Факторы, влияющие на взаимосвязь агрегации и каталитической активности глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Шалова, Ирина Николаевна

• Шалова, Ирина Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шалова, Ирина Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

О-глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа: структура, свойства и функции.

Структура глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы.

Механизм дегидрогеназной реакции.

Многофункциональность глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы.

Участие глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы в развитии нейродегенеративных заболеваний.

Синтетические полиэлектролиты и их поликомплексы.

Основные свойства полиэлектролитных комплексов.

Основные свойства белок-полиэлектролитных комплексов.

Применение синтетических полиэлектролитов в биотехнологии.

Болезнь Альцгеймера: общие представления и основные подходы к лечению.

Общие представления о болезни Альцгеймера.

Стадии развития болезни Альцгеймера и основные свойства пептида (3амилоида.

Современные подходы к лечению болезни Альцгеймера.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Материалы.

Методы.

Выделение глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы из скелетных мышц кролика.

Приготовление экстрактов ткани мозга.

Определение концентрации реагентов.

Определение концентрации белков.

Определение активности глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы.

Инкубация глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы с препаратами, индуцирующими болезнь Алъцгеймера.

Модификация глицералъдегид-3-фосфатдегидрогеназы глутаровым альдегидом.

Приготовление растворов полиэлектролитов.

Термоинактивация глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы в смесях с полиэлектролитами.

Реактивация глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы при разрушении белок-полиэлектролитного комплекса увеличением ионной силы.

Реактивация глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы при разрушении белок-полиэлектролитного комплекса полиэлектролитом-конкурентом

Кинетика агрегации белка.

Метод динамического светорассеяния.

Метод дифференциальной сканирующей калориметрии.

Электрофорез белков по методу Лэммли.

Метод иммуноблоттинга.:.

Статистический анализ данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Изменение удельной активности глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы в мозге животных при моделировании болезни

Альцгеймера.

Кросс-реактивность антител 6Е10, выработанных на ¡3-амилоид, с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой.

Определение удельной активности и содержания глицеральдегид-3фосфатдегидрогеназы в мозге животных.

Влияние синтетических полиэлектролитов на термоагрегацию и термоинактивацию глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы.

Факторы, влияющие на термоагрегацию глицеральдегид-3фосфатдегидрогеназы в смеси с полиэлектролитами.

Влияние соотношения заряженных групп белка и полиэлектролита на термоагрегацию глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы.

Влияние степени полимеризации полиэлектролита на термоагрегацию глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы.

Влияние плотности заряда цепи полиэлектролита на термоагрегацию глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы.

Влияние гидрофобности цепи полиэлектролита на термоагрегацию глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы.

Влияние ионной силы раствора на термоагрегацию глицеральдегид-3фосфатдегидрогеназы.

Термоинактивация глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы.

Реактивация фермента, участвующего в комплексообразовании.

ВЫВОДЫ.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Шалова, Ирина Николаевна

1. Показано, что удельная активность глицеральдегид-3-

фосфатдегидрогеназы в мозге животных при различных способах

моделирования болезни Альцгеймера уменьшается. При этом

содержание белка глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы в

нерастворимых фракциях мозга трансгенных мышей TG2576

увеличивается. 2. Выявлена кросс-реактивность антител 6Е10, выработанных на Р амилоид, с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой и подобраны

условия избирательной идентификации двух белков. 3. Показано, что высокомолекулярные синтетические поликатионы и

полианионы подавляют агрегацию глицеральдегид-3-

фосфатдегидрогеназы. 4. Показано, что после термоинактивации глицеральдегид-3-

фосфатдегидрогеназы в составе белок-полиэлектролитного комплекса и

последующего вытеснения белка из комплекса можно провести

реактивацию фермента с восстановлением до 40 % удельной активности.