Совершенствование методов определения стафилококковых инфекций у животных и в сырье животного происхождения на основе ДНК- и иммунодиагностики тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат ветеринарных наук Розанов, Сергей Николаевич

• Розанов, Сергей Николаевич
• кандидат ветеринарных наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Розанов, Сергей Николаевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Золотистый стафилококк и его характеристика.

1.2. Стафилококковые и сопутствующие инфекции у животных, в сырье и продуктах животного происхождения.

1.3. Методы диагностики золотистого стафилококка и сопутствующих инфекций бактериальной и вирусной природы.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Цель и задачи исследования.

2.2. Объекты и методы исследований.

2.2.1. Микробиологические методы определения Staphylococcus aureus в биоматериале.

2.2.2. Выделение и очистка ДНК из бактерий.

2.2.3. Включение биотина в ДНК методом ник-трансляции.

2.2.4. Получение меченых ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции.

2.2.5. Методика идентификации бактерий точечной ДНК-гибридизацией на мембранных фильтрах с биотинилированными ДНК-зондами.

2.2.6. Методика идентификации парвовируса с применением тест-системы «ПАРВОВИР».

2.2.7. Методика определения стафилококковых и сопутствующих инфекций на основе амплификации с последующей ДНК-гибридизацией

2.2.8. Методика определения антигенов парвовируса собак с использованием тест-набора SNAP Parvo.

2.2.9. Методика выявления антигенов парвовирусного энтерита собак иммуноферментным анализом.

2.2.10. Статистическая обработка результатов.

2.3. Результаты исследований

2.3.1. Результаты мониторинговых исследований по выявлению Staphylococcus aureus и сопутствующих инфекций в биоматериале животных, в мясном сырье и субпродуктах.

2.3.2. Разработка и совершенствование методик определения Staphylococcus aureus и сопутствующих инфекций в мясном сырье, субпродуктах и биоматериале животных на основе амплификации с последующей ДНК-гибридизацией.

2.3.3. Усовершенствование определения парвовируса в биоматериале с использованием тест-системы IDEXX SNAP.

2.3.4. Разработка методики ускоренной индикации Staphylococcus aureus в сырье животного происхождения на основе точечной гибридизации со специфичными ДНК-зондами.

2.3.5. Сравнительный анализ микробиологических методов и методов ДНК-диагностики по выявлению Staphylococcus aureus в биоматериале животных, в сырье и субпродуктах животного происхождения.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование методов определения стафилококковых инфекций у животных и в сырье животного происхождения на основе ДНК- и иммунодиагностики»

Актуальность темы.

Стафилококковые инфекции достаточно широко распространены у различных животных. Основными проявлениями стафилококковой инфекции являются: гнойные воспаления кожи и подкожной клетчатки, стафилококковый сепсис, синдром токсического шока, пневмонии, ангины, энтероколиты, отравление стафилококковым энтеротоксином и поражение центральной нервной системы. Резервуаром инфекции коагулазопозитивных стафилококков являются грызуны, птицы, крупный и мелкий рогатый скот, собаки, кошки. При этом заболевание проявляется у всех возрастных групп, но в большей степени у молодняка. Высок риск взаимного заражения золотистым стафилококком животных и человека. Выделение возбудителя происходит с носовыми истечениями, фекальными массами, мочой, истечениями из половых органов (препуция и влагалища), гнойными выделениями из кожных поражений (язвы, свищи).

Инкубационный период продолжается несколько дней. Клинические проявления стафилококковых болезней многообразны. При смешанном заражении стафилококками и вирусами (например,' парвовирус) иногда наблюдаются сходные клинические признаки заболеваний. Возбудитель ПВС-2 очень устойчив в окружающей среде и при комнатной температуре может сохраняться в инфицированных объектах в течение 6 месяцев (Б.Ф. Шуляк, 2003; М. Уиллард, Г. Тведтен, 2004; Я.Рэмси, Б.Теннат, 2005г). Лечение заболеваний, вызванных бактериальными, вирусными или смешанными инфекциями требуют различного подхода, вследствие чего, существует необходимость дифференциации возбудителей заболеваний.

Сырье животного происхождения (молоко, мясо, субпродукты) подвержено как первичной, так и вторичной контаминации ( Логвинов Д.Д., 1992; Горяинова Г.М., 2004; Eshraghi Н., 1997; Pfleger R. et al., 2002). При ветеринарно-санитарной экспертизе актуальным является дифференциация золотистого стафилококка от других бактериальных инфекций, в частности от синегнойной палочки, сальмонелл, стрептококков.

Диагностика стафилококковых инфекций основана на классическом бактериологическом анализе с применением питательных сред: мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА). Определение патогенности возбудителя проводят в реакции плазмокоагуляции.

Для ускоренной диагностики стафилококковых и парвовирусных инфекций применяют методы ПЦР анализа и ИФА (В.Н.Сюрин, А.Я. Самуйленко и др. 1998; М. Уиллард, Г. Тведтен и др., 2004 г).

Для проведения мониторинговых исследований по определению золотистого стафилококка и сопутствующих инфекций в большом количестве биоматериала животных и сырья животного происхождения актуальным является разработка ускоренных методов на основе ИФА и ДНК-диагностики. Цель и задачи исследований.

Целью исследований являлась разработка и совершенствование методов определения стафилококковых и сопутствующих парвовирусных инфекций у животных, а также стафилококковых инфекций в сырье животного происхождения на основе ДНК- и иммунодиагностики.

В задачи исследований входило: провести мониторинговые исследования по выявлению Staphylococcus aureus и сопутствующих парвовирусных инфекций в биоматериале домашних животных по городу Москва; провести мониторинговые исследования по выявлению Staphylococcus aureus в сырье животного происхождения;

- усовершенствовать методику определения Staphylococcus aureus и сопутствующих парвовирусных инфекций в биоматериале животных на основе амплификации с последующей ДНК-гибридизацией;

-усовершенствовать определение антигенов парвовируса у домашних животных с использованием тест системы IDEXX SNAP;

- усовершенствовать определения Staphylococcus aureus в мясном сырье и субпродуктах на основе модифицированных методик амплификации с последующей ДНК-гибридизацией;

- разработать модифицированную методику ускоренной индикации Staphylococcus aureus в мясном сырье и субпродуктах на основе точечной гибридизации со специфичными ДНК-зондами;

- определить чувствительность и специфичность методов;

- провести сравнительный анализ микробиологических методов и методов ДНК-диагностики выявления Staphylococcus aureus у животных и в мясном сырье и субпродуктах.

Научная новизна

Проведены мониторинговые исследования по выявлению стафилококковых и парвовирусных инфекций у домашних животных и стафилококковых инфекций в мясном сырье и субпродуктах на территории мегаполиса Москва, которые показали заболеваемость в 2008 году стафилококкозом до 86,1%, парвовирусным энтеритом до 95,7%, совместных инфекций - 30,2%, и, соответственно, 82,3% , 99,0% и 48,3%) - в 2009 году. Золотистый стафилококк был выявлен в сырье животного происхождения в относительно не большом проценте исследуемых проб.

Усовершенствовано определение Staphylococcus aureus и других сопутствующих инфекций бактериальной и вирусной природы в мясе, субпродуктах и у животных на основе разработанных модифицированных методик амплификации с последующей ДНК-гибридизацией, позволяющих проводить анализ в течение 6-8 часов. Методики дают возможность одновременно определять смешанные инфекции (Staphylococcus aureus и Salmonella typhi murium) в мясном сырье и субпродуктах и (Staphylococcus aureus и парвовирус) в биоматериале животных.

Усовершенствовано определение парвовируса в биоматериале с использованием тест-системы IDEXX SNAP. Тест-система позволяет проводить анализ в течение одного часа.

Разработана методика ускоренного определения Staphylococcus aureus в мясе и субпродуктах на основе ДНК гибридизации со специфичными ДНК-зондами. Методика позволяет проводить дифференциацию Staphylococcus aureus от других бактериальных инфекций.

Практическая ценность.

На основе проведённых исследований разработаны:

1. «Методические рекомендации по определению антигенов и антител на основе иммуноферментного анализа при инфекционных заболеваниях мелких домашних животных», утверждённые Отделением ветеринарной медицины РАСХН 30.05.2008г.

2. Проект Национального стандарта Российской Федерации «Экспресс-метод определения антигенов и антител при внутренних заболеваниях животных на основе иммуноферментного анализа».

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены и обсуждены:

- на Международной научно-практической конференции «Современные средства и методы диагностики, профилактики и лечения инфекционных, протозойных и микотических болезней сельскохозяйственных и промысловых животных, рыб и пчел», посвященной 100-летию со дня рождения Героя Социалистического труда, лауреата Государственной премии СССР и премии Эстонской ССР, доктора ветеринарных наук, профессора, академика ВАСХНИЛ А.Х. Саркисова (Москва, 2009 г.).

- на Ученом совете ГНУ ВНИИВСГЭ (2009 г.).

- на межлабораторном совещании ГНУ ВНИИВСГЭ (2009 г.).

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», Розанов, Сергей Николаевич

ВЫВОДЫ

1. Проведенные мониторинговые исследования проб биоматериала и сырья животного происхождения показали, что заболеваемость стафилококкозом у домашних животных составляла 86,1%, парвовирусным энтеритом - 95,7% и совместных инфекций - 30,2% в 2008 году, и, соответственно, 82,3% , 99,0% и 48,3% - в 2009 году. Процент контаминированных проб мяса и субпродуктов золотистым стафилококкоком был значительно ниже, чем в биоматериале животных и составлял от 10 до 16,2%.

2. Усовершенствовано определение Staphylococcus aureus и других сопутствующих инфекций бактериальной и вирусной природы в мясе, субпродуктах и у животных на основе разработанных модифицированных методик амплификации с последующей ДНК-гибридизацией, позволяющее проводить анализ в течение 6-8 часов.

3. Модифицированные методики позволяют одновременно определять смешанные инфекции (Staphylococcus aureus и Salmonella typhi murium) в мясном сырье и субпродуктах и (Staphylococcus aureus и парвовирус) в биоматериале животных.

4. Усовершенствовано определение парвовируса в биоматериале с использованием тест-системы IDEXX SNAP. Тест-система позволяет проводить анализ в течение 2-3 часов.

5. Усовершенствовано определение Staphylococcus aureus в мясе и субпродуктах на основе точечной гибридизации со специфичными ДНК-зондами. Методика позволяет проводить дифференциацию Staphylococcus aureus от других бактериальных инфекций с чувствительностью 105 клеток (без обогащения) или с чувствительностью до единичных клеток с предварительным обогащением.

6. Сравнительные исследования показали, что методы ДНК-диагностики не уступают микробиологическим методам по чувствительности и специфичности и на порядок превосходят их по затраченному времени анализа.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.

Для использования в научных учреждениях и исследовательских лабораториях могут быть рекомендованы разработанные нами:

1. «Методические рекомендации по определению антигенов и антител на основе иммуноферментного анализа при инфекционных заболеваниях мелких домашних животных», утверждённые Отделением ветеринарной медицины РАСХН 30.05.2008г.

2. Проект Национального стандарта Российской Федерации «Экспресс-метод определения антигенов и антител при внутренних заболеваниях животных, на основе иммуноферментного анализа»

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Розанов, Сергей Николаевич, 2010 год

1. Абаджиева А.Н./ Генетическая и биохимическая характеристика детерминантной устойчивости грамположительных микроорганизмов к антибиотикам // М., 1987, с. 56-67.

2. Акатов А.К., Зуева B.C. /Стафилококки // М., изд. «Медицина», 1983, с. 87-94.

3. Антонов А .С./ Молекулярные основы геносистематики // Изд. МГУ, М., 1980, с. 24-31.

4. Асеев Н. В., Светличкин В.В., Астахова О.И. /Тест-система для ускоренной индикации- и идентификации сальмонелл и кишечной палочки в продуктах убоя с/х животных на основе генных зондов // Труды ВНИИВСГЭ, 1994, т. 94, с. 95-98.

5. Белоусова Р.В., Гончарова Т.М., Асеев Н.В. и др./ Разработка способов и технических средств полевой индикации возбудителей инфекционных заболеваний животных на основе генных зондов // В кн.: Вопросы ветеринарной биологии, М., 1994, с. 68-70.

6. Вальехо-Роман К. М. /Гибридизация ДНК В кн.: Молекулярные основы геносистематики // Изд-во МГУ, М., 1980, с.86-105.

7. Вахромеева В.В. /Антигенная структура и анализ межштаммовых различий парвовирусов плотоядных // Автореферат диссертации насоискание ученой степени кандидата биологических наук ВНИИВВиМ, г. Покров, 2000 г.

8. Ветеринарная микробиология./ Под ред. Е.В. Козловского, П.А. Емельяненко // М., изд. «Колос», 1982, с. 138-141.

9. Гаврилин А.С. /Уровень заболеваемости коров маститом и его этиология // Сб. тр. "Селекция, кормление, содержание с.-х. жив-х и технология произ-ва продуктов жив-ва", 2002, Вып. 13, с. 104-106.

10. Гаршина И.А., Дагина A.M., Яковлев В.П./ Влияние антибиотиков на адгезию микроорганизмов // Антибиотики и химиотерапия, 1990, том 35, № 3, с. 50-53.

11. Гейдрих Г., Ренк В. /Маститы сельскохозяйственных животных и борьба с ними. // М., «Колос», с. 1968, с. 376.

12. Гинцбург А. Л. /Современное состояние и перспективы молекулярно-генетических методов и решение задач медицинской микробиологии // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 1999, № 5, с. 22-26.

13. Горбовицкая М. /Диагностика болезни Марека с использованием ДНК-зондов // Птицеводство, М., 1996., №> 2, с. 27-28.

14. Горяинова Г.М. /Идикация Staphylococcus aureus методами ДНК-диагностики в молоке и молочных продуктах//. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, ВНУ ВНИИВСГиЭ, г. Москва, 2004 г.

15. Госионов Р. /Некультивируемые формы микроорганизмов. // Ветеринарная газета, 2000, № 5.

16. ГОСТ 10444.2-94 /Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества Staphylococcus aureus.// 1996.

17. Громов Б.В., Павленко Г.В. /Экология бактерий // JL, изд. ЛГУ. 1989.

18. Демидова Л.Д. /Этиология мастита у коров // Тез.докл. IX Междунар. симпозиума по маш. доению с.-х. жив-х., Оренбург, 1997, с.188-189

19. Дерюшева С.Е./ Биотинилирование ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции // Труды ВНИИ генетики и разведения с/х животных, Санкт- Петербург, 1993, с.43-45.

20. Друца В.Л./ Радиоизотопное мечение ДНК // В. кн.: Молекулярные основы геносистематики // М., изд. МГУ, 1980, с. 35-50.

21. Дрыгин Ю.Ф., Бузмаков А.В., Тетерина Н.Л., Морозов С.Ю. /Нерадиоактивная диагностика вирусных инфекций зондами "ДНК-пероксидаза" //Молекулярная биология, 1992. т. 26, с. 18-22.

22. Егоров Н.С./ Основы учения об антибиотиках // М., изд. МГУ, 1994, с. 51-59.

23. Золотарев Ф.Н, Голубев Д.Б., Петров Н.А./ Метод точечной гибридизации в вирусологии.// Успехи современной биологии.- 1989.-том 108.- с. 375-382.

24. Иванов Л.Г./ Систематика, морфологическая характеристика и биологические свойства возбудителей токсикоинфекций // Автореф. на соискание ученой степени доктора биологических наук, МГУ им. Ломоносова, 1992.

25. Калина В.П. /Инволюция патогенных бактерий, как биологическая закономерность // Журнал микробиологии, эпизоотологии и иммунологии. 1988, № 4, с. 33-40.

26. Карташова В.М., Ивашура А.И. /Маститы коров // М., ВО «Агропромиздат», 1988.

27. Касянчук В.В. /Мастит: основы диагностики и лечения. // Молоч. и мясн.скотоводство, 1992, №4, с.15-16.

28. Кац Л.Н. /Субмикроскопическая структура микроорганизмов с дефектной клеточной стенкой // Успехи микробиологии. 1980, вып. 15, с. 186-196.

29. Коромыслов Г.Ф., Фомин Б. А., Артюшин С.К. и др. /Диагностикумы инфекционных болезней сельскохозяйственныхживотных на основе генной инженерии // Труды ВИЭВ, 1994, т. 69, с. 8-14.

30. Красько А.Г., Ркхадзе Г.Г., Сергеев В.А. и др. /Диагностика ротавирусной инфекции человека методом точечной гибридизации // Вопросы вирусологии, 1987, т. 32, № 2, с. 208-212.

31. Кривононосов М.В. /Организация защиты качества продуктов питания // Международный медицинский журнал (г. Харьков), 1998, №4, с. 104-106.

32. Логвинов Д. Д. /Маститы и качество молока // Молоч. и мясн. скотоводство, 1992, №5-6., с.5-7.

33. Маккреди Б.Д., Чимера Д.А./Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами // В кн. Молекулярная клиническая диагностика, М., изд. «Мир», 1999, с.496-506.

34. Мальков И.Г. /Нетрадиционные методы анализа в ускоренной диагностике патогенных бактерий // В кн.: Проблемы ветеринарной санитарии, 1992, с. 3-14.

35. Мамаев М.А./ Разработка ускоренных способов ДНК-диагностики для определения бактерий в мясе и мясопродуктах // Авторефератдиссертации на соискания ученой степени кандидата вет. наук, М., 2000.

36. Маниатис Т, Фритч Э., Сэмбрук Дж./ Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование // М., изд. «Мир»., 1994, с. 159-172.

37. Методика по применению тест-системы «ПАРВОВИР» для выявления возбудителя парвовирусного энтерита собак//М. Минсельхоз России, 2002, с 2-13.

38. Методические указания по применению набора для выявления антигенов парвовируса собак, вирусов энтерита норок и панлейкопении кошек иммуноферментным анализом (ИФА) // М. ЗАО «НПО НАРВАК», 2005, с. 1-4.

39. Методы общей бактериологии. /(Под ред. Герхардта Ф. и др) // М., изд. «Мир», 1984, с. 89-96.

40. Механизм действия антибиотиков./ (Под ред. Гаузе JI.) // М., изд. «Мир», 1975, с. 5-64.

41. Монахова Е.В., Власов В.П., Вуцан В.Н., Е.И.Седых, Н.К.Михась./Видоспецифический ДНК-зонд для идентификации холерных вибрионов // Молекул, генетика микроб, вирусол, М., изд. «Медицина», 1993.-4, с.8-11.

42. Николаев Ю.А., Воронина Н.А. /Перекрестное действие внеклеточных факторов адаптации к стрессу у микроорганизмов // Микробиология, 1999, 68, № 1, с. 45-50.

43. Общая микробиология / (Под ред. Вершигора А .Я.) // Киев, 1988, с. 25-36.

44. Околелов В.И./ Современные физико-химические методы биодетекции и идентификации микроорганизмов // Актуальные проблемы вет. медицины в россии, Новосибирск, 1998, с. 339-346.

45. Определитель бактерий Берджи / под ред. Г.А. Заварзина // М., изд. «Мир», 1997.

46. Павлова И.Б. /Закономерности развития популяций бактерий в окружающей среде (электронно-микроскопическое исследование) // Диссертация в виде научного доклада, М., 1999.

47. Павлова И.Б., Куликовский А.В., Джентемирова К.М. /Экология бактерий в популяции // Вестник сельскохозяйственной науки, 1990, № 2, с. 75-78.

48. Павлова И.Б., Куликовский А.В. и др./ Электронно-микроскопическое исследование развития бактерий в популяциях. Морфология колоний бактерий // Журнал микробиологии, эпизоотологии и иммунологии, 1990, № 9, с. 15-20.

49. Паников Н.С. /Кинетика роста микроорганизмов. Общие закономерности и экологические положения // М., изд. «Наука», 1991, с. 4-72.

50. Панчини Д., Паретти Ф. /Антибиотики. //М., изд. «Мир», 1985, с. 41-58.

51. Париков В.А., Слободяник В.И., Кузьмин Г.Н. и др./ Дифференциация кокковой микрофлоры молока // Ветеринария, 1981, №11, с. 64-65.

52. Петров Н.Б. /Методы изучения реассоциации ДНК // В кн. Молекулярные основы геносистематики, М., изд. МГУ, 1980, с. 51-75.

53. Печуркин Н.С. /Популяционная микробиология // Новосибирск, "Наука", 1978, с. 39-46.

54. Поставин В. А. /Пищевые токсикоинфекции // М., изд. "Медицина", 1980, с. 6-49.

55. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов. /Утв.

56. Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, 27 декабря 1983 г.// М, ВО «Агропромиздат», 1988.

57. Прозоровский С.В., Кац Л.Н., Каган Г.Я. /L-форма бактерий // М., изд. «Медицина», 1981, с. 5-112.

58. Рахманина М.М., Сулимов А.А., Селиванов А.В. /Биологические свойства парвовируса собак.// Ветеринария, 1994, №7,с21-26.

59. Рэмси Я. Теннант Б. /Инфекционные болезни собак и кошек.//М., изд. «Аквариум», 2005, с. 151-155.

60. Светличкин В.В. / Разработка тест-систем и технических средств ускоренной оценки безопасности и качества объектов ветеринарно-санитарного контроля.//Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук, М., 2002.

61. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б./ Определитель зоопатогенных бактерий//М., изд.»Колос», 1985, с. 22-25.

62. Синагатуллина Э.М. /Разработка тест-систем для выявления инфекционных агентов с использованием нерадиоактивных биотиниллированных ДНК-зондов // Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук, М., 1992.

63. Стафилококки и стафилококковые инфекции // Изд. Сарат. ун-та., 1980, с. 52-93.

64. Стикланд Ю.Е. /Получение зондов и их мечение // В кн. Молекулярная клиническая диагностика. М, изд. «Мир», 1999, с. 329372.

65. Сулимов А.А., Уласов В.И., Могильный Ю.И. /Парвовирусная инфекция животных семейства псовых.// Сборник научных трудов ВГНКИ, 2005, № 65, с.60-64.

66. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. /Вирусные болезни животных // М. изд. ВНИТИБП, 1998, с.561-569.

67. Тимченко Н.Ф. Генетико-биохимические механизмы патогенности бактерий и перспективы их изучения //Бюлл. АМН СССР, 1986, №4, с. 66-71.

68. Уиллард М., Тведтен Г.,Торнальд Г. /Лабораторная диагностика в клинике мелких домашних животных//М., изд. «Аквариум», 2004., с. 207-209.

69. Франклин Т., Сноу Дж./ Биохимия антимикробного действия // М., изд. «Мир», 1984, с. 15-49.

70. Фрумгарц Л.Ф., Киприянов С.М., Калачиков С.М. и др. /Получение флуоресцентной меченой ДНК и использование ее в качестве зонда при молекулярной гибридизации // Биоорганическая химия, 1986, №11, с. 1508-1513.

71. Херрингтон С., Макги Дж. /Молекулярная клиническая диагностика//М, изд. «Мир», 1999, с.558.

72. Чан Т.В.Т./ Гибридизация нуклеиновых кислот // В кн. Молекулярная клиническая диагност, методы, М., 1998, изд. «Мир», с. 374-394.

73. Шибата Д.К./ Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биотопов // В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., изд. «Мир», 1999, с. 395-425.

74. Шлегель Г. /Общая микробиология // М., изд. «Мир», 1987, с. 2034.

75. Шуляк Б.Ф. /Руководство по бактериальным инфекциям собак. //М. изд. «Олита», 2003,1 т., с. 14-50.

76. Шур дуба Н.А., Сотникова В.М., Нагорных A.M. / Определение энтеротксигенности S. Aureus, выделенного из молока и молочных продуктов // Российский журнал «проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» № 1, 2009 г., стр. 20-24.

77. Экологическая биотехнология /(Под ред. Форстера К.Ф., Вейза Д.А.) // Д., изд. «Химия», 1990, с. 21-39.

78. Экология и генетика микроорганизмов /(Под ред. Иванова А.И.) // Свердловск, 1991, с. 5-41.

79. Agrowal S., Cristodoulou С., Gait М. /Efficient methods for attaching nonradioactive labels to the 5 ends of syntheticaligodeoxy ribonucleotides // Nucl. Acid. Res., 1986., v. 14, p. 6227-6245.

80. Alcerlund Т./ Growth and division of E. coli cells // Sci. and Technol, 1995, № 170, p. 1-47.

81. Andrew V., Sayler G./ The use of gene probes in the rapid analysis of natural microbial communities // J. Ind. Microbiol., 1988, 3, №5, p. 281292.

82. Ashall F., Miless M. /Diagnosis of parasitic diseases using DNA to DNA hybridization // Trans Roy Soc trop. Med. Hyg, 1988, № 2, p. 235236.

83. Baker R.F. /Binding of DNA to cellulose nitrate filters under denaturing conditions // Anal. Biochem, 1977, v.78, p. 569-571.

84. Basant К. et. al./ Subclinical mastitis: A real challenge to dairy industry (Detection and bacteriological studies) // Techn. Symposium on Dairy «Mastitis and milk quality», 2002, New Delhi, India, p. 30-33.

85. Beard J. /Gene probes Locate waterborne diseases // New Sci, 1987, № 1562, p. 237.

86. Bennett R. /Milk quality. A second look// Dairy Herd. Manag., 1988, v. 25, №1, p. 30-31.

87. Bernet C., Carret M., de Barbeyrac B. /Detection ofMycoplasma pneumoniae by Using the Polymerase chain Reaction // J.clin. Microbiol.-1989.-Vol. 27. NII,- p. 2492-2495.

88. Bevan I.S, Daw R.A., Day P.J.R., Ala F.A., Walker M.R./ Polymerase chain reaction for detection of human cytomegalovirus infection in a blood donor population // Brit. J. Haematol., 1991, v.78, № 1, p. 94-99.

89. Boom R, Sol C, Beld M., Weel J., Goudsmit J., Wertheim-van Dillen. /Improved Silica-Guanidiniumthiocyanate DNA isolation Procedure Based on Selective Binding of Bovin Alpha-Casein to Silica Particles // J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, № 3, p.615-619.

90. Brun Buisson Ch. / Staphylococcus aureus stable of resist methociclin. Evolution, epidemic, part in clinic // Pathol. Biol., 1998, v. 46, p. 227-234.

91. Brytting M, Sundgvist V.-A., Stahlhandske P., Linde A., Wahren B. /Cytomegalovirus DNA detection of an immediate early protein gene with nested primer oligonucleotides // J. Virol. Meth., 1991, v. 32, № 2-3, p. 1127-138.

92. Burtonboy G, Coignoul F, Delfrriern,Pastoret P.P. /Canine hemorraqgic enteritis: detection of viral partieles by election microscopy//Arch. Vitol., 1979, № 61(1),pl-11.

93. Cassiman I. /Diagnosis of genetic diseases by probes // Acta clin. Belg, 1988, p. 181-184.

94. Chou S., Merigan Т.С./ Rapid detection and quantitation of human cytomegalovirus in urine through DNA hybridization // New England Journal of Medicine., 1985, v. 308, p. 921-925.

95. Chu B.C.F., Wahl G.M., Orgel L.E./ Derivatization of unprotected polynucleotides//Nucl. Acid Res., 1983, v.ll, p. 6513-6529.

96. Coates P.J., Мак W.P., Slavin G., Ardenne A.J. /Detection of singl copies of Epstein-Barr virus in paraffin wax sections by nonradioactive in situ hybridization // J. Clin. Pathol., 1991, v.44, № 6, p. 487-491.

97. Costa A.L., Valenti A., Veronese M. /Study of the Morphogunetiohal Alterations Produced Fenticonazole on strains of Staphylococcus aureus, Using the Scaning Electron Microscope (S.E.M.) // Microbiology, 1984., v. 27, p. 29-35.

98. Сох K.H., DeLeon D.V., Angerer L.M. /Detection of mRNAs in sea unchin embryos by in situ hibridization using asymmetric RNA probes //Developmental Biology, 1987, v. 101, p.485-502.

99. Day P.J.R., Bevan I.S., Gurney S.J., Young L. S., Walker M.R. /Synthesis in vitro and application of biotinylated DNA probes for human papiloma virus type 16 by utilizing the polimerase chain reaction // Biochmi., 1990, v.267, №1, p.l 19-123.

100. Denhardt D.T. /А membrane filter technique for the detection of complementery DNA // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1966, v.23, p. 641-646.

101. Dodd F.H. /Progress in mastitis control // Kieler Milchw. Forsch.-Ber., 1985, v. 37, h. 3, p. 216-223.

102. Falkow S., Moseley S. /Specific DNA probes in diagnostic microbiology // Патент США № 4358535, 10.11.1982,435/15.

103. Fine S.P., Reddy G.R., Marnett L.J. /Mutagenicity in Escherichia coli of the mayor DNA adduct derived from the endogenous mutagen malondialdehyde // Proc. Natl. Acad. Sci., 1997, v.94, p. 8652-8657.

104. Flint S.H., Hartley N.J. /Evaluation of the TECRA Escherichia coli 0157 visual immunoassay for tests on dairy products // Lett Appl Microbiol, 1995, v. 21(2), p.79-82.

105. Forster A., Modness J., Skingle D. /Non-radioactive hybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with novel reagent, photobiotin //Nuc. Acid Res., 1985, № 3, p.745.

106. Fox L. /Staph, aureus: source, impact. // Dairy Herd. Manag., 1990, v. 27, № 6, p. 32.

107. Fox L., Hancock D. /Follow the basics to control S. aureus // Hoards' Dairyman, 1990, v. 135, № 16, p. 767.

108. Garger S., Turpen T. /Use of RNA probes to detect plant RNA viruses // «Eth Enzymol., v.l 18, Orlando, 1986, p. 717-722.

109. Gou D. F., Kubota H, Onuma N, Kodama H./ Detection of salmonid heipes virus in fisli by Southern-blot technique // J. Vet. Mod. Sci., 1991, v. 53, NI.P 43-48.

110. Halt C.,Ward M.E.,Clarke 1 .N./Analysis of the entire nucleotide sequence of the ciyptic plasrnid of Chlamidia trachomatis serovar L I .Evidence for involvement in DNA replication // Nucl. Acid. Res., 1988, v. 16, p. 4053-4067.

111. Hames B.D., Higgins S.J./ Nucleic acid hybridization: a practical approach// IRL Press, Oxford, 1985.

112. Herrick J., Michalet X., Conti C., Schurra C., Bensimon A. /Quantifying single gene copy number by measuring fluorescent probe lengths on combed genomic DNA // Proc. Natl. Acad. Sci., 2000, v. 97 (1), p 222-227.

113. Hill W., Payne A./ Detection and enumeration of virulent Yersinia enterocalitica in food by DNA colony hybridization // Appl. F Environmental Microbiology, 1984, №4, p. 801-807.

114. Huss H.H. /Control of indigenous pathogenic bacteria in seafood // Food control, 1997, v.8, № 2, p.91-98.

115. Ikeda S., Yamamoto M., Nagao K., Zhang В., Watanabe S., Oda T. /Non-radioactive hybridization probes prepared using M13 phage vector and the universal sequencing primer // Acta mod. Okajama., 1989, v.43, № 4, p. 1197-1202.

116. Innis M.A., Gelfand D.H., Sninsky J J., White T.J./ Optimization of PCRs. In: PCR protocols, a guide to methods and applications // Academic Press, San Diego, California, 1990, p. 16-21.

117. Joseph Т., Navo P.E., Caron C.F. /Molecula characterization of Chlamidia trachomatis and Chlamidia psitace; Plasmids // Infect. Innwn., 1986, v.51, p.699- 703.

118. Jremstein M. and Hognes D./ Colony hybridization: A method for the isolation of cloned DNAs that contain a specific gene // Proc. Nail. Acad. Sci. USA, 1975, p. 3961-3965.

119. Kalorey D.R. /Recent concepts in epidermiology and control of mastitis // Techn. Symposium on Dairy «Mastitis and milk quality», 2002, New Delhi, India, p. 102-107.

120. Kohne D. /Novel approach for rapid and sensitive detection of microorganisms // Clinicae Microbiol, 1987, № 6, p. 110-112.

121. Lakshmi D., James D. /А solution hybridization assay for the quantitation of prodynorphin mRNA // Mol. Brain Res., 1987, № 2, p. 173176.

122. Langer P. R., Waldrop A.A., Ward D.C. /Enzymatic synthesis of biotim-labelled polynucleotides: novel nucleic acid affinity probes // Proc. Nat. Acad. Science., 1982, v.19, p. 4381-4385.

123. Leiser R., Schubert J. /Nachweis phytopathogener Virren mit Hilfe der RNA-RNA-hydridisierung auf Filtern // Acta biotechnol, 1986, №1, p.14-16.

124. Longer P. /Enzymatic synthesis of biotin-labelekl polynucleotides novel nucleic acid affinity probes // Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1981, №11, p. 6633.

125. Martm R. H. /Non-radioactive techiques for the labelling of nucleic acids // Biotech. Adv., 1991, v.9, p. 185-190.

126. Matsunaga Т., Yoshida T. et al./ Identification of Staphylococci from bovine mastitis and fb examination of their susceptibility to antibiotics // Japan J. Vet. Sci., 1990, v. 52, № 6, p. 1219-1227.

127. Mauriello G., Moschetti G., Villani F., Coppola S. /Antibiotic resistance of coagulase negative staphylococcal isolated from artisanal Naples-types salami //Int. J. Food Sci. andNutr, 2000, -51, № 1, p. 19-24.

128. More Mardret J., Henricn James В./ Quantitative cell lyses of indigenous microorganisms and rapid exstraction of microbial DNA from sediment // Appl. and Environ. Microbiol., 1994, 60, № 5, p. 1574-1580.

129. Moseley S.L., Hyg J. /Detection of enterotoxigen Esherichia coli by DNA colong hybridization // J. Infect., 1989, № 6, p. 892-898.

130. Murtanyh M.P., Lin G.F., Haggard D.L., Weber A.F., Meiske J.C. /Detection of bovine leukemia virus in cattle by the polymerase chain reaction // J. Virol. Meth., 1991, v. 33, № 11-12, p. 73-85.

131. Neeelam S./ A rabid method for the preparation of plastid DNA // Indian J. Exp. Biol., 1995, 33, № 5, p. 387-391.

132. Ozawa M., Mijazawa K., Ohsaki R. /Evaluation of cefroxime in the treatment for bovine clinical mastitis // J. Japan Vet. Med., 1989, v. 42, № 12, p. 843-848.

133. Paul P.S. /Application of nucleic acid probes in veterinary infectious diseases // Voter. Microbiol., 1990, v. 24, № 3/4, p. 409-417.

134. Peirce C. /DNA technology provides new tools for identifycirung genetic causes of disease // Res. Resour. Report., 1988, №8, p. 1-4.

135. Persing D.H., Smith T.F., Tenover F.C., White T.J. /Target selection and optimization of amplification reaction // In: Diagnostic molecular microbiology, ASM, 1993, p. 88-102.

136. Pulco P R., Khatib R., Barientes S., Atmar R., Tony M.A. /Detection of all 6 Coxsackieviral cerotype by polymerize chain reaction // J. Cell Biochem., 1991, Suppl. 15, p. 194.

137. Rifai S., Barbancon V., Prevost G., Piemont Y. /Staphylococcus aureus Synthetic exfoliative toxin A and В DNA probes for detecton of toxigenic Staphylococcus aureus strains // J. Clin. Microbiol., 1989, №3, p. 504-506.

138. Rippinger P., Bertschinger H.U., Imberechts H., Nagy В., Sorg I., Stamm M., Witting W. /Designations F18ac for the related fimbrial types

139. F107, 2134Р and 8813 of Escherichia coli isolated from porcine postweaning diarrhoea and from oedema disease // Veterinary Microbiology, 1995, № 45, p. 281-295.

140. Rusvai F., Belak S. /Detection of bovine adenovirus nucleic acid sequences in nasal specimens by biotinylated DNA probes // J. Virol., 1992, №4, p. 311-316.

141. Saiki R.K., Walsh P.S., Levenson C.H., Erlich Н.А./ Genetic ahalisis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, vol. 86, p. 6230-6234.

142. Serhir В., Dugord D., Jacques M., Higgins R., Harel J. /Cloning and characterization gene (dexS) from Streptococcus suis // GENE, 1997, № 190, p. 257-261.

143. Sonnleither B. / Microorganisms dynamic packuption // J. Biotechnol, 1998, v. 65, № 1, p. 47-60.

144. Trinidad P., Nickerson S.C. Adkinson R.W. /Histothology of Staphylococcus mastitis in unbred dairy heifers //1 Dairy Sci, 1990, v.73, p. 639-642.