Технология производства иммунобиологических препаратов для диагностики листериоза и индикации его возбудителей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Егшатян, Татьяна Ивановна

• Егшатян, Татьяна Ивановна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Егшатян, Татьяна Ивановна

ВВЕДЕНИЕ

1. Современное состояние заболеваемости листериозом и иммунобиологические препараты для его лабораторной диагностики

1.1.Эпидемиология листериоза

1.2.Эпизоотология листериоза

1.3.Биологические свойства, таксономия и антигенная структура возбудителя листериоза

1.4. Иммунобиологические препараты для диагностики листериоза, индикации его возбудителей, их диагностическая ценность

2. Материалы и методы

2.1. Штаммы микроорганизмов, взятые в работу

2.2. Получение антигенных комплексов микроорганизмов

2.3. Физико-химические методы

2.4. Реакция преципитации в агаровом геле

2.5. Получение иммунофлуоресцирующих коньюгатов и методы их контроля

2.6. Иммунофлуоресцентный анализ

2.7.Получение иммунопероксидазных коньюгатов и контроль их активности

2.8. Сублимация иммунобиологических препаратов

2.9.Характеристика лабораторных животных, использованных в опытах

2.10. Методы статистической обработки материала

3. Анализ заболеваемости листериозом в России и современное состояние лабораторной диагностики листериоза

4. Разработка биотехнологии получения листериозных диагностических иммунобиологических препаратов

4.1. Получение диагностической поливалентной агглютинирующей сыворотки

4.2. Получение диагностикума цветного листериозного для реакции агглютинации

4.3. Разработка биотехнологии приготовления эритроцитарного листериозного антигенного диагностикума

4.4. Получение флуоресцирующих иммуноглобулинов и их характеристика

4.5. Получение листериозных иммунопероксидазных коньюгатов и их характеристика

4.6. Аллерген листериозный для внутрикожной пробы 100 5. Стабилизация иммунобиологических листериозных диагностических препаратов и биологического сырья для их производства 110 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Технология производства иммунобиологических препаратов для диагностики листериоза и индикации его возбудителей»

Актуальность проблемы. Листериоз относится к числу природно-очаговых инфекций. Возбудителем листериоза является грамположитель-ная аспорогенная бактерия Listeria monocytogenes, впервые описанная в 1927 году Пири.

Листериоз у людей проявляется спорадически, но описаны также многочисленные вспышки пищевого листериоза и внутрибольничные заболевания в родильных домах. Заражение в основном происходит при употреблении в пищу инфицированных продуктов животного и растительного происхождения. При хранении инфицированных продуктов в холодильнике происходит размножение возбудителя (Бакулов, 1993).

Заболеваемость листериозом регистрируется и изучается главным образом в индустриально развитых странах, и следует признать, что листериоз остается серьезной проблемой здравоохранения во всем мире, а если учесть растущую урбанизацию, эволюцию социальных отношений и изменение привычек питания, то можно предположить, что и в развивающихся странах данная проблема будет усугубляться (Бюллетень ВОЗ, 1993; Омарова и др., 2001; Честнова, 2001).

На изучение этой проблемы направлены усилия ученых-медиков, ветеринаров, биологов. Для координации усилий в деле изучения листе-рий был создан Подкомитет по таксономии листерий в составе Всемирного Совета микробиологических обществ, в который вошли исследователи листериоза из Германии, Великобритании, Франции, США, Голландии, Болгарии, России. К настоящему времени проведено 14 международных симпозиумов по проблеме листериоза.

Внимание медицинских работников к изучению листериоза возросло после расшифровки в конце 80-х годов вспышек пищевого листериоза людей с летальностью до 33 % в результате употребления в пищу молока, мягких сыров, мяса, мясных продуктов, квашенной капусты в США, Канаде, Мексике, Швейцарии, Великобритании, то есть в странах с традиционно высоким уровнем здравоохранения и технологий приготовления продуктов питания. Широкий спектр клинико - эпидемиологических проявлений, разноообразия форм заболевания, медицинская, социальная и экологическая значимость - все это стимулировало разработку мер профилактики борьбы с листериозом, разработку законодательных актов, связанных в первую очередь с контролем безопасности пищевых продуктов (Васильев, 1992; Тартаковский, Палей, Опочинский и др., 1999; Опо-чинский, 1999 и др.; Gitter, 1986; Gellin et al, 1989; Fenlon, 1989; Farber, Peterkin, 1991; Schuhat et al., 1991).

В последнее десятилетие наблюдается явный рост числа случаев заболевания листериозом в России (Ермолаева, Тартаковский, 2001; Ома-рова и др., 2001). Так, в Ивановской области с 1992 года зарегистрировано 120 случаев заболеваний листериозом, в Ульяновской области - 37, в Тульской - 71. Вполне возможно, что это не столько свидетельствует об истинном повышении заболеваемости листериозом, сколько следствие усилившегося внимания к данному заболеванию. В настоящее время определены группы риска у людей - это беременные женщины, новорожденные дети и пожилые люди с нарушениями иммунной системы, в том числе в результате применения кортикостероидов.

Несмотря на успехи, достигнутые в последнее время в интенсивной терапии детей раннего возраста, и введение в практику антимикробных средств широкого спектра действия, генерализованные бактериальные инфекции остаются самыми частыми причинами заболеваемости и смертности в период новорожденности. Отсутствие в последнее десятилетие значительных улучшений в проблеме инфекций у новорожденных обусловлено частично, по-прежнему, трудной дифференциацией бактериального сепсиса от других, часто встречающихся болезней новорожденных. Среди общего числа инфицированных новорожденных 1/2-1/3 умирает, а у 1/3 развивается менингит (Anthony, 1977). Летальные исходы листери-озной инфекции приведены в работах М.М.Адамович, (1993), Ю.С. Мусатова и др., (1994), Т.В.Честновой (2001). В связи с этим, необходима разработка и проведение комплекса мероприятий, направленных на своевременное выявление носительства листерий и санацию беременных женщин. Учитывая вышесказанное, диагностика листериоза среди беременных женщин является достаточно серьезной проблемой здравоохранения.

В Российской Федерации сведения о заболеваемости людей листе-риозом учитываются в государственной статистической отчетности с 1992 года. Число зарегистрированных случаев среди людей колеблется от 50 до 100 человек ежегодно, при этом 70 % заболевших - дети. Лабораторную диагностику листериоза проводят центры Госсанэпиднадзора в 45-65 % субъектов Российской Федерации. Проведенный анализ деятельности лабораторий показывает, что в целом существенных положительных сдвигов лабораторная диагностика за годы учета не претерпела. Высокая значимость лабораторной диагностики листериоза была подчеркнута на Международном симпозиуме "Листериоз на рубеже тысячелетий", состоявшемся в г. Покрове Владимирской области 18-20 мая 1999 года. Анализ состояния лабораторной диагностики листериоза позволяет предположить, что зарегистрированный уровень заболеваемости представляет лишь "вершину айсберга" и при совершенствовании организационных и методических вопросов лабораторной диагностики число зарегистрированных больных может значительно возрасти (Бакулов, 1999; Опочин-ский, 1999).

Цель и задачи исследований. Разработка и совершенствование биотехнологий производства иммунобиологических препаратов для диагностики листериоза и индикации его возбудителя.

Для достижения указанной цели предполагалось решить следующие задачи: разработать оптимальные биотехнологии следующих листе-риозных иммунобиологических препаратов: диагностической поливалентной агглютинирующей сыворотки; диагно-стикума цветного листериозного для реакции агглютинации; эритроцитарного антигенного диагностикума; флуоресцирующих иммуноглобулинов; антительных иммуноперокси-дазных коньюгатов; аллергена листериозного для внутри-кожной пробы; выделить высокоспецифичные антигенные комплексы лис-терий; получить высокоактивные агглютинирующую и гипериммунную полигрупповые листериозные сыворотки; составить нормативную документацию для производства иммунобиологических препаратов и методические рекомендации по их применению при лабораторной диагностике листериоза; провести лабораторные и полевые испытания разработанных диагностикумов; провести анализ заболеваемости людей и сельскохозяйственных животных листериозом в России, а также состояние его лабораторной диагностики.

Научная новизна. Впервые разработаны биотехнологии листери-озных иммунобиологических препаратов: диагностической поливалентной агглютинирующей сыворотки, диагностикума цветного для реакции агглютинации, эритроцитарного антигенного диагностикума, иммуноф-луоресцентных и иммуноферментных коньюгатов, аллергена листериозного для внутрикожной пробы.

Проведен эпидемиологический и эпизоотологический анализ заболеваемости и состояния лабораторной диагностики листериоза в России и Ставропольском крае, в частности выявивший низкий уровень диагностики этого заболевания из-за отсутствия необходимого арсенала иммунобиологических препаратов и недостаточной ориентированности на данную инфекцию врачей практического здравоохранения.

Практическая значимость. Изготовлены экспериментальные серии иммунобиологических препаратов для диагностики листериоза и индикации его возбудителей, лабораторные и клинические испытания которых показали их высокую чувствительность и специфичность, что позволяет рекомендовать их для широкого практического применения в учреждениях здравоохранения; составлена нормативная документация, одобренная Ученым советом института и утвержденная директором Ставропольского научно-исследовательского противочумного института (протокол № 2 от 28.02.2002г): экспериментально-производственные регламенты "Диагностикум листериозный антигенный эритроцитарный жидкий (сухой)", "Иммуноглобулины диагностические листериозные люми-несцирующие сухие"; по результатам внедрений данных препаратов получены акты в Центрах Государственного санитарно-эпидемиологического контроля в городах Железноводске и Кисловодске; оформлены методические рекомендации "Лабораторная диагностика листериоза у людей", одобренные Ученым советом СтавНИПЧИ и утвержденные директором института (протокол №1 от 28.01.2002г).

Апробация. Исследования проведены в рамках 2-х плановых НИР: "Повышение технологичности производства диагностикумов эритроци-тарных" (№ Госрегистрации 01961111792) и "Совершенствование лабораторной диагностики листериоза" (№ Госрегистрации 01200109083).

Основные результаты диссертационной работы были доложены на научно-практической конференции молодых ученых и специалистов СтавНИПЧИ (Ставрополь, 1999); Международном симпозиуме по листе-риозу "Листериоз на рубеже тысячелетий" (Покров, 1999); 46-ой научно-методической конференции преподавателей и студентов "XXI век-век образования" в Ставропольском государственном университете, Ставрополь, 2001; научной конференции "Проблемы развития биологии и химии на Северном Кавказе", посвященной 70-летию биолого-химического факультета СГУ, г.Ставрополь, 2001г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 153 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц и 17 рисунков, состоит из введения, 1 главы обзора литературы, 5 глав собственных исследований, включающих описание материалов и методов исследований и экспериментальную часть; заключения; выводов; списка использованной литературы, включающего - 136 отечественных и 101 - зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Егшатян, Татьяна Ивановна

ВЫВОДЫ

1 .Разработана единая биотехнологическая схема производства иммунобиологических препаратов для диагностики листериоза и индикации его возбудителей.

2.Разработана биотехнология изготовления листериозной диагностической поливалентной сыворотки и диагностикума цветного для серологической идентификации листерий и определения специфических антител к ним в реакции агглютинации.

3.Разработан оптимальный вариант биотехнологии получения эритроцитарного листериозного антигенного диагностикума, обладающего высокой чувствительностью и специфичностью.

4.На основе полигрупповой листериозной гипериммунной сыворотки изготовлены иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие и иммунопероксидазные коньюгаты, отвечающие ОМБТ, предъявляемым к индикационным препаратам.

5.Разработана биотехнология производства высокоспецифичного листериозного аллергена - листерина для аллергической диагностики листериоза.

6. Для сохранения исходных свойств листериозных иммунобиологических препаратов и биологического сырья для их производства отработан оптимальный, экономичный режим сублимации, позволяющий одномоментно лиофилизировать биополимеры, имеющие различный порог биодеградации.

7. Лабораторные и клинические испытания листериозных иммунобиологических препаратов свидетельствуют о их высокой чувствительности, специфичности, информативности и перспективности использования в лабораториях практического здравоохранения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Листериоз - это медико-ветеринарная проблема, с 80-х годах 20-го столетия листериоз заявил о себе, как пищевая инфекция, т.к. заболевания людей часто связаны с употреблением инфицированных возбудителем таких продуктов питания как овощные, молочные, мясные, морепродукты (Бакулов, 1999; Котляров, 1999; Онищенко, Монисов, Гульченко и др., 1999). Для ее решения требуется оперативная информация об эпидемической и эпизоотической ситуации в экологической системе "человек-животное-окружающая среда". При этом главная роль принадлежит постоянному лабораторному контролю этой системы, учитывая что возбудитель листериоза имеет уникальную способность репродуцироваться при транспортировании контаминированных продуктов даже при строгом соблюдении "холодовой цепи" (Гальцева, Цепко, Маевский и др., 1999; Зыкин, Савельева, Касьян, 1999). Установлено, что листериоз сельскохозяйственных, синантропных, диких животных с 80-х годов по настоящее время является актуальным для животноводства более 80 стран мира, в том числе для стран Северной, Центральной, Восточной Европы. Идет активный импорт продовольственных товаров для населения России, а также кормов для сельскохозяйственных животных. Анализ эпидемической ситуации в Российской Федерации показал, что листериоз остается во многом малоизученным и редко диагностируемым заболеванием из-за ненадлежащего контроля за содержанием листерий в пищевых продуктах и отсутствия иммунобиологических препаратов для диагностики этого заболевания. Заболеваемость листериозом в России диагностируют в ограниченном числе субъектов Российской Федерации. Ежегодно регистрируют от 50 до 100 случаев. На юге России в Ставропольском крае, в частности, в последние годы листериоз людей регистрируется лишь в единичных случаях. Но это не отражает истинной картины распространения листериоза по стране (и по краю).

Эпидемиология листериоза тесно связана с эпизоотологией в связи с тем, что к этому заболеванию восприимчивы многочисленные виды животных, в том числе сельскохозяйственные и домашние, а также птицы. Ветеринарная служба ведет систематические, целенаправленные исследования по диагностике и изучению его возбудителя на более высоком уровне, чем практическое здравоохранение. Среди сельскохозяйственных животных листериозом в наибольшей степени поражены свиньи и овцы, у крупного рогатого скота эта болезнь чаще всего проявляется спорадически (Бакулов, 1993). Листериоз с 2000 года будет представлять серьезную угрозу благополучию животноводства в природно-очаговых зонах Российской федерации: Центральный и Северозападный экономические районы, Бурятия, Краснодарский, Ставропольский края и др. (Книзе, Бузун, 1999). Так, ежегодно в Ставропольском крае заболевает от 500 до 1000 голов мелкого рогатого скота, процент смертности колеблется от 30 до 50 %.

Таким образом, сложившаяся эпидемическая и эпизоотическая ситуация по листериозу свидетельствует о необходимости расширения арсенала иммунобиологических препаратов для диагностики листериоза и индикации его возбудителей. Одним из простых и доступных методов индикации и идентификации возбудителей инфекционных заболеваний является реакция агглютинации. Качество агглютинирующей сыворотки зависит от высокоэффективной схемы специфической иммунизации животных. При разработке технологии получения агглютинирующей листериозной сыворотки нами опробованы несколько схем иммунизации. Иммуногеном служил корпускулярный полигрупповой антиген, полученный их 7 основных по антигенной структуре штаммов

Ь.топос^с^епеБ: 1/2а; 1/2Ь; За; 4а; 5; 7. При этом мы варьировали дозой антигена, кратностью и способами его введения. Наиболее результативной оказалась схема иммунизации, предусматривающая три способа введения антигена: внутривенный, в подушечки лап, в лимфатические узлы. Важным достоинством этой схемы является непродолжительность периода иммунизации кроликов-продуцентов, атравматичность для них, получение высоких титров специфических антител - до 1:3200+0 - 1 :+6400.

Традиционным и эффективным методом диагностики инфекционных заболеваний является реакция агглютинации с применением корпускулярного диагностикума. При окраске микробных клеток анилиновыми или другими красителями реакция становится наиболее наглядной. Нами разработана технология приготовления цветного листериозного полигруппового диагностикума для постановки РА. Из 12 испытанных красителей (малахитовый зеленый, бромкрезоловый пурпурный, фуксин основной, бриллиантовый зеленый, бромфеноловый синий, метилен виолет, фуксин кислый, кристалл виолет, феноловый красный, тиамин синий, трепан синий, метилен синий) наиболее пригодным оказался бромфеноловый синий. Диагностикум, окрашенный этим красителем, выявлял агглютинины в полигрупповых агглютинирующих сыворотках в разведении 1:1600 - 1:3200, при этом оптимальная концентрация микробной взвеси в нем - 3x109 м.к./мл. При изучении специфичности использовали коммерческие агглютинирующие сыворотки: сальмонеллезную поливалентную основных (АВСДЕ) групп, туляремийную агглютинирующую сухую, холерную "О", шигеллезную дизентерийную поливалентную, бруцеллезную агглютинирующую поливалентную. Со всеми перечисленными сыворотками реакция агглютинации была отрицательная.

До сих пор остаются актуальными и традиционно используются простые, достаточно чувствительные, не требующие применения специальной аппаратуры и потому общедоступные серологические тесты и, в частности, РИГА. При отработке биотехнологии изготовления эритроцитарного антигенного диагностикума было необходимо решить следующие задачи: подобрать эффективную методику извлечения специфического лиганда из микробной клетки; отработать условия формалинизации эритроцитов барана; подобрать условия сенсибилизации эритроцитов специфическим листериозным антигеном. Для извлечения нативных водорастворимых антигенов листерий использовали биомассы штаммов 7 основных сероваров. Антигены изолировали водно-солевой экстракцией в комплексе с ультразвуковой дезинтеграцией. Полигрупповой листериозный антиген иммобилизовали на поверхности эритроцитов барана, формалинизированных по методу Чизмена в модификации М.И. Леви с соавт. (1962), при этом активацию их поверхности проводили 2% раствором вторичного алкилсульфата натрия. Оптимальная нагрузка лиганда равнялась 1000 мкг/мл по белку при следующих условиях конъюгации: концентрация эритроцитов 20%; температура их связывания с сенситином - 45 °С; рН раствора - 5,0 в течение 18+2 часов.

При контроле полученных серий эритроцитарного листериозного антигенного диагностикума титры специфических антител в РИГА выявлялись в разведениях 1:5120 - 1:10240. При изучении специфичности на коммерческих гетерологичных агглютинирующих сыворотках перекрестных реакций не наблюдалось. На диагностикум составлена НД (экспериментально-производственный регламент, одобренный Ученым советом института и утвержденный директором СтавНИПЧИ от 28.02.2002 г., протокол №2), и ОБТК проведены лабораторные испытания экспериментальных серий препарата, которые подтвердили соответствие их требованиям НД и общим медико-биологическим требованиям, предъявляемым к эритроцитарным диагностикумам. Диагностическая ценность эритроцитарного листериозного антигенного полигруппового диагностикума подтверждена клиническими испытаниями при исследовании сывороток крови людей в родильном доме г.Ставрополя, Центрах Госсанэпиднадзора г.г. Кисловодска и Железноводска (акты испытаний от 27.12.2000 г., 27.03.2002г.).

Для экспресс - индикации возбудителя листериоза методом прямой иммунофлуоресценции изготовлены флуоресцирующие полигрупповые иммуноглобулины. При их получении было необходимо иметь высококачественное сырье - высокоспецифичную и высокоактивную гипериммунную сыворотку, которую удалось получить при гипериммунизации кроликов полигрупповым водорастворимым антигенным комплексом при использовании иммуномодулятора -феракрила. Иммунизация заключалась в последовательных инъекциях в подушечки задних лап, подколенные лимфоузлы, внутримышечного и внутривенного введения комплекса антиген-антитело. Фракцию иммуноглобулинов в, выделенную из сывороток каприловой кислотой, метили ФИТЦ. Изготовлено 5 серий препарата. Оценка их физико-химических свойств (внешний вид, растворимость, прозрачность, цветность, щелочность, остаточная влажность, концентрация белка, количественное соотношение ФИТЦ/белок) показала соответствие ОМБТ, предъявляемым к флуоресцирующим диагностическим иммуноглобулинам.

Специфическая активность всех испытуемых серий при исследовании мазков из гомологичных штаммов характеризовалась красящим титром в разведении 1:64 - 1:128, рабочее разведение коньюгатов - 1:32 - 1:64. Флуоресцирующие иммуноглобулины позволили обнаруживать гомологичные листерии в мазках из бактериальных взвесей в концентрации о

5x10 м.к./мл. Изучение их специфичности на 16 штаммах культур гетерологичных микроорганизмов позволило констатировать отсутствие специфического свечения при исследовании мазков из F.tularensis, Brucella, Salmonella, Shigella, E.coli, Streptococcus, Y.enterocolitica. Биотехнология производства иммуноглобулинов диагностических листериозных люминесцирующих сухих изложена в экпериментально-производственном регламенте, одобренном Ученым советом и утвержденном директором СтавНИПЧИ (протокол №2 от 28.02.2002г.) Диагностическая ценность иммуноглобулинов листериозных флуоресцирующих сухих подтверждена клиническими испытаниями при исследовании сывороток крови людей в Центре Госсанэпиднадзора г.Железноводска (акт испытаний от 27.03.2002 г.).

На основе иммуноглобулинов из полигрупповой гипериммунной кроличьей листериозной сыворотки получено 7 серий иммунопероксидазных коньюгатов. Рабочий титр препаратов определяли в ELIZE - ТИФА ("сэндвич-вариант"). Он находился в пределах 1:200 -1:400. Чувствительность диагностикумов с водорастворимыми антигенами, полученными из гомологичных штаммов листерий, составила 50-100 нг/мл. Контроль специфичности пероксидазных коньюгатов с гетерологичными штаммами микроорганизмов дал отрицательный результат. Диагностическая ценность иммунопероксидазных коньюгатов определена не только на чистых культурах листерий, но и на имитированных пробах внешней среды (смывы с предметов обихода, пищевых продуктов, пробы почвы, воды). Установлено, что эти пробы, содержащие 1x104 - 1x105 м.к., являются положительными, что позволяет нам сделать вывод о возможности использования полученного диагностикума для экспресс-индикации возбудителей листериоза в иммуноферментном методе.

Кожная реакция на введение соответствующего аллергена указывает на иммуно-аллергическую перестройку организма у животного и у человека, инфицированных каким-либо патогеном. Исследования, проведенные ранее рядом экспериментаторов по разработке листериозного аллергена, не увенчались созданием коммерческого препарата как для ветеринарных, так и для медицинских целей. Подходы к его получению были различны: от использования инактивированных бульонных культур до лизатов агаровых (Сливко, 1954; Олсуфьев, 1963; Егорова и др., 1970; Тропинаидр., 1984).

Нами для получения листериозного аллергена избран щелочной и кислотный гидролиз бактериальных масс. Готовые препараты были проверены на токсичность, специфичность, специфическую активность, стерильность на моделях белых мышей и морских свинок. Данные опыты свидетельствовали, что аллергическая реакция развивалась у всех животных при введении аллергенов различной химической природы, но наиболее выраженная реакция была у животных, которым вводили уксуснокислый гидролизат. На месте введения аллергена у инфицированных животных через 48 часов развивались отек и гиперемия в среднем 13,8 х 15,1 мм. Наиболее ярко активность аллергической реакции проявлялась на 20-30 день после заражения. После постановки аллергической пробы листериозным антигеном у животных, зараженных другими видами микроорганизмов, реакция была отрицательной, что свидетельствовало о специфичности препарата. Проведенные опыты показали возможность и перспективность применения в качестве листериозного аллергена уксуснокислого гидролизата листерий для аллергической диагностики листериоза.

Все листериозные иммунобиологические препараты, разработанные нами, а также биологическое сырье для Их производства нуждались в стабилизации их исходных свойств. В настоящее время наиболее лучшим методом для сохранения свойств биополимеров является лиофильное высушивание препаратов. В связи с тем, что названные выше диагностические препараты и сырье для них имеют свой порог биодеградации, необходимо было отработать единый, оптимальный экономичный режим их высушивания. При лиофилизации мы использовали различные криозащитные среды, подобранные нами для каждого биообъекта. Лиофилизацию проводили на установке для сублимационной сушки ТГ-5 с использованием двух режимов: "умеренный" (длительность удаления свободной воды - 12,5+1 час, связанной влаги - 10,5+1 час, конечная температура подогрева 25+1 °С) и "жесткий" (длительность периода сублимации и изотермического отторжения влаги - в течение 6 часов с подогревом материала до 45+2,5 °С, общая длительность процесса сушки - 16 часов). После лиофилизации "умеренным" и "жестким" режимами, а также через 2 года хранения (срок наблюдения) показатели контроля специфической активности и чувствительности всех иммунобиологических препаратов, разработанных нами, а также биологического сырья для их производства, оставались на уровне исходных. Результаты этих экспериментов позволяют рекомендовать довольно жесткий, экономичный режим сублимации при производстве листериозных диагностических препаратов.

Таким образом, нами впервые разработана оптимальная биотехнологическая схема производства целого ряда иммунобиологических препаратов для диагностики листериоза и индикации его возбудителей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Егшатян, Татьяна Ивановна, 2002 год

1. Аграновская E.H., Карпенкова Н.И. Вопросы прикладной иммунологии Ленинград. - 1967. - С. 144-146.

2. Адамович М.М. Эпидемиологические и клинические особености листериоза в г. Минске "Медико-ветеринарные аспекты листериоза" 23-26 ноября 1993 г. ВНИИВВиМ г. Покров, 1993.- С. 17-18.

3. Азаренок К.С. К возможности обнаружения токсина в крови больного ботулизма при помощи реакции пассивной гемагглютинации гамма-глобулинами //Журн. Микробиол. 1970. - №7. - С.112.

4. Афанасьев E.H. Сравнительная характеристика антигенной структуры бактерий рода Brucella.Атореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1984. -20С.

5. Афанасьев E.H., Таран И.Ф., Тюменцева И.С. Антигенная структура бруцелл. 1 Сравнительная оценка методов выделения водорастворимых антигенов бруцелл //ВИНИТИ 12. 09. 86 г, № 6635-В.

6. Алиева Е.В., Егшатян Т.И. Проблема листериоза на территории Ставропольского края. Сб. науч. труд. Здоровье (проблемы теории и практики). Ставрополь, 2001. С. 472-473.

7. Ю.Ашмарин И.П., Васильев H.H., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. Изд. Лениградского университета, 1975. 17- 18с.

8. П.Бакулов И.А., Васильев Д.А., Белоусов В.Е., Цыганов A.A., Котляров В.М. Биологические свойства компонентов листериозной клетки //Ветеринария. 1988. - № 4. - С. 26-29

9. Бакулов И.А. Основные вехи истории изучения листериоза животных и людей. //Матер, международн. симпозиума по листериозу. "Листериоз на рубеже тысячелетий". Покров, 1999. С.-43.

10. П.Бакулов И.А., Васильев Д.А. Листериоз как пищевая инфекция: Учебное пособие. Вопросы диагностики и профилактики. Ульяновск, 1991,-78 с.

11. М.Бакулов И.А., Котляров В.М., Кольпикова Т.И., Дмитриенко И.В., Ведерников В.А., Пыталев П.Н. Листериоз животных в России: эпизоотическая ситуация. "Медико-ветеринарные аспекты листериоза", науч. произв. конф. 23-26 ноября 1993 г. Покров С. 9-10.11.

12. Бакулов И.А., Котляров В.М., Шестиперова Т.И. Эпидемиологические и эпизоотологические аспекты листериоза //ЖМЭИ. 1994. - № 5.- С. 100-105.

13. Бакулов И.А. Международный симпозиум по проблемам листериоза //Вестник РАСХН. 1990. - № 5. - С. 60-62.

14. Бакулов И.А., Белоусов В.Е., Котляров В.М. Эпизоотологический мониторинг //Ветеринария. 1989. - № 5.- С. 43-46.

15. Бакулов И.А., Васильев Д.А. Пищевой листериоз новое проявление известной болезни (обзор литературы) //Вестник РАСХН. - 1995. - № 2 - С.69-72.

16. Барашкова Л.Н., Карцева Н.А, Коржуева Н.А, Шестакова Т.И. Разработка и испытание эритроцитарных диагностикумов из чистых антител. Сб. науч. трудов под ред. академика АМН СССР проф. И.И. Бло-хиной. Горький, 1986. - С. 131.

17. Березкина Г.В., Стефаненко Т.Н. Сравнительная характеристика некоторых серологических методов диагностики листериоза. При-родно-очаговые болезни человека. Омск, 1989. - С. 114-116.

18. Березкина Г.В., Никитюк Н.М.,ФилимоноваИ.Н.,Опочинский Э.Ф. //Клин. лаб. диагност. 1994. - № 3. - С.43-45.

19. Бельская Н.А, Митина B.C., Вейнблат В.И. Микрометод фракционирования и идентификации белков бактерий //Материалы СевероКавказской биохим. конф. Махачкала, 1970. - С. 270-271.

20. Вельская H.A., Митина B.C., Вейнблат В.И. Микрометод фракционирования и идентификация белков //Лаб. дело. 1972. - №10. - С. 514616.

21. Благовещенский В.А., Степанченок-Рудник Г.И., Жулина Л.В. Изучение химческого состава экстрактов культур Б.Ц.Ж., подвергшихся обработке ультразвуком, и выделение из них растворимого антигена //ЖМЭИ. 1961. - №3. - С Л 7-22.

22. Бюллетень ВОЗ. М.: Медицина, 1987. Т 71. - № 2. - С.87-167.

23. Бюллетень ВОЗ. М.: Медицина, 1993. Т.65.- №3. - С. 119-122.

24. Бланков Б.И.,Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии.- М.- 1961.- С. 57-60, 86-87.

25. Ванеева Н.П, Цветкова Н.В., Гудкова Р.Г., Дерябин П.Н. Диагностика стафилококковых заболеваний с помощью иммуноферментной реакции //ЖМЭИ. 1984. - №6. - С.61-64.

26. Волина Е.Г., Быченко Б.Д., Бочарова Н.Г. Применение реакции энзим-меченых антител для диагностики лептоспироза //ЖМЭИ. 1981.- №10. С.45-48.

27. Вейнблат В.И. Антигены Y.Pestis (биохимические и иммунологические аспекты): Дисс.: . д-ра мед. наук. Саратов, 1974. - С. 324.

28. Вейнблат В.И., Каменский В.В., Орлова Л.С. Иммунодискэлектрофо-рез антигенов чумного микроба //Проблемы особо опасных инфекций.- Саратов, 1972. Вып. 4 (26). - С. 196-200.

29. Васильев Д.А., Барышников П.И. Использование иммуноферментного анализа для диагностики листериоза //Ветеринария. № 4. 1989. - С. 60-62.

30. Васильев Д.А. Роль пищевых продуктов в распространении листериоза //Ветеринария 1992. - № 4.- С.46-48.

31. Гершун В.И. //Экология возбудителей сапронозов.- М. -1988. С.80-84.

32. Гулькевич Ю.В. Перинатальные инфекции. Издательство "Беларусь" Минск, 1966.-С.8-9, С.112-131.

33. Гайдамович С.Я., Ксиленко Г.А., Шаноян Н.К. Реакция агглютинации, сенсибилизированных антителами эритроцитовирусом, колорадской клещевой лихорадки. Вопросы вирусологии. 1974. - №2. -С. 169.

34. Герберт У.Д. Классификация по иммунологическим данным //В кн.: Ветеринария иммунология. М., 1974. - С.31-46.

35. Гуславский И.И., Павлова Н.П. Оценка специфичности серологической реакции при листериозе. Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана, 1979. № 8. - С. 71-73.

36. Голубев Л.Г., Сажин Б.Е., Валашек Е.Р. Сушка в химико-фармацевтической промышленности. М. - 1978.- С. 18-50.

37. Григорьева Г.И. Мембраны и мембранные белки в сравнительной характеристике стафиллококков. Автореф. дис. . канд. биол. наук. -Пущино, 1980. - 19с.

38. Дмитриева Т.Б. Состояние здоровья населения Российской Федерации и задачи органов и учреждений здравоохранения //ЖМЭИ. -1996.-№6.-С. 3-6,

39. Данилина Г.П., Кошелева P.A., Зеленков Е.Ю. Активность и специфичность листериозной диагностической сыворотки //Специфическая профилактика и диагностика инфекционных болезней животных. Сборник научных трудов М., 1986. - С. 54-56.

40. Дзантиев Б.Б., Егоров A.M. Современное состояние перспективы развития иммуноферментного анализа //Журн. Всесоюзн. хим. об-ва. -1982. 27. - № 4.- С.442-447.

41. Дзантиев Б.Б., Канатникова А.Н., Парбузин B.C. Основные закономерности конкурентного иммуноферментого анализа //В кн.: Методы иммуноферментного анализа в биологии и медицине: Сб. тр. Моск. НИИВС им. И.И. Мечникова. -М., 1983. С. 37-51.

42. Демина Н.С., Лысенко C.B. Действие дегидратации на микроорганизмы //Биол. науки. 1987. - №8. - С.50-52.

43. Ермолаева Е.З., Карасева Е.В, Степанова Н.В. Мелкие млекопитающие обитатели плодоовощных баз Москвы //РЭТ-инфо. 1997. - №4. -С.2-9.

44. Ермаченко В.А., Григорьева Г.И, Джемухадзе Т.К., Харатьян Е.Ф., Дегтярева Г.К., Лукоянова М.А., Рудзит Э.А. Получение мембранных стафиллококков и их ферментативная и белковая характеристика. М.-1978 г. С.74.

45. Егорова А.П., Мартынин М.Я., Малышев А.Н. Диагностическое значение внутрикожной аллергической пробы при листериозе //ЖМЭИ. -1970. №2. - С.62-67.

46. Жданова Л.Г., Перс И.Ф. Действия ультразвука на биологические свойства бактерий кишечной группы. Сооб. 1 Дезинтегрирующее действие ультразвука //ЖМЭИ. 1961. - № 11. - С. 73-79.

47. Журавлева Г.В., Демина A.A. Повышение стандартизации иммуноферментного анализа для диагностики менинигококковых инфекций //ЖМЭИ. 1985. - №4. -С.63-66.

48. Карасева Е.В., Тихонова Г.Н., Степанова Н.В. Мелкие млекопитающие незастроенных участков Москвы //Бюлл. МОИП. Отд. биол. 1990. Т.95. - Вып. 2. - С. 34-44.

49. Казанцев А.П., Матковский B.C. В книге справочник врача инфекциониста М. "Медицина" - 1973. - С. 92-95.

50. Карпенко В.В., Сачков В.И. Обезболивание животных в эксперименте //Методические рекомендации. М., 1985.- 53с.

51. Козлов П.С., Беликов М.И., Куюмджи З.М. Некоторые вопросы эпизоотологии и дифференциальной диагностики листериоза крупного рогатого скота в Карачаево-Черкесской автономной области //В кн.:

52. Диагностика, лечение, профилактика паразитарных заболеваний сельскохозяйственных животных. Ставрополь, 1984.- С. 5-6.

53. Кольпикова Т.И., Бакулов И.А., Котляров В.М. Перспективы практического применения листериозных бактериофагов "Вопросы вет. вирус. микроб, и эпизоот. ч. 2 Покров, 1992. - С. 211.

54. Константинова Н.Д., Шлыгина К.Н. Субмикроскопическая организация возбудителя листериоза и эризепилоида //ЖМЭИ. 1969. - № 7. -С. 72-75.

55. Куфлина С.А., Павлова Т.Н. Эвтаназия экспериментальных животных //Методические рекомендации по выведению животных из экспериментов." М., 1985 .-9с.

56. Каральник Б.В. О режиме сенсибилизации эритроцитов Vi-антигенами S.typhi //ЖМЭИ. 1963. - № 8. - С.140.

57. Каральник Б.В. Диагностика бактерий кишечных инфекций и энте-ровирусов //М. 1965.- С.34-36.

58. Каральник Б.В. Количественный анализ процесса взаимодействия эритроцитов и бактериальных антигенов. Сообщение III. Зависимость процесса от температуры //ЖМЭИ. 1967.- № 9.- С. 121-126

59. Каральник Б.В., Шамардин В.А., Шмутер М.Ф. О влиянии танизации на процесс сенсибилизации эритроцитов бактериальными антигенами небелковой прирды //Материалы 10-й науч. практ. конф. Казахск. ИЭМ. - Алма-Ата. - 1969. - С.119.

60. Каральник Б.В. Научные основы изготовления эритроцитарных диаг-ностикумов //ЖМЭИ. 1977 . - №4 - С.29.

61. Каральник Б.В., Царевский Ю.П., Шамардин В.А. Эритроцитарные белковые диагностикумы. Изд. "Наука". 1982. - Алма-Ата. - 1982. -148с.

62. Кантеева Е.А. Оптимизация этапов приготовления чумных, туляре-мийных, бруцеллезных иммунобиологических препаратов //Автореф. дис. канд. мед. наук. Ставрополь. 1996 -25 С.

63. Кузьмин Ю.А., Мека-Меченко Т.О. Эритроцитарные листериозные диагностикумы //Материалы науч. практ. конф., посвященной 100-летию организации противочум. службы Росии (16-18 сент. 1997). -Саратов, 1997 - Т.2. - С.264.

64. Каральник Б.В, Царевский Ю.П., Шамардин В.А. Эритроцитарные белковые диагностикумы Изд. "Наука".- 1982. С. 127-134.

65. Леви М.И., Орлова Г.М, Сучков Ю.Г. Серологические исследования при чуме //Труды Азерб. противочумн. станции. 1962. - Т.З. - С.281.

66. Леви М.И., Басова H.H., Сучков Ю.Г. //ЖМЭИ,- 1962,- N 10.- С. 4045.

67. Лиманский А.П. Идентификация гипервариабельных и консервативных фрагментов генома листерий. ЖМЭИ № 5.-2001.- С. 62-65.

68. Маненкова Г.М., Цвиль Л.А. Организация эпиднадзора за листерио-зом в Москве //Сб. докл. Науч.-практич. конф. Покров, 1993. С. 1920.

69. Маруяма М. Инфекция, вызываемая L.monocytogenes при употреблении пищевых продуктов //Коею эпсэйин кэнкю = Bull. Inst. Publ. Health. 1992. - 41. - № 2. - С. - 204-205.

70. Мельницкая Е.В., Бернасовская Е.П., Кондрашенко В.Н. Разработка и оценка лептоспирозного, поливалентного, антигенного эритроцитар-ного диагностикума //ЖМЭИ. 1995. - № 6. - С.79-80.

71. Маракуша Б.И., Дарвиш H.A., Тартаровский И.С. Молекулярно-биологические методы в эпидемиологическом анализе листериознойинфекции. Материалы VII съезда Всероссийского общества эпидемиологов микробиологов и паразитологов. М.,- 1997. С.82-83.

72. Мелехов П.П., Кривоносова О.В., Бакулов И.А. Листерионосительст-во у овец // Ветеринария. 1971. - № 3. - С. 58-59.

73. Олсуфьев Н.Г. Листериоз. Лабораторная диагностика особо опасных и молоизвестных бактерильных инфекций. Ростов-на-Дону, 1963. -С.336.

74. Павловский E.H., Токаревич К.И. Листериоз. Птицы и инфекци онная патология человека. Изд. "Медицина". 1966.- С. 182-184.

75. ЮЗ.Пашанина Т.П., Роныиина Н.В., Корсакова И.И., Лазоренко В.В., Хворостяная Л.И. Листериоз в Волгоградской области. Сб. науч. тр. Природно-очаговые ООИ на юге России, их профилактика и лабораторная диагностика. Астрахань, 2001.- С. 126-127.

76. Приказ № 1179 от 10 октября 1983 г. Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения. Москва, 1983.

77. Юб.Пушкарева В.И. Патогенные листерии в почве и в ассоциации с водорослями: обратимый переход в некультивируемое состояние //ЖМЭИ. 1997. - № 3. - С. 3-11.

78. Пшеничная Л.П., Тукачинский С.Е. Влияние частичной модификации сывороточного альбумина на его конформацию и комплексообра-зующую активность //ЖМЭИ. 1977. - №3. - С. 115.

79. Печникова И.В., Тинкер А.И. Влияние сред высушивания на способность чумной вакцины ЕВ вызывать продукцию антител в организме экспериментальных животных //Проблемы особо опасных инфекций. Иммунол., микробиол. Саратов, 1977. - Вып. 3. - С. 32-34.

80. Ю.Петров С.П. , Латыпов P.A. , Воронов В.В. , Казаков А.Н. Об эпизо-отологической ситуации по листериозной инфекции в Ставропольском крае. Эпидемиологические аспекты краевой патологии Ставрополья". 1995.-С.41.

81. Родина Л.В., Маненкова Г.М., Цвиль Л.В. Эпидемическая ситуация по листериозу в Москве //Эпид. и инф. болезни. -2000.- № 6.- С. 15-17.

82. Сливко В.В. Листереллез сельскохозяйственных животных. Вологда, 1954. С. 136.

83. Сомов Г.П., Беленева И.А., Бузолева Л.С., Дзадзиева М.Ф., Бесед-нов A.A. Экологические аспекты листериоза в Приморском крае. //ЖМЭИ. 1997. - № 5. - С. 78-82.

84. Сахаров П.П., Гудкова Е.И. Листереллезная инфекция. М. Мед гиз, 1959.-С.10-11.

85. Станиславский Е.С. Бактериальные структуры и их антигенность. -М.: Медицина, 1991.-220 с.

86. Субботина Ю.Л., Сухарева М.Е., Чупрынина A.A. //ЖМЭИ.- 1968.- № 4. С. 24-29.

87. Смирнов В.В., Чаплинский В.Я., Андреева З.М., Богоявленская Л.Б. Научные основы производства диагностических препаратов (сыворотки для идентификации энтеробактерий). Киев: Наукова Думка, 1980.- 195с.

88. Сызранцев П.И. Простые способы вычисления основных статистических величин //Соц. зерновое хозяйство.- 1978. №3. -С.185-203.

89. Султанов Г.В., Саидов М.С. Внутриутробные зоонозные инфекции в Дагестане //ЖМЭИ. N4. - 1998 - С. 33-35.

90. Сучков Ю.Г., Канатов Ю.В. Сенсибилизация формалинизированных эритроцитов иммунными гамма-глобулинами //ЖМЭИ. 1970. - №7.- С.112.

91. Тропина Т.Д., Хашимова П.Р., Кондратьева Л.А. Биологическая активность аллергена, выделение из листерий // Проблемы краевой инфекционной патологии и гигиены. Душанбе, 1984. - С. 105-107.

92. Тимченко Н.Ф., Булганов В.П., Булах Е.В, Яснецкая Е.Г., Журавлев Ю.Н. Взаимодействие Yersinia, Listeria, Salmonella с растительными клетками //ЖМЭИ. № 1. 2000. - С. 6-9.

93. Тюменцева И.С. Научно-методические основы конструирования и усовершенствования производства диагностических тест-систем для выявления возбудителей особо опасных и других инфекций: Дисс. . доктора мед. наук. Ставрополь, 1996. - 327с.

94. Тартаковский И.С., Малеев В.В., Ермолаева С.А. Экология листерий. Листерии: Роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. М. "Медицина для всех". - 2002г. - С.20.

95. Тартаковский И.С., Малеев С.А., Ермолаева С.А. Эпидемиология листериоза. М. "Медицина для всех". - 2002г. - С.8-4.

96. Урбах В.Ю. Статистические методы в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1985. -296 с.

97. Фихте Б.А. Дезинтеграция микроорганизмов. Задачи и перспективы //В Сб.: Дезинтеграция микроорганизмов: Матер. Всесоюзн. конф. по дезинтеграции микрорганизмов (25-27 окт., 1972 г.) Пущино-на-Оке, 1972.-С. 5-14.

98. Фадеева Л.Л., Халецкая Э.В., Селеднева А.Ю. Консервация вирусов различных групп для целей длительного хранения //Методы исследования в молекулярной, общей и медицинской вирусологии. М., 1987. - С.66-73.

99. Хашимова П.Р., Кондратьева Л.А., Тропина Т.Д. Изучение антигенов листерий и выделенных из них белковых фракций //ЖМЭИ.- 1988 -№9. С. 16-19.

100. Честнова Т.В. Диагностика листериоза у новорожденных. //Эпид. и инф. болезни.- 2001.- № 3.- С.45-47.

101. Шамардин В.А., Каральник Б.В. Способ получения эритроцитарного диагностикума. АС СССР, №634749 от 11.07.77, Б.И. №44, 19786.

102. Шварцман Я.С., Синицын В.А. Реакция непрямой гемагглютинаций (Обзор литературы) //ЖМЭИ.- 1961. № 9.- С. 97-102.

103. Шин Н.Г., Ременцева М.М., Еремин Ю.П., Федосеенко В.М. Ультразвуковая дезинтеграция бруцелл //Изв. А.Н.Каз. ССР. Сер. биол., 1973.-№ 1.-С. 68-71.

104. Цыбин Б.П. , Таран И.Ф. Оценка диагностических свойств бруцеллезного антигенного эритроцитарного диагностикума //Проблемы особо опасных и малоизвестных бактериальных инфекций. Ростов-на Дону, 1976. С.336.

105. Эльпинер И.Е. О механизме действия ультразвуковых волн на микроорганизмы //Микробиология.- 1955.- Т. 24. В.З. - С. 371-381.

106. Amador С., Banares R., Clemente G., Plasquau F., Guirado A.Peritonits bacteriona espontanea por Listeria monocytogenes //Enferm. infecc. у mi-crobiol. clin. 1988. - 6, № 8. - P. 361-363.

107. Antony C.J., Akada D. M. The emergence of group В streptococci in infection of newborn infant. Annu. Rev. Med., 1977, 28, 355.

108. Avrameas S.M., Ureal J. Methode de marquage d antigene et d anticorps avec des enzymes et sons application en immunodiffusion //C.R. Acad. Sci. (D). 1966. - Vol. 2. - № 26. - P. 2543-2545.

109. Avrames S.M. Coupling of enzymes to proteins with glutaraldehyde: use of the conjugates for detections of antibodies //Immunochemistry. 1969.-Vol.6.- № 1,- P. 43-52.

110. Bing G.V., Weyaland J.G.M., Stavitski A.B. Proc. soc. Exp. Biol. Med. 1967.-V.124.-P.1166.

111. Baculov I., Kotlarov V., Manenkova G. Prophylaxy and Control of Listeriosis in human and animals in Russia. XII International simposium on problems of listeriosis. Perth Werstern Australia 2-6 October 1995. pp 160. 1995.

112. Barret T.J., Blace D.A., Brown S.L., Hoffman L., Lort J.M., Feeley J.C. Enzyme-linked immunosorbent assay for human antibodies to Salmonella thuphi Vi antigen //J. Clin., Microbiol. 1983. - V. 17. - № 4. P. 625-627.

113. Benezet Por A., De La Osa J.V., Botas M., Olmo N., Florez F.P. Investigación de Listeria monocytogenes en productos //Alimentaria. 1993. - 30, №247.-P. 19-23.

114. Beumer R.R., te Giffel M.C., Spoorenberg E., Rombouts F.M. Listeria species in domestic environments //Epidemiol, and lnfec. 1996. - 117, № 3. p. 437-442.

115. Berthier A.M., Soustre y. Listeria, listeriose //Techn. et Biol. 1988. -14, №3.-P. 112-117.

116. Beninger Paul R., Savoia Maria C., Davis Charles E. Listeria monocytogenes meningitis in a patient with AIDS related complex //J. Infec. Deseases. - 1988. - 158, № 6. - P. 1396-1397.

117. Boyden S.V. The adsorption of protein on erythrocyes treated with tannic acid and subsequent hemaggutination by antiprotein sera //J. Exp. Med.-1951.- N 93.- P.107-120.

118. Bokkenheuser V., Koornhof H.J. //Nature. 1959.-V.184,- P. 109.

119. Bizet C., Mechali D., Rocourt J., Fraise F. Listeria monocytogenes bac-teraemia in AIDS. //Lancet. 1989. № 8636. - P. 501.

120. Bendig J.W.A., Strangeways J.E.M. Listeria in hospital lettuce //Lancet. -1989. -№ 8638.-P. 616-617.

121. Bannerman E., Yersin M-N.and Bille J. Evalution of Organon -Teknika Micro-ID Listeria system: Applied and Environmental Microbiology. -1992, 58, 2011-1015.

122. Beumer R.R., the Giffel M.C., Doornik P.C., and Cox LJ. The isolation of Listeria monocytogenes from food and environmental samples using enhanced haemolisis agar: In Book of Abstracts Isopol XI, 1992, 23-24,Copengagen.

123. Bille, J., Catimal, B., Bannerman, E., Jaquet, C., Yersin, M-N, Caniaux, L, Moget, D. and Rocourt, J. API Listeria, a new and promissing one-day system to identify Listeria isolates; Applied and Environmental Microbiology. 1992,58, 1857-1860.

124. Coons A.N., Kaplan M.U. Localisation of antigen in tissue cells //J.Exp. Med. 1950.- V. 91, № 1-. P. 81-89.

125. Canillac N., Mourey A. Sources of contamination by Listeria during the making of senu-soft surface-ripened cheese //Sci. alim. 1993. - 13., № 3. -P. 533-544.

126. Cossart Pascale, Kocks Christine. The actin based motility of the facultative intracellular pathogen Listeria monocytogenes //Mol. Microbiol. -1994.- 13, №3. - P. 395-402.

127. Cox , L.J., Kleiss, T., Cordier , J. L., Cordellana C., Koncel, P., Pedrassi, C., Beumer , R.R. and Seibenga , A. Listeria spp. In food processing , non food and domestic environments: Food Microbiology. 1989,6,49-61.

128. Clark M.F., Adams A.N. Characteristics of the microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant virus //J. Gen. Virol. 1977. - Vol. 36. - № 3. - P. 475-483.

129. Fey H., Pfister., Ruegg O. Comparative evalution of different enzyme-linced immunosorbent systems for the detection of staphylococcal en-terotoxins A, B, C and D //J. clin. Microbiol.- 1984. Vol. 19. -№1. P. 3438.

130. Fenlon D.R. Silage as a potential sourse of Listeria monocytogenes in the food chain //Microbiol., alim., nutr., 7, N 2 .- 1989. - P. 171-173.

131. Fliming Boisen. Listeria monocytogenes Anvendelseat gen probe test tie hurting identification of Listeria monocytogenes //Dan veterinartidsskr. -1993 -76, №23.-P. 1023-1025.

132. Fujisava , T and Mori, M. Evalution of media for determining hemolitic activity and thate of API Listeria system for identifying strains Listeria monocytogenes: Journal of Clinical Microbiology.-1994, 32, 1127-1129.

133. Farber, J.M. and Peterkin, P. I. (1991) Listeria monocytogenes, a food-borne pathogen. Microbiology Reviews 55, 476-511.

134. Fenlon, D.R. 1988, Listeriosis. In: Silage and Health, pp.7-18 Fd. B.A. Stark and J.M. Wielkinson Chalcombe Publications Marlow, Buckinghamshire, UK.

135. Fulthorpe A.J. //J.Hyg.-1957.- V.55, N 3,- P.382-401.173 .Galsnorhys B. Role of the cell surface in virulence of Listeria monocytogenes. "Ann. Inst. Pasteur. Microbiol", 1987, 138, № 2, 273-276.

136. Gitter, M. A changing pattern of ovin listeriosis in Great Britaing. In: Courtieu, A-L ., Espase , E. P. and Raynaud , A. E . (Eds). Proceedings of the 9th International Symposium of Listeriosis. University of Nantes, 1986, pp. 294-299.

137. Gellin B.G., Broome C.V., 1989; Listeriosis, JAMA 261: 1313-1320.

138. Hansen Peter Bo, Jenson Tom Hartvig, Lykkegaard Stig, Kristensen Henning Sund. Listeria monocytogenes miningitis in adults. "Sand. J. Infer. Diseasess", 1987, 19, № 1, 55-60.

139. Hao D. Y.-Y., Beuchat L.R., Brackett R.E. Comparison of media and methods for detecting and enumerating. Listeria monocytogenes in refrier-ated calbage. "Appl. And Environ. Microbiol"., 1987, 53, № 5, 955-957.

140. Herrero J.A., Naya M.T., Rivera M., Pelaez E., Felipe C., Teruel J.L., Romero J.R., Or tuno J. Listeria monocytogenes infection in renal transplant //Transl. And Clin. Immunol. Vol. 20. Amsterdam etc., 1989. - P. 214.

141. Hof H., Hefner P. Pathogenicity of Listeria monocytogenes in comparison to other Listeria species. "Infection", 1988, 16, Suppl. № 2, 141-144.

142. Hofstra, H., van der Vossen, M.B.W. and van der Plas, Microbes in food processing technology: FEMS Microbiology Reviews,- 1994, 15, 175-183.

143. Harmayani, E., Sofos J.N., and Schmidt G.R., (1993). Fate of Listeria monocytogenes in raw and cookeed ground beef with meat processing additives. International Journal of Food Microbiology 18, 223-232.

144. Jenson Anneet, Frederisk Willhelm, Gerner-Smidt Peter. Risk farctors for listeriosis in Denmark, 1989-1990 r. //Scand.J. infec. Diseases. 1994. -26, №2. -P. 171-178.

145. Junttila Jaana, Brander Minna Listeria monocytogenes septicemia associated with consumption of salted mushrooms /Scand. J. I. Fee. Peseases. -1989.-21, №3.-P. 339-342.

146. Jonson, J. L., Doule, M.P., and Cassens, R.G. (1990) Listeria spp. in meat and meat products. Areview. Journal of Food Protection 53, 81-91.

147. Kaufman Stefan H.E. Listeriosis findinds current concerh //Microb. Pathog. - 1988.- 5, № 4. - P. 225-231.

148. Kerr D. В., and Ash M. Rapid diagnostic methods for the Detection of Listeria spp. in food and food-related samples . XII International symposium on problems of listeriosis . Perth Western Australia 2-6 October 1995 .pp 477. 1995.

149. Khan M. Altaf. Amino acid requga // Zbl. Bakteriol. 1989. - 271, № 2. -P. 146-152.

150. Klinger J.D. Выделение листерий. Обзор методов и будущие перспективы. J.for clin. Study and Freat. Inf. Suppe, 2, 1988, v 16, p. 98106.

151. Khardori Nancy, Berkey Peter, Hayat Saniina, Rosenbaum Beverly, Bodey Gerald P. Spectrum and outcome of microbiologically documened Listeria monocytogenes infections of cancer patients //Cancer. 1989. - 64, №9,-P. 1968-1970.

152. Levit Т.A. A salfhydryl disulfide hypothesis of frest injury and resistance in plants //J. Sheeret. Biol. 1962. - V. 3, №4. - P.355-391.

153. Levit J. Cryochemistry of plant tissue. Protein interactions //Criobiology. 1966. - V., 3, №3. - P. 243-251.

154. Levit J. The role of "SH" and "SS" in the resistance of cells to high and low temperature //The cell and environmental temperature /Ed. A. S. Iros-chin. London Pergamon Press. 1967. - P. 269-274.

155. Loncarevic By S., Milanovie A., Caklovica F., Tham W., Danielsson -Tham M., Occurrence of Listeria species in an abattoir for cattle and pigs in Bosnia and Hercegovina //Acta vet. Scand. 1994. - 35, № 1. - P. 1115.

156. Lhopital S., Faurse P. La Listeriose en France: une epidemie de 275 cas. //Monit. Hosp. 1993. - № 58. - pp. 10-11.

157. Lantz P. G., Hahn-Hagerdal B. and Radstrom P. Sample preparation methods in PCR based detection of food pathogens: Trends in Food Science and Technology, 5, 1994, 384-389.

158. Marco A., Ramos J.А. Иммуноцитохимическое обнаружение L.monocytogenes в ткани методом пероксидаза-антипероксидара. Vet. Pathal. 1988, V. 25, № 5, 385-387.

159. Mac. Donald, F. and Sutherland , A. D. Impotant differences beetwen the generation times of Listeria monocytogenes and Listeria innocua in two Listeria enrichment broths : Journal of Dairy Research 1994, 61, 433-436.

160. Nakane P.K., Pierce G.B. Enzyme-labelled antibodies: preparation and application for the localization of antigen //J. Histochem. Cytochem. -1966.-Vol. 14. -№ 12.-P. 1084-1091.

161. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labelled antibody a new method of conjugation //J. Histochem. Cytochem. - 1974. - Vol. 22. - № 4. - P. 504508.

162. Nolla-Salas J., Plasencia A., Gasser I., Almena M., Coll P., Anto J.M. Estudio clinicoepidemiologico de la listeriosis humana en Barcelona //Med. Clin. 1994. - 103. № 2. - P. 41-45.

163. Neter E., Gorzynski E.A., Gino R.M. et al. //Canad. J. Microbiol.-1956.-N 2,3.-P. 232-24.

164. Polson A., Potgieter G.M., Largier J.E. The fractionation of protein mixtures by linear polymers of higth molecular weigh //Biochem. Biophis. Acta. 1964. V.82. -P.463-475.

165. Proc. Soc. Exp. Biol. 1948, V. 68. - P.382-401.

166. Pamer Eric G. Direct seguence identification and kinetic analysis of an MHC ciass I restricted Listeria monocytogenes CTL epitope //J. Immunol. - 1994. - 152. № 2. - P. 686-694.

167. Petran, R.L. and Swanson , K.M.J. Simultaneous growth of Listeria monocytogenes and Listeria innocua : Journal of Food Protection 1993, 56,616-618.

168. Robinson , B.J. and Cunningham, C.P.Accurasy of Micro-ID Listeria for identification of members of the genus Listeria : Journal of Food Protection 1991,54, 798-800.

169. Rayss K., Ketyi J., Schweiz Z. Allg. Path.- 1958. N 21. - P. 879891.

170. Redway K.F., Lapage S.P. Effect of carbohydrates and related compounds on the long-term presarvation of treeze-dried bacteria //Cryobiology. 1974. -V. 11, №1. -P. 73-79.

171. Ralovich B. Importance of Listeria monocytogenes in food hygiene //Acta microbiol. Hung. 1988. - 35. № 2. - P. 183.

172. Ralovich B. Listeriosis research: present situation and perspective. ""Ann. Immunol, hung.", 1986, 26, № 2, 911-925.

173. Ribeiro M.A., Almedia S.H., Souza C.C. Dot Elisa for human leptospi-rosis employing immunodominant antigen //J. Trop. Med. HYG. - 1995. -Vol. 98. - № 6. - P. 452-456.

174. Rebiere. Epidemie de Listeriose-Franc-Ete 1993. Bilan au 1 erdecembre 1993 //J. Le Bull.d. Epiter, 1994. - Vol. 7, № 1. - pp. 8-11.

175. Stavitsky A.B. Micromethods for the study and antibodies //J. Immunol.-1954.- V. 72. P. 360.

176. Skovgaard N.Ihe impact of the prevalence of Listeria monocytogenes in in the environment on meat and milk hygiene // Microbiol., alim., nutr. -1990.-8, №1,-P. 15-20.

177. Serafmi Alvaro bisol: Presenca de cepas de Listeria patogenica em lin-guica frescal de carne Snina, comereializada em supermercados de Goiania, Goias //Rev. Patol. Trop. 1993. - 22, № 1, - P. 17-22.

178. Steibuch G., Andran R. The isolation of IgG from imanalion serra with the acid of caprilic //Arch. Of Biochem. Stray and Biophys. 1969. - V. 139.-P. 279-284.

179. StortsZ H. (Шторц X.) Иммунофлуоресценция //Иммунологические методы. М.: Медицина, 1987. - Р.128-148.

180. Skovgaard Niels, Morgen Carl-Aage. Detection of Listeria spp in faeces from animals in feeds, and in raw foods of animal origin. "Int.J. Food Microbiol, 1988, 6, № 3, 229-242.

181. Schuster G., Borkhardt H. L. Gehauftes Auqtreten von Listeriose - Erkrankungen in Bezirk Magdeburg im Jahr 1985. "Z. gesamte Hyg. Und Grenzgeb.", 1987, 33, № 5, 261-263.

182. Seeliger H.P.R. u Langer В.Серологический анализ рода листерий. Его ценность и ограничения. International gournal of Food. Microbiolog, (1989), p 245-248.

183. Schuchat A., Swaminathan В., Broome C.V., 1991; Epidemiology of human listeriosis; Clin. Microbiol. Rev 4; 169-183.

184. Warburg O., Christian W. Isolierung und kristalisation des Garugster-ments enolase //Biochem. J. 1941.-V.310.- P.384-421.153

185. Weller T.H., Coons A.H. Fluorescent antibody studies with agents of varicella and herpes zoster propagated in vitro //Proc. Soc. Exp. Biol.-1954.- V.86.-P.789-794.

186. Weinbach R. Die Verwendbarkeit formol behandeiter Erythrocyten als Antigentrager in der indirecten Haemagglutination. - 2. //Schweiz. Z. Allg. Path. - 1958.- V. 21. -P. 1043.

187. Weinbach R. Die Verwendbarkeit formol behandeiter Erythrocyten als Antigentrager in der indirecten Haemagglutination. - 1 //Schweiz. Z. Allg. Path. - 1959.--V. 22.-P. 1.

188. Zaremrba Maria, Kaczmarski Wtadys taw, Rybaczuk Mikota J. Borowski Jerzy. Wystepowanie przeciwcial anty- Listeria monocytogenes W Suro-wicach uzyskanych od ludzi zterenu kraju w latach 1970-1974."Prz. Epidemiol.", 1977, 31, № 1,33-39.

189. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ1. ФЕДЕРАЦИИ

190. СТАВРОПОЛЬСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ

191. Утвераедаю Директор Ставропольского научно- исследовательского много института, ^служенный $ ¡¡^России1. И.Ефременко 4 силш1 г

192. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ РЕГЛАМЕНТ ДИАГНОСТИКУМ ЛИСТЕРИОЗНЫЙ АНТИГЕННЫЙ

193. ЭРИТРОЦИТАРНЫЙ ЖИДКИЙ (СУХОЙ) Erytrocyte Listeriosis Atigemim Diagnosticum liquid (dry)

194. Рекомендовано к утверждению Ученым советом СтавНИПЧИ Протокол №от "М OoL 2002 Г

195. СОГЛАСОВАНО Директор ГИСК им. Л.А. Тарасевича1. Н.В. Медуницын1. СТАВРОПОЛЬ, 2002 г.

196. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт

197. Рекомендовано к утверждению Ученым советом Став-НИПЧИ1. Протокол №от " II " 0JL 200 ¿л

198. Директор ГИСК им. JLA. Тарасевича1. Н.В. Медуницын1. СТАВРОПОЛЬ, 2002 г

199. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

200. ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ

201. СТАВРОПОЛЬСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ

202. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЛИСТЕРИОЗА У1. ЛЮДЕЙ

203. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ)1. УТВЕРЖДАЮ

204. Ставропольский родильный дом

205. Наименование внедряемого в практику препарата : Диагностикум эритроцитарный антигенный листериозный для диагностики листериоза (РНГА) . (Авторы : Тюменцева И.С., Афанасьев E.H., Егшатян Т.Н., Алиева Е.В.).

206. Краткое описание внедряемого в практику препарата : Препарат представляет собой сенсибилизированные антигеном эритроциты барана для диагностики листериоза (РНГА).

207. Сроки внедрения : 2000 г . и по настоящее время .1. Заведующая клинической1. Волосовец Ю.В.1. Голищева Т.Г.

208. Тест- система иммуноферментная для выявления антител возбудителе листериоза, изготовленная в НПО СТАВНИПЧИ.

209. Диагостикум эритроцитарный антигенный листериозный, изготовленный в НПО СТАВНИПЧИ.

210. Данные препараты были опробированны бактериологической лабораторией ФГУ ЦГ СЭН в г. Кисловодске.

211. Материалом для исследования служили сыворотки больных с диагнозом: «Кишечная инфекция неясной этиологии». Исследования проводились путем постановки:1 .Иммуноферментного анализа (ИФА). 2.Реакции пассивной гемаглютинации (РПГА).

212. При исследовании были поставлены 24 пробы РПГА дала положительные в трех, ИФА в шести.1. Г.К.Галутва1. Л.Г.Еремкина

213. Зам .главного врача ФГУ ЦГ СЭН в г. Кис

214. Зав. отделом Лабораторных иссл ФГУ ЦГ СЭН в г. Ки

215. ФГУ "ЦЕНТР ГОСУДАРСТВЕННОГО САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА В ГОРОДЕ ЖЕЛЕЗНОВОДСКЕ СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ"357400 г.Железноводск ул. Семашко, 12 тел.(факс) 97-61-071. E-mail: [e-mail]27 марта 2002г. г.Железноводск1. АКТ

216. Тест-система иммуноферментная для выявления антител к возбудителям листериоза, изготовленные в НПО Ставропольского противочумного института.

217. Диагностикум эритроцитарный антигенный листериозный, изготовленные в НПО Ставропольского противочумного института.

218. Исследования проводились путем постановки:

219. A.реакции иммулофлуоресценции (РИФ) Б.иммулоферментного анализа (ИФА)

220. B.реакции пассивной гемаггмотинации (РПГА)

221. В качестве исследуемого материала были взяты испражнения больных кишечной инфекции неясной этиологии, а также сыворотки этих больных.

222. Было поставлено 30 проб. При определении антигена листерий при помощи РИФ положительный результат был получен в 5 пробах.

223. При определении антител к листериям при помощи ИФА и РПГА положительный результат был получен также в 5 пробах.

224. Главный врач , А.В.Вараксин1. ШЬЦ'^'^ШЦ L lits*w

225. Зав.бак. лабораторией^-Л^"^l/Jnk , И.В.Лисай

226. Врач-бактериолог у О.В.Щеголихина