.Ransas, M.Ivanova, R.Verger, I.Panaiotov Monolayer Techniques for Stadying Lipase Kinetics Methods in enzymology 1997, 286, 263-292

109. Dervischian D.G. Biochimie, 1971. V.53. 25-34

110. J.M.Muderhwa, H.L.Brockman Lateral Lipid Distribution Is a Major Regulator of Lipase Activity Journal of Biological Chemistry 1992, 267, 24184-24192

111. U.Dahmen-Levison, G.Brezesinski, H.Moehwald Prog.Colloid Polym Sci 1998, 110, 269-274

112. U.Derewenda,A.M.Brozozski, D.M.Lawson Z.S.Derewenda Catalysis at the Interface: The anatomy of a conformational Change in a Triglyceride Lipase Biochemistry 1992, 31, 1532-1541

113. M.P.Egloff, F.Marguet, G.Buono, R.Verger, C.Cambilillau, H.Tilbeurgh The 2.6 Â Resolution Structure of the Pamcreatic Lipase-Colipase Complex Inhibited by a Cll Alkyl PhosphonateBiochemistry 1995, 34, 2751-2762

114. H.Tilbeurgh, M.P.Egloff, C.Martinez, N.Rugani, R. Verger, C.Cambilillau Interfacial activation of the lipase-procolipase complex by mixed micelles revealed by X-ray crystallography Nature 1993, 362, 814-825

115. C.S.Rao, S.Damodaran Is Interfacial Activation of Lipase in Lipid Monolayers Related to Thermodynamic Activity of Interfacial Water? Langmuir 2002,18 6294-6306

116. C.S.Rao, S.Damodaran Is Surface Pressure a Measure of Interfacial Water Activity? Evidence from Protein Adsorption Behavior at Interfaces Langmuir 2000, 16, 9468-9477

117. P.J.Halling Thermodynamic predictions for biocatalysis in nonconventional media: Theory, tests and recommendation for experimental design and analysis Enzyme Microbial Technology 1994, 16 (3), 178-206.

118. Laboda H.M., Glick J.H., Phillips M.C Hydrolysis of lipid monolayers and the substrate specificity of hepatic lipase Biochim. Biophys. Acta 1986, 876 (2), 233-242

119. Г.П.Ямпольская, В.Н.Измайлова, З.Д.Туловская Регулирующая роль поверхностной энергии в липолитических реакциях Итоги науки и техники серия Биотехнология. 1987, 4, 199-269

120. T.Thuren, R.Wilcox, P.Sisson, M.Waite Hepatic Lipase Hydrolysis of Lipid Monolayers Journal of Biological Chemistry 1991, 266, 4853-4861

121. R.Wilcox, T.Thuren, P.Sisson, J.D.Schmitt, M.Kennedy, M.Waite Regulation of Rat Hepatic Lipase by the Composition of Monomolecular Films of Lipid Biochemistry 1993, 32 №22, 5752-5758

122. K.Tanaka, S.P.Mecca, H.Yu Lipase Catalysis on Monolayers at the Air/Water Interface. 2. Diffusion-Controlled Kinetics on Quasi-Two-Dimension Langmuir 2000, 16, 2672-2676

123. M.Ivanova, R.Verger, I.Panaiotov Mechanism underlying the desorption of long-chain lipolytic products by cyclodextrins: application to lipase kinetics in monolayer Colloids and Surfaces В: Biointerfaces 1997, 10, 1-12

124. E.Ziomek, I.Douchet, M.Ivanova, R. Verger Interaction of a poly(dimethylsiloxane) with triglycerides in monomolecular films and application to lipase kinetics Chemistry and Physics of Lipids 1996, 81, 1-9

125. С.Ю.Зайцев, Б.Аха, Т.А.Волченкова, С.В.Белов, М.П.Шнайдер, А.Е.Иванов Исследование гидролиза в монослоях новых липидоподобных субстратов и трилаурина под действием липазы Pseudomonas fluorescens Биоорганическая химия. 2000, 26, 224-230

126. S.Ransac, С.Riviere, J.M.Soulie, C.Gancet, R.Verger, G.H.Haas Competitive inhibition of lipolytic enzymes. I. A kinetic model applicable to water insoluble competitive inhibitors Biochimica et Biophysica Acta 1990, 1043, 57-66

127. M.Ivanova, A.SvendsenR.Verger, I.Panaiotov Hydrolysis of 1,2-rac-dicarpin monomolecular films by Humicola lanuginose, as reflected in the surface potential Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 2000, 19, 137-146

128. G.H.Peters, U.Dahmen-Levison, K. De Meijere, G.Brezesinski, S.Toxvaerd, H.Moehwald, A.Svendsen, P.K.J.Kinnunen Influence of surface properties of mixed monolauers on lipolytic hydrolysis Langmuir 2000, 16, 2779-2788

129. E.Rogalska, S.Ransac, R.Verger Controlling Lipase Stereoselectivity via the Surface Pressure Journal of Biological Chemistry 1993, 268, 792-794

130. P.Skagerlind, K.Holmberg, Lipase catalyzed reactions at different types of surfactant monolayers Reports of Institute Surface Chemistry, Stockholm, Sweden Series С 1994, 6, 102-105

131. C.P.Singh, D.O.Shah Lipase-catalyzed esterification in monolayers and microemulsions Colloids and Surfaces A: 1993, 77, 219-224

132. Спутник химика т.З Химия, Ленинград, 1964, 98

133. Sugiura, М., Oikawa, Т. Biochim Biophys Acta 1977, 24, 489(2), 262-268

134. Reetz M.T., Zonta A., Simpelkamp J., Efficient Immobilization of Lipase by Entrapment in Hydrophobic Sol-Gel Materials, Biotechnology and Boiengineering 1996, 49, 527-534

135. Zhen Yang, Darrel Williams, Alan J.Russel, Synthesis of Protein-Containing Polymers in Organic Solvents, Biotechnology and Boiengineering 1995, 45, 10-17

136. Birdi K.S. Lipid and Biopolymer Monolayers at Liquid Interfaces. New York, London: Plenum Press, 1989, 305

137. Адамсон А.У. Физическая химия поверхностей Мир, Москва, 1979, 568

138. Ransac S., Riviere С., Verger R. Methods in Enzymology, 1991, 197, 49-65.

139. Heckl W.M., Thompson M., Moewald H Fluorescence and electron microscopic study of lectin-polysaccharide and immunochemical aggregation at phospholipid Langmuir-Blodgett monolayers Langmuir, 1989, 5,№2, 390-394

140. Okahata Y., Tsuruta Т., Ijiro K., Ariga K. Preparations of Langmuir-Blodgett films of enzyme-lipid complexes: a glucose sensor membrane Thin Solid Films 1989, 180, 65-72

141. Абрамзон A.A., Бочаров B.B., Гаевой Г.М Поверхностно-активные вещества: Справочник под ред. Абрамзона А.А. и Гаевого Г.М Ленинград: Химия, 1979, 108-122

142. А.Е.Иванов, С.В.Белов, В.П.Зубов Химическая адсорбция поли-п-нитрофенилакрилата на аминопропилсилильных производных силикагеля и пористого стекла Высокомолекулярные соединения ,1993, т.5, №8, 1320-1325

143. А.Е.Иванов, Л.В.Верховская, С.Н.Хилько, В.П.Зубов Твердокаркасные широкопористые сорбенты для гидрофобной хроматографии белков Биоорганическая химия , 1990, т. 16, №8, 1028-1039

144. С.Грег, К.Синг Адсорбция, удельная поверхность пористость. М.Мир,1984, 186-203

145. Ed.by B.Borstrom and H.L.Brockman, Lipase. Elsevier, Amsterdam, New York, Oxford, 1984, pp.505-523

146. Потапов B.M Органикум . M: Мир, т.2, c.353-377

147. Brandrup J., Immergut E.H. Polymer Handbook THIRD edition. N.Y.: J.Welly&Sons. 1989. VIII. P.9