Усовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат биологических наук Янченко, Татьяна Александровна

• Янченко, Татьяна Александровна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Янченко, Татьяна Александровна

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современная классификация микобактерий туберкулеза и их морфологические, культуральные и биологические свойства.

1.2 Изменчивость микобактерий туберкулеза под действием физико-химических и биологических факторов.

1.3 Лабораторная диагностика туберкулеза и перспективы ее развития

1.3.1 Бактериоскопический метод исследования.

1.3.2 Культуральный метод исследования.

1.3.3 Идентификация микобактерий туберкулеза культуральным, биохимическим и биологическим методами.

1.3.4 Полимеразная цепная реакция, ее применение для индикации и идентификации микобактерий туберкулеза.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота»

Актуальность темы. Туберкулез крупного рогатого скота занимает особое место среди инфекционной патологии животных. Инфекция» длительное время может протекать в латентной форме, не проявляя клинических признаков болезни, не влияя на продуктивность Иг жизнедеятельность, быстро распространяясь среди поголовья животных, туберкулез искореняется с большим трудом.

В неблагополучных хозяйствах туберкулез крупного рогатого скота наносит значительный экономический ущерб владельцам животных и представляет большую опасность в заражении людей, организация мероприятий1 по борьбе с этим заболеванием была, и остается актуальной проблемой (Ю.И. Смолянинов, 1994; A.A. Колосов, H.A. Донченко, М;Ф. Агапова, 2002).

С момента открытия? «туберкулезной* палочки» и до сегодняшнего дня-против туберкулеза не разработано эффективных средств специфической профилактики и лечения. Поэтому, основным, звеном в проведении профилактических и оздоровительных мероприятий является своевременная и качественная^диагностика:

Для диагностики туберкулеза на протяжении XIX-XX веков : было предложено значительное количество методов. Однако обнаружение и идентификация возбудителя, инфекционного заболевания являются приоритетными, что обеспечивается богатым и разнообразным арсеналом методических приемов;, начиная от классических методик микробиологического исследования и заканчивая иммунохимическими и молекулярно-генетическими методами (A.C. Апта, под ред. Б.Р. Блума, 2002; T.V. Grebennikova et al., 1997; L.B. Heifets, P.A. Zenkins, 1997).

Основными методами первичной диагностики туберкулеза животных являются: аллергический, патологоанатомический и бактериологический, результаты которых предопределяют окончательный эпизоотический статус исследуемого поголовья животных, а также в целом фермы- или: хозяйства

A.G. Донченко и др., 2004; Л.А. Таллер, 1995; В.Г. Ощепков^ и др., 2001; В.И. Околелов, 2002; H.FL Овдиенко, В.А. Ведерников, А.Х. Найманов и др., 2002; Т.М. Shinnik, 1996; Е.М. Скрягина и др., 2001).

Заболевание туберкулезом считается установленным, если подтверждается данными патологоанатомической экспертизы, а- при отсутствии характерных для- туберкулеза видимых изменений — положительными результатами бактериологического исследования; Бактериологическое исследование, в свою« очередь, осуществляется; бактериоскопическим, культуральным и биологическим методом. (A.G. Донченко, H.A. Донченко, Ю.И. Смолянинов, 2000; D. Beilage, 1994).

Более чем 100-летний опыт фтизиатров* всего мира; доказал, что «золотым» стандартом; диагностики- туберкулеза является классическое сочетание культурального и микроскопического, методов? исследования, которые остаются актуальными , несмотря на! появление1 большого? числа альтернативных методов.

Бактериоскопическое исследование является-: наиболее быстрым и дешевым методом выявления кислотоустойчивых, микобактерий. Однако, пределы- метода, даже при использовании самою совершенной микроскопической техники, позволяют обнаружить,, микобактерии при; содержании не менее 1000 микробных тел в 1 мл материала. Такое количество микобактерий^ можно обнаружить только у больных животных с прогрессирующими формами процесса., Кроме того, микроскопическое обнаружение кислотоустойчивых микобактерий, не позволяет дифференцировать микобактерии туберкулеза от нетуберкулезных («атипичных») микобактерий — возбудителей'. микобактериозов (С.Е. Борисов, 2001).

Бактериологический метод исследования?; на туберкулез,, в частности посев на специальные питательные среды, является весьма надежным и достоверным. Этот метод позволяет получить чистую культуру даже при наличии в исследуемом материале нескольких десятков микобактерий, а также провести их идентификацию, определить вирулентность, биологические и биохимические свойства (О.Н. Бронштейн и др., 1934; И.С. Драбкина, 1963; В.И. Голышевская, 1995; Н.П. Овдиенко и др., 2006).

Выделение микобактерий туберкулеза из патологического материала, в силу генетических и фенотипических особенностей возбудителя, связано с определенными трудностями — это медленный рост на искусственных питательных средах, способность к полиморфизму и длительной персистенции возбудителя в измененной форме (Г.К. Самилло, E.H. Ромашева; 1988; B.C. Федосеев, И.Н. Рубцова, А.Н. Байгазанов, 1988; O.A. Иртуганова, 2006).

Изменение культурально-морфологических свойств микобактерий может происходить под воздействием самых различных факторов внешней' среды; применяемых химиопрепаратов, защитных реакций организма (В.Г. Ощепков и др., 2001; 2003; 2009).

Кроме того, в последние годы многими исследователями установлено, что появились штаммы микобактерий, обладающие лекарственной устойчивостью. Причем, в структуре устойчивости возросло число полирезистентных штаммов. Известно, что полирезистентные штаммы обладают пониженной" жизнеспособностью и проявляют очень скудный рост или вовсе . не растут на существующих питательных средах (А.Г. Хоменко и др., 1995; А.Г. Самойлова, А.О. Марьяндышев, 2005).

Наиболее часто для культивирования микобактерий используют плотные яичные питательные среды - Левенштейна-Иенсена, Гельберга, Финн-2. Однако на этих средах выделение микобактерий туберкулеза проводится довольно длительное время, а иногда наблюдается и незначительный рост микобактерий, явно недостаточный для проведения идентификации выросшей культуры (Наставление по диагностике туберкулеза животных, 2002).

Усилия многих исследователей направлены на повышение высеваемости микобактерий и сокращение сроков роста при выделении их из биоматериала. С этой целью испытываются различные химические и биологические препараты в качестве дополнительных компонентов селективных питательных сред.

Таким образом, усовершенствование существующих питательных сред для изоляции типичных и измененных форм микобактерий из биоматериала животных, их экспериментального получения и последующей идентификации, а также, изучение возможности сокращения сроков исследования на туберкулез за счет разработки новых и модификации существующих методов диагностики является актуальной задачей.

Цель и задачи исследований. Усовершенствовать методы выделения и идентификации' микобактерий туберкулеза из биоматериала, взятого от животных.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать питательную среду, позволяющую ускорить выделение и повысить высеваемость микобактерий туберкулеза из биоматериала от крупного рогатого скота.

2. Разработать метод ускоренного выявления микобактерий туберкулеза на< основе комбинированного применения культурального метода и полимеразной цепной реакции.

Научная новизна.

1. Разработана плотная питательная среда, содержащая фитопрепарат — 10%-ный водный экстракт полыни - для ускоренной изоляции типичных и измененных микобактерий туберкулеза, повышающая высеваемость микобактерий из биоматериала животных на 30%. Получен патент № 2382076 «Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза» от 20 февраля 2010 г.

2. Впервые разработан комбинированный культурально-генетический метод (КГМ), основанный на исследовании «слепых» смывов с поверхности питательных сред в ранние сроки культивирования методом полимеразной цепной реакции. Предлагаемый метод позволяет дополнительно выявлять труднорастущие и некультивируемые формы микобактерий, при этом значительно сокращая сроки исследования до 3-5 суток.

Практическая значимость и внедрение результатов исследований.

Повышение высеваемости микобактерий, выделенных из биоматериала от животных и сокращение сроков исследования, позволяет оперативно организовывать противотуберкулезные мероприятия в неблагополучных хозяйствах, а в случае исключения туберкулеза - предотвращать необоснованный убой здоровых животных.

Результаты исследований использованы при составлении методических рекомендаций:

- «Комплекс ускоренной дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах» утвержденные секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области, протокол № 9 от 15.11.08;

- «Методы ускоренного выявления типичных и измененных (L-форм) микобактерий туберкулеза», утвержденные секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области, протокол № 5 от 30.09.10;

Также материалы^ исследований использованы при проведении научно-исследовательской работы в ГНУ ВНИИБТЖ и учебном процессе Института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО ОмГАУ.

Апробация. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ВНИИБТЖ г.Омск и координационных совещаниях ВИЭВ г. Москва (2006-20 Юг.), на научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов института ветеринарной, медицины ОмГАУ (2008, 2010г.), на заседаниях совета молодых ученых ВНИИБТЖ (2006-2011 г.), на 6-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ «Патология сельскохозяйственных животных и пути ее профилактики» (г. Омск, 2007г.), на 7-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 180-летию- аграрной науки Сибири. «Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях Сибири и Урала» (г. Омск, 2008), на Всероссийской научно - практической конференции, посвященной памяти заслуженного деятеля науки, профессора И.А. Косилова. «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических инфекций и патологии животных» (г. Омск, 2009г.), на Международной научной конференции молодых ученых, «Новейшие направления развития аграрной науки» (п. Краснообск Новосибирской области, 2010г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Усовершенствованная плотная питательная среда, содержащая фитопрепарат, для ускоренного выявления микобактерий туберкулеза.

2. Разработанный метод диагностики туберкулеза- у крупного рогатого скота с использованием полимеразной цепной реакции.

Публикация результатов, исследований. По материалам диссертации опубликовано 15 научных статей, в том числе три в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ' («Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», «Ветеринария и кормление», «Достижения науки и техники АПК»). Патент № 2382076 «Питательная среда для< культивирования- микобактерий туберкулеза»- от 20 февраля: 2010 г. Методические рекомендации «Комплекс ускоренной дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах», утверждены секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области (протокол № 9 от 15.11.08). Методические рекомендаций «Методы- ускоренного выявления типичных и измененных (JI-форм) микобактерий туберкулеза», утверждены секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области (протокол №5 от 30.09.10).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора- литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследования,, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложения. Работа

Заключение диссертации по теме «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», Янченко, Татьяна Александровна

4 ВЫВОДЫ

1. Установлено, что на новой питательной среде для культивирования микобактерий-туберкулеза, созданной на-основе яичной среды Левенштейна-Йенсена с добавлением 10%-ного водного экстракта полыни, высеваемость микобактерий1 из биологического материала на 30,0 % выше по сравнению со стандартной ¡средой без фитопрепарата.

2. Доказано стимулирующее влияние 10%-ного водного экстракта полыни, добавленного в дозе 0,2-0,3 мл к 5 мл готовой питательной среды Левенштейна-Иенсена, на интенсивность накопление бактериальной массы и сокращение сроков роста культур микобактерий на 3-5 суток.

3. Разработан комбинированный культурально-генетический. метод (KFM) для ускоренной индикации^' и идентификации микобактерий^ туберкулеза, который дополнительно выявляет труднорастущие и некультивируемые"формы микобактерий,' сокращает сроки исследования и повышает достоверность диагностики на 33,4% по-сравнению с традиционными бактериологическими методами.

4. Исследование смывов* с поверхности питательных сред методом полимеразной цепной реакции* с использованием тест-системы «МТБ-КОМ» производства ФГУН' ЦНИИ" «Эпидемиологии» г. Москва позволяет выявить ДНК Mycobacterium tuberculosis complex на 3-5-е сутки и дифференцировать патогенные (М bovis, М. tuberculosis и др.) и-«атипичные» микобактерии (И, III, IV групп по Раньону) в 100% случаев:

5. Использование в диагностическом комплексе дополнительно комбинированного культурально-генетического метода позволяет в 94% случаев объективно оценить инфицированность животных и эпизоотический статус ферм по туберкулезу.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В лабораторной диагностике рекомендуется использовать «Питательную среду для культивирования микобактерий туберкулеза» для сокращения сроков культивирования и повышения выделяемости культур микобактерий из биоматериала.

2. Комбинированный культурально-генетический метод рекомендуется использовать в качестве экспресс-метода для наиболее эффективного обнаружения микобактерий в исследуемых образцах дополнительно к традиционным приемам микробиологической диагностики.

3. По результатам исследований разработаны методические рекомендации для лабораторий и ветеринарных специалистов хозяйств, которые также могут быть использованы в учебном процессе учреждений микробиологического и ветеринарного профиля:

- «Комплекс ускоренной дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах» утвержденные секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области, протокол № 9 от 15.11.08;

- «Методы ускоренного выявления типичных и измененных (Л-форм) микобактерий туберкулеза», утвержденные секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области, протокол № 5 от 30.09.10.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Янченко, Татьяна Александровна, 2011 год

1. Андросов, Ф.З. Справочник ветеринарного лаборанта / Ф.З. Андросов, И.Я; Беляев, Р.Т. Клочко; под ред. В.Я. Антонова. М.: Колос, 1981. - 248 с.

2. Антонов, Б.И; Использование метода ПЦР при диагностике: острых инфекционных болезней ЖИВОТНЫХ / Б;И; Антонов // Медицинский центр «Наследственность». Н.Новгород, 2002. - С. 5-8.

3. Апта, A.C. Туберкулез. Патогенез, защита, контроль, / A.C. Апта, М. Карачунский; под ред. Б.Р. Блума: пер.с англ. М.: Медицина, 2002. - 678 с.

4. Байгазанов, А.Н. Изменчивость микобактерий туберкулеза, / А.Н. Байгазанов // Материалы научно-практической конференции РАСХН СО

5. ИЭВСиДВ. Новосибирск, 1995, - С.53-54.

6. Байтерякова, Т.И. Персистирование микобактерий^ в .организме крупного рогатого скота / Т.И. Байтерякова, И.Н. Рубцова, Ю.А. Макаров // Проблемы туберкулеза и болезней легких. — 1982 №11. - С. 59-62.

7. Бактериологическая диагностика туберкулеза животных / Н.П. Овдиенко и др. // Ветеринария. 2006. - №12 - С. 3-5.

8. Баранов, A.A. Применение методов молекулярной биологии для исследования микобактерий туберкулеза1/ A.A. Баранов, А.О: Марьяндышев // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2008. - №4. - С. 3-5;

9. Бараускене, Л.П: Биологические и биохимические свойства патогенных для человека микобактерий как основа комплекса методов ускоренной идентификации и классификации: автореф. дис. . д-ра- бйол. наук / Л.П. Бараускене. Москва, 1977. - 19 с.

10. Барнаулов, О.Д. Фитотерапия больных легочным туберкулезом: монография / О.Д. Барнаулов СПб.: Весь, 1999. - 415 с.

11. Баронец, Н.Г. Получение стимуляторов роста микроорганизмов из лекарственных растений: дис. . канд. биол. наук / Н.Г. Баронец. Москва, 2004. - 132 с.

12. Басыбеков, С.Д. Животные-источники микобактериозов у человека / С.Д. Басыбеков, Я.А. Благодарный, Н.Ж. Жангузаков. Алма-Ата: Изд-во Кайнар, 1985. - 110 с.

13. Боганец, Н.С. Питательные среды для культивирования микобактерий туберкулеза / Н.С. Боганец // Методы диагностики и профилактики бруцеллеза и туберкулеза животных: сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ. Омск, 1988. -С. 132-137.

14. Боганец, Н.С. Совершенствование бактериологического метода диагностики туберкулеза: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / Н.С. Боганец. -Казань, 1989.- 18 с.

15. Боганец, Н.С. Эффективность питательных сред в диагностике туберкулеза / Н.С. Боганец // Ветеринария. 2006. - №3. - С. 28-30.

16. Борисов, С.Е. Диагностика туберкулеза: Возможности и пределы / С.Е. Борисов // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2001. - №3. - С.5-9.

17. Генодиагностика во фтизиатрии / Е.Г. Бочкарев и др. // Реф. ж. ВНИИТИ. Медицина. Реф. Сб. вып. Туберкулез. 2002. - №1. - С. 1-16.

18. Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней: Санитарные правила СП 1.32322-08. -М., 2008.

19. Берджи, Д. Определитель Берджи. В 2т. Т.1 Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта и др. М.: Мир, 1997. - 368с.

20. Борьба с туберкулезом: монография / О.Н. Бронштейн, М.В. Триус, A.A. Клебанова, A.C. Хольцман. М., 1934. - 258 с.

21. Вейсфейлер, Ю.К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичные микобактерии / Ю.К. Вейсфейлер. Будапешт, 1975. - 285с.

22. Видовая принадлежность микобактерий, выделяемых от крупного рогатого кота и из объектов внешней среды / Н.П. Овдиенко и др. // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 1990.- №2. - С. 46-48.

23. Вирулентность микобактерий туберкулеза / Б.И. Вишневский и др. // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2002. - №10. - С. 33-36.

24. Взаимосвязь туберкулеза животных и человека / H.A. Донченко и др. // Материалы Всерос. науч. конф. по проблемам хронических инфекций (Омск, 16-17 мая 2001 г.). Омск, 2001. - Ч. 1.-С. 158-159.

25. Влияние фитодобавок на рост патогенных и «атипичных» микобактерий на питательной среде / Т.Д. Абдыраманова и др. // Сибирский вестник сельскохозяйственных наук. 2008. - №3. - С. 103-105.

26. Выявление М. tuberculosis в крови методом ПЦР (экспериментальная модель) / М.В. Альварес Фигероа и др. / Генодиагностика в современной медицине: материалы III Всерос. конф. Москва, 2000. - С. 277-279.

27. Выявление микобактерий туберкулеза различными методами / Е.М. Скрягина и др. // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2001. - №3. -С. 55-58.

28. Гарифулов, А.Г. Антимикробная и трипаноцидная активность эфирных масел / А.Г. Гарифулов, Л.Г. Косиченко // Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве Казахстана: сб. науч. трудов. Алматы, 2006. -С. 34-37.

29. Генетическое типирование микобактерий туберкулезного комплекса с помощью анализа ПДФР ампликонов / H.A. Донченко и др. // Ветеринарная патология. 2004. - №1-2. - С. 71.

30. Генетическое типирование штаммов М. bovis / A.JI. Лазовская, З.Г. Воробьева, К.Н. Слинина, Е.А. Ильина // Ветеринария. 2004. - №7. -С. 26-28.

31. Головлев, Е.Л. О старых проблемах новой систематики бактерий / Е.Л. Головлев. М.: Микробиология, 1998. - Т.67, вып.2. - С. 281-286.

32. Голышевская, В.И. Возбудитель туберкулеза: биохимические особенности и трудности микробиологической диагностики / В.И. Голышевская // Вестник РАМН. 1995. - №7.- С. 13-15.

33. Денисова, Т.С. Возможности применения метода ПЦР (ДНК -диагностики) для выявления туберкулезного комплекса / Т.С. Денисова,

34. B.М. Говорун // Полимеразная цепная реакций в> диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний: материалы II Всерос. конф. Москва, 1998. - С. 96-100.

35. Дзадзиева, М.Ф. Диагностическая ценность ПЦР при туберкулезе / М.Ф. Дзадзиева, Н.В. Жербутович // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1997. - №5. - С. 10-13.

36. Дифференциальная диагностика микобактерий методом полимеразной цепной реакции / Т.В. Гребенникова и др. // Ветеринария. 1999. - №3.1. C. 17-20.

37. Донченко, A.C. Туберкулез крупного рогатого скота, верблюдов, яков, овец и пантовых оленей / A.C. Донченко, В.Н. Донченко. // РАСХН. Сиботд-ние. Новосибирск, 1994. - 354 с.

38. Донченко, A.C. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота /

39. A.C. Донченко, Н.П. Овдиенко, H.A. Донченко. Новосибирск: Изд-во Церис, 2004. -С.127-140.

40. Донченко, H.A. Культивирование микобактерий туберкулеза на поверхности мясопептонного агарового геля / H.A. Донченко, C.B. Ионина,

41. B.Н. Донченко // Ветеринария. 2010. - №1. - С. 81-84.

42. Дорожкова, И.Р. Выделение L-форм микобактерий туберкулеза из патологического материала: методические рекомендации / И.Р. Дорожкова, З.М. Кочемасова, М.М. Дыхно. Москва, 1984. - 19 с.

43. Дорожкова, И.Р. Эндогенная реактивация туберкулеза как результат реверсии прогрессирующих Jl-форм микобактерий / И.Р. Дорожкова, З.С. Земскова, В.Н. Круду // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 1995. -№3. - С.43-46.

44. Драбкина, И.С. Микробиология туберкулеза / И.С. Драбкина. М. 1963.1. C. 179.

45. Ерошенко, Л.А. Использование стандартных сред для выращивания микобактерий / Л.А. Ерошенко, А.Н. Шаров, Н.К. Букова // Всероссийский

46. Государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов: материалы Всероссийской науч. конф. по проблемам хронических инфекций. (Омск, 16-17 мая 2001 г.). Омск, 2001. - С. 161-163.

47. Жанузаков, А.Н. Современное состояние и перспективы развития < диагностики туберкулеза животных / А.Н. Жанузаков, С.Т. Даугалиева //

48. Зыков, М.П. Потенциально патогенные микобактерии и лабораторная диагностика микобактериозов / М.П. Зыков, Т.Б. Ильина // М., 1978. 174 с.

49. Идентификация JI-форм Mycobacterium tuberculosis с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) / Е.В. Вишневская, А.П. Бобченок, H.H. Мельникова, Б.И. Вишневский // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2001. - №4. - С. 38-40.

50. Изменчивость возбудителя туберкулеза в организме несвойственного хозяина / В.Ф. Романенко, A.M. Дьяченко, B.C. Козлов, В.А. Матузенко // Ветеринария. 1997. - №1. - С. 20-24.

51. Ильиных Л.А. Ускоренный способ бактериологической диагностики туберкулеза / Л.А. Ильиных // Система мер борьбы с туберкулезом с.-х. животных: сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ. Новосибирск, 1991 -С. 30-35.is