Использование углеводородокисляющих бактерий рода Pseudomonas для биоремедиации нефтезагрязненных почв тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Станкевич, Дарья Сергеевна

• Станкевич, Дарья Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Станкевич, Дарья Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Проблема нефтяного загрязнения окружающей среды и восстановление природных экосистем.

1.2 Влияние нефтяного загрязнения на свойства почвы и почвенную биоту.

1.3 Микробная деструкция нефти в почве и факторы, влияющие на ее интенсивность.

1.4 Бактерии рода Pseudomonas и их биологические особенности. Углеводородокисляющие штаммы видов рода Pseudomonas, способные к эффективной биодеструкции углеводородов нефти.

1.5 Биоремедиация нефтезагрязненных почв и применение биопрепаратов на основе микроорганизмов-деструкторов нефти, в т.ч. бактерий рода Pseudomonas.

1.6 Проблема выживания интродуцированных микроорганизмов, экологическая безопасность микробного метода очистки нефтезагрязненных почв.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

И. ОБЪЕКТЫ, МЕТОДЫ И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТОВ.

2.1 Методика изучения влияния нефтепродуктов на физико-химические свойства и фитотоксичность почвы.

2.2 Методика изучения динамики численности микрофлоры в неф-тезагрязненной почве.

2.3 Методика выделения из почвы штаммов микроорганизмов, способных к разложению нефтепродуктов.

2.4 Методы изучения свойств выделенных углеводородокисляющих штаммов рода Pseudomonas и методика оптимизации питательных сред для их культивирования.

2.5 Методика изучения изменения фитотоксичности нефтезагряз-ненной почвы при внесении углеводород окисляющих бактерий.

2.6 Методика изучения динамики численности различных групп микроорганизмов нефтезагрязненной почвы при внесении штаммов бактерий-деструкторов нефтепродуктов.

2.7 Методика приготовления торфяного микробного биопрепарата «Псевдомин» на основе выделенных штаммов микроорганизмов рода Pseudomonas.

2.8 Методика проведения полевого эксперимента по изучению эффективности разложения нефтепродуктов в почве под действием микробных биопрепаратов.

2.9. Методика проведения сравнительного исследования эффективности различных биопрепаратов для деструкции углеводородов на нефтезагрязненных почвах.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Изучение влияния нефтепродуктов на физико-химические свойства и фитотоксичность почв.

3.2 Изучение динамики численности различных групп микроорганизмов при загрязнении почвы нефтепродуктами.

3.3 Выделение из нефтезагрязненной почвы бактериальных штаммов деструкторов нефти.

3.4 Изучение морфологических, культуральных и физиолого-биохимических особенностей выделенных из загрязненной почвы бактерий, способных к трансформации нефтепродуктов.

3.4.1 Идентификация выделенных углеводородокисляющих бактерий.

3.4.2 Изучение роста и развития выделенных бактерий на питательных средах с различными источниками углерода и азота.

3.4.3 Изучение способности выделенных бактерий к росту на средах с различными концентрациями нефтепродуктов.

3.5 Исследование изменения фитотоксичности почвы, загрязненной нефтепродуктами, при дополнительном внесении углеводородо-кисляющих бактерий рода Pseudomonas.

3.6 Определение изменения численности различных групп микроорганизмов в нефтезагрязненной почве при внесении бактерий рода Pseudomonas в качестве агента биодеградации нефти.

3.7 Изучение степени биодеградации нефтепродуктов в почве под действием микробных препаратов на основе углеводородокисляю-щих бактерий рода Pseudomonas (полевой опыт).

3.8 Сравнительные испытания биопрепарата «Псевдомин» и других микробных биопрепаратов при их воздействии на застарелое нефтяное загрязнение почвы (лабораторный опыт).

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Использование углеводородокисляющих бактерий рода Pseudomonas для биоремедиации нефтезагрязненных почв»

Актуальность проблемы

В настоящее время добыча нефти и производство нефтепродуктов играют в нашей жизни огромную роль. Но чем больше масштабы производства, тем больше и масштабы нефтяного загрязнения окружающей среды. Они поистине огромны. Нефть и нефтепродукты признаны приоритетными загрязнителями планеты (Израэль, Ровинский, 1986; Amadi et al., 1993). В первую очередь процесс добычи нефти отражается на загрязнении почвы. Нарушается равновесие в экосистеме вследствие изменения состояния почвенного покрова и геохимических свойств. В почве устанавливается новое динамическое состояние, параметры которого сильно отличаются от исходных (Киреева, 1996). Это приводит к отторжению земель из сельскохозяйственного использования, в связи с чем проблема рекультивации нефтезагряз-ненных почв становится весьма актуальна.

Естественное очищение почв, вод и других природных объектов от нефтяного загрязнения является длительным процессом, зависящим от природных условий (Bossert, Bartha, 1984; Пиковский, 1993). Определяющую роль в процессах самоочищения почв от нефти играют микроорганизмы (Гусев, Коронелли, 1981; Славнина, Середина, 1992). Большинство известных биотехнологических способов очистки основано на использовании чистых и смешанных культур микроорганизмов в сочетании с различными веществами или приемами, стимулирующими их активность (Исмаилов, 1985; Rosenberg, 1985). Эти способы зарекомендовали себя как эффективные и наиболее естественные средства охраны природной среды. Направленное регулирование жизнедеятельности углеводородокисляющих микроорганизмов в природных субстратах (почве, воде и др.), построенное на углубленном познании их биологии, призвано сыграть большую роль в решении ряда актуальных проблем современности, связанных с многочисленными случаями нефтяного загрязнения почв и водных бассейнов (Квасников, Клюшникова, 1981; Гузев и др., 1989). Однако в природоохранных мероприятиях, направленных на борьбу с нефтяными загрязнениями, биотехнологические препараты пока не играют заметной роли, что ведет к увеличившемуся риску загрязнения окружающей среды и повышению энергоемкости механических способов очистки. Знания о физиологии и экологии нефтеокисляющих микроорганизмов и условиях их успешной интродукции в природные экосистемы необходимы для развития экологической биотехнологии в нашей стране. Недостаток отечественных биопрепаратов-деструкторов нефти неизбежно приведет к заполнению национального рынка импортными аналогами, зачастую худшего качества, и как следствие, поставит Россию в необратимую зависимость от импорта (Киреева, Новоселова, 1996).

Цель работы - выделить из почвы эффективные штаммы микроорганизмов-деструкторов нефтепродуктов и разработать с их использованием способы биоремедиации нефтезагрязненной почвы.

Задачи исследования;

• получить методами аналитической селекции и выделить в чистой культуре перспективные штаммы микроорганизмов-деструкторов нефти;

• идентифицировать выделенные микроорганизмы, выявить их углеводо-родокисляющую способность и оптимизировать условия роста для получения микробной биомассы;

• разработать технологию приготовления и применения нового микробного препарата на основе наиболее активного выделенного штамма для биоремедиации нефтезагрязненных почв; изучить его эффективность в условиях реального нефтяного загрязнения;

• исследовать эффективность нового микробного биопрепарата в сравнении с другими аналогичными препаратами для рекультивации почв, загрязненных нефтепродуктами.

Научная новизна

Впервые из нефтезагрязненной почвы выделены бактериальные штаммы, способные к росту на средах с высокими концентрациями нефтепродуктов (свыше 10% от объема среды), использующие углеводороды, входящие в состав дизельного топлива, сырой нефти и мазута в качестве единственных источников углерода. Полученные культуры идентифицированы и отнесены к роду Pseudomonas виду putida (st. 91-96 и st. 9:IV). Показано, что при внесении выделенных штаммов в почву, загрязненную нефтепродуктами, существенно снижается фитотоксичность почвы, а численность и соотношение отдельных групп микроорганизмов приближаются к соответствующим показателям незагрязненной почвы.

Выявлено, что при биоремедиации нефтезагрязненных почв (Сургутский район, Тюменская обл.) с использованием биопрепарата «Псевдомин» на основе одного из выделенных штаммов (Pseudomonas putida st. 91-96) в течение 2,5 месяцев происходит почти полное разложение нефтепродуктов. При совместном использовании с ним минеральных удобрений эффективность достигает 98,1%. Микробиологический анализ образцов рекультивируемой почвы выявил высокую активность штамма и способность размножаться в загрязненной почве.

Показано, что «Псевдомин» в сравнении с рядом подобных биопрепаратов, разработанных различными научно-исследовательскими организациями, обладает достаточно высокой эффективностью. Так, среди 14 испытанных биопрепаратов, «Псевдомин» по суммарному деградационному действию на нефтепродукты в почве явился одним из лучших.

Практическая значимость

На основе выделенного из нефтезагрязненной почвы штамма бактерий-деструкторов углеводородов нефти разработана технология приготовления нового микробного препарата «Псевдомин» для биоремедиации почв, загрязненных нефтепродуктами и оптимизированы способы его применения совместно с различными мелиорантами. Новый биопрепарат «Псевдомин», пройдя серию полевых и лабораторных испытаний, зарекомендовал себя как эффективный деструктор нефти. Результаты работы могут быть использованы для дальнейших биотехнологических исследований и при разработке комплексных технологий по восстановлению нефтезагрязненных почв, завершающей стадией которых является микробиологическая. Биопрепарат «Псевдомин», благодаря своей высокой эффективности, быстроте действия и простоте применения, может быть рекомендован для использования в северных нефтедобывающих регионах (где климат характеризуется коротким теплым периодом) в качестве активного агента биоремедиации нефтезагрязненных почв, ускоряющего процесс разложения нефтепродуктов.

Работа выполнена в 1996-2001 году на кафедре микробиологии Московской сельскохозяйственной академии имени К.А. Тимирязева и лаборатории биотехнологии Сургутского государственного университета.

Автор выражает искреннюю благодарность своему научному руководителю - профессору, д.б.н. В. Т. Емцеву, а также к.б.н. О. В. Селицкой, профессору, к.с-х.н. В. А. Калинину и профессору, д.с-х.н. В. Г. Алехину, за ценные консультации при выполнении данной работы; а также выражает признательность всем сотрудникам кафедры микробиологии за оказанное содействие и предоставленную возможность провести необходимые эксперименты.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Станкевич, Дарья Сергеевна

выводы

1. Впервые из нефтезагрязненной почвы выделены бактериальные штаммы, способные к росту на средах с высокими концентрациями нефтепродуктов (свыше 10% от объема среды), использующие углеводороды, входящие в состав дизельного топлива, сырой нефти и мазута в качестве единственных источников углерода и энергии. Изучение морфологии и физиологии выделенных бактерий позволило отнести их к роду Pseudomonas виду putida (штамм 91-96 и штамм 9:IV).

2. Исследованы изменения биологических характеристик почв, загрязненных различными типами нефтепродуктов, при использовании выделенных штаммов псевдомонад в качестве активного агента биоремедиации. Установлено, что при внесении выделенных углеводородокисляющих бактерий в почву, загрязненную дизельным топливом, в течение 150 суток ослабляется токсическое воздействие последней на растения.

- Выявлено, что при интродукции в почвы, подвергшиеся высокому (500 мг/кг почвы) загрязнению различными типами нефтепродуктов - дизельного топлива, сырой Талаканской нефти и флотского мазута - штаммов Ps. putida 91-96 и Ps. putida 9:IV происходит интенсивное разложение ими нефтепродуктов в период 7-30 сутки. В микробном углеводородокисляю-щем комплексе преобладают внесенные бактерии, активно утилизирующие углеводородный субстрат.

3. Разработана технология изготовления торфяного микробного биопрепарата «Псевдомин» на основе одного из выделенных углеводородокисляющих штаммов Pseudomonas putida (st.91-96). Выявлена их способность размножаться в торфе и длительное время сохранять жизнеспособность в почве, что указывает на возможность длительного последействия на нефтепродукты, остающиеся в почве.

4. Выявлено, что при биоремедиации нефтезагрязненных почв (Сургутский район, Тюменская обл.) с использованием биопрепарата «Псевдомин» в течение 2,5 месяцев происходит почти полное разложение нефтепродуктов. При использовании минеральных удобрений эффективность достигает 98,1% (при начальной концентрации нефтепродукта около 500 мг/кг).

- Восстановление микробного комплекса нефтезагрязненной почвы происходит в условиях хорошей аэрации и рН почвенного раствора, близком к нейтральному.

5. Показано, что «Псевдомин» в сравнении с рядом подобных препаратов-биодеструкторов, разработанных различными организациями, обладает высокой эффективностью. Так, при загрязнении почвы нефтепродуктами в концентрации около 200 мг/кг почвы, его эффективность составила 75,7%. Причем, значительное положительное влияние на активность препарата оказали минеральные удобрения. При дополнительном внесении азотных и фосфорных удобрений в процессе рекультивации почвы, степень эффективности «Псевдомина» увеличилась на 22,1%.

Высокая углеводородокисляющая активность штамма Pseudomonas putida st. 91-96, составляющего основу биопрепарата, простота изготовления и применения, а также относительная быстрота и стабильность действия позволяют считать «Псевдомин» пригодным для биоремедиации нефтезагрязненных территорий в условиях Севера, где теплый период непродолжителен и процессы естественной биодеградации не успевают развернуться.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Станкевич, Дарья Сергеевна, 2002 год

1. Абрамец А. М., Дударчик В. М., Ивашкевич J1. С. и др. Гуминовые препараты для мелиорации рекультивируемых песчаных почв // Химиз. с. х. - 1988. - № 3. -С. 68-71.

2. Алексеева Т. П., Бурмистрова Т. И., Терещенко Н. Н. и др. Перспективы использования торфа для очистки нефтезагрязненных почв // Биотехнология. -2000. -№ 1.-С. 58-64.

3. Алещенкова 3. Н., Самсонова А. С., Байкова С. В. и др. Использование Rhodococcus erythropolis для ускорения деградации дибутилфталата в почве // Биотехнология. 1997. - №11-12. - С. 59-63.

4. Алиев С. А., Гаджиев Д. А. Влияние загрязнения нефтяным органическим веществом на активность биологических процессов почв // Изв. АН АзССР. Сер. биол. наук. - 1977. - № 2. - С. 46-49.

5. Андерсон Р. К., Багаутдинов Ф. Я., Бойко Т. Ф. и др. Использование микробиологического метода для очистки нефтезагрязненных почв // Интродукция микроорганизмов в окружающую среду. Тез. докл. конференции. Москва 17-19 мая 1994 г.-С. 10.

6. Андрусенко М. Я., Рунов В. И. Углеводородокисляющие бактерии и лучистые грибы, выделенные из нефтеносных почв Узбекистана, как продуценты биомассы и биологически активных веществ // Микробиологическая промышленность. 1973.-В. 1.-С. 23-27.

7. Аристовская Т. В. Большой практикум по микробиологии / под общ. Редакцией проф. Г. Л. Селибера. М.: ВШ, 1962.

8. Артемьева Т. И., Штина Э. А. Экологические последствия загрязнения почв нефтью // Бактериальный фильтр Земли: Тез. докл. семинара, 30-31 мая 1985 г. -Пермь, 1985. -Т.1. -С.28-29.

9. Балашова Н. В., Кошелева И. А., Филонов А. Е. и др. Штамм Pseudomonas putida BS371 деструктор фенантрена и нафталина // Микробиология. - 1997. -Т.66, № 4. - С. 488-493.

10. Барышникова Л. М., Грищенков В. Г., Аринбасаров М. У. и др. Биодеградация нефтепродуктов штаммами-деструкторами и их ассоциациями в жидкой среде // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. - Т. 37, № 5. - С. 542-548.

11. Батанов Б. Н. Биотехногенная деградация и изменение биопродуктивности почв в бассейне нижнего течения р. Белой : Дис. канд. с-х. наук. 06.01.04. Уфа, 1999.

12. Белов П. С., Голубева И. А., Низова С. А. Экология производства химических продуктов и углеводородов нефти и газа. М.: Химия, 1991. - 256 с.

13. Белонин М. Д., Рогозина Е. А., Свечина Р. М. и др. Биопрепарат для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов. Патент 2053205 Россия. Опубл. 27.01.96. Биология. №3.

14. Борзенков И. А., Ибатуллин Р. Р., Милехина Е. И. и др. Использование микроорганизмов при ликвидации нефтяных загрязнений почв. // Интродукция микроорганизмов в окружающую среду. Тез. докл. конф.-Москва 17-19 мая 1994 г. -С. 14-15.

15. Борзенков И. А., Милехина Е. И., Беляев С. С., Иванов М. В. Консорциум микроорганизмов, используемых для очистки почвенных и солоноватоводных экосистем от загрязнения нефтепродуктами: Патент № 2023686 РФ // Б. И. 1994. -№22.-С. 136.

16. Боровиков В. П. Программа «Статистика» для студентов и инженеров». 2-е изд. - М.: КомпьютерПресс, 2001. - 301 с.

17. Бусыгин Е. А. Влияние концентрации нефти на активную альгофлору, отражающую состояние почвы // Микроорганизмы в сельском хозяйстве. Тез. докл. 3 Всес. науч. конф., Москва, 23-25 декабря, 1986. -М.: МГУ, 1986. С. 124-125.

18. Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем // под. ред. М. А. Глазовской. М.: Наука, 1988. - 254 с.

19. Габбасова И. М., Хазиев Ф. X., Сулейманов Р. Р., Галимзянова Н. Ф., Бойко Т. Ф. Стимулирование микрофлоры нефтезагрязненной серой лесной почвы с помощью органических добавок // Башкирский экологический вестник. 1992. -№2.-С. 14-19.

20. Герасимов В. Н., Ермоленко 3. М., Штучная Г. В. и др. Физиологические, ультраструктурные и морфо-популяционные особенности бактерий Mycobacterium flavescens, утилизирующих нефть и нефтепродукты // Биотехнология. 1996. -№5.-С. 17-24.

21. Гилязов М. Ю. Нарушение плодородия почв при загрязнении нефтепромысловыми сточными водами и приемы их рекультивации : Дис.кнд. с-х. наук. 06.01.04.-М., 1985.

22. Глазовская М. А. Способность природной среды к самоочищению. Природа. -1979.-№3.-С. 71-79.

23. Глазовская М. А., Пиковский Ю. И. Комплексный эксперимент по изучению факторов самоочищения и рекультивации загрязненных нефтью почв в различных природных зонах // Миграция загрязненных веществ в почвах и сопредельных средах. Л., 1985. - С.185-191.

24. Головлев Е. JI. Проблемы интродукции микроорганизмов-деструторов. // Новые направления биотехнологии. Тез. докл. VI конф. РФ. - Пущино 24-26 мая 1994 г.-С. 9.

25. Головченко А. В., Добровольская Т. Г., Чернов И. Ю. Структура бактериальных комплексов в заповедных ельниках // Плчвоведение. 1995. - №9. - С. 11211124.

26. Голодяев Г. П. Биодеградация нефтепродуктов в почвах и почвогрунтах. // Генезис и биология почв юга Дальнего Востока. Владивосток, 1994. - С. 253268.

27. Голодяев Г. П., Никитина 3. И. Санация нефтезагрязненных почв юга Дальнего Востока. // Тез. докл. I съезда почвоведов России. С.-Петербург, 1996. - С. 246-247.

28. Градова Н. Б., Кожевин П. А., Рабинович Н. JI. и др. Биотехнологические способы очистки почв, загрязненных синтетическими моющими средствами // Биотехнология. 1996. - № 11. - С. 46-50.

29. Грищенков В. Г., Гаязов Р. Р., Токарев В. Г. и др. Бактериальные штаммы-деструкторы топочного мазута: характер деградации в лабораторных условиях // Прикладная биохимия и микробиология. 1997. - Т.ЗЗ, № 4. - С. 423-427.

30. Гродзинский А. М. Аллелопатия растений и почвоутомление. Киев: Наукова думка, 1991.-429 с.

31. Гузев В. С., Голышин П. Н. Пролонгированная катаболитная репрессия и проблема интродукции микроорганизмов в почву // Микробиология. 1994. - Т.66, Вып. 4.-С. 565-572.

32. Гузев В. С., Халимов Э. М., Волде М. И., Куличевская И. С. Регуляторное действие глюкозы на активность углеводородокисляющих микроорганизмов в почве // Микробиология. 1997. - Т.66, № 2. - С. 154-159.

33. Гусев М. В., Коронелли Т. В. Микробиологическое разрушение нефтяного загрязнения // Изв. АН СССР. 1981. - Сер. биол. -№ 6. - С. 835-844.

34. Давыдов М. Н., Мухитова Ф. К., Ибатуллин Р. Р. Анаэробная трансформация нефти под действием экстрактов клеток СВБ // Микробиология. 1998. - Т. 67, № 2. - С. 202-207.

35. Дмитриев Е. А. Математическая статистика в почвоведении. М.: Изд-во МГУ, 1995.-292 с.

36. Евдокимова Г. А., Месяц С. П., Мозгова Н. П. Пути биодеградации нефти в водоемах высоких широт. / Тез. докл. конф. «Интродукция микроорганизмов в окружающую среду». М.: ПНЦ РАН, 1994. - С.33-34.

37. Ермоленко 3. М., Холоденко В. П., Чугунов В. А. и др. Биологическая характеристика штамма микобактерий, выделенного из нефти Ухтинского месторождения // Микробиология. 1997. - Т.66, № 5. - С. 650-654.

38. Етеревская JI. В., Яранцева Л. Д. // Растения и промышленная среда. Киев: Наукова думка, 1976. С.73-75.

39. Звягинцев Д. Г. Почва и микроорганизмы. М.: МГУ, 1987. - 296 с.

40. Звягинцев Д. Г., Гузев В. С., Левин С. В. и др. Диагностические признаки различных уровней загрязнения почвы нефтью II Почвоведение. 1989. -№ 1. - С. 72-78.

41. Звягинцева И. С., Поглазова М. Н., Готоева М. Т., Беляев С. С. Влияние солености среды на деструкцию нефтяных масел нокардиеподобными бактериями // Микробиология. 2001. - Т.70, № 6. - С. 759-764.

42. Иванова А. Е. Углеводородокисляющие и сульфатвосстанавливающие бактерии высокотемпературных нефтяных пластов. / Автореф. дисс. канд. биол. наук. -М., 1998.

43. Израэль Ю. А., Ровинский Ф. Я. Комплексный фоновый мониторинг в СССР // Комплексный глобальный мониторинг состояния биосферы. Тр.Ш Междунар. симп., 14-19 окт. 1985. Ташкент, 1986. - С. 89-105.

44. Ильин Н. П., Калачникова И. Г., Каркишко Т.И. и др. Наблюдение за самоочищением почв от нефти в средней и южной тайге // Добыча полезных ископаемых и геохимия природных экосистем. М., 1982. - С. 245-258.

45. Ильичев Р. Б., Вакулинко М. В., Жариков С. Н., Ильичев Б. А. Содержание би-тумоидов в зональных почвах европейской части России // Почвоведение. -2001.-№ 11.-С. 1392-1401.

46. Исмаилов Н. М. Биодеградация нефтяных углеводородов в почве, инокулиро-ваной дрожжами // Микробиология. 1985. - Т. 54, №5. - С. 835-841.

47. Исмаилов Н. М. Микробиология и ферментативная активность нефтезагрязнен-ных почв. Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем / под ред. М. А. Глазовской. М.: Наука, 1988. - С. 42-56.

48. Исмаилов Н. М., Пиковский Ю. И. Биодинамика загрязненной нефтью почвы // Миграция загрязненных веществ в почвах и сопредельных средах. Л., 1985. -С.195-198.

49. Калачникова И. Г., Колесникова Н. М. Динамика микробных популяций в дерново-подзолистой почве при воздействии нефтяного загрязнения // Биодинам.почв. Тез. докл. 3 Всес. симп., Харку, 25-27 октября, 1988. Таллин, 1988. - С. 83.

50. Капотина JI. Н., Моршакова Г. Н. Биологическая деструкция нефти и нефтепродуктов, загрязняющих почву и воду // Биотехнология. 1998. - № 1. - С. 85-92.

51. Картыжова JI. Я., 31менка Т. Г., Мохава С. В. Уздзеянне газавьпадау нафтапере-рапрацоучага прадкрыенства на мпсробны цэноз i улас1ДвасЩ дзярнова-падзолютай глебы. // Вэсщ акадэмп навук БССР серыя б1ялапчных навук. -Мшск, 1990. С.47-56.

52. Квасников Е. И., Клюшникова Т. М. Микроорганизмы деструкторы нефти в водных бассейнах. - Киев: Наукова думка, 1981. - 132 с.

53. Киреева Н. А. Биодеструкция нефти в почве культурами углеводородокисляю-щих микроорганизмов // Биотехнология. 1996. - № 1. - С. 51-54.

54. Киреева Н. А. Микробиологические процессы в нефтезагрязненных почвах. -Уфа: Изд-во БашГу, 1994. 171 с.

55. Киреева Н. А. Микрофлора почв Башкирии, загрязненных нефтью и нефтепродуктами // Ботанические исследования на Урале. Свердловск, 1988.

56. Киреева Н. А., Водопьянов В. В. Математическое моделирование биодеградации нефти в почве. // Биотехнология. 1996. - №8. - С. 55-59.

57. Киреева Н. А., Галимзянова Н. Ф. Влияние загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами на численность и видовой состав микромицетов // Почвоведение. -1995.-№ 2.-С. 211-216.

58. Коронелли Т. В. Экофизиологические основы и практический опыт интродукции углеводородокисляющих бактерий в природные экосистемы. // Интродукция микроорганизмов в окружающую среду. Тез. докл. конф., Москва 17-19 мая 1994г.-С. 53.

59. Коронелли Т. В., Комарова Т. И., Поршнева О. В., Ткебучева JI. Ф. Внеклеточные метаболиты углеводородокисляющих бактерий как субстрат для развития сульфатредукции // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. - Т. 37, № 5.-С. 549-553.

60. Красильников Н. А. Определитель бактерий и актиномицетов. М.; JL: Изд-во АН СССР, 1949.-830 с.

61. Лысак Л. В., Лапыгина Е. В. Деструкция нефти монокультурами и природными ассоциациями почвенных бактерий // Вестн. МГУ. Сер. 17., Почвоведение. -1994. -№1. - С.58-61.

62. Мальцева О. В. Особенности промежуточного метаболизма Pseudomonas aeruginosa, деградирующего чужеродные соединения. / Автореф. дисс. канд. биол. наук. Пущино, 1983.

63. Медведева Н. Г., Поляк Ю. М., Зиновьева С. В. и др. Микробная деструкция иприта бактериальными культурами // Биотехнология. 2000. - № 2. - С. 60-65.

64. Методы изучения почвы и высшие растения / под ред. Н. А. Красильникова. -М.: Изд-во АН СССР, 1958. 352 с.

65. Микроорганизмы и охрана почв / под ред. Д. Г. Звягинцева. М.: Изд-во МГУ, 1989.-206 с.

66. Милько Е. С., Мартынкина Л. П. Морфологические и физиолого-биохимические особенности диссоциантов Pseudomonas aeruginosa // Микробиология. 1996. - Т. 65, № 3. - С. 352-356.

67. Мишустин Е. Н., Рунов Е. В. Успехи разработки приемов микробиологического диагностирования состояния почвы. Успехи современной биологии. - Т. 44, вып.2 (5). - 1957. - С. 256-268.

68. Мукатанов А. X., Ривкин П. Р. Влияние нефти на свойства почв. Нефтяное хозяйство, 1980. - № 4. - С. 53-54.

69. Мурзаков Б. Г., Биттеева М. Б., Морщакова Г. Н. и др. Бактерии деструкторы нефтепродуктов // Микробиология охраны биосферы в регионах Урала и Северного Прикаспия. Тез.докл. Всесоюзного симпозиума. - Оренбург, 1991. - С. 29.

70. Назина Т. Н. Микроорганизмы нефтяных пластов и использование их в биотехнологии повышения нефтеотдачи : Автореф. дис. В форме науч. докл.докт.биол. наук : 03.00.07. М., 2000. - 66 с.

71. Оборин А. А., Калачникова И. Г., Масливец Т. А. и др. / Самоочищение и рекультивация нефтезагрязненных почв Предуралья и Западной Сибири. Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем / под ред. М. А. Глазовской. М.: Наука, 1988. - С. 140-168.

72. Огородников А. В., Хромых В. С. Экологическая измененность пойменных геосистем под влиянием нефтедобычи. // Проблемы экологии Томской области. -Томск, 1992. Т.2. - С. 46-48.

73. Одинцова С. В. Изучение возможности самоочищения нефтезагрязненных почвенных территорий ассоциациями нефтеокисляющих микроорганизмов // Докл. науч.-прак. конф. «ПромЭкол-97», С-Петербург, 12-14 ноября, 1997. СПБ, 1997.-С. 491.

74. Охрана окружающей природной среды. Постатейный комментарий к закону России.-М., 1993.-С. 224.

75. Панченко JI. В., Турковская О. В. Возможности использования микроорганизмов-деструкторов поверхностно-активных веществ в условиях многокомпонентных сточных вод // Биотехнология. 1999. - № 2. - С. 69-75.

76. Пароменская J1. Н., Гаранкина Н. Г., Моисеева И. Г., Круглов Ю. В. Альгологи-ческий метод определения фитотоксичности почв // Почвоведение. 2001. - № 6.-708-712.

77. Петухов В. Н., Фомченков В. М., Чугунов В. А., Холоденко В. П. Биотестирование почвы и воды, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, с помощью растений // Прикладная биохимия и микробиология. 2000. - Т. 36, № 6. - С. 652655.

78. Пиковский Ю. И. Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. -М.: Наука, 1988.-С. 7-22.

79. Пиковский Ю. И., Калачникова И. Г., Оглоблина А. И., Оборин А. А. Экспериментальные условия трансформации нефти в почвах // Миграция загрязненных веществ в почвах и сопредельных средах. Д., 1985. - С.191-195.

80. Плотникова Е. Г., Алтынцева О. В., Кошелева И. А. и др. Бактерии деструкторы полициклических ароматических углеводородов, выделенные из почв и донных отложений района солеразработок // Микробиология. - 2001. - Т.70, № 1,- С. 61-69.

81. Пономарева JI. В., Крунчак В. Г., Торгованова В. А. и др. Биоремедиация нефтезагрязненной почвы с использованием биопрепарата «Биосэт» и пероксида кальция // Биотехнология. 1998. - № 1. - С. 79-84.

82. Практикум по почвоведению / под ред. И. С. Кауричева. М.: Агропромиздат, 1986.-336 с.

83. Пунтус И. Ф., Филонов А. Е., Кошелева И. А. и др. Выделение и характеристика микроорганизмов-деструкторов полициклических ароматических углеводородов // Микробиология. 1997. - Т.66, № 2. - С. 269-272.

84. Регламент рекультивации нефтезагрязненных заболоченных земель. М. -1993.-39 с.

85. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / под ред. проф. Н. С. Егорова. М.: Изд-во МГУ, 1983. - 215 с.

86. Рыбак В. К., Овчарова Е. П., Коваль Э. 3. Микрофлора почвы, загрязненной нефтью // Микробиол. Журнал. 1984. - Т. 46, №4. - С. 29-32.

87. Седых В. Н., Игнатьев JI. А., Семенюк М. В. Реакция растений на отходы бурения нефтяных скважин. Всхожесть семян и выживание сеянцев. Сообщение 1 // Сибирский экологический журнал. Новосибирск: Изд-во СО РАН - 1998. - Т. 5, №1. - С. 34-38.

88. Семенов А. М., Куличевская И. С., Халимов Э. М. и др. Лабораторные тесты для оптимизации интродукции в почву микроорганизмов-деструкторов нефти // Прикладная биохимия и микробиология. 1998. - Т. 34, № 5. - С. 576-582.

89. Сидоренко Н. Н. Микробные комплексы городских загрязненных почв : Авто-реф. дис.канд. биол. наук : 03.00.07. -М., 1999.-28 с.

90. Сидоров Д. Г., Борзенков И. А., Ибатуллин Р. Р. и др. Полевой эксперимент по очистке почвы от нефтяного загрязнения с использованием углеводородокисляющих микроорганизмов // Прикладная биохимия и микробиология. 1997. -Т.ЗЗ, № 5. - С. 497-502.

91. Сидоров Д. Г., Борзенков И. А., Милехина Е. И. и др. Микробиологическая деструкция мазута в почве при использовании биопрепарата Деворойл // Прикладная биохимия и микробиология. 1998. - Т.34, № 3. - С. 281-286.

92. Скворцова И. Н. Идентификация почвенных бактерий рода Pseudomonas. М.: 1983.-63с.

93. Скворцова И. Н. Количественная сезонная динамика психрофильного Псевдо-монаса в дерново-подзолистой почве // В кн.: Биодинамика и плодородие почвы. Таллин, 1979. - С. 97-99.

94. Скрябин Г. К., Головлева JI. А. Использование микроорганизмов в органическом синтезе. М.: Наука, 1976. - 235 с.

95. Славнина Т. П., Середина В. П. И др. Биологическое состояние почв при загрязнении нефтью. // Проблемы экологии Томской области. Томск, 1992. -Т.2. - С. 66-67.

96. Смирнов В. В., Киприанова Е. А. Бактерии рода Pseudomonas. Киев: Нау-кова думка, 1990. - 264 с.

97. Солнцева Н. П., Пиковский Ю. И., Никифорова Е. М. и др. Проблемы загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами: геохимия, экология, рекультивация // Докл. симпоз. VII делегатск. съезда Всес. общества почвоведов. Ташкент, 1985.-4.6.-С. 246-254.

98. Стабликова Е. В., Селезнева М. В., Дульгеров А. Н., Иванова В. Н. Применение биопрепарата «Лестан» для очистки почвы от углеводородов нефти // Прикладная биотехнология и микробиология. 1996. - 32, №2. - 219-223.

99. Суржко Л. Ф., Финкелынтейн 3. И., Баскунов Б. П. и др. Утилизация нефти в почве и воде микробными клетками // Микробиология. 1995. - Т.64, № 3. - С. 393-398.

100. Суровцева Э. Г., Ивойлов В. С., Беляев С.С. Разрушение ароматической фракции нефти ассоциацией грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов // Микробиология. 1997. - Т. 66, № 1. - С. 78-83.

101. Таранова Л. А., Жданова Е. Б. Влияние бактерий и дрожжей на биохимическое окисление нефти // Нефть и газ Западной Сибири. Тез. докл. Международной научно-технической конференции, 21-23 мая, Тюмень. 1996. - С. 126.

102. Таранова Л. А., Трачевский В. В., Делеменчук Н. В. и др. Бактериальная деструкция катионных поверхносто-активных веществ // Биотехнология. 1996. -№9.-С. 32-37.

103. Теппер Е. 3., Шильникова В. К., Переверзева Г. И. практикум по микробиологии. Москва. - 1993. - 169 с.

104. Турковская О. В., Дмитриева Т. В., Муратова А. Ю. Штамм Pseudomonas aeruginosa продуцент биоПАВ // Прикладная биохимия и микробиология. -2001.-Т. 37, № 1.-С. 80-85.

105. Фомченков В. М., Холоденко В. П., Ирхина И. А., Петрунина Т. А. Влияние загрязнения водной среды нефтью и нефтепродуктами на барьерные свойства цитоплазматических мембран бактериальных клеток // Микробиология. 1998. -Т. 67,№3.-С. 333-337.

106. Хазиев Ф. X. Методы почвенной энзимологии. М.: Наука., 1990. - 190 с.

107. Халимов Э. М., Левин С. В., Гузев В. С. Экологические и микробиологические аспекты повреждающего действия нефти на свойства почвы // Вестн. МГУ.- Сер. 17., Почвоведение. 1996. - №2. - С.59-64.

108. Чугунов В. А., Ермоленко 3. М., Жиглецова С. К. и др. Создание и применение жидкого препарата на основе ассоциации нефтеокисляющих бактерий // Прикладная биохимия и микробиология. 2000. - Т. 36, № 6. - С. 666-671.

109. Шлегель Г. Общая микробиология. М.: Наука, 1988. - С. 281-301.

110. Шлыгин Н. И. Мониторинг состояния окружающей природной среды // Обзор. Сер. 87. Обнинск, ВНИИГМИ-МУД, 1986. - Вып. 4. - С. 47.

111. Щеблыкин И. И., Битеева М. Б., Бирюков В. В., Янкевич М. И. Биовосстановление загрязненной нефтью почвы при ликвидации последствий аварии на магистральном нефтепроводе Лисичанск-Тихорецк // Охрана окружающей среды.- 1995.-С. 19-28.

112. Ягафарова Г. Г., Гатаулина Э. М., Барахнина В. Б., Ягафаров И. Р., Сафаров А. X. Новый нефтеокисляющий микромицет Fusarium sp. // Прикладная биотехнология и микробиология. 2001. - Т. 37, №1. - С. 77-79.

113. Ягафарова Г. Г., Скворцова Н. Н. Новый нефтеокисляющий штамм бактерий Rhodococcus erythropolis 1339 Д // Прикладная микробиология и биохимия -1996.-Т. 32, № 2. -224-227.

114. Aeckersbery F., Rueter P., Rabus R., Widdek F. Hydrocarbon degradation by anaerobic bacteria // Beijerinck Centenn. Microb. Physiol, and Gene Regul. Emerg. Princ. And Apple. Hague, 10-14 Dec., 1995. - Book abstr. - Delft., 1995. - P. 7071.

115. Amadi A., Dickson A. A., Maate G. O. Remediation of oil-polluted soils. I. Organic and inorganic nutrient supplements on the perfomans of Maize // Water, Air and Soil Pollut. 1993. - V. 66, N 1-2. - P. 59-76.

116. Aronstein В. N., Alexander M. Surfactants at low concentrations stimulate biodeg-radation of sorbed hydrocarbons in samples of aquifer sands and soil slurries // Environ. Toxicol. Chem. 1992. - V. 11, N 9. - P. 1227-1233.

117. Atlas R. M. Biodegradation of hydrocarbons in the environment // Environmental biotechnology. 1988. - ed. G. S. Omenn Plenum. Press. - N.Y. - P. 211-222.

118. Atlas R. M. Microbial degradation of organic compounds within complex effluents // Environ. Hazard Asses. Effluents. Proc. Pellston Environ. Workshop, Cody, Wyo., 22-27 Aug., 1983. -N.Y.,1986. P. 163-171.

119. Atlas R. M., Bartha R. Hydrocarbon biodegradation and oil spill bioremediation (ed. by К. C. Marshall) // Adv. Microb. Ecol. 1992. - V. 12. - P. 287-338.

120. Benka-Coker M. O., Ekundayo J. A. Applikation of evaluating the ability of microbes isolated from an oil spill site to degrade oil // Environ. Monit. and Assess. -1997.-45.3.-P. 259-272.

121. Bergey's manual of determinative bacteriology. 9th edition. - 1.: 430 p.

122. Bertrand J. C., Caumette P., Mille G., Gilewicz M., Denis M. Anaerobic biodegradation of hydrocarbons // Sci. Progr. (Gr. Brit.). 1989. - V. 3. - P. 333-350.

123. Bossert I., Bartha R. The fate of petroleum in soil ecosystems / Petroleum Microbiology (ed by R. M. Atlas). New York: McMillan Co, 1984. - P. 434-476.

124. Brown-Lewis R. Oil-degrading microorganisms // Chem. Eng. Progr. 1987. - 83. -N10.-P. 35-40.

125. Byng G., Whitaker R., Cherna et al. Variable enzymoligical pattering in tyrosine biosynthesis as a means of determining naturalrelatedness among the Pseudomonada-ceae // J. Bacteriol. 1980. - 144, N 1. - P. 247-257.

126. Cerniglia С. E. Microbial transformation of aromatic hydrocarbons // Petroleum Microbiology (ed. by R. M. Atlas). New York: Micmillan Co. - 1984. - P. 99-128.

127. Chen С. T. Understanding the fate of petroleum hydrocarbons in the subsurface environment // Chemical Education. 1992. - 69, N 5. - P. 357-361.

128. Cipinyte V., Grigiskis S. Selection of petroleum-degrading bacterial strains // Microclimate and physica of soil: problems ecology education. Kaunas, 1997. - P. 812.

129. Cook J., Weller D. M. Management of take-all in consecutive crops of wheat or barley // Innovative approaches to plant disease control. N. Y., Wiley a. sons inc., 1987.-P. 41-76.

130. Cooney J. J., Summers R. J. Hydrocarbon-using microorganisms in three fresh water ecosystems // Prog. Third Inter. Biodegradation Symp. Appl. Sci. - London. -1976.-P. 141-156.

131. Cundell A. M., Traxler R. W. Microbial degradation of petroleum at low temperature // Marine pollution bulletin. 1973. - V. 4. - N 8. - P. 125-127.

132. Cunlla C.D., Ferreira L. S. G. Optimization of some environmental conditions to enhance gasoline biodegradation in soil microcosms bioaugmented with Pseudomonas putida // Rev. Microbiol. 1997. - 28, N 2. - P. 129-134.

133. Danilova M. N. Are northern ecosystems tolerant to petroleum pollution? / III Me-ждунар. конф. «Освоение Севера и проблемы рекультивации»: тез. докл. Сыктывкар, 1996.-С. 36-37.

134. Delaune R. D., Hambrick G. A., Patrick W. H. Degradation of hydrocarbons in oxidized and reduced sediments // Mar. Pollut. Bull. 1980. - V. 11. - P. 103-106.

135. Deyo B. G., Robbins G. A., Binkhost G. K. Use of portable oxygen and carbon dioxide detectors to screen soil gas for subsurface gasoline contamination ground water. 1993. - V. 31, N 4. - P. 598-604.

136. Ellis R., Adams R. S. Contamination of soils by Petroleum hydrocarbons. Advances in agronomy. — 1961.—N 13. — P. 197-216.

137. Falatko D. M., Novak J. T. Effects of biologically produced surfactants on the mobility and biodegradation of petroleum-hydrocarbons // Water Environ. Res. 1992. -V. 64, N 2. -P.163-169.

138. Fedorak P. M., Westlake D. W. S. Degradation of aromatic and saturates in crude oil by soil enrichments // Water, Air and Soil Pollut. 1981. -V. 16. -P. 367-375.

139. Fuhs G. W. Обзор. Разложение углеводородов микроорганизмами. Микробиологический синтез. 1965. -N 2. - Р. 1-10.

140. Funch W., Loibner А. P., Klimitisch A. et al. Bioremediation of soils contaminated with polycyclic aromatic hydrocarbons // Soil and Environment. Dordrecht etc., 1995.-V. 5/2.-P. 1209-1210.

141. Jain D. K., Lee H., Trevors J. T. Effect of addition in Pseudomonas aeruginosa UG2 inocula or biosurfactants on biodegradation of selected hydrocarbons in soil // In-dustr. Microbiol. 1992. - V. 10. - P. 87-93.

142. Jessen O. Pseudomonas aeruginosa and other green fluorescent pseudomonads. -Munksgaad, Copengagen, 1965. 240 p.

143. Jobson A. M., Cook F. D., Westlak D. W. S. Microbial utilization of crude oil // Appl. Microbiol. 1972. -V. 23, N 6. - P. 1082-1091.

144. Johnson J, Anderson R. S., Ordal E. J. Nucleic acid homologies among oxidase-negative Moraxella sp. // J. Bacteriol. 1970. - V. 101. -N 2. - P. 568-573.

145. Kator H., Miget R. J., Oppenheimer С. H. Utilization of paraffin hydrocarbons in crude oil by mixed cultures of marine bacteria / Simp, on Environ. Conserv. Soc of Petrol. Engin. Dallas, 1972. - Paper N SPE 4206.

146. Klein J. Mikrobiologische methoden zur Sanierung mineralolkontaminierter Boden // Mineralol. 1992. - V. 40. - B. 12. - S. 209-217.

147. Kopp-Holtwiesche B. Biocrack // BFE (Biotech. Forum Eur). 1992. - V. 9 - N 6. -P. 627-632.

148. McGill W. B. Soil restoration following oil spills // J. Canad. Petrol. Technol. -1977.-V. 16, N2.-P. 60-67.

149. Oberbremer A., Muller-Hurtig R. Aerobic stepwise hydrocarbon degradation and formation of biosurfactans by an original soil population in a stirred reactor // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1989. -V. 31. - P. 582-586.

150. Odu C.T.I. Oil degradation and microbiological chance in soils deliberately contaminated with petroleum hydrocarbons // Inst. Petrol. 1977. - N 5. - P. 1-11.

151. Palleroni N., Kunisawa R., Contopoulou R., Doudoroff M. Nucleic acid homologies in the genus Pseudomonas // Int. J. Syst. Bacteriol. 1973. - 23, N 4. - P. 333-339.

152. Ramos C., Molina L., Ronchel M. C. et al. Field release of biologically contained soil bacteria for environmental application // JIRCAS Intern. Symp. Ser. Japan intern, research. 1997. -N 5. - P. 21-29.

153. Rhodes M.E. The characterization of Pseudomonas fluorescens //J. Gen. Microbiol. 1959.-21, N 1.-P. 221-263.

154. Rosenberg E. Biotechnical oil cleaning // Rapp. Ingenjorsvetens Kapsakad. 1985. -N278.-P. 83-96.

155. Roy J. L., McCill V. В., Rawluk M. D. Petroleum residuces as water-repellent sub-staunces in weathered nonwettable oil-contaminated soils // Canad. J. Soil Sc. -1999. V. 79, N 2. - P. 367-380.

156. Shukla O.P. Biodegradation for Environmental Management // Everyman's Sci. -1990. V.25. - N 2. - P.46-50.

157. Shussler H. Sanierrung kontaminierter boden durch microorganismen: gefundede-nes fressen // Entsorga. 1986. - B. 5, H. 4. - P. 12-13.

158. Sikkema J, De Bont J. A. M., Poolman B. Mechanisms of membrane toxicity of hydrocarbons // Microbiol. Rev. 1995. - V. 59. - N 2. - P. 201-222.

159. Sims J. L., Sims R. H., Matthews J. E. Approach to bioremediation of contaminated soil // Haz. Waste Haz. Matter. 1990. - V. 7. - P. 117-149.

160. Song H.G., Bartha R. Effects of jet fuel spills on the microbiol community of soil // Appl. Environ. Microbiol. 1990. -N 56. -P.646-651.

161. Song H.G., Wang X., Bartha R. Bioremediation potential of terrestial fuel spills // Appl. Environ. Microbiol. 1990. -N 56. -P.652-656.

162. Sorkhoh N. A., Ghannoum M. A., Ibrahim A. S. et al. Crude oil and hydrocarbon degrading strains of Rhodococcus: Rhodococcus strains isolated from soil and marine environments in Kuwait // Environ. Pollut. 1990. - V. 65. - P. 1-17.

163. Staff C.P. Mutant bacteria decontaminates spilled crude oil site // Chem. Process. (USA). 1982. - V. 45, N 14. - P.96.129

164. Stanier R.V., Palleroni N. J., Doudoroff M. The aerobic pseudomonas, a Taxonomic studu // J. Gen. Microbiol. 1966. - 43, N 2. - P. 159-271.

165. Stetzenbach L. D., Sinclair N. A. Degradation of anthracene and pyrene by soil bacteria // Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol., 1986. 86th Annu. Meet. - Washington: D. C. - 1986. - P. 302.

166. Stetzenbach L. D., Story S. P., Haldeman D. I., Army P. S. Hydrocarbon-degrading bacteria isolated from hydrocarbon contaminated sites at Johnson Atoll // Abstr. 37th Annu. Meet.Ariz. Nev. Acad. Sci., Las Vegas. - 1993. - P. 29.

167. Sullivan D. Soil remediation gains momentum // Chem. and Eng. News. 1991. -V.69, N 47. - P. 24-26.

168. Wang X., Bartha R. Effect of bioremediation on residues, activity and toxicity in soil contaminated by fuel spills // Soil Biol. Biochem. 1990. - N 22. - P. 501-505.

169. Ward A., Campoli-Richards D. M. Mupirocin A review of its antibacterial activity, pharmacokinetic properties and therapeutis use // Drugs. - 1986. - 32. - P.425-444.

170. Ward D. M., Brock T. D. Anaerobic metabolism of hexadecane in marine sediments // Geomicrobiol. J. 1978. - V.l. - P. 1-9.