Ген MRPL37: структура и функциональные особенности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Левшенкова, Елена Владимировна

• Левшенкова, Елена Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2003

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Левшенкова, Елена Владимировна

выводы

1. Методом прямой селекции из кДНК библиотеки активированных лимфоцитов на ДНК YAC клона 131F1 был изолирован транскрипт размером 147п.о. Получена полная копия кДНК отселектированного гена, размер которой составил 1430 п.о. Обнаружена 100% гомология отселектированного гена с геном MRPL37, кодирующим компонент большой субчастицы миторибосомы. С помощью панели из соматических клеточных гибридов (человек — хомяк), ген MRPL37 был локализован на хромосоме 1 человека.

2. Проведенный комплексный анализ экспрессии гена MRPL37 в различных тканях человека и мыши, а также в ряде опухолевых клеточных линий человека обнаружил дифференциальный характер экспрессии гена.

3. С помощью ряда экспериментов показано, что MRPL37, наряду с DAP3 и PDCD9, является медиатором процесса апопотоза, причем MRPL37 предположительно вовлечен в р53-независимый путь апоптоза.

4. В клеточной линии аденокарциномы ободочной кишки НТ29 обнаружен альтернативный транскрипт гена

MRPL37a, который является потенциальным TFIIS — подобным фактором, благодаря наличию гомологичного домена. Показано, что продукты альтернативных транскриптов несут противоположную функциональную нагрузку: MRPL37n способствует гибели клеток, a MRPL37a способствует выживаемости клеток при стрессовых воздействиях, индуцирующих апоптоз.

5. Проведенный функциональный анализ промоторной области гена MRPL37 показал, что MRPL37 принадлежит к Е2Р-респонсивным генам, причем E2F является репрессором экспрессии MRPL37.

6. Используя метод дрожжевой двухгибридной системы, выявлено три партнера по взаимодействию белка MRPL37, а именно: кислый рибосомный белок РО, РНК связывающий белок TAR-BP, а также гемоглобин эпсилон НЬ-е.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В процессе данной работы из активированных Т лимфоцитов человека был изолирован ген, продукт которого обнаружил 100% гомологию с рибосомным белком большой субчастицы рибосомы митохондрий MRPL37, который впервые идентифицировали Graack и сотр. по гомологии соответствующего гена быка с кДНК человека, представленными в GenBank EST (145).

Анализ аминокислотной последовательности MRPL37 показал наличие гомологии с проапоптозным белком PDCD9, который также является митохондриальным рибосомным белком малой субчастицы рибосомы (MRP-S30). К настоящему моменту известно два митохондриальных рибосомных белка, вовлеченных в процесс программируемой клеточной смерти, это PDCD9 (MRP-S30) и DAP3 (MRP-S29). Было высказано предположение, что MRPL37 также может быть вовлечен в процесс апоптоза, как PDCD9 и DAP3.

Настоящая работа была посвящена функциональному исследованию гена MRPL37, которое показало, что уровень экспрессии MRPL37 в клетках Hef р53-/- увеличивается при индукции апоптоза путем удаления из среды культивирования факторов роста. Показано, что при суперэкспрессии гена MRPL37 выживаемость клеток Mef р53-/-, обработанных УФ, падает, таким образом, можно предположить, что ген MRPL37 вовлечен в р53-независимый путь программируемой клеточной смерти.

В процессе работы нами был впервые идентифицирован альтернативный транскрипт гена MRPL37, обнаруженный в клетках аденокарциномы ободочной кишки НТ29, предполагаемая аминокислотная последовательность которого содержит консенсус ДНК связывающего домена транскрипционного фактора TFIIS. Показано, что суперэкспрессия продуктов альтернативных транскриптов гена MRPL37 приводит к противоположным эффектам, MRPL37H способствует клеточной смерти, тогда как MRPL37a, напротив, увеличивает степень выживаемости клеткок при индукции апоптоза.

С помощью метода дрожжевой двухгибридной системы было идентифицировано три возможных партнера по взаимодействию белка MRPL37, а именно РО, TAR-BP и НЬ-эпсилон.

Таким образом, нами охарактеризованы дополнительные функции компонента миторибосомы MRPL37, не связанные непосредственно с процессом биосинтеза белка.