Разработка отечественных реагентов для решения задач молекулярно-генетического тестирования в клинической трансплантологии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Сергеев, Илья Викторович

• Сергеев, Илья Викторович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сергеев, Илья Викторович

Содержание.

Список использованных в работе сокращений.

Введение.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ: МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В СОВРЕМЕННОЙ КЛИНИЧЕСКОЙ ТРАНСПЛАНТОЛОГИИ.

1.1 Иммуногенетика.

1.2 Геномика главного комплекса тканевой совместимости человека.

1.3 Иммуногенетика и транстантология.

1.4 Вирусы - возбудители латентных инфекций в условиях посттрансплантационной иммуносупрессии.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Материал дчя исследований.

2.2 Выделение ДНК.

2.3 Дизайн, синтез и очистка олигонукл еотидов.

2.4 Оборудование для проведения ПЦР в реальном времени.

2.5 Определение концентрации плазмидной ДНК.

2.6 Параметры, испочьзуемые для описания ПЦР в реальном времени.

2.7 Секвенирование по Сэнгеру.

2.8 Статистика.

2.9 Использованное в работе программное обеспечение и базы данных.

3. Результаты и обсуждение.

3.1 Метод типирования локуса DRB1 на уровне групп аллелей на основе метода ПЦР в реальном времени.

3.2 Анализ эффективности подбора доноров почки дчя гомозиготных по HLA-DRB1 реципиентов.

3.3 Метод количественного определения латентных инфекций HSV 1 и 2, CMV, ЕВ V, ВК на основе метода ПЦР в реальном времени.

3.4 Метод типирования гена MIC-A на уровне групп аллелей на основе метода фрагментного анализа.

3.5 Обсуждение результатов.

4. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка отечественных реагентов для решения задач молекулярно-генетического тестирования в клинической трансплантологии»

Актуальность работы.

Клиническая трансплантология является сегодня одной из быстро развивающихся высокотехнологичных и многопрофильных областей современной медицины. Успешность операций, проводимых клиническими трансплантологами, зависит во многом от эффективности внедрения современных иммуно- и молекулярно-генетических методов. Такими методами на данный момент являются иммуногенетическое тестирование при подборе совместимых пар донор-реципиент и мониторинг вирусных инфекций в условиях посттрансплантационной иммуносупрессии.

К сожалению, на сегодняшний день количество операций по трансплантации органов в России крайне мало: за 2008 год - 29 трансплантаций сердца, 73 трансплантации печени, не более 800 трансплантаций почек [66], причём 4/5 общего числа операций выполняется в Москве. Потребность в подобных операциях в сотни раз выше.

Развитие клинической трансплантологии в России напрямую зависит не только от эффективной работы лечебных центров, создания единого организационного механизма обеспечения донорскими органами, совершенствования законодательной базы, включающей организационно-правовые и этические аспекты донорства, но и от координации усилий ученых и врачей в создании отечественных реагентов, необходимых для развития данной области медицины.

Разработанный в ходе данной работы метод типирования локуса НЬЛ-ЭКВ1 на основе метода ПЦР в реальном времени позволяет существенно сократить время анализа, снизить трудоёмкость и минимизировать риск контаминации лаборатории продуктами ПЦР. Кроме того, в отличие от существующих сегодня отечественных реагентов и большей части их импортных аналогов, разработанный метод может быть полностью автоматизирован, что имеет принципиальное значение как с точки зрения снижения влияния человеческого фактора, так и при организации лабораторий, ориентированных на проведение больших объемов исследований. Из этого следует, что данный метод может эффективно использоваться как в случае типирования посмертных доноров при органной трансплантации, когда требуется быстрое получение результата, так и в случае создания регистров доноров костного мозга, когда требуются масштабные скрининговые исследования.

Проведенное генотипирование образцов ДНК, выделенных из клеток крови реципиентов листа ожидания пересадки Московского координационного центра органного донорства, показало, что результаты типирования могут нести не только практическое значение, но и являться базисом для теоретических выводов. На основании полученных результатов установлено достоверное превышение процента ША-БИМ гомозигот среди реципиентов клиники трансплантации почки по сравнению с частотами гомозигот в популяции. В ходе данной работы обоснована целесообразность использования метода селективного подбора НЬА-011В1 гомозиготных доноров для НЬА-Б11В1 гомозиготных реципиентов.

Кроме того, на единой технологической основе разработаны реагенты, позволяющие проводить мониторинг наличия и количества возбудителей латентных инфекций, что является необходимым требованием в условиях посттрансплантационной иммуносупрессии.

В последнее время в научной литературе появляется всё больше публикаций, подтверждающих, что в случае подбора пары донор-реципиент при пересадке кроветворных стволовых клеток требуется учитывать совпадение донора и реципиента по гену М1С-А, так как отсутствие такового приводит к реакции отторжения «трансплантат против хозяина». В ходе данной работы был разработан и апробирован на популяционной выборке метод типирования гена М1С-А, который в перспективе может быть внедрен в рутинную практику клинической трансплантологии.

Цель исследования.

Разработать комплекс ключевых иммуно- и молекулярно-генетических методов, необходимых для лабораторного обеспечения клинической трансплантологии.

Задачи исследования.

1. Разработать и апробировать метод типирования локуса НЬА-1ЖВ1 на уровне групп аллелей на основе метода ПЦР в реальном времени.

2. Провести анализ эффективности подбора доноров почки для гомозиготных по НЬА-ОКВ1 реципиентов.

3. Разработать и апробировать метод количественного определения латентных инфекций HSV 1 и 2, CMV, EBV, ВК.

4. Разработать и апробировать метод типирования гена MIC-A на уровне групп аллелей.

Научная новизна работы.

Впервые в отечественной практике разработана методика типирования локуса DRB1 на уровне групп аллелей на основе метода ПЦР в реальном времени.

Проведено генотипирование образцов ДНК, выделенных из клеток крови реципиентов листа ожндания пересадки Московского координационного центра органного донорства. Впервые установлено достоверное превышение процента HLA-DRB1 гомозигот среди реципиентов клиники трансплантации почки по сравнению с частотой гомозигот в популяции. Обоснована целесообразность использования метода селективного подбора HLA-DRB1 гомозиготных доноров для HLA-DRB1 гомозиготных реципиентов.

Впервые в отечественной практике разработана методика комплексного количественного определения латентных инфекций HSV 1 и 2, CMV, EBV, ВК на основе метода ПЦР в реальном времени.

Впервые получены данные о частоте встречаемости аллелей генов HLA MIC-A в русской популяции среди здоровых индивидуумов. Созданные молекулярно-генетические реагенты доступны для широкого применения в клинической трансплантологии, а также позволяют проводить исследования роли HLA-полиморфизма в таких прикладных разделах иммуногенетики, как «HLA и аутоиммунные заболевания», «HLA и инфекционные заболевания», «HLA и репродукция». Также данные реагенты могут использоваться в популяцнонно-генетических исследованиях.

Практическая значимость работы.

Молекулярно-генетические компоненты для типирования локуса DRB1 на уровне групп аллелей на основе метода ПЦР в реальном времени, как и возможность быстрого и точного определения вирусной нагрузки в образцах, взятых у пациентов трансплантологических отделений, открывают принципиально новые возможности в области прикладной клинической трансплантологии. Низкая трудоёмкость и быстрота получения результатов делают первый из приведённых методов незаменимым для быстрого подбора пар «донор-реципиент» при органной трансплантации. Возможность автоматизировать работу лаборатории для массового генотипирования послужит предпосылкой для создания крупных регистров доноров, необходимых для проведения пересадок кроветворных стволовых клеток. Именно последний вид трансплантации на сегодняшний день является не только методом радикального лечения целого ряда онкогематологических заболеваний среди взрослого и детского населения, но и методом лечения последствий радиационного и химического поражения кроветворной и иммунной систем человека.

В мире в настоящее время трансплантации кроветворных стволовых клеток проводятся при полной НЬА совместимости между донором и реципиентом. Под полной НЬА совместимостью понимается совместимость по генам НЬА класса I (А, В, С локусы), НЬА класса II генов БКВ1, Б0В1. Желательна совместимость по генам НЬА БРВ1 (класс II) и М1С-А(класс I). Анализ последних литературных данных позволяет предположить, что совместимость по гену М1С-А в ближайшее время будет также признана необходимой. В этом случае разработанный метод типирования аллелей гена М1С-А будет востребован не только иммуногенетиками и популяционными генетиками, но и клиническими трансплантологами.

Работа выполнялась в рамках заданий ФМБА по темам: «Разработка оригинальных тест-систем на основе молекулярно-генетических методов в интересах ФМБА России для обеспечения биобезопасности населения, в условиях возможного радиационного и/или химического поражения: скринингового НЬА-генотипирования потенциальных доноров кроветворных стволовых клеток» (2006-2008гг.), «Разработка биомедицинской технологии НЬА- типирования, отвечающей международным стандартам, для использования в системе ФМБА России при лечении профессиональных заболеваний» (2007-2009гг.), а также международного проекта «Разработка иммунотерапевтических стратегий для лечения гематологических и неопластических заболеваний на основе оптимизированных аллогенных пересадок стволовых клеток», участником которого является ГНЦ «Институт иммунологии ФМБА России». Работа финансово поддерживалась грантами Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» на 2002-2006 годы (проекты ЖС-КП.5/002 и 2006-РИ-34.0/002/081) и «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы» (проекты 2007-2-2.2-04-04 и 2007-2-1.2-04-02-116).

Публикации.

Материалы диссертации изложены в 13 публикациях, в том числе 1 публикация в научном издании, рекомендованном ВАК для опубликования научных результатов диссертаций на соискание ученой степени доктора и кандидата наук, 5 статьей в научной печати, 7 публикаций в материалах отечественных и зарубежных конференций и конгрессов.

Структура и объем работы.

Материалы диссертации доложены на 92 страницах машинописного текста. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, раздела «Материалы и методы», раздела «Результаты и обсуждение», выводов и списка литературы. Работа включает 8 рисунков и 10 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Сергеев, Илья Викторович

5. ВЫВОДЫ.

Разработан и апробирован метод типирования локуса HLA DRB1 на уровне групп аллелей на основе ПЦР в реальном времени.

Обоснована целесообразность использования метода селективного подбора HLA-DRB1 гомозиготных доноров для HLA-DRB1 гомозиготных реципиентов.

Разработана методика комплексного количественного определения латентных инфекций HSV 1 и 2, CMV, EBV, ВК на основе метода ПЦР в реальном времени.

Разработан метод типирования гена М1С-А на уровне групп аллелей.

Определены частоты групп аллелей гена MIC-A в русской популяции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

Мальков И.Г., Трофимов Д.Ю., Петрова Т.В., Павлова О.Г., Сергеев И.В., Алексеев Л.П. Создание комплекса приборов и реагентов для диагностики и мониторинга ассоциированных с иммунологической недостаточностью инфекционных заболеваний. Аллергия, астма и клиническая иммунология, 2001, №1. С.108-109.

Болдырева М.Н., Грудакова Е.Г., Кабдулова Д.О., Гуськова И.А., Богатова О.В., Сергеев И.В., Трофимов Д.Ю., Алексеев Л.П. Создание ПЦР-наборов для молекулярно-генетического типирования генов главного комплекса гистосовместимости человека (HLA) разного уровня разрешения. Аллергия, астма и клиническая иммунология, 2001, №1. С.161-162.

Sechkin А.V., Alexeev L.P., Dolbin A.G., Boldyreva M.N., Dmitrieva N.G., Sergeev I.V., Trofimov D.Yu., Smirnov V.L. Effective use of a regional limited waiting list fro renal transplants at the selection based on HLA DRB1 genotyping. Europ. J. of Immungen., Vol.28 N.2. P.261.

Сергеев И.В., Трофимов Д.Ю., Грудакова Е.Г., Алексеев Л.П. Изучение полиморфизма неклассических генов HLA в русской популяции. 5-п конгресс РААКИ Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии. 12-14 ноября 2002 г. Сборник трудов, том2. С. 197.

Trofimov D.Yu., Sergeev I.V., Groudakova E.G., Alexeev L.P. The MIC-A alleles' frequencies in healthy Russians and in type I diabetic patients. Europ. J. of Immungen., Vol.29. N2. P. 147.

Boldyreva M., Kabdulova D., Zelov A., Evseeva I., Rahimova D., Osokina I., Sergeev I., Dedov I., Alexeev L. HLA haplotypes determined among Caucasians and Orients correlated to Type I diabetes. Europ. J. of Immungen., Vol.29. N2. P. 146

Sergeev I.V., Trofimov D.Yu., Groudakova E.G., Alexeev L.P. Nonclassic HLA genes polymorphism in Russian population. 15th European Immunology Congress EFIS 2003. Rhodes, Greece. June 8-12, 2003. P.154.

Boldyreva M.N., Trofimov D.Yu., Yankevich Т.Е., Bogatova O.V., Gouskova I.A., Philippova E.V., Sergeev I.V., Alexeev L.P. HLA-genes diversity among 5 Russian groups from different regions of Russian European part. May 2003. Vol.4, Suppl.l, P.S29. 17th European Histocompatibility Conference. 11 Annual Meeting. German Society of Immunogenetics. Baden-Baden, Germany May 6-9, 2003. P.29.

Sergeev I.V., Trofimov D.Yu., Groudakova E.G., Alexeev L.P. Diversity of nonclassical HLA genes among Russians. 17th European Histocompatibility Conference. 11 Annual Meeting. German Society of Immunogenetics. Baden-Baden, Germany. May 6-9, 2003. P.29.

Болдырева M.H., Хаитов P.M., Барцева О.Б., Гузов И.И., Барко И.Ю., Померанцева Е.И., Богатова О.В., Гуськова И.А., Янкевич Т.Э., Хромова Н.А., Сергеев И.В., Филиппова Е.В., Алексеев Л.П. Исследование роли HLA-DRB1-генов при невынашивании беременности неясного генеза. Иммунология, 2004, №1, Т.25, С.4-8.

Трофимов Д.Ю., Рагимов А.А., Абрамов Д.Д., Кадочникова В.В., Гончарова Е.В., Сергеев И.В., Хаитов P.M., Алексеев Л.П. Популяционно-иммуногенетическая характеристика русской популяции в части генетических полиморфизмов, значимых для иммунного статуса человека. Физиология и патология иммунной системы, 2009, №2, С.3-7.

Борисова Л.В., Яздовский В.В., Болдырева М.Н., Сергеев И.В. Особенности распределения HLA-аллелей I и II классов в чувашской популяции. Физиология и патология иммунной системы, 2009, №3, С.28-35.

Долбин А.Г., Минина М.Г., Сергеев И.В., Кофиади И.А., Хаитов М.Р., Трофимов Д.Ю., Болдырева М.Н., Алексеев Л.П. Новые возможности поиска HLA-совместимых доноров для реципиентов листа ожидания почечного трансплантата. Физиология патология иммунной системы, 2009, №4, С.21-26. I

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сергеев, Илья Викторович, 2009 год

1. Алексеев Л.П., Дедов И.И., Болдырева М.Н. Зилов A.B., Хаитов P.M. HLA-гены маркеры инсулин-зависимого сахарного диабета, этнические аспекты. // Иммунология., 2003. Т. 24, №5., С.308-311.

2. Вейр Б. Анализ генетических данных // М.: «Мир». 1995.

3. Данович Г.М. Руководство по трансплантации почки // М.: «Триада». 2004.

4. Долбин. А.Г. Трансплантология, руководство//М.: «Медицина». 1995.

5. Евсеева И.В. Уэлс С. Тонкс С. Бодмер Дж. Генетический полиморфизм генов иммунного ответа I класса в коренных популяциях Европейского Севера России //Иммунология., 2001.,№5., С.27-30.

6. Животовский Л.А. Популяционная биометрия // М.: «Наука». 1991.

7. Пальцев М.А., Хаитов P.M., Алексеев Л.П. Иммуногенетика человека и биобезопасность // М.: «Медицина». 2009.10.

8. Пирогов Н. И. Избранные труды // М., 1967.

9. Пирогов Н. И. О пластических операциях вообще, о ринопластике в особенности // Собрание сочинений. М., 1957., Т. 1, С. 100 -101.

10. Ребриков Д.В., Саматов Г.А., Трофимов Д.Ю., Семёнов П.А., Савилова A.M. Кофиади И.А, Абрамов Д.Д . ПЦР «в реальном времени» // М.: «Бином». 2009.

11. Ройт А. Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология // М.: «Мир». 2000.

12. Хаитов P.M. Физиология иммунитета. //Аллергия, астма и клин, иммунология., 2000., №2., С. 3-16 .

13. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. //Рос. физиол. журнал им.И.М.Сеченова., 2000., Т.86., №3. С. 252-267.

14. Хаитов P.M., Алексеев Л.П. Генетика иммунного ответа. //Иммунология., 1998., №5., С.11-15.

15. Хаитов P.M., Алексеев Л.П., Василов Р.Г. Молекулярно-генетические подходы к изучению системы HLA: новые возможности фундаментальных и прикладных исследований. //Бюл. эксперим. биол. и мед., 1994. №10., С.436-439.

16. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. // М.: «Медицина». 2002.

17. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. // М., ВИНИТИ, 2005., С.223.

18. Хаитов P.M., Алексеев Л.П. Геномика HLA: новые возможности молекулярной генетики человека в диагностике и терапии. // Молекулярная медицина., 2003. , №1., С. 17-31.

19. Чемерис A.B., Ахунов Э.Д., Вахитов В.А. Секвенирование ДНК // М.: «Наука». 1999.

20. Шумаков В.И. Трансплантация. // М., «Медицина». 1998.

21. Alexeev L.P., Dolbin A.G., Sechkin A.V. Renal transplants in Russia / Clinical Transplants 2000. Ed.MJ Cecka and P.I.Terasaki, Los Angeles., 2001., P.392-393.

22. Bach F., Kuperman O., Sollinger О. et al. Cellular immunogenetics and LD-CD collaboration./ Transplant. Proc. 9., 1977., P.859-863.

23. Bauer S., Groh V., Wu J., Steinle A., Philips JH., Lanier LL., Spies T. Activation of NK cells ad T cells by NKG2D, a receptor for stress-inducible MICA.// Science., 1999., Vol. 285., P. 727-729.

24. Beaucage S., Iyer R. The functionalization of oligonucleotides via phosphoramidite derivatives. //Tetrahedron., 1993., Vol. 49., P.1925-1963.

25. Benichou G. Direct and indirect antigen recognition: the pathways to allograft immune rejection. // Front Biosci., 1999., N4., P.476-480 .

26. Bodmer J., Bodmer W.F., Heyes J. et al. Indication of HLA-DP polymorphism with DPa and DPß probes and monoclonal antibodies: correlation with primed lymphocyte typing. // Proc. Natl. Acad.Sci.USA, 1987., Vol.84, P. 4596-4600.

27. Bodmer J.G., Marsh S.G., Albert E.D., Bodmer W.F., Bontrop R.E., Charron D., Dupont В., Erlich H.A., Fachet R., Mach В., Mayr W.R, Parham P., Sasazuki Т.,

28. Schreuder G.M.T., Strominger J.L., Svejgaard A. and Terasaki P.I. Nomenclature for factors of the HLA system. // Tissue antigens., 1996., Vol.49., P.297-321.

29. Bodmer W.P., Terasaki and D.Gjertson. HLA Polymorphism: Origin and Maintenance.// In HLA 1997 (ed. Terasaki P., Gjertson D.)., 1998., P.l-7.

30. Bodmer W. HLA: What's in a name? A commentary on HLA nomenclature development over years. //Tissue Antigens., 1997., Vol. 46., P. 293-296.

31. Bolognesi E., Dalfonso S., Rolando V., Fasano M.E., Pratico L., Momigliano-Richiardi P. MICA and MICB microsatellite alleles in HLA extended haplotypes. // Eur J Immunogenet., 2001 Oct., Vol. 28., №5., P.523-530.

32. Borel J.F., Feurer C., Gubler H.U., Stahelin H. Biological effects of cyclosporin A: a new antilymphocytic agent. // Agents Actions., 1976., Vol.6., P. 468 475.

33. Calne R. Y., White D.J.G., Thiru S. et al. Cyclosporin A in patients receiving renal allografts from cadaver donors. // Lancet., 1978., P. 1323 1327.

34. Cerundelo V., Alexander J., Anderson K. et al. Presentation of viral antigen controlled by a gene in the major histocompatibility complex. // Nature ., 1990., Vol.345., P. 449-452.

35. Cecka J. M., Terasaki P.I. Clinical transplants . // UCLA Immunogenetics Centre Los Angeles, California 2000., P .1- 707

36. Cohen C.R., Gichui J., Rukaria R., Sinei S.S., Gaur L.K., Brunham R.C.Immunogenetic correlates for Chlamydia trachomatis-associated tubal infertility. // Obstet. Gynecol., 2003., Vol. 101., №3., P. 438-44.

37. Cohen R., Metzger S., Nahir M., Chajek-Shaul T. Assotiation of the MIC-A gene and HLA-B51 with Behcet's disease in Arabs and non-Ashkenasi Jews in Israel.// Ann Rheum Dis., 2002 Feb., Vol.61., №2., P.157-160.

38. Cozzi E., Besenzon F., Bosio E., Valente M., Seveso M. Antibody-medated rejection: an update. // Organs, tissues and cells., 2009., Vol. 12., P. 97-105.

39. Dausset J., Contu L. Is the MHC a General Self-Reconnition System Playing a Major Unifying Role in an Organism? // Human Immunol., 1980., Vol.1., P.5-17.

40. Deng GY., Muir A., Maclaren NK: She J-X: Association of LMP2 and LMP7 genes within the major histocompatibility complex with insulin-dependent diabetes mellitus: population and family studies. // Am.J.Hum.Genet., 1995., Vol.56., P.528-553.

41. Didenko V.V. DNA probes using fluorescence resonance energy transfer: designs and application//Biotechniques., 2001., Vol.31., P.1106-1116.

42. Ellis S.A., Palmer M.S., McMichael A.J. Human trophoblast and the choriocarcinoma cell line be Wo express a truncated HLA class I molecule. // J.Immunol., 1990., Vol. 144., P.731-735.

43. Erlich H., Stetler D., Sheng-Dong R. et al. Analysis by molecular cloning of human class. // II genes. Fed. Proc., 1984., Vol.43., P. 3025-3030.

44. Fehr T., Bossart W., Wahl C., Binswanger U. Disseminated varicella infection in adult renal allograft recipients: four cases and a review of the literature. // Transplantation., 2002., Vol.73., № 4., P. 608-611.

45. Goodchild J. Conjugates of oligonucleotides and modified nucleotides: a review of their synthesis and properties. // Bioconjugate Chem., 1990., V. 1., N. 3., P165-187.

46. Hariharn S., Cohen E.P., Vasudev B., BKV specific antibodies and BKV DNA in renal transplant recipients with BKV nephritis. // Am J Transplant., 2005., Vol.5., P.2719-2724.

47. Heid, C. A., Stevens, J., Livak, K. J., Williams, P. M. Real Time Quantitative PCR. // Genome Res., 1996., Vol.6., P.986-994.

48. Higashi Y., Tanae A., Inoue H.H. et al. Evidence for frequent gene conversion in the steroid 21-hydroxylase P-450 gene (C21) gene: implications for steroid 21 hydroxylase deficiency. //Am. J.Hum. Genet., 1988., Vol.42., P.17-25.

49. Jaaskelainen A.J., Piiparinen H., Lappalainen M., Vaheri A., Improved multiplex-PCR and microarray for herpesvirus detection from CSF. // J Clin Virol., 2008 Jun., Vol.42., №2., P. 172-175.

50. Janeway C.A. Functions of the MHC: Presentation of Antigens to T cells. /Plenaryreport at ASHI 23rd Annual Meeting, October 14-19, 1997, Atlanta, Georgia, P. 2742.

51. Ju J., Kheterpal I., Scherer J., Ruan c., Fuller C., Glazer A. , Design and synthesis of fluorescence energy transfer ye-labeled primers and their application for DNA sequencing and analysis. //Analytical Biochemistry., 1995., Vol.231., P.131-140.

52. Khameneh Z.R., Soin J., Durlik. Factors affecting reactivation of Epstein-Barr virus infection after kidney allograft transplantation. // Ann Transplant .,1999., Vol.4., №2., P. 18-22.

53. Khanna A. and Campbell R.D. Characterization of a novel gene G13 in the class III region of the human MHC. // In HLA 1991 (eds K.Tsuji, M.Aizawa and T.Sasazuki)., Oxford University Press, Oxford., 1992., P.198-202.

54. Manyalich M., Costa A.N., Paez. GIRODaT 2008 international donatio a and trsnsplantation activity. // Organs, tissues and cells, 2009., Vol.12., P.97-105

55. Marras S.A., Kramer F.R., Tuagi S. Efficiencies of fluorescence resonanse enerev transfer and contact-mediated quenching in oligonucleotide probes // Nucleic Asids Res., 2002., Vol.30., P. 122.

56. Marshall R.L., Laffler T.G., Cerney M.B., Sustachek J.C., Kratochvil j j^ Morgan R.L. // PCR Methods Appl., 1994., V. 4., P. 80-84.

57. Marx P.A., Chen Z. The function of simian chemokine receptors in the replication of SIV. //Semin. Immunol., 1998., Vol.10., №3., P.215-223.

58. Mason PD, Robinson CM, Lechler RI. Detection of donor-specific hyporesponsiveness following late failure of human renal allografts. // Kidney Int 1996., Vol. 50., P.1019-1025.

59. Milner C.M. and Campbell R.D. Polymorphic analysis of the three MHC-Iinked HSP70 genes. // In HLA 1991 (eds K.Tsuji, M.Aizawa and T.Sasazuki), Oxford university Press, Oxford. Moller G., 1992., P.157-161.

60. Mizuki N., Ota M., Kimura M.,et al. Triplet repeat polymorphism in the transmembrane region of the MICA gene: strong association of six GCT repetitions with Behcet disease. // Proc. Net. Acad. Sci., 1997., Vol.94., P.1298-1303.

61. Molinero L.L., Marcos C.Y., Mirbaha F., Fainboim L., Stastny P., Zwirner N.W. Codominant expression of the polymorphic MICA alloantigens encoded by genes in the HLA region. // Eur J Immunogenet., 2002 Aug., Vol.29., №4., P.315-319.

62. Murray J.E., Merrill J.P., Harrison J.H. Renal homotransplantation in identical twins // Surg. Forum., 1955., Vol. 6., P. 432 436.

63. Muti G., Cantoni S., Oreste P. et al. Post-transplant lymphoproliferative disorders: improved outcome after clinico-pathologically tailored treatment. // Haematologica., 2002., Vol.87., №1., P. 67-77.

64. Nast C.C., Moudgil A., Zuo X.J. et al. Long-term allograft acceptance in a patient with posttransplant lymphoproliferative disorder correlation with intragraft viral interleukin-10. // Transplantation., 1997., Vol.64., №11., P. 1578-1582.

65. Nickeleit V., Klimkait T., Binet I.F. Testing for polyomavirus type BK DNA in plasma to identify renal-allograft recipient with viral nephropathy. // N Engl J Med., 2000., Vol.342., P.1309-1315.

66. Nunnally B.K., He H., Li L.C., Tucker S.A., McGown L.B. Characterization of visible dyes for four-decay fluorescence detection in DNA sequencing.//Anal Chem., 1997., Vol.69., P.2392-2397.

67. Opelz G.: Factor influencing long-term graft loss. // The Collaborative Transplant Study. Transplant.Proc., 2000, May., Vol.32., №3.,P. 647-549.

68. Orr HT. HLA class I gene family: characterization of genes encoding non-HLA-A, B, C proteins. // In Immunobiology of HLA, Vol. II (ed. B.Dupont) Springer-Verlag, New York., 1989., P.33-39.

69. Perez-Rodriguez M., Arguello J.R., Fischer G., Corell A., Cox S.T., Robinson J., Hossain E., McWhinnie A., Travers P.J., Marsh S.G., Madrigal J.A. Further polymorphism of the MICA gene. // Eur J Immunogenet., 2002 ,Feb., Vol.29., №1., P.35-46.

70. Permuller D.H., Dinarello C.A., Punsal P.I. et al. Cache tin/tumor necrosis factor regulates hepatic acute-phase gene expression. // J.Clin.invest., 1986., Vol.78., P.1349-1354.

71. Purighalla R., Shapiro R., McCauley J., Randhawa P. BK virus infection in a kidney allograft diagnosed by needle biopsy. // Am J Kidney Dis., 1995., Vol.26., P.671-673.

72. Rees M.T., Dowling J., Darke C. A typing system for the major histocompatibility complex class I chain related genes A and B using polymerase chain reaction with sequence-spesific primers. // Genet Test., 2005 Summer., Vol.9., №2. P. 93-110.

73. Reusser P., Cathomas G., Attenhofer R. et al. Cytomegalovirus specific T-cell immunity after renal transplantation mediates protection from CMV disease by limiting the systemic virus load. // J Infect Dis .,1999., Vol.180., №2., P.247-253.

74. Rogers N. and Lechler R. I. Allorecognition. // Am. J. of Transplantation., 2001., Vol.1., P.97-102.

75. Ruddy S. Component deficiencies. 3. The second component. // Prog.Allergy., 1986., Vol.39., P.250-266.

76. Rynes RI. Inherited complement deficiency states and SLE. // Clin. Rheum. Dis., 1982., Vol. 8., P.29-47.

77. S. David Hudnall, Tiansheng Chen, Paul Allison, Stephen K. Tyring, and Ashley Heath, Herpesvirus prevalence and viral load in healthy blood donors by quantitative real-time polymerase chain reaction. // Transfusion., 2008., Vol.48 16., P. 1180—1187.

78. Sanger F., Niclein S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1977., Vol.74., P.5463-5467.

79. Sargent CA, Dunham I, Trowsdale j et al. Human major histocompatibility complex contains genes for the major heat shock protein HSP70. // Proc.Natl.Acad. Sci.USA 86: 1968-1972. 1989

80. Segers A., Tezcan C., DeSmet W. et al. Only a limited set of HLA epitopes is associated with organ graft loss. / Book of abstracts Transplant 98. The transplantation society, XVII World Congress, Montreal., 1998., P.73

81. Selvin P.R. Fluorecence resonance energy transfer. // Methods Enzimol., 1995., Vol.246., P.300-334.

82. Servenious B., Gustafsson K., Widmark E. et al. Molecular map of the human HLA-SB (HLA-DP) region and sequence of an SB-alpha (DP-alpha) pseudogene. // EMBO J., 1984., Vol.3., P. 3209-3214.

83. Sherman L.A., Cattopadhyan S. The molecular basis of allorecognition // Ann. Rev Immunol., 1992., Vol.11., P. 385-402.

84. So R. Structure and Assembly of Class I and Class II Molecules. HLA and Disease. // Academic Press., 1994., P.35-45.

85. Spies T., Morton C.C., Nedospasov S.A. et al. Genes for the tumor necrosis factors alpha and beta linked to the human major histocompatibility complex. // Proc.Nati.Acad. Sci.USA., 1986., Vol.83., P.8699-8702.

86. Suemizu H., Radosavljevic M., Kimura M., Sadahiro S., Yoshimura S., Bahram S., Inoko H. A basolateral sorting motif in the MICA cytoplasmic tail. // Proc Natl Acad Sci U S A., 2002 Mar., Vol.99., №5., P.2971-2976.

87. Tokunaga K.,Omoto K., Yukiyama Y. et al. Further study or a Bf silent allele. // Hum. Genet., 1984., Vol.67., P.449-451.

88. Van Es A., Baldwin W.M., Oljans P.J. et al. Expression of HLA-DR on T-lymphocytes following renal transplantation, and association with graft rejection episodes and cytomegalovirus infection. // Transplantation., 1984., Vol.37., P.65-67.

89. Warrell M.J., Chinn I., Morris P.J., Morris J.O. The effects of viral infection on renal transplants and their recipients. // Q J Med., 1980., Vol.498., P. 219.

90. Whitcombe D., Theaker J., Guy S. P., Brown T., Little S. Detection of PCR Products Using Self-probing Amplicons and Fluorescence. // Nat. Biotechnol., Vol.17., P. 804-807.

91. Winkelspecht B., Mueller-Lantzsch N., Kohler H. Serological evidence for reactivation of EBV infection due to uraemic immunodeficiency. //Nephrol JDial Transplant., 1997., Vol.12., №10., P. 2099-2104.

92. Yao Z., Volgger A., Helmberg W., Keller E., Fan L.A., Chandanayingyong D., Albert E.D. Definition of new alleles of MIC-A using sequencing-based typing. // Eur J Immunogenet., 1999 Apr-Jun., Vol.26., №2-3., P.225-232.

93. Zenker R. Etchische und rechtliche Probleme der Organstransplantation // München. 1979.111. www.allelefrequencies.net112. http://www.ebi.ac.uk/imgt/hla/stats.html