Морфофункциональная оценка и отбор сперматозоидов в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Беляева Лидия Александровна

• Беляева Лидия Александровна
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Беляева Лидия Александровна

Введение

Глава 1. Обзор литературы

Современные представления о сперматогенезе и морфофункциональных

особенностях сперматозоидов человека и их селекции in vitro

Глава 1.1 Сперматогенез у человека /общие представления/. Морфофункциональный анализ эякулята человека, его роль в определении

оплодотворяющей способности эякулята

Глава 1.2 Оксидативный стресс и его влияние на сперматогенез

Глава 1.3 Гиперактивация сперматозоидов и ее роль в процессе

оплодотворения

Глава 1.4 Микрожидкостные системы в медицине. Возможности микрофлюидики

в селекции сперматозоидов

Глава 2.Материалы и методы исследования

2.1 Сбор и анализ эякулята

2.2 Ручной анализ эякулята

2.3 Автоматизированный анализ эякулята

2.4 Определение уровня оксидативного стресса

2.5 Определение уровня гиперактивации сперматозоидов после добавления кофеин

2.6 Селекция сперматозоидов методом центрифугирования в градиентах плотностей

2.7 Селекция сперматозоидов с помощью микрожидкостных чипов

2.8 Анализ эмбриологических и клинических показателей

2.9 Статистический анализ

Глава 3. Собственные данные

Глава 3.1 Ручной и автоматизированный анализ эякулята человека, сравнительная характеристика

Глава 3.2 Определение оксидативного стресса в эякуляте у пациентов и доноров

спермы

Глава 3.3 Определение уровня гиперактивации сперматозоидов и его

прогностическая ценность в выборе метода оплодотворения

Глава 3.4 Селекция сперматозоидов с помощью микрожидкостных чипов и ее

влияние на раннее преимплантационное развитие эмбрионов in vitro

Глава 4. Обсуждение полученных результатов и заключение

Заключение

Выводы

Практические рекомендации

Список сокращений

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Список литературы

Введение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональная оценка и отбор сперматозоидов в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ)»

Актуальность темы.

Изучение цитофизиологии гамет человека является актуальным направлением исследований клеточной биологии. Проблема бесплодия, связанная с морфологическими и функциональными нарушениями мужских половых клеток, имеет не только медицинское, но социально-демографическое и экономическое значение [Паскарь С.С., 2017; Епанчинцева Е.А., 2022; Камалов А.А., 2023]. Согласно современным исследованиям, «мужской» фактор занимает до 50% в структуре причин бесплодия [Лычагин А.С., 2017; Гамидов С.И., 2017; Лебедев Г.С., 2019; Рогозин Д.С., 2020].

Сперматогенез является сложным, крайне чувствительным к внешним и внутренним факторам, процессом клеточной пролиферации и дифференцировки, в регуляции которого участвуют различные системы организма [Bergmann, M., 2005; Larson, 2018]. Нарушения в каждом из звеньев, в конечном итоге отражаются на параметрах эякулята. Морфофункциональный анализ спермы (спермограмма), включающий сведения о количестве, подвижности и морфологии сперматозоидов в соответствии с рекомендациями ВОЗ, является в настоящее время одним из основных методов в определении возможности естественного зачатия [World Health Organization reference values for human semen char acteristics, 2010, 2021]. Однако, спермограмма, как единственный инструмент определения способности сперматозоидов данного конкретного образца к оплодотворению, как in vivo, так и in vitro, имеет весьма ограниченные возможности. Сегодня подсчета доли сперматозоидов, имеющих нормальную морфологию, в практической медицинской деятельности, явно недостаточно. Данные специальной литературы свидетельствуют о том, что зачатие и рождение собственных детей возможно и при снижении уровня морфологически нормальных форм сперматозоидов [Филоненко Т.Г., 2013]. В связи с чем идет активный поиск новых, альтернативных методов цитологической диагностики, цитохимии, микроскопии, компьютерной морфометрии и цифрового анализа

изображений, позволяющих оценить функциональные способности мужских половых клеток.

В практике абсолютного большинства лабораторий вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) выполнение спермограммы осуществляется традиционным, ручным, способом. В этом случае результаты, как правило, имеют субъективный характер, который определяется опытом, знаниями, загруженностью исследователя. В связи с чем возникает необходимость стандартизации метода и снижение влияния человеческого фактора. Использование автоматизированного подсчета разных категорий сперматозоидов представляется более объективным способом. Цифровой анализ изображений и траекторий движения сперматозоидов позволяет четко ранжировать категории мужских половых клеток в образце. Именно от этих данных и зависит принятия решения в клинической практике: насколько возможно естественное зачатие, какой именно метод оплодотворения необходим при реализации программы ВРТ, возможно ли использование собственного материала или необходим донорский. В связи с чем очевидна необходимость проведения сравнительного исследования данных, полученных при ручном и автоматизированном способах проведения спермограммы.

При оплодотворении сперматозоид выполняет функцию не только «доставки мужского генома», а также содержит важные для дальнейшего нормального развития эмбриона факторы, которые участвуют в процессах его развития. Но не только структура сперматозоида влияет на успех оплодотворения и рождение здорового ребенка. Цитофизиологические характеристики, такие как устойчивость к оксидативному стрессу, способность к гиперактивации оказывают серьезное влияние не только на процесс оплодотворения, но и на преимплантационное развитие человека.

Для оценки функциональных характеристик сперматозоидов и их селекции мы использовали наиболее актуальные на сегодняшний день методы исследования в области спермиологии.

Возникновение оксидативного стресса - следствие дисбаланса между активными формами кислорода (АФК) и антиоксидантами в организме, что приводит к повреждению половых клеток, и, как следствие, влияет на фертильность мужчины. Согласно Рекомендациям Всемирной Организации Здравоохранения (WHO-2010, 2021), Европейской ассоциации репродукции человека и эмбриологии (ESHRE-2016) и Европейской урологической ассоциации (ЕАи-2017) определение АФК входит в перечень рекомендуемых методов обследования при мужском бесплодии и нарушениях развития беременности. Однако, в нашей стране этот метод не получил широкого распространения из-за отсутствия валидных методик. В данной работе мы предлагаем для определения уровня оксидативного стресса (уровня АФК) в сперме качественный метод, легко воспроизводимый на практике, а также демонстрируем его корреляцию с концентрацией активно-подвижных форм.

Одним из современных функциональных тестов, определяющих способность сперматозоидов к оплодотворению, является определение уровня гиперактивированных сперматозоидов. У таких гамет выше скорость, интенсивность, амплитуда жгутиковых биений, средняя ширина движений (латеральное биение головки). Низкая подвижность может быть вызвана множеством факторов, включая аномалии в сперматогенезе, оксидативное повреждение, истощение внутриклеточной АТФ и др. Гиперактивация сперматозоидов имеет решающее значение для оплодотворения, поскольку она необходима для проникновения в блестящую оболочку ооцита и является одной из составляющих последовательных непрерывных физиологических процессов, происходящих в сперматозоиде с целью достижения им оплодотворяющей способности. В настоящее время в эмбриологических лабораториях данный тест имеет ограниченное применение в силу отсутствия его в номенклатуре медицинских услуг. Тем не менее, прогностическое определение уровня гиперактивации сперматозоидов может стать одним из критериев для выбора метода оплодотворения и позволит снизить риски на его отсутствие или низкие

показатели в ходе эмбриологического этапа программ ВРТ [Suarez, S.S., 1992; Armon L., Ho H.C., 2003; 2011].

Стандартным способом обработки эякулята в программах ВРТ является центрифугирование, которое может привести к фрагментации ДНК в сперматозоидах [Cho, CL., 2018; Епанчинцева Е.А., 2020]. При наличии уже имеющегося повышенного уровня фрагментации ДНК в сперме у пациентов с бесплодием такой способ обработки еще более негативно влияет на цитофизиологические характеристики мужских половых клеток. Этот важный аспект при работе с гаметами требует использования наиболее физиологичных («бережных») методов отбора.

Микрофлюидика — это область фундаментальной науки, в рамках которой изучают поведение жидкостей в каналах толщиной порядка микрон [S. Xiao, 2017; Y-J Ko, 2018]. Использование микрофлюидных устройств позволяет отбирать подвижные и цитофизиологически наиболее компетентные сперматозоиды без центрифугирования. Это абсолютно новый метод селекции сперматозоидов, который недавно появился в лабораториях некоторых стран - США, Канады, Турции. В России данное исследование, по разрешению локального этического комитета, проведено впервые. Сортировка с использованием микрожидкостных чипов позволяет избежать оксидативного стресса и повреждения ДНК сперматозоидов. Более того, по данным некоторых специалистов, компетенции к имплантации у эмбрионов, полученных in vitro при отборе с помощью микрофлюидных технологий, выше, по сравнению с эмбрионами, которые образовались при оплодотворении сперматозоидами, выделенными стандартными методами [M.M. Quinn, 2018; Ozcan, 2021, F. Anbari, 2021].

Таким образом, всестороннее изучение дискуссионных вопросов в отношении цитохимических и физиологических характеристик мужских половых клеток, новых методов цифрового анализа изображений и селекции на основе микрофлюидных устройств является крайне актуальным и востребованным для фундаментальной и практической медицины.

Цель исследования - определить цитофизиологические характеристики сперматозоидов in vitro и оценить эффективность различных способов их отбора в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).

Задачи исследования

1. Сравнить данные, полученные при ручном и автоматизированном способах оценки эякулята;

2. Определить уровни АФК в сперме и провести сравнительный анализ их показателей у пациентов, обратившихся в клинику лечения бесплодия и доноров спермы;

3. Выявить прогностическую ценность гиперактивации сперматозоидов для определения тактики оплодотворения и вероятности наступления клинической беременности;

4. Проанализировать возможность функциональной селекции сперматозоидов с использованием микрожидкостных чипов;

5. Оценить основные показатели эмбриологического этапа программ ВРТ при использовании различных методов селекции сперматозоидов.

Научная новизна

Впервые изучены цитохимические и физиологические аспекты организации сперматозоидов человека и их селекции in vitro у пациентов, обратившихся в клинику лечения бесплодия. Доказано, что применение цифрового анализа траектории движения сперматозоидов обеспечивает более точную и объективную оценку сперматозоидов, особенно категорий А и С в анализируемом образце, по сравнению с ручным способом оценки. Это позволяет определить возможность самостоятельного зачатия или выбрать оптимальный метод оплодотворения, а также прогнозировать возможность использования собственного материала для его проведения.

Новыми являются данные по определению уровня оксидативного стресса и его корреляция между концентрацией прогрессивно -подвижных сперматозоидов.

Впервые установлено, что степень гиперактивации сперматозоидов является

прогностическим маркером для выбора метода оплодотворения, позволяя нивелировать риск отсутствия и/или низкого показателя оплодотворения. Данный показатель коррелирует с вероятностью наступления беременности в группе пациентов, где было проведено оплодотворение методом ЭКО.

Абсолютно новыми следует признать данные эмбриологических показателей, полученные при селекции сперматозоидов с использованием микрожидкостных чипов и отражающие развитие сформированных эмбрионов in vitro. Данный способ отбора является инновационным, максимально «щадящим» для мужских половых клеток. Впервые представлены результаты его применения в практике эмбриологических лабораторий.

Практическая и теоретическая значимость

Полученные в работе сведения существенно расширяют имеющиеся представления о цитофизиологии сперматозоидов.

Обнаруженные преимущества автоматизированной оценки сперматозоидов (особенно категорий А и С) принципиально важны, поскольку решение вопросов о методе оплодотворения и использовании донорского материала являются критичными не только для получения эмбрионов in vitro, но и важны для пациентов с этической точки зрения.

Стандартные методы оценки фертильности пациентов могут быть дополнены за счет методик определения уровня АФК, гиперактивации сперматозоидов. Выявленные прогностические особенности гиперактивации и оксидативного стресса, простота и доступность методов их оценки должны быть приняты в рутинную практику эмбриологических лабораторий для принятия решения о тактике ведения пациентов на эмбриологическом этапе. Использование нового подхода к селекции сперматозоидов - применение микрожидкостных чипов - позволяет выделить наиболее компетентные гаметы для проведения оплодотворения, сохранив их функциональные возможности.

Таким образом, система оценки цитофизиологических характеристик сперматозоидов, физиологический отбор с помощью микрожидкостных чипов

позволяет осуществлять их качественную селекцию для последующего использования лечения бесплодия в циклах ВРТ. Прогнозируя способ оплодотворения, специалисты способны максимально персонализировать подход к каждому пациенту, сократив время до наступления желанной беременности и рождения здорового ребенка.

Методология и методы исследования

Методология работы заключается в системном подходе и комплексном анализе результатов исследования сперматозоидов человека с последующим выполнением статистического анализа полученных данных. В рамках данной научной работы был проведен анализ российских и зарубежных исследований по теме. В соответствии с полученными данными была разработана концепция, цель и задачи исследования. При использовании в нашем исследовании сперматозоидов человека соблюдались все международные, правовые и этические нормы [ст. 18 Конвенции Совета Европы о защите прав человека и достоинства человеческого существа при использовании достижений биологии и медицины, 1997]. Проведение клинического исследования одобрено Комитетом по биоэтике при ФГБОУ ВО «Самарском государственном медицинском университете» (выписка из протокола N116 от 3 октября 2020 года).

Степень достоверности и апробация работы

Достоверность результатов обеспечивается последовательным и логичным изложением задач исследования и их решением, использованием комплекса современных морфологических методов, достаточным объемом данных для каждой модели исследования, адекватным применением статистического анализа, критической оценкой полученных результатов при сравнении с данными современной литературы.

Основные положения работы доложены на научных конференциях: Межвузовская научно-практическая конференция с международным участием Самарского государственного медицинского университета «Синтез наук как основа развития медицинских знаний» (Самара), 2020г., Межвузовская научно -

практическая конференция с международным участием Самарского государственного медицинского университета «Синтез наук как основа развития медицинских знаний» (Самара), 2021г., Всероссийской научно-практической конференции с международным участием Аспирантские чтения -2021, Всероссийской научно-практической конференции с международным участием Аспирантские чтения -2022, Всероссийской научно-практической конференции с международным участием Аспирантские чтения -2023.

В 2021 году результаты полученных исследований были представлены в качестве печатных тезисов в материалах XXXI Ежегодной Международной конференции РАРЧ «Репродуктивные технологии сегодня и завтра», Межвузовского международного конгресса «Высшая школа: научные исследования»; в 2022г. в материалах научно -практической конференциии «Репродуктивный потенциал Узбекистана: динамика, проблемы и консолидация действий» научного издания «Новый день в медицине», Хива, в материалах XXXII Ежегодной Международной конференции РАРЧ «Репродуктивные технологии сегодня и завтра», Казань.

Личное участие автора заключалось в сборе информации, планировании исследования, проведении исследования, обработке статистических данных, их анализе и кампиляции, формировании выводов, подготовке публикаций, научных статей и написании диссертационного исследования.

Связь работы с научными программами

Диссертационная работа выполнена в рамках программы стратегического академического лидерства ПРИОРИТЕТ-2030 ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет МЗ РФ.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедрах гистологии и эмбриологии, репродуктивной медицины, клинической эмбриологии и генетики, акушерства и гинекологии ФГБОУ ВО «Самарским государственный медицинским университет» Министерства здравоохранения Россиискои

Федерации.

Также результаты исследования внедрены и используются в практической работе эмбриологических лабораторий АО «Медицинская компания ИДК». На основании нашего исследования были составлены и стандартизированы протоколы процедур, применяемых в работе с эякулятом и сперматозоидами человека для их использования в рамках программ ВРТ при лечении бесплодия.

Положения, выносимые на защиту:

1. Комплексная автоматизированная оценка различных категорий сперматозоидов в эякуляте, их цитофизиологическая характеристика, основанная на определении уровня активных форм кислорода в сперме и способности к гиперактивации, позволяют высокоэффективно прогнозировать оплодотворяющую способность мужских гамет

2. Физиологическая селекция, основанная на микрофлюидном принципе сортировки, позволяет отобрать компетентные гаметы для проведения оплодотворения в программах вспомогательных репродуктивных технологий без потенциально неблагоприятного влияния центрифугирования

Публикации

Материалы диссертации нашли отражение в 19 печатных работах, из них 4 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК, материалы и тезисы российский конференций с международным участием.

Объем и структура диссертации

Работа изложена в традиционной форме. Состоит из оглавления, списка принятых сокращений, введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа представлена на 126 страницах, иллюстрирована 35 рисунками, 11 таблицами. Библиографический указатель включает 149 источников.

Глава 1. Обзор литературы

Современные представления о сперматогенезе и

морфофункциональных особенностях сперматозоидов человека и их селекции in vitro

Глава 1.1 Сперматогенез у человека /общие представления/. Морфофункциональный анализ эякулята человека, его роль в определении оплодотворяющей способности эякулята

Сперматогенез — сложный физиологический процесс образования зрелых мужских половых клеток путем редукционного деления и метаморфоза клеток -предшественниц — сперматогоний, протекающий в семенных извитых канальцах яичка [FF. Neto, 2016]. Он протекает под контролем специфических генов развивающихся гамет и регулируется совокупностью гормонов, цитокинов и факторов роста. В сутки у половозрелого мужчины в яичке образуется около 100 -200 млн спермиев. В то же время в эякулят поступает меньшее количество спермиев, чем то, что начально образуется в семенных канальцах яичка, вследствие их частичной гибели в самом яичке и в семявыносящих путях. Так происходит дозревание и накопление сперматозоидов [Richer, G, 2020]. В сперматогенезе выделяют 4 стадии [Bergmann, 2005]: размножение, рост, созревание и формирование.

Стадия размножения происходит путем митотического деления исходных стволовых клеток (сперматогониев) с образованием последующих клеточных типов герминативных клеток. Сперматогонии составляют всего 0,03 % клеток сперматогенного ряда. Морфологически различают два типа сперматогониев: А и В. В свою очередь сперматогонии типа А различаются по степени конденсации хроматина на темные (конденсированный хроматин) и светлые (диффузный хроматин) клетки [Bergmann, 2005; Kanatsu-Shinohara, 2013]. Темные сперматогонии представляют собой резервные стволовые клетки и в обычных условиях не проявляют пролиферативной активности. В процессе сперматогенеза делятся только светлые сперматогонии, которые являются полустволовыми

клетками и способны давать начало сперматогониям типа В, которые, в свою очередь, проходят несколько митотических делений, дифференцируясь в сперматоциты I порядка.

Стадия роста заключается в увеличении в размерах сперматоцитов I порядка в порядке прохождения ими интерфазы мейоза. Стадия созревания включает два последовательных деления мейоза. После первого деления (редукционного) из сперматоцита I порядка образуются два сперматоцита II порядка. Профаза I мейоза занимает достаточно много времени, поэтому первичный сперматоцит - самый долгоживущий. Вторичные сперматоциты живут недолго (в среднем 1,1-1,7 дня), они входят во второе деление мейоза (эквационное), образуя сперматиды. Сперматоциты II порядка вдвое, а сперматиды вчетверо меньше по объему сперматоцитов I порядка. В сперматогониях и сперматоцитах I порядка диплоидный набор хромосом (2п=46), в сперматидах число хромосом гаплоидное (п=23).

Стадия формирования характеризуется преобразованием сперматид в сперматозоиды. На этой стадии происходит конденсация хроматина, который становится генетически инертным, а также перемещение органелл клетки. Аппарат Гольджи смещается к ядру и образует акросому, меняется химический состав плазматической мембраны. После смещения на апикальный конец клетки, центриоли перемещаются на противоположный полюс и располагаются одна ближе к ядру, а другая - дистальнее. Проксимальная центриоль будет участвовать в формировании веретена первого деления в ходе дробления зиготы, а из дистальной начинает образовываться жгутик, внутри которого формируется аксонема. Вокруг основания жгутика в виде спиралей располагаются митохондрии.

Выходу сперматозоида в просвет канальца способствуют клетки Сертоли. Они способны совершать клеточные движения по мере продвижения сперматид к просвету канальца. Происходящие от одних и тех же сперматогониев сперматиды остаются соединенными мостиками, которые облегчают транспорт

цитоплазматических продуктов. После разрушения межклеточных мостиков зрелые сперматиды отсоединяются от сперматогенного эпителия и становятся свободными клетками, называемыми сперматозоидами. В процессе высвобождения в сперматозоиде могут оставаться фрагменты цитоплазмы клеток Сертоли, именуемые цитоплазматическими каплями. Обнаружение таких капель в гаметах, содержащихся в сперме, свидетельствует об их незрелости [F. Neto, 2016]. Сперматозоиды последовательно проходят по прямым семенным канальцам, сети яичка и через выносящие канальцы поступают в головку придатка яичка, где большая часть жидкости, в которой транспортировались сперматозоиды, всасывается, повышая их концентрацию в 10-100 раз. Эпителий придатка секретирует жидкость, в которой сперматозоиды находятся во взвешенном состоянии. По мере того, как вновь образованные сперматозоиды проходят через отделы придатка яичка (тело и хвост) они подвергаются модификациям, в том числе изменениям поверхностного заряда, состава мембранных белков, иммунореактивности, содержания фосфолипидов и жирных кислот, активности аденилатциклазы и др. Весь сперматогенез занимает примерно 64-72 дня [Bergmann, 2005].

В строении зрелой мужской половой клетки выделяют головку, шейку и хвост, длина его около 50-60 мкм. Головка сперматозоида овальной формы, в ней располагается ядро, окруженное тонким слоем протоплазмы (рис. 1). В шейке находится видоизмененная центросома, которая после оплодотворения будет играть важную роль в дроблении зиготы. Характерные параметры нормального сперматозоида: овальная головка длиной 4-6 мкм и шириной 2-4 мкм, акросома занимает 40-60 % головки, отсутствие дефектов шейки и хвоста, цитоплазматическая капля не должна превышать по размеру головку.

Рисунок 1. Продольный срез через головку нормального сперматозоида. В ядре электронно-плотный конденсированный хроматин (Х), акросома (А) покрывает 2/3 ядра [Брагина Елизавета Ефимовна, Бочарова Е.Н. Количественное электронно-микроскопическое исследование сперматозоидов при диагностике мужского бесплодия // Андрология и генитальная хирургия. 2014. №1. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/kolichestvennoe-elektronno-mikroskopicheskoe-issledovanie-spermatozoidov-pri-diagnostike-muzhskogo-besplodiya.

Хвост представлен протоплазмой и наделен локомоторными функциями, прежде всего он обеспечивает передвижение со скоростью около 2-3 мм/мин (рис. 2). В основном, подвижность сперматозоидов зависит от нормального развития аксонемных структур. Отсутствующие части жгутиковых структур (например, динеиновые рукава аксонемы) приводят к неподвижности. В хвосте придатка и семявыносящих протоках спематозоиды приобретают способность к движению. Так же на их поверхности сорбируются гликопротеиды (синтезируемые придатками и семенными пузырьками), которые учувствуют в связывании сперматозоида и яйцеклетки.

Рисунок 2. Структура нормального жгутика сперматозоида: а - схема строения аксонемы (9+2); б - поперечный срез через средний отдел жгутика. Аксонема (А) окружена 9 наружными плотными фибриллами (П) и митохондриями (М); в - поперечный срез жгутика через основной отдел жгутика. Аксонема окружена фиброзной оболочкой (Ф); г - продольный срез через переходную зону между средним и основным отделами жгутика. [Лекции по общей эмбриологии человека / И.В. Мильто [и др.]: учебное пособие. - Томск: Изд-во СибГМУ, 2019. - 112 с.]

Межканальцевый компартмент яичка человека содержит микроциркуляторную сеть, эндокринные клетки Лейдига, нервные волокна, макрофаги, фибробласты, другие клетки соединительной ткани (тучные клетки), частично разделяющие это пространство, и лимфатические сосуды. Микроциркуляторная сеть обеспечивает доступ к семенным канальцам и клеткам Лейдига, обеспечивая распределение эндокринных и паракринных веществ.

Как известно, клетки Лейдинга выделяют тестотерон и небольшое количество эстрогенов. Так же они вырабатывают b-эндорфин, небольшие количества окситоцина (стимулирующего сокращения перитубулярных миоидных клеток извитых семенных канальцев), а также интерлейкин 1, действующий как фактор роста на сперматогонии типа В. Одна из функций тестостерона заключается в репрессии генов апоптоза в половых клетках, что позволяет сформировать и сохранить полноценное количество зрелых сперматозоидов.

С развитием новых технологий (например, секвенирования одноцепочечной РНК) идентифицируется все больше регуляторных генов, связанных с процессом сперматогенеза. Генетический контроль лежит в основе развития нормального и аномального сперматогенеза, в частности, пролиферации, дифференцировки и апоптоза сперматогониальных стволовых клеток грызунов и человека [Novel, 2021].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Беляева Лидия Александровна, 2025 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Антиспермальные антитела при мужском бесплодии, связь с абдомина льным ожирением / Е.А. Епанчинцева [и др.] // Успехи современного естествознания. - 2015. № 4. С. 24-27.

2. Бердыш, Д.С. Влияние физических факторов на подвижность сперматозоидов человека / Д.С Бердыш, Р.К. Мирзоева // Международный студенческий научный вестник. - 2018. - № 4-3. [электронный ресурс] // https: //eduherald.ru/ru/article/view?id=18850

3. Божедомов, В.А. Иммунологические причины бездетного брака / В.А Божедомов, И.И. Гузов, О.В. Теодорович // Проблемы репродукции. -2016. - № 6. - С. 57-62.

4. Брюханов, А.Л. Каталаза и супероксиддисмутаза: распространение, свойства и физиологическая роль в клетках строгих анаэробов / А.Л. Брюханов, А.И. Нетрусов // Биохимия. - 2004. - Т. 69, № 9. - С. 1170-1186.

5. Быкова, М.В. Нарушение редокс-баланса сперматозоидов и семенной плазмы мужчин при патоспермии: автореф. дис. ... канд. биол. наук / М.В. Быкова. - Красноярск, 2008. - 24 с.

6. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, О.А. Азисова, А.И. Деев // Итоги науки и техники. - 1991. - № 29. - C. 243-249.

7. Возрастные особенности антропометрических и биохимических характеристик мужчин из бесплодных пар / Е.А. Епанчинцева, С.В. Янковская, С.Г. Селятицкая // Сибирский научный медицинский журнал. -2022. - Т. 42, № 1. - С. 62-71.

8. Гидрофильные и липофильные нутриенты при лечении мужского иди опатического бесплодия: рандомизированное сравнительное открытое много центровое проспективное контролируемое исследование / В.А. Божедомов [и др.] // Urology. - 2021. - № 1. - № 70-78.

9. Гормональная характеристика андрогенного статуса у мужчин разных возрастных групп / Селятицкая В.Г., [и др.] // Успехи геронтологии. -

2019.- Т.32, № 5. - С. 737-742.

10. Диагностика мужского бесплодия / Е.А. Епанчинцева [и др.]. -Новосибирск: 2022. - 35с.

11. Доценко, А.А. Патофизиологические и возрастные механизмы морфо-функциональных изменений сперматозоидов при бесплодии: автореф. дис. ... канд. мед. наук: Доценко А. А. - СПб, 2021. - 26 с.

12. Епанчинцева, Е.А. Индекс фрагментации ДНК сперматозоидов -необходимость для современной клинической практики / Е.А. Епанчинцева,

B.Г. Селятицкая, В.А. Божедомов // Андрология и генитальная хирургия. -

2020. - Т. 21, № 1. - С. 14-21.

13. Епанчинцева, Е.А. Параметры эякулята у пациентов с абдоминальным ожирением / Е.А. Епанчинцева, В.Г. Селятицкая, Ю.И. Шеина // Андрология и генитальная хирургия. - 2015. - №Т. 16, № 1. - С. 88-93.

14. Епанчинцева, Е.А., Янковская

C.В. Комплексный анализ эякулята мужчин из бесплодных пар в возрастном аспекте / Е.А. Епанчинцева, В.Г. Селятицкая // Андрология и генитальная хирургия. - 2021. - Т. 22, № 3. С. 56-69.

15. Зайцев, В.Г. Модельные системы перекисного окисления липидов и их применение для оценки антиоксидантного действия лекарственных препаратов / В.Г. Зайцев // Вестник Волгоградской мед. академии. - 1998. -№ 4. - С. 49-53.

16. Зинчук, В.В. Роль кислородсвязывающих свойств крови в развитии окислительного стресса, индуцированного липополисахаридом / В.В. Зинчук, Е.В. Шульга, А.Н. Глебов // Гродно: ГрГМУ, 2011. - 216 с.

17. Иванова, О.В. Морфологическая оценка функциональной способности гамет и эмбрионов человека после криоконсервации:

автореферат дис. ... кандидата мед. наук / Иванова О.В. - Самара, 2020. - 31 с.

18. Иммунологические факторы бесплодия и антигены сперматозоидов / Д.А. Охоботов [и др.] // Мед. науки. - 2007. - №4. - С. 31-42.

19. Камалов, А.А. Образ жизни современного человека как фактор риска развития урологических заболеваний: от профилактики к лечению / А.А. Камалов, О.Ю. Нестеров // Экспериментальная и клиническая урология. -2023. - Т. 16, № 4. - С. 68-78.

20. Количественные и качественные нарушения в спермограмме и дополн ительных анализах эякулята у мужчин из бесплодных пар / Е.А. Епанчинцева [и др.] Проблемы репродукции. - 2017. - № 23. С. 90-96.

21. Корсак, В.С. Регистр ВРТ Общероссийской общественной организации «Российская Ассоциация Репродукции Человека». Отчет за 2020 год / В.С. Корсак, А.А. Смирнова, О.В. Шурыгина // Проблемы репродукции. - 2022. - Т. 28, № 6. С.12-27.

22. Кулинский, В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита / В.И. Кулинский // Соросовский общеобразовательный журнал. - 1999. - № 1. - С. 2-7.

23. Курило, Л.Ф. Система тестирования факторов, повреждающих женские и мужские гаметы и гонады / Л.Ф. Курило // Гигиена и санитария. -2011. - № 5. - С. 72-78.

24. Леонтьева, О.А. Сравнительный анализ морфологии сперматозоидов человека: нативный эякулят — прогрессивно подвижная фракция / О.А. Леонтьева, О.А. Воробьева // Проблемы репродукции. - 1999. - № 3. - С. 2936.

25. Лычагин, А.С. Невынашивание беременности: вклад мужского фактора и возможности его преодоления / А.С. Лычагин, О.Ю. Малинина // Проблемы репродукции. - 2017. - Т. 23, № 5. - С. 106-114.

26. Макарова, Н.П. Морфологические и молекулярно-биологические особенности постовуляторных ооцитов и их роль в преимпла нтационном развитии эмбрионов человека : автореф. дис. ... доктора биол. наук / Макарова Н.П. - М., 2019. - 40 с.

27. Морфологическая характеристика биоптатов яичка при бесплодии / Е.А. Дубова [и др.] // Архив патологии. - 2012. - № 6. - С. 8-10.

28. Морфология сперматогенеза при обструктивной азооспермии / Т.Г. Филоненко [и др.] // Таврический медико -биологический вестник. - 2013. -Т. 16, № 1, ч.3 (61). - С. 225-228.

29. Мужское бесплодие в Российской Федерации: статистические данные за 2000-2018 годы. / Лебедев Г.С., Голубев Н.А., Шадеркин И.А., Шадеркина В.А.,Аполихин О.И.,СивковА.В.,Комарова В.А.// Экспериментальная и клиническая урология 2019 - (4):4-12

30. Мужское бесплодие и нарушение структурной организации хроматина сперматозоидов. Существует ли связь? / О.А. Воробьева [и др.] // Проблемы репродукции. - 2005. - Т. 11, № 6. - С. 56-62.

31. Назаренко, Р.В. Методы селекции сперматозоидов для процедуры интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в программах экстракорпорального оплодотворения (обзор литературы) / Р.В. Назаренко, В.М. Здановский // Проблемы репродукции. - 2019. - Т. 25, № 5. - С. 83-89.

32. «О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению» (документ не вступил в силу): приказ Министерства здравоохранения РФ от 31 июля 2020 г. № 803н. [электронный ресурс] // Консультант Плюс - режим доступа: http://www.pravo.gov.ru/ (дата обращения 29.03.2923г.).

33. «Об утверждении Требований к организации и проведению внутреннего контроля качества и безопасности медицинской деятельности»: приказ Министерства здравоохранения РФ от 31 июля 2020 г. № 785н /

[электронный ресурс] https://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/74610282/ (дата обращения 03.03.2024г.).

34. Параметры спермограммы и генетические аномалии / Е.А. Епанчинцева [и др.] // Journal of Siberian Medical Sciences. - 2021. № 2. - С. 104-113.

35. Паскарь, С.С. Эпидемиологические аспекты бесплодного брака (обзор литературы) / С.С. Паскарь, К.Ю. Боярский // Проблемы репродукции. -2017. - Т. 23, № 5. - С.23-26.

36. Пичугова, С.В. Ультраструктура сперматозоидов у подростков с варикоцеле / С.В Пичугова // Экспериментальная и клиническая урология. -2022. - Т.15, № 2. - С. 167-175.

37. Прогнозирование эффективности эмбриологического этапа вспомогательных репродуктивных технологий по микробному составу эякулята / Е. А. Паначева [и др.] // Вестник РГМУ. - 2023. -№2. - С. 13-19.

38. Рогозин, Д.С. Мужская фертильность: обзор литературы апреля — июня 2020 года / Д.С. Рогозин // Вестник урологии. - 2020. - Т. 8, № 3. - С. 111-119.

39. Роль мужского фактора бесплодия в программе вспомогательных репродуктивных технологий (обзор литературы) / С.И. Гамидов [и др.] // Андрология и генитальная хирургия. - 2017. - T. 18, № 3. - С. 28-36.

40. Роль инфекционно-

воспалительных процессов в формировании мужского бесплодия / Е.А. Епанчинцева [и др.] // Pharmateca. - 2021. - № 6. - С. 58-63.

41. Сатаева, Т.П. Жизненный цикл сперматозоида. Норма и нарушения / Т.П. Сатаева, А.В. Ковальчук, С.А. Кутя // Крымский журнал экспериментальной и клинической медицины. - 2018. - Т. 8, № 1. - С. 113122.

42. Сизоненко, М.Л. Проблема мужского бесплодия: возможные пути решения (обзор литературы) / М.Л., Сизоненко, Г.В. Брюхин, М.А. Шереметьева // Проблемы репродукции. - 2019. - Т. 25, № 2. - С. 9092.

43. Скулачев, В.П. Кислород в живой клетке: добро или зло? / В.П. Скулачев // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колонопроктологии. - 1999. - № 1. - С. 12-18.

44. Современные представления о механизмах стрессобусловленных изменениях активности сперматогенеза / Т.А. Золотарёва [и др.] // СМБ. -2011. - №4. [Электронный ресурс] https: // cyberleninka.ru/article/n/sovremennye-predstavleniya-o-mehanizmah-stressobuslovlennyh-izmeneniyah-aktivnosti-spermatogeneza

45. Сухих, Г.Т. Мужское Бесплодие. Этиология, патогенез и классификация нарушений репродуктивной функции мужчин / Г.Т. Сухих, В.А. Божедомов. - М.: Эксмо, 2009. - 240 с.Титова, А.А. Морфологические изменения скелетных мышц в условиях экспериментальн ой ишемии и индуцированного ангиогенеза диссертация ... кандидата мед. .. наук: Титова А.А. - Казань, 2023. - 131 с.

46. Федорова, И.Д. Цитогенетический анализ сперматозоидов человека с использованием внутрицитоплазматической инъекции в ооциты мыши / И.Д. Федорова // Генетика. - 2005. - Т. 41, № 3. - С. 396-404..

47. . Медико-социальные факторы риска бесплодия у мужчин / Е.А. Епанчинцева [и др.] // Андрология и генитальная хирургия. - 2016. - Т. 17, № 3. - С. 47-53.

48. A dog oviduct-on-a-chip model of serous tubal intraepithelial carcinoma / М. de Almeida Monteiro Melo Ferraz [et all] // Sci Rep. - 2020. - V.10, № 1 / [electronic version] https://api.semanticscholar.org/CorpusID:210997884.

49. A microfluidic culture model of the human reproductive tract and 28-day menstrual cycle / S. Xiao [et all] // Nat Commun. - 2017. - № 8 / [electronic version] https: //pubmed.ncbi.nlm. nih. gov/283503 83/.

50. A new sperm-specific Na+/H+ exchanger required for sperm motility and fertility / D. Wang [et all] // Nat Cell Biol. - 2003. - V. 5, №12. - P. 1117-1122.

51. A sperm-specific Na+/H+ exchanger (sNHE) is critical for expression and in vivo bicarbonate regulation of the soluble adenylyl cyclase (sAC) / D. Wang [et all] // Proc Natl Acad Sci USA. - 2007. - V. 104, № 22. - P. 9325-9330. Agarwal, A. Automation is the key to standardized semen analysis using the automated SQA-V sperm quality analyzer / A. Agarwal, R.K. Sharma // Fertil Steril. - 2007. - № 87. - P. 156-162.

52. Agarwal, A. Reactive oxygen species as an independent marker of male factor infertility / A. Agarwal, R.K. Sharma, K.P. Nallella // Fertil Steril. - 2006. -№ 4. - P. 878-885.

53. Aitken, R.J. Reactive oxygen generation and human spermatozoa: the balance of benefit and risk / R.J Aitken, H. Fisher // Biossays. - 1994. - № 16. -P. 259-267.

54. Amann, R.P.Computer-assisted sperm analysis (CASA): capabilities and potential developments / R.P. Amann, D. Waberski // Theriogenology. - 2014. -V. 81, № 1. - P. 5-17.

55. n oviduct-on-a-chip provides an enhanced in vitro environment for zygote genome reprogramming / M.A.M.M. Ferraz [et all] // Nat Commun. -2018. - V. 9, № 1 / [electronic version]

56. Armon, L. Behavioral mechanism during human sperm chemotaxis: involvement of hyperactivation / L. Armon, M. Eisenbach // PLoS One. - 2011. -V 6, № 12 / [electronic version] https ://doi.org/10.1371/j ournal. pone .0028359.

57. Asymmetrically Positioned Flagellar Control Units Regulate Human Sperm

58. Beebe, D.J. Physics and applications of microfluidics in biology / D.J. Beebe, G.A. Mensing, G.M. Walker // Annu Rev Biomed Eng. - 2002. - V. 4, № 1. - P. 261-286.

59. Bend propagation in the flagella of migrating human sperm, and its modulation by viscosity / D.J. Smith [et all] // Cell Motil Cytoskeleton. - 2009. -V. 66, № 4. - P. 220-236.

60. Bergmann, M. Spermatogenesis--physiology and pathophysiology / M. Bergmann, A. Urologe // 2005. - V. 44, № 10. - P. 1131-1132.

61. Ca2+-stores in sperm: their identities and functions / S. Costello [et all] // Reproduction. - 2009. - V.138. - P. 425-437.

62. Capacitation of mouse spermatozoa. II. Protein tyrosine phosphorylation and capacitation are regulated by a cAMP-dependent pathway / P.E. Visconti [et all] // / Development. - 1995. - V.121, № 4. - P. 1139-1150.

63. Carreau, S. Oestrogens and spermatogenesis / S. Carreau, R.A. Hess // Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. - 2010/ - V. 365, № 1546. - P. 1517-1535.

64. CatSper1 required for evoked Ca2+ entry and control of flagellar function in sperm / Carlson A.E. [et all] // Proc Natl Acad Sic USA. - 2003. - V. 100, № 25. - P. 14864-14868.

65. Cho, CL. Role of sperm DNA fragmentation in male factor infertility: A systematic review / CL Cho, A. Agarwal // Arab Journal of Urology. - 2018. - V. 16, № 1. - P. 21-34.

66. Chromatin dynamics during spermiogenesis / C. Rathke [et all] // Biochim Biophys Acta. - 2014. - № 1839. - P. 155-168.

67. Compartmentalized Culture of Perivascular Stroma and Endothelial Cells in a Microfluidic Model of the Human Endometrium / J.S. Gnecco [et all] // Ann Biomed Eng. - 2017. - V. 45, № 7. - P. 1758-1769.

68. D printed microfluidics for biological applications / CM Ho [et all] // Lab Chip. - 2015. - V. 15, № 18. - P. 3627-3637. De Lamirande, E. Impact of reactive oxygen species on spermatozoa: a balancing act between beneficial and

detrimental effects / E. De Lamirande, C. Gagnon // Hum. Reprod. - 1995. -№10. - P. 15-21.

69. Deletion of the Slo3 gene abolishes alkalization-activated K+ current in mouse spermatozoa / X.H. Zeng [et all] // Proc Natl Acad Sci USA. - 2011. - V. 108, № 14. - P. 5879-5884.

70. Design, fabrication, and testing of a microfluidic device for thermotaxis and chemotaxis assays of sperm /Y-J Ko [et all] // SLAS Technol. - 2018. - V. 23, № 6. - P. 507-515.

71. Devadoss C. Microfluidic tectonics: a comprehensive construction platform for microfluidic systems / D.J. Beebe [et all] // Proc Natl Acad Sci USA. - 2000. -V. 97, № 25. - P. 13488-13493. Development of a novel dual reproductive organ on a chip: recapitulating bidirectional endocrine crosstalk between the uterine endometrium and the ovary / S.R. / S.R.Park [et all] // Biofabrication. - 2020. - V. 13, №. 1 / [electronic version] https://iopscience.iop.org/article/10.1088/1758-5090/abbd29/meta.

72. Does the use of microfluidic sperm sorting for the sperm selection improve in vitro fertilization success rates in male factor infertility? / P. Ozcan [et all] // J Obstet Gynaecol Res. - 2021. - V. 47, № 1. - P. 382-388.

73. Dohle, G.R. Genetic risk factors in infertile men with severe oligozoospermia and azoospermia / G.R. Dohle, J.O. Van Hemel // Human Reproduction. - 2002. - № 1. - P. 13-16.

74. - Doxorubicin induced toxicity to 3D-cultured rat ovarian follicles on a microfluidic chip / Aziz A.U.R. / [et all] // Toxicol In Vitro. - 2020 / [electronic version] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31629067/.

75. Effect of transient scrotal hyperthermia on human sperm: an iTRAQ-based proteomic analysis / Y.Q. Wu // Reprod Biol Endocrinol. - 2020. - V. 18, № 1. -P. 83.

76. Effects of the microfluidic chip technique in sperm selection for intracytoplasmic sperm injection for unexplained infertility: a prospective,

randomized controlled trial / I J Seleuk Yetkine // Assist Reprod Genet. - 2019. -V.36, № 3. - P. 403-409.

77. Endometrium On-a-Chip Reveals Insulin- and Glucose-induced Alterations in the Transcriptome and Proteomic Secretome / T.H.C. de Bem, [et all] // Endocrinology. - 2021. - V. 162, № 6 / [electronic version] https: //pubmed.ncbi. nlm. nih. gov/33693651.

78. Evaluation of an ovary-on-a-chip in large mammalian models: Species specificity and influence of follicle isolation status / J.B. Nagashima [et all] // J Tissue Eng Regen Med. -2018. - V. 12, № 4. - P. 1926-1935.

79. Evaluation of Mouse Oocyte In Vitro Maturation Developmental Competency in Dynamic Culture Systems by Design and Construction of A Lab on A Chip Device and Its Comparison with Conventional Culture System / B. Sadeghzadeh Oskouei [et all] // Cell. - 2016. - V. 18, № 2. - P. 205-213.

80. Evaluation of sperm selection procedure based on hyaluronic acid binding ability on ICSI outcome / M.H. Nasr-Esfahani, [et all] // Assist Reprod Genet. 2008. - V. 25, № 5. - P. 197-203.

81. Fertility testing and ICSI sperm selection by hyaluronic acid binding: clinical and genetic aspects / G. Huszar [et all] // Reprod Biomed Online. - 2007. - V. 14, № 5. P. 650-663. Finkelstein, M. Ca2+ signaling in mammalian spermatozoa / M. Finkelstein, N. Etkovitz, H. Breitbart // Mol Cell Endocrinol. -2020 / [electronic version] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7730405/.

82. Flow-free microfluidic device for quantifying chemotaxis in spermatozoa / J.T.W. Berendsen [et all] // Anal Chem. - 2020. - V.92, № 4. - P. 3302-3306.

83. Fujii, J. Cooperative function of antioxidant stress in male reproductive tissues / J. Fujii, Y. Iuch // Andrology. - 2003. - № 1. - P. 1-12.

84. Funahashi, H. Regulation of in vitro penetration of frozen-thawed boar spermatozoa by caffeine and adenosine / H. Funahashi, T. Nagai // Molecular Reproduction and Development. - 2001. - V. 58, № 4. - P. 424-431.

85. Griveau, J.F. Reactive oxygen species and human spermatozoa / J.F. Griveau, D. Le Lannou // Int. J. Androl. - 1997. - № 20. - P. 61-69.

86. Hemodynamic forces enhance decidualization via endothelial-derived prostaglandin E2 and prostacyclin in a microfluidic model of the human endometrium / J.S. Gnecco [et all] // Hum Reprod. - 2019. - V. 34, № 4. - P. 702714. Ho, H.C. Characterization of the intracellular calcium store at the base of the sperm flagellum that regulates hyperactivated / H.C. Ho, S.S. Suarez // Reprod. -2003. - V. 68, № 5. - P. 1590-1596.

87. Ho, H.C. Hyperactivated motility of bull sperm is triggered at the axoneme by Ca2+ and not cAMP / H.C. Ho, K.A. Granish, S.S. Suarez // Dev Biol. - 2002.

- V. 250, № 1. - P. 208-217.

88. Hyperactivation of monkey spermatozoa is triggered by Ca2+ and completed by cAMP / S. Ishijima [et all] // Mol Reprod Dev. - 2006. - V. 73, № 9. - P. 1129-1139. Identification of proteins undergoing tyrosine phosphorylation during mouse sperm capacitation / E. Arcelay [et all] // Int J Dev Biol. - 2008. -52, № 5-6. - P. 463-472.

89. Infertility Cell Therapy and Epigenetic Insights / N. Eshghifar [et all] // Hum. Antibodies. - 2021. - № 29. - P. 17-26.

90. Influence of caffeine on movement characteristics, fertilizing capacity and ability to penetrate cervical mucus of human spermatozoa / R.J. Aitken [et all] // J. Reprod Fertil. - 1983. -V. 67, № 1. - P. 19-27.

91. Inhibition of Ser/Thr phosphatases induces capacitation-associated signaling in the presence of Src kinase inhibitors / D. Krapf [et all] // J Biol Chem.

- 2010. - V. 285, № 11. - P. 7977-7985.

92. Integrated Microfluidic Platform with Multiple Functions To Probe Tumor-Endothelial Cell Interaction / L. Lin [et all] // Anal Chem. - 2017. - V. 89, № 18.

- P. 10037-10044. Integration of single oocyte trapping, in vitro fertilization and embryo culture in a microwell-structured microfluidic device / C. Han [et all] // Lab Chip. - 2010. - V. 10, № 21. - P. 2848-2854.

93. Integration of sperm motility and chemotaxis screening with a microchannel-based device / L. Xie [et all] // Clin Chem. - 2010. - V. 56, № 8. -P. 1270-1278.

94. Intra- and inter-individual variability in human sperm concentration, motility and vitality assessment during a workshop involving ten laboratories / Auger J. [et all] // Hum Reprod. - 2000. - № 15. - P. 2360-2368. Jameel, T. Sperm swim-up: a simple and effective technique of semen processing for intrauterine insemination / T. Jameel // J Pak Med Assoc. - 2008. - V. 58, № 2. -P. 71-74.

95. Kanatsu-Shinohara, M. Spermatogonial stem cell self-renewal and development / M. Kanatsu-Shinohara, T. Shinohara // Annu Rev Cell Dev Biol. -2013. - № 29. - P. 163-187. Larson, E.L. Spermatogenesis and the Evolution of Mammalian Sex Chromosomes / E.L. Larson, E.E.K. Kopania, J.M. Good // Trends Genet. - 2018. - V. 34, № 9. - P. 722-732.

96. Lewis, S. Effect of pentoxifylline on human sperm motility in normozoospermic individuals using computer-assisted analysis / S. Lewis, J. Moohan, W. Thompson // Fert. and Steril. - 1993. - №59. - P. 418-423.

97. Li, L. Potential clinical value of in vitro spermatogenesis / L. Li, Y. Yuan, J. Sha // Biology of Reproduction. - 2022. - V. 107, № 1. - P. 95-100. Luconi, M. Pathophysiology of sperm motility / M. Luconi, G. Forti, E. Baldi // Front Biosci. - 2006. - № 11. - P. 1433—1447.

98. Ma, D.D. Kinesins in spermatogenesis / D.D. Ma, D.H. Wang, W.X. Yang // Biol Reprod. - 2017. - V. 96, № 2. - P. 267-276.

99. Male infertility / A. Agarwal [et all] // Lancet. - 2021. - V. 397, № 10271. - P. 319-333.

100. Micro-dissected tumor tissues on chip: an ex vivo method for drug testing and personalized therapy / M. Astolfi [et all] // Lab Chip. - 2016. - V. 16, № 2. -P. 312-325.

101. Microfluidic sorting selects sperm for clinical use with reduced DNA damage compared to density gradient centrifugation with swim-up in split semen samples / M.M. Quinn [et all] // Hum Reprod. - 2018. - V. 33, № 8. - P. 13881393.

102. Microfluidic sperm selection device increases clinical pregnancy rate in IVF/ PGT-A cycles / C.Z. Berton [et all] // Human Reproduction. - 2022. - V. 37. - P. 120.

103. Microfluidic sperm selection yields higher sperm quality compared to conventional method in ICSI program: A pilot study, Systems Biology in Reproductive Medicin / F. Anbari [et all] // 2021. - V. 67, № 2. - P. 137-143.

104. Microfluidic-enabled self-organized tumor model for in vitro cytotoxicity assessment of doxorubicin / Y. Yang [et all] // Biomed Microdevices. - 2020. - V. 22, № 70 / [electronic version] https://link.springer.com/article/10.1007/s10544 -020-00523-2#citeas.

105. Miller, M.P. Meiosis I: when chromosomes undergo extreme makeover / M.P. Miller, A. Amon, E. Unal // Curr Opin Cell Biol. - 2013. - V. 25, № 6. - P. 687-696.

106. Molecular Biology of Spermatogenesis: Novel Targets of Apparently Idiopathic Male Infertility / R. Cannarella [et all] // Int. J. Mol. Sci. - 2020. - V. 21, № 5. - P. 1728.

107. Molecular control of rodent spermatogenesis / S.Z. Jan [et all] // Biochim Biophys Acta. - 2012. - V. 1822, № 12. - P. 1838-1850.

108. Morphometric and structural analysis of Florida manatee spermatozoa / JR Cowart [et all] // Anat Rec (Hoboken). - 2022. - V. 305, № 2. - P. 446-461.

109. Mortimer, S.T. Kinematics of capacitating human spermatozoa analysed at 60 Hz / S.T. Mortimer, M.A. Swan // Hum Reprod. - 1995. - V. 10. - P. 873-879.

110. Mouse sperm membrane potential hyperpolarization is necessary and sufficient to prepare sperm for the acrosome reaction. / J.L. de La Vega-Beltran [et all] // J Biol Chem. - 2012. - V. 287, № 53. - P. 44384-44393.

111. Multiplex newborn screening for Pompe, Fabry, Hunter, Gaucher, and Hurler diseases using a digital microfluidic platform / R.S. Sista [et all] // Clin Chim Acta. - 2013. - № 424. - P. 12-18.

112. Non-steroidal signal originating in the gonad / J.F. Ackland [et all] // Physiol. Rev. - 1992. - Vol. 72. - P. 731-787.

113. Novel Gene Regulation in Normal and Abnormal Spermatogenesis / L, Du [et all] // Cells. - 2021. - V. 10, № 3. - P. 666.

114. On-chip oocyte denudation from cumulus-oocyte complexes for assisted reproductive therapy / L. Weng [et all] // Lab Chip. - 2018. - V. 18, № 24. - P. 3892-3902.

115. Organ-on-chip of the cervical epithelial layer: A platform to study normal and pathological cellular remodeling of the cervix / O.A.G. Tantengco [et all] // FASEB J. - 2021. - V. 35, № 4 / [electronic version] https://pubmed.ncbi.nlm.nih. gov/33689188.

116. Paniker, N.V. Effect of glutathione reductase deficiency on the stimulation of hexose monophosphate shunt under oxidative stress / N.V. Paniker, S.K. Srivastala, E. Beutler // Biochim. Biophys. Acta. - 1970. - № 215. - P. 456-460.

117. Passively driven integrated microfluidic system for separation of motile sperm / B.S. Cho [et all] // Anal Chem. - 2003. - V. 75, № 7. - P. 1671-1675.

118. Peña, FJ. Molecular Biology of Spermatozoa / FJ. Peña //Int J Mol Sci. -2020. - V. 21, № 9 / [electronic version] https://doi.org/10.3390/ijms21093060.

119. Prospective randomized controlled study of a microfluidic chip technology for sperm selection in male infertility patients / §. Aydin, [et all] // Andrologia. -2020. - V. 54, № 6 / [electronic version] https://doi.org/10.1111/and.14415.

120. Rapid selection of sperm with high DNA integrity / R. Nosrati [et all] // Lab Chip. - 2014. - V. 14, № 6. - P. 1142-1150.

121. Richer, G. In-vitro spermatogenesis through testis modelling: Toward the generation of testicular organoids / G. Richer, Y, Baert, E. Goossens // Andrology. - 2020. - № 8. - P. 87-91.

122. Role of Selective Autophagy in Spermatogenesis and Male Fertility / C. Lv [et all] // Cells. - 2020. - V. 9, № 11. - P. 23-25.

123. Schettler, V. The oxidant/antioxidant balance during regular low-density lipoprotein apheresis / V. Schettler // Ther. Apher. - 1999. - № 3. - P. 219-226. Sharma, A. Male infertility due to testicular disorders Мужское бесплодие из-за заболеваний яичек / A. Sharma [et all] // J Clin Endocrinol Metab. - 2021. - V. 106, № 2. - P. 442-459.

124. Small RNAs, spermatogenesis, and male infertility: a decade of retrospect / M. Joshi [et all] // Reprod Biol Endocrinol. - 2023. - V. 21, № 1. - P. 106.

125. Sperm Capacitation and Acrosome Reaction in Mammalian Sperm / C. Stival [et all] // Adv Anat Embryol Cell Biol. - 2016. - № 220. - P. 93-106. .

126. Sperm nuclear vacuoles, as assessed by motile sperm organellar morphological examination, are mostly of acrosomal origin / O. Kacem [et all] // Reproductive BioMedicine Online. - 2010. - V. 20, № 1. - P. 132-137.

127. Sperm Q"A Simple Analysis Software to Comprehensively Study Flagellar Beating and Sperm Steering Sperm Q " / J.N. Hansen [et all] // Cells. - 2018. - V. 8, № 1. / [electronic version] https://www.ncbi.nlm.nih. gov/pmc/articles/PMC6357160/.

128. Sperm Selection and Embryo Development: A Comparison of the Density Gradient Centrifugation and Microfluidic Chip Sperm Preparation Methods in Patients with Astheno-Teratozoospermia / M. Cincik [et all] // Life. - 2021. - V. 11 / [electronic version] https://api.semanticscholar. org/CorpusID:23793 53 55

129. Sperm sorting based on the imitation of the physiological process on the microfluidic chip. Q.C. Zhang [et all] // Zhonghua Nan Ke Xue. - 2012. - V. 18, № 9. - P. 803-806.

130. Spermatogenesis in humans and its affecting factors / F. Neto [et all] // Seminars in Cell & Developmental Biology. - 2016. - V. 59. - P. 10-26.

131. Suarez, S.S. Hyperactivation enhances mouse sperm capacity for penetrating viscoelastic media / S.S. Suarez, X. Dai // Biol Reprod. - 1992. - №. 46. - P. 686 - 691.

132. Suh, R. Microfluidic applications for andrology / R. Suh, S. Takayama, G.D. Smith // J Androl. - 2005. - V. 26, № 6. - P. 664-670. Suresh, C. S. Bioenvironmental Issues Affecting Men's Reproductive and Sexual Health / Editer by Suresh C. S. - Tulane University, New Orlean, LA, United States, 2018.

133. Taitson, P.F. Rodrigues LMF. Treating male infertility / P.F. Taitson, Mourthe A Filho // JBRA Assist Reprod.- 2022. - V. 17, № 6. - P. 351-352.

134. Temporal trends in sperm count: a systematic review and meta-regression analysis of samples collected globally in the 20th and 21st centuries / L. Hagai [et all] // Human Reproduction Update. - 2022. - V. 29, № 2. - P. 157-176. The computational sperm cell / L. Alvarez [et all] // Trends Cell Biol. - 2014. - V. 24, № 3. - P. 198-207.

135. The construction of an interfacial valve-based microfluidic chip for thermotaxis evaluation of human sperm / Z. Li [et all] // Biomicrofluidics. - 2014. - V. 8, № 2 / [electronic version] https://api.semanticscholar.org/CorpusID:205188681.

136. The cytoskeleton in spermatogenesis J.E.M. Dunleavy [et all] // Reproduction. - 2019. - V. 157, № 2. - P. 53-72.

137. The diagnosis of male infertility: an analysis of the evidence to support the development of global WHO guidance-challenges and future research opportunities / CLR Barratt [et all] // Human Reproduction Update. - 2017. - V. 23, № 6. - P. 660-680.

138. The function of pre-mRNA alternative splicing in mammal spermatogenesis / H. Song [et all] // Int J Biol Sci. - 2020. - V. 16, №. 1. - P. 38-48. The molecular evolution of mammalian spermatogenesis /N. Trost, N. Mbengue, H. Kaessmann // Cells. - 2023 / [electronic version] https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2667290123000414.

139. Three-dimensional microengineered vascularised endometrium-on-a-chip / J. Ahn [et all] // Hum Reprod. - 2021. - V. 36, № 10. - P. 2720-2731.

140. Unconventional endocannabinoid signaling governs sperm activation via the sex hormone progesterone / M.R. Miller [et all] // Science. - 2016. - V. 352, № 6285. - P. 555-559. Van der Hors, G. Origin, migration and reproduction of indigenous domestic animals with special reference to their sperm quality / G. Van der Hors, L. Maree // Animals. 2022. - V. 12, № 5 / [electronic version] https://doi.org/10.3390/ani12050657.

141. Van der Horst, G. Sperm form and function in the absence of sperm competition / /G. Van der Horst, L. Maree // Mol Reprod Dev. - 2014. - V. 81, № 3. - P. 204-216.

142. Van der Horst, G. Status of Sperm Functionality Assessment in Wildlife Species From Fish to Primates / G. Van der Horst // Animals. - 2021. - V. 11, № 6 / [electronic version] https://doi.org/10.3390/ani11061491.

143. Walker, W.H. Regulation of mammalian spermatogenesis by miRNAs / W.H. Walker // Seminars in cell and developmental biology. - 2022. - № 121. -P. 24-31.

144. WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen, Sixth Edition. - Geneva.: World Health Organization. - 2021. - 276 p.

145. Working Group on Male Sexual and Reproductive Health. European Association of Urology Guidelines on Male Sexual and Reproductive Health Update on Male / S. Minhas [et all] // Eur Urol. - 2021. - V. 80, № 5. - P. 603620.

146. World Health Organization reference values for human semen characteristics.Cooper TG [et all] // Hum Reprod Update. - 2010. - № 16. - P. 231-245.

147. Xiong, Y. Ubiquitin-proteasome system-regulated protein degradation in spermatogenesis / Y. Xiong, C. Yu, Q. Zhang // Cells. - 2022. - V. 11, № 6. - P. 1058.

148. Zhang, Z. Mitochondrial regulation in spermatogenesis / Z. Zhang, J. Miao, Y. Wang // Reproduction. - 2022. - V. 163, № 4. - P. 55-69.

149. Zini, A. Antioxidant activity in the semen of fertile and infertile men / A. Zini, K. Carrels, D. Phang // Urology. - 2000. - № 55. - P. 922- 926.