Сравнительный анализ организации типов клеток и поведения у Placozoa тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.01, кандидат наук Романова Дарья Юрьевна

• Романова Дарья Юрьевна
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Романова Дарья Юрьевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ретроспектива изучения типа Placozoa

1.2. Биогеография и экология Placozoa

1.3. Астматическое положение Placozoa

1.4. Микроскопическая анатомия Placozoa

1.5. Физиология и поведение Placozoa

1.6. Основные и перспективные вопросы изучения Placozoa 20 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

2.2. Культивирование гаплотипов

2.2.1. Адаптация особей к лабораторным условиям

2.2.2. Универсальные условия для длительного культивирования

2.2.3. Культивирование гаплотипа Н4

2.3. Микроскопия

2.3.1. Световая микроскопия

2.3.2. Сканирующая лазерная микроскопия

2.3.3. Сканирующая электронная микроскопия

2.4. Фармакологическое тестирование

2.4.1. Тестирование глицина на поведенческие и морфологические паттерны

2.4.2. Микроанализ нитритов/нитратов и аминокислот с использованием лазерно-индукционной флуоресцентной детекции

2.4.3. Тестирование ингибиторов синтазы оксида азота

2.4.4. Устойчивая к фиксации гистохимическая NADPH-диафоразная активность

2.5. Молекулярно-генетические методы

2.5.1. Выделение тотальной РНК

2.5.2. Диссоциация животных

2.5.3. Подготовка кДНК библиотек единичных клеток

2.5.4. Биоинформатическая обработка данных библиотек

2.5.5. Нормализация, идентификация высоко экспрессируемых генов и дифференциально экспрессируемых генов

2.5.6. Визуализация клеточных типов

2.5.7. Кластерный анализ и компьютерная идентификация клеточных типов

2.5.8. In situ гибридизация единичных молекул РНК

2.5.9. Визуализация структуры протеинов

2.6. Электрофизиологическое тестирование

2.7. Статистическая обработка данных 34 ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 35 3.1. Адаптация и длительное культивирование четырех видов Placozoa

3.1.1. Адаптация H1, H2 и H13 гаплотипов к единым лабораторным условиям

3.1.2. Некоторые поведенческие особенности родов Trichoplax и Hoilungia в условиях длительного культивирования

3.1.3. Негативный фототаксис

3.1.4. Особенности воспроизведения у Пластинчатых

3.2. Сравнительный морфологический анализ и функциональная анатомия родов Тпскор1ах

и НоИип^а

3.2.1. Ультраструктурный анализ клеточных типов для рода Hoilungia

3.3. Электрофизиология Placozoa: идентификация Ка+-зависимых потенциалов действия и потенциал-зависимых ионных каналов

3.3.1. Индуцированные потенциалы действия у Placozoa

3.3.2. Разнообразие и структура натриевых каналов у Placozoa

3.4. Сравнительная биология транскриптомов Тпскор1ах айкаегеп8

3.4.1. Молекулярные маркеры для клеточных типов

3.4.2. WNT-зависимый сигнальный каскад у Placozoa

3.5. Сигнальные системы у Placozoa

3.5.1. Синтез монооксида азота (NO) и его рецепторы у Placozoa

3.5.2. Глицин как сигнальная молекула и хемоаттрактант у Placozoa

3.5.3. Микрохимическая идентификация энантиомеров 93 ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1. Сравнение клеточных типов у Placozoa: молекулярные и ультраструктурные данные

4.2. Интегративные системы и сигнальные молекулы у Placozoa 102 4.3 Интегративные особенности функциональной анатомии Placozoa 106 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 109 ВЫВОДЫ 110 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 111 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительный анализ организации типов клеток и поведения у Placozoa»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Эволюционная ветвь Пластинчатых (Placozoa) имеет ключевое значение для понимания происхождения и эволюции Metazoa. Представители типа Placozoa обладают простым строением тела, однако полное отсутствие органов, нервной системы и мышечных клеток резко контрастирует с достаточно сложными поведенческими реакциями, в том числе динамичными изменениями формы тела. Известно не менее 19 гаплотипов Placozoa, которые включают три описанных вида — Trichoplax adhaerens, Hoilungia hongkongensis и Polyplacotoma mediterranea [Eitel et al., 2018, Osigus et al., 2019]. Однако, в Мировом океане может присутствовать более 100 видов Placozoa [Schierwater and DeSalle, 2018; Eitel et al., 2013].

В настоящее время большинство филогенетических данных указывает, что Placozoa является сестринской группой мегатаксона Cnidaria и Bilateria, хотя некоторые авторы считают, что Placozoa являются вторично упрощенными от представителей типа Cnidaria. Независимо от предполагаемых эволюционных моделей происхождения, Placozoa представляет собой важный таксон для понимания возникновения и эволюции интеграционных систем у животных и, в частности, нервной и мышечной организации.

Пластинчатые являются идеальным модельным объектом для биологии, поскольку имеют самое простое из всех известных животных строение тела, легко наблюдаемые поведенческие реакции, включая социальное поведение. Это дает уникальную возможность исследовать относительно новый модельный организм Пластинчатых на всех уровнях биологической организации: молекулярном (компактный геном, около 100 Mb), клеточном (несколько типов клеток), системном (физиологические функции, опосредованные внесинаптическими межклеточными взаимодействиями) и популяционном (индивидуальное и групповое пищевое поведение, клеточные и геномные основы физиологических адаптаций животных).

В настоящей работе впервые выполнена интеграция методов клеточной и молекулярной физиологии с генетическими исследованиями (включая транскриптомику единичных клеток), микроскопии для разработки функциональной и генеалогической клеточной систематики и идентификации сигнальных молекул. Сравнительно-эволюционное изучение клеточных типов у разных экологических групп Placozoa и их сопоставление с сигнальными и системными функциями расширяют понимание того, как относительно простой организм формирует сложное поведение, как происходили пути эволюции клеточных типов. Такой высокий уровень интеграционного анализа и разрешения трудно достигнуть на любом другом модельном организме.

Цели и задачи исследования. Целью исследования является провести сравнительно-физиологический, ультраструктурный и молекулярный анализ разнообразия типов клеток и их сигнальных молекул у представителей двух родов Р1аео2оа.

Для достижения этой цели поставлены следующие задачи:

1. Разработать и оптимизировать методы лабораторного культивирования различных видов Р1аео2оа, выделенных из географически удаленных популяций, что необходимо для последующего молекулярно-физиологического анализа.

2. Разработать технологии выделения и культивирования функционально жизнеспособных единичных клеток у четырех видов Placozoa для транскриптомного анализа.

3. Идентифицировать и сравнить разные функциональные клеточные типы у представителей двух родов Hoilungia и ТпекорШх, используя методы световой и электронной микроскопии, а также геномного анализа всех основных типов единичных клеток, включая идентификацию предполагаемых сенсорных и эффекторных клеток.

4. Разработать методы фармакологического тестирования животных с аппликацией сигнальных молекул, включая глицин и монооксид азота.

5. На основе данных геномного и транскриптомного анализа индивидуальных клеток идентифицировать сигнальные системы и ассоциированные с ними молекулярные рецепторные компоненты.

Научная новизна. Клоновые культуры четырех видов Placozoa, выделенные из различных биотопов Мирового океана, были адаптированы к единым контролируемым лабораторным условиям. Это позволило провести детальные физиологические и молекулярные исследования и сравнение клеточных типов.

Методами световой и электронной микроскопии впервые была охарактеризована подробная микроанатомическая организация двух видов нового рода Hoilungia и впервые идентифицированы гомологичные клеточные популяции между родами Hoilungia и Тпекор1ах\ два типа эпителиальных клеток, образующих (1) нижний/вентральный и (2) верхний/дорсальный слои; кристаллические клетки (3) и волокнистые клетки (4); секреторные железистые клетки (5); бокаловидные клетки (6); липофильные клетки с пищеварительными ферментами (7); секреторные клетки с электронно-прозрачными гранулами (8); звездчатые или «нейроноподобные» клетки с длинными отростками (9); липофильные клетки под дорзальным эпителием (10); клетки блестящих шаров, выполняющие защитную функцию (11); овальные клетки небольшого диаметра неизвестной функции (12); два типа (13) продолговатых и (14) атипичных реснитчатых

клеток в дорсальном эпителии.

Впервые был проведен анализ транскриптомов более 20 тысяч единичных клеток (scRNA-seq) для вида ТпеИор1ах аёкавгвт. Были идентифицированы уникальные (дифференциально-экспрессируемые) гены, которые были использованы в качестве функциональных маркеров для определения и картирования всех клеточных групп и популяций клеток, включая новые секреторные клетки и их эффекторы.

Впервые была охарактеризована значительная гетерогенность в рамках каждой из шести ранее описанных групп клеток, а также идентифицированы и классифицированы 35 клеточных типов по данным анализа транскриптомики единичных клеток. Полученные результаты демонстрируют исключительное молекулярное разнообразие генетических программ, определяющих клеточный фенотип и поведенческую интеграцию.

На основе анализа дифференциально-экспрессируемых генов для большинства клеточных типов были предсказаны более 50 новых сигнальных молекул, включая секреторные пептиды. Также были идентифицированы семейства ионных каналов и рецепторов, с уникальной экспрессией в разных типах клеток у ТпекорШх аёкавгвт. Это позволило установить наличие функциональных клеточных аналогов нервных и интеграционных систем у Placozoa.

Анализ геномов четырех видов (Т. аёкавгвт, ТпеИор1ах sp., H. ко^ко^в^^, Hoilungia sp.) показал наличие 5 натриевых потенциал-чувствительных (№у) каналов для рода ТпеИор1ах и 7 каналов для рода Hoilungia. Последующие электрофизиологические эксперименты подтвердили натрий-зависимую природу вызванных потенциалов действия у всех четырех исследуемых видов.

Впервые был использован микрохимический анализ для определения низкомолекулярных сигнальных молекул, включая энантиомеры для Б-/Ь-глутамата и Б-/Ь-аспартата у Т. аёкавгвт. Эндогенный уровень глицина оказался значительно выше, чем у Ь-глутамата, Ь-аспартата или гамма-аминомасляной кислоты. Серотонин и дофамин не были обнаружены у Т. аёкавгвт. Миллимолярные концентрации глицина (сходные с эндогенным уровнем) индуцируют «мышечноподобные» сокращения у ТпекорШх и Hoilungia. Микромолярные концентрации (10-5-10-4 М) увеличивали ресничную двигательную активность пластинчатых, подтверждая гипотезу, что глицин может действовать как эндогенная сигнальная молекула. Глицин (10-6 М) также может быть хемоаттрактантом (направляющим фактором для поиска источников пищи) и, следовательно, выступать в качестве экзогенного сигнала.

Впервые было показано, что монооксид азота (N0) является сигнальной молекулой

у Placozoa. Были идентифицированы ферменты для синтеза NO (NO-синтазы - NOS) у всех четырех культивированных видов Пластинчатых. В отличие от других исследованных беспозвоночных, у Trichoplax и Hoilungia есть три различных гена NOS, включая ген, содержащий PDZ домен, критический для образования разнообразных молекулярных комплексов. Используя сверхчувствительный микрохимический анализ с применением капиллярного электрофореза, было подтверждено присутствие функциональных NOS у Placozoa. Используя флуоресцентную in situ гибридизацию единичных молекул мРНК, было показано, что различные NOS экспрессируются в разных субпопуляциях клеток с распределением вблизи краевых областей T. adhaerens, в том числе и в кристаллических клетках. Механизм действия NO может включать как канонический сигнальный каскад с использованием растворимых гуанилатциклаз в качестве внутриклеточных рецепторов, так и новый тип сенсоров не только для NO, но и для нитритов/нитратов. Это возможно с участием в качестве рецепторов уникальных гуанилатциклаз с NIT-доменами. Такие домены ранее были известны только у бактерий и впервые были обнаружены у Placozoa. Таким образом, хотя Trichoplax и Hoilungia служат примером морфологически простых животных, передача сигналов NO-cGMP каскада у Placozoa может быть сложнее, чем у позвоночных.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты, полученные в работе, являются важными для анализа эволюции и биоразнообразия Metazoa в целом, и их интеграционных/нервных систем. Разработанные протоколы позволяют проводить дальнейшие систематические исследования в условиях длительного культивирования для 4 видов: Trichoplax adhaerens (H1), Trichoplax sp. (H2), Hoilungia hongkongensis (H13), Hoilungia sp. (H4). Полученный молекулярный и микроанатомический атлас рода Hoilungia служит фундаментальной основой для исследования возникновения и эволюции клеточных типов у Metazoa, а также для изучения адаптаций и симбиотических процессов в отдельных клетках животных на уровне функционирования целого генома. Предсказанные и идентифицированные сигнальные молекулы у Placozoa являются мощным инструментом для последующей расшифровки клеточных механизмов поведения.

Методология и методы диссертационного исследования. Исследования были проведены с соблюдением правил содержания лабораторных животных. Исследования морфологии особей проводили с использованием современных методов микроскопии: световой, сканирующей электронной (SEM), лазерной сканирующей (LSM, Scanning-disk). Молекулярный анализ был проведен как с помощью стандартных методов выделения

высоколекулярной ДНК и РНК, так и с помощью новых методов нанотехнологии, микрофлюидики, биоинформатики, использования платформы 10х Genomics для транскриптомики единичных клеток. Методы идентификации сигнальных молекул в специфических клетках были проведены с использованием in situ гибридизации для единичных молекул мРНК, а также микрохимических анализов с использованием капиллярного электрофореза с лазерно-индуцированной флуоресцентной детекцией. Анализ геномных последовательностей и данных был проведен с помощью стандартных методов биоинформатики. Анализ данных транскриптомики единичных клеток был выполнен с помощью универсальных скриптов 10x genomics и Seurat [Shalek et al., 2014], Monocle [Qiu et al., 2017]. Визуализация протеоформ была выполнена на платформах SMART [Letunic et al., 2015] и Protter [Omasits et al., 2014], модели протеинов были рассчитаны с помощью SWISS-MODEL [Bordoli et al., 2009], PHYRE2 [Kelley et al., 2015].

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработанные протоколы позволяют успешно и длительно культивировать представителей четырех видов Placozoa в лабораторных условиях для сравнительно-физиологических исследований. Новый протокол выделения единичных клеток позволяет сохранить целостность молекул РНК для scRNA-seq.

2. Идентифицировано четырнадцать морфофункциональных клеточных типов у представителей рода Hoilungia. Молекулярная гетерогенность клеточных типов по данным транскриптомики единичных клеток (scRNA-seq) подтверждает присутствие 35 клеточных популяций.

3. Пластинчатые способны генерировать быстрые №+-зависимые потенциалы действия с помощью потенциал-чувствительных Nav каналов.

4. Глицин и монооксид азота (NO) идентифицированы как эндогенные сигнальные молекулы у Пластинчатых, участвующие в контроле локомоции, исследовательских и пищевых реакций. Выявлено генетическое разнообразие ферментов синтеза и рецепторных компонентов NO-зависимых сигнальных систем, включая гуанилатциклазы с уникальными NIT доменами.

5. Комбинированный анализ молекулярно-физиологических данных указывает на существование у Placozoa бессинаптических интеграционных систем поведения.

Степень достоверности результатов. Достоверность полученных результатов обеспечена интеграцией методов микроскопии (сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопии, лазерной сканирующей) с данными молекулярно-генетического анализа транскриптомов единичных клеток с помощью технологии 10x Genomics для более 20000 клеток, а также лабораторного культивирования. Представленные в работе сведения подтверждены иллюстративным материалом, таблицами, микрофотографиями.

Диссертация апробирована и рекомендована к защите на расширенном заседании лаборатории клеточной нейробиологии обучения ФГБУН ИВНД (Протокол № 3 от 28.08. 2020 г.).

Апробация диссертации. Результаты исследований были представлены на международном симпозиуме «Biodiversity: Genomics and Evolution» (август 2018, ИЦИГ, г. Новосибирск, Россия); международной конференции «Advances in genome biology and technology (AGBT)» (27 февраля - 2 марта 2019, Марко Айленд, Флорида, США); международной конференции «Biology of Genomes» (7-11 мая, 2019, Колд Спринг Харбор, Нью-Йорк, США); международном симпозиуме «Evolution of cell types» (May 14-18, 2019, EMBL, г. Хайдельберг, Германия); международной конференции «Human Frontiers Scientific Program» (9-13 июля 2019, Цукуба, Япония); международной конференции «Invertebrate Neuroscience» (13-17 августа 2019, Тихань, Венгрия); конференции-школе «Актуальные проблемы биологии развития» (14-19 октября 2019, ИБР, Москва, Россия); конференции «Society for Neuroscience Meeting» (19-23 октября 2019, Чикаго, Иллинойс, США).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 4 работы в журналах, входящих в международные реферативные базы данных и систем цитирования и, соответственно, в Перечень ВАК.

Личный вклад автора. Автору принадлежат концептуальные идеи в разработке дизайна и протоколов исследования, постановке задач, выполнение экспериментов, обосновании выводов и практических рекомендаций. Проработаны отечественные и зарубежные источники литературы по тематике диссертационного исследования.

Место проведения работы. Основная работа по диссертационному исследованию выполнена в Департаменте фундаментальных нейронаук, Университет Лозанны, Швейцария (адаптация и культивация видов, фармакологическое тестирование, in situ гибридизация, прижизненное и иммунногистохимическое окрашивания, микрохимический анализ трансмиттеров) под руководством Фредерик Варокуа. Частичная сканирующая электронная и лазерная сканирующая микроскопия выполнена в ЦКП

«Ультрамикроанализ» при ФГБУН ЛИН СО РАН (г. Иркутск) и в ЦКП «Таксон» при ЗИН РАН (г. Санкт-Петербург). Часть работы по молекулярно-генетическим исследованиям выполнялась на базе Лаборатории биологии развития под руководством Детлева Аренда, ЕМВЬ (г. Хайдельберг, Германия), Университета Бергена (г. Берген, Норвегия), Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН (г. Москва, РФ).

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: Введение, Обзор литературы, Материалы и методы, Результаты, Обсуждение, Заключение, Выводы, Список литературы. Диссертация изложена на 133 страницах (с приложениями - 144 страницы), содержит 42 рисунка, 2 таблицы и 213 ссылок на цитируемые источники.

Благодарности. Автор выражает признательность научному консультанту, проф. Л. Л. Морозу. Автор выражает благодарность Е. Д. Бедошвили (ЛИН СО РАН, г. Иркутск), А. Миролюбову и В. В. Старунову (СПбГУ, г. Санкт-Петербург) за неоценимую помощь в подготовке образцов к микроскопическим исследованиям. Особая благодарность Никитину М. А. (МГУ, г. Москва) за предоставление культуры штамма Н4 Hoilungia sp., а также Бг. Frederique Varouqueaux (Университет Лозанны, г. Лозанна, Швейцария) за неоценимую помощь в работе с культурой Hoilungia ко^ко^в^^ и Тпекор1ах sp. Автор выражает особую благодарность Смирнову И. В, Малышеву А. Ю. и Балабану П. М. за неоценимую помощь и участие в электрофизиологических экспериментах.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Ретроспектива изучения типа Placozoa

Изучая микроскопические организмы морского аквариума в Граце, Австрия, в 1883 году, Франц Шульце впервые описал животных с простой морфологией - «плоский многоклеточный дискообразный организм диаметром около миллиметра, лишенный органов или симметрии, который питался на стенках аквариума». Основываясь на особенностях поведения и движения ресничек, на поверхности животных, Шульце назвал новый вид Trichoplax adhaerens («липкая волосатая пластинка»). После открытия трихоплаксов, многие зоологи опубликовали ряд исследований по морфологической организации и биологии нового вида Trichoplax [Metschnikoff, 1886; Noll, 1890; Graff, 1891; Garbowsky, 1903; Stiasny, 1903].

В работе Т. Крумбаха [Krumbach, 1907] была описана биология гидроидных медуз Eleutheria krohni, включая их половое воспроизведение. Поскольку трихоплаксы были найдены в одном аквариуме с половозрелыми особями E. krohni, Т. Крумбах посчитал трихоплаксов абберантными планулами гидроидных медуз, после чего исследования трихоплаксов прекратились до начала 60-х годов ХХ века.

В 60-е супруги Куль опубликовали исследование о локомоции трихоплаксов и их питании [Kuhl and Kuhl, 1963, 1966]. После Карл Грелль провел ряд морфологических и поведенческих исследований Trichoplax и предложил новый зоологический тип Placozoa, с единственным, на то время, представителем - классическим штаммом Грелля или Н1 гаплотипа. Ряд авторов независимо расширил морфологическую характеристику вида Trichoplax adhaerens [Grell, 1971; Иванов и др., 1980а, б,1982; Малахов и Незлин, 1983; Окштейн, 1987; Малахов, 1990; Smith et al., 2014]. Описанная, к настоящему времени, морфологическая простота Trichoplax контрастирует с множеством найденных сложных форм поведения, включая компоненты пищевого и, возможно, социальное поведения [Серавин, 1989; Серавин и Гудков, 2005; Smith et al., 2015; Fortunato et al., 2018].

В начале 2000-х интерес к особям вида Trichoplax adhaerens возрос, поскольку морфологический анализ показал отсутствие аналогов нейронов и мышц, несмотря на множество скоординированных поведенческих реакций. Были опубликованы работы научной группой К. Смит посвящённых детальному анализу ультраструктурной организации вида Trichoplax adhaerens, где у T. adhaerens были описаны дополнительные морфологические клеточные типы и подтипы [Eitel et al., 2013; Smith et al., 2014; Mayorova et al., 2018; Mayorova and Smith, 2019; Smith et al., 2019].

Морфологическая простота, сложное поведение и неясное филогеническое положение этого таксона также вызвали большой интерес ученых к полученному геному вида Trichoplaxadhaerens, который был опубликован в 2008 [Srivastava et al., 2008], а спустя 10 лет М. Эйтель выделил новый род Placozoa и вид - Hoilungia hongkongensis [Eitel et al., 2018].

На данный момент тремя независимыми группами из Германии, США и Японии были исследованы митохондриальные геномы нескольких десятков гаплотипов Placozoa [Miyazawa et al., 2012; Eitel et al., 2013; Eitel et al., 2018; Srivastava et al., 2008]. Показано, что ядерные геномы T. adhaerens и H. hongkongensis включают в себя сложные сигнальные системы [Nikitin, 2015; Varoqueaux et al., 2018; Romanova et al., 2020a; Moroz et al., 2020a, 2020b], иммунный компоненты [Kamm et al., 2019], экспрессию генов, ответственных за сперматогенез [Eitel et al., 2013] и что не менее удивительно - наличие комплекса SNARE и полное отсутствие гомологов и аналогов иннексинов или паннексинов [Srivastava et al., 2008], формирующих плотные щелевые контакты (gap junction). Однако электрическая возбудимость некоторых клеток in vivo [Romanova et al., 2020b] и in vitro [Smith et al., 2017; Elkhatib et al., 2019] указывает на присутствие дополнительных механизмов регуляции клеточных взаимодействий и контроля поведения у Placozoa [Senatore et al., 2016; Smith et al., 2017, 2019; Armon et al., 2018; Romanova et al., 2020a].

На данный момент исследования биологии Placozoa проводятся лишь в нескольких лабораториях мира, где исследуется поведение животных в лабораторных условиях [Zuccolotto-Arellano and Cuervo, 2020], происходит геномный и функциональный анализ[Popgeorgiev et al., 2019; Kamm et al., 2019], включая анализ некоторых ионных каналов, сигнальных молекул и локомоции [Senatore et al., 2016; Smith et al., 2017, 2019; Armon et al., 2018; Romanova et al., 2020a, 2020b]. Однако еще много не исследованных вопросов требует пристального внимания для понимания и интеграции знаний о биологии Placozoa и эволюции животных, в частности.

1.2. Биогеография и экология Placozoa

С начала 90-х годов интерес к типу Placozoa существенно возрос, и исследователи со всех континентов собрали коллекции многих штаммов для изучения биологии и филогении Пластинчатых. Первые представители вида Trichoplax adhaerens (также известный как гаплотип H1 или штамм Грелля) были найдены из образцов Средиземного и Красного морей. Теперь этот гаплотип широко используется практически во всех исследованиях Placozoa. Однако систематический анализ биоразнообразия, проведённый в

течение последнего десятилетия, выявил десятки новых гаплотипов [Voigt et al., 2004; Signorovitch et al., 2006; Ball and Miller, 2005; Eitel and Schierwater, 2010; Miyazawa et al., 2012; Eitel et al., 2013; Kamm et al, 2018].

Placozoa найдены в большинстве сублиторальных зон тропических и субтропических вод на глубине от 0,5 до 20 метров и потенциально этот тип животных содержит около 100 видов [Schierwater and DeSalle, 2018]. На сегодняшний день секвенирование митохондриальных и ядерных геномов привело к формальному описанию двух новых родов Placozoa - Hoilungia [Eitel et al., 2018] и Polyplacotoma [Osigus et al., 2019]. Ядерный геном у Trichoplax adhaerens был секвенирован в 2008 [Srivastava et al., 2008], а секвенирование Hoilungia hongkongensis (или гаплотипа H13) [Eitel et al., 2018], предполагает существенные молекулярные различия для каждого рода и вида. Однако мало что известно о морфологических и ультраструктурных различиях между родами [Guidi et al., 2011]. К сожалению, практически все микроанатомические исследования выполняются сейчас на Trichoplax adhaerens.

На сегодняшний день представители Placozoa были собраны из теплых прибрежных вод с умеренным и тропическим климатом из таких экосистем, как мангровые заросли, рифы или неглубокие заливы [Ueda et al., 1999; Signorovitch et al., 2006; Pearse et al., 2007; Eitel et al., 2011; Nakano, 2014]. Пластинчатые живут в условиях различной солености (2050 %о), температуры (11-27°C), глубины (0-20 м), освещения и pH [Schierwater, 2005; Schierwater et al., 2010a; Eitel et al., 2010, 2013], где рост их популяций подвержен сезонным колебаниям [Ueda et al., 1999; Maruyama, 2004; Pearse and Voigt, 2007].

Обширное распространение Пластинчатых по всему земному шару [Paknia and Schierwater, 2015; Schierwater and De Salle, 2018] и их последующий генетический анализ указывают на присутствие множества морфологически сходных видов и гораздо большее, чем считалось ранее, биологическое разнообразие внутри типа Placozoa. К 2020 были описаны три генетически отличных, вида Пластинчатых: Trichoplax adhaerens [Schultze, 1883], Hoilungia hongkongensis [Eitel et al., 2018] и Polyplacotoma mediterranea [Osigus et al., 2019] и около 20 гаплотипов [Eitel et al., 2013], в то время как предполагается наличие более ста отдельных видов [Schierwater and De Salle, 2018].

На рис. 1 показаны филогенетические взаимоотношения между известными видами Placozoa. Принадлежность гаплотипов к известным родам описана по Eitel [Eitel et al., 2018]. Следует отметить более высокую генетическую дистанцию между родом Polyplacotoma и двумя другими родами Placozoa по данным анализа 18S/28S [Osigus et al., 2019].

— Polyplacotoma mediterranea, HO I Trichoplax adhaerens, H1 Trichoplax sp., H2

lHoilungiasp.,H4 I Hoilungia hongkongensis, H13

Trichoplax adhaerens, H1

Trichoplax sp., H2 , ¿Ш^С fT4"

..'"■ - "s

Jß*'

»«ft* v-

ЩщЩ

Рисунок 1 - Биоразнообразие и филогения Placozoa в Мировом океане: Trichoplаx adhaerens, Trichoplax Бр., Hoilungia Бр., Hoilungia hongkongensis. Род Hoilungia включает две отдельные ветви с H. hongkongensis (зеленая рамка) и японским штаммом 'Shirahama', вторая ветвь представляет новый вид Hoilungia Бр. (синяя рамка), штамм ^ и гавайский штамм ^ - Б249 (а). Существуют различия в экологических нишах между родами Trichoplax и Hoilungia: Trichoplax распространен от 48 северной (Роскофф, Франция) до 23 южной широт (остров Хирон, Австралия). Род Hoilungia имеет только четыре ареала (синие цифры 1-4) - от 32 северной (Бермудские острова) до 7 южной (Индонезия) широт (Ь).

Для оценки как общих признаков, так и отличительных таксономических особенностей представителей этого типа животных, было необходимо изначально провести систематическое и физиологическое описание некоторых референсных видов Placozoa. В настоящее время, их экологические ниши и точные источники пищевых ресурсов неизвестны в природе. Пирс и Войт [Pearse and Voigt, 2007] предположили, что Placozoa в тропических и субтропических областях питаются, поглощая органический детрит, а также водоросли и бактерии, формирующие биоплёнки на кораллах и другие субстраты.

Культивирование Trichoplax adhaerens в лаборатории было подробно описано [Signorovitch et al., 2006; Heyland et al., 2014], где культуру особей содержали в «естественных» аквариумах [Pearse, 1989] или чашках Петри, используя различные источники питательного субстрата, такие как Cryptomonas [Grell, 1972; Ruthman, 1977], дрожжевые экстракты [Ueda et al., 1999], красные водоросли Pyrenomonas helgolandii [Signorovitch et al., 2006], зеленые водоросли [Ulva sp; Серавин, Герасимова, 1998] или

смесь зеленых (Nannochloropsis salina) и красных водорослей (Rhodamonas salina, Pyrenomonas helgolandii) [Jackson and Buss, 2009; Smith et al., 2014].

Heyland и соавторы [2014] предложили протокол, содержащий оптимизированные лабораторные условия культивирования для Trichoplax adhaerens. Согласно этому протоколу, популяции животных поддерживали в чашках Петри, заполненных морской водой (35 %о, pH = 8,0), сменяемой раз в два месяца. Источником корма были водоросли Cryptomonas sp., Trichoplax культивировали в климатической камере с постоянным освещением (12:8 ч) и температурой (24°C).

На сегодняшний день нет систематического сравнения между различными протоколами культивирования разных видов Placozoa. Оптимизация условий культивирования имеет важное практическое значение для сравнительно-физиологических и молекулярно-генетических экспериментальных работ по изучению Placozoa и выявления специфического поведения для каждого вида. Таким образом, разработка стандартизированных условий культивирования является ключевым методологическим подходом, позволяющим систематически исследовать все аспекты биологии Пластинчатых, что способствуют расшифровке общих принципов организации и эволюции животных в целом, и их сигнальных систем.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Романова Дарья Юрьевна, 2020 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Adamska M. Structure and expression of conserved Wnt pathway components in the

demosponge Amphimedon queenslandica. / M. Adamska, C. Larroux, M. Adamski, K. Green, E. Lovas, D. Koop, G. S. Richards, C. Zwafink, B. M. Degnan // Evol. Dev. - 2010.

- Т. 12 - №. 5-494-518c.

2. Alberstein R. Glycine activated ion channel subunits encoded by ctenophore glutamate

receptor genes / R. Alberstein, R.Grey, A.Zimmet, D. K. Simmons, M. L. Mayer // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2015. - Т. 112-№. 44-E6048-E6057c.

3. Aleshin V. V. On the genetic uniformity of the genus Trichoplax (Placozoa) / V. V. Aleshin,

A. V. Konstantinova, M. A. Nikitin, I. L.Okshtein // Genetika. - 2004. - Т. 40. - №. 12-1714-1716c.

4. Anctil M. Neuronal and nonneuronal taurine-like immunoreactivity in the sea pansy, Renilla

koellikeri (Cnidaria, Anthozoa) / Anctil M., Minh C. N. // Cell Tissue Res. - 1997 - Т. 288

- №. 1-127-134c.

5. Anderson P. A. V. Physiological and chemical analysis of neurotransmitter candidates at a

fast excitatory synapse in the jellyfish Cyanea capillata (Cnidaria, Scyphozoa) / Anderson P. A. V., Trapido-Rosenthal H. G. // Invertebr Neurosci. - 2009 - Т. 9 - №. 3-4 - 167-173c.

6. Apostol B. L. A cell-based assay for aggregation inhibitors as therapeutics of

polyglutamine-repeat disease and validation in Drosophila / B. L. Apostol, A. Kazantsev, S. Raffioni, K. Illes, J. Pallos, L. Bodai, N. Slepko, J. E. Bear, F. B. Gertler, S. Hersch, D. E. Housman, J. L. Marsh, L. Michels Thompson // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2003

- Т. 100 - №. 10-5950-5955c.

7. Armon S. et al. Ultrafast epithelial contractions provide insights into contraction speed

limits and tissue integrity / S. Armon, M. S. Bull, A. Aranda-Diaz, M. Prakash. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2018 - Т. 115 - №. 44-E10333-E10341c.

8. Miller D. J. Animal evolution: the enigmatic phylum placozoa revisited / D. J. Miller, E. E.

Ball // Curr. Biol. - 2005 - Т. 15 - №. 1- R26-R28c.

9. Bassler J. Adenylate cyclases: Receivers, transducers, and generators of signals / J. Bassler,

J. E. Schultz, A. N. Lupas // Cell. Signal. - 2018. - Т. 46-135-144c.

10. Behrendt G. The cytoskeleton of the fiber cells of Trichoplax adhaerens (Placozoa) / G. Behrendt, A. Ruthmann // Zoomorphology. - 1986 - Т. 106 - №. 2-123-130c.

11. Becht E. Dimensionality reduction for visualizing single-cell data using UMAP / E. Becht, L. McInnes, J. Healy, C.-A. Dutertre, I. W H Kwok, L.G. Ng, F. Ginhoux, E. W. Newell // Nat. Biotechnol. - 2019. - T. 37- №. 1-C. 38-44.

12. Berman H., Henrick K., Nakamura H. Announcing the worldwide protein data bank / H. Berman, K. Henrick, H. Nakamura // Nat. Struct. Mol. Biol. - 2003 - T. 10 - №. 12-980-980c.

13. Bobrie A. Exosome secretion: molecular mechanisms and roles in immune responses / A. Bobrie, M. Colombo, G. Raposo, C. Théry. // Traffic. - 2011. - T. 12 - №. 12 -1659-1668c.

14. Bodnárová M. Calcium/calmodulin-dependent nitric oxide synthase activity in the CNS of Aplysia californica: biochemical characterization and link to cGMP pathways / M. Bodnárová, P. Martásek, L. L. Moroz // J. Inorg. Biochem. - 2005. - T. 99 - №. 4-922-928c.

15. Bonik K. Die Evolution der Tierkonstruktionen. III. Vom Gallertoid zur Coelomhydraulik / K. Bonik, M. Grasshoff, W. F.Gutmann // Natur und Museum. - 1976. - T. 106 - №. 6-178-188c.

16. Bordoli L. et al. Protein structure homology modeling using SWISS-MODEL workspace // Nat. Protoc. - 2009. - T. 4 -№. 1-C. 1.

17. Broeke J. Image processing with ImageJ. / J. Broeke, J. M. M. Pérez, J. Pascau // Packt Publishing Ltd - 2015.

18. Buchholz K. The mesenchyme-like layer of the fiber cells of Trichoplax adhaerens (Placozoa), a syncytium / K. Buchholz K., A. Ruthmann //Zeitschrift für Naturforschung C. - 1995. - T. 50 -№. 3-4-282-285c.

19. Bullock T. H., Horridge G. A. Structure and Function in the Nervous Systems of Invertebrates." Vol. I. Freeman, San Francisco, California. - 1965.

20. Bztschli O. Bemerkungen zur Gastrea-Theorie // Mor phol. Jahrb. - 1884. - T. 9-415-427c.

21. Caccia S. The amazing complexity of insect midgut cells: types, peculiarities, and functions / S. Caccia, M. Casartelli, G. Tettamanti // Cell Tissue Res. - 2019. -1-21c.

22. Clark C. C. Molecular cloning of the human proto-oncogene Wnt-5A and mapping of the gene (WNT5A) to chromosome 3p14-p21 / C. C. Clark, I. Cohen, I. Eichstetter, L. A. Cannizzaro, J. D. McPherson, J. J. Wasmuth, R. V. Iozzo // Genomics. - 1993. - T. 18 -№. 2 - 249-260c.

23. Camargo A. Nitrate signaling by the regulatory gene NIT2 in Chlamydomonas / A. Camargo, Á. Llamas, R. A. Schnell, J. J. Higuera, D. González-Ballester, P. A. Lefebvre, E. Fernández, A. Galván // Plant Cell. - 2007. - T. 19 - №. 11-3491-3503c.

24. Cruz L. A. Nitrite and nitrate levels in individual molluscan neurons: single-cell capillary electrophoresis analysis / L. Cruz, L. L. Moroz, R. Gillette, J. V. Sweedler // J. Neurochem. - 1997. - T. 69 -№. 1-110-115c.

25. Zuccolotto-Arellano J. Binary fission in Trichoplax is orthogonal to the subsequent division plane / L. Zuccolotto-Arellano, R. Cuervo-González // Mech. Dev. - 2020. -103608c.

26. Daff S. The 42-amino acid insert in the FMN domain of neuronal nitric-oxide synthase exerts control over Ca2+/calmodulin-dependent electron transfer / S. Daff, I. Sagami, T. Shimizu // J. Biol. Chem. - 1999. - T. 274 - №. 43-30589-30595c.

27. Dawson T. M. Nitric oxide synthase and neuronal NADPH diaphorase are identical in brain and peripheral tissues / T. M. Dawson, D. S. Bredt, M. Fotuhi, P. M. Hwang, S. H. Snyder // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 1991. - T. 88 - №. 17 - 7797-7801c.

28. Derbyshire E. R. Structure and regulation of soluble guanylate cyclase / E. R. Derbyshire, M. A. Marletta // Annu. Rev. Biochem. - 2012. - T. 81-533-559c.

29. Dubuc E. Cell-free microcompartmentalised transcription-translation for the prototyping of synthetic communication networks / E. Dubuc, P. A. Pieters, A. J. van der Linden, J. C. van Hest, W. T. Huck, T. F. de Greef // Curr. Opin. Biotech. - 2019. - T. 58-72-80c.

30. Eitel M. The phylogeography of the Placozoa suggests a taxon-rich phylum in tropical and subtropical waters / M. Eitel , B. Schierwater // Mol. Ecol. - 2010. - T. 19 - №. 11-2315-2327c.

31. Eitel M. New insights into placozoan sexual reproduction and development / M. Eitel, L. Guidi, H. Hadrys, M. Balsamo, B. Schierwater // PloS ONE. - 2011 - T. 6 - №. 5-e19639c.

32. Eitel M. Global diversity of the Placozoa / M. Eitel, H. J. Osigus, R. DeSalle, B. Schierwater // PloS ONE. - 2013. - T. 8 - №. 4-e57131c.

33. Eitel M. Comparative genomics and the nature of placozoan species / M. Eitel , W. R. Francis, F. Varoqueaux, J. Daraspe, H. J. Osigus, S. Krebs, S. Vargas, H. Blum, G. A. Williams, B. Schierwater,G. Wörheide // PLOS Biol. - 2018. - T. 16 - №. 7-e2005359c.

34. Elkhatib W. Na+ leak channel cloned from Trichoplax adhaerens extends extracellular pH and Ca2+ sensing for the DEG/ENaC family close to the base of Metazoa /W. Elkhatib, C. L. Smith, A. A. Senatore // J. Biol. Chem. - 2019. - T. 294 - №. 44 - 16320-16336c.

35. Floyd P. D. Capillary electrophoresis analysis of nitric oxide synthase related metabolites in single identified neurons / P. D. Floyd, L. L. Moroz, R. Gillette, J. V.Sweedler // Anal. Chem. - 1998. - T. 70. -№. 11-2243-2247c.

36. Fortunato A. Social feeding behavior of Trichoplax adhaerens / A. Fortunato, A. Aktipis // Front. Ecol. Environ. - 2019. -T. 7-19c.

37. Fuchs S. A. D-amino acids in the central nervous system in health and disease / S. A. Fuchs, R. Berger, L. W. Klomp, T. J. De Koning // Mol Genet Metab. - 2005. - T. 85. -№. 3-168-180c.

38. Fujii N. D-Amino acids in protein: The mirror of life as a molecular index of aging / N. Fujii, T. Takata, N. Fujii, K. Aki, H.Sakaue // Biochim Biophys Acta Proteins Proteom. -2018. - T. 1866. -№. 7-840-847c.

39. Fuller R. R. Single neuron analysis by capillary electrophoresis with fluorescence spectroscopy / R. R. Fuller, L. L. Moroz, R. Gillette, J. V. Sweedler // Neuron. - 1998. -T. 20 -№. 2-173-181c.

40. Fux J. E. Eukaryotic voltage-gated sodium channels: on their origins, asymmetries, losses, diversification and adaptations / J. E. Fux, A. Mehta, J. Moffat, J. D. Spafford // Front. Physiol. - 2018. -T. 9-1406c.

41. Gancedo J. M. Biological roles of cAMP: variations on a theme in the different kingdoms of life // BRE. - 2013. - T. 88 -№. 3-645-668c.

42. Gao B. Wnt signaling gradients establish planar cell polarity by inducing Vangl2 phosphorylation through Ror2 / B. Gao,H. Song, K. Bishop, G. Elliot, L. Garrett, M. A.English, P. Andre, J. Robinson, R. Sood, Y. Minami, A. N.Economides, Y. Yang // Dev. Cell. - 2011. - T. 20 - №. 2-163-176c.

43. Garbowski T. Morphologenetische Studien als Beitrag zur Metodologie zoologischer Forschung. // Jena. - 1903-189c.

44. Genchi G. An overview on D-amino acids // AMINO ACIDS. - 2017. - T. 49. - №. 9-1521-1533c.

45. Graff L. Die Organization der Turbellaria Acoela. // Leipzig: W. Engelmann. 1891. - 90c.

46. Grasshoff M. Die Evolution der Tiere in neuer Darstellung. // Natur und Museum. 1993. -T. 123 -204-218c.

47. Grell K.G. Trichoplax adhaerens F.E. Schulze und die Entstehung der Metazoen. // Naturwiss. Rundschau. - 1971. - T. 24 -160-161c.

48. Grell K. G. Die Ultrastruktur von Trichoplax adhaerens F.E. Schulze. / K. G. Grell, G. Benwitz // Cytobiologie. - 1971. - T. 4 -216-240c.

49. Grell K. G. Eibildung und furchung von Trichoplax adhaerens FE Schulze (Placozoa). // Zoomorphology. - 1972. - T. 73. - № 4 - 297-314c.

50. Grell K. G. Elektronenmikroskopische beobachtungen über das wachstum der eizelle und die bildung der „befruchtungsmembran" von Trichoplax adhaerens FE Schulze (Placozoa) / K. G. Grell, G. Benwitz // Zeitschrift für Morphologie der Tiere. - 1974. - T. 79 - №. 4-295-310c.

51. Grell K. G. Trichoplax adhaerens and the origin of Metazoa // Origine dei Grandi Phyla dei Metazoi, Accademia Nazionale dei Lincei, Convegno Intern. - 1981. -107-121c.

52. Grell K. G. Microscopic anatomy of invertebrates / K. G. Grell, A. Ruthmann, F. W. Harrison, J. A. Westfall // Placozoa, Porifera, Cnidaria, and Ctenophora (Harrison, FW & Westfall, JA. - 1991. -13-28c.

53. Grell K. G., Ruthmann, A. Placozoa. In: Microscopic Anatomy of Invertebrates / F. W. Harrison and J. A. Westfall (eds). New York: Wiley- Liss, 1991, 13-27c.

54. Grell K. G., Benwitz G. Elektronenmikroskopische beobachtungen über das wachstum der eizelle und die bildung der „befruchtungsmembran" von Trichoplax adhaerens FE Schulze (Placozoa). // Zoomorphology - 1974. - T. 79 - № 4- 295-310c.

55. Gruber-Vodicka H. R. Two intracellular and cell type-specific bacterial symbionts in the placozoan Trichoplax H2 / H. R. Gruber-Vodicka, N. Leisch, M. Kleiner, T. Hinzke, M. Liebeke, M. McFall-Ngai, M. G. Hadfield, N. Dubilier // Nat. Microbiol. - 2019. - T. 4 -№. 9-1465-1474c.

56. Guidi L. Ultrastructural analyses support different morphological lineages in the phylum Placozoa Grell, 1971 / L. Guidi, M. Eitel, E. Cesarini, B. Schierwater, M. Balsamo // J. Morph. - 2011. - T. 272 -№. 3-371-378c.

57. Gunn A. Conformationally Distinct Five-Coordinate Heme-NO Complexes of Soluble Guanylate Cyclase Elucidated by Multifrequency Electron Paramagnetic Resonance (EPR) / A. Gunn, E. R. Derbyshire, M. A. Marletta, R. D. Britt // Biochemistry. - 2012. - T. 51-№. 42-8384-8390c.

58. Haeckel E. Die Gastrea & Theorie die phylogenetische Classification des Tierreichs und die Homologie der Keim& blatter. // Jen. Z. Naturw. - 1874. - T. 8 -1-55c.

59. Halanych K. M. The new view of animal phylogeny //Annu. Rev. Ecol. Evol. Syst. - 2004. - T. 35-229-256c.

60. Harsing Jr L. G. Mechanisms of glycine release, which build up synaptic and extrasynaptic glycine levels: The role of synaptic and non-synaptic glycine transporters / Jr L. G. Harsing, P. Matyus // Brain Res. Bull. - 2013. - T. 93 -110-119c.

61. Heyland A. Trichoplax adhaerens, an enigmatic basal metazoan with potential. / Heyland A, Croll R, Goodall S, Kranyak J, Wyeth R. // Methods Mol Biol. - 2014. - T. 1128-45-61c.

62. Hillier B. J. Unexpected modes of PDZ domain scaffolding revealed by structure of nNOS-syntrophin complex / B. J. Hillier, K. S. Christopherson, K. E. Prehoda, D. S. Bredt, W. A. Lim // Science. - 1999. - T. 284 - №. 5415-812-815c.

63. Hope B. T. Neuronal NADPH diaphorase is a nitric oxide synthase / B. T.Hope, G. J. Michael, K. M. Knigge, S. R. Vincent // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 1991. - T. 88 -№. 7-2811-2814c.

64. Horst B. G. Allosteric activation of the nitric oxide receptor soluble guanylate cyclase mapped by cryo-electron microscopy / B. G. Horst, A. L. Yokom, D. J. Rosenberg, K. L. Morris, M. Hammel, J. H. Hurley, M. A. Marletta // eLife. - 2019. - T. 8 - e50634c.

65. Horst B. G. Physiological activation and deactivation of soluble guanylate cyclase / B. G. Horst , M. A. Marletta // Nitric Oxide. - 2018. - T. 77-65-74c.

66. Hoshino D. et al. Exosome secretion is enhanced by invadopodia and drives invasive behavior / D. Hoshino, K. C.Kirkbride, K.Costello, E. S. Clark, S. Sinha, N. Grega-Larson, M. J.Tyska, A. M.Weaver // Cell Rep. - 2013. - T. 5 - №. 5-1159-1168c.

67. Ignarro L. J., ed. Nitric Oxide: Biology and Pathobiology. // San Diego: Academic Press.

- 2000. -1003c.

68. Irazoqui J. E. Evolution of host innate defence: insights from Caenorhabditis elegans and primitive invertebrates /J. E. Irazoqui , J. M. Urbach , F. M. Ausubel // Nat. Rev. Immunol.

- 2010. - T. 10 - №. 1-47-58c.

69. Jackson A. M. Shiny spheres of placozoans (Trichoplax) function in anti-predator defense / A. M. Jackson , L. W. Buss // INVERTEBR BIOL. - 2009. - T. 128. - №. 3-205-212c.

70. Jones R. J. The function of the small insertion in the hinge subdomain in the control of constitutive mammalian nitric-oxide synthases / R. J. Jones, S. M. Smith, Y. T. Gao, B. S. DeMay, K. J. Mann, K. M. Salerno, J. C. Salerno // J. Biol. Chem. - 2004. - T. 279 -№. 35-36876-36883c.

71. Kamm K. Trichoplax genomes reveal profound admixture and suggest stable wild populations without bisexual reproduction / K. Kamm, H. J. Osigus, P. F. Stadler, R. DeSalle, B. Schierwater // Sci. Rep. - 2018. - T. 8 -№. 1-1-11c.

72. Kamm K. Genome analyses of a placozoan rickettsial endosymbiont show a combination of mutualistic and parasitic traits / K. Kamm, H. J. Osigus, P. F. Stadler, DeSalle, B. Schierwater // Sci. Rep. - 2019. - T. 9 - №. 1-1-12c.

73. Kang Y. Structural insights into the mechanism of human soluble guanylate cyclase / Y. Kang, R. Liu, J. X. Wu, L. Chen // Nature. - 2019. - T. 574 - №. 7777-206-210c.

74. Kelley L. A. The Phyre2 web portal for protein modeling, prediction and analysis / L. A. Kelley, S. Mezulis, C. M. Yates M. N. Wass, , M. J. Sternberg // Nat. protoc. - 2015. - T. 10 - №. 6-845-858c.

75. King N. The genome of the choanoflagellate Monosiga brevicollis and the origin of metazoans / N. King, M. J. Westbrook, S. L. Young, A. Kuo, M. Abedin, J. Chapman, S. Fairclough, U. Hellsten, Y. Isogai, I. Letunic, M. Marr, D. Pincus, N. Putnam, A. Rokas, K. J. Wright, R. Zuzow, W. Dirks, M. Good, D. Goodstein, D. Lemons, W. Li, J. B. Lyons, A. Morris, S. Nichols, D. J. Richter, A. Salamov, JGI Sequencing, P. Bork, W. A. Lim, G. Manning, W. T. Miller, W. McGinnis, H. Shapiro, R. Tjian, I. V. Grigoriev, D. Rokhsar // Nature. - 2008. - T. 451 - №. 7180-783-788c.

76. Knoop K. A. Goblet cells: multifaceted players in immunity at mucosal surfaces / K. A. Knoop, R. D. Newberry // Mucosal Immunol. - 2018. - T. 11 - №. 6-1551-1557c.

77. Knudsen G. M. Nitric-oxide synthase (NOS) reductase domain models suggest a new control element in endothelial NOS that attenuates calmodulin-dependent activity / G. M. Knudsen, C. R. Nishida, S. D. Mooney, P. R. O. de Montellano // J. Biol. Chem. - 2003.

- T. 278 -№. 34-31814-31824c.

78. Krumbach T. Trichoplax, die umgewandelte Planulaeiner Hydromeduse. // Zool. Anz. -1907. - T. 31-450-454c.

79. Krumenacker J. S. Regulation of nitric oxide and soluble guanylyl cyclase / J. S. Krumenacker, K. A. Hanafy, F. Murad // Brain Res. Bull. - 2004. - T. 62 -№. 6-505-515c.

80. Kuhl W. Bewegungsphysiologische Untersuchungen an Trichoplax adhaerens F.E.Schulze. / W. Kuhl, G. Kuhl // Zool. Anz. Suppl. - 1963. - T. 26-460-469c.

81. Kuhl W. Untersuchungen uber das Bewegungsverhalten von Trichoplax adhaerens F.E.Schulze (Zeittransformation: Zeitranffung). / W. Kuhl, G. Kuhl // Z. Morph. Okol. Tiere. - 1966 - T. 5 -417-435c.

82. Kurenni D. E. Nitric oxide synthase in tiger salamander retina / D. E. Kurenni, G. A. Thurlow, R. W. Turner, L. L. Moroz, K. A. Sharkey, S. Barnes // J. Comp. Neurol. - 1995.

- T. 361 - №. 3-525-536c.

83. Lane P. The autoinhibitory control element and calmodulin conspire to provide physiological modulation of endothelial and neuronal nitric oxide synthase activity / P. Lane, S. S. Gross // Acta Physiol. - 2000. - T. 168 -№. 1-53-64c.

84. Laumer C. E. Support for a clade of Placozoa and Cnidaria in genes with minimal compositional bias / C. E. Laumer, H. Gruber-Vodicka, M. G. Hadfield, V. B. Pearse, A. Riesgo, J. C. Marioni, G. Giribet // eLife. - 2018. - T. 7-e36278c.

85. Leake L. D. Putative nitric oxide synthase (NOS)-containing cells in the central nervous system of the leech, Hirudo medicinalis: NADPH-diaphorase histochemistry / L. D. Leake, L. L. Moroz // Brain Res. - 1996. - T. 723 - №. 1-2-115-124c.

86. Letunic I. 20 years of the SMART protein domain annotation resource / I. Letunic, P. Bork // Nucleic Acids Res. - 2018. - T. 46 -№. D1-D493-D496c.

87. Leys S. P. Gastrulation in calcareous sponges: in search of Haeckel's gastraea / S. P. Leys, D. Eerkes-Medrano // Integr. Comp. Biol. - 2005. - T. 45 - №. 2-342-351c.

88. Li D. Heme distortion modulated by ligand-protein interactions in inducible nitric-oxide synthase / D. Li, D. J. Stuehr, S. R.Yeh, D. L. Rousseau //J. Biol. Chem. - 2004. - T. 279

- №. 25-26489-26499c.

89. Liebeskind B. J. Evolution of sodium channels predates the origin of nervous systems in animals / B. J. Liebeskind, D. M. Hillis, H. H. Zakon // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. -2011. - T. 108 - №. 22-9154-9159c.

90. Liebeskind B. J. Independent acquisition of sodium selectivity in bacterial and animal sodium channels / B. J. Liebeskind, D. M. Hillis, H. H. Zakon // Cur. Biol. - 2013. - T. 23

- №. 21-R948-R949c.

91. Ghezzi A. Ancient association between cation leak channels and Mid1 proteins is conserved in fungi and animals / A. Ghezzi, B. J. Liebeskind, A. Thompson, N. S. Atkinson, H. H. Zakon // Front. Mol. Neurosci. - 2014. - T. 7-15c.

92. Ma J. Mucins, mucus, and goblet cells / J. Ma, Rubin, J. A. Voynow // Chest. - 2018. - T. 154 - №. 1-169-176c.

93. Martin E. Soluble guanylyl cyclase: The nitric oxide receptor. / E. Martin, V. Berka, A. L. Tsai, F. Murad // Methods Enzymol. - 2005 - T. 396-478-492c.

94. Maruyama Y. K. Occurrence in the field of a long-term, year-round, stable population of placozoans // Biol. Bull. - 2004. - T. 206 - №. 1-55-60c.

95. Mayorova T. D. Cells containing aragonite crystals mediate responses to gravity in Trichoplax adhaerens (Placozoa), an animal lacking neurons and synapses / T. D. Mayorova ,C. L. Smith, K. Hammar, C. A. Winters, N. B. Pivovarova, M. A. Aronova, R. D. Leapman,T. S. Reese // PloS ONE. - 2018. - T. 13 - №. 1-e0190905c.

96. Mayorova T. D. The ventral epithelium of Trichoplax adhaerens deploys in distinct patterns cells that secrete digestive enzymes, mucus or diverse neuropeptides / T. D.

Mayorova, K. Hammar, C. A. Winters, T. S. Reese, C. L. Smith // Biol Open. - 2019. - T. 8 - №. 8-bio045674c.

97. Merino-Gracia J. Insights into the C-terminal peptide binding specificity of the PDZ domain of neuronal nitric-oxide synthase characterization of the interaction with the tight junction protein claudin-3 / J. Merino-Gracia, C. Costas-Insua, M. Á. Canales, I. Rodríguez-Crespo // J. Biol. Chem. - 2016. - T. 291 - №. 22-11581-11595c.

98. Metschnikoff E. Embriologische Studien an Medusen. Ein Beitrag zur Genealogie der Primitive-Organe. // Wien. - 1886. -159c

99. Miller D. J. Cryptic complexity captured: the Nematostella genome reveals its secrets / D. J. Miller, E. E. Ball // Trends Genet. - 2008. - T. 24 -№. 1-1-4c.

100. Miyazawa H. Mitochondrial genome of a Japanese placozoan / H. Miyazawa, M. A.Yoshida, K.Tsuneki, H. Furuya // Zool. Sci. - 2012. - T. 29 -№. 4-223-228c.

101. Moncada S. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology // Pharmacol rev. - 1991. - T. 43-109-142c.

102. Montfort W. R. Structure and activation of soluble guanylyl cyclase, the nitric oxide sensor / W. R. Montfort, J. A. Wales, A. Weichsel // Antioxid. Redox Signal. - 2017. - T. 26 -№. 3-107-121c.

103. Moran Y. Evolution of voltage-gated ion channels at the emergence of Metazoa / Y. M. Moran, G. Barzilai, B. J. Liebeskind, H. H. Zakon // J. Exp. Biol. - 2015. - T. 218 -№. 4-515-525c.

104. Moroz L. L. Parallel evolution of nitric oxide signaling: diversity of synthesis & memory pathways / L. L. Moroz, A. B. Kohn // Frontiers in bioscience (Landmark edition). - 2011. - T. 16 - 2008c.

105. Moroz L. L. Unbiased view of synaptic and neuronal gene complement in ctenophores: Are there pan-neuronal and pan-synaptic genes across Metazoa? / L. L. Moroz, A. B. Kohn // Integr. Comp. Biol. - 2015. - T. 55 - №. 6-1028-1049c.

106. Moroz L. L. From Polyplacophora to Cephalopoda: Comparative analysis of nitric oxide signalling in Mollusca / L. L. Moroz, R. Gillette // Acta Biol. Hung. - 1995. - T. 46 -№. 2-4-169c.

107. Moroz L. L. Non-enzymatic production of nitric oxide (NO) from NO synthase inhibitors / L. L. Moroz, S. W. Norby, L. Cruz, J. V. Sweedler, R. Gillette,R. B. Clarkson // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1998. - T. 253 - №. 3-571-576c.

108. Moroz L. L. Single-cell analyses of nitrergic neurons in simple nervous systems / L. L. Moroz, R. Gillette, J. V. Sweedler // J. Exp. Biology. - 1999. - T. 202 - №. 4-333-341c.

109. Moroz L. L. Giant identified NO-releasing neurons and comparative histochemistry of putative nitrergic systems in gastropod molluscs // Microsc. Res. Tech. - 2000. - T. 49 -№. 6-557-569c.

110. Moroz L. L. Distribution of NADPH-diaphorase reactivity and effects of nitric oxide on feeding and locomotory circuitry in the pteropod mollusc, Clione limacina / L. L. Moroz , T. P. Norekian, T. J. Pirtle, K. J. Robertson, R. A. Satterlie // J. Comp. Neurol. - 2000. -T. 427 - №. 2-274-284c.

111. Moroz L. L. Nitric oxide regulates swimming in the jellyfish Aglantha digitale / L. L. Moroz, R. W. Meech, J. V. Sweedler, G. O. Mackie // J. Comp. Neurol. - 2004. - T. 471 - №. 1-26-36c.

112. Moroz L. L. Direct single cell determination of nitric oxide synthase related metabolites in identified nitrergic neurons / L. L. Moroz, R. L. Dahlgren, D. Boudko, J. V. Sweedler, P. Lovell // J. Inorg. Biochem. - 2005. - T. 99 - №. 4-929-939c.

113. Moroz L. L. The genealogy of genealogy of neurons // Comm. Integr. Biol. - 2014. - T. 7 - №. 6-e993269c.

114. Moroz L. L. The ctenophore genome and the evolutionary origins of neural systems / L. L. Moroz, K. M. Kocot, M. R. Citarella, S. Dosung, T. P. Norekian, I. S. Povolotskaya, A. P. Grigorenko, C. Dailey, E. Berezikov, K. M. Buckley, A. Ptitsyn, D. Reshetov, K. Mukherjee, T. P. Moroz, Y. Bobkova, F. Yu, V. V. Kapitonov, J. Jurka, Y. V. Bobkov, J. J. Swore, D. O. Girardo, A. Fodor, F. Gusev, R. Sanford, R. Bruders, E. Kittler, C. E. Mills, J. P. Rast, R. Derelle, V. V. Solovyev, F. A. Kondrashov, B. J. Swalla, J. V. Sweedler, E. I. Rogaev, K. M. Halanych, A. B. Kohn // Nature. - 2014. - T. 510 - №. 7503-109-114c.

115. Moroz L. L. Neurosystematics and periodic system of neurons: model vs reference species at single-cell resolution // ACS Chem. Neurosci. - 2018. - T. 9 - №. 8-1884-1903c.

116. Moroz L. L. Microchemical identification of enantiomers in early-branching animals: Lineage-specific diversification in the usage of D-glutamate and D-aspartate / L. L. Moroz, D. Sohn, D. Y. Romanova, A. B. Kohn // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2020. -T. 527 - 947-952c

117. Moroz L. L. The diversification and lineage-specific expansion of nitric oxide signaling in Placozoa: insights in the evolution of gaseous transmission / L. L. Moroz, D. Y. Romanova, M. A. Nikitin, D. Sohn, A. B. Kohn, E. Neveu, F. Varoqueaux, D. Fasshauer // Sci. Rep. - 2020. - T. 10 - №. 1-1-16c.

118. Nakano H. Survey of the Japanese coast reveals abundant placozoan populations in the Northern Pacific Ocean // Scientific reports. - 2014. - T. 4 -5356c.

119. Nickel M. The contractile sponge epithelium sensu lato-body contraction of the demosponge Tethya wilhelma is mediated by the pinacoderm / M. Nickel, C. Scheer, J. U. Hammel, J. Herzen, F.Beckmann // J. Exp. Biol. - 2011. - T. 214 - №. 10-1692-1698c.

120. Nikitin M. Bioinformatic prediction of Trichoplax adhaerens regulatory peptides // Gen. Comp. Endocrinol. - 2015. - T. 212-145-155c.

121. Nishida C. R. Autoinhibition of Endothelial Nitric-oxide Synthase. Identifcation of an electron transfer control element / C. R. Nishida, P. R. O. de Montellano // J. Biol. Chem. - 1999. - T. 274 - №. 21-14692-14698c.

122. Nishida C. R. Control of electron transfer in nitric-oxide synthases. Swapping of autoinhibitory elements among nitric-oxide synthase isoforms / C. R. Nishida, P. R. O. de Montellano //J. Biol. Chem. - 2001. - T. 276 - №. 23-20116-20124c.

123. Nishino A. Evolutionary history of voltage-gated sodium channels / A. Nishino, Y. Okamura // Voltage-gated Sodium Channels: Structure, Function and Channelopathies. -Springer, Cham, 2017. - 3-32c.

124. Noll F.C. Zber das Leben niederer Seatiere. // Ber. Senckenberg. Ges Franfurt. - 1890. -85-87c.

125. Ollivaux C. Biogenesis of d-amino acid containing peptides/proteins: where, when and how? / C. Ollivaux, D. Soyez, J. Y. Toullec // J. Pept. Sci. - 2014. - T. 20 -№. 8-595-612c.

126. Omasits U. Protter: interactive protein feature visualization and integration with experimental proteomic data / U. Omasits, C. H. Ahrens, S. Müller, B. Wollscheid // Bioinformatics. - 2014. - T. 30 - №. 6-884-886c.

127. Osigus H. J. Polyplacotoma mediterranea is a new ramified placozoan species / H. J. Osigus, S. Rolfes, R. Herzog, K. Kamm, B. Schierwater // Cur. Biol. - 2019. - T. 29 - №. 5-R148-R149c.

128. Oulavallickal T. The Pseudomonas syringae pv. actinidiae chemoreceptor protein F (PscF) periplasmic sensor domain: cloning, purification and X-ray crystallographic analysis / T. Oulavallickal, J. L. Brewster, J. L. McKellar, M. J. Fairhurst, N. A. Tenci, M. LGerth // Acta Crystallogr. B. - 2017. - T. 73 - №. 12-701-705c.

129. Paknia O. Global habitat suitability and ecological niche separation in the phylum placozoa / O. Paknia, B. Schierwater //PLoS ONE. - 2015. - T. 10 - №. 11-e0140162c.

130. Pasqualotto B. A. Citrulline in the rat brain: immunohistochemistry and coexistence with NADPH-diaphorase / B. A. Pasqualotto, B. T. Hope, S. R. Vincent // Neurosci. Lett. -1991. - T. 128 - №. 2-155-160c.

131. Pearse V. B. Field biology of placozoans (Trichoplax): distribution, diversity, biotic interactions / V. B. Pearse, O. Voigt // Integr. Comp. Biol. - 2007. - T. 47 - №. 5-677-692c.

132. Pearse V. B. Growth and behavior of Trichoplax adhaerens: first record of the phylum Placozoa in Hawaii. - 1989.

133. Pereira R.T. Distribution of goblet and endocrine cells in the intestine: A comparative study in Amazonian freshwater Tambaqui and hybrid catfish. / R.T. Pereira, C. Nebo, L. de Paula Naves, R. Fortes-Silva, I. R. Cardoso de Oliveira, R.R. Paulino, C.D. Drummond, P.V. Rosa // J Morphol. - 2020. - T. 281- № 1 - 55-67c.

134. Piekut T. Early Metazoan Origin and Multiple Losses of a Novel Clade of RIM Presynaptic Calcium Channel Scaffolding Protein Homologs / T. Piekut, Y. Y. Wong, S. E. Walker, C. L. Smith, J. Gauberg, A. N. Harracksingh, C. Lowden, B. B. Novogradac, H.-Y. M. Cheng, G. E. Spencer, A. Senatore // Genome Biol. Evol. - 2020. - T. 12 -№. 8-1217-1239c.

135. Pozdnyakov I. Diversity and evolution of four-domain voltage-gated cation channels of eukaryotes and their ancestral functional determinants / I. Pozdnyakov, O. Matantseva , S. Skarlato // Sci Rep. - 2018. - T. 8 - №. 1-1-10c.

136. Rassat J. Trichoplax adhaerens FE Schulze (Placozoa) in the scanning electron microscope / J. Rassat, A. Ruthmann // Zoomorphologie. - 1979. - T. 93 - №. 1-59-72c.

137. Roelink H. Molecular cloning and chromosomal localization to 17q21 of the human WNT3 gene / H. Roelink, J. Wang, D. M. Black, E. Solomon, R. Nusse // Genomics. -1993. - T. 17 - №. 3-790-792c.

138. Romanova D. Y. Glycine as a signaling molecule and chemoattractant in Trichoplax (Placozoa): insights into the early evolution of neurotransmitters / D. Y. Romanova, A. Heyland, D. Sohn, A. B. Kohn, D. Fasshauer, F. Varoqueaux, L. L. Moroz // NeuroReport. - 2020. - T. 31 - №. 6-490-497c.

139. Romanova D. Y. Sodium action potentials in placozoa: Insights into behavioral integration and evolution of nerveless animals / D. Y.Romanova, I. V.Smirnov, M. A.Nikitin, A. B.Kohn, A. I.Borman, A. Y.Malyshev, P. M.Balaban, L. L.Moroz // Biochem. Biophys. Res. Comm. - 2020. - T. 532 - №1-120-126.

140. Ruiz-Stewart I. Guanylyl cyclase is an ATP sensor coupling nitric oxide signaling to cell metabolism / I. Ruiz-Stewart, S. R. Tiyyagura, J. E. Lin, S. Kazerounian, G. M. Pitari, S. Schulz, E. Martin, F. Murad, and S. A. Waldman // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2004. -T. 101 - №. 1-37-42c.

141. Ruthman A. Cell differentiation, DNA content and chromosomes of Trichoplax adhaerens F.E.Schulze // Cytobiologie - 1977 - T. 15-58-64c.

142. Ruthmann A. The ventral epithelium of Trichoplax adhaerens (Placozoa): Cytoskeletal structures, cell contacts and endocytosis / A. Ruthmann, G. Behrendt, R. Wahl // Zoomorphology. - 1986 - T. 106 - №. 2-115-122c.

143. Saitoh T. Molecular cloning and characterization of human WNT8A / T. Saitoh, M. Katoh // Int. J. Oncol. - 2001. - T. 19 - №. 1-123-127c.

144. Salerno J. C. An autoinhibitory control element defines calcium-regulated isoforms of nitric oxide synthase /J. C. Salerno, D. E. Harris, K. Irizarry, B. Patel, A. J. Morales, S. M. E. Smith, P. Martasek, L. J. Roman, B. S. S. Masters, C. L. Jones, B. A. Weissman, P. Lane, Q. Liu, S. S. Gross // J. Biol. Chem. - 1997. - T. 272 - №. 47-29769-29777c.

145. Satija R. Genome-wide functional element detection using pairwise statistical alignment outperforms multiple genome footprinting techniques / R. Satija, J. Hein, G. A. Lunter // Bioinformatics. - 2010. - T. 26 - №. 17-2116-2120c.

146. Shalek A. K. Single-cell RNA-seq reveals dynamic paracrine control of cellular variation / A. K. Shalek, R. Satija, J. Shuga, J. J. Trombetta, D. Gennert, D. Lu, P. Chen, R. S. Gertner, J. T. Gaublomme, N. Yosef, S. Schwartz, B. Fowler, S. Weaver, J. Wang, X. Wang, R. Ding, R. Raychowdhury, N. Friedman, N. Hacohen, H. Park, A. P. May, A. Regev // Nature. - 2014. - T. 510 - №. 7505-363-369c.

147. Schiebinger G. Optimal-transport analysis of single-cell gene expression identifies developmental trajectories in reprogramming / G. Schiebinger, J. Shu, M. Tabaka, B. Cleary, V. Subramanian, A. Solomon, J. Gould, S. Liu, S. Lin, P. Berube, L. Lee, J. Chen, J. Brumbaugh, P. Rigollet, K. Hochedlinger, R. Jaenisch, A. Regev, E. S. Lander // Cell. -2019. - T. 176 - №. 4-928-943c.

148. Schierwater B. My favorite animal, Trichoplax adhaerens // BioEssays. - 2005. - T. 27 -№. 12-1294-1302c.

149. Schierwater B. The Diploblast-Bilateria sister hypothesis: parallel evolution of a nervous systems in animals / B. Schierwater, S. O. Kolokotronis, M. Eitel, R. DeSalle // Comm. Integr. Biol. - 2009. - T. 2 - №. 5 - 403-405c.

150. Schierwater B. Concatenated analysis sheds light on early metazoan evolution and fuels a modern "urmetazoon" hypothesis / B. Schierwater, M. Eitel, W. Jakob, H.-J. Osigus, H. Hadrys, S. L. Dellaporta, S.-O. Kolokotronis, R. DeSalle // PLoS Biol. - 2009. - T. 7 - №. 1-e1000020c.

151. Schierwater B. Placozoa and the evolution of Metazoa and intrasomatic cell differentiation / B. Schierwater, D. de Jong, R. DeSalle // Int. J. Biochem. Cell Biol.. -2009. - T. 41 - №. 2-370-379c.

152. Schierwater B. Trichoplax and Placozoa: one of the crucial keys to understanding metazoan evolution / B. Schierwater, M. Eitel, H. J. Osigus, K. von der Chevallerie, T. Bergmann, H. Hadrys, M. Cramm, L. Heck, W. Jacob, M. R. Lang, R. DeSalle // Key transitions in animal evolution. - 2010. - T. 289 - 326c.

153. Schierwater B. The early evolution of Hox genes: a battle of belief? / B. Schierwater, K. Kamm // Hox Genes. - Springer, New York, NY, 2010. - 81-90c.

154. Schierwater B. Placozoa / B. Schierwater, R. DeSalle //Current Biology. - 2018. - T. 28

- №. 3 - R97-R98c.

155. Schubotz H. Ist Trichoplax die umgewandelte Planula einer Hydromeduse // Zool. Anz.

- 1912. - T. 39 - 582-585c.

156. Schuchert P. Trichoplax adhaerens (Phylum Placozoa) has cells that react with antibodies against the neuropeptide RFamide // Acta Zool. - 1993. - T. 74 - №. 2-115-117c.

157. Schulze F. E. Trichoplax adhaerens, nov. gen., nov. spec // Zool. Anz. - 1883. - T. 6 -92-97c.

158. Schwartz V. Das radialpolare Differenzierungsmuster bei Trichoplax adhaerens FE Schulze (Placozoa) / The Radial Polar Pattern of Differentiation in Trichoplax adhaerens FE Schulze (Placozoa) // Zeitschrift für Naturforschung C. - 1984. - T. 39 - №. 7-8-818-832c.

159. Sebe-Pedros A. Early metazoan cell type diversity and the evolution of multicellular gene regulation / A. Sebe-Pedros, E. Chomsky, K. Pang, D. Lara-Astiaso, F. Gaiti, Z. Mukamel, I. Amit, A. Hejnol, B. M. Degnan, A. Tanay // Nat. Ecol. Evol. - 2018. - T. 2 - №. 7-1176-1188c.

160. Senatore A. Physiology and evolution of voltage-gated calcium channels in early diverging animal phyla: Cnidaria, placozoa, porifera and ctenophora / A. Senatore, H. Raiss, P. Le // Front. Physiol. - 2016. - T. 7-481c.

161. Senatore A. Neuropeptidergic integration of behavior in Trichoplax adhaerens, an animal without synapses / A. Senatore, T. S. Reese, C. L. Smith // J. Exp. Biol. - 2017. - T. 220 -№. 18-3381-3390c.

162. Sasabe J. Emerging role of d-amino acid metabolism in the innate defense / J. Sasabe, M. Suzuki // Front. Microbiol. - 2018. - T. 9. - 933c.

163. Shalek A. K. Single-cell transcriptomics reveals bimodality in expression and splicing in immune cells / A. K. Shalek, R. Satija, X. Adiconis, R. S. Gertner, J. T. Gaublomme, R. Raychowdhury, S. Schwartz, N. Yosef, C. Malboeuf, D. Lu, J. J. Trombetta, D. Gennert,

A. Gnirke, A. Goren, N. Hacohen, J. Z. Levin, H. Park, A. Regev // Nature. - 2013. - T. 498 - №. 7453-236-240c.

164. Shu C. J. The NIT domain: a predicted nitrate-responsive module in bacterial sensory receptors / C. J. Shu , L. E. Ulrich , I. B. Zhulin // Trends Biochem. Sci. - 2003. - T. 28 -№. 3-121-124c.

165. Signorovitch A. Y. Caribbean placozoan phylogeography / A. Y. Signorovitch, S. L. Dellaporta, L. W. Buss // The Biological Bulletin. - 2006. - T. 211 - №. 2 - 149-156c.

166. Signorovitch A. Y. Comparative genomics of large mitochondria in placozoans / A. Y. Signorovitch, L. W. Buss, S. L. Dellaporta //PLoS Genet. - 2007. - T. 3 - №. 1-e13c.

167. Smith C. L. Novel cell types, neurosecretory cells, and body plan of the early-diverging metazoan Trichoplax adhaerens / C. L.Smith, F.Varoqueaux, M. Kittelmann, R. N.Azzam,

B. Cooper, C. A.Winters, M. Eitel, D. Fasshauer, T. S.Reese // Cur. Biol. - 2014. - T. 24 - №. 14-1565-1572c.

168. Smith C. L. Coordinated feeding behavior in Trichoplax, an animal without synapses / C. L. Smith, N. Pivovarova, T. S. Reese // PloS ONE. - 2015. - T. 10 - №. 9-e0136098c.

169. Smith C. L. Adherens junctions modulate diffusion between epithelial cells in Trichoplax adhaerens / C. L. Smith, T. S. Reese // Biol. Bull. - 2016. - T. 231 - №. 3-216-224c.

170. Smith C. L. Evolutionary insights into T-type Ca2+ channel structure, function, and ion selectivity from the Trichoplax adhaerens homologue / C. L. Smith, S. Abdallah, Y. Y. Wong, P. Le, A. N. Harracksingh, L. Artinian, A. N. Tamvacakis, V. Rehder, T. S. Reese, A. Senatore // J. Gen. Physiol. - 2017. - T. 149 - №. 4-483-510c.

171. Smith C. L. Insights into the evolution of digestive systems from studies of Trichoplax adhaerens / C. L. Smith, T. D. Mayorova // Cell Tissue Res. - 2019. -1-15c.

172. Specian R. D. Functional biology of intestinal goblet cells / R. D. Specian , M. G. Oliver // Am. J. Physiol. - 1991. - T. 260 - №. 2-183-C193c.

173. Srivastava M. The Trichoplax genome and the nature of placozoans / M. Srivastava, E. Begovic, J. Chapman, N. H. Putnam, U. Hellsten, T. Kawashima, A. Kuo, T. Mitros, A. Salamov, M. L. Carpenter, A. Y. Signorovitch, M. A. Moreno, K. Kamm, J. Grimwood, J. Schmutz, H. Shapiro, I. V. Grigoriev, L. W. Buss, B. Schierwater, S. L. Dellaporta, D. S. Rokhsar // Nature. - 2008. - T. 454 - №. 7207-955-960c.

174. Stiasny G. Einige histologische Details über Trichoplax adhaerens // Zeitschrift für wissenschaftliche Zoologie. - 1903. - T. 75-430-436c.

175. Syed T. Trichoplax adhaerens: discovered as a missing link, forgotten as a hydrozoan, rediscovered as a key to metazoan evolution / T. Syed, B. Schierwater // Vie et Milieu. -2002. - T. 52 - №. 4-177-188c.

176. Syed T. The evolution of the Placozoa: a new morphological model / T. Syed, B. Schierwater // Senckenbergiana lethaea. - 2002. - T. 82 - №. 1-315-324c.

177. Telford M. J. Phylogenomic insights into animal evolution / M. J. Telford , G. E. Budd, H. Philippe // Cur. Biol. - 2015. - T. 25 - №. 19-R876-R887c.

178. Telford M. J. Evolution: a sisterly dispute / M. J. Telford , L. L. Moroz, K. M. Halanych // Nature. - 2016. - T. 529 - №. 7586-286-287c.

179. Thiemann M. Trichoplax adhaerens FE Schulze (Placozoa): The formation of swarmers / M. Thiemann, A. Ruthmann // Zeitschrift für Naturforschung C. - 1988. - T. 43 - №. 11-12-955-957c.

180. Thiemann M. Spherical forms ofTrichoplax adhaerens (Placozoa) / M. Thiemann, A. Ruthmann // Zoomorphology. - 1990. - T. 110 - №. 1-37-45c.

181. Thiemann M. Alternative modes of asexual reproduction inTrichoplax adhaerens (Placozoa) / M. Thiemann, A. Ruthmann // Zoomorphology. - 1991. - T. 110 - №. 3-165-174c.

182. Tochio H. Formation of nNOS/PSD-95 PDZ dimer requires a preformed ß-finger structure from the nNOS PDZ domain / H. Tochio, Y. K. Mok, Q. Zhang, H. M. Kan, D. S. Bredt, M. Zhang // J. Mol. Biol. - 2000. - T. 303 - №. 3-359-370c.

183. Trapnell C. The dynamics and regulators of cell fate decisions are revealed by pseudotemporal ordering of single cells / C. Trapnell, D. Cacchiarelli, J. Grimsby, P. Pokharel, S. Li, M. Morse, N. J. Lennon, K. J. Livak, T. S. Mikkelsen, J. L Rinn // Nat. Biotech. - 2014. - T. 32 - №. 4-381c.

184. Qiu X. Single-cell mRNA quantification and differential analysis with Census / X. Qiu, A. Hill, J. Packer, D. Lin, Y. A. Ma, C. Trapnell // Nat. Meth. - 2017. - T. 14 - №. 3-309-315c.

185. Turner R. W. Localization of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase activity in electrosensory and electromotor systems of a gymnotiform teleost, Apteronotus leptorhynchus / R. W.Turner , L. L. Moroz // J. Comp. Neurol. - 1995. - T. 356 - №. 2-261-274c.

186. Ueda T. Dynamic patterns in the locomotion and feeding behaviors by the placozoan Trichoplax adhaerence / T. Ueda , S. Koya , Y. K. Maruyama // Biosystems. - 1999. - Т. 54 - №. 1-2-65-70c.

187. Varoqueaux F. High cell diversity and complex peptidergic signaling underlie placozoan behavior / F. Varoqueaux, E. A.Williams, S. Grandemange, L.Truscello, K. Kamm, B. Schierwater, G.Jekely, D. Fasshauer // Cur. Biol. - 2018. - Т. 28 - №. 21 - 3495-3501c.

188. Verleysdonk S. Rapid uptake and degradation of glycine by astroglial cells in culture: synthesis and release of serine and lactate / S. Verleysdonk, H. Martin, W. Willker, D. Leibfritz, B. Hamprecht // Glia. - 1999. - Т. 27 - №. 3-239-248c.

189. Voigt O. Placozoa-no longer a phylum of one / O. Voigt, A. G. Collins, V. B. Pearse, J. S. Pearse, A. Ender, H. Hadrys, B. Schierwater // Cur. Biol. - 2004. - Т. 14 - №. 22-R944-R945c.

190. Walther M. Taurine in the marine hydrozoan Hydractinia echinata: stabilizer of the larval state? // COMP BIOCHEM PHYS A. - 2002. - Т. 133 - №. 1-179-190c.

191. Whelan N. V. Ctenophore relationships and their placement as the sister group to all other animals / N. V. Whelan, K. M. Kocot, T. P. Moroz, K. Mukherjee, P. Williams, G. Paulay, L. L. Moroz, K. M. Halanych // Nat. Ecol. Evol. - 2017. - Т. 1 - №. 11-1737-1746c.

192. Reid P. J. W.Wnt signaling and polarity in freshwater sponges / P. J. W. Reid, E. Matveev, A. McClymont, D. Posfai, A. L. Hill, S. P. Leys // BMC Evol. Biol. - 2018. - Т. 18 - №. 1-12c.

193. Yu A. Glutamate and glycine binding to the NMDA receptor / A. Yu, A. Y. Lau // Structure. - 2018. - Т. 26 - №. 7-1035-1043c.

194. Zakon H. H. Adaptive evolution of voltage-gated sodium channels: the first 800 million years // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 2012. - Т. 109 - №. Supplement 1-10619-10625c.

195. Zheng G. X. Y. Massively parallel digital transcriptional profiling of single cells / G. X. Y. Zheng, J. M. Terry, P. Belgrader, P. Ryvkin, Z. W. Bent, R. Wilson, S. B. Ziraldo, T. D. Wheeler, G. P. McDermott, J. Zhu, M. T. Gregory, J. Shuga, L. Montesclaros, J. G. Underwood, D. A. Masquelier, S. Y. Nishimura, M. Schnall-Levin, P. W. Wyatt, C. M. Hindson, R. Bharadwaj, A. Wong, K. D. Ness, L. W. Beppu, H. J. Deeg, C. McFarland, K. R. Loeb, W. J. Valente, N. G. Ericson, E. A. Stevens, J. P. Radich, T. S. Mikkelsen, B. J. Hindson, J. H. Bielas // Nat. Comm. - 2017. - Т. 8 - №. 1-1-12c.

196. Zhou L. Neuronal nitric oxide synthase: structure, subcellular localization, regulation, and clinical implications / L. Zhou, D. Y. Zhu // Nitric oxide. - 2009. - Т. 20 - №. 4-223-230c.

197. Бианки В. Л. Асимметрия мозга животных. - Наука. Ленингр. отд-ние, 1985.

198. Догель В. А. Зоология беспозвоночных. - Изд-во" Высшая школа", 1981.

199. Иванов А. В. Trichoplax adhaerens - фагоцителлообразное животное. // Зоол. журн.

- 1973. - Т. 52 - 1117-1130с.

200. Иванов Д. Л. Новая находка примитивного многоклеточного организма Trichoplax sp. / Д. Л. Иванов, В. В. Малахов, А.Б. Цетлин // Зоол. журн. - 1980. -Т. 59 - 1735-1739с.

201. Иванов Д. Л. Тонкая морфология и ультраструктура примитивного многоклеточного организма Trichoplax sp. 1. Морфология взрослых особей и бродяжек по данным растровой электронной микроскопии / Д. Л. Иванов, В. В. Малахов, А.Б. Цетлин // Зоол. журн. - 1980. - Т. 59 - №. 12 - 1765с.

202. Иванов Д. Л. Тонкая морфология и ультраструктура примитивного многоклеточного организма Trichoplax sp. 2. Ультраструктура взрослых особей. / Д. Л. Иванов, В. В. Малахов, Г. Б. Прилепский, А.Б. Цетлин //Зоол. журн. - 1982г. - Т.61

- 645-652с.

203. Малахов В. В. Трихоплакс — живая модель происхождения многоклеточных / В. В. Малахов, Л. П. Незлин // Природа. - 1983. - Т. 3 - 32-41с.

204. Малахов В. В. Загадочные группы морских беспозвоночных: трихоплакс, ортонектиды, дициемиды, губки. - Изд-во МГУ, 1990.

205. Мечников И. И. Эмбриологические исследования над медузами. // В кн.: Избранные биологические произведения. М.: АН СССР. - 1950. - 271-472с.

206. Мечников И. И. Сравнительно-эмбриологические исследования. III. О гаструле некторых многоклеточных. // В кн.: Академическое собрание сочинений. Т. 3. М.: Госиздат мед. лит. - 1955. -104-24с.

207. Окштейн И. Л. К биологии Trichoplax sp.(Placozoa) // Зоол. журн. - 1987. - Т. 66 -№. 3 - 339с.

208. Романова Д. Ю. Разнообразие клеточных типов у гаплотипа H4 Placozoa sp //Морской биологический журнал. - 2019. - Т. 4 - №. 1 - 81-90c.

209. Серавин Л. Н. Особенности ориентировки беспозвоночных в трехмерном пространстве / Л. Н. Серавин, А. А. Карпенко // Зоол. журн. - 1987. - Т. 66 - №. 9 -1285-1292с.

210. Серавин Л. Н. Особенности тонкого строения трихоплакса Trichoplax adhaerens, питающегося на плотных растительных субстратах / Л. Н. Серавин, З. П. Герасимова // Цитология. - 1998. - Т. 30 - 1188-1193с.

211. Серавин Л. Н. Амебоидные свойства клеток в процессе раннего морфогенеза и природа возможного протозойного предка Ме^оа / Л. Н. Серавин, А. В. Гудков // Журн. общ. биол. - 2005. - Т. 66 - №. 3 - 212-223с.

212. Серавин Л. Н.ТпсЬор1ах аёЬаегепБ (тип Р1асо2оа)-одно из самых примитивных многоклеточных животных / Л. Н. Серавин, А. В. Гудков//СПб.: ТЕССА. - 2005.

213. Шарова И. Х. Зоология беспозвоночных // М.: ВЛАДОС. - 2002. - 162-184с.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Приложение №1

Список водорослей, использованных при культивировании Placozoa в качестве источников пищи

o Tetraselmis marina (Cienkowski) R.E.Norris, Hori & Chihara, 1980 WoRMS Aphia ID

376158 (Chlorophyta) o Nannochloropsis salina D.J.Hibberd, 1981 WoRMS Aphia ID 376044 (Ochrophyta) o Leptolyngbya ectocarpi (Gomont) Anagnostidis et Komarek 1988 WoRMS

Aphia ID 615645 (Cyanobacteria) o Spirulina versicolor Cohn ex Gomont 1892 WoRMS Aphia ID 495757 (Cyanobacteria) o Entomoneispaludosa (Entomoneispaludosa (W.Smith) Reimer, 1975 WoRMS Aphia ID

163646 (Ochrophyta), strain 1EP60530P (Romanova et al., 2017) o Rhodomonas salina (Wislouch) D.R.A.Hill & R.Wetherbee, 1989 WoRMS Aphia ID 106316 (Cryptophyta)

Приложение №2

Использованные растворы

o Искусственная морская вода (ASW; должна быть всегда

свежеприготовленной, максимальный срок хранения - 1 неделя)

■ Смесь морской соли (например, Red sea salt # 222597521890, Red Sea, или Pro-Reef sea salt, #10524, Tropic Marin)

■ Свежеприготовленная дистиллированная вода или MilliQ вода o Растворы для культивации водорослей

■ Стоковый раствор (сохранять при 4°C)

• 1.75 М KNÜ3

• 25 мМ К2НРО4

• 25 мМ Fe2SÜ4

• Дополнительный стоковый раствор "A5":

• 23272 мг/л FeC6H5Ü7

• 1009,4 мг/л MnSO4, 7H2Ü

• 78 мг/л CuSO4, 5H2Ü

• 176 мг/л ZnSO4, 7H2Ü

• 50 мг/л Na2MoÜ4, 2H2O

• 571 мг/л H3BO3

• 95 мг/л C0SO4, 7H2Ü

■ Рабочий раствор (сохранять при 4°C)

• В небольшую колбу добавить 200 мкл KNÜ3 (финальная концентрация 7 мМ), 20 мл К2НРО4 (финальная концентрация 0.1 мМ) , 20 мкл мМ Fe2(SÜ4)3 (финальная концентрация 0.1 мМ) довести до 50 мл дистиллированной водой; размешать.

• Для оптимального роста Tetraselmis marina также добавить 10 мкл суспензии водорослей.

Приложение №3

Протокол культивации Placozoa с использованием зеленой водоросли T. marina

Отдельная чашка Петри с водорослями может являться стартовым материалом для

возобновления культуры экспериментальных животных. Мы рекомендуем готовить новые

чашки Петри с матами микроводоросли T. marina каждые 7 дней, на которые можно

перенести животных для поддержания или увеличения численности популяции животных.

1. Приготовить стерильные чашки Петри (диаметром 9 или 20 см);

2. Приготовить свежую морскую воду ASW (примерно 50 мл для заполнения чашек Петри (9 см) или 500 мл для заполнения чашек Петри (20 см), соответственно;

3. Для каждой 9-сантиметровой чашки Петри добавить 40 мл морской воды ASW, 200 мкл KNÜ3, 20 мкл К2НРО4 и Fe2SÜ4;

4. Добавить 10 мкл раствора A5 для каждой чашки Петри как необходимый источник микроэлементов для роста Tetraselmis marina и цианобактерий;

5. Использовать новые «наконечники» пипеток для каждой чашки Петри;

6. Для наращивания водорослевого мата Tetraselmis marina, добавить примерно 2.5 x105 клеток микроводоросли в каждую 9-см чашку (или примерно 1 мл плотной маточной культуры водорослей);

7. Для культивации штамма H4 необходимо использовать 1 мл плотной смешанной культуры цианобактерий (1:1 - Leptolyngbya ectocarpi: Spirulina versicolor), а также добавить в каждую 9см чашку Петри 1 мл Tetraselmis marina;

8. Чашки Петри должны находиться в условиях постоянной комнатной температуры (примерно 22-24°C) на стеклянной подставке, под которой размещена светодиодная лента;

9. Каждый второй день культивационные чашки должны проверяться на контаминацию (в случаях контаминации чашки изолируются, тщательно вымываются и проходят цикл стерилизации);

10. Когда плотная водорослевая биопленка покрывает дно чашки, ее можно использовать для культивирования особей. Период наращивания субстрата составляет 10-15 дней для Tetraselmis marina и 8-10 дней для цианобактерий Leptolyngbya ectocarpi и Spirulina versicolor.

о Чашки с плотным субстратом промывают трижды свежеприготовленной морской водой по 2 минуты для удаления метаболитов микроводорослей: снижается уровень нитратов и фосфатов, которые токсичны для Р1аео2оа; о Через 24 часа на подготовленные и промытые чашки Петри отсаживают по 10-15 особей и помещают чашки в климатостат с режимом работы «день-ночь» 12:12 ч при температуре 24°С. Тем не менее, животных также можно культивировать в полной темноте или при освещении окружающей среды в течение нескольких дней.

Приложение №4

Протокол культивации Р1асо2оа с использованием зерен риса

1. Приготовить стерильные чашки Петри (диаметром 9 или 20 см);

2. Приготовить свежую морскую воду ASW (примерно 50 мл для заполнения чашек Петри (9 см) или 500 мл для заполнения чашек Петри (20 см), соответственно;

3. В отдельные чашки Петри поместить рисовые зерна в количестве от 5 (9-см чашка) до 20 (20-см чашка);

4. Отсадить животных на подготовленные чашки Петри по 10-15 особей и поместить чашки в климатостат с режимом работы «день-ночь» 12:12 ч при температуре 24°С. Животных также можно культивировать в полной темноте или при равномерном освещении в течение нескольких дней.

Приложение №5

Протокол для иммунногистохимического окрашивания и in situ гибридизация

• Стоковые растворы

o 1% бычий сывороточный альбумин (BSA) на 35 %о ASW o 0.1 M раствор фосфатного буфера (PBS, pH 7.4) o 0.1 M раствор фосфатного буфера с 1% Tween-20 (PBT, pH 7.4)

• Красители

o TRITC-ассоциированный фаллоидин (Sigma, P1951) o Alexa Fluor™ 488 Phalloidin (Thermo Fisher Scientific, USA) o Mito-tracker Orange (Sigma, USA) o Mito-tracker Red (Sigma, USA) o DAPI (CarlRoth, Germany,1:1000, 10 мкл мл-1) o Lyso-tracker Red (Thermo Fisher Scientific, USA) o Lyso-tracker yellow (Thermo Fisher Scientific, USA)

o CellMask™ Orange Plasma membrane Stain (Thermo Fisher Scientific, USA)

• Антитела

o Immunostar serotonin rabbit antibody 5-HT (Immunostar, USA, #20080) o Monoclonal primary antibodies against acelylated a-tubulin (T-6793, Sigma-

Aldrich, St. Louis, USA, produced in mouse, 1:1000-1:2000) o Anti-alpha-Tubulin Antibody, tyrosinated, clone YL1/2 (Sigma-Aldrich, St.

Louis, USA, produced in mouse, 1:1000-1:2000) o fluorescent anti-mouse antibodies (AlexaFluor 633, AlexaFluor 647, Thermo

Fisher Scientific, Waltham, USA or CF 633, SigmaAldrich, 1:500-1:800) o fluorescent anti-rabbit antibodies (AlexaFluor 647, Thermo Fisher Scientific, Waltham) 1:800

• Растворы для in situ гибридизации

o 1x раствор PBS

o Холодный фиксатор: 4% параформальдег (EMS, #19208) + 5% декстран

(Sigma, #D1662) на ASW (38 г/л соли Coral pro salt, Red Sea). o 50%, 70%, 100% раствор этанола на однократном свежеприготовленном PBS

o ACD:

■ Зонды мРНК с C1, C2, C3 метками

■ протеазы III и IV

■ однократный промывочный раствор (сохранять 1 месяц при комнатной температуре). После приготовления прогреть 60 мл 50-кратного стокового раствора до 40°C 10-20 минут; добавить 20 мл для каждого 1 литра воды MilliQ

■ AMP 1-4 FL

• ÄHTH^engbi

o SlowFade™ Gold Antifade Mountant with DAPI (S36968, Invitrogen, Thermo

Fisher Scientific, USA) o ProLong™ Gold Antifade Mountant with DAPI (P36931, Thermo Fisher Scientific, USA)

Приложение №6

Оборудование и реактивы для анализа транскриптомики единичных клеток

■ стереомикроскоп (Stemi 305, Zeiss, Germany)

■ инвертированный микроскоп (Eclipse Ts2R, Nikon, Japan)

■ 10x Genomics machine

■ Гель-документатор E-Gel

■ Вортекс Vortex Mixer (VWR, #10153-838)

■ амплификатор Bio-Rad C1000 Touch™ Thermal Cycler with 96-Deep Well Reaction Module (PN-1851197)

Раствор для диссоциации №1 (хранить при 4°C), pH 7.6 MilliQ water

■ 460 мМ NaCl

■ 10 мМ KCl

■ 1 мМ CaCl2 * 2 H2O

■ 10 мМ HEPES

Раствор для диссоциации №2 (хранить при 4°C), pH 7.6

■ Вода MilliQ

■ 460 мМ NaCl

■ 10 мМ KCl

Для захвата единичных клеток: o Оборудование

■ Чашки Петри (диаметром от 3 до 15 см), стерильные

■ 5-10 Glass cavity, sterile

■ TempAssure PCR 8-tube strip* (alternate to Eppendorf product) (USA Scientific, #14024700)

o Наборы для транскриптомики единичных клеток

■ Chromium™ Single Cell 3' Library Kit v2 (store at -20°C)

■ Chromium™ Single Cell 3' Gel Bead Kit v2 (store at -80°C)

■ Chromium™ Single Cell 3' Chip Kit v2 (store at ambient temperature)

■ Chromium™ i7 Multiplex Kit (store at -20°C)

o Дополнительные инструменты

■ 10x™ Chip Holder (10X Genomics, #330019)

■ 10x™ Vortex Adapter (10X Genomics, #330002)

■ 10x™ Magnetic Separator (10X Genomics, #230003)

o Растворы

■ Вода свободная от нуклеаз (Thermo Fisher Scientific, #AM9937)

■ глицерин (глицерол), 50% (v/v) Aqueous Solution (Ricca Chemical Company, #3290-32)

■ буфер Low TE (10 мМ^-Ж1 pH 8.0, 0.1 мМ EDTA) (Thermo Fisher Scientific, #12090-015)

■ чистый этанол (200 Proof, anhydrous) (Sigma, #459836-500 мл)

■ Сухой лед

■ Колотый лед

Приложение №7

Рисунок 1 - Динамика изменения скорости локомоции особей по субстрату разных типов в трех контрольных группах: modell, model2, model3. Modell - характеризуется наличием оптимального субстрата, model2 - плотный субстрат, model3 - истонченный субстрат микроводорослей. Слева - цветовая карта значений скорости передвижения, справа - гистограмма для трех экспериментальных групп.

Приложение №8

Разнообразие гуанилатциклаз (sGC) и родственных рецепторов NO у пластинчатых.

Модифицировано из [Мого2 й а1., 2020Ь].

Accession Number Gene ГО Name in tree Species

ББУ20503 009842-ИЛ ЛСУ type 3/5-1ike 1 Trichoplax adhaerens

КББ41839 TгispH2 006995 ЛСУ type 3/5-1ike 1 Trichoplax sp. И2

ББУ29767 TгiadITZ 001202-ИЛ ЛСУ type 3/5-1ike 2 Trichoplax adhaerens

КББ47118 TгispH2 000152 ЛСУ type 3/5-1ike 2 Trichoplax sp. И2

ББУ23584 TгiadITZ 006914-ИЛ ЛСУ type 3/5-1ike 3 Trichoplax adhaerens

КОБ44722 TгispH2 002900 ЛСУ type 3/5-1ike 3 Trichoplax sp. И2

ББУ27250 TгiadITZ 003628-ИЛ ЛСУ type 3/5-1ike 4 Trichoplax adhaerens

КББ42696 TгispH2 004866 ЛСУ type 3/5-1ike 4 Trichoplax sp. И2

ББУ22157 TгiadITZ 008153-ИЛ ЛNPR-1ike 1 Trichoplax adhaerens

КББ37929 TгispH2 010210 ЛNPR-1ike 1 Trichoplax sp. И2

pending PH4 010894-ИЛ ЛNPR-1ike 1 Hoilungia sp. H4

Ьгakeг1 g07532 ЛNPR-1ike 1 Hoilungia hongkongensis Ш3

ББУ22567 TгiadITZ 007124-ИЛ ANPR-1ike 2 Trichoplax adhaerens

КББ43673 TгispH2 003698 ЛNPR-1ike 2 Trichoplax sp. H2

pending PH4 000663-ИЛ ANPR-1ike 2 Hoilungia sp. H4

Ьгakeг1 g07696 ЛNPR-1ike 2 Hoilungia hongkongensis Ш3

ББУ22105 TгiadITZ 008046-ИЛ ЛNPR-1ike 3 Trichoplax adhaerens

К0Б46450 TгispH2 002051 ANPR-1ike 3 Trichoplax sp. H2

pending PH4 005709-ИЛ ЛNPR-1ike 3 Hoilungia sp. Ш

Ьгakeг1 g00715 ANPR-1ike 3 Hoilungia hongkongensis H13

ББУ21316 TгiadITZ 008304-ИЛ ЛNPR-1ike 4 Trichoplax adhaerens

КББ47549 TгispH2 000784 ЛNPR-1ike 4 Trichoplax sp. H2

pending РШ 003411-ИЛ ANPR-1ike 4 Hoilungia sp. H4

Ьгakeг1 g04948 ЛNPR-1ike 4 Hoilungia hongkongensis H13

ББУ28199 TгiadITZ 002243-ЯЛ ANPR-1ike 5 Trichoplax adhaerens

КББ45349 TгispH2 002264 ЛNPR-1ike 5 Trichoplax sp. H2

pending PH4 002654-ИЛ ЛNPR-1ike 5 Hoilungia sp. H4

Ь^ег1 g01654 ANPR-1ike 5 Hoilungia hongkongensis Ш3

ББУ21712 TгiadITZ 007393-ИЛ NIT domain ОСУ 1 Trichoplax adhaerens

КББ47314 TгispH2 000293 NIT domain ОСУ 1 Trichoplax sp. И2

pending PH4 010320-ИЛ NIT domain ОСУ 1 Hoilungia sp. H4

Ьгakeг1 g05999 NIT domain ОСУ 1 Hoilungia hongkongensis Ш3

ББУ22186 TгiadITZ 007946-ИЛ NIT domain ОСУ 10 Trichoplax adhaerens

КББ46472 TгispH2 001949 NIT domain ОСУ 10 Trichoplax sp. H2

pending PH4 011388-ИЛ NIT domain ОСУ 10 Hoilungia sp. H4

Ьгakeг1 g00822 NIT domain ОСУ 10 Hoilungia hongkongensis Ш3

EDV22185 TriadITZ 007945-RA NIT domain GCY 11 Trichoplax adhaerens

RDD46473 TrispH2 001948 NIT domain GCY 11 Trichoplax sp. H2

pending PH4 011247-RA NIT domain GCY 11 Hoilungia sp. H4

braker1 g00823 NIT domain GCY 11 Hoilungia hongkongensis H13

EDV19209 TriadITZ 010843-RA NIT domain GCY 12 Trichoplax adhaerens

RDD35992 TrispH2 011922 NIT domain GCY 12 Trichoplax sp. H2

pending PH4 012087-RA NIT domain GCY 12 Hoilungia sp. H4