Вторичные метаболиты экстрактов корня Glycyrrhiza glabra L., их противомикробная, антиоксидантная и противоопухолевая активность тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Ларина Виктория Викторовна

• Ларина Виктория Викторовна
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Ларина Виктория Викторовна

Введение

Глава 1. Литературный обзор

1.1 БАВ экстрактов G. glabra

1.2 Способы получения экстрактов Glycyrrhiza

1.3 Выделение индивидуальных веществ из G. glabra

1.4 Биологическая активность экстрактов G. glabra

1.4.1 Противомикробная активность

1.4.2 Противовирусная активность

1.4.3 Гепатопротекторная активность

1.4.4 Антиоксидантная активность

1.4.5 Противовоспалительная активность

1.4.6 Противокашлевое действие

1.4.7 Противоязвенная активность

1.4.8 Иммуномоделирующая активность

1.4.9 Антитромботическая активность

1.4.10 Антинейродегенеративная активность

1.4.11 Противоопухолевая и антимутагенная активность

1.4.12 Влияние на моторику толстой кишки

1.4.13 Антидиабетическая и гиполипидемическая активность

1.4.14 Противоаллергическая активность

1.4.15 Обезболивающий эффект компонентов G. glabra

1.5 Побочное действие при употреблении G. glabra

Глава 2. Материалы и методы

2.1 Подготовка растительного сырья для проведения исследования

2.2 Определение содержания золы, общего содержания липидов, клетчатки, протеина

2.3 Определение элементного состава

2.4 Определение содержания глицирризиновой кислоты

2.5 Получение экстрактов

2.6 Определение основных компонентов экстрактов

2.7 Определение тотального выхода экстрактов

2.8 Определение общего содержания фенольных компонентов

2.9 Фракционирование растительных экстрактов хроматографическими методами

2.10 Выделение индивидуальных БАВ

2.11 Качественное и количественное определение фенольных компонентов

2.12 Определение антиоксидантной активности

2.13 Определение остаточного органического растворителя

2.14 Культивирование клеточных линий

2.15 Определение цитотоксической активности в отношении опухолевых и условно нормальных клеток

2.16 Определение противомикробной активности

2.17 Идентификация структуры методом ЯМР

2.18 Статистическая обработка результатов анализа

Глава 3. Результаты экспериментов и их обсуждение

3.1 Состав корня G. glabra и соответствие исследуемого растительного сырья фармакопейной статье

3.1.1 Содержание золы, общее содержание липидов, клетчатки, протеина и глицирризиновой кислоты в корне G. glabra

3.1.2 Содержание макро- и микроэлементов в корне G. glabra

3.2 Основные компоненты экстрактов G. glabra

3.3 Исследование влияния кислотности и основности, а также полярности экстрагента на содержание фенольных компонентов в экстрактах, на антиоксидантную и цитотоксическую активность экстрактов

3.3.1 Тотальный выход экстрактов

3.3.2 Общее содержание фенольных компонентов в экстрактах

3.3.3 Содержание БАВ в экстрактах G. glabra

3.3.4 Скрининг антиоксидантной активности экстрактов корня G. glabra in vitro

3.3.5 Цитотоксическая активность экстрактов G. glabra в зависимости от полярности экстрагента

3.4 Выделение индивидуального БАВ из экстрактов G. glabra, обладающего противоопухолевой активностью в отношении клеток глиобластомы крысы С6

3.4.1 Состав фракций наиболее активного экстракта G. glabra

3.4.2 Цитотоксическая активность фракций в отношении опухолевых и условно нормальных клеток

3.4.3 Выделение дайдзеина и его производного из фракции хлороформ - метанол (8:2) и его цитотоксическая активность

3.5 Оптимизация способа выделения дайдзеина

3.6 Влияние экстрагента на противомикробную активность экстрактов корня

G. glabra

3.7 Определение противомикробного компонента этилацетатного экстракта G. glabra

3.7.1 Состав фракций наиболее активного экстракта G. glabra

3.7.2 Противомикробная активность фракций

3.7.3 Противомикробная активность БАВ экстрактов G. glabra

Заключение

Список сокращений и условных обозначений

Список использованной литературы

Приложение А (Обязательное) Акты внедрения результатов диссертационного исследования

Приложение Б (Обязательное) Условия ОФ-УВЭЖХ-КВП-МС/МС разделения и настройки для электрораспылительной ионизации

Приложение В (Обязательное) Библиотека соединений G. glabra и их масс-спектрометрические данные (LC-ESI-QTOF, если не указано иное)

Приложение Г (Обязательное) Статистический анализ достоверности различий между цитотоксической активностью и IC50 экстрактов для нормальных и опухолевых клеток (тест Манна-Уитни)

Приложение Д (Обязательное) Статистический анализ достоверности различий между цитотоксической активностью и IC50 фракций и индивидуальных БАВ для нормальных и опухолевых клеток (тест Манна-Уитни)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Вторичные метаболиты экстрактов корня Glycyrrhiza glabra L., их противомикробная, антиоксидантная и противоопухолевая активность»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Растительное сырье является возобновляемым природным ресурсом в качестве источника различных биологически активных веществ. Известно, что многие растения могут проявлять широкий спектр биологической активности, что делает их актуальным объектом исследования [1].

С увеличением осведомленности о пользе антиоксидантов растет спрос на продукты и добавки, содержащие эти вещества. Функциональные продукты питания с антиоксидантами помогают нейтрализовать свободные радикалы, снижая окислительный стресс и воспалительные процессы в организме. Антиоксиданты могут способствовать общему улучшению здоровья, поддерживая иммунную систему, замедляя процессы старения и снижая риск хронических заболеваний, таких как сердечно-сосудистые и онкологические [2]. Многие традиционные источники антиоксидантов (например, фрукты и овощи) могут не обеспечивать достаточное количество этих веществ. Поиск новых источников может привести к открытию более мощных антиоксидантов.

С избыточным количеством свободных радикалов может быть связано возникновение опухолей. Статистика онкологических заболеваний в России показывает, что злокачественные новообразования остаются одной из основных причин смертности в стране. В последние десятилетия наблюдается устойчивый рост числа новых случаев возникновения злокачественных опухолей, что связано с увеличением продолжительности жизни, изменениями образа жизни и воздействием неблагоприятных факторов окружающей среды. Онкологические заболевания остаются одной из ведущих причин смертности, уступая лишь сердечно-сосудистым заболеваниям [3].

Поиск новых противоопухолевых средств необходим по нескольким ключевым причинам, одна из которых - устойчивость к существующим препаратам. Многие опухоли со временем развивают устойчивость к традиционным противоопухолевым

препаратам, что приводит к снижению их эффективности. Кроме того, поиск новых средств позволяет разрабатывать таргетные терапии, которые более точно воздействуют на конкретные типы онкологии.

Существующие противоопухолевые препараты часто имеют серьезные побочные эффекты, которые могут ухудшать качество жизни пациентов. Новые средства могут быть более селективными и иметь меньшую токсичность. Кроме того, некоторые виды онкологических заболеваний, например, глиобластома, по-прежнему имеют высокую смертность, и существует необходимость в более эффективных вариантах лечения. Опухоли головного мозга являются одной из главных причин смертности из онкологических заболеваний в возрасте до 39 лет [3].

В настоящее время все более важным становится поиск новых антибиотиков. С увеличением международных поездок и торговли инфекционные заболевания могут быстро распространяться по всему миру, что требует наличия эффективных антибиотиков для контроля их распространения. Бактерии развивают устойчивость к существующим антибиотикам, что делает лечение инфекций все более сложным и опасным. По данным ВОЗ (Всемирной организации здравоохранения), резистентность к антибиотикам приводит к увеличению числа случаев тяжелых инфекций и смертности [4-6].

Объектом исследования в данной работе выбраны корни солодки голой Glycyrrhiza glabra L. G. glabra является лекарственным растением. Она богата различными БАВ (биологически активными веществами), основные из которых глицирризиновая кислота, глабридин, глаброл, ликвиритин, различные флаваноиды. Указанные компоненты в большей или меньшей степени проявляют АОА (антиоксидантную активность). В зависимости от способа получения экстракта его состав, а, следовательно, АОА и противомикробная активность будут меняться. Ранее не была установлена зависимость указанной биологической активности экстрактов G. glabra от кислотности и основности экстрагента.

Степень разработанности темы исследования. В настоящее время активно ведутся работы по исследованию химического состава растительного сырья, в том числе G. glabra, и его биологической активности. Лекарственные растения рассматриваются в качестве источника активных компонентов лекарственных средств.

Имеется ряд исследований на тему биологической активности экстрактов G. glabra и ее терапевтическому применению [7-10]. Широко изучается противомикробная активность экстрактов G. glabra [11-13]. Батиха и соавторы [14] обобщили имеющиеся данные об использовании, метаболомном составе, фармакологической и токсикологической активности экстрактов G. glabra. Известна противомикробная активность экстрактов G. glabra против широкого круга микроорганизмов. Сообщалось о противоопухолевом действии водного экстракта G. glabra [15]. В качестве противоопухолевых компонентов G. glabra обычно описывают глицикумарин, глицирретиновую кислоту, глицирризин, ликохалконы А и Е и др. [16,17]. Среди изофлавонов наиболее изученными соединениями в области цитотоксической активности по отношению к глиомам являются генистеин и биоханин А [18], в то время как указанная активность дайдзеина описана мало.

Цели и задачи. Целью работы была стандартизация сырья G. glabra и исследование зависимости биологической активности экстрактов G. glabra от экстрагента, а также обнаружение противоопухолевого и противомикробного компонента.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить общее содержание белков, жиров, углеводов, золы, глицирризиновой кислоты и элементный состав корня G. glabra, а также соответствие исследуемого сырья литературным данным и фармакопейной статье ФС.2.5.0040.15 «Солодки корни Glycyrrhizae radices».

2. Определить основные компоненты корня G. glabra.

3. Исследовать влияние кислотности и основности, а также полярности экстрагента на содержание фенольных компонентов в экстрактах, а также на антиоксидантную и цитотоксическую активность экстрактов.

4. Выделить и идентифицировать индивидуальное соединение из экстракта G. glabra и исследовать его токсичность в отношении линий клеток глиобластомы крысы С6 и условно нормальных клеток HEK293T.

5. Оптимизировать способ выделения активного противоопухолевого соединения.

6. Исследовать влияние экстрагента на противомикробную активность экстрактов.

7. Определить противомикробный компонент наиболее активного экстракта корня G. glabra.

Научная новизна.

1. Впервые показана возможность использования экстрагентов с определенным уровнем кислотности и основности для обогащения экстрактов G. glabra целевыми соединениями и снижения вклада балластных веществ в конечный экстракт.

2. Впервые систематически исследована противоопухолевая активность индивидуальных веществ из корня G. glabra.

3. Впервые выделен дайдзеин как противоопухолевый компонент G. glabra в отношении клеток глиобластомы крысы.

4. Впервые показана возможность препаративного выделения индивидуального вещества дайдзеина с чистотой не ниже 82 % из корней G. glabra.

5. Впервые показана противомикробная активность формононетина в отношении Pseudomonas aeruginosa.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Предложен способ получения экстрактов G. glabra, основанный на подборе кислотности и основности или полярности растворителей в соответствии с

биологической активностью (антиоксидантной, противомикробной, противоопухолевой) выделяемых компонентов.

Установлено содержание антиоксидантов в экстрактах G. glabra и их противомикробная активность в зависимости от кислотности и основности, а также полярности экстрагентов.

Дайдзеин, выделенный из водно-этанольного экстракта G. glabra, можно рассматривать как перспективное противоопухолевое средство.

Формононетин показал противомикробную активность в отношении P. aeruginosa.

Кроме того, результаты проведенной работы были внедрены в образовательный процесс Высшей школы живых систем БФУ им. И. Канта по учебной дисциплине «Современные подходы к поиску и разработке новых лекарственных препаратов» в рамках образовательной программы «Фармацевтическая химия» направления подготовки 04.04.01 Химия, а также по учебной дисциплине «Хроматографические методы анализа» в рамках образовательной программы «Химическая экспертиза» направления подготовки 04.04.01 Химия (Приложение А).

Методология и методы исследования. При написании главы 1 «Литературный обзор» использовался теоретический метод исследования, который включал анализ информации, обобщение литературных данных. При выполнении экспериментальной части работы применялись хроматографические методы (колоночная жидкостная хроматография, ВЭЖХ-УФ (высокоэффективная жидкостная хроматография с УФ-детектором), УВЭЖХ-МС/МС (ультравысокоэффективная жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией), препаративная жидкостная хроматография), спектрофотометрические методы, гравиметрические методы, методы рентгеновской фотоэлектронной спектроскопии и ЯМР (ядерного магнитного резонанса). Для определения цитотоксической активности проводили анализ на жизнеспособность клеток. Противомикробная активность экстрактов была изучена диско-диффузионным методом.

Положения, выносимые на защиту:

1. Состав исследуемого растительного сырья соответствует фармакопейным стандартам и литературным данным.

2. Условия экстракции влияют на антиоксидантную и цитотоксическую активность экстрактов.

3. Наиболее активная фракция водно-этанольного экстракта богата дайдзеином, обладающим противоопухолевой активностью в отношении клеток глиобластомы крысы С6.

4. Для получения дайдзеина с чистотой не менее 82 % его следует выделять из фракции хлороформ - метанол 8:2 экстракта этанол - вода 70:30.

5. Наиболее широкий спектр противомикробной активности выявлен для этилацетатного экстракта G. glabra.

6. Формононетин оказывает противомикробное действие в отношении P. aeruginosa.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов обеспечивается использованием современных методов инструментального анализа, масс-спектрометрии, ЯМР, хроматографии и фотометрии, а также стандартизованных методов в части анализа антиоксидантной и антимикробной активностей; при измерении противоопухолевой активности использовались соответствующие линии клеток, в качестве положительного контроля и в качестве стандарта сравнения использовались 50 % раствор диметилсульфоксида и известный противоопухолевый препарат соответственно.

Результаты исследования были представлены на 7 конференциях, таких как «Актуальные проблемы экологии - 2022», Гродно, 05-06 октября 2022 г.; Всероссийский форум молодых исследователей «ХИМБИОSEASONS 2023», Калининград, 20-22 апреля 2023 г.; XXIV Международная научно-практическая конференция студентов и молодых ученых имени выдающихся химиков Л.П. Кулёва и Н.М. Кижнера, посвященная 85-летию со дня рождения профессора А.В. Кравцова

«Химия и химическая технология в XXI веке», Томск, 15-19 мая 2023 г.; I Всероссийская молодежная научная конференция (с элементами научной школы) «Актуальные проблемы биологии, химии, географии и технологии», Саранск, 26 декабря 2022 г.; «Kimyo va tibbiyot: nazariyadan amaliyotgacha», Buxoro, 07-08 октября 2022 г.; «International Conference Science and innovations 2021 : development directions and priorities», Melbourne, 10 ноября 2021 г.; XXV Международная научно-практическая конференция студентов и молодых ученых имени выдающихся химиков Л.П. Кулёва и Н.М. Кижнера, посвященная 100-летию со дня рождения профессора В.П. Лопатинского «Химия и химическая технология в XXI веке», Томск, 20-24 мая 2024 г.

По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 6 статей в журналах, рекомендуемых ВАК РФ, из них 5 статей в журналах, включенных в международные базы данных Web of Science и Scopus.

Диссертация имеет классическую структуру. Текст работы включает главы литературный обзор, материалы и методы, результаты экспериментов и их обсуждение, заключение. Объем диссертации составляет 187 страниц.

Автор выражает благодарность своему научному руководителю к.х.н. Чупахину Евгению Геннадьевичу за направление научного исследования, помощь и поддержку на всех этапах работы; БФУ им. И. Канта за возможность проведения исследований; сотрудникам НОЦ «Промышленные биотехнологии» за материально-техническую поддержку в процессе проведения исследований; сотруднику БФУ им. И. Канта Романишину Александру за помощь в определении цитотоксической активности, сотрудникам СПбГУ за помощь в проведении исследований методом УВЭЖХ-МС.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Солодка голая G. glabra L. (семейство Fabaceae) - это небольшое многолетнее растение, произрастающее в Евразии, Северной Африке и Западной Азии [19].

1.1 БАВ экстрактов G. glabra

В соответствии с Фармакопейной статьей "Солодки корни. ФС.2.5.0040.15" ("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том III") [20] основным биологически активным веществом корня G. glabra является 180-глицирризиновая кислота, которая является водорастворимым тритерпеновым гликозидом, образованным одной молекулой глицирретовой кислоты и двумя молекулами глюкуроновой кислоты. Глицирризиновая кислота обладает широким спектром фармакологических свойств (противовоспалительные, противоязвенные, противоаллергические, противоядные, антиоксидантные, противоопухолевые, противовирусные и т. д.). Содержание глицирризиновой кислоты в корне G. glabra составляет 2-24 % от сухого веса [21].

Кроме того, корни G. glabra содержат значительное количество других активных соединений [14,22,23] (таблица 1):

- флавоноиды (соединения 1-8);

- изопреноидзамещенные фенольные компоненты (соединения 9-17);

-птерокарпаноиды (соединение 18);

- изофлавоноиды, такие как изофлавоны (соединения 19-25), изофлавены (соединение 26), изофлаваны (соединение 27) и их производные;

- кумарины (соединения 28-30);

- сапонины (соединения 31-37);

- летучие компоненты (соединения 38-41).

Класс [24-27] Структура Название Источник

Эуфлавоноиды

Таблица 1 - Биологически активные вещества, входящие в состав G. glabra

л X о К а ю а ч

ликвиритигенин

ликвиритин

апиозид ликвиритина

апиозид глюколиквири-тина

[14]

[14]

[28]

[14]

кверцетин

[29]

1

2

3

4

Класс [24-271

Структура

Название

Л

л о н а в а л

катехин

[30]

л

н о к л а х

изоликвирити-генин

[141

л

«

и о н о к л а х

ликохалкон А

[14,23]

8

Изопреноидзамещенные фенольные соединения

л

н о в а

л ф

л и н

е р

п

ликофлавон А

[311

пренилликофлавон А

6

7

9

Класс [24-271

Структура

Название

ы н а в а

л ф

о з и л и н

е р

п

гиспаглабридин А

[311

11

гиспаглабридин Б

[311

12

ы н о н а в а

л ф

л и н

е р

п

глаброл

[281

13

шинфлаванон

[141

Класс [24-27]

Структура

Название

изоангустон А

[14]

15

л

н о в а

л

о

СО

и л и н

е р

С

семиликоизо-флавон В

[14]

16

ликорифенон

[14]

17

Птерокарпаноиды

л

л о н а

с

р

а к

о р

е т

с

18

шинптеро-карпин

[14]

Изофлаваноиды

л

н о в а

л ф

о з и

глизофлавон

[14]

Класс [24-271

Структура

Название

20

даидзеин

[321

21

даидзин

[321

ы н о в а

л ф

о

з и

22

генистеин

[32,331

23

генистин

[311

24

формононетин

[32,341

ононин

[341

Класс [24-27]

Структура

Название

л

н е в а

л ф

о з и

глабрен

[23,33]

26

л

н а в а

л ф

о з и

глабридин

[14,23]

27

Кумарины

и с к о т е ем и с к

о р

д

и г

ы н

и р

а м

ук

28

ликоарилкумарин

[14]

ы н

и р

а м

ук и с к

о р

д

и г

ликокумарин А

[14]

Класс [24-271

Структура

Название

ы н

и р

а м

ук о н

а р

и п

30

ликопирано-кумарин

[141

Сапонины

31

18Р-глициррети-новая кислота

[14,231

ы н и н о п а с

ы в о н е

п р

е т

и р

т

32

18Р-глицирризи-новая кислота (глицирризин)

[14,231

18а-глициррети-новая кислота

Класс [24-27]

Структура

Название

18а-глицирризи-новая кислота

34

[31]

ы

н

и

н

о

п

а

с

е

ы

в

о

н

е

п р

е т

и р

т

сапонин солодки G2

35

[35]

сапонин А3

36

[35]

22Р-ацетоксигли-цирризин

Класс [24-27] Структура Название Источник

Летучие компоненты

й CP

к с ч

К

и ч й

38

тетраметил-пиразин

[14]

терпинен-4-ол

[14]

39

л ч и о н е

п р

е т

гераниол

[14]

40

а-терпинеол

[14]

41

Кроме того, G. glabra содержит биологически активные полисахариды, одним из основных мономерных звеньев которых является глюкоза [23,36].

Различные виды солодки имеют отличия в метаболомном составе. Например, метаболиты ликохалкон А и глабридин являются специфическими для G. inflata и G. glabra соответственно [37-39]. Ликохалкон А (таблица 1, соединение 8) содержится лишь в небольших количествах в G. uralensis и G. glabra, и наряду с наличием ликохалкона C, ликохалкона E и ликохалкона D, представляет собой маркер для G. inflata. Глицикумарин, метаболит, обнаруженный в больших количествах в G. uralensis, в небольших количествах в G. inflata и в следовых количествах в G. glabra, считается видоспецифичным метаболитом для G. uralensis [38,40].

1.2 Способы получения экстрактов Glycyrrhiza

Известны различные способы получения растительных экстрактов: экстракция методом мацерации, Сокслета, ультразвуковая экстракция, микроволновая экстракция, сверхкритическая флюидная экстракция.

Для сапонинов или флавоноидов из видов Glycyrrhiza разработаны различные методы экстракции. Они включают мацерацию, противоточную экстракцию, сверхкритическую флюидную экстракцию, экстракцию ультразвуком, экстракцию Сокслета и микроволновую экстракцию [41,42].

Метанол и водные растворы этанола наиболее часто используются для экстракции флавоноидов. Например, смесь этанол-вода (30:70, об./об.), используемая при экстракции в течение 60 минут (50 °C), дала высокое извлечение глабридина (72,5%) [43]. Для обогащения фракций различных видов солодки ликохалконом А (таблица 1, соединение 8) использовались методы, включая высокоскоростную противоточную хроматографию и обработку макропористой смолой [40,44].

Применение различных органических растворителей может влиять на эффективность экстракции флавоноидов из корней G. glabra. При экстракции методом мацерации при небольшом нагревании этанолом, ацетоном, этилацетатом, дихлорметаном выход экстракта уменьшался в ряду

этанол>ацетон>этилацетат>дихлорметан от 6 % до 3 %. Более высокий общий выход фравоноидов и глабридина (таблица 1, соединение 27) был получен с дихлорметаном, за которым следовали этилацетат, ацетон и этанол, что указывает на то, что неполярные растворители способствуют оптимальной экстракции флавоноидов и глабридина. Данные способы экстракции не подходят для экстракции глицирризина, о чем свидетельствует низкое содержание этого компонента во всех экстрактах (от 0,1% до 1%), за исключением экстракта, приготовленного с водой, где содержание глицирризина составило около 10% [45].

В исследовании [46] для приготовления экстрактов G. glabra был применен метод ультразвуковой экстракции на основе экологически чистого глубокого эвтектического растворителя. В качестве растворителя использовали хлорид холина и молочную кислоту. Метод был оптимизирован и смоделирован с использованием методологии поверхности отклика для максимизации выходов экстракции глабридина (таблица 1, соединение 27) и изоликвиритигенина (таблица 1, соединение 7).

В работе [47] самая высокая эффективность ультразвуковой экстракции из G. glabra была достигнута при использовании в качестве экстрагента воды. Эффективность экстракции составила 30,52%. За водной экстракцией следовали растворители этанол - вода (50:50) и метанол - вода (50:50) с 28,52% и 26,39%. Однако самое высокое содержание полифенолов наблюдалось в этанольных экстрактах. Кроме того, в большинстве случаев в качестве экстрагента выбирают этанол, т. к. он является пищевым растворителем [48].

В работе [49] для экстракции полисахаридов измельченное растительное сырье G. glabra обезжиривали петролейным эфиром и предварительно обрабатывали абсолютным этанолом для удаления пигментов и других низкомолекулярных соединений. Затем полисахариды экстрагировали горячей водой.

1.3 Выделение индивидуальных веществ из G. glabra

В работе [50] описан способ селективной экстракции глабридина (таблица 1, соединение 27) из G. glabra. Была использована система экстракции тройным растворителем, содержащая водорастворимое производное Р-циклодекстрина. Оптимальная система экстракции состояла из водной фазы 0,1 М SBE-P-CD (сульфобутилэфир-Р-циклодекстрина) и органической фазы н-октанол - н-гексан (50:50). SBE-P-CD показал самую сильную способность к инкапсуляции по отношению к глабридину среди протестированных производных Р-циклодекстрина. Многоступенчатая центрифужная фракционная экстракция в идеальных условиях экстракции использовалась для непрерывного и специфического отделения

глабридина от экстракта G. glabra. Выход и чистота глабридина достигли 97 % и 95 % соответственно. Эта методика, объединяющая экстрагент SBE-P-CD и фракционную экстракцию, обеспечивала эффективный, высоковыходный, высокочистый, экологичный и недорогой метод отделения глабридина от экстракта. В исследовании [45] показано, что этилацетат позволяет селективно изолировать только глабридин без следов глицирризина (таблица 1, соединение 32). В свою очередь глицирризин может быть извлечен из экстракта G. glabra с помощью колоночной хроматографии и тонкослойной хроматографии [51].

В исследовании [28] хроматографическая очистка общего экстракта G. glabra с использованием различных методов, включая полупрепаративную ВЭЖХ, привела к выделению двадцати двух чистых соединений, которые были идентифицированы как нарингенин 4'-0-глюкозид, 3',4',7-тригидроксифлаванонбутин, ликвиритин, ликвиритин апиозид, абиссинон, глаброл, изоликвиритин, неоизоликвиритин, изоликвиритин апиозид, ликуразид, 3',4'-(2,2-диметилпирано)-3,7-

дигидроксифлаванон, глаброкумарин, глабрен, изомедикарпин, формононетин, ононин, глицирозид, (3S)-7,4'-дигидрокси-2'-метоксиизофлаван, глабридин, неоликвиритин, 3,11-диоксоолеано-1,12-ди-29-овая кислота и 3-оксо-18р-глицирретиновая кислота.

Для извлечения полисахаридов использовали водный экстракт G. glabra. Полисахариды были осаждены путем добавления четырех объемов абсолютного этанола. После этого осадки были растворены водой, депротеинизированы, диализированы против дистиллированной воды (отсечка Mw 3500 Да) и лиофилизированы для получения полисахарида. Раствор неочищенного полисахарида фракционировали путем ступенчатого элюирования сверхчистой водой и градиентными концентрациями растворов NaCl. Фракцию, элюированную водой, собирали, концентрировали, диализовали и очищали на колонке с сефадексом. В результате был получен глюканоподобный полисахарид, который представлял собой повторяющуюся единицу 1^4-а^-глюкопираноза и 1^6-a-D- глюкопираноза [49].

В работе [52] из водно-этанольного экстракта G. glabra было выделено 8 различных флавоноидов. Для этого из экстракта получали этилацетатную фракцию, которую затем хроматографировали на колонке с силикагелем при градиентном элюировании в системе хлористый метилен - метанол. В результате было получено 8 субфракций. Субфракцию, элюированную 5% раствором метанола, очищали кристаллизацией из метиленхлорида и этилацетата, что дало 7,4'-дигидроксифлавон.

Субфракцию 1 хроматографировали на колонке с силикагелем, заполненной н-гексаном, и элюировали возрастающей концентрацией этилацетата (от 5% до 30%) для получения 20 фракций. Фракцию 5 далее хроматографировали на колонке с силикагелем, заполненной смесь хлористый метилен - метанол - муравьиная кислота (9:1:0,1), элюировали изократически, в результате чего был получен формононетин [52].

Фракция 8 из субфракции 1 была элюирована 20 %-ным этилацетатом в гексане. В результате был получен 3-К-глабридин. ( 55 мг). Фракцию 13, элюированную 25 %-ным этилацетатом в гексане, далее очищали с использованием колонки с сефадексом, получив изоликвиритигенин [52].

Субфракцию 6 хроматографировали на колонке с сефадексом, элюируя метанолом, с получением восьми фракций, пятую из которых подвергали хроматографии на колонке с силикагелем, используя градиентное элюирование с компонентами системы хлористый метилен - метанол - муравьиная кислота. Собрали фракцию, элюируемую при полярности 8,5:1,5:0,1 соответственно, которую затем очищали на колонке с сефадексом, получая ликвиритин. Шестую фракцию субфракции 6 очищали на колонке с силикагелем, элюируя изократически в системе EtOAc : CH2C12 : CH3OH : H2O ( 15 : 8 : 4 : 0,5 ) с последующей полупрепаративной ВЭЖХ для получения нарингенина-5-О-глюкозида. Седьмую фракцию субфракции 6 очищали на колонке с силикагелем, элюируя изократически в системе этилацетат -хлористый метилен - метанол - вода (15:8:4:0,5) с получением 3,3',4,4'-тетрагидрокси-2-метоксихалкона [52].

Субфракцию 8 хроматографировали на колонке с сефадексом, получив десять фракций, пятую из которых очищали на колонке с сефадексом, затем на колонке с силикагелем, элюируя изократически смесью этилацетат - хлористый метилен -метанол - вода (15:8:4:0,5). В результате был получен ликвиритапиозид. Фракцию 9 субфракции 8 очищали на двух последовательных колонках с сефадексом, элюируя метанолом. В результате были получены два изомера изоликвиритигенин-4'-0-Р^-апиозилглюкозид и изоликвиритигенин-4-0-Р^-апиозилглюкозид [52].

1.4 Биологическая активность экстрактов G. glabra

Известно, что экстракты G. glabra проявляют такую фармакологическую активность, как противомикробная, противовирусная, противогрибковая, антиоксидантная, противораковая, противовоспалительная, цитотоксическая и другие [14,53,54]. Разнообразная фармакологическая активность экстрактов G. glabra и родственных ей соединений обусловлена различными механизмами ее действия. Например, род Glycyrrhiza хорошо известен как ингибитор 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы (11P-HSD2), который впоследствии ингибирует инактивацию кортизола, что приводит к увеличению эффективности минералокортикоидов или псевдогиперальдостеронизму.

Псевдогиперальдостеронизм экстрактов G. glabra в основном обусловлен присутствием глицирретиновой кислоты (таблица 1, соединение 31), которая действует по двум различным механизмам действия: либо путем ингибирования 11 в-HSD2, который непосредственно связывается с минералокортикоидным рецептором в качестве агониста, или это может быть обращено вспять путем одновременного введения блокатора минералокортикоидных рецепторов и производного спиронолактона, канренона [9]. Ингибирующее действие глицирретиновой кислоты на 11P-HSD2 проявляется даже при низких концентрациях в сыворотке крови, тогда как ее связывание с минералокортикоидным рецептором проявляется позже, после накопления в крови.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ларина Виктория Викторовна, 2026 год

- №. 11.

82. Singh M. Comparative phytochemical & antioxidant study of aqueous extracts of Glycyrrhiza glabra (Mulethi) & Piper longum (long pepper) / M. Singh // International Journal of Drug Research and Technology (UDRT). - 2021. - V. 10. - №. 3.

83. Gonçalves A. C. et al. Hepatoprotective effects of sweet cherry extracts (cv. Saco) //Foods. - 2021. - V. 10. - №. 11. - P. 2623.

84. Phenolics as potential antioxidant therapeutic agents: mechanism and actions / M.A. Soobrattee, V.S. Neergheen, A. Luximon-Ramma, O.I. Aruoma, T. Bahorun // Mutation Research/Fundamental and Molecular mechanisms of mutagenesis. - 2005. - V. 579. - №. 1-2. - P. 200-213.

85. Bento, C. Phenolic compounds: Sources, properties and applications / C. Bento, A.C. Gonçalves, F. Jesus, M. Simoes, L.R. Silva //Bioactive Compounds: Sources, Properties and Applications; Porter, R., Parker, N., Eds. - 2017. - P. 271-299.

86. Dietary effects of anthocyanins in human health: A comprehensive review / A.C. Gonçalves, A.R. Nunes, A. Falcâo, G. Alves, L.R. Silva //Pharmaceuticals. - 2021. -V 14. - №. 7. - P. 690.

87. Foti, M.C. Antioxidant properties of phenols / M.C. Foti // Journal of Pharmacy and Pharmacology. - 2007. - V 59. - №. 12. - P. 1673-1685.

88. Hepatoprotective effects of sweet cherry extracts (cv. Saco) / A.C. Gonçalves, D. Flores-Félix, A.R. Costa, A. Falcâo, G. Alves, L.R. Silva // Foods. - 2021. - V. 10. - №. 11. - P. 2623.

89. Heim K. E. Flavonoid antioxidants: chemistry, metabolism and structure-activity relationships / K. E. Heim, A. R. Tagliaferro, D. J. Bobilya // The Journal of nutritional biochemistry. - 2002. - V 13. - №. 10. - P. 572-584.

90. Rice-Evans C. A. Structure-antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids / C. A. Rice-Evans, N. J. Miller, G. Paganga // Free radical biology and medicine. - 1996. - V 20. - №. 7. - P. 933-956.

91. Spiegel M. Flavones' and flavonols' antiradical structure-activity relationship—A quantum chemical study / M. Spiegel, T. Andruniow, Z. Sroka // Antioxidants. - 2020. - V 9. - №. 6. - P. 461.

92. A quantum chemical explanation of the antioxidant activity of flavonoids / S. A. B. E. Van Acker, M. J. De Groot, D. J. van den Berg, M. N. J. L. Tromp, G. D. O. den Kelder, W. J. F. Van Der Vijgh, A. Bast // Chemical research in toxicology. -1996. - V. 9. - №. 8. - P. 1305-1312.

93. Flavonoids as antioxidants: Determination of radical-scavenging efficiencies / W. Bors, W. Heller, C. Michel, M. Saran //Methods in enzymology. - Academic Press, 1990. - V 186. - P. 343-355.

94. Chronic quercetin ingestion and exercise-induced oxidative damage and inflammation / S. R. McAnulty, L. S. McAnulty, D. C. Nieman, J. C. Quindry, P. A. Hosick, M. H. Hudson, L. Still, D. A. Henson, G. L. Milne, J. D. Morrow, C. L. Dumke, A. C. Utter, N. T. Triplett, A. Dibarnardi // Applied physiology, nutrition, and metabolism. - 2008. - V. 33. - №. 2. - P. 254-262.

95. Cuyckens, F. Mass spectrometry in the structural analysis of flavonoids / F. Cuyckens, M. Claeys // Journal of Mass spectrometry. - 2004. - V. 39. - №. 1. - P. 1-15.

96. Bayliak M. M. Effects of pH on antioxidant and prooxidant properties of common medicinal herbs / M. M. Bayliak, N. I. Burdyliuk, V. I. Lushchak // Open Life Sciences. - 2016. - V 11. - №. 1. - P. 298-307.

97. Complexes of iron with phenolic compounds from soybean nodules and other legume tissues: prooxidant and antioxidant properties / J.F. Moran, R.V. Klucas, R.J. Grayer,

J. Abian, M. Becana // Free Radical Biology and Medicine. - 1997. - V 22. - №. 5. - P. 861870.

98. Effects of functional phenolics dietary supplementation on athletes' performance and recovery: A review / A. C. Gonçalves, D. Gaspar, J. D. Flores-Félix, A. Falcao, G. Alves, L. R. Silva // International journal of molecular sciences. - 2022. - V. 23. - №. 9. - P. 4652.

99. The anti-inflammatory properties of licorice (Glycyrrhiza glabra)-derived compounds in intestinal disorders / C. D. S. Leite, G. A. Bonafé, J. Carvalho Santos, C. A. R. Martinez, M. M. Ortega, M. L. Ribeiro // International journal of molecular sciences. -2022. - V. 23. - №. 8. - P. 4121.

100. Sri, H. Comparative Evaluation of Glycyrrhiza glabra Incorporated Soft-Liner Over Conventional Soft-Liner Based on Antimicrobial Activity, Anti-Inflammatory Efficacy, Surface Roughness, Wettability, and Tensile Bond Strength: An: In Vitro: Study / H. Sri, S. Maiti, R. Shanmugam // Journal of International Oral Health. - 2023. - V. 15. - №. 3. - P. 290-297.

101. Fatoki T. H. In Silico Evaluation of the Antioxidant, Anti-Inflammatory, and Dermatocosmetic Activities of Phytoconstituents in Licorice (Glycyrrhiza glabra L.) / T. H. Fatoki, B. O. Ajiboye, A. O. Aremu // Cosmetics. - 2023. - V. 10. - №. 3. - P. 69.

102. Adel, M. Licorice: a possible anti-inflammatory and anti-ulcer drug / M. Adel, L. A. Alousi, H. A. Salem // Aaps Pharmscitech. - 2005. - V. 6. - P. E74-E82.

103. Green synthesis of gold nanoparticles using liquiritin and other phenolics from Glycyrrhiza glabra and their anti-inflammatory activity / A. O. Eltahir, K. L. Lategan, O. M. David, E. J. Pool, R. C. Luckay, A. A. Hussein // Journal of Functional Biomaterials. - 2024. - V. 15. - №. 4. - P. 95.

104. Cho B. O. Anti-inflammatory effect of Chrysanthemum zawadskii, peppermint, Glycyrrhiza glabra herbal mixture in lipopolysaccharide stimulated RAW264. 7 macrophages / B. O. Cho, J. Y Shin, H. J. Kang, J. H. Park, S. Hao, F. Wang, S. I. Jang // Molecular Medicine Reports. - 2021. - V. 24. - №. 1. - P. 1-8.

105. Sherwani F. Exploring the Potential of Asl-us-Soos (Glycyrrhiza glabra L.) in the Treatment of Respiratory Diseases—An Ethnomedicinal and Pharmacological Review / F. Sherwani, M. Nawab // Alternative Therapies in Health & Medicine. - 2024. - V. 30. -№. 8.

106. Mucoactive effect evaluation and acute toxicity study of natural herbal combination of Echinacea purpurea, Sambucus nigra, Glycyrrhiza glabra, Vitex trifolia, and Zingiber officinale / P. F. Arifin, F. D. Suyatna, W. Arozal, G. B. Wikanendra, R. A. Susilowidodo, R. Wisastra // Pharmacology Online. - 2020. - V. 1. - P. 186-194.

107. Sharma D. Phytochemistry & pharmacological studies of Glycyrrhiza glabra: A medicinal plant review / D. Sharma, P. Namdeo, P. Singh // Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res. -2021. - V. 67. - №. 1. - P. 187-194.

108. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of Extractum liquiritiae, glycyrrhizin and its metabolites / R. Krausse, J. Bielenberg, W. Blaschek, U. Ullmann // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. - 2004. - V 54. - №. 1. - P. 243-246.

109. Akbar, S. Glycyrrhiza glabra L. (Fabaceae/Leguminosae) / S. Akbar // Handbook of 200 Medicinal Plants: A Comprehensive Review of Their Traditional Medical Uses and Scientific Justifications. - 2020. - P. 963-980.

110. Immunotherapeutic effects of Glycyrrhiza glabra and Glycyrrhizic Acid on Leishmania major-infection BALB/C mice / S. Sheikhi, A. Khamesipour, T. Radjabian, T. Ghazanfari, A. Miramin Mohammadi // Parasite Immunology. - 2022. - V. 44. - №. 1-2. - P. e12879.

111. Potential of complementary and alternative medicine in preventive management of novel H1N1 Flu (Swine Flu) pandemic: Thwarting potential disasters in the bud. / R. Arora, R. Chawla, R. Marwah, P. Arora, R. K. Sharma, V. Kaushik, R. Goel, A. Kaur, M. Silambarasan, R. P. Tripathi, J. R. Bhardwaj // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. - 2011. - V 2011. - P. 1-16.

112. Structure of a new glycyrrhiza polysaccharide and its immunomodulatory activity / Y Wu, H. Zhou, K. Wei, T. Zhang, Y. Che, A. D. Nguyen, Y Wu // Frontiers in Immunology. - 2022. - V. 13. - P. 1007186.

113. Antithrombotic effect of Glycyrrhizin, a plant-derived thrombin inhibitor / W. Mendes-Silva, M. Assafim, B. Ruta, R. Q. Monteiro, J. A. Guimaraes, R. B. Zingali // Thrombosis research. - 2003. - V 112. - №. 1-2. - P. 93-98.

114. A review on Glycyrrhiza glabra linn (liquorice)—An excellent medicinal plant / A. V. Lohar, A. M. Wankhade, M.Faisal, A. Jagtap // Eur. J. Biomed. Pharm. Sci. - 2020. -V. 7. - P. 330-334.

115. Antithrombotic effect of Glycyrrhizin, a plant-derived thrombin inhibitor / W. Mendes-Silva, M. Assafim, B. Ruta, R. Q. Monteiro, J. A. Guimaraes, R. B. Zingali, // Thrombosis research. - 2003. - V. 112. - №. 1-2. - P. 93-98.

116. Glabridin, a bioactive flavonoid from licorice, effectively inhibits platelet activation in humans and mice / C. L. Chung, J. H. Chen, W. C. Huang, J. R. Sheu, C. W. Hsia, T. Jayakumar., S. M. Hou //International journal of molecular sciences. - 2022. - V. 23. - №. 19. - P. 11372.

117. Isoliquiritigenin isolated from Glycyrrhiza uralensis protects neuronal cells against glutamate-induced mitochondrial dysfunction / E. J. Yang, J. S. Min, H. Y. Ku, H. S. Choi, M. K. Park, M. K. Kim, D. S. Lee // Biochemical and biophysical research communications. - 2012. - V. 421. - №. 4. - P. 658-664.

118. Palmer, A. M. Pharmacotherapy for Alzheimer's disease: progress and prospects / A. M. Palmer // Trends in pharmacological sciences. - 2002. - V. 23. - №. 9. -P. 426-433.

119. Cognitive, behavioral, and physiological changes in Alzheimer disease patients as a function of incontinence medications / R. D. Jewart, J. Green, C. J. Lu, J. Cellar, L. E. Tune //The American journal of geriatric psychiatry. - 2005. - V. 13. - №. 4. - P. 324328.

120. The aqueous extract of Glycyrrhiza inflata can upregulate unfolded protein response-mediated chaperones to reduce tau misfolding in cell models of Alzheimer's disease / K. H. Chang, I. C. Chen, H. Y. Lin, H. C. Chen, C. H. Lin, T. H. Lin, Y T. Weng, C. Y Chao, Y. R. Wu, J. Y Lin, G. J. L. Chen, C. M. Chen // Drug Design, Development and Therapy. - 2016. T. 10. - P. 885-896.

121. Aqueous extract of Glycyrrhiza inflata inhibits aggregation by upregulating PPARGC1A and NFE2L2-ARE pathways in cell models of spinocerebellar ataxia 3 / C. M. Chen, Y T. Weng, W. L. Chen, T. H. Lin, C. Y Chao, C. H. Lin, I. C. Chen, L. C. Lee, H. Y Lin, Y. R. Wu, Y. C. Chen, K. H. Chang, H. Y. Tang, M. L. Cheng, G. J. L. Chen, J. Y. Lin / /Free Radical Biology and Medicine. - 2014. - V. 71. - P. 339350.

122. Ansari, M.A. Oxidative stress in the progression of Alzheimer disease in the frontal cortex / M.A. Ansari, S.W. Scheff // Journal of Neuropathology & Experimental Neurology. - 2010. - V 69. - №. 2. - P. 155-167.

123. Oxidant/antioxidant imbalance in Alzheimer's disease: therapeutic and diagnostic prospects / J. Wojsiat, K.M. Zoltowska, K. Laskowska-Kaszub, U. Wojda // Oxidative medicine and cellular longevity. - 2018. - V. 2018. - №. 1. - P. 6435861.

124. The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb / R. Yang, B. C. Yuan, Y S. Ma, S. Zhou, Y Liu // Pharmaceutical biology. - 2017. - V. 55. -№. 1. - P. 5-18.

125. Dandekar, A. Cross talk between ER stress, oxidative stress, and inflammation in health and disease / A. Dandekar, R. Mendez, K. Zhang // Stress responses: methods and protocols. - 2015. - P. 205-214.

126. Ikarashi, Y. Neuropharmacological efficacy of the traditional Japanese Kampo medicine yokukansan and its active ingredients / Y Ikarashi, K. Mizoguchi // Pharmacology & Therapeutics. - 2016. - V. 166. - P. 84-95.

127. Parle, M. Memory-strengthening activity of Glycyrrhiza glabra in exteroceptive and interoceptive behavioral models / M. Parle, D. Dhingra, S. K. Kulkarni // Journal of Medicinal Food. - 2004. - V 7. - №. 4. - P. 462-466.

128. Hikino, H. Recent research on oriental medicinal plants / H. Hikino //Economic and medicinal plant research. - 1985. - V. 1. - P. 53-85.

129. Diammonium glycyrrhizinate upregulates PGC-1a and protects against Ap1-42-induced neurotoxicity / X. Zhu, C. Chen, D. Ye, D. Guan, L. Ye, J. Jin, H. Zhao, Y. Chen, Z. Wang, X. Wang, Y. Xu // PloS one. - 2012. - V 7. - №. 4. - P. e35823.

130. Ethnopharmacological approaches for dementia therapy and significance of natural products and herbal drugs / D. Tewari, A. M. Stankiewicz, A. Mocan, A. N. Sah, N. T. Tzvetkov, L. Huminiecki, A. G. Atanasov //Frontiers in aging neuroscience. - 2018. -V. 10. - P. 3.

131. The anti-apoptosis effects of daidzein in the brain of D-galactose treated mice / Z. Mao, Y. L. Zheng, Y. Q. Zhang, B. P. Han, X. W. Zhu, Q. Chang, X. B. Hu // Molecules.

- 2007. - V. 12. - №. 7. - P. 1455-1470.

132. Hasan, M. K. Phytochemistry, pharmacological activity, and potential health benefits of Glycyrrhiza glabra / M. K. Hasan, I. Ara, M. S. A. Mondal, Y Kabir // Heliyon.

- 2021. - V. 7. - №. 6.- C.e07240. DOI: 10.1016/j.heliyon.2021.e07240.

133. Chemical composition, antioxidant, antimicrobial and anticancer activities of licorice (Glycyrrhiza glabra L.) root and its application in functional yoghurt / G. Hamad, A. Elaziz, S. Hassan, M. Shalaby, A. A. A. Mohdaly // Journal of Food and Nutrition Research. - 2020. - V 8. - №. 12. - P. 707-715. DOI: 10.12691/jfnr-8-12-3.

134. Sharma, V. Assessment of median lethal dose and anti-mutagenic effects of Glycyrrhiza glabra root extract against chemically induced micronucleus formation in Swiss albino mice / V. Sharma, R. C. Agrawal, V. K. Shrivastava // Int J Basic Clin Pharmacol. -2014. - V 3. - №. 2. - P. 292-297.

135. Sharma, V. Evaluation of anticlastogenic effects of Glycyrrhiza glabra root extract against cyclophosphamide induced chromosomal aberration in Swiss albino mice /

V. Sharma, R. C. Agrawal // Journal of Applied Pharmaceutical Science. - 2015. - V. 5. -№. 6. - P. 127-132.

136. AH H. P. Anticancer effect of Plectranthus amboinicus and Glycyrrhiza glabra on oral cancer cell line: an invitro experimental study / C. M. Leo, M. R. Sathish, P. A. H. Harini, N. Nachiammai // Asian Pacific Journal of Cancer Prevention: APJCP. -2023. - V. 24. - №. 3. - P. 881.

137. Glycyrrhiza glabra-enhanced extract and adriamycin antiproliferative effect on PC-3 prostate cancer cells / K. Gioti, A. Papachristodoulou, D. Benaki, A. Beloukas, A. Vontzalidou, N. Aligiannis, R. Tenta // Nutrition and cancer. - 2020. - V. 72. - №. 2. - P. 320-332.

138. Glycyrrhetinic acid-induced permeability transition in rat liver mitochondria / M. Salvi, C. Fiore, D. Armanini, A. Toninello // Biochemical pharmacology. - 2003. - V. 66. - №. 12. - P. 2375-2379.

139. On the mechanism of mitochondrial permeability transition induction by glycyrrhetinic acid / C. Fiore, M. Salvi, M. Palermo, G. Sinigagliab, D. Armaninia, A. Toninello // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics. - 2004. - V. 1658. - №. 3. - P. 195-201

140. Different effects of the chemically similar foodborne flavonoids genistein, genistin, and daidzein on the inhibition of proliferation and induction of apoptosis in U251 glioma cells / M. Li, Q. Huang, L. Xie, Z. Qian, H. Yang, X. Shi, Z. Huang // Research Square. - 2022. - P. 1-19.

141. Inhibition of DAMP actions in the tumoral microenvironment using lactoferrin-glycyrrhizin conjugate for glioblastoma therapy / H. S. Kim, S. C. Park, H. J. Kim, D. Y Lee // Biomaterials Research. - 2023. - V. 27. - №. 1. - P. 52.

142. A systematic review of the anticancer properties of compounds isolated from licorice (Gancao) / Z. H. Tang, T. Li, Y G. Tong, X. J. Chen, X. P. Chen, Y T. Wang, J. J. Lu // Planta medica. - 2015. - V. 81. - №. 18. - P. 1670-1687.

143. Three new compounds, licopyranol a-c, together with eighteen known compounds isolated from Glycyrrhiza glabra L. and their antitumor activities / S. Wang, J. H. Alafifi, Q. Chen, X. Shen, C. Bi, Y. Wu, Y. Jiang, Y Liu, Y. Li, D. He, Z. Yang // Metabolites. - 2022. - V. 12. - №. 10. - P. 896.

144. Exploiting Glycyrrhiza glabra L. (Licorice) Flavanones: Licoflavanone's Impact on Breast Cancer Cell Bioenergetics / L. Frattaruolo, G. Lauria, F. Aiello, G. Carullo, R. Curcio, M. Fiorillo, G. Campiani, V. Dolce, A. R. Cappello // International Journal of Molecular Sciences. - 2024. - V. 25. - №. 14. - P. 7907.

145. Gharib Naseri, M. K. Antispasmodic effect of hydroalcoholic leaf extract of licorice ileum contraction in rat / M. K. Gharib Naseri, M. Arabian, Z. Gharib Naseri // Shahrekord Journal of Medical Sciences. - 2008. - V. 9. - №. 3. - P. 1-9.

146. Ghayedi, N. The effect of hydro-alcoholic extract of licorice (Glycyrrhiza glabra) rhizome on the mechanical activity of the colon of male rats and its interaction with adrenergic system / N. Ghayedi, S. E. Khoshnam, A. Bahaoddini // Armaghane Danesh. -2016. - V. 21. - №. 3. - P. 225-237.

147. Isoliquiritigenin, one of the antispasmodic principles of Glycyrrhiza ularensis roots, acts in the lower part of intestine / Y. Sato, J. X. He, H. Nagai, T. Tani, T. Akao // Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2007. - V. 30. - №. 1. - P. 145-149.

148. Isoliquiritigenin, a flavonoid from licorice, plays a dual role in regulating gastrointestinal motility in vitro and in vivo / G. Chen, L. Zhu, Y. Liu, Q. Zhou, H. Chen, J. Yang // Phytotherapy Research: An International Journal Devoted to Pharmacological and Toxicological Evaluation of Natural Product Derivatives. - 2009. - V. 23. - №. 4. - P. 498506.

149. Khoshnazar, S. M. Effect of alcoholic extract of licorice (Glycyrrhiza glabra L.) rhizome on isolated duodenum motility in male rats and its interference with cholinergic, nitrergic, and adrenergic systems / S. M. Khoshnazar, A. Bahaoddini, H. Najafipour // Bull. Env. Pharmacol. Life Sci. - 2013. - V. 2. - №. 12. - P. 173-177.

150. Sen, S. Ameliorative effects of glycyrrhizin on streptozotocin-induced diabetes in rats / S. Sen, M. Roy, A. S. Chakraborti // Journal of Pharmacy and Pharmacology. - 2011.

- V. 63. - №. 2. - P. 287-296.

151. Antihyperglycemic activity of hydroalcoholic extracts of selective medicinal plants Curcuma longa, Lavandula stoechas, Aegle marmelos, and Glycyrrhiza glabra and their polyherbal preparation in alloxan-induced diabetic mice / S. B. Mustafa, M. Akram, H. Muhammad Asif, I. Qayyum, A. M. Hashmi, N. Munir, F. S. Khan, M. Riaz, S. Ahmad // Dose-Response. - 2019. - V. 17. - №. 2. - P. 1559325819852503.

152. Antidiabetic effect of glycyrrhizin in genetically diabetic KK-Ay mice / H. Takii, T. Kometani, T. Nishimura, T. Nakae, S. Okada, T. Fushiki // Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2001. - V. 24. - № 5. - P. 484-487.

153. Lipoprotein lipase expression, serum lipid and tissue lipid deposition in orally-administered glycyrrhizic acid-treated rats / W. Y. A. Lim, Y Y Chia, S. Y. Liong, S. H. Ton, K. A. Kadir, S. N. A. Syed Husain // Lipids in Health and Disease. - 2009. - V. 8. - P. 1-10.

154. Choh, L. 11B-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1 and 2 and HOMAIR in Orally-Administered Glycyrrhizic Acid / L. Choh // Monash University Malaysia: Subang Jaya, Malaysia. - 2008. - V. 71. - № 1. - P. 36-44.

155. Glycyrrhizic acid improved lipoprotein lipase expression, insulin sensitivity, serum lipid and lipid deposition in high-fat diet-induced obese rats / C. H. A. Eu, W. Y A. Lim, S. H. Ton, K. A. Kadir // Lipids in Health and Disease. - 2010. - V. 9. - P. 19.

156. Yaw, H. P. Glycyrrhizic acid as the modulator of 11p-hydroxysteroid dehydrogenase (type 1 and 2) in rats under different physiological conditions in relation to the metabolic syndrome / H. P. Yaw, S. H. Ton, K. A. Kadir // J Diabetes Metab. - 2015. -V. 6. - №. 522. - P. 2.

157. Sen, S. Ameliorative effects of glycyrrhizin on streptozotocin-induced diabetes in rats / S. Sen, M. Roy, A. S. Chakraborti // Journal of Pharmacy and Pharmacology. - 2011.

- V. 63. - №. 2. - P. 287-296.

158. Study on the differences in the composition and the whitening and anti-allergy activities of different kinds of licorice / X. Zhang, J. He, S. Gong, L. Liu // China Surfactant Detergent & Cosmetics. - 2021. - V. 51. - №. 7.

159. Nasal irrigation with Glycyrrhiza glabra extract for treatment of allergic rhinitis-A study of in vitro, in vivo and clinical trial / G. H. Chang, Y. S. Lin, K. H. Hsu, Y C. Cheng, P. R. Yang, M. S. Tsai, Y. T. Tsai, C. M. Hsu, P. J. Chang, C. S. Shi, Y. H. Yang, C. Y Wu // Journal of Ethnopharmacology. - 2021. - V. 275. - P. 114116.

160. In vitro and in vivo antiallergic effects of Glycyrrhiza glabra and its components / Y. W. Shin, E. A. Bae, B. Lee, S. H. Lee, J. A. Kim, Y. S. Kim, D. H. Kim // Planta medica. - 2007. - V. 73. - №. 03. - P. 257-261.

161. Baltina L. A. Chemical modification of glycyrrhizic acid as a route to new bioactive compounds for medicine / L. A. Baltina // Current medicinal chemistry. - 2003. -V. 10. - №. 2. - P. 155-171.

162. Extract of Glycyrrhiza glabra root attenuates nociception in experimental pain models: The role of BKCa channels / A. Parlar, R. Köprülü, S. Arslan, S. Qam, F. Özdogan, Ö. Yumruta§, F. Ü?karde§, M. Ríos, J. Martinez // Boletin Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromaticas. - 2022. - V. 21. - №. 4. - P. 464-484.

163. Parlar A. Glabridin alleviates inflammation and nociception in rodents by activating BKCa channels and reducing NO levels / A. Parlar, S. O. Arslan, S. A. Qam // Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2020. - V. 43. - №. 5. - P. 884-897.

164. Screening of in vivo anti-inflammatory and analgesic potential of methanolic extract of roots of Glycyrrhiza glabra L. in rats / N. W. A. Sheikh, S. B. Kosalge, S. S. Kosalge, N. I. Upwar // Journal of Phytonanotechnology and Pharmaceutical Sciences. -2022. - V. 2. - №. 4. - P. 27-29.

165. Chowdhury, B. A comparative study on central a algesic activities of ethanol and aqueous extracts of glycyrrhiza glabra root in albino rats / B. Chowdhury // Pharmacologyonline 3. - 2011. - P. 660-667.

166. Analgesic and uterine relaxant effects of isoliquiritigenin, a flavone from Glycyrrhiza glabra / Y. Shi, D. Wu, Z. Sun, J. Yang, H. Chai, L. Tang, YGuo // Phytotherapy Research. - 2012. - V. 26. - №. 9. - P. 1410-1417.

167. Glycyrrhiza glabra (Licorice): A comprehensive review on its phytochemistry, biological activities, clinical evidence and toxicology / S. Wahab, S. Annadurai, S. S. Abullais, G. Das, W. Ahmad, M. F. Ahmad, G. Kandasamy, R. Vasudevan , M. S. Ali, M. Amir // Plants. - 2021. - V. 10. - №. 12. - P. 2751.

168. Isbrucker, R. A. Risk and safety assessment on the consumption of Licorice root (Glycyrrhiza sp.), its extract and powder as a food ingredient, with emphasis on the pharmacology and toxicology of glycyrrhizin / R. A. Isbrucker, G. A. Burdock // Regulatory Toxicology and Pharmacology. - 2006. - V. 46. - №. 3. - P. 167-192.

169. Armanini, D. Affinity of liquorice derivatives for mineralocorticoid and glucocorticoid receptors / D. Armanini, I. Karbowiak, J. W. Funder // Clinical endocrinology. - 1983. - V. 19. - №. 5. - P. 609-612.

170. 11p-Hydroxysteroid dehydrogenase type 1: a tissue-specific regulator of glucocorticoid response / J.W. Tomlinson, E.A. Walker, I.J. Bujalska, N. Draper, G.G. Lavery, M.S. Cooper, M. Hewison, P.M. Stewart // Endocrine reviews. - 2004. - V. 25. - №. 5. - P. 831-866.

171. Chapman, K. 11 p-hydroxysteroid dehydrogenases: intracellular gate-keepers of tissue glucocorticoid action / K. Chapman, M. Holmes, J. Seckl // Physiological reviews. -2013. - V. 93. - №. 3. - P. 1139-1206.

172. Liquorice (Glycyrrhiza glabra): A phytochemical and pharmacological review / G. Pastorino, L. Cornara, S. Soares, F. Rodrigues, M. B. P. Oliveira // Phytotherapy research. - 2018. - V. 32. - №. 12. - P. 2323-2339.

173. Licorice induced hypokalemia, edema, and thrombocytopenia / M.M. Celik, A. Karakus, C. Zeren, M. Demir, H. Bayarogullari, M. Duru, M. Al // Human & experimental toxicology. - 2012. - V. 31. - №. 12. - P. 1295-1298.

174. Fraunfelder, F. W. Ocular side effects from herbal medicines and nutritional supplements / F. W. Fraunfelder // American Journal of Ophthalmology. - 2004. - V. 138. -№. 4. - P. 639-647.

175. Dobbins, K. R. B. Transient visual loss after licorice ingestion / K. R. B. Dobbins, R. F. Saul // Journal of neuro-ophthalmology. - 2000. - V. 20. - №. 1. -P. 38-41.

176. Santaella, R. M. Ocular adverse effects associated with systemic medications: recognition and management / R. M. Santaella, F. W. Fraunfelder // Drugs. - 2007. - V. 67. - P. 75-93.

177. Hall, R. C. Central retinal vein occlusion associated with liquorice ingestion / R. C. Hall, R. S. Clemett // Clinical & Experimental Ophthalmology. - 2004. - V 32. - №. 3. - P. 341-341.

178. Adverse reaction induced by licorice preparations: Clinical analysis of 93 cases / M. Mao, W. Li, W. Wang, S. X. Wang, J. Lu, Z. F. Chang // China Journal of Chinese Materia Medica. - 2013. - V. 38. - №. 21. - P. 3768-3772.

179. ГОСТ 32905-2014. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения содержания сырого жира = Animal feeding stuffs - Determination of fat content : межгосударственный стандарт : издание официальное : утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 октября 2014 г. № 1312-ст : введен впервые : дата введения 2016-0101 / подготовлен Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»). -Москва : Стандартинформ, 2020. - IV, 11, [1] с. ; 29 см. - 34 экз. - Текст непо средственный.

180. ГОСТ 26226-95. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения сырой золы = Fodder, mixed fodder and mixed fodder raw material. Methods for determination of raw ash : межгосударственный стандарт : издание официальное : утвержден и введен в действие постановлением Комитета Российской Федерации по

стандартизации, метрологии и сертификации от 29 февраля 1996 г. № 140 : введен взамен ГОСТ 26226-84 : дата переиздания июль 2003 г. / разработан МТК 4, Центральным институтом научного агрохимического обслуживания сельского хозяйства, Всероссийским научно-исследовательским институтом комбикормовой промышленности. - Москва : И П К Издатедьство стандартов, 2003. - II, 5 с. ; 29 см. -121 экз. - Текст непосредственный.

181. ГОСТ 13496.4-93. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания азота и сырого протеина = Fodder, mixed fodder and animal feed raw stuff. Methods of nitrogen and cmde protein determination : межгосударственный стандарт : издание официальное : утвержден и введен в действие постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 г. № 160 : введен взамен ГОСТ 13496.4-84 : дата переиздания март 2011 г. / разработан Госстандартом России. - Москва : Стандартинформ, 2011. - II, 15 с. ; 29 см. - Текст непосредственный.

182. ГОСТ 31675-2012. Корма. Методы определения содержания сырой клетчатки с применением промежуточной фильтрации : межгосударственный стандарт : издание официальное : утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 декабря 2007 г. № 467-ст : введен впервые : дата введения 2009-01-01 / разработан Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт кормов им. В.Р. Вильямса» (ГНУ «ВНИИ кормов»), Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт агрохимии им. Д.Н. Прянишникова» (ГНУ «ВНИИА»). - Москва : Стандартинформ, 2011. - II, 9 с. ; 29 см. - Текст непосредственный.

183. An alternative approach to evaluate the quality of protein-based raw materials for dry pet food / N. Montegiove, R. M. Pellegrino, C. Emiliani, A. Pellegrino, L. Leonardi // Animals. - 2021. - V. 11. - №. 2. - P. 458.

184. ОФС.1.4.1.0021.15 Экстракты: фармакопейная статья: издание официальное: взамен ГФ X, ст. 253, ст. ГФ XI, вып. 2 / Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. - Том II. - 2015. - 5 с.

185. In vitro study of Biological Activity of Tanacetum vulgare Extracts / O. Babich, V. Larina, O. Krol, E. Ulrikh, S. Sukhikh, M. A. Gureev, A. Prosekov, S. Ivanova // Pharmaceutics. - 2023. - V 15. - №. 2. - P. 616.

186. Variability of Phenolic Compound Accumulation and Antioxidant Activity in Wild Plants of Some Rumex Species (Polygonaceae) / P. Feduraev, L. Skrypnik, S. Nebreeva, G. Dzhobadze, A. Vatagina, E. Kalinina, A. Pungin, P. Maslennikov, A. Riabova, O. Krol, G. Chupakhina // Antioxidants. - 2022. - V. 11. - P. 311.

187. ОФС.11.0008 «Остаточные органические растворители»: фармакопейная статья: издание официальное: введена впервые 30.04.2025 / Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание. - 2025.

188. Karomatov, I. J. Neuroprotective properties of the glycyrrhiza / I. J. Karomatov, G. S. Yusupova // Biology and Integrative Medicine. - 2018. - V. 8. - № 25. - P. 79-90.

189. Kasimova, D. B. Atom-absortive spectrometry for determining of the elemental content of the Glycyrrhiza glabra roots / D. B. Kasimova, N. U. Abdukhalikova, D. T. Gaibnazarova // Collection of abstracts «Biological Markers in Fundamental and Clinical Medicine» (official specialized scientific journal of The Czech Republic). - 2017. - V. 1. -№3. - P. 44.

190. Total phenolics, mineral contents, antioxidant and antibacterial activities of Glycyrrhiza glabra L. roots grown wild in Turkey / S. Ercisli, I. Coruh, A. Gormez, M. Sengul // Italian journal of food science. - 2008. - V. 20. - №. 1.

191. Study of the composition and properties of extracts of Glycyrrhiza glabra grown in the Kaliningrad region and prospects of its use. / O. O. Babich, E. V. Ulrikh, V. V. Larina, A. K. Bakhtiyarova // Food systems. - 2022. - V 5. - № 3. - P. 261-270.

192. Screening and identification of the metabolites in rat plasma and urine after oral administration of areca catechu L. Nut extract by ultra-high-pressure liquid chromatography

coupled with linear ion trap-orbitrap tandem mass spectrometry / L. Li, Z. Luo, Y. Liu,

H. Wang, A. Liu, G. Yu, M. Li, R. Yang, X. Chen, J. Zhu, B. Zhao // Molecules. - 2017. - V. 22. - №. 6. - P. 1026.

193. Phytochemical composition, health effects, and crop management of liquorice (Glycyrrhiza glabra L.): A medicinal plant / A. Karkanis, N. Martins, S. A. Petropoulos,

I. C. Ferreira // Food reviews international. - 2018. - V. 34. - №. 2. - P. 182-203.

194. Atkins D. Skin rejuvenation in facial surgery / D. Atkins, J. Frodel // Facial plastic surgery. - 2006. - V. 22. - №. 02. - P. 129-139.

195. Wiese, H. F. Essential fatty acids in infant nutrition: I. linoleic acid requirement in terms of serum di-, tri-and tetraenoic acid levels / H. F. Wiese, A. E. Hansen, D. J. D. Adam // The Journal of nutrition. - 1958. - V. 66. - №. 3. - P. 345-360.

196. Palmitic acid in higher plant lipids / R. A. Sidorov, A. V. Zhukov, V. P. Pchelkin, V. D. Tsydendambaev // Palmitic Acid: Occurrence, Biochemistry and Health Effects. NOVA Publishers, New York. - 2014. - P. 125-144.

197. Лурье А. А. Хроматографические материалы (справочник). / А. А. Лурье // Москва, «Химия» - 1978. - 440 с.

198. Аналитическая химия. Проблемы и подходы / Р. Кельнер, Ж. М. Мерме, М. Отто, Г. М. Видмер // Москва. - 2004. - Том 2.

199. Райхардт Х. Растворители в органической химии: Пер. с нем. / Х. Райхардт, Э. Р. Захс // Химия. Ленингр. отд-ние, 1973. - 150 с.

200. Investigation of phytochemical variability, antioxidant activity and ecological conditions of native Iranian Glycyrrhiza glabra L. / G. Eghlima, A. Kheiry, M. Sanikhani, J. Hadian, M. Aelaei, S. N. Ebrahimi // International Journal of Horticultural Science and Technology. - 2020. - V. 7. - №. 4. - P. 387-400.

201. Quality assessment of licorice (Glycyrrhiza glabra L.) from different sources by multiple fingerprint profiles combined with quantitative analysis, antioxidant activity and chemometric methods / F. Yang, T. Chu, Y. Zhang, X. Liu, G. Sun, Z. Chen, //Food Chemistry. - 2020. - V. 324. - P. 126854.

202. Inability of total antioxidant activity assays to accurately assess the phenolic compounds of date palm fruit (Phoenix dactylifera L.) / M. Z. Alam, M. S. Alhebsi, S. Ghnimi, A. Kamal-Eldin // NFS Journal. - 2021. - V 22. - P. 32-40.

203. Schaich, K. M. Hurdles and pitfalls in measuring antioxidant efficacy: A critical evaluation of ABTS, DPPH, and ORAC assays / K. M. Schaich, X. Tian, J. Xie //Journal of functional foods. - 2015. - V. 18. - P. 782-796.

204. Miguel-Chavez, R. S. Phenolic Antioxidant Capacity: A Review of the State / R. S. Miguel-Chavez // Phenolic compounds: biological activity. - 2017. - P. 59.

205. Prior, R. L. Standardized methods for the determination of antioxidant capacity and phenolics in foods and dietary supplements / R. L. Prior, X. Wu, K. Schaich // Journal of agricultural and food chemistry. - 2005. - V. 53. - №. 10. - P. 4290-4302.

206. Comparative characteristics of spectrophotometric methods for determining the in vitro antioxidant activity of plant extracts / A.D. Popov, N.U. Chupakhina, L.N. Skrypnik, V.V. Larina, O.O. Babich // IOP Conference Series: Earth and Environmental Sciencethis. -2023. - V. 1154. - №1. - P. 012081.

207. In-vitro antitumor activity of compounds from Glycyrrhiza glabra against C6 glioma cancer cells: identification of natural lead for further evaluation / B. Goel, A. Sharma, N. Tripathi, N. Bhardwaj, B. Sahu, G. Kaur, B. Singh, S. K. Jain // Natural Product Research. - 2021. - V. 35. - №. 23. - P. 5489-5492.

208. Sheng, Z. Z. Anticancer effects of catechin flavonoid in human glioma cells are mediated via autophagy induction, cell cycle arrest, inhibition of cell migration and invasion and targeting MAPK/ERK signalling pathway / Z. Z. Sheng // J BUON. - 2020. - V. 25. -№. 2. - P. 1084-90.

209. Development of resistance to antiglioma agents in rat C6 cells caused collateral sensitivity to doxorubicin / S. Stojkovic, A. Podolski-Renic, J. Dinic, T. Stankovic, J. Bankovic, S. Hadzic, V. Paunovic, A. Isakovic, N. Tanic, M. Pesic // Experimental Cell Research. - 2015. - V 335. - №. 2. - P. 248-257.

210. Effects of the combination of camptothecin and doxorubicin or etoposide on rat glioma cells and camptothecin-resistant variants / V. Pavillard, D. Kherfellah, S. Richard, J. Robert, D. Montaudon // British journal of cancer. - 2001. - V. 85. - №. 7. - P. 1077-1083.

211. Daidzein suppresses tumor necrosis factor-a induced migration and invasion by inhibiting hedgehog Gli1 signaling in human breast cancer cells / C. Bao, H. Namgung, J. Lee, H. C. Park, J. Ko, H. Moon, H. W. Ko, H. J. Lee // Journal of agricultural and food chemistry. - 2014. - V. 62. - №. 17. - P. 3759-3767.

212. Daidzein overcomes TRAIL-resistance in malignant glioma cells by modulating the expression of the intrinsic apoptotic inhibitor, bcl-2 / M. D. Siegelin, T. Gaiser, A. Habel, Y. Siegelin // Neuroscience letters. - 2009. - V. 454. - №. 3. - P. 223-228.

213. Daidzein inhibits choriocarcinoma proliferation by arresting cell cycle at G1 phase through suppressing ERK pathway in vitro and in vivo / W. Zheng, R. Sun, L. Yang, X. Zeng, Y Xue, R. An // Oncology Reports. - 2017. - V. 38. - №. 4. - P. 2518-2524.

214. Growth inhibitory in vitro effects of glycyrrhizic acid in U251 glioblastoma cell line / S. Li, J. H. Zhu, L. P. Cao, Q. Sun, H. D. Liu, W. D. Li, J. S. Li, C. H. Hang // Neurological Sciences. - 2014. - V. 35. - P. 1115-1120.

215. Preparation and In Vitro Evaluation of Daidzein-Loaded Nanoparticulate Systems / R. S. Ozakar, M. Cetin, A. Taghizadehghalehjoughi, A. Hacimuftuoglu // The Eurasia Proceedings of Health, Environment and Life Sciences. - 2021. - V. 1. - P. 1-12.

216. Скрининг противоопухолевой активности корня Glycyrrhiza glabra L. / В. В. Ларина, А. О. Романишин, П. К. Клещина, Д. Д. Кротов, Е. Г. Чупахин // Химия растительного сырья. - 2025. - №3. - С. 254-263.

217. Evaluation of the antibiofilm and antimicrobial activities of Glycyrrhiza glabra and Viola odorata in poly herbal formulations / H. A. Rafey, A. H. Shah, K. M. Khalid, M. Kamran, M. Tayyab // Main Group Chemistry. - 2021. - V. 20. - № 4. - P. 557-563.

218. Targeting Pseudomonas aeruginosa PAO1 pathogenicity: The role of Glycyrrhiza glabra in inhibiting virulence factors and biofilms / G. Soundhariya, N. N.

Pathoor, K. Murthykumar, P. S. Ganesh // Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. - 2025. - V. 111. - № 3. - P. 116674.

219. Ларина, В. В. Зависимость противомикробной активности различных экстрактов Glycyrrhiza glabra L. от экстрагента и обнаружение ее противомикробного компонента. / В. В. Ларина, И. А. Лаврентьева, Е. Г. Чупахин // Известия СПбГТИ. -2025. - №73. - С. 37-42.

220. Behdad, A. Comparison of phytochemical compounds of two Glycyrrhiza glabra L. populations and their relationship with the ecological factors / A. Behdad, S. Mohsenzadeh, M. Azizi // Acta Physiologiae Plantarum. - 2020. - V. 42. - № 8. - P. 118.

221. Suman, A. New prenylated iso □ avanones from the roots of Glycyrrhiza glabra / A. Suman, M. Ali, P. Alam // Chemistry of Natural Compounds. - 2009. - V. 45. - P. 487491.

222. Obagi, S. Skin rejuvenation and resurfacing. / S. Obagi, R. K. Gandhi // Maxillofacial surgery. - 2017. - P. 1286-1301.

223. Cantelli-Forti, G. Interaction of licorice on glycyrrhizin pharmacokinetics / G. Cantelli-Forti, F. Maffei, P. Hrelia, F. Bugamelli, M. Bernardi, P. D'intino, M. Maranesi, M. A. Raggi // Environmental health perspectives. - 1994. - V. 102. - №. 9. - P. 65-68.

Рисунок А.1 - Акт внедрения результатов диссертационного исследования в учебную дисциплину «Хроматографические методы анализа».

Рисунок А.2 - Акт внедрения результатов диссертационного исследования в учебную дисциплину «Современные подходы к поиску и разработке новых лекарственных

препаратов».

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (ОБЯЗАТЕЛЬНОЕ) УСЛОВИЯ ОФ-УВЭЖХ-КВП-МС/МС РАЗДЕЛЕНИЯ И НАСТРОЙКИ ДЛЯ ЭЛЕКТРОРАСПЫЛИТЕЛЬНОЙ ИОНИЗАЦИИ

Таблица Б.1 - Условия ОФ-УВЭЖХ-КВП-МС/МС разделения и настройки для электрораспылительной ионизации_

Менеджер образцов ACQUITY

Режим впрыска Частичная петля

Объем впрыска 5 мкл

Слабый элюент вода

Объем слабого элюента 600 мкл

Сильный элюент ацетонитрил

Объем сильного элюента 200 мкл

Целевая температура образца 4.0 °C

Промывка при переполнении иглы автоматиче ская

Условия колонки

Разделительная колонка EC 150/2 NUCLEO SHELL RP 18 (150 x 2 мм, размер частиц 2.7 мкм)

Целевая температура колонки 40.0 °C

Менеджер бинарных растворителей ACQUITY

Элюент A вода

Элюент B ацетонитрил

Продолжительность промывки 5 мин.

уплотнения

Скорость потока 0.4 мл/мин.

Программа элюирования 5% элюент В изократический режим - 2 мин.; градиент до 95% элюента В - 19 мин.; 95% элюент В изократический режим - 2 мин.; градиент до 5% элюента В - 0.01 мин.; 5% элюент В изократический режим - 7 мин. (переуравновешивание)

Масс-спектрометр

Тип масс-анализатора квадруполь-времяпролетный (QqTOF-MS)

Источник ионов DuoSpray™

Последовательное оконное получение всех

Тип эксперимента теоретических масс-спектров фрагментарных ионов (SWATH)

Режим работы положительный/отрицательный

Время цикла (с) 1.1

Пауза между диапазонами (мс) 1.049

Автоматическая регулировка массы вкл.

Время установления (с) 0

Временные интервалы для суммирования 4

Продолжительность 23 min

Масс-спектрометрия

Наст ройки источника ионов

Газ для распыления (фунтов на кв. дюйм изб.) 60

Осушающий газ (фунт/кв. дюйм изб.) 70

Газовая завеса (фунт/кв. дюйм изб.) 55

Напряжение ионного распыления (кВ) 5.5/-4.5 (положительный/отрицательный режим)

Температура источника ионов (°С) 450

Настройки масс-спектрометра

Тип эксперимента TOF-MS

Диапазон m/z 65 - 1250

Время накопления (мс) 50

Потенциал декластеризации (В) 35/-35 (положительный/отрицательный режим)

Потенциал столкновения (В) 10/-10 (положительный/отрицательный режим)

Настройки MS/MS

Режим фрагментации диссоциация, активируемая столкновением (CAD)3

Тип эксперимента MS/MS SWATH

Номер окна SWATH 15

Ширина окна SWATH (m/z) 81

Перекрытие окон SWATH (m/z) 1

Энергия столкновения при качении выключено

Тип аналита малые молекулы

Время накопления (мс) 60

Потенциал декластеризации (В) 35/-35 (положительный/отрицательный режим)

Потенциал столкновения (В) 45/-35 (положительный/отрицательный режим)

Распространение энергии столкновения (V) 35/15 (положительный/отрицательный режим)

Задержка высвобождения ионов (В) 30/-30 (положительный/отрицательный режим)

Ширина ионного выброса (V) 15/-15 (положительный/отрицательный режим)

ПРИЛОЖЕНИЕ В (ОБЯЗАТЕЛЬНОЕ)

БИБЛИОТЕКА СОЕДИНЕНИЙ G. GLABRA И ИХ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ (LC-ESI-

QTOF, ЕСЛИ НЕ УКАЗАНО ИНОЕ)

Таблица В.1 - Библиотека соединений G. Glabra и их масс-спектрометрические данные

Соединение Моноизотопная масса [М]+ [М+Н]+ [M-H]-

m/z 1 m/z 2 m/z 3 m/z 4 m/z 1 m/z 2 m/z 3 m/z 4

1,7-диметил-4,4а,5,6-тетрагидропиридо-1н пиридазин-2(3н)-он [220] 179,11

18а-глицирретиновая кислота [31] 471,34677 177,16389 469,33191 425,3423

18Р-глицирретиновая кислота (глицирретовая кислота) [31] 471,3443 469.3271 387.0234 425,3361 355,2569

1-метиладамантан [220] 150.140850574

2-(метилтио)этиламин [220] 91.04557046

2,3-дигидро-3,5-дигидрокси-6-метил-4н-пиран-4-он [220] 144,04

2-аминохинолин [220] 144.068748264

2-ацетилфенол [220] 136.052429494

2-гидрокси-3-метил-4-пирон [220] 126,03

2-метокси-4-винилфенол [220] 150.068079557 151,0792 (LC-ESI-QFT) 87.06377 86,05753 105,0742 149,0638 105.07372 130,0471 149.06398

3'-гидрокси-4'-о-метилглабридин [31 ] 354,1467238

3-метоксикатехин [220] 140.047344113 139.1222

3-метоксифенол [220] 125,0597 (IT) 93,1 110,2 107,2

4'-о-метилглабридин [193] 338.15180918

4-5-а-эпокси-3-метокси-17-метил-7-а-6-Р,7-Р-морфинан [220] 285,17

Соединение Моноизотопная масса [М]+ [М+Н]+ [М-Н]-

т^ 1 тЪ 2 т^ 3 тЪ 4 m/z 1 m/z 2 т^ 3 тЪ 4

4-ацетил-3-гидрокси-2,6-диметокситолуол [220] 210,09

5,7-дигидроксифлаванон [193] 256.07355886 257,0794 153.0166 131,0478 255,0648 151.00237 213.05367

5,8-дигидроксифлавон-7-о-Р^глюкуронид (глихионид а) [193] 446,08

5-гидрокси-8-метоксил-флавон-7-о-Р^-глюкуронид (глихионид Ь) [193] 460,1

6-метокси-3-метилбензофуран [220] 162.068079557

7,7-диметилбициклооктан-2-он [220] 152.120115130

7-гидрокси-4'-метоксифлавон [220] 268.07355886 267,0654 268,0687 252,042

7-метилликорицидин [31] 438,2406242

п-аминопирролидин [220] 86,09

а-пинен [31] 136.125200510 137,15 ОО) 95

а-терпинеол ацетат [220] 196.146329876

Р-кариофиллен [31] 204,1878008

Р-пинен [31] 136,1252005

Р-туяплицинол [220] 180.078644241

у-терпинен [31] 135,1174 134,1096 89,0892

Апиоглицирризин [31] 778,4139567

Апиозид ликвиритина [31] 550.16864101 549 О1Т) 255 429 297

Арабоглицирризин [31] 778,4139567

Бензокарбазол [220] 217.089149355

Соединение Моноизотопная масса [М]+ [М+Н]+ [М-Н]-

N 2 N 53 3 N 53 4 N 53 N 53 2 N 53 3 N 53 4 N 5=

Бензол, 1,2,3,4-тетраметил-5-(1-метилэтил) [220] 176.156500638

Бис(2-этилгексил)фталат [220] 390.27700969 149.0235 QFT) 71.0857 167.0341

Ганкаонин C [31] 354,1103383

Ганкаонин O [31] 354,1103383

Ганкаонин P [31] 370,1052529

Генистеин [31] 271,0591 153,0171 215,0686 197,0584 269,0671 133.0557 159,0722 180,0948

Генистин [31] 432,1056468 431,0985 269,0451 268,0376

Геранилгексанолат [31] 252,2089301

Герниарин [31]

Гидро-п-кумаровая кислота [220] 166.062994177 167,23 (TQD-ESI-QqQ) 166 149 165,3 QQ) 121,2 93,1

Гиспаглабридин A [193] 392.19875937 393 QIT) 337 189 191 391 QIT) 203 177 201

Гиспаглабридин B [193] 390,1831093 391 (ЕГО-ХЦ) 189 147 389 201 175 187

Глабраизофлаванон B [193] 478,27

Глабраизофлаванон A [193,221] 392,2

Глабрен [193] 322.12050905 321 QIT) 306 303 277

Глабридин [193] 324.13615911 325 QIT) 189 123 203 323 QIT) 135 201 213

Глаброизофлаванон A [31] 338,1154237

Соединение Моноизотопная масса [М]+ [М+Н]+ [М-Н]-

т^ 1 тЪ 2 т^ 3 тЪ 4 т^ 1 тЪ 2 т^ 3 тЪ 4

Глаброизофлаванон B [31] 352,1310737

Глаброкумарин [31] 336,0997736

Глаброкумарон B [31] 308,104859

Глаброкумарон А (канзонол Ц) [31] 308,104859

Глаброл [31] 391,19006 187,1106 203,0685

Глабролид [31] 468,3239599

Глаброн [193] 336.09977361 335 ^С^Г- огг) 291 320 213

Глепидотин А [31] 338,1154237

Глепидотин В [31] 340,1310737

Глизаглабрин [31] 298,047738

Глизарин [31] 294,0892089

Глиинфланин В [31] 338,1154237

Глицикумарин [192] 368.12598835 369.13419 313.06604 314.07693 165,0194 367,12015 297,038

Глицирдион а [31] 408,193674

Глицирретол [31] 456,3603454

Глицирризин [193,220,222,223] 822.40378589 823.41157 453,3358 647,3802 471,3469 821.39597 351,0596 113,0256 193,0373

Глицирризинат аммония [31] 839,430335

Глицитеин [31] 283,0614 268,0382 240,0429

Гралбранин [31] 324.13615911 325.1464 165.0164 269.081 323.1286

Даидзейн [31] 255,06592 152,06319 91,05684 137,0247 253,052 132,022 223,041 195,046

Дайдзин [31] 417,1186 255,0658 415,1029 252,042 132,0211 253,0497

Соединение Моноизотопная масса [М]+ [М+Н]+ [M-H]-

m/z 1 m/z 2 m/z 3 m/z 4 m/z 1 m/z 2 m/z 3 m/z 4

Дегидроглиасперин [31]

Дигидростильбены [31] 182,1095504

Изобавачин [31] 325,13376 269,07843 183,9829 323,1297 119,0502 203,0719 323,1297

Изовиолантин [193] 578.16355563

Изоглаборлид [31] 468,3239599

Изоглицирол [31] 366,1103383

Изоликвиритигенин [193] 257.08083 53 137.02274 119,0475 255.0668 119.0509 135.0088

Изоликвиритин [31,193] 418.12638228 419 (LTQ-XL-ESI-QIT) 257 417 (LTQ-XL-ESI-QIT) 255

Изоликвиритина апиозид [31]

Изопренилхалкон [193] 274.135765193

Изофенхон (1,5,5-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-он) [31] 152,1201151

Изофлаван [31] 210,1044651

Карбеноксолон [193] 570.35565393 571.3629 (IT) 453.3 569,3484 (IT) 469,3

Кумаран (2,3-дигидробензофуран) [220] 120,0575149

Куматакенин [31] 314,0790382

Куместрол [31] 269,04498 197,05901 213,0545 241,0503 267,0414 266,0373 182,0478

Ликвиритигенин [193] 256.07355886 255.0689 511.1447 119.0512 135.0098

Ликвиритигенин [31] 255,0689 511,1447

Ликвиритин [31] 419.13365 9 257.08197 137,0221 417.11932 255.06557 135.00757 119.04894

Ликвиритовая кислота [31] 470,3396099

Соединение Моноизотопная масса [М]+ [М+Н]+ [М-Н]-

m/z 1 тЪ 2 т^ 3 тЪ 4 m/z 1 тЪ 2 m/z 3 тЪ 4

Ликоагродин [31] 728,298533

Ликоагрохалкон A [31] 325,14166 271,09076 149,0222 269,08 323,12543 187,1153 135,0113

Ликоагрохалкон B [31] 336,1361591

Ликоагрохалкон C [31] 354,1467238 355,1538 269,08063 355,1524 299,0915 353,1387 108.02077 159,0425 243,1035

Ликоагрохалкон D [31] 354,1467238

Ликобензофуран [31] 354,1467238

Ликоизофлаванон [31] 354,1103383

Ликоизофлавон A [31] 355,11713 299,05667 153,0164 353,10126

Ликоизофлавон B [31] 352,0946882

Ликокумарон [31] 341,13986 149,02361 285,0781 339.12097 135,0434 203,0714

Ликопиранокумарин [31] 384,120903

Ликоризофлаван А [31] 438,2406242 437,23269 203,1069 177.09113 7 215,1071

Ликорикон [31] 382,1416384

Ликорицидин [31] 424,2249741 423,21768 19 203,1071 233,1179 207,1021

Ликофлаванол [31] 354,1103383

Ликофлаванон [31] 341,13718 153,0174 267,0656 285,0801 339,12256

Ликофлавон B [31] 390,1831093

Ликофлавон А [31] 322,1205091

Ликофлавонол [31]

Ликофуранокумарин [31]

Ликохалкон C [31] 337,1442 245,081 279,0678

Соединение Моноизотопная масса [М]+ [М+Н]+ [М-Н]-

т^ 1 m/z 2 т^ 3 тЪ 4 т^ 1 тЪ 2 m/z 3 тЪ 4

Ликохалкон в [193] 286.08412354 287 (ЕГО-ХЬ-ESI-QIT) 193 147 121

Ликохалкон А [31] 338,1518092 339,1588 121.02844 297,1466 271,0998 337,1443 268.07339 229,0877

Ликуразид [31] 550,168641

Ликуразид-2-(5-р-кумарил апиозил) [31]

Медикарпин [220] 271,0972 121,02644 229,0884 269.0813 120,0209 175,038

Мезитол [220] 136.088815002

Метилбензофенон [220] 196.088815002

Неоглицирол [31] 366,1103383

Неоизоликвиритин [31] 418,1263823

Неоликвиритина апиозид [31]

Неоликурозид [193] 550.16864101 551 419 257

Оксазолидин [220] 73.052763847

Оксид кариофиллена [31] 220,1827154

Ононин [31] 431.13418 269.0813 429.11858 267.1026 252.0778

п-этилфенол [220] 122.073164938

Резорцин [220] 110.036779430 111.0441 (ГГ) 93 68,9 83

Сапонин солодки А3 [193] 984.45660930

Сапонин солодки С2 [193] 806.40887127

Сапонин солодки Е2 [31] 820,3881358

Сапонин солодки G2 [193] 838.39870051 839.40717 469,33063 487,3417

Соединение Моноизотопная масса [М]+ [М+Н]+ [M-H]-

m/z 1 m/z 2 m/z 3 m/z 4 m/z 1 m/z 2 m/z 3 m/z 4

Сапонин солодки J2 [193] 824,429

Сигмоидин B [31] 357,13382 179,03398 153,0185 283,0618 355,11584 151,0026 245,083 135,0469

Солодковая кислота [31] 886,332928

Тимол [193] 150.104465066 151,1118 (LC-ESI-QFT) 107.08593 93,07042

Триметил-2-пропенилпиразин [220] 162.115698455

Умбеллиферон [31]

Уралсапонин B [31] 822,4037859

Формононетин [193] 269.08083 5 197,05855 141,0717 169,0665 267.06628 252,0407 223,0379 195,0433

Фуран-2-карбоксальдегид (фурфурол) [220] 96.021129366

Циклогуанил [220] 251.0937732 252,101 (IT) 195 193 170

Цитронеллилацетат [31] 198,185291 (ESI-QFT) 61,010899 186,9278 157,9522 197,15469 199,1696 61,98697 156,8938

Шинптерокарпин [31] 322,1205091

LC - жидкостная хроматография

ESI - электрораспылительная ионизация

QTOF - гибридная квадрупольная/времяпролетная масс-спектрометрия QFT - квадрупольный Фурье-спектрометр IT - ионная ловушка

QQ квадрупольный масс-селективный детектор

QIT - квадрупольная ионная ловушка

QqQ - трехквадрупольный масс-селективный детектор

LTQ-XL-ESI-QIT линейный масс-спектрометр с электрораспылительной ионизацией

ПРИЛОЖЕНИЕ Г (ОБЯЗАТЕЛЬНОЕ) СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ДОСТОВЕРНОСТИ РАЗЛИЧИЙ МЕЖДУ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И 1С50 ЭКСТРАКТОВ ДЛЯ НОРМАЛЬНЫХ И ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК (ТЕСТ МАННА-УИТНИ)

Таблица Г. 1 - Статистический анализ достоверности различий между цитотоксической активностью и 1С50 экстрактов для нормальных и опухолевых клеток (тест Манна-Уитни)

Экстрагент Концентра Критерий Число Стандарти- Вероятность Р

ция Манна- степеней зированное

экстракта, Уитни и свободы, Г значение

мкг/мл критерия Ъ

Гексан 0 57 15 2,626 0,007

50 0 -3,361 1,55- 10-4

100 0 -3,361 1,55- 10-4

150 1 -3,256 3,108- 10-4

200 8 -2,528 0,010