Пробоподготовка QuEChERS и дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция при одновременном определении микотоксинов различных классов хроматографическими методами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат наук Авдеева, Надежда Михайловна

  • Авдеева, Надежда Михайловна
  • кандидат науккандидат наук
  • 2013, Владимир
  • Специальность ВАК РФ02.00.02
  • Количество страниц 140
Авдеева, Надежда Михайловна. Пробоподготовка QuEChERS и дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция при одновременном определении микотоксинов различных классов хроматографическими методами: дис. кандидат наук: 02.00.02 - Аналитическая химия. Владимир. 2013. 140 с.

Оглавление диссертации кандидат наук Авдеева, Надежда Михайловна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Краткая характеристика микотоксинов

1.2. Способы пробоподготовки при определении микотоксинов

1.3. Хроматографические методы определения микотоксинов различных

классов

1.4. Способы одновременного определения микотоксинов

1.5. Возможные трудности при определении микотоксинов

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ)

2.1. Реактивы и материалы

2.2. Аппаратура

2.3. Вспомогательное оборудование

2.4. Методики извлечения двадцати микотоксинов различных классов из

одной навески образцов зерна, кормов и продуктов питания

2.5. Хроматографическое разделение и определение микотоксинов

ГЛАВА 3. ВЫБОР УСЛОВИЙ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ КЛАССОВ МИКОТОКСИНОВ

3.1. Условия разделения афлатоксинов, охратоксинов, патулина

и зеараленона

3.2. Условия разделения трихотеценовых микотоксинов

3.3. Резюме к главе 3

ГЛАВА 4. ПРОБОПОДГОТОВКА ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ МИКОТОКСИНОВ В ЗЕРНЕ, КОРМАХ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

4.1.Выбор условий С*иЕСЬЕ118 для одновременного извлечения микотоксинов

из одной навески

4.2. Выбор условий ДЖЖМЭ для извлечения микотоксинов

4.3. Резюме к главе 4

ГЛАВА 5. СПОСОБЫ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ В ЗЕРНЕ, КОРМАХ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ ИЗ

ОДНОЙ НАВЕСКИ

5.1.Одновременное определение микотоксинов в зерне и кормах

5.2. Одновременное определение микотоксинов в мясе и субпродуктах мясных

5.3. Одновременное определение микотоксинов в молоке и молочных продуктах

5.4. Резюме к главе 5

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Аналитическая химия», 02.00.02 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Пробоподготовка QuEChERS и дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция при одновременном определении микотоксинов различных классов хроматографическими методами»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Микотоксины - вторичные метаболиты жизнедеятельности микроскопических плесневых грибов - загрязняют пищевые продукты растительного, животного происхождения и могут нанести серьезный урон здоровью как животных, так и человека. На сегодняшний день известно более 450 микотоксинов. Все микотоксины разделяются на несколько классов и отличаются по своим свойствам и строению, что приводит к трудностям их одновременного определения. Существующие в РФ ГОСТ и МУК для определения единичных микотоксинов или отдельных классов в продуктах растительного и животного происхождения основаны на использовании хроматографических методов анализа: ТСХ, ВЭЖХ с флуориметрическим или УФ - детекторами, ГЖХ с детектором по захвату электронов. Для извлечения микотоксинов из анализируемых объектов в основном используют жидкостно-жидкостную экстракцию. Для очистки экстрактов от соэкстрагируемых веществ (белки, жиры, липиды, стеролы, полярные органические кислоты, каротиноиды, хлорофилл) используют твердофазную экстракцию и коммерческие иммуноаффинные колонки для избирательного извлечения микотоксинов (одного или определенного класса). Обычно данные методики длительны (пробоподготовка может занимать от 3 до 5 ч), трудоемки, требуют больших количеств токсичных органических растворителей и дорогостоящих одноразовых иммуноаффинных колонок.

В последнее время для извлечения микотоксинов и определения их методами ГЖХ(ВЭЖХ)-МС/МС используют пробоподготовку по QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe). Однако при такой пробоподготовке определение микотоксинов более доступными хроматографическими методами с флуориметрическим, УФ - и электронно-захватным детекторами затруднено в связи с недостаточной очисткой экстрактов.

Цель данной работы: разработка экспрессного комбинированного способа одновременного определения микотоксинов различных классов в продуктах растительного и животного происхождения, совмещающего пробоподготовку С>иЕСЬЕ118 и дисперсионную жидкостно-жидкостную микроэкстракцию с хроматографическим определением.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

•Установить возможность комбинации методов пробоподготовки РиЕСЬЕЯ8 и дисперсионной жидкостно-жидкостной микроэкстракции для одновременного извлечения микотоксинов различных классов из одной навески зерна, кормов и продуктов питания.

•Оптимизировать условия пробоподготовки для получения высокой чистоты экстрактов из различных матриц, необходимой при анализе, хроматографическими методам (ВЭЖХ - УФ, ФЛД; ГХ-ДЭЗ).

•Установить оптимальные условия получения производных афлатоксинов и трихотеценовых микотоксинов, хроматографического разделения данных соединений, а также охратоксинов, зеараленона и патулина.

• Разработать методики определения микотоксинов различных классов в зерне, кормах и продуктах питания.

Научная новизна. Установлена возможность одновременного извлечения исследуемых микотоксинов (афлатоксинов М1, В1, В2, 01, С2\ трихотеценовых типа А: Т-2 токсина, НТ-2 токсина, Т-2-тетраол токсина, Т-2-триол токсина, неосоланиола, диацетоксискирпенола; трихотеценовых типа В: дезоксиниваленола, ниваленола, 15-ацетилдезоксиниваленола, 3-ацетилдезоксиниваленола, фузаренона X; охратоксина А и охратоксина В; зеараленона; патулина) из зерна, кормов и продуктов питания с использованием пробоподготовки С)иЕСЬЕ118.

Предложен способ ДЖЖМЭ для дополнительной очистки и избирательного извлечения микотоксинов разных классов (афлатоксинов, трихотеценовых микотоксинов, зеараленона и патулина) из экстракта,

полученного после (^иЕСИЕКЗ. Исследовано и оценено влияние различных факторов на условия приготовления образцов при совместном использовании ОиЕСЬЕБ^ и ДЖЖМЭ.

Практическая значимость.

Предложен способ одновременного извлечения двадцати микотоксинов разных классов из одной навески образцов зерна, кормов, пищевых продуктов с использованием пробоподготовки С>иЕСНЕ118 и дополнительного избирательного извлечения из экстракта методом ДЖЖМЭ отдельных групп микотоксинов: афлатоксинов и патулина, трихотеценовых микотоксинов типа А и В, охратоксинов и зеараленона.

1. Разработан способ определения микотоксинов в продуктах растительного и животного происхождения, включающий пробоподготовку РиЕСЬЕЯ8, ДЖЖМЭ и последующее определение в экстракте:

- пяти афлатоксинов, двух охратоксинов, зеараленона методом ВЭЖХ с флуориметическим детектированием;

- патулина методом ВЭЖХ с УФ детектированием;

- одиннадцати трихотеценовых микотоксинов методом газожидкостной хроматографии с детектором электронного захвата.

Применение данного способа извлечения позволило снизить время анализа, сократить объемы токсичных растворителей, а также снизить себестоимость анализа за счет использования малых количеств насыпных сорбентов и растворителей. Предложенные методики проверены на реальных образцах зерна, кормов и пищевых продуктов. Продолжительность анализа составила 1,5-2 ч.

На защиту выносится:

Новый способ одновременного извлечения микотоксинов различных классов, основанный на совмещение методов пробоподготовки РиЕСЬЕЯЗ и ДЖЖМЭ.

Результаты по оптимизации условий экстракции и очистки экстракта при совместном использовании методов РиЕСЬЕЯ8 и ДЖЖМЭ из одной навески

зерна, кормов и продуктов питания для определения двадцати микотокисинов (афлатоксинов Ml, Bl, В2, Gl, G2; трихотеценовых: Т-2 токсина, НТ-2 токсина, T-2-тетраол токсина, T-2-триол токсина, неосоланиола, диацетоксискирпенола, дезоксиниваленола, ниваленола, 15-

ацетилдезоксиниваленола, 3-ацетилдезоксиниваленола, фузаренона X; охратоксинов А и В; зеараленона; патулина).

Оптимальные условия получения производных афлатоксинов и трихотеценовых микотоксинов, селективного и эффективного разделения микотоксинов различных классов хроматографическими методами с различными детекторами.

Результаты валидации методик и определения микотоксинов различных классов в реальных образцах зерна, кормов и продуктах питания.

Личный вклад автора заключался в проведении экспериментальных исследований по получению производных микотоксинов; в установлении оптимальных условий хроматографического разделения и определения микотоксинов различных классов; в разработке способов извлечения и очистки экстрактов микотоксинов из зерна, кормов и различных продуктов питания; в интерпретации результатов эксперимента, формулировании научных положений и выводов.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на следующих конференциях и симпозиумах: Международной молодежной научной конференции «ЛОМОНОСОВА 11, 2012, 2013» (Москва, МГУ), Международной конференции 5th International Symposiumon Recent Advancesin Food Analysis, 2011 г. (Прага, Чехия), Всероссийской школе -конференции молодых ученых, аспирантов и студентов с международным участием, 2012 г (Саратов), VI Всероссийской конференции молодых учёных, аспирантов и студентов с международным участием, «Менделеев - 2012» 2012 г. (Санкт-Петербург, СПбГУ), Всероссийской конференции с международным участием, посвящённой 75-летию со дня рождения В.В. Кормачева, 2012 г. (Чебоксары), Международной конференции 36th International Symposiumon

Capillary Chromatography, 2012 г. (г. Рива дель Гардо, Италия), Всероссийской

конференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез»

th

(Краснодар, 2013), Международной конференции 19 International Symposium on Separation Sciences. New Achievements In Chromatography, 2013 г. (Пореч, Хорватия).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 работ, 6 статей (из них 5 статей опубликованы в журналах из списка ВАК), 10 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 140 страницах, включая введение, 5 глав, выводы, список литературы (146 источников) и одно приложение. Работа содержит 30 рисунков и 13 таблиц.

ГЛАВА 1. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Краткая характеристика микотоксинов

Наиболее опасными токсичными веществами, встречающимися в продуктах питания, являются микотоксины - вторичные метаболиты микроскопических плесневелых грибов [1, 2]. Предотвратить загрязнение продуктов питания микотоксинами практически невозможно, поэтому необходим строгий контроль данных веществ в пищевых продуктах растительного и животного происхождения. В настоящее время в большинстве стран установлены максимально допустимые уровни для ряда микотоксинов в продуктах питания и кормах, превышение которых ведет к серьезным заболеваниям человека и животных.

Известно около 250 видов микроскопических плесневелых грибов, которые продуцируют более 450 токсичных метаболитов - микотоксинов [1, 3]. Данные вещества очень разнообразны, отличаются по своему строению и свойствам. Строение некоторых основных групп микотоксинов представлено в табл. 1.

Таблица 1. Строение некоторых микотоксинов.

Афлатоксины

О О Афлатоксин В1: Я=Н Афлатоксин В2: Я=Н, положение 8 и 9 гидрированы Афлатоксин М1: Я=ОН

1 9 'в О О ^^ ОСН3

О О ЛА Афлатоксин С1 Афлатоксин С2: положения 9 и 10 гидрированы

1 \ 8 / О 5 |

Трихотеценовые микотоксины

Тип А

Токсин Т-2: Я^ОН, Я2=Я3= ОСОСНз, Я4=Н, Я5=ОСОСН2СН(СН3)2 Т-2-Тетраол: Я^ОН, Я2=ОН, Я3=

ОН, Я5=ОН

Т-2-Триол:Я!=ОН, Я2=ОН Я3=

ОН, ЯгН, Я5= ОСОСН2СН(СН3)2

Токсин НТ-2: Я1=Я2=ОН, Я3=

ОСОСНз, И4=Н, Я5=ОСОСН2СН(СН3)2

Триходермол : Я]=Н, Я2= ОН,

Я3=Н, Я4=Н, Я5=Н

Триходермин. Я,=Н, Я2=ОСОСН3

Я3=Н, Я4=Н, Я5=Н

Веррукарол: Я1=Н, Я2=ОН

Я3=ОН, Я4=Н, я5=н

Скирпентриол : Я]=ОН, Я2=ОН Я3=ОН, Яд=Н, я5=н

Моноацетоксискирпенол:

Я!=ОН, Я2=ОН, Я3= ОСОСНз, ЯгН,

я5=н

Диацетоксискирпенол: Я1= ОН,

Я2=ОСОСН3, Я3= ОСОСН3, Я4=Н, Я5=Н 7,8-

Дигидроксидиацетоксискирпенол:

Я^ОН, Я2=ОСОСН3; Яз= ОСОСНз, Я4=ОН, Я5=ОН

Неосоланеол: Я1=ОН,

Я2=ОСОСН3 Я3= ОСОСНз, Ь*4=Н,

Я5=ОН

н н н

НзС

----Ri

----H

Тип В

Ниваленол: Ri=R2=R3=R4=OH Дезоксиниваленол : Ri=R3=R4=OH, R2=H

З-Ацетилдезоксиниваленол: Rr ОСОСН3, R2=H, R3=R4=OH

15-Ацетилдезоксиниваленол: R!=R4=OH, R2=H, R3=OCOCH3

Фузаренон X: R!=R3=R4= OH, R2=OCOCH3

Трихотеколон: Ri= H, R2=OH, R3=Rt=H

Трихотецин: R¡= H, R2=OCOCH2CH(CH3)2, R3=R4=H

Охратоксины

Os OR

Охратоксин A: Ri=H, Ri=Cl Охратоксин В: Ri=H, Ri=H Охратоксин С: Ri=Cl, Ri=C2H5

Патулин

Зеараленон

Фумонизины

ФуманизинА1: Ri= ОН,

R2=OH, R3=COCH3, R4=CH3

Фуманизин А2: R^ H, R2=H, R3=COCH3, R4=CH3

Фуманизин Bl: R\= OH, R2=OH, R3=H, R4=CH3

Фуманизин B2: Rj= H, R2=OH, R3=H, R4=CH3

Фуманизин B3: Rj= OH,

r2=h, r3=h, R4=ch3

Фуманизин B4: R{= H, R2=H, R3=H, R4=CH3

Фуманизин Cl: R|= OH, R2=OH, R3=H, R4=H

Фуманизин C2: Rt= OH, R2=H, R3=H, R4=H

Фуманизин C3: Rj= H, R2=H, R3=H, R4=H

Стегмацистин

4,

о

сн3

Цитрин

Контаминируют данные вещества продукты растительного происхождения: зерновые, фрукты и травы, которые в свою очередь могут поступать в виде корма для животных. В связи с этим микотоксины могут оказаться в молоке, мясе и яйцах этих животных.

Плесневелые грибы могут образоваться и при неправильном хранении кормов, а также выделять микотоксины еще во время роста растений. Для их развития большую роль играют температура и влажность, причем в разных странах, в зависимости от климата, распространены разные микотоксины.

Так, в странах с влажным, жарким или теплым климатом чаще встречаются афлатоксины [4, 5], в умеренном климате Европы, Америки и Азии - трихотеценовые микотоксины [6] .

Употребление в пищу продуктов, загрязненных микотоксинами, негативно влияет на здоровье человека и животных. Они могут вызывать целый ряд серьезных заболеваний: проявляют канцерогенные, мутагенные, иммунодепрессивные, эстрогенные, тератогенные, дерматоксические и другие свойства [1].

Среди множества микотоксинов выделяют несколько классов наиболее распространенных и опасных: трихотеценовые микотоксины, афлатоксины, охратоксины, патулин, зеараленон. Максимально допустимые уровни (МДУ) микотоксинов в продуктах питания и кормах, установленные в РФ, представлены в табл. 2 [7,8].

Таблица 2. МДУ микотоксинов в пищевых продуктах и кормах.

Субстрат Микотоксин МДУ, мг/кг

Афлатоксин В1 0,005

Дезоксиниваленол 0,7 (для ячменя) 1,0 (для пшеницы)

Зерно, мука, крупа Т-2 токсин 1,0 (зерно пшеницы, ячменя) 0,1 (для круп и муки)

Зеараленон 1,0 (для пшеницы, ржи) 0,1 (для кукурузы)

Афлатоксин В1 0,002

Дезоксиниваленол 1,0

Зерно фуражное Т-2 токсин 0,06

Зеараленон 0,1

Охратоксин А 0,005

Афлатоксин В1 0,002 (арихисовый шрот) 0,05 (подсолнечный шрот)

Дезоксиниваленол 1,0 (подсолнечный шрот)

Корма Т-2 токсин 0,06(арихисовый шрот) 0,1 (подсолнечный шрот)

Зеараленон 0,1 (арихисовый шрот) 1,0 (подсолнечный шрот)

Охратоксин А 0,005 (арихисовый шрот) 0,05 (подсолнечный шрот)

Молоко, молокопродукты Афлатоксин М1 0,0005

Фрукты, овощи, соки и пюре Афлатоксин В1 0,005

Т-2 токсин 0,05

Зеараленон 0,05

Афлатоксин М1 0,005

Патулин 0,05

Кофе, чай, какао, кондитерские изделия Афлатоксин В1 0,005

Афлатоксин М1 0,005

Патулин 0,005

1.2. Способы пробоподготовки при определении микотоксинов

Для определения микотоксинов пробоподготовка является наиболее важным этапом и состоит из отбора пробы, экстракции и очистки экстрактов от различных примесей, мешающих определению токсинов.

При отборе проб следует учитывать, что токсины неравномерно распределяются по продукту. В местах роста плесени концентрация микотоксинов может быть очень высокой. Отбор пробы производят методом выборки. Возможны статистический и динамический способы отбора пробы. В первом случае пробу отбирают в контейнер, а затем из неё производят выборку, во втором - используют автоматические пробоотборники. После отбора сыпучих продуктов, образцы измельчают до гомогенной смеси и затем проводят подвыборку измельченного образца [9-11]. Рекомендуется проводить отбор таким образом, чтобы из каждых 200 кг образца отбирали по несколько проб массой 200 г. Если масса образца больше, чем хотелось бы, то она должна быть тщательно перемешана и затем усреднена и уменьшена методом квартования [9]. В частности, масса навески зерна или кормов для определения трихотеценовых микотоксинов обычно составляет 20 - 50 г, а для соломы выше из-за объемной матрицы образца [12].

После отбора пробы микотоксины экстрагируют органическими растворителями и проводят очистку экстракта. Наиболее часто используют жидкостно-жидкостное экстрагирование и твердофазную экстракцию. В

первом случае существуют специализированные установки для непрерывного или противоточного экстрагирования [2]. Этот метод является простым и легким при выполнении. Однако он проходит в несколько этапов и требует большого количества органических растворителей. Для отдельных микотоксинов применяют разные растворители, часто растворитель подбирается в зависимости от матрицы образца [13]. Так, в зависимости от полярности трихотеценовых и процедуры очистки для их извлечения из зерна, продуктов питания и других твердых материалов, применяют различные комбинации растворителей. Обычно трехотеценовые типа А и В извлекают смесью воды и ацетонитрила или метанола [12-14]. Для извлечения зеараленона (ЗОН) из зерна или кормов применяют этилацетат, метанол, хлороформ и, особенно часто, смесь ацетонитрила и воды [12]. В сложных матрицах, таких, как корма для животных, дополнительным этапом является разбавление и фильтрация, которые необходимо проводить до очистки экстракта [2].

В последнее время использование жидкостной экстракции под давлением, более известной как ускоренная экстракция растворителем, оказалось быстрой альтернативой обычному извлечению, проводимому путем встряхивания или смешивания. Этот способ уменьшает использование органических растворителей и ускоряет экстракцию [15]. Охратоксины извлекают, как правило, из пробы смесью воды и органических растворителей и, в зависимости от типа матрицы, в основном используют хлороформ. Например, для определения охратоксина А в ячмене используют смесь хлороформа и фосфорной кислоты; для зеленого кофе - хлороформ; для пшеницы - смесь растворителей толуол/НС1, хлороформ/этанол/уксусная кислота и дихлорметан/фосфорная кислота. Используют и нехлорированные растворители, например, трет-бутиловый эфир для извлечения охратоксина А из детского питания [16, 17]. При экстракции афлатоксинов применяют хлороформ или водно-ацетонитрильную смесь, метанол [18-21]. Для извлечения патулина проводят экстракцию этилацетатом [22].

Вторым способом выделения и очистки микотоксинов является твердофазная экстракция (ТФЭ). Для очистки экстрактов применяют колонки, заполненные сорбентом. Фирмой 8ире1со разработаны патроны, заполненные сорбентом 8ире1с1еапЬС-СЫ (силикагель, модифицированный цианопропильными группами), для извлечения и очистки экстрактов микотоксинов [23]. Такая экстракция способствует высокому извлечению микотоксинов. Несколько методов с применением ТФЭ (патроны 8ер-Рак с силикагелем) были опробованы для извлечения ЗОН, патулина [24-26]. Широкое применение для извлечения микотоксинов получили российские сорбенты диапаки, диасорбы, диасферы на основе модифицированного силикагеля [27, 28].

В качестве адсорбентов для колонок при выделении микотоксинов и

____онистке_экс,трактов все чаше стали применять сверхсшитые полимеры, это

обусловлено их низкой стоимостью, легкой подготовкой, высокой химической стабильностью и длительным сроком хранения [23, 29]. Для извлечения патулина из соков предложен метод ТФЭ на коммерчески доступном сверхсшитом полистироле (картриджи РигоБер, Великобритания) [27]. Разработан способ очистки и концентрирования зеараленона из образцов кукурузы и пшеницы с помощью ТФЭ на сверхшитом полимере (АРРШ1М1РТМ гОИ, РОЬУТЫТЕЬЬ). Данный сорбент избирательно концентрирует из экстрактов зерновых данный токсин с высокими значениями степеней извлечения [30].

Одним из наиболее часто используемых и коммерчески доступных способов для удаления примесей при определении микотоксинов являются

(К)

колонки Мусо8ер [23, 12-14]. Эти колонки часто используются для очистки экстрактов из зерновых. В качестве сорбентов в колонках Мусо8ер® использован уголь, цеолит и ионообменные смолы. Через колонки пропускают экстракт, примеси задерживаются на сорбенте, а интересующие вещества выходят из колонки с раствором. Такие колонки используются для

одновременной и быстрой очистки ряда микотоксинов: трихотеценовых типа А и В, афлатоксинов, охратоксинов, зеараленона [13, 29].

Используют также иммуноаффинные колонки AflaTest, ZearalaTest (США), Ochraprep, Donprep (Германия). Действие их основано на введении экстракта образца в колонку, содержащую твердую фазу, к которой ковалентно присоединены антитела против микотоксина. Молекула токсина, содержащаяся в образце, присоединяется к соответствующему иммобилизованному антителу. Следующая затем элюция токсина из иммуноаффинной колонки позволяет провести количественное определение с использованием хроматографических методов. Иммуноаффинные колонки коммерчески доступны для афлатоксинов, охратоксинов, зераленона, ДОН, Т-2 и НТ-2 токсинов. Они были использованы также для одновременного определения этих токсинов с помощью ВЭЖХ [23, 29,31].___

В последнее время для быстрого извлечения микотоксинов и очистки экстрактов применяют метод QuEChERS [2, 32-38]. Данный способ является быстрым, дешевым, эффективным, надежным и безопасным (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe). Метод основан на растворении пробы в смеси ацетонитрил/вода, добавлении буферирующих неорганических солей. В результате такой экстракции микотоксины переходят в органическую фазу, а более полярные примеси - в водный слой. Примеси (некоторые сахара, липиды, полярные органические кислоты, жиры), оставшиеся в ацетонитриле, могут быть удалены на дисперсионном сорбенте, содержащем амины (PSA сорбент) и октадецилсилан (С 18 сорбент) [33]. Однако из-за кислой природы некоторых микотоксинов использование PS А сорбентов не рекомендуется [3].

Предложены методики извлечения трихотеценовых микотоксинов и зеараленона методом QuEChERS из зерновых [33, 35]. Для извлечения используют неорганические буферирующие соли, содержащие сульфат магния и хлорид натрия. Для очистки экстракта используют сорбент Cl8 [33]. Степени извлечения, полученные после такого способа приготовления образцов, удовлетворительны и составляют более 70% и выше.

Разработаны методики одновременного определения более двадцати микотоксинов разных классов [36-38]. Неочищенные экстракты анализировали методом СВЭЖХ-МС/МС и ВЭЖХ-МС, ионизацию осуществляли электроспреем. При анализе образцов зерновых и кормов были получены высокие степени извлечения практически для всех микотоксинов (70 - 120 %).

В последние несколько лет стал пользоваться большой популярностью новый эффективный способ извлечения микотоксинов - дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция (ДЖЖМЭ). Методика извлечения основана на использовании системы растворителей: диспергатора, экстрагента и воды. Растворители подбирают таким образом, чтобы они могли взаимно растворяться друг в друге, за исключением экстрагента, который не должен растворяться в воде. После добавления смеси из подходящих растворителей к воде образуется мелкодисперсная система. В конечном итоге происходит разделение смеси на две фазы, в одну из которых переходят интересуемые вещества. Данный способ является быстрым и простым, также позволяет сконцентрировать исследуемые компоненты. На сегодняшний день имеется уже несколько работ с использованием данного метода для определения микотоксинов. Разработаны методики извлечения методом ДЖЖМЭ для охратоксина А в вине [39, 40], афлатоксинов в рисе, пшенице, кукурузе [41], дезоксиниваленола в пшеничной муке [42]. В качестве экстрагента во всех случаях используют хлороформ, он является наилучшим из опробованных растворителей. Использование ДЖЖМЭ позволяет эффективно извлекать микотоксины, степень извлечения для охратоксина А составила 91-100 %, для афлатоксинов - 67-92%, для ДОН - 73%.

Опубликовано несколько статей совместного использования методов С2иЕС11Е118 и ДЖЖМЭ. Разработана методика для одновременного определения микотоксинов в пробах расторопши [43], в орехах и семенах [44]. Совместно данные методы применяют для извлечения десяти микотоксинов (четырех афлатоксинов, зеараленона, цитринина, стегмоцистина) из пятнадцати предложенных [43]; и четырех афлатоксинов из четырнадцати анализиремых

токсинов [44]. Для остальных соединений используют метод QuEChERS без применения ДЖЖМЭ.

1.3. Хроматографические методы определения микотоксинов различных

классов

Трихотеценовые микотоксины. Для определения данной группы микотоксинов широко используют газовую хроматографию с детекторами по захвату электронов (ДЗЭ), пламенно-ионизационным (ПИД) и масс-спектрометрическим (МС) [12].

Важным шагом при определении является перевод микотоксинов в производные. Дериватизирующий реагенты выбирают в зависимости от цели анализа, типа трихотеценовых и используемого детектора. Дериватизация заключается в переводе гидроксильных групп в трифторацетильные, триметилсилильные, пентафторопропионильные, гептафторобутирильные производные [13]. В качестве дериватизирующих реагентов используют бис (триметилсилил)ацетамид, триметилсилилимидазол, смесь

триметилсилилимидазола и триметилхлорсилана, коммерческие смеси бис(триметилсилил)трифторацетамид - триметилсилилимидазол триметилхлорсилан (3:3:2) и бис(триметилсилил)ацетамид триметилсилилимидазол - триметилхлорсилан (3:3:2). Для получения фторацетильных производных применяют гептафторобутирилимидазол, гептафторобутирил ангидрид, пентафторопропионилимидазол,

пентафторопропионил ангидрид, трифторуксусную кислоту (ТФУК) и её ангидрид (ТФА) [13,14, 45- 48].

Трихотеценовые типа А определяют с использованием ГХ-ДЗЭ обычно после дериватизации гидроксильных групп фтороацетильными производными. Последнее приводит к повышению летучести целевых аналитов и делает их восприимчивыми к обнаружению на ДЗЭ [12]. Разработана методика определения НТ-2 и Т-2 токсинов в паприке [49]. Извлечение микотоксинов

проводили смесью ацетонитрила и воды, очистку экстрактов осуществляли на иммуноаффинных колонках. В качестве реагента для перевода в производное применяли пентафторпропионильный ангидрид. Пределы обнаружения для Т-2 и НТ-2 токсинов составили 7 и 3 мкг/кг соответственно, при степени извлечения 70-80 %.

Для дериватизации трихотеценовых типа В, как правило, применяют фтороацетильные или триметилсилильные реагенты [12]. Установлено, что меньше мешающих пиков наблюдается при использовании силилированных, чем фторированных производных. Так, определение ДОН, ниваленола, 3-й 15-ацетилдезоксиниваленола (ЗАД ОН, 15 АД ОН) при анализе кормов в качестве реагента для дериватизации применяли триметилсилилимидазол, пробы выдерживали при 40 °С 15 мин. Микотоксины извлекали ацетонитрилом и водой, очистку проводили на колонах МусоЗер®. Пределы обнаружения для микотоксинов составили 20 - 40 мкг/кг [47]. При определении ДОН с помощью ГХ - ДЗЭ с переводом в производное при помощи ТФА, предел обнаружения в зерновых составил 5 мкг/кг [46]. Ниваленол, ДОН, 3-АДОН, 15-АДОН определяют также после их перевода в производное с помощью гептафторбутирильного ангидрида. Предел обнаружения для микотоксинов в этом случае составил 30 мкг/кг [48].

Разработана методика определения 12 микотоксинов (верукарол, скирпентриол, Т-2, Т-2 тетраол, изо-Т-2, НТ-2, ДАС, ниваленол, фузаренон X, ДОН, 3-АДОН, 15-АДОН) методом ГХ - ДЭЗ в кукурузе. В качестве дериватизирующего реагента использовали гептафторбутирильный ангидрид в присутствии ацилирующего катализатора диметиламина пиридина. Экстракцию проводили смесью ацетонитрила и воды, очистку осуществляли на колонке с углем и оксидом алюминия. Пределы обнаружения составили 50-200 мкг/кг [45].

Похожие диссертационные работы по специальности «Аналитическая химия», 02.00.02 шифр ВАК

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Авдеева, Надежда Михайловна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

2. Другое Ю. С., Родин А. А. Анализ загрязненных биосред и пищевых продуктов. М.: БИНОМ. Лабораториязнаний. 2007. 294 с.

3. Hajslova J., Zachariasova М., Cajka Т. Analysis of Multiple Mycotoxins in Food // Mass Spectrometry in Food Safety: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. 2011. V. 747. P. 233-258.

4. Torres - Pacheco /. Aflatoxins - Detection, Measurement and Control. Croatia: InTech. 2011. P.75.

5. Cotty P. J. , Jaime-Garcia R. Influences of climate on aflatoxin producing fungi and aflatoxin contamination // Int. J. Food Microbiol. 2007. V. 119. № 1/2. P.109-115.

6. Yazar S., Omurtag G. Z. Fumonisins, Trichothecenes and Zearalenone in Cereals //Int. J. Mol. Sci. 2008. V. 9. № 11. P. 2062-2090.

7. СанПиН 2.3.2.1078-01 Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов (токсичные элементы, пестициды, микотоксины). М: Москва, 2001.

8. Единые ветеринарные (ветеринарно-санитарные) требования ТС № 317. М.: Москва, 2010.

9. Whitaker Т.В., Johansson A.S., Slate А.В. Sampling feeds for mycotoxin analysis. Book Chapter. 2005. 23 p.

10. Whitaker Т. B. Sampling food for mycotoxins 11 Food Addit. Contam. 2006. V. 23. № l.P. 50-61.

11. Cheli F., Campagnoli A., Pinotti L., Fusi E., Dell'Orto V. Sampling feed for mycotoxins: acquiring knowledge from food // Ital. J. Anim. Sci. 2009. V. 8. № 1. P. 259-270.

12. Krska R., Welzing E., Boudra H. Analysis of Fusarium toxins in feed // Animal Feed Sci. Technol. 2007. V. 137. № 3. P. 241-264.

13. Langseth W, Rundberget T. Instrumental methods for determination of nonmacrocyclictrichothecenes in cereals, foodstuffs and cultures // J. Chromatogr. A . 1998. V. 815. № l.P. 103- 121 .

14. Krska R., Baumgartner S., Josephs R. The state-of-the-art in the analysis of type -A and -B trichothecenemycotoxins in cereals // Fresenius J. Anal. Chem. 2001.V. 371. №3. P. 285-299.

15. Pallaroni L., Hoist C. Development of an extraction method for the determination of zearalenone in corn using less organic solvents // J. Cromatogr. A. 2004. V. 1055. № 5. P. 247-249.

16. Burdaspal P. Determination of ochratoxin A in baby food by immunoaffinity column cleanup with liquid chromatography: interlaboratory study // J. AO AC int. 2001. V. 84. № 5. P. 1445-1452.

17. Levi C.P. Collaborative study of a method for the determination of ochratoxin A in green coffee // J. AOAC. Int. 1975. V. 58. № 2. P. 258-262.

18. Reiter E.V., Vouk F., Böhm J., Razzazi-FazeliE. Aflatoxins in rice - A limited survey of products marketed in Austria // Food Control. 2010.V. 21. № 7. P. 988-991.

19. Abdulkadar A.H.W., Abdulla A. AI-Ali, Afrah M. Al. Mycotoxins in food products available in Qatar // Food Control. 2004. V. 15. № 7. P. 543-548.

20. Quinto M., Spadaccino G., Palermo C., Centonze D. Determination of aflatoxins in cereal samples by solid-phase microextraction coupled with liquid chromatography and post-column photochemical derivatization-fluorescence detection//J. Chromatogr. A. 2009. V. 1216. № 49. p. 8636-8641.

21. Cho S.-H., Lee C.-H., Jang M.-R., Son Y.-W., Lee S.-M., Choi I.-S., Kim S.-H., Kim D.-B. Aflatoxins contamination in spices and processed spice products commercialized in Korea // Food Chem. 2008. V. 107. № 3. P. 1283-1288.

22. Pittet A. Modern methods and trends in mycotoxin analysis // Mitt. Lebensm. 2005. V. 96. № 6. P. 424-444.

23. Cigic I. К., Prosen H. An overview of conventional and emerging analytical methods for the determination of mycotoxins // Int. J. Mol. Sci. 2009. V.10. № 1. P. 62-115.

24. Гратцфилд-Хьюзген А., Шустер P. Анализ пищевых продуктов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. М.: Interlab. 2000. 99 с.

25. Herry М. P., Lemetayer N. Liquid chromatographic determination of patulin in French apple ciders // J. AO AC Int. 1996. V. 79. № 5. P. 1107-1110.

26. Trucksess M. W., Tang Y. Solid phase extraction method for patulin in apple juice and unfiltered apple juice // J. AOAC Int. 1999. V. 82. № 5. P. 1109-1114.

27. Сычев C.H., Аксенова H.C., Криволапое С.С. Адсорбционное модифицирование в жидкостной хроматографии на силикагеле // Ж. физ. химии. 1986. Т. 59. № 8. С. 1996-1998.

28. Сычев С.Н. Методы совершенствования хроматографических систем и механизмы удерживания в ВЭЖХ. Орел: ОГТУ. 2000. 212 с.

29. Pascale М. Detection methods for mycotoxins in cereal grains and cereal products //Proc. Nat. Sci. 2009. № 117. P. 15-22.

30. Lucci P., Derrien D., Alix F., Perollier C., Bayoudh S. Molecularly imprinted polymer solid-phase extraction for detection of zearalenone in cereal sample extracts // Book of Abstracts/ 4th Int. Symp. on Recent Advances in Food Analysis. 2009. P. 383.

31. Lesli J.F., Bandyopadhyay R., Visconti A. Mycotoxins. Detection Methods, Management, Public Health and Agricultural Trade. London.: CAB International. 2008. 476 p.

32. Zachariasova M., Lacina O., Malachova A., Kostelanska M., Poustka J., Godula M. Novel approaches in analysis of Fusarium mycotoxins in cereals employing ultra performance liquid chromatography coupled with high resolution mass spectrometry // Anal. Chim. Acta. 2010. V. 662. № 1. P. 51-61.

33. Cunha S. C., Fernandes J. O. Development and validation of a method based on a QuEChERS procedure and heart-cutting GC-MS for determination of five mycotoxins in cereal products // J. Sep. Sci. 2010. V. 33. № 4 - 5. P. 600-609.

34. Romero-González R., GarridoFrenich A., Martínez Vidal J. L., Prestes O. D., Grio S.L. Simultaneous determination of pesticides, biopesticides and mycotoxins in organic products applying a quick, easy, cheap, effective, rugged and safe extraction procedure and ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry// J. Chromatogr. A. 2011. V. 1218. № 11. P. 1477-1485.

35. Sospedra I., Blesa J., Soriano J.M., Manes J. Use of the modified quick easy cheap effective rugged and safe sample preparation approach for the simultaneous analysis of type A- and B- trichothecenes in wheat flour // J. Chromatogr. A. 2010. V. 1217. №9. P. 1437-1440.

36. Rensen P., Prestes O., Marijke K., De Kok. A. Fast multi-analyte method for the simultaneous determination of 221 pesticides and 26 mycotoxins in rice samples -UPLC-MS/MS (esi+) analysis of 26 mycotoxins // Book of Abstracts/ 3th Int. Symp.on Recent Advances in Food Analysis. 2007. P. 442.

37. Rasmussen R. R., Storm I. M. L. D., Rasmussen P. H., Smedsgaard J., Nielsen K. F. Multi-mycotoxin analysis of maize silage by LC-MS/MS // Anal. Bioanal. Chem. 2010. V. 397. № 2. P. 765-776.

38. Rubert J., Dzuman Z., Vaclavikova M, Zachariasova M., Soler C., Hajslova J. Analysis of mycotoxins in barley using ultra high liquid chromatography high resolution mass spectrometry: Comparison of efficiency and efficacy of different extraction procedures // Talanta. 2012. V. 99. P. 712-719.

39. Arroyo-ManzanaresN., Gamiz-Gracia L., Garcia-Campaca A. M. Determination of ochratoxin A in wines by capillary liquid chromatography with laser induced fluorescence detection using dispersive liquid-liquid microextraction // Food Chem. 2012. V. 135. № 2. P. 368-372.

40. Campone L., PiccinelliA. L., Rastrelli ¿.Dispersive liquid-liquid microextraction combined with high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the identification and the accurate quantification by isotope

dilution assay of Ochratoxin A in wine samples // Anal. Bioanal. Chem. 2011. V. 399. №3. P. 1279-1286.

41 .Campone L., Piccinelli A. L., Celano R., Rastrelli L. Application of dispersive liquid-liquid microextraction for the determination of aflatoxins Bl, B2, G1 and G2 in cereal products // J. Chromatogr. A. 2011. V. 1218. № 42. P. 76487654.

42. Karami-Osboo R., Maham M., Miri R., Hossein M., AliAbadi S., Mirabolfathy M., Javidnia K. Evaluation of dispersive liquid-liquid microextraction-HPLC-UV for determination of deoxynivalenol (DON) in wheat flour // Food Anal. Methods. 2013. V. 6. № 1. P. 176-180.

43. Arroyo-Manzanares N.,García-Campaña A. M., Gámiz-Gracia L. Multiclass mycotoxin analysis in Silybummarianum by ultra high performanceliquid chromatography-tandem mass spectrometry using a procedure based on QuEChERS and dispersive liquid-liquid microextraction // J. Chromatogr. A. 2013. V. 1282. P. 11-19.

44. Arroyo-Manzanares N., Huertas-Pérez J. F.,Gámiz-Gracia L.,García-CampañaA. M. A new approach in sample treatment combined with UHPLC-MS/MS for the determination of multiclass mycotoxins in edible nuts and seeds // Talanta. 2013. V. 115. P. 61-67.

45. Croteau S. M., Prelusky D. B., Trenholm H.L. Analysis of trichothecene mycotoxins by gas chromatography with electron capture detection // J. Agrie. Food Chem. 1994. V. 42. № 4. P. 928 - 933.

46. Hajslova J., Lane K., Sehn M., Krplovál A., Zach M. Occurrence ofTrichothecene Mycotoxins in Cereals Harvested in the Czech Republic // Czech J. FoodSci. 2007. V. 25. P. 339-350.

47. Labuda R., Tancinova D. Incidence of trichothecenes and zearalenone in poultry feed mixtures from Slovakia// Intern. J. Food Microbiol. 2005. V.105. № 1. P. 19-25.

48. Mateo J.J., Llorens A., Mateo R., Jimenez M. Critical study of and improvements in chromatographic methods for the analysis of type B trichothecenes //J. Chromatogr. A. 2001. V. 918. № 1. P. 99-112.

49. Valle-Algarra F. M., Mateo E. M., Mateo R., Gimeno J. V. Determination of type A and type B trichothecenes in paprika and chili pepper using LC-triple quadrupole-MS and GC-ECD // Talanta. 2011. V. 84. № 4. P. 1112-1117.

50. Oliveira A. de Q., Soares L. M. V. Survey of deoxynivalenol, diacetoxyscirpenol, and T2 toxin in popcorn hybrids planted in the state of sao paulo and in popcorn commercialized in the city of campinas // Cienc. Tecnol. Aliment., Campinas. 2001. V. 21. № 3. P. 330-333.

51. Schothorst R.C., Jekel A A Determination of trichothecenes in wheat by capillary gas chromatography with flame ionisation detection // Food Chem . 2001. V. 73. № l.P. 111-117.

52. Jimunez M., Mateo J., Mateo R. Determination of type A trichothecenes by highperformance liquid chromatography with coumarin-3-carbonyl chloride derivatisation and fluorescence detection // J. Chromatogr. A. 2000. V. 870. № 1/2. P. 473-481.

53. DallAsta C., Galaverna G., Biancardi A., Gasparini M., Sforza S., Dossena A, Marchelli R. Simultaneous liquid chromatography-fluorescence analysis of type A and type B trichothecenes as fluorescent derivatives via reaction with coumarin-3-carbonyl chloride// J. Chromatogr. A. 2004. V. 1047. № 2. P. 241-247.

54. Muscarella M., IaMMarino M., Nardiello D., Palermo C., Centonze D. Determination of deoxynivalenol and nivalenol by liquid chromatography and fluorimetric detection with on-line chemical post-column derivatization // Talanta. 2012. V. 97. P. 145-149.

55. Cahill L. M., Kruger S. C., McAlice B.T., Ramsey C. S., Prioli R., Kohn B. Quantification of deoxynivalenol in wheat using an immunoaffinity column and liquid chromatography // J. Chromatogr. A. 1999. V. 859. № 1. P. 23-28.

56. Omurlag G.Z., Beyoglu D. Occurrence of deoxynivalenol (vomitoxin) in beer in Turkey detected by HPLC// Food Control .2007. V. 18. № 2. P. 163-166.

57. Klinglmayra C., Nöbauerb K., Razzazi-Fazelib E., Cichna-Mark M. Determination of deoxynivalenol in organic and conventional food and feed by solgel immunoaffinity chromatography and HPLC-UV detection / /7. Chromatogr. B. 2010. V. 878. №2. P. 187-193.

58. Kotal F., Radova Z. A simple method for determination of deoxynivalenol in cereals and flours // Czech J. Food Sei. 2002. V. 20. P. 63 - 68.

59. Josephs R.D., Krska R., Grasserbauer M., Broekaert J.A.C. Determination of trichothecenes mycotoxins in wheat by use of supercritical fluid extraction and high-performance liquid chromatography with diode array detection or gas chromatography with electron capture detection. // J. Chromatogr. A. 1998. V. 795. № 2. P. 297 - 304.

60. Sforza S., Dall'Astra Ch., Marcheli R. Recent advances in mycotoxin determination in food and feed by hyphenated chromatographic techniques/mass spectrometry// Mass Spectr. Rev. 2006. V. 25. № 1. P. 54 -76.

61. Yue Y.-T., Zhang X.-F., Pan J, Ou-Yang Z., Wu J., Yang M.-H. Determination of deoxynivalenol in medicinal herbs and related products by GC-ECD and confirmation by GC-MS // Chromatographia. 2010. V. 71. № 5/6. P. 533538.

62. Klötzel, M., Lauber, U., Hans-Ulrich A new solid phase extraction cleanup method for the determination of 12 type A and B trichothecenes in cereals and cereal-based food by LC-MS/MS // Mol. Nutr. Food Res. 2006. V. 50. № 3. P. 261 - 269.

63. Berger U., Oehme M., Kuhn F. Quantitative determination and structure elucidation of type A- and B- trichothecenes by HPLC/ion trap multiple mass spectrometry// J. Agric. Food Chem. 1999. V.47. № 10. P. 4240^1245.

64. Razzazi-Fazeli E., Buhm J., Luf W. Determination of nivalenol and deoxynivalenol in wheat using liquid chromatography-mass spectrometry with negative ion atmospheric pressure chemical ionisation // J. Chromatogr. A. 1999. V.854. № 1/2. P. 45-55.

65. Beitran E., Ibanez M., Sancho J. V., Hernandez F., Hernandez F. Determination of mycotoxinsin different food commodities by ultra-high-pressure

liquid chromatography coupled to triple quadrupolemass spectrometry // Mass Spectrom. 2009. V. 23. № 12. P. 1801-1809.

66. Kostelanska M., Hajslova J., Zachariasova M., Malachova A., Kalachova K, Poustka J., Fiala J., Scott P. M., Berthiller F., Krska i?.Occurrence of deoxynivalenol and its major conjugate, deoxynivalenol-3-glucoside in beer and some brewing intermediates //J. Agric. Food Chem. 2009. V. 57. № 8. P. 3187 -3194.

67. Lorenzini R., Garbini D., Barbanera M., Braschi I .Multi-mycotoxin analysis using immunoaffinity column clean-up and LC-MS/MS determination for deoxynivalenol,zearalenone, T2 and HT-2 toxins in foods // Book of Abstracts/ 4th Int. Symp. on Recent Advances in Food Analysis. 2009. P. 388.

68. Lattanzio V. M. T., Solfrizzo M., Powers S., Visconti A. Simultaneous determination of aflatoxins, ochratoxin A and Fusarium toxins in maize by liquid chromatography/tandem mass spectrometry after multitoxin immunoaffinity cleanup // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2007. V. 21. № 20. P. 3253 - 3261.

69. Tanaka H., Takino M., Sugita-Konishi Y.,Tanaka T. Development of a liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometric method for the simultaneous determination of trichothecenes, zearalenone and aflatoxins in foodstuffs // Rapid Commun. MassSpectrom. 2006. V. 20. № 9. P. 1422 - 1428.

70. Sulyok M, Berthiller F., Krska R. Development and validation of a liquid chromatography/tandem mass spectrometric method for the determination of 39 mycotoxins in wheat and maize // Rapid Commun. MassSpectrom. 2006. V. 20. № 18. P. 2649 -2659.

71. Spanjer M. C. , Rensen P. M. , Scholten J. M. LC-MS/MS multi-method for mycotoxins after single extraction, with validation data for peanut, pistachio, wheat, maize, cornflakes, raisins and figs// Food Add. Contam. 2008. V. 25. № 4. P. 472489.

72. Frenich A. G., Vidal J. L. M., Romero - Gonzalez R., Aguilera-Luiz M. Simple and high-throughput method for the multimycotoxin analysis in cereals and

related foods by ultra-high performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry // Food Chem. 2009. V. 117. № 4. P. 705 - 712.

73. Egmond H. P., Heisterkamp S. H., Paulsch W.E.EC-collaborative study on the determination of aflatoxin B1 in animal feeding stuffs// Food Add. Cont. 1991. V. 8. № l.P. 17-29

74. Shephard M., Gilbert J. An investigation of HPLC post-column iodination conditions for the enhancement of aflatoxin B1 fluorescence // Food Add. Cont. 1984. V. 1. № 4. P. 325 -335.

75. Garner R. C., Whattam M. M., Taylor P. J. L., Stow M. W. Analysis of United Kingdom purchased spices for aflatoxins using an immunoaffinity column clean-up procedure followed by high - performance liquid chromatographic analysis and post - column derivatisation with pyridinium bromide perbromide // J.

Chromatogr. A. 1993. V. 648. P. 485-490.

76. Hans P., Walcer E. Determination of mycotoxins // Pure Appl. Chem. 1986.

V. 2. №2. P. 315-326.

77. KokW.Th. Derivatization reactions for the determination of aflatoxins by liquid chromatography with fluorescence detection // J. Chromatogr. B. 1994. V. 659. № 1/2. P. 127-137.

78. TarterE.J., Hanchay J.P., Scott P.M. Improved liquid chromatographic method for determination of aflatoxins in peanut butter and other commodities. // J. Assoc. Off. Anal. Chem. // 1984. V. 67. № 3. P. 597 - 600.

79. Thiel P. G., Stockenstrom S., Gathercole P. S. Aflatoxin Analysis by Reverse phase HPLC using post column derivatization for enhancement of fluorescence// J. Liquid Chromatogr. 1986. V. 9. № 1. P. 103 - 112.

80. Guevara-Gonzalez R. G. Aflatoxins - Biochemistry and Molecular biology.Croatia : InTech. 2011. p. 468.

81. Tabari M. II American-Eurasian J. Agric. Environ. Sci. 2010. V. 8. № 6. P. 662-665.

82. Berthiller F., Sulyok M., Krska R. Chromatographic methods for the simultaneous determination of mycotoxins and their conjugates in cereals // Int. J. Food Microbiol. 2007. V. 119. № 1/2. P. 33 -37.

83.Chia-Yang Chen, Wen-Jiun Li, Kai-Yao Peng. Determination of aflatoxin Ml in milk and milk powder using high-flow solid-phase extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry // J. Agric. Food Chem. 2005 V. 53. № 22. P. 8474 - 8480.

84. Vahl M., Jurgensen K. Determination of aflatoxins in food using LC/MS/MS //Z. Lebensm. Unters. Forsch. A. 1998. V. 206. № 4. P. 243 - 245.

85.Nasser S., Tozlovanu M., Adlouni C. E., Pfohl-Leszkowicz ^.Occurrence of fumonisins, zearalenone, ochratoxin and citrinin in breakfast cereal // Book of Abstracts / 3th Int. Symp. on Recent Advances in Food Analysis. 2007. P. 256.

86. Aragua's C., Gonzalez-Pen~ as E., Lo'pez de Cerain A. Study on ochratoxin A in cereal-derived products from Spain // J. Food Chemistry. 2005. V. 92. № 3. p. 459-464.

87. Gilbert J.. Progress in Food Contaminant Analysis. London: Blackie Academic and Professional. 1996. p. 426.

88. Raters M, Matissek R. Determination of ochratoxin A in liquorice products using HPLC-based analytical methods. Part II: harmonized method and method validation study// Mycotox. Res .2010. V. 26. № 2. P. 101 - 108.

89. Garcia- Fonseca S., Ballesteros-G 'omez A., Rubio S., P 'erez- Bendito D. Coacervative extraction of ochratoxine A in wines prior to liquid chromatography/fluorescence determination //Anal. Chim. Acta . 2008. V. 617. № 1/2. P. 3-10.

90. Yang L., Wang L. A., Pan J. Y., Xiang L.,Yang M., Logrieco A. F. Determination of ochratoxin A in traditional Chinese medicinal plants by HPLC-FLD// Food Addit. Contam. 2010. V. 27. № 7. P. 989 - 997.

91. Brer a C., Debegnach F., Minardi V., Prantero E., Pannunzi E., Faleo S., De Santis B., Miraglia M. Ochratoxin A contamination in italian wine samplesand

evaluation of the exposure in the italian population // J. Agric. Food Chem. 2008. V. 56. №22. P. 10611 - 10618.

92.Toscania T., Moseritib A., Dossenab A., Dall'Astab C., Simoncinia N., Virgili R. Determination of ochratoxin A in dry-cured meat products by a HPLC-FLD quantitative method //J. Chromatogr. B. 2007. V. 855. № 2. P. 242 - 248.

93.Guler F. K., Heperkan D. Natural occurrence of ochratoxin A in dried figs // Anal. Chim. Acta. 2008. V. 617. № 1/2. P. 32 - 36.

94. Jayeola C. O., A. Oluwadun L. E., Yahaya, Dongo L. N., Mokwunyel A. A. Comparative analysis of detecting ochratoxin A in cocoa powder samples using high performance liquid chromatography (HPLC) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) // African J. Food Sci. 2011. V. 5. № 8. P. 513 - 521.

95. Cdprifa A., Caprifa R., Cozmiuc C., Maranescu B., Sarandan H. Simultaneous determination of mycotoxins (ochratoxin a and deoxynivalenol) in biological samples // J. Agroaliment. Proc. Technol. 2007. V. XIII. № 2. P. 353-358.

96. Copetti M. V., Iamanaka B.T., Pereira J.L., Lemes D.P., Nakano F. ,Taniwaki M.H. Co-occurrence of ochratoxin A and aflatoxins in chocolate marketed in Brazil // Food Control. 2012. V. 26. № 1. P. 36-41.

97. Becker M., Degelmann P., Herderich M., Schreier P., Humpf H.-U. Column liquid chromatography - electrosprayionisation - tandem mass spectrometry for the analysis of ochratoxin 11 J. Chromatogr. A. 1998. V.818. № 2. P. 260-264.

98. Briones-Reyes D., Gomez-Martine L., Cueva-RolonR. Zearalenone contamination in corn for human consumption in the state of Tlaxcala, Mexico // J. Food Chemistry. 2007. V. 100. № 2. P. 693-698.

99. Tanaka T., Yoneda A., Sugiura S., Ueno Y. Simultaneous determination of trichothecene mycotoxins and zearalenone in cereals by gas chromatography-mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2000. V.882. № 1/2. P. 23-28.

100. Berthiller F., Schuhmacher R., Buttinge G., Krska R. Rapid simultaneous determination of major type A- and B-trichothecenes as well as zearalenone in maize by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2005. V. 1062. № 2. P. 209 - 216.

101. Trucksess M. W., Tang Y. Solid-Phase Extraction Method for Patulin in Apple Juice and Unfiltered Apple Juice // J AOAC Int. 1999.V. 82. № 5. P. 11091114.

102. Gaspar E. M., Lucena A. F. Improved HPLC methodology for food control- furfurals and patulin as markers of quality // Food Chem. 2009. V. 114. № 4. P. 1576-1582.

103. Katerere D. R., Stockenstrom S., Shephard G. S. HPLC-DAD method for the determination of patulin in dried apple rings // Food Control. 2008. V. 19. № 4. P. 389 -392.

104. Rosinska D., Vierikova M., Lehotay J. Determination of patulin in apple products using HPLC with photodiode array detector and ultra performance liquid chromatography with electrospray-tandem mass spectrometry // J. Liq. Chromatogr. R. T. 2009. V. 32. № 4. P. 500-511.

105. Moukas A., Panagiotopoulou V., Markaki P. Determination of patulin in fruit juices using HPLC-DAD and GC-MSD techniques // Food Chem. 2008. V. 109. № 4. P. 860-867.

106. Fernández-Cruz M. L., Mansilla M. L, Tadeo J. L.Mycotoxins in fruits and their processed products: Analysis, occurrence and health implications// J. Adv. Res. 2010. V. 1. № 2. P. 113-122.

107. Cunha S. C., Faria M. A., Fernandes J. O. Determination of patulin in apple and quince products by GC-MS using 13C5-7 patulin as internal standard// Food Chem. 2009. V. 115. № l.P. 352-359.

108. Shephard G.S., Thiel P.G., Stockenstrom S., Sydenham E.W. Worldwide survey of fumonisin contamination of corn and corn-based products // J. AOAC Int. 1996. V. 79. №3. P. 671 -687.

109. Thiel P.G., Sydenham E.W., Shephard G.S., Schalkwyk D.J. Study of the reproducibility characteristics of a liquid chromatographic method for the determination of fumonisins B1 and B2 in corn: IUPAC Collaborative Study // J. AOAC Int. 1993.V. 76. № 2. P. 361 - 366.

110. Williams L.D., Meredith F.I., Riley R.T. Fumonisin-ortho-phthalaldehyde derivative is stabilized at low temperature // J. Chromatogr. B. 2004. V. 806. № 2. P. 311-314.

111. Yilmaz N., Tuncel N. B. An alternative strategy for corn drying (Zea mays) resulted in both energy savings and reduction of fumonisins B1 and B2// Int. J. Food Sci. Tech. 2010. V. 45. № 3. P. 621 - 628.

112. Dilkin P., Mallmann C.A., Almeida C.A., Correa B. Robotic automated clean-up for detection of fumonisins B1 and B 2 in corn and corn-based feed by highperformance liquid chromatography // J. Chromatogr. A. 2001. V. 925. P. 151 - 157.

113. Churchwell M.I., Cooper W.M., Howard P.C., Doerge D.R. Determination of fumonisins in rodent feed using HPLC with electrospray mass spectrometric detection // J. Agric. Food Chem. 1997. V. 45. № 7. P. 2573 - 2578.

114.Vukovic G., Pavlovic S., Ristic M., Lazic S. Determination of fumonisins Bl, B2 and B3 in herbal teas and medicinal plants by liquid chromatography/tandem mass spectrometry // Book of Abstracts/ 4th Int. Symp. on Recent Advances in Food Analysis. 2009. P. 369.

115. Sydenham E.W., Wentzel C.A., Gelderblom W.C.A., Thiel P.G., Marasas W.F.O. Evidence for the natural occurrence of fumonisin Bl, a mycotoxin produced by Fusarium moniliforme in corn // J. Agric. Food Chem. 1990. V. 38. № 1. P. 285 -290.

116. Shephard G.S., Berthiller F., Burdaspal P., Crews C., Jonker M.A., Krska R., MacDonald S., Malone B., Maragos C., Sabino M., Solfrizzo M., Egmond H.P. van and Whitaker T.B.Developments in mycotoxin analysis: an update for 2009-2010 // World Mycotoxin J. 2011. V. 4. № 1. P. 3-28.

117. Shephard G.S., Berthiller F., Burdaspal P., Crews C., Jonker M.A., Krska R., MacDonald S., Malone B., Maragos C., Sabino M., Solfrizzo M., Egmond H.P. van and Whitaker T.B.Developments in mycotoxin analysis: an update for 2010-2011 // World Mycotoxin J. 2012. V. 5. № 1. P. 3-30.

118. Plattner R.D., Norred W.P., Bacon C.W., Voss K.A., Peterson R., Shackelford D.D. Weisleder D. A method of detection of fumonisins in corn samples

associated with field cases of equine leukoencephalomalacia // Mycologia. 1990. V. 82. № 6. P. 698 - 702.

119. Razzazi-Fazeli E., Rabus B., Cecon B. Simultaneous quantification of A-trichothecene mycotoxins in grains using liquid chromatography atmospheric pressure chemical ionisation mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2002. V.968. № 1/2. P. 129-142.

120. Lagana A., Curini R., D. Ascenzo G., De Leva /., Faberi A., Pastorini E. Liquid chromatography/tandem mass spectrometry for the identification and determination of trichothecenes in maize // Mass Spectrom. 2003. V. 17. № 10. P. 1037-1043.

121. Cavaliere C., D'Ascenzo G., Foglia P., Pastorini E.,Samperi R., Lagana A. Determination of type B trichothecenes and macrocyclic lactone mycotoxins in field contaminated maize // J. Food Chem. 2005. V. 92. № 3. P. 559-568.

122. Schuhmacher R., Berthiller F., Buttinger G., Krska R. Simultaneous determination of type A- & B-trichothecenes and zearalenone in cereals by High Performance Liquid Chromatography- Tandem Mass Spectrometry // Mycot. Res. 2005. V. 21. №.4. P. 237-240.

123. Biselli S., Hummert C. Development of a multicomponent method for Fusarium toxins using LC-MS/MS and its application during a survey for the content of T-2 toxin and deoxynivalenol in various feed and food samples // Food Addit. Contam. 2005. V. 22. № 8. P. 752-760.

124. Monbaliu S., Poucke Van C., Detavernier C., Dumoulin F., Velde Van de M., Schoeters E., Dyck Van S., Averkieva O., Peteghem Van C., Saeger de S. Occurrence of mycotoxins in feed as analyzed by a multi-mycotoxin LC-MS/MS method // J. Agric. Food Chem. 2010. V. 58. № 1. P. 66-71.

125. Sorensen L. K., Elbaek T. H. Determination of mycotoxins in bovine milk by liquid chromatography tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. B. 2005. V. 820. №2. P. 183-196.

126. Mavungu J. D. D., Monbaliu S., Scippo M., Maghuin-Rogister G., Schneider Y., Larondelle Y, Callebaut A., Robbens, J., Van Peteghem C., De Saeger

S. LC-MS/MS multi-analyte method for mycotoxin determination in food supplements // Food Addit.Contam. 2009. V. 26. № 6. P. 885 - 895.

127. Kokkonen M. K., Jestoi M. N. A Multi-compound LC-MS/MS method for the screening of mycotoxins in grains// Food Anal. Methods. 2009. V. 2. № 2. P. 128140.

128. Desmarchelier A.,Oberson J.-M., Telia P., Gremaud E., Seefelder W. Mottier P. Development and comparison of two multiresidue methods for the analysis of 17 mycotoxins in cereals by liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry //J. Agric. Food Chem. 2010. V. 58. № 13. P. 7510-7519.

129. Shephard G.S., Berthiller F., Burdaspal P., Crews C., Jonker M.A., Krska R., Lattanzio V.M.T., MacDonald S., Malone B., Maragos C., Sabino M., Solfrizzo M., Egmond H.P., Whitaker T.B. Developments in mycotoxin analysis: an update for 2011-2012 // World Mycotoxin J. 2013. V. 6. № 1. P. 3-30.

130. Meister U. Analysis of T-2 and HT-2 toxins in oats and other cereals by means of HPLC with fluorescence detection // Mycot. Res. 2008. V. 24. № 1. P. 3139.

131. Seidel V., Poglits E., Schiller K., Lindner W. Simultaneous determination of ochratoxin A and zearalenone in maize by reversed-phase high performance liquid chromatography with fluorescence detection and P-cyclodextrin as mobile phase additive // J. Chromatogr. A . 1993. V. 635. № 2. P. 227-235.

132. Eke Z., Kende A., Torkos ^.Simultaneous detection of A and B trichothecenes by gas chromatography with flame ionization or mass selective detection//Microchem. J. 2004. V. 78. № 2. P. 211 - 216.

133. Jelen H. H., Wasowicz E. Determination of trichothecenes in wheat grain without sample cleanup using comprehensive two-dimensional gas chromatography-time-of-flight mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2008. V. 1215. № 1/2. P. 203207.

134. Schollenberger M, Lauber U., Jara H., Suchy S., Drochner W., Mueller H. M. Determination of eight trichothecenes by gas chromatography-mass spectrometry

Ill

after sample clean-up by a two-stage solid-phase extraction//! Chromatogr. A. 1998. V. 815. № l.P. 123 - 132.

135. Seidel V., Lang В., FraiBler S., Lang C., Schiller K, Filek G., Lindner W Analysis of trace levels of trichothecene mycotoxins in austrian cereals by gas chromatography with electron capture detection // Chromatographia. 1993. V. 37. №. 3/4. P. 191 -201.

136. Грушко Г. В., Линченко С.H., Хан B.B. Биохимические и токсикологические особенности микотоксинов, продуцируемых грибами -патогенами озимой пшеницы // Успехи современного естествознания. 2005. № 8. С. 74-78.

137. ГОСТ Р 53162-2008. Продукты пищевые. Определение афлатоксина В1 и общего содержания афлатоксинов В1, В2, Gl и G2 в зерновых культурах, орехах и продуктах их переработки. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Москва: Изд-во стандартов, 2008. 15 с.

138. МУ 5177-90. Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) и зеараленона в зерне и зернопродуктах. Москва: Изд-во стандартов, 1990. 5 с.

139. МУ 3184-84. Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье. Москва: Изд-во стандартов, 1984. 5 с.

140. МУК 4.1.2204-07. Методические указания «Обнаружение, идентификация и количественное определение охратоксина А в продовольственном сырье и пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии». Москва: Изд-во стандартов, 2007. 6 с.

141. ГОСТ 28038-89. Продукты переработки плодов и овощей. Метод определения микотоксина патулина. Москва: Изд-во стандартов, 1989. 8 с.

142. ГОСТ Р ИСО 13528. Статистические методы. Применение при экспериментальной проверке компетентности посредством межлабораторных сравнительных испытаний. Москва: Стандартинформ, 2012. 62 с.

143. Minoru Ohta, Kenji Ishii, Yoshio Ueno Metabolism of Trichothecene Mycotoxins // J. Biochem. 1977. V. 82. P. 1591-1598.

144. Valenta H., Danicke S., Doll S. Analysis of deoxynivalenol and de-epoxy-deoxynivalenol in animal tissues by liquid chromatography after clean-up with an immunoaffmity column // Mycotoxin Research. 2003. V. 19. P. 51-55.

145. Галяутдиноеа Г.Г., Егоров В.К, Папуниди Э.К., Иванов А. В. Ветеринарно-санитарная оценка продуктов животноводства при сочетании воздействия пиретроида и микотоксина // Современная микология в России. Том 2. Тезисы докладов Второго съезда. М.: Национальная академия микологии. 2008. С. 248.

146. ГОСТ 30711-2001. Продукты пищевые. Методы выявления и определения содержания афлатоксинов В1 и Ml. Москва: Изд-во стандартов, 2001. 16 с.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.