Фармакогностическое изучение травы стальника полевого (Ononis arvensis L.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Тулайкин, Александр Игоревич

• Тулайкин, Александр Игоревич
• кандидат фармацевтических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Тулайкин, Александр Игоревич

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Систематическое положение и распространение представителей рода Ononis L.

1.2. Морфолого-анатомические особенности представителей рода Ononis L.

1.3. Основные соединения, характерные для представителей рода Ononis L.

1.3.1. Соединения полифенольной природы.

1.3.2. Соединения терпеноидной и стероидной природы

1.3.3. Углеводы и циклитолы.

1.3.4. Другие группы соединений.

1.4. Биологическая активность и применение представителей рода Ononis L.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Объекты исследований.

2.2. Методы исследований.

2.2.1. Методы фитохимического анализа.

2.2.2. Методы ресурсоведческой оценки запасов сырья.

2.2.3. Методы фармакологического анализа.

2.2.4. Методы товароведческого анализа.

Глава 3. ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ.

3.1. Общий фитохимический анализ на основные группы биологически активных веществ.

3.2. Определение экстрактивных веществ и их динамика.

3.2.1 Содержание экстрактивных веществ в зависимости от фазы вегетации.

3.2.2. Содержание экстрактивных веществ в зависимости от размера сырьевой части растения.

3.3. Изучение флавоноидного состава.

3.3.1. Количественное содержание флавоноидов.

3.3.2. Флавоноидный состав.

3.4. Выделение и подтверждение структуры некоторых изо-флавоноидов. Изучение динамики накопления формононетина.

3.4.1. Выделение суммарного полифенольного комплекса и его разделение.

3.4.1.1. Выделение и очистка суммарного полифенольного комплекса.

3.4.1.2. Разделение суммарного полифенольного комплекса

3.4.2 Хроматомасс-спектроскопические исследования осадков.

3.4.2.1. Изучение компонентного состава «Осадка 1».

3.4.2.2. Изучение компонентного состава «Осадка 2».

3.4.2.3. Изучение компонентного состава «Осадка 3».

3.4.3. Выделение и идентификация формононетина.

3.4.3.1. Выделение индивидуального изофлавоноида.

3.4.3.2. Хроматомасс-спектроскопические исследования «Осадка 4».

3.4.3.3. Установление структуры изофлавоноида.

3.4.4. Изучение динамики накопления формононетина.

3.5. Определение наличия фенолкарбоновых кислот.

3.6. Изучение сапонинов.

3.7. Изучение углеводного состава стальника полевого.

3.7.1. Изучение динамики накопления и состава свободных моносахаров.

3.7.1.1. Изучение количественного содержания свободных моносахаров.

3.7.1.2. Изучение качественного состава свободных моносахаров

3.7.2. Изучение динамики накопления и состава водорастворимых полисахаридов.

3.7.2.1. Изучение количественного содержания водорастворимых полисахаридов.

3.7.2.2. Выделение и очистка водорастворимых полисахаридов

3.7.2.3. Изучение мономерного состава водорастворимых полисахаридов.

3.7.3. Структурный анализ водорастворимых полисахаридов

3.7.3.1. Сравнение структуры водорастворимых полисахаридов из надземной части и корней.

3.7.3.2. Гель-хроматография водорастворимых полисахаридов из надземной части растения.

3.7.4.Выделение и анализ пектиновых веществ.

3.7.4.1. Выделение и изучение мономерного состава пектиновых веществ.

3.7.4.2. Изучение структуры пектиновых веществ.

3.7.5. Выделение и изучение мономерного состава гемицел-люлоз.

3.8. Определение содержания (3-ситостерола в надземной части некоторых представителей рода Ononis. Изучение динамики его накопления и распределения.

3.8.1. Определение наличия р-ситостерола в сырье.

3.8.2. Количественное содержание Р-ситостерола в сырье и его распределение по органам растения.

Глава 4. ОСОБЕННОСТИ ГЕОГРАФИЧЕСКОГО РАСПРОСТРАНЕНИЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЫРЬЕВЫХ ЗАПАСОВ.

4.1. Географическое распространение и экологическая приуроченность.

4.1.1. Ареалы Ononis arvensis и Ononis leiosperma на территории стран СНГ.

4.1.2. Особенности экологической приуроченности.

4.2. Определение запасов сырья (надземной части) О. arvensis

4.2.1. Определение урожайности и выхода воздушно-сухого сырья.

4.2.2. Расчет величины запасов и объема ежегодной заготовки

Глава 5. ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ АСПЕКТОВ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ.

5.1. Определение острой токсичности извлечений из травы

О. arvensis.

5.2. Изучение антигипоксической активности.

5.2.1. Модель острой гипобарической гипоксии.

5.2.2. Модель острой гистотоксической гипоксии.

5.2.3. Модель острой гемической гипоксии.

5.3. Изучение анальгезирующей активности.

5.3.1. Модель «уксуснокислые корчи».

5.3.2. Модель «tail-flick».

5.3.3. Модель «электростимуляция корня хвоста».

5.4. Изучение мочегонного и литолитического действия.

5.4.1. Диуретическая активность.

5.4.2. Литолитическое действие.

Глава 6. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ТРАВЫ СТАЛЬНИКА ПОЛЕВОГО.

6.1. Морфологические диагностические признаки сырья.

6.2. Микроскопическое исследование травы О. arvensis.

6.2.1. Лист.

6.2.2. Цветок.

6.2.3. Стебель.

6.3. Определение товароведческих показателей.

6.4. Качественные фитохимические реакции на сырье - траву стальника полевого.

6.5. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в траве стальника полевого.

6.5.1. Выбор индивидуального флавоноида (РСО) и аналитической длины волны.

6.5.2. Построение калибровочного графика.

6.5.3. Подбор оптимальных условий экстракции.

6.5.3.1. Подбор оптимального экстрагента.

6.5.3.2. Подбор оптимального времени экстракции.

6.5.3.3. Подбор оптимального соотношения сырья и экстрагента

6.5.3.4. Подбор оптимальной степени измельчения сырья

6.5.4. Методика количественного определения суммы флавоноидов и ее метрологические характеристики.

6.5.4.1. Методика количественного определения суммы флавоноидов.

6.5.4.2. Определение метрологических характеристик методики

6.5.4.3. Определение предельного значения содержания суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в сырье.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение травы стальника полевого (Ononis arvensis L.)»

Актуальность темы. Поиск новых эффективных препаратов растительного происхождения является одним из перспективных и востребованных направлений в отечественной фармацевтической деятельности. Эта проблема в настоящее время стала весьма актуальной в связи с постоянным ростом темпов развития фармацевтической науки и с потребностью в расширении сырьевой базы на основе природных (в том числе - растительных) источников.

Многие растения сем. Бобовые - Fabaceae (или Leguminosae) обладают широким спектром биологической активности и используются как в офи-цинальной, так и в народной медицине. К числу таких представителей принадлежат виды рода стальник - Ononis L., из которых стальник полевой -Ononis arvensis L. (корни) входит в Государственную Фармакопею, а стальник колючий - Ononis spinosa L. (корни) - в европейские фармакопеи (European Pharmacopoeia, 2003; Martindale. The Extra Pharmacopeia, 1993; Pharmaco-poea Hungarica, 1970).

Виды рода Ononis с древних времен применяются в народной медицине в качестве потогонного, мочегонного, кровоостанавливающего, обезболивающего средства. В настоящее время в России корни стальника полевого являются официнальным сырьем, применяемым для приготовления отвара и настойки (Государственная Фармакопея, 1989; ФС 42-1932-95), которые используются при лечении геморроя. Однако, при заготовке этого сырья растение полностью уничтожается, а вся надземная часть отбрасывается. С точки зрения биологической активности и рационального природопользования использование надземной части растения является перспективным.

В некоторых видах этого рода были обнаружены различные группы биологически активных веществ: полифенольные соединения (оксикумари-ны, фенолкарбоновые кислоты, флавоноиды); стероидные и терпеноидные соединения (фитостерины, сапонины, монотерпеноиды, тритерпеноиды); циклитолы.

Один из видов - О. arvensis достаточно широко распространен на территории европейской части России, что делает его перспективным и в ре-сурсоведческом отношении. Нас интересовала прежде всего возможность ввести в арсенал лекарственных растений новый объект - траву стальника полевого. Для этого следовало решить целый ряд задач, чему посвящена настоящая диссертация.

Работа была выполнена на кафедре фармакогнозии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии в соответствии с научным направлением «Изыскание и изучение биологически активных веществ синтетического, микробного и растительного происхождения для создания на их основе импортозамещающих оригинальных отечественных лекарственных субстанций» и тематическим планом научно-исследовательских работ СПХФА по теме «Исследование лекарственных растений, перспективных для создания лекарственных средств и БАД». Фармакологические исследования проводились на кафедре фармакологии СПХФА. Исследования с использованием приборных хроматографических и спектроскопических методов выполнены в лаборатории аналитических методов НИУ академии.

Цели и задачи исследования.

Целью работы является фармакогностическое изучение надземной части

0. arvensis как перспективного источника лекарственного растительного сырья.

В задачи исследования входило:

1. Общий фитохимический анализ надземной части О. arvensis L., а также — внутривидовых таксонов (О. arvensis var. inermis Ledeb. и О. arvensis var. spinescens Ledeb.).

2. Изучение полифенольного комплекса из надземной части растения, а именно — флавоноидов и фенолкарбоновых кислот.

3. Количественное и качественное изучение углеводов (моносахаров, водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ и гемицеллюлоз) из надземной части О. arvensis.

4. Анализ содержания (3-ситостерола в надземной части О. arvensis.

5. Анализ географического распространения О. arvensis на территории стран СНГ; определение урожайности и учет запасов сырья надземной части О. arvensis.

6. Изучение некоторых аспектов биологической активности извлечений из надземной части О. arvensis.

7. Разработка проекта нормативной документации (проекта ФС) на сырье «Стальника полевого трава»: определение критериев установления подлинности и нормативов доброкачественности.

Научная новизна. Изучен фотохимический состав надземной части О. arvensis (в том числе - его разновидностей: var. inermis и var. spinescens). Впервые были выделены и изучены полисахариды, содержащиеся в надземной части О. arvensis. Изучен их мономерный и компонентный состав, динамика накопления и распределение в различных органах растения. Изучен полифенольный комплекс травы стальника полевого. Определен состав фенолкарбоновых кислот. Впервые исследована динамика накопления индивидуального изофлаво-ноида формононетина в надземной части О. arvensis. Изучена динамика накопления |3-ситостерола и его распределение в различных органах растения.

Практическая значимость. Установлена анальгезирующая, диуретическая и литолитичаская активности извлечений из надземной части О. arvensis. В связи с этим проведены работы по изучению травы стальника полевого с целью возможного введения этого вида сырья в практику научной медицины. Определены условия заготовки сырья: сроки заготовки, оптимальная фаза вегетации и предельный размер сырьевой части. Разработаны критерии, позволяющие установить подлинность сырья - травы стальника полевого, определены показатели его доброкачественности. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов как одной из возможных групп маркерных соединений, позволяющих оценивать доброкачественность сырья.

Уточнен ареал О. arvensis в пределах стран СНГ. Составленная карта ареала может быть основой для возможного планирования заготовок лекарственного растительного сырья. Проведено определение урожайности травы стальника полевого на территории Северо-Западного региона России. Данные о фитохимическом составе и результаты фармакологических исследований могут быть использованы при целенаправленном создании новых фитопрепаратов из надземной части О. arvensis.

Внедрение результатов исследования. Результаты работы использованы при разработке проекта ФС на предлагаемый новый вид лекарственного сырья «Стальника полевого трава». Модифицированные методики (выделение, хроматографическое и спектроскопическое изучение углеводов; качественный и количественный анализ (3-ситостерола; количественный анализ формононетина) введены в практику научных исследований растительных объектов и учебного процесса на кафедре фармакогнозии СПХФА.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Результаты общего фитохимического изучения надземной части О. arvensis, а также — внутривидовых таксонов (О. arvensis var. inermis и О. arvensis var. spinescens).

2. Результаты изучения полифенольного комплекса из надземной части растения: анализ фенолкарбоновых кислот; выделение, установление структуры и изучения динамики накопления формононетина.

3. Результаты изучения полисахаридов из надземной части стальника полевого: выделение, качественный и' количественный анализ водорастворимых полисахаридов; выделение и изучение состава пектиновых веществ и гемицеллюлоз.

4. Динамика накопления и распределение (3-ситостерола в надземной части растения.

5. Результаты определения урожайности и учета запасов сырья - травы стальника полевого.

6. Результаты изучения некоторых аспектов биологической активности извлечений из надземной части стальника полевого.

7. Результаты товароведческого анализа сырья «Стальника полевого трава» и его стандартизация. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

• XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004);

• IX Международном съезде «Фитофарм 2005» (Санкт-Петербург, 2005);

• VIII Молодежной конференции ботаников (БИН им. B.JI. Комарова РАН. Санкт-Петербург, 2004 г.);

• научной конференции студентов и аспирантов «Молодые ученые - 85-летию академии» (СПХФА. Санкт-Петербург, 2004 г.).

Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 10 научных статьях и тезисах.

Личный вклад автора. Диссертация представляет собой самостоятельный научный труд и включает исследования автора за период с 2002 по 2005 годы.

Во всех работах, выполненных в соавторстве, вклад автора выражается личным участием в сборе, определении и паспортизации сырья, постановке и выполнении экспериментальных исследований по выделению и идентификации природных соединений, проведению ресурсоведческих, товароведческих, фармакологических исследований и обобщении полученных результатов.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Тулайкин, Александр Игоревич

выводы

1. В надземной части О. arvensis, а также - внутривидовых таксонов {О. arvensis var. inermis и О. arvensis var. spinescens) установлено наличие углеводов, тритерпеновых сапонинов, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов и кумаринов. В отдельных образцах в незначительном количестве присутствуют дубильные вещества и вещества, содержащие основой азот. Все образцы сырья О. arvensis, собранные в различных географических точках, практически идентичны по наличию либо отсутствию основных групп биологически активных веществ.

2. Изучен полифенольный комплекс из надземной части О. arvensis: флаво-ноиды и фенолкарбоновые кислоты.

• Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин (определенное спектрофотометрическим методом) варьирует от 1,5% (в фазу плодоношения) до 2,2% (в фазу цветения).

• В надземной части обнаружены и идентифицированы 2 изофлавонои-да-агликона: формононетин и дайдзеин. Выделен в индивидуальном виде формононетин, его структура подтверждена спектроскопическими (УФ-, ИК-, ЯМР-, и хроматомасс-спектроскопия) методами.

• Содержание формононетина (определенное денситометрическим методом) имеет максимальные значения в фазу бутонизации растения - 0,4%.

• В составе комплекса фенолкарбоновых кислот надземной части О. arvensis идентифицированы вератровая, галловая, гентезиновая, кофейная, п-гидроксибензойная, п-кумаровая, п-кумароилхинная, сиреневая и хлорогеновая кислоты.

3. В надземной части О. arvensis обнаружены следующие группы углеводов: моносахара, водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества и геми-целлюлозы.

• Максимальное накопление свободных моносахаров в надземной части растения отмечено в фазу цветения: для О. arvensis var. inermis — 4,2%; для О. arvensis var. spinescens — 5,8%.

• В состав свободных моносахаров в основном входят глюкоза и галактоза.

• Максимальное накопление водорастворимых полисахаридов в надземной части растения отмечено в фазу цветения: для О. arvensis var. inermis — 2,7%; для О. arvensis var. spinescens — 3,1%.

• Водорастворимые полисахариды из надземной части О. arvensis (обе разновидности) в качестве мономеров содержат арабинозу, галактозу, глюкозу, рамнозу, ксилозу и уроновые компоненты, представленные га-лактуроновой и глюкуроновой кислотами.

• Водорастворимые полисахариды являются полидисперсными. При их фракционном разделении было выделено три фракции, содержащие макромолекулы, различные по молекулярной массе и относящиеся к нейтральным арабиноглюкогалактанам.

• Выделенные из надземной части растения пектиновые вещества содержат арабинозу, галактозу, глюкозу, рамнозу, ксилозу и уроновые кислоты. Количество уроновых кислот составляет приблизительно 70%.

• Мономерный состав гемицеллюлоз в пределах различных их фракций в количественном соотношении несколько различен, однако основными общими мономерами являются галактоза, глюкоза и ксилоза.

4. Содержание Р-ситостерола в надземной части О. arvensis варьирует от 0,1% (в фазу бутонизации) до 0,2% (в фазу плодоношения). В сырье О. arvensis var. spinescens наблюдается более высокое содержание Р-ситостерола, чем в сырье О. arvensis var. inermis.

5. Составлена карта ареала О. arvensis. Вид имеет дизъюнктивный западно-евразиатский ареал. Он широко распространен в большинстве районов Европейской части СНГ, в Средней Азии и Казахстане, а также - в юго-западной части Западной Сибири. Установлено, что в пределах СевероЗападного региона России находятся значительные заросли стальника полевого, которые могут быть использованы в качестве промысловых. При введении надземной части О. arvensis в практику научной медицины, потребности в сырье могут быть полностью обеспечены за счет дикорастущих растений.

6. Определена степень токсичности, установлена антигипоксическая, диуретическая и литолитическая активность водного и деалкоголизированного

70%-го спиртового извлечений из травы О. arvensis.

• Трава О. arvensis относится к малотоксичным видам сырья.

• Водное и 70%-е спиртовое извлечения в диапазоне доз от 1,5 до 150 1 мг/кг обладают умеренной антигипоксической активностью.

• Водное извлечение (в диапазоне доз от 1,5 до 150 мг/кг) и 70%-е спиртовое извлечение (только в дозе 150 мг/кг) показывают умеренный диуретический эффект.

• Отмечена литолитическая активность исследуемых извлечений в отношении фосфатно-кальциевых конкрементов.

7. Разработаны критерии подлинности и нормативы доброкачественности, включенные в проект фармакопейной статьи на сырье «Стальника полевого трава».

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Тулайкин, Александр Игоревич, 2006 год

1. Александрова А.Е. Антигипоксическая и антиоксидантная активность некоторых синтетических и природных препаратов. Универсальность их протекторного действия // VIII Международный съезд Фитофарм 2004. Материалы съезда. СПб.: ВВМ, 2004. С. 34-44.

2. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений / Под ред. П.С. Чикова. М., 1980. 340 с.

3. Бандюкова В.А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографии на бумаге // Растительные ресурсы, 1965. Т. I, вып. 1. С. 591-596.

4. Бандюкова В.А. Распространение флавоноидов в некоторых семействах высших растений. Сообщение 1. Сем. Leguminosae II Растительные ресурсы, 1968. Т. 4. №1. С. 97-112.

5. Бандюкова В.А., Аванесов Э.Т. О вероятности обнаружения флавонов, флаванонов и изофлавоноидов в некоторых семействах высших растений. Сообщение 2. //Растительные ресурсы, 1973. Т. 9. №4. С. 508-515.

6. Барыкина Р.П., Веселова Т.Д., Девятов А.Г., Джалилова Х.Х. и др. Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы / М.: Изд-во МГУ, 2004.312 с.

7. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Л., 1963. 152 с.

8. Березина B.C., Повыдыш М.Н., Теслов Л.С., Буданцев А.Л. Содержание и состав суммарных водорастворимых полисахаридных комплексов в надземной части Lamium album L. и Galeobdolon luteum Huds. // Раст. ресурсы. 2003. Т. 39, вып. 1. С. 69-76.

9. Бирштейн В. Я., Тульчинский В. М. Исследование и идентификация полисахаридов, выделенных из археологических образцов // Химия природ, соединений. 1976. №1. С. 15-19.

10. Ю.Благовещенский В.В., Пчелкин Ю.А., Раков Н.С., Старикова В.В., Шустов B.C. Определитель растений Среднего Поволжья. Л.: Наука, 1984. 392 с.11 .Буданцев А.Л., Лесиовская Е.Е. Дикорастущие полезные растения России /СПб., 2001. С. 283-284.

11. Васильченко И.Т. Стальник Ononis L. / Флора Европейской части СССР. ' Т. 6. Л.: Наука, 1987. С. 176-178.

12. Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений / Новосибирск: Наука, 1990. 333 с.

13. Гладких А.С., Губанов И.А., Мещеряков А.А. Содержание сапонинов'в растениях флоры Туркмении // Изв. АН ТССР. Сер. биол. наук, 1965. №1. С. 22-35.

14. Головкин Б.Н., Руденская Р.Н., Трофимова И.А., Шретер А.И. Биологически активные вещества растительного происхождения. Т. 1 и Т. 2 / М.: Наука, 2001.

15. Гончарова Т.А. Энциклопедия лекарственных растений. Лечение травами. М., Издательский дом МСП, 1998.

16. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е издание, дополненное. М., 1987. 336 с.

17. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11-е издание, дополненное. М., 1989. 400 с.

18. Гринкевич Н.И., Сафронич Л.Н. Химический анализ лекарственных растений. М.: Высш. шк., 1983. 218 с.

19. Гроссгейм А.А. Ononis L. Стальник / Флора Кавказа. Т. 5. 2-е изд. Изд-во А.Н. СССР. 1952. С. 166-167.

20. Губанов И.А., Кабанов С.М. Новые алкалоиды из Флоры Тянь-Шаня // Аптечное дело, 1959. №5. С. 40-42.

21. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений. В 2 т. М.: Мир, 1986. Т.1.-318 с. Т.2. 320 с.

22. Давитавян Н.А., Сампиев A.M. Целесообразность и возможность использования в медицине травы стальника полевого // VIII Международный съезд Фитофарм 2004. Материалы съезда. СПб.: ВВМ, 2004. С. 424-426.

23. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джон К. Справочник биохимика: Пер. с англ. /М.: Мир, 1991. 544 с.

24. Дудкин М. С., Денисюк Н. А. Углеводы Symphytum asperum И Химия природ. соединений. 1984. №1. С. 15-20.

25. Ермакова А.Е., Арасимович В.В., Ярош Н.П. и др. Методы биохимического исследования. 3-е изд. Л., 1987. 430 с.

26. Жбанов Р. Г. Инфракрасные спектры и структура углеводов. Минск, 1965.

27. Зайцева Н. Е., Кожина И. С. Полисахариды из сердцевины стеблей Alceaflavovirens //Химия природ, соединений. 1980. №1. С. 29-33.

28. Захарова И .Я., Косенко JI.B. Методы изучения микробных полисахаридов. Киев. Наукова думка, 1982.

29. Игнатов Ю.Д., Михайлович В.А. Болевой синдром / JL: Медицина, 1990. 95 с.

30. Исмаилов 3. Ф., Рахимов Д. А., Ногойбаева 3. Р., Шелухина Н. П. Строение пектина сахарной свеклы // Химия природ, соединений. 1980. №1. С. 35-38.

31. Картмазова JI.C., Ткаченко Н.М., Козлова Е.П., Ковальов В.М. По-рвшяльне морфолого-анатом!чне вивчення вегетативних оргашв вовчуга польового. Повщомлення I // Фармацевтичний журнал, 1984. №6. С. 50-53.

32. Картмазова JI.C., Ткаченко Н.М., Козлова Е.П., Ковальов В.М. По-рвшяльне морфолого-анатом1чне дослщження генеративних оргашв вов-чупв польового та колючого. Повщомлення II // Фармацевтичний журнал, 1985. №3. С. 59-62.

33. Клебанов JI.K., Черноташ К.А. Влияние нестероидных противовоспалительных средств на некоторые компоненты кининовой системы у животных с экспериментальным воспалением // Фармакология и токсикология. 1977. Т. 40, №4. С. 428-430.

34. Клышев JI.K., Бандкжова В.А., Алюкина JI.C. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования). Алма-Ата, 1978. 220 с.

35. Ковалев В.Н. Некоторые результаты изучения растений семейства бобовые // Научно-практическая конференция «Перспективы создания и производства лекарственных средств в Украине»: Тезисы докладов. Харьков, 1993. С. 36-37.

36. Ковалев В.Н. Фармакогностическое изучение некоторых видов стальника. Автореф. дисс. . к.фарм.н. Харьков, 1979. 25 с.

37. Ковалев В.Н. Флавоноиды Ononis leyosperma II Химия природных соединений, 1982. №2. С. 253-254.

38. Ковалев В.Н., Борисов М.И., Спиридонов В.Н. Фенольные соединения Ononis arvensis L. I // Химия природных соединений, 1974. №6. С. 795-796.

39. Ковалев В.Н., Борисов М.И., Спиридонов В.Н., Ковалев И.П., Гордиенко В.Г. Фенольные соединения Ononis arvensis III // Химия природных соединений, 1976. №1. С. 104-105.

40. Ковалев В.Н., Попова Н.В., Кисличенко B.C. и др. Практикум по фармакогнозии: Учебное пособие для студентов ВУЗов. Харьков: НФаУ «Зо-лоые страницы», 2003. 512 с.

41. Ковалев В.Н., Спиридонов В.Н., Борисов М.И., Ковалев И.П., Гордиенко В.Г., Колесников Д.Д. Фенольные соединения Ononis arvensis. Строение оногенина//Химия природных соединений, 1975. №3. С. 354-357.

42. Ковальов В.М. Кшыасне визначення оношну в коренях вовчуга польового // Фармацевтичний журнал, 1983. №5. С. 47-49.

43. Ковальов В.М. ФлавоноУди трави вовчуга польового // Фармацевтичний журнал, 1975. №2. С. 93.

44. Коломиец Н.И. Биологичекие основы введения в культуру Ononis arvensis L. // Растительные ресурсы, 1969. Т. V. №1. С. 100-104.

45. Коломиец Н.И. Влияние удобрений на урожайность и качество корней стальника полевого //Химико-фармацевтический журнал, 1978. №8. С. 80-85.

46. Краснов Е.А. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. Омск: Изд-во Томского ун-та, 1987.

47. Кретович B.JI. Биохимия растений. М.: Высш. шк., 1986. 503 с.

48. Крылова Н.И., Дедюхина Э.Г., Ерошин В.К. Закономерности в соотношении азотсодержащих компонентов в биомассе дрожжей // Прикладная биохимия и микробиология. 1983. Т. 19, вып. 4. С. 486-489.

49. Кузманов Б., Едрева А. Хемотаксономично изследоване на български бо-бови растения // Фитология, 1976. №5. С. 34-50.

50. Куликов В. Лекарственные растения Алтайского края. Барнаул, 1975. 208 с.

51. Курбатский В.И. Ononis L. Стальник / Флора Сибири. Т. 9. Новосибирск: Наука, 1994. С. 193.

52. Майоровъ А.А. Таблица для определения видовъ p. Ononis L. флоры Кавказа и Крыми // Вестник Тифлисскаго Ботаническаго Сада, 1919. №12. С. 16-22.

53. Методика определения запасов лекарственных растений. М., 1986.

54. Морозова А.С. Нейрохимические механизмы антиноцицептивного эффекта, возникающего при стимуляции глубоких структур мозга // Нейрофизиологические аспекты эмоционального стресса и лекарственной зависимости. Л., 1978. С. 48-56.

55. Муравьева О.А. Стальник Ononis L. / Флора СССР. Т. 11. Л., 1945. С. 94-102.

56. Наканиси К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений. М., 1965.

57. Никитин В.В., Гельдиханов A.M. Определитель растений Туркмении. Л.: Наука, 1988.680 с.

58. Пастушенков Л.В. Повышение устойчивости организма к перегрузкам с помощью фармакологических средств // Воен.-мед. журн. 1967. №12. С. 55-56.

59. Пастушенков Л.В., Кобачный В.И., Линьков В.И. и др. Коррекция гипоксии кортиева органа при звуковой нагрузке и действии аминогликозидных антибиотиков // Тезисы докладов 6-ого Всесоюзного съезда фармакологов. Ташкент, 1988. С. 282.

60. Пастушенков JI.B., Лесиовская Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии. Ч. 2. СПб, 1995. С. 217.

61. Перепечко Н.П. Новое лекарственное растение стальник полевой Ononis arvensis L. //Ботанический журнал, 1964. Т. 49. №4. С. 592-594.

62. ПершинГ.Н. Методы экспериментальной химиотерапии. М., 1971. С. 100-105.

63. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2005.

64. Саар В.Г., Кузнецова С.В., Королева Е.М. Определение моносахаридов в физиологических жидкостях // Тез. докл. Всерос. конф. «Химический анализ веществ и материалов». М., 2000. С. 102.

65. Сарджвеладзе О.В. Материалы о химическом составе и мочегонном действии стальника пахучего Ononis hircine Jacq. Автореф. дисс. . к.ф.н. Тбилиси, 1954. 12 с.

66. Сепетлиев Д.В. Статистические методы в научных и медицинских исследованиях. М., 1968. 117 с.

67. ФС 42-1932-95 (взамен ФС 42-1932-82). Tinctura Ononidis (Настойка стальника). Министерство Здравоохранения РФ, 1995. 4 с.

68. Ходжаева М.А., Исмаилов З.Ф. Углеводы Allium. I. Выделение и характеристика полисахаридов // Химия природ. Соединений, 1979. №2. С. 137-142.

69. Цвелев Н.Н. Определитель сосудистых растений Северо-Западной России (Ленинградская, Псковская и Новгородская области). СПб.: Изд-во СПХФА, 2000. 781 с.

70. Шварц Г .Я., Сюбаев Р.Д. Соотношение антиэкссудативного, анальгетиче-ского и жаропонижающего компонентов в действии нестероидных противовоспалительных препаратов // Фармакология и токсикология. 1982. Т.45, №1. С. 46-49.

71. Шишкина Б.К. Ononis L. Стальник / Флора Средней Полосы Европейской части СССР. 9-е изд. Л.: «Колос», 1964. С. 147.

72. Яковлев Г.П. Бобовые земного шара. Л.: Наука, 1991. 144 с.

73. Abdel-Kader M.S. Phenolic constituents of Ononis vaginalis roots // Planta Med., 2001. Vol. 67. №4. P. 388-390.

74. Abdel-Kader M.S. Two new norphenylpropanoid glucosides and hemipholin from the flowers of Ononis vaginalis // J. Braz. Chem. Soc., 1997. Vol. 8. №6. P. 637-639.

75. A1 Khalil S., Masalmeh A., Abdalla Shtaywy, Tosa Hideki, iinuma Munekazu. N-Arachidylanthranilic acid, a new derivative from Ononis natrix II J. Nat. Prod., 1995. Vol. 58. №5. P. 760-763.

76. Allen O.N., Allen Ethel K. The Leguminosae. Tennesse, Kingsport, 1981. 812 p.

77. Amer M.E., Abdel-ader M.S., Mahmoud Z.F., Abdel Salam N.A., Yang Song S., Mabry T.J. Flavonoids of Ononis vaginalis Vahl. Syml. // Rev. Latinoam. Quin, 1989. Vol. 20. №3-4. P. 152-153.

78. Barrero A. F., Sanchez J.F., Barron A., Rodriguez I. Specionin and speciosides A and B: new aromatic lactones from Ononis speciosa II Jurnal of Natural Products, 1989. Vol. 52. №6. P. 1334-1337.

79. Barrero A.F., Cabrera E., Rodriguez I., Fernandez-Gallego E.M. Resorcinols derivatives and other components from Ononis viscose subsp. breviflora // Phytochemistry, 1994a. Vol. 36. №1. P. 189-194.

80. Barrero A.F., Cabrera E., Rodriguez I., Planelles F. Alkylresorcinols and isocou-marins from Ononispubescens II Phytochemistry, 1994b. Vol. 35. №2. P. 493-498.

81. Barrero A.F., Herrador M.M., Arteaga P., Rodriguez I. Phytochemistry of the genus Ononis (Papilonaceae). Pharmacological impotence // Ars. Pharm., 1993a. Vol. 34. №1. P. 47-63.

82. Barrero A.F., Herrador M.M., Arteaga P., Rodriguez I., Garcia-Moreno M. Re-sorcinol derivatives and flavonoids of Ononis natrix subspecies ramosissima II J. Nat. Prod., 1997. Vol. 60. №2. P. 65-68.11

83. Barrero A.F., Sanchez J.F., Rodriguez I. N-A -Docosenoylanthranilic acid and alkylresorcinols from Ononis natrix subsp. hispanica II Phytochemistry, 1990. Vol. 29. №6. P. 1967-1969.

84. Barrero A.F., Sanchez J.F., Rodriguez I., Maqueda M. Use of alkenyresorcinols from Ononis speciosa as synthetic precursors of compounds with potential biological activity //J. Nat. Prod., 1993b. Vol. 56. №10. P. 1737-1746.

85. Baztan J. Efectos de la irradiation con UV cerano sorbe la evolucion del con-tenido de apigenina у quercetol en Ononis spinosa L. // Anales de edafologia у agrobiologia, 1983a. Tomo XLII. №5-6. P. 825-830.

86. Baztan J. Influencia de la irradiation UV-A sorba la actividad IAA-oxidasa en plantas de Ononis spinosa L.: relacion con los contenidos endogenos de deter-minados flavonoids // Anales de edafologia у agrobiologia, 1983b. Tomo XLII. №9-10. P. 1655-1661.

87. Baztan J.M., Rebuelta M., Vivas J.M. Aislamiento e identificacion de derivados flavonicos del Ononis spinosa L. // Anales de la Real Academia de Farmacia, 1981. Vol. 47. №3. P. 303-310.

88. Berhardt M., Shaker K.H., Elgamal M., Elgamal M. Hani A., Seifert K. The new bishomoflavone ononin and its glucoside from Ononis vaginalis II Z. Naturforsch., 2000. Vol. 55c. №5. P. 516-519.

89. Bio Active Botanical Complexes // http://www.bioactive-us.com/pages/complex /bayberryplex.htm, 2005.

90. Bladt, S. Wagner, H. Woo. W.S. DC- und HPLC-Analyse von Eleutherococ-cus-bzw. Acanthopanax-Extrakten und diese enthaltenden Phytopreparaten // Deutsche Apotheker Zeitung, 1990. №130. P. 1499-1508.

91. Boissier E. Ononis / Flora Orientalis. Vol. Secundum. Genevae et Basileae, 1872. P. 56-64.

92. Canedo L.M., Miguel del Corral J.M., San Feliciano A. 5-Alkylresorcinols from Ononis natrix II Phytochemistry, 1997. Vol. 44. №8. P. 1559-1563.

93. Dedio I., Kozlowski J. Porovnawcze badania morfologiczne i fitochemiczne wilzyny ciernistej (Ononis spinosa L.) I wilzyny bezbronnej (Ononis arvensis L.) II. Badania olejku // Acta Poloniae Pharmaceutica, 1977b. Vol. 34. №1. P. 103-108.

94. Dittrich P., Brandl A., Revision of the pathway of D-pinitol formation in Le-guminosae II Phytochemistry, 1987. Vol. 26. №7. P. 1925-1926.

95. European Pharmacopoeia. 4 end. / France, 2003.

96. Frohlich R., Pauli G.F. Onocerin chloroform hemisolvate // Acta Cryst., 2000. Vol. 56c. P. 1476-1477.

97. Fujise Y., Toda Т., Ito S. Isolation of trifolirhizin from Ononis spinosa L. // Chem. Pharm. Bull., 1965. Vol. 13. №1. P. 93-105.

98. Garcia M.D., Marhuenda E. Isolation and antimicrobial activity of vanillic acid and parahydroxybenzoic acid, constituents of Ononis natrix 11 Fitoterapia, 1985. Vol. 56. №6. P. 349-350.

99. Ghodsi M., Raynaud J., Gorunovic M., Prum N. Distribution of anthocya-nins and flavonoids in flowers of various Ononis species // Bull. soc. pharm. France, 1970. T. 14. №4. P. 129-133.

100. Harborn J.B., Mabry T.J. The flavonoids: advances in research. London; New York, 1982. 744 p.

101. Haznagy A., Toth G., Tamas J. Uber die Inhaltstoffe des waBrigen extraktes von Ononis spinosa L. // Archiv der Pharmazie, 1978. Vol. 311. №4. P. 318-323.

102. Herzog P. Spezifische Phytoagglutinine aus Ononis spinosa Wurzeln // Zeitschrift fur Immunitatorschung und experimentelle Therapie, 1959. Vol. 117. № 1. P. 53-59.

103. Herzog P., Soucek J. Ein Beitrag Zur Isolierung und Identifizierung der Phytoagglutinine aus Ononis spinosa Wurzeln // Zeitschrift fur Immunitatorschung und experimentelle Therapie, 1960. Vol. 119. №5. P. 469-478.

104. Heyn C.C. Trifolieae / Advances in Legume Systematics. Part 1. Edited by R.M. Polhil & P.H. Raven. Royal Botanic Gardens, Kew, 1981. P. 383-385.

105. Hilp K., Kating H., Schaden G. Constituents from Ononis spinosa L. Part 1 //Arch. Pharm., 1975a. Vol. 308. P. 429-433.

106. Hilp K., Kating H., Schanden G. Constituents from Ononis spinosa L. 1. Volatile oil of the radix Ononidis //Arch. Pharm., 1975b. Vol. 308. № 6. P. 429-433.

107. Horejsi V., Chaloupecka O., Kokourek J. Studies on lectins. XLIII. Isolation and characterization of the lectin from restharrow roots (Ononis hircine Jacq.) // Biochimica et biophysica acta (G), 1978. Vol. 539. №3. P. 287-293.

108. Horejsi V., Kokourek J. XXXVI. Properties of some lectins prepared by affinity chromatography on O-glycosyl polyacrylamide gels // Biochimica et bio-physica acta (G), 1978. Vol. 538. №2. P. 299-315.

109. Hutchinson J. The genera of flowering plants. Dicotyledones. Oxford: Clarendon Press, 1964. Vol. 1. 516 p.

110. Ivimey-Cook R.B. Ononis L. / Flora Europaea. Vol. 2. Rosaceae to Umbel-liferae. Cambridge, 1968. P. 143-148.

111. Karting Т., Gruber A., Preuss M. Flavonoid-O-glycosides in Ononis spinosa L. (Fabaceae) II Pharm. ActaHelv., 1985. Vol. 60. №9-10. P. 253-255.

112. Kassem M.S., Mosharrafa S.A.M., Saleh N.A.M., El-Wahab S.M.A. A new kaempferol glucoside from two Ononis species I I Fitoterapia, 1996. Vol. 67. №5. P. 432-434.

113. Kindl H., Hoffmann-Ostenhof O. Untersuchungen iider die biothynthese der cyclite, XII. Die bildung von D-Ononit und anderen cycliten in Ononis spinosa //Zeitschrift fur Physiologische Chemie, 1966. Vol. 345. №4-6. P. 257-263.4/

114. Kyrmyzyguel S., Goeren N., Yang S., Cordell G., Bozok-Johansson C. Spi-nonin, a novel glycoside from Ononis spinosa subsp. leyosperma II J. Nat. Prod., 1997. Vol. 60. №4. P. 378-381.

115. Lexique des remedes homeopathiques de la nomenclature fran^aise. Docteur Robert Seror / http://www.homeoint.org/seror/lexique/lexhomop.htm, 2005.

116. Linnaeus Carl. Species Plantarum. Vol. II, 1753. 1200 p.

117. Marhuenda E., Garcia M.D. Demonstration of the antimicrobial properties of flovers of Ononis natrix L. Identification of ferulic acid // Plant. Med. Phy-tother., 1985a. Vol. 13. №3. P. 163-172.

118. Marhuenda E., Garcia M.D. Studies on the antibacterial activity of the fla-vonoid fraction of the flowering tops of Ononis natrix L. subsp. natrix 11 Bi-runiya, 1986a. Vol. 2. №2. P. 117-120.

119. Marhuenda E., Garcia M.D. Studies on the solubility of Ononis natrix L. antibacterial principles // Bol. Chim. Farm., 1986b. Vol. 125. №1. P. 21-23.

120. Marhuenda E., Garcia M.D. The diuretic activity of Ononis natrix L. // Far-maco Prat., 1985b. Vol. 40. №9. P. 302-306.

121. Marhuenda E., Garcia M.D., Martin M.J., Remesal M.J. The antihypertensive activity of Ononis natrix L. // Farmaco Ed. Prat., 1987. Vol. 42. №2. P. 45-49.

122. Marhuenda E., Martin M.J., Garcia M.D., Remesal M.J. Determination of" diuretic action of different preparation of Ononis speciosa Lag. and Ononis mi-tissima L. // Ann. Farm. Fr., 1986. Vol. 44. №6. P. 455-460.

123. Martindale. The Extra Pharmacopoeia. Thirteth Edition / Edited by E.F. Reynolds. London: The Pharmaceutical Press, 1993. P. 1396.

124. McComb E.A., Rendig V.V. Ononitol (4-O-methylmyo-inositol) as a constituent of Madicago sativa // Archives of Biochemistry and Biophysics, 1962. Vol. 99. P. 192-193.

125. Montero M.J., Moran A., Martin M.L., San Roman L. Pharmacological screening of Ononis pubescens L. // Int. J. Crude Drug Res., 1988. Vol. 26. P. 215219.

126. Morisset P. Chromosome numbers in Ononis L. II Watsonia, 1978. Vol. 12. №2. P. 145-153.

127. Pauli G.F. Comprehensive spectroscopic investigation of alpha-onocerin // Planta Med., 2000. Vol. 66. №3. P. 299-302.

128. Pharmacopoea Helvetica. Editio Quinta/Editions Francaise. Berne, 1934. P. 785.

129. Pharmacopoea Hungarica. Tomus III / Redigit B. Lang. Academiai Kiado. Budapest, 1970. P. 91.

130. Pietta P., Mauri P., Manera E., Ceva P. Determination of isoflavones from Ononis spinosa L. extracts by high-performance liquid chromatography with ultraviolet diode-array detection // Journal of Chromatography, 1990. Vol. 513. P. 397-400.

131. Plants in Kneipp's Herbal Teas INDEX / http://www.lenaturel.ca/en/bv-plantes, 2005.

132. Plouvier V. Nouvelles recherches de cyclitols daus quelques groupes bo-taniques: le L-inositol des composees, le D-pinitol des Legumineuses // Des Seances de l'Academie des Sciences, 1962. Vol. 255. №15. P. 1770-1772.

133. Plouvier V. Sur deux cyclitols nouveaux, le l-bornesitol isole de Lathyrus vernus Bernh., le d-ononitol isole d"Ononis Natrix L. (Legumineuses) // Comptes Rendus hebdomadaires des Seances de l-Academie des Sciencesm, 1955. Vol. 241. №15. P. 983-985.

134. Rezacova A., Spilkova J., Hubik J. Farmacognosticka studie druhu Ononis arvensis L. // Ceskoslovenska farmacie, 1978. Vol. 27. №10. P. 452-455.

135. Rice-Evans C.A., Miller N.J. Structure antioxidant activity relationships of flavonoids / Flavonoids in helth and diseases, 1999. Chapter 5. P. 199-219.

136. Rowan M.G., Dean P.D. a-Onocerin and sterol content of twelve species of Ononis II Phytochemistry, 1972. Vol. 11. №11. P. 3263-3265.

137. Saeed A., Ibrahim N. Lipids and mucilage contents of Ononis vaginalis Vahl. II Bull. Fac. Pharm. (Catro Univ.), 1994. Vol. 32. №1. P. 143-146.

138. San Feliciano A., Miguel del Corral J.M., Canedo L.M., Medarde M. 3.4-Dihydroisocoumarins from Ononis natrix II Phytochemistry, 1990. Vol. 29. №3. P. 945-948.

139. Shaker K.H., Dockendorff K., Bernhardt M., Seifert K. A new triterpenoid saponin from Ononis spinosa and two new flavonoid glycosides from Ononis vaginalis И Z. Naturforsch, 2004. Vol. 59b. P. 124-128.

140. Sirjaev G. Generis Ononis L. revisio critica // Beihefte zum Botanischen Centralblatt, 1932. Band XLIX. P. 381-665.

141. Spilkova J., Bednar P., Stroblikova R. Capillary electrophoretic analysis of hydroxycinnamic acids from Ononis arvensis L. // Pharmazie, 2001. Vol. 56. №5. P. 424-425.

142. Spilkova J., Dusek J., Solich P., Stranska J.,Ruzicova K. Application of two-dimensional chromatography for determination of ononin in the roots and aerial parts of Ononis arvensis L. // J. Planar Chromatogr., 1996a. Vol. 9. №4. P. 299-302.

143. Spilkova J., Hubik J. Farmacognosticka studie druhu Ononis arvensis L. II. Flavonoidy a onocerin v droze // Ceskoslovenska farmacie, 1982. Vol. 31. №1. P. 24-26.V

144. Spilkova J., Novakova P., Zaludova L. Stanovem obsahu flavonoidu v nati jehlice rolni Ononis arvensis L. 11 Ceska a Slovenska farmacie, 1996b. Vol. 45. №2. P. 79-82.

145. Spilkova J., Vasatova M., Zamecnfkova K., Dusek J. HPTLC denzitometricke stanovenf onocerinu v radix Ononidis II Ceska a Slovenska farmacie, 1996c. Vol. 45. №4. P. 196-198.

146. Usov A. I., Bilan M. I., Klochkova N. G. Polysaccharides of algae. 48. Polysaccharide composition of several calcareous red algae: isolation of alginate from Corallinapilulitara II Bot. Marina. 1995. Vol. 38, №3. P. 43-51.

147. Wollenweber E., Dorr M., Rivera D., Roitman J.N. Exterally accumulated flavonoids in three Mediterranean Ononis species I I Z. Naturforsch., 2003. Vol. 58c. №11-12. P. 771-775.

148. Yakovlev G.P., Sytin A.K., Roskov Yu.R. Legumes of Northern Eurasia. Royal Botanic Gardens, Kew, 1996. 724 p.