Изучение биологических свойств рекомбинантных штаммов Salmonella Enteritidis, экспрессирующих НВс-антиген вируса В с эукариотического и прокариотического промоторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат медицинских наук Донин, Михаил Васильевич

• Донин, Михаил Васильевич
• кандидат медицинских наук
• 0

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Донин, Михаил Васильевич

ВВЕДЕНИЕ.3-

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1. Состояние вакцинопрофилактики против гепатита В на современном этапе.7

1.2. Пути усовершенствования стандартной рекомбинантной вакцины против гепатита В.9

1.3. Стратегия иммунотерапии хронической формы гепатита В.11

ГЛАВА 2. Собственные исследования

2.1 Материалы и методы исследования.26

2.2 Влияние плазмид на биологические характеристики гибридных штаммов Salmonella.41

2.3 Определение минимальной ингибирующей концентрации ампициллина для гибридных штаммов сальмонеллы.

2.4. Определение концентрации вакцинных штаммов в суппозиториях и динамика их сохранности в свечевом препарате.51

2.5 Определение кинетики размножения исследуемых штаммов сальмонеллы в жидкой питательной среде.52

2.6 Возможность проведения санитарно-бактериологического контроля препаратов на основе штамма-носителя S. Enteritidis (Е-23).54

2.7. Исследование персистенции штаммов в организме лабораторных животных.64

2.8 Определение антител к НВс антигену в сыворотке мышей.70

2.9 Изучение взаимодействия штамма Salmonella Enteritidis Е-23 и его дериватов с культурой фагоцитов человека в системе in vitro.73

2.10 Исследование влияния НВс-антигена, экспрессируемого с эукариотического промотора на поведение вирулентного штамма

Salmonella Enteritidis 1791.77

Обсуждение.84

Выводы.89

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение биологических свойств рекомбинантных штаммов Salmonella Enteritidis, экспрессирующих НВс-антиген вируса В с эукариотического и прокариотического промоторов»

По данным ВОЗ число инфицированных вирусом гепатита В составляет 2000 миллиона человек, а число носителей - 350 млн. человек (в том числе 5 миллионов в России). Ежегодно в мире 1 миллион человек погибает от патологии связанной с развитием гепатита В [25].

Для профилактики гепатита В с 1986 года в календарь прививок введена рекомбинантная вакцина. Она состоит из HBs - антигена вируса гепатита В, главным образом S-белка, синтезированного генно-инженерным путем в дрожжевых клетках или культуре клеток яичников китайского хомячка (СНО), который после очистки сорбируется на гидрооксиде алюминия или фосфате алюминия, в качестве адъювантов [131, 133]. Вакцина создаёт защиту на 5 лет [31]. Однако, около 10-15% населения земли толерантны к её действию и не формируют в ответ на введение защитного иммунного ответа [38].

В 5-10% случаев острая форма гепатита В переходит в хроническую, осложнениями которой являются цирроз и первичный рак печени [117, 134]. Переход острой формы в хроническую связан с недостаточностью клеточного иммунного ответа, в стимуляции которого основная роль принадлежит НВс-антигену [10, 11, 50]. Это приводит к необходимости создания вакцины терапевтического действия. Использование рекомбинантной профилактической вакцины в терапевтических целях не принесло желаемого успеха [27, 37, 60, 113], особенно если учесть что основная роль в активации клеточного иммунного ответа при гепатите В принадлежит НВс-антигену.

Учитывая особенности биологии вируса гепатита В, вакцина на основе НВс-антигена может быть представлена только в виде вакцины нового поколения: ДНК или векторной. В обоих типах вакцины в качестве вектора, обеспечивающего доставку вакцины, может выступать аттенуированная Salmonella, так как при этом способе доставки вакцинного препарата возможно использование естественного пути иммунизации, что на много удешевит вакцинный препарат. Благодаря работам Schodel F. с соавторами [44, 109, 112] имеются значительные наработки в создании векторной вакцины на основе аттенуированных штаммов S. Typhimurium и S. Typhi. Однако не имеется данных о свойствах экспериментальной ДНК-вакцины, переносимой представителями рода Salmonella.

По этому целью нашего исследования явилось сравнительное изучение биологических свойств аттенуированных штаммов Salmonella Enteritidis (Е-23) и Salmonella Typhimurium (Т-10), а так же их гибридных вариантов, экспрессирующих НВс-антиген с прокариотического (векторная вакцина) и эукариотического (ДНК-вакцина) промоторов.

В задачи настоящего исследования входило:

1. Исследовать влияние гибридных плазмид, детерминирующих синтез НВс - антигена с прокариотичнского и эукариотического промотора на фенотипические свойства штаммов.

2. Исследовать возможность сохранения жизнеспособности изучаемых штаммов в процессе изготовления свечевой формы и её хранения до момента иммунизации.

3. Изучить персистенцию штаммов в организме экспериментальных животных после их ректальной иммунизации свечевой формой, содержащей изучаемые штаммы.

4. Изучить способность штаммов сальмонелл, экспрессирующих НВс-антиген с прокариотического и эукариотического промоторов, индуцировать выработку специфических антител против НВс-антигена, после ректальной иммунизации экспериментальных животных.

5. Изучить характер взаимодействия штаммов сальмонеллы, экспрессирующих НВс-антиген с прокариотического и эукариотического промоторов с культурой моноцитов человека в системе in vitro.

6. Исследовать возможность проведения санитарно-бактериологического контроля препаратов на основе аттенуированных мутантов Salmonella Typhimurium Т-10 и Salmonella Enteritidis Е-23.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Атгенуированный мутант Salmonella Enteritidis Е-23 и его гибридные варианты сохраняют жизнеспособность в процессе приготовления и хранения свечевой формы препарата, не изменяя при этом основных фенотипических характеристик.

2. Ректальная иммунизация мышей гибридными штаммами Salmonella Enteritidis Е-23 не вызывает длительной контаминации окружающей среды.

3. НВс-антиген ограничивает персистенцию Salmonella в лимфоидной ткани как в системе in vivo, так и в системе in vitro независимо от вирулентности Salmonella.

4. Препараты, содержащие гибридные штаммы на основе Salmonella Enteritidis Е-23 могут подвергаться санитарно бактериологическому контролю по схеме контроля нестерильных лекарственных средств

Научная новизна:

Впервые было показано, что штамм Salmonella Enteritidis, несущие плазмиду, экспрессирующую НВс-антиген с эукариотического промотора, имеют ограниченную персистенцию как в культуре моноцитов in vitro, так и в лимфоидной ткани in vivo независимо от вирулентности штамма.

Практическая значимость работы:

Дополненная схема санитарно - бактериологического контроля нестерильных лекарственных средств может быть использована разработчиками векторных и ДНК - вакцин на основе суа сгр мутантов сероваров S. enterica, и, в частности, используется в настоящее время в работе НПО "Вектор".

По теме диссертации опубликовано: 4 журнальных статьи 4 тезисов

Материалы диссертации были доложены: Материалы работы дважды докладывались на конференциях; 13 Европейский конгресс клинической иммунологии и инфекционных болезней. Глазго 2003.

I Международная конференция «Молекулярная медицина и биобезопасность». Москва 2004.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Донин, Михаил Васильевич

Выводы:

1. Атгенуированный мутант Salmonella Enteritidis Е-23 и его гибридные варианты сохраняют жизнеспособность в процессе технологии приготовления суппозиториев независимо от характера экспрессии ими НВс-антигена.

2. Атгенуированный мутант Salmonella Enteritidis Е-23 и все его плазмидосодержащие гибрдные варианты независимо от характера экспрессии ими НВс-антигена при введении мышам per rectum ограниченно персистируют в мезентериальных лимфатических узлах в течение 15 суток.

3. Гибридный штамм аттенуированного мутанта Salmonella Enteritidis Е-23, экспрессирующий НВс-антиген под контролем прокариотического промотора, при введении мышам per rectum персистирует в лимфоидной ткани паренхиматозных органов (селезёнки) на протяжении 42-х суток с максимальным накоплением в органе на 21-е сутки.

4. Гибридный штамм аттенуированного мутанта Salmonella Enteritidis Е-23, экспрессирующий НВс-антиген под контролем прокариотического промотора, при введении мышам per recrum стимулирует выработку специфических антиНВс-антител.

5. Персистенция гибридного штамма аттенуированного мутанта Salmonella Enteritidis Е-23, экспрессирующего НВс-антиген под контролем эукариотического промотора, после однократного ректального введения мышам ограничивалась региональными лимфатическими образованиями кишечника, при этом штамм не индуцировал выработку специфических анти НВс-антител.

6. НВс-антиген вируса гепатита В увеличивает бактерицидную активность фагоцитов и ограничивает размножение сальмонелл в лимфоидной ткани независимо от уровня их вирулентности.

7. Препараты, содержащие атгенуированный мутант Salmonella Enteritidis Е-23 и его гибридные плазмидосодержащие варианты, могут подвергаться санитарно-бактериологическому контролю по дополненной схеме контроля нестерильных лекарственных средств, равно как и любые суа сгр мутанты серотипов S. Enterica.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Донин, Михаил Васильевич, 0 год

1. Ашмарин И.П., Воробьёв А.А. /Статистические методы микробиологических исследований/. "Медицинское издательство", Ленинград 1962 г.

2. Акимкин В.Г. /Эффективность вакцинопрофилактики медицинского персонала крупного стационара против вирусного гепатита В (опыт 4-летнего наблюдения)/. Больница. 2001,5: 10- 11.

3. Баснакьян И. А., Бондаренко В.М., Мельникова В. А. и др. /Стрессориндуцибельные бактериальные белки и вирулентность./ Журн. микробиол. 2001, 5: 101 108.

4. Белявская В.А., Тимофеев И.В., Перминова Н.Г. и др. /Конструирование экспрессионного вектора для осуществления доставки in vivo рекомбинантных биологически активных белков./ Мол. генетика. 2000, 3: 17-21.

5. Бойченко М.Н., Воробьев А.А., Гусев В.В. и др. /Возможность использования суа сгр мутантов сальмонелл в качестве векторов рекомбинантной вакцины орального применения./ Вестн. РАМН. 1994, 4: 62-63.

6. Бойченко М.Н., Воробьев А.А. /Использование сальмонелл в качестве вектора при создании рекомбинантных вакцин./ Вестник РАМН, 1997, №3, с.43-46.

7. Бондаренко В.М. /Острова патогенности бактерий./ ЖМЭИ., 2001, №4, 67-74

8. Бондаренко В.М., Белявская В.А., Воробьев А.А. /Использование рекомбинантных штаммов сальмонелл для доставки в организм биологически активных молекул./ Журн. Микробиологии, 2002, №3, с.70-79

9. Бондаренко В.М. /Типы секреции и регуляция функциональной активности молекул, ассоциированных с патогенностью энтеробактерий./ ЖМЭИ, 2002, №5, 86-91

10. Борисова В.Н., Мельников В.А. /Отечественная вакцина против гепатита В./Вакцинация. 1999,4:10.

11. Борисова В.Н. /Отечественные иммунобиологические препараты для защиты от вирусного гепатита В./ Медицинская картотека. 2002,7-8: 1215.

12. Борисова В.Н., Николаева A.M., Фельдблюм И.В. /Бубо-Кок — новая отечественная комбинированная вакцина против дифтерии, столбняка, коклюша и полиомиелита./ Медицинская картотека. 2003, 7/8: 18—24.

13. Веремейко Т.А., Лебедев Л.Р., Зайцев Б.Н. и др. /Конструирование химерных частиц HBcAg, несущих эпитопы районов preS поверхностного белка вируса гепатита В./ Сибирский медицинский журнал. 2004 Т19, №2, с. 48-50.

14. Горбунов М.А., Павлова Л.И., Титов И.А. /Результаты полевых клинических испытаний против гепатита В H-B-Vax-П./ Materia medika: 1 — 6.

15. Государственная фармакопея. Выпуск 2, 11 издание, 1990 год.

16. Иенсен Г.-Л., Бурмейстер Ю. /Фракционирование суспензии лимфоцитов с помощью центрифугирования в градиенте плотности. /Иммунологические методы/ Под ред. X. Фримеля, М.: Мир. - 1979. -с. 367-372.

17. Медицинские лабораторные технологиии и диагностика: Справочник. Медицинские лабораторные технологии. Под редакцией профессора А. И. Карпшценко. С Пб: Интермедика, 2002. - 408 с.

18. Костинов М.П. /Вакцинация детей с нарушенным состоянием здоровья: Практическое руководство для врачей./ Медицина для всех, 2002.

19. Костинов М.П. /Вакцины нового поколения в профилактике инфекционных заболеваний./ М., Медицина для всех, 2002.

20. Миллер Д. /Эксперименты в молекулярной генетике./ Москва. "Мир" 1976 г.

21. Основы вакцинопрофилактики у детей с хронической патологией. М.П. Костинов (ред.). М., Медицина для всех, 2002.24. 20—летний опыт вакцинации от гепатита В. Медицинская картотека. 2002,7 — 8: 17 — 18

22. Онищенко Г.Г. /Контроль и ликвидация инфекционных заболеваний — стратегическое направление здравоохранения./ Журн. микробиол. 2002, 4: 3 — 16.

23. Онищенко Г.Г., Дементьева JLA. /Распространение вирусных гепатитов как угроза национальной безопасности/ Журн. Микробиологии, 2003, №4, с. 93-99

24. Павлова Л.И. и др. /Отечественная реком-бинантная вакцина против гепатита В (результаты контролируемых испытаний-1)./ Вопр. вирусол. 1996, 1:15 — 22.

25. Петровская В.Г., Маракуша Б.И., Бондаренко В.М. /Генетические принципы конструирования живых сальмонеллезных вакцин./ Вестн. РАМН. 1996,3:25-28.

26. Петровская В.Г., Маракуша Б.И., Бондаренко В.М. /Генетические принципы конструирования живых сальмонеллезных вакцин./ ЖМЭИ, 1996 г., №3, с. 25-28.

27. Рыжова С.А., Бойченко М.Н. /Исследование стабильности авирулентного фенотипа и способности ограниченной персистенции в организме мышей авирулентного мутанта S.enteritidis./ БэБиМ-1997-№10-с.429-431.

28. Соловьева И.Л., Кусельман А.И., Костинов М.П. и др. /Показатели клеточного звена иммунитета у подростков в поствакцинальном периоде после иммунизации вакциной против вирусного гепатита В./ Пермь, 2003.

29. Соловьёва И.Л., Кусельман А.И., Калманова В.П. и др. /Эффективность отечественных вакцин в профилактике вирусного гепатита В./ Журн. Микробиологии, 2005, №1, с. 100-105

30. Степанова JI.K., Белая Ю.А. /Поведение сальмонелл в культуре макрофагов в зависимости от наличия К и О-антигенов./ ЖМЭИ 1977, № 11, с. 116-121

31. Таточенко В.К. /Новый календарь вакцинопрофилактики России./ Журн. микробиол. 2002,4: 112- 116

32. Иммунопрофилактика. В.К. Таточенко, Н.А.Озерецковский (ред.). М., 2003.

33. Титов И.А. /Характеристика вакцин против вирусного гепатита В и их использование в календаре прививок./ Дисс. канд. мед. наук. М., 1998.

34. Фельдблюм И.В, Воробьева Н.Н., Николаева A.M. и др. /Оценка реактогенности и иммуногенности отечественной комбинированной вакцины Бубо-М при иммунизации взрослых против дифтерии, столбняка и вирусного гепатита В./ Журн. микробиол. 2001,5:27-30

35. Фельдблюм И.В., Воробьева Н.Н., Николаева А.М. и др. /Реакгогенность и имму-ногенность комбинированной вакцины Бубо-М при иммунизации детей против дифтерии, столбняка и вирусного гепатита В./ Журн. микробиол. 2001, 6: 50— 52

36. Шамшева О.В. /Особенности вакцинации детей с хроническими заболеваниями./ Автореф. дисс. док-pa мед. наук. М., 2001.

37. Ascon М.А., Hone D.M., Walters N. et al. /Oral immunization with a Salmonella vaccine vector expressing recombinant enterotoxigenic E.coli K99fimbriae elicits elevated antibody titers for protective immunity./ Infect. Immun. 1998, 66: 5470 5476.

38. Akbar S.L., M.Schechter, C.P.Zostroh et all /АгаС/XylS family members HilD and HilC directly activate virulence gene expression independly of HilA in S.Typhimurium/ Mol.Microbiol, 2003, v.47, p. 715-728

39. Bajaj V., Lucas R.L., Hwang С et all. /Coordinate regulation of S.typhimurium invasion genes by environmental and regulatory factors is mediated by control of hilA expression./ Mol. Microbiol. 1996,22, 703 714.

40. Bao J.X., Clements J.D. /Prior immunologic experience potentiates the subsequent antibody response when Salmonella strains are used as vaccine carriers./Infect. Immun. 1991, 59: 3841-3845

41. Bertoletti A., D'Elios M.M., Boni C. et all /Different cytokine profiles of intrahepatic T cells in chronic hepatitis В and hepatitis С virus infection/ Gastroenterology-1997, v.l2p. 193-199

42. Bo-jian Z., Woo P.C.Y., Mun-hon Ng et all /А crucial role of macrophages in the immune responses to oral DNA vaccination against hepatitis В virus in a mirine model/ Vaccine-2002, v.20, p. 140-147

43. Bumann D., C.Hueck, T.Aebischer et all /Recombinant live Salmonella spp. For human vaccination against heterologous pathogens/ FEMS Immunol and Med. Microbiology-2000, v.27, p.357-364

44. Chatfield S.N., Straban К., Pickard D. et all. /Evolution of S. Typhimurium strains harboring defined mutations in htrA and aroA in murine salmonellosis model./Microb. Pathology 1992, v. 12, p. 145-151

45. Chisari F.V. /Hepatitis В virus immunopathogenesis/ Annu Rev Immunol-1995, v.13, p. 29-60

46. Chisari F.V. /Perspectives series host/pathogen interaction/ J.Clin.Invest.-1997, v.99, p.1472-1477

47. Couilin I., Pol S., Mancini M. et all /Specific therapy in chronic hepatitis B: induction of the T-cell proliferation response specific for envelope antigen/ J. Infect. Dis.-1999, v.180, p.15-26

48. Corthesy Theulaz I.E., Hopkins S., Bachmann D. et all. /Mice are protected from H.pylori infection by nasal immunization with attenuated S.typhimurium phoP expressing urease A and В subunits./ Infect. Immun. 1998,66: 581 586

49. Curtiss R.IH, Celly S.M., Tinge S.A. et all. /Recombinant Salmonella vectors in vaccine development./ Dev. Biol. Stand. 1994, 82: 23 33

50. Dao-Zhen Xu, Ke-Zin Huang, Kai Zhao et all /Vaccination with recombinant HBs-ag-HbsIg complex in healthy adulds/ Vaccine-2005, v.23, p.2558-2564

51. Darji A., Guzman C.A., Gerstel B. et all. /Oral somatic transgene vaccination using attenuated S. typhimurium./ Cell Press, 1997, v. 91, № 12, p. 765-775

52. Daiji A., Zaje S., Garbe A.I. et all /Oral delivery of DNA vaccine using attenuated S.Typhimurium as carrier/ FEMS Immunology and Microbiology-2000, v.27, 341-349

53. Darwin K.H., V.L. Miller /Inv F is required for expression of genes encoding proteins secreted by the SPI-1 type HI secretion apparatus in Salmonella Typhimurim/ J.Bacteriol., 1999, v.181, p. 4949^1954

54. Darwin K.H.,V.L.Miller /The putative invasion protein chaperone SicA acts together with InvF to activate the expression of Salmonella typhimurium virulence genes/ MoLMicrobiol., 2000, v.35, p.949-959

55. Dikici В., Bosnak M., Ucmak H. et all /Failure of therapeutic vaccination using hepatitis В surface antigen vaccine in the immunotolerant phase of children with chronic hepatitis В infection/ Hepatology, 2003, v. 18, p. 218-222

56. Dunstan S.J., Simmons C.P., Strugnell R.A. /Comparison of the abilities of different attenuated Salmonella Typhimurium strains to elicit humoral immune responses against a heterologous antigen./ Infect and Immun. 1998, v. 66 (2), p. 732-740

57. Ehrbar K., Hapfelmeir S., Stecher B. et all /InvB is required for type independent secretion of SopA in Salmonella enterica s/v Typhimurium/ J.Bacteriol.2004,v. 186, n 4, p. 1215-1219

58. Eichelberg K., Galan J.E. /Differential regulation of Salmonella typhimurium type III secreted proteins by pathogenicity island 1 (SPI-1) encoded transcriptional activators InvF and HilA./ Infect. Immun. 1999, 67: 4099 -4105

59. Ellermeier C.D.,Slauch J.M/ RtsA coordinatory regulates DsbA and the Salmonella pathogenicity island I Type III secretion system/ J.Bacteriology, 2004, v 186, nl,p 68-79

60. Everest P., Griffiths P., Dougan G. Live Salmonella vaccine as a route towards oral immunizations. Biologicals. 1995,23: 119 124

61. Fairweather N.F., Chatfield S., Makoff A., et al. Oral vaccination of mice against tetanus by use of a live attenuated Salmonella carrier. Infect. Immun. 1990, 58: 1323-1326

62. Flo J., Tismunetzky S., Baralle F. /Oral transgene vaccination mediated by attenuated Salmonella is an effective method to prevent Herpes simplex virus-2 induced disease in mice./ Vaccine 2001, v. 19, p. 1772-1782

63. Floreani A., Baldo V., Cristofoletti M et all /Long-term persistence of anti-HBs after vaccination against HBV: an 18 year experience in health care workers/ Vaccine, 2004, у 22, p 607-610

64. Galen J.E., Nair J., Wang J.Y. et al. Optimization of plasmid maintenance in the attenuated live vector vaccine strain S. typhi CVD908htrA./ Infect. Immun. 1999, 67: 6424-6433

65. Galan J.E., Colmer /ТуреШ secretion machines: bacterial devices for protein delivery/ Science, 1999, v 284, p. 1322-1328.

66. Gathuru J.K., Koide F., Ragupathi G. et all /Identification of DHBcAg as a potent carrier protein comparable to KLH for augmenting MUCI antigenicity/ Vaccine-2005, v.23, p.4727-4733

67. Grishman E.A. /The pleceotropic two component regulatory system PhoP-PhoQ/ J.Bacteriol.2001, v.183, p. 1835-1842

68. GomezDuarte O.G., Lucas В., Yan Z.X., et all. /Protection of mice against gastric colonization by H.pylori by single oral dose immunization with attenuated S.typhimurium producing urease subunits A and В./ Vaccine. 1998, 16:460-471

69. Hardt N.D., H.Urlaub, J.Galan /А substrate of the centisome 63 type III protein secretion system of S.Typhimurium is encoded by a cryptic bacteriophage/ Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1998, v 95, 2574-2579

70. Hartmann G., Weiner G.J., Krieg A.M. /CpG DNA: a potent signal for growth, activation and maturation of human dendritic cells/ Proc. Nat. Acad. Sci. USA-1999, v.96, p. 9305-9310

71. Heineman T.C., Clements-Mann M.L., Poland G.A. et all /А randomized controlled study in adults of the immunogenisity of a novel hepatitis В vaccine containing MF59 adjuvant/ Vaccine-1999, v, 17, p.2769-2778

72. Hensel M. /Salmonella pathogenicity island 2/ Mol.Microbiol., 2000, v.36, p.1015-1023

73. Hernandez L.D.,Pypaert M.,R.A. Flarell et all /А Salmonella protein causes macrophage cell death by inducing autophagy/ J.Cell Biol., v.163, p. 1123— 1131

74. Hess J., Ladel C, Miko D. et all. /Salmonella typhimurium aroAinfection in genetargeted immunodeficient mice: major role of CD4, TCRa(3 cells and TFNy bacterial clearance independent of intracellular location./ J. Immunol, 1996, 156: 3321-3326

75. Hilleman M.R. /Yeast recombinant hepatitis В vaccine/ Infection 1987, v.15, p.2-6

76. Hilleman M.R. /Critical overview and outlook: pathogenesis, prevention, and treatment of hepatitis and hepatocarcinoma caused by hepatitis В virus/ Vaccine-2003, v.21, p.4626-4649

77. Hone D., Hackett J. /Vaccination against enteric bacterial diseases./ J. Infect. Dis. 1989, 11,853-877

78. Isolis R.M., Adams G.L., Ficht T.A. et all. /Contribution of S. typhimurium virulence factor to diarrhoeae disease in calves./ Infect. Immunity. 1999, 67, p. 4879-4885

79. Kane M.A. /Global status of hepatitis В immunization/ Lancet, 1996, v. 348, p.696

80. Karavolos M.N., M. Wilson, J. Henderson et all /Type III secretion of the Salmonella effector protein Sop EIS mediated via an N-terminal amioacid signal and not an m-RNA sequence/ XBacteriol., 2005,vl87, n 5 , pi559-1567

81. Karem K., Chatfield S., Kuklin N. et all. /Differential induction of carrier antigenspecific immunity by S.typhimurium live vaccine strains after singlemucosal or intravenous immunization of BALB/c mice./ Infect. Immun, 1995,63:4557-4563

82. Kennedy M.J., Yancey R.J., Sanchez M.S. et all. /Attenuation and immunogenicity of cya crp derivaties of S.choleraesuis in pigs./ Infect. Immun. 1999, 67:4628-4636

83. Kieny M.P., M.P.Girard /Human vaccine research and development/ Vaccine-2005, v.23, p.5705-5707

84. Krishnakumar R., M.Craig, J.A.Imlay /Difference in enzymatic properties allow SodCi but not Sod C2 to contribute to virulence in S.enterica serovar Typhimurium strain 14028/J.Bacteriol, 2004, v. 186, p. 5230-5238

85. Lemon S.M., Thomas D.L. /Vaccines to prevent viral hepatitis/ N. Engl. J. Med, 1997, v.336, p.196-204

86. Liu M.A. /DNA vaccine/ J. of Internal.Medicine-2003, v.253, p.402-410

87. March J.B., Clark J.R., Jepson C.D. /Genetic immunization against hepatitis В using whole bacteriophage lambda particles/ Vaccine-2004, v.22, p. 1666-1671

88. Medina E., Guzman C.A., Staendner L.H. et all. /Salmonella vaccine carrier strains: effective delivery system to trigger antitumor immunity by oral route./ Eur. J. Immunol. 1999,29: 1 8

89. Michel M-L, Pol S., Brechot C. et all /Immunotherapy of chronic hepatitis В by anti HBV vaccine from present to future/ Vaccine-2001, v.19, p/2395-2399

90. Morgan E., Campbell J.D., Rowe S.C. /Identification of host-specific colonization factors of S.enterica serovar Typhimurium/ Mol.Microbiol., 2004, v.54, p. 954-1010

91. Nashar Т.О., Webb H.M., Eaglestone S. et all. /Potent immunogenicity of the В subunits of E.coli heatlabile enterotoxinreceptorbinding is essential andinduces differential modulation of lymphocyte subsets./ PNAS. 1996, 93: 226 -230

92. O' Callaghan D., Maskell D., Liew F.Y. et all. /Characterization of aromatic and purinedependent Salmonella typhimurium: attenuation, persistence and ability to induce protective immunity in BALB/c mice./ Infect. Immun. 1988, 56:419-423

93. Orr N., Galen J.E., Levine M.M. /Expression and immunogenicity of a mutant diph toxin molecule CRM , and its fragments in S.typhi vaccine strain CVD908htrA./ Infect. Immun. 1999, 67: 4290 4292

94. Pisetsky D.S. /Immune activation by bacterial DNA : a new genetic code/ Immunity-1996, v.5, p.303-310

95. Rendi-Wagner P., Wildermann G., Stemberger et all /New vaccination strategies for low-and non-responders to hepatitis В vaccine/ Wien Klin.Wochenschr-2002, v.114, p.175-180

96. Roberts Lee K., Barr L.J., Fuller D.H. et all /Clinical safety and efficacy of powdered Hepatitis В nucleic acid vaccine delivered to the epidermis by a commercial prototype device/Vaccine-2005, v.23, p.4867-4878

97. Roman M., Martin-Orozco E., Goodman J.S. et all Лттшк^нпи^огу DNA sequences function as T helper-1-promoting adjuvants/Nat.Med.-1997, V.3, p. 849-854

98. Schodel F., Milich D.R., Will H. /Hepatitis В virus nucleocapsid/preSi fusion proteins expressed in attenuated Salmonella for oral vaccination/ J.Immunol.1990, v.145, p.4317-4321

99. Schodel F. /Prospects for oral vaccination using recombinant bacteria expressing viral epitopes./ Adv Virus Res. 1992, v.41, p. 409-446

100. Schodel F., Peterson D., Hughes J. et all /Avirulent Salmonella expressing hybrid hepatitis В viruas core/pre S for oral vaccination/ Vaccine, 1993v. 11, p. 143-148

101. Schodel F., Kelly S.M., Peterson D.L. et all /Hybrid hepatitis В virus core-preS-proteins synthesized in avirulent S.typhimurium and S.typhi for oral vaccination/ Infect.Immun./1994, v.62, p. 1669-1679

102. Senturk H., Tabak F., Akdogan M et all /Therapeutic vaccination in chrinic hepatitis В/ J. Gastroenterol/ Hepatol-2002/ v.17, p.72-76

103. Sigh M, O'Hagan D.T. /Reccent advances in vaccine adjuvants /Phharm.Res.-2002, v.19, p.175-28

104. Shea J.E., Beuzon C.R., Gleeson С et all. Influence of the Salmonella typhimurium pathogenicity island 2 type HI secretion system on bacterial growth in the mouse./ Infect. Immun. 1999, 67: 213 219

105. Splengers D., Janssen H.L.A, Kwekkeboom J. et all /In vivo immunization following virus suppression: a novel approach for inducing immune control in chronic hepatitis В/ J. of viral Hepatitis-2003, V.10, p.7-9

106. Staats H.F., Jackson R.J., Marinaro M. et all. /Mucosal immunity to infection with implication for vaccine development./ Curr. Opin. Immunol. 1994, 6: 572 -583.

107. Stabel T.J., Mayfield J.E., Morfitt D.C. et all. /Oral immunization of mice and pigs with an attenuated S.choleraesuis delta cya 12 delta (crpcdt) 19. mutant containing a recombinant plasmid./ Infect. Immun. 1993, 61: 610 614

108. Stocker B.A.D., Hoiseth S.K., Smith B.P. /Aromatic-dependent Salmonella spp. as live vaccines in mice and calves./ Dev. Biol. Stand. 1983, №53, p. 4754

109. Stocker B.A.D. /Auxotrophic Salmonella typhi as live vaccines./ Vaccine. 1988, 6: 141 145

110. Tacket CO., Sztein M.B., Losonsky G.A. et al. Safety of live oral S.typhi vaccine strains with deletions in htrA and aroC aroD and immune response in humans/. Infect. Immun. 1997, 65: 452-456.

111. Tijhaar J.E., ZhengXing Y. Construction and evaluation of an expression vector allowing the stable expression .of foreign antigens in a S.typhimurium vaccine strain./ Vaccine. 1994, 12:311 317.

112. Tsolis R.M., Adams G.L., Ficht T.A. et all. /Contribution of S.typhimurium virulence factors to diarrheal disease in calves./ Infect. Immun. 1999, 67: 4879 -4885

113. Turrez A. /The Salmonella membrane Protein IgaA modulates the activity RcsC-YojN-RcsB and PhoP-PhoQ regulons./ Garcia-delPontillo F. J.Bacteriol,2004,vl 86, пЗЗ, p 7481-7489

114. Valdura R.H., Falkow S. /Fluorescence-based isolation of bacterial genes expressed within host cell/ Science-1997, v.227, 2007-2011

115. Villareal R.B., Manser J., Collins R.A. et all. /Immune responses in calves immunised orally or subcutaneously with a live S.typhimurium aro vaccine./ Vaccine. 1998,16: 45 53

116. Vitiello A., Ishioka G., Grey H.M. et all /Development of lipopeptide-based therapeutic vaccine to treat chronic HBV infection/ Induction of a primery cytotoxic T lymphocyte response in human/ J.Clin.Invest.-1995, v.95, p.341-349

117. Vryheid R.E., Kane M.A., Muller N. et all /Infant and adolescent hepatitis В immunization up to 1999:a global overview/ Vaccine-2001, v. 19, p.1026-1037

118. WHO meeting Geneva. /Potential use of live viral and bacterial vectors for vaccines./ Vaccine, 1990, v.8, №5, p. 425-437

119. WHO Expanded programme on immunization. /Global advisory group. Part 1/ Wkly Epidemiol-1992, v.3, p.11-16

120. Woo P.C.Y., Wong Lei-po, Zheng Bo-jian et all /Unique imunogenicity of hepatitis В virus Dna vaccine presented by live-attenuated Salmonella typhimurium/ Vaccine-2001, v. 19, p.2945-2954

121. Zhang Barber L., Turner A.K., Dougan G. et all. /Protection of chickens against experimental fowl typhoid using a nuoG mutant of Salmonella serotype gallinarum./ Infect. Immun. 1999, 67: 899 903