Химическое исследование корней лопуха как источника биологически активных веществ противоопухолевого действия тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Боев, Роман Сергеевич

• Боев, Роман Сергеевич
• кандидат фармацевтических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Боев, Роман Сергеевич

оглавление.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ- РОД ЛОПУХ (АНСТШМ Ь.) -ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ИСТОЧНИК БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ВЕЩЕСТВ.

1.1 Систематика, ботаническая характеристика, ареал, местообитание, сырьевые ресурсы видов рода лопух (АйЛшт Ь.) .„.,.

1.2. Степень изученности химического состава лопуха.

1.3. Применение лопуха в оф и ни нал иной и народной м^прти—-

1.4. Сведения об экспериментальном изучении биологической активности прет 1аратов лопуха —.„.„.

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2,1 Объекты исследования.—.,,.

2.2. Методы исследования.„

2.2.1. Методы химического исследования.

2.2.2. Методики морфологического и микроскопического

2.2.3. Методики товароведческого исследования

2.2.4. Методики фармакологического исследования.

2.2.4. Статистическая обработка результатов-.,,.,.,

ГЛАВА 3. ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ КОРНЕЙ ЛОПУХА

3.1 Качественный и количественный анализ основных групп биологически активных веществ,.

3-2- Выделение р-асларалша И1 водного экстракта корней лопуха н установление его структуры.,,,.

глава 4 исследование фармакологических свойств и безвредности водного экстракта лопуха и выдели иного

ИЗ НЕГО Р-АСПАРАГИНА

4.1, Оценка острой токсичности-------------------,-------------------------------—~—

4.2, Исследование апоптозиндуцнруюидсЙ актннности in vilro.

4.3. Исследование противоопухолевой активности iri vitro.

4.4. Исследование воздействия водного экстракта корней лопуха и аспарагнна на перевиваемые опухоли животным.

ГЛАВА 5 РАЗРАБОТКА МЕТОДИК СТАНДАРТИЗАЦИИ КОРНЕЙ ЛОПУХА СВЕЖИХ ПО р-АСПАРАГИНУ

5.1. Методики качественного обнаружения p-аспарагнна о сырье лопуха.^

5.2. Разработка методик количественного определения (J-аспарагина в корнях лопуха.

5.3.Разработка приемов культивирования лопуха большого—.,

5.4. Изучение динамики накопления jl-аенарагина в листьях и корнях лопуха в зависимости от фазы aci еганнн н места сбора растения ..

5.5. Определение товароведческих показателей корней лопуха свежего.

5.6. Исследование морфологических и анатомических признаков корней ло пуха„.„„.

ВЫВОДЫ.—.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Химическое исследование корней лопуха как источника биологически активных веществ противоопухолевого действия»

Ак-туалысскпь темы. Применение биологически активных веществ (БАВ) растительного происхождения в герапик многих заболеваний становится с каждым годом все более актуальным. В частности, противоопухолевые лекарственные средства растительного происхождения находит широкое применение в онкологической практике. Данная тенденция развития фармакологии связана, прежде всего» с потребностями практического здравоохранения.

Преимущество использования растительных препаратов заключается в мягкости действия, малой токсичности н редком индуцировании аллергических реакций, что особенно важно в случае заболеваний, требующих длительного лечения

Корин лопуха являются официальным лекарственным сырьем [9, 10] и рекомендуются в качестве диуретического средства, В народной медицине извлечения из листьев и корней лопуха применяют как мочегонное, потогонное, кровоочистительное и противовоспалительное средства. В эксперименте доказано противоязвенное и адаптогенное действие экстракта корней лопуха.

Наше внимание привлекли работы зарубежных анторон и опыт народной медицины использования извлечений из лопуха для лечения онкологических заболеваний Доказано противоопухолевое действие зтанольного и днхлормста-нового экстрактов корней лопуха на -экспериментальных злокачественных опухолях на животных [93]. Нами установлено, что концентрированный сок, полученный из свежих корней лопуха, обладает не только пнтостатической (останавливает рост и деление опухолевых клеток), по и апонтознндуцирующей активностью (генетически программируемая гибель клеток) [7]. В связи с этим представляет интерес выделить и идентифицировать вещества, обуславливающие данные свойства концентрированного сока корней лопуха.

Цель настоящей работы: на основании химического и фармакологического исследований корней лопуха большого обосновать возможность использования водного экстракта лопуха в качестве противоопухолевого средства.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1, Методами фитохнмнческого анализа определить н корнях лопуха большого дикорастущего и культивируемого в условиях Сибири содержание основных групп биологически активных веществ.

2. Выделить из водного экстракта лопуха действующее вещество ß-аспарагин и провести его идентификацию.

3, Провести исследование противоопухолевых свойств, оценить острую токсичность водного экстракта лопуха и выделенного из чего р-аспаратина.

4. Раэрабогагь методики качественного обнаружения и количественного определения ß-эспарагнно в корнях лопуха.

5, Изучить динамику накопления ß-аспарагина в корнях лопуха в зависимости от фазы развития и места произрастания растения и определить сроки заготовки сырья.

6. Разработать проект нормативной документации (ФСП) «Лопуха корни свежие».

Научная новиана работы. Впервые проведено сравнительное фнтохнмиче-ское исследование БАВ корней лопуха большого дикорастущего и культивируемого в условиях Сибири и показана их идентичность. Из концентрированного водного экстракта корней лопуха большого впервые выделен и идентифицирован моноамид аспарзгнновой кислоты - ß-аспарагнн, структура которого доказана элементным анализом (C,H,N) и спектральными методами (ИК, ПМР), Исследована структурная (рентгеносгруктурный анализ) и оптическая изомерии (ноля-рнметрия). Впервые показано, что ß-аспарагин, выделенный из корней лопуха, обладает цитоетатнческой и апоитозиндуцирующей активностью н является одним из компонентов, обусловливающих противоопухолевое действие водного экстракта данного сырья. Доказано, что концентрированный водный экстракт корней лопуха и выделенный из него ß-аспарагин нетоксичны.

Разработаны методики качественного обнаружения н количественного определения p-аспарагина в корнях лопуха. Изучена динамика накопления р-аепарагина в корнях лопуха в зависимости от фазы вегетации и места произрастания растения, определены сроки заготовки сырья для получения биологически активных веществ противоопухолевого действия.

Практическая значимость. Показана целесообразность стандартизации корней лопуха по р-аспарагнну, Предложена методика стандартизации сырья лопуха rio содержанию p-аспарагина методом ВЭЖХ Разработан проект ФСП «.Лопуха корни свежие».

Предложен оригинальный способ получения водного экстракта лопуха и выделения и i него р-аспарагнна. Получено положительное решение о выдаче патента на нздбрстснне «Средство, обладающее цитостати ческой н апоптозинду-пирующей активностью» (J& 2005112031 от 23.10,2006 г,).

Концентрированный водный экстракт корней лопуха и выделенный из него p-аспарагнн по результатам экспериментального изучения рекомендованы для дальнейших фармакологических исследовании противоопухолевых свойств в комплексном лечении онкологических заболеваний. На основании полученных результатов предложены, зарегистрированы и налажен серийный выпуск; Б АД «Экстракт корня лопуха» (ТУ 9] 54-059-20680882-06, Свидетельство о государственной регистрации №77.99,23,3.у .8925.8.06 от 23.08.2006.). Гель «Мамовит» (ТУ-9158-015-20680882-03. Сертификат соответствия РОС RY АЮ 66 В 00761 от 07.02.06)

Нз защиту рынрсятся положения. Химический состав корней лопуха дикорастущего и культивируемого в условиях Сибири идентичен и представлен в основном полисахаридами н аминокислотами. Водный экстракт корней лопуха и выделенный из него р-аснарагии обладают противоопухолевой н антиметастатической активностью.

Апробация работы. Основные положения работы докладывались и обсуждались на Всероссийских конференциях: «Актуальные вопросы разработки и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов». Томск, 2004; «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья», Барнаул, 2005; Международном конгрессе молодых учёных «Науки о человеке», Томск, 2006; на проблемно» комиссии СибГМУ «Изыскание и изучение новых лекарственных средств. Вопросы фармации», Томск, 23.10.2006.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена как инициативное исследование в соответствии с комплексной целевой программой СО AMI I Российской федерации «Здоровье человека а Сибири» {.^государственной регистрации 01,9,2002479),

Публикации^ По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ и тезисов, m которых I статья а журнале, L положительное решение о выдаче патента на изобретение,

Структура н объем диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах и состоит ич введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, трех глав собственных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 28 таблицами и 20 рисунками. Библиографический указатель включает 135 источников литературы, из них 50 - зарубежной,

Во введении раскрыта актуальность темы, определенны цель и задачи исследования, сформулированы научная повита и практическая значимость работы,

В первой главе проведен анализ данных литературы о систематическом положении, ареале, местообитании и состоянии сырьевой базы видов рода лопух; приводятся сведения о химическом составе, применении в народной и научной медицине лопуха, экспсрнментапьных исследованиях фармакологических свойств препаратов нт лопуха.

Вторая глава посвящена характеристике объекта исследования, методик химического и фармакологического исследования, а также методик оценки подлинности н качества сырья,

В третьей главе представлены результаты изучения химического состава корней лопуха, качественное и количественное определение БАБ, выделение основного компонента ß-аспарагина и установление его структуры.

Четвертая глава посвящена исследованию противоопухолевых свойств и острой токсичности водного экстракта корней лопуха и выделенного ич него р-аспарагина.

В пятой главе представлены методики качественного и количественного определения ß-аспарагнна в корнях лопуха; обоснованы сроки заготовки корней лопуха по результатам изучения динамики накопления ß-аспарагнна в salinen мости от фазы вегетации и места сбора растения; приведены результаты разработки товароведческих показателей н методик определения подлинности сырья лопуха по внешним н микроскопическим признакам.

В Приложении представлен проект Фармакопейной статьи предприятия «Лопуха корни свежие»

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Боев, Роман Сергеевич

выводы

I В результате химического исследований свежих корней лопуха обнаружены: полисахариды (34,6± ] .5%), из них фруктозиды (6.2±0,3), фруктоза-ны (28,4*1*5), фенольные соединения (9»05±0,02%), включающие фенолокисло-ты (1,68±0,07%) и кумарниы (0,09Ю,01%); сапонины (2,52±0,13%); аминокислоты (8.82iOr36%). Установлено, что качественный состав дикорастущего и культивированного лопуха идентичны В количественном соотношении по основным группам БАВ различия незначительны.

2. Из водного экстракта свежих корней лопуха впервые выделен L-JJ-аспаратин, структура которого доказана элементным анализом, ИК- и Г1МР-спектроскопией, рентгеноструктурным анализом и нолярнмстрисн.

У. В экспериментальных исследованиях на культурах клеток (зритро-миелолейкоза К-562, карцинома Эрлнха) и на моделях перевиваемых опухолей, метастазнрующих в легкие (пигментный вариант мелаиома В (6, карцинома легких Льюиса) показано противоопухолевое действие водного экстракта корней лопуха и выделенного из него L-IJ-аспарагина,

4. Обоснована необходимость стандартизации корней лопуха свежих по аенлрагнну, как одному нз веществ, обусловливающих противоопухолевые свойства водного экстракта корня лопуха; предложены методики качественного обнаружения и количественного определения ас параш на двумя методами (упрощенный метод определения азота по Кьельдалю и метод ВЭЖХ),

5. Изучение динамики накопления аспарагнна в корнях лопуха показало, что оптимальным сроком заготовки сырья является первый месяц второго года вегетации растения.

6. С помощью анатомо-морфологического исследования установлены диагностические признаки сырья для определения его подлинности, получены достоверные фотоиллюстрации микроскопических признаков.

7. Разработаны числовые показатели сырья для цельных корней лопуха свежих: содержание аспарагнна не менее 3%; содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 40%; влажность не более 80%; золы обшей НС более 10%, золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлороводородной не более 1%; других частей растения не более 2%; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 1%,

8, На основании полученных результатов разработан проект Фармакопейной статьи предприятия «Лопуха корни свежие».

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Боев, Роман Сергеевич, 2006 год

1. Адюнжкш, К Б. Хроматоспектрофотометрнческий метод определения суммы фенолкарбоновых кислот в препарате танаиин и в соцветиях пижмы обыкновенной / К Б. Алнхолжасва И Химико-фармацевтический журнал. 1979. - Г. Х1П.№5 -СЛ13-115.

2. Бандюкова. В. А. Применение цветных реакций для обнаружения фллвонои-дов путем хроматографии на бумаге / В. А. Бандюкова И Растительные ресурсы. 1965. -Т. 1, вып. 4.-С. 591-596.

3. Бандюкова. В. А, Фенолокнслоты растений, нх зфнры и глнкозиды /В. А. Бандюкова U Химия природных соединений. 1983. - Вып. 3. - С. 263-272.

4. Беляков, К. В. Определение инулина в корневищах и корнях девясила / К. В Беляков. Д М I1опов // Фармация 1998. - - С, 34 - 36

5. Блинова, К, Ф Ботанико фармакологический словарь / К- Ф. Блинова, Г П-Яковленл - М.: Наука, 1990. - 207 с,

6. ВФС 42-2878-97 Корин лопуха.

7. ВФС 42-2879-97 Брикет корней лопуха,

8. Выделен не и анализ природных биологически активных веществ I Е, А. Краснов, Т. П. Береювкая. II. А. Акексюк н др. Томск : Изд-во I ГУ, 1987. — 184 с,

9. Горячев, М И Эфирные масла флоры СССР / М, И, Горячев Алма-Ата Изд. Академии наук Казахской ССР, 1952. - 228с.

10. ГОСТ 13496.19-93 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье, Методы определения содержания нитратов и нитритов.

11. ГОСТ 13496.4-93 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания азота н сырого протенна.

12. ГОСТ 26657-97 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания фосфора.

13. ГОСТ 30504-97 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Пламенно-фотометрический метод определения содержания калия.

14. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1 / МЗ СССР - 11-е изд., доп -М : Медицина, 1987, -336 с.

15. Государствснная фармакопея СССР, Вып. 2. - Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье ! МЗ СССР - 11 -с изд., доп. - М- : Медицина, 1989.-400 с,

16. Грнпевич. M А. Информационный поиск перспективных лекарственных растений / М- А. Гриневнч Л.: 1990. - 185 с.

17. Гринксвич, Н-И. Химический анализ лекарственных растений / Н.И. Грин-кевнч. Л.А. Сафрой нч. М. : Высшая школа, 1983. - 176 с.

18. Губсн-Венль Методы органической химии. Методы анализа / Губен-Всиль -М : Химия, 1967. -531с.

19. Губернии А. Я. Лекарственные растения Донбасса I А. Я. Губергриц. И. И. Сололченко. Донецк : 1990. - 106 с,

20. Девятиин, В А. Методы химического анализа в производстве витаминов / В-А. Девяткин. М.: 1964. - 360 с.28,Дсиюлиення к российской фармакопее ( препараты и магистраты п,н: формулы, не по-мсикнные в poccHiicvofs фармакопее). СПб- : 1910.-385 с.

21. Дорджиса% В- И. Биология размгтня лопуха бсипыиого / В. И. Дорджкева. H. 1L Баранова ИIV Мсждунар. cid,oi Новые н нстрадниношьге расгення н перспективы нх нсполъэовашм Москва, 2001, - TJ. - С 125-128,

22. Ж Дроздова. ИЛ. Аминокислотный и минеральный состав .'снспл-н лопуха > ИЛ. Дроздова // Фармация 2004 - №3 - С. 18-19.

23. Ермакова. В-А. Фармакогностическос изучение и стандартизация сборов, брикетов, растительных порошков . автореф. дне. . д-ра. фарм. наук / В.А. Ермакова. М., 1999. - 46 с.

24. Жданов, В. H Влияние извлечений из лопуха войлочного на токсические эффекты этанола и гипоксию: автореф. дне. . канд. бнол. Наук ! В. И, Жданов. Томск, 1999.-20 с.

25. Жнгвр, М. П. Мир целебных корней / М. П Жигар, Л.В.Ннколайчук Минск: Ураджан, 199Е-)76с.

26. Жизнь растений /под ред. ак. Твхтаджяк АЛ, М: Просвещение, 1981. - Т. 5. - 512с.

27. Иванов, В, Д. ФеноЛКЗрбоновые кислоты in Viburnum opulus L/ В. Д Иванов, Н. Ф. Комисаренко, Е. Я Ладыгина // Фармация, -1983 № 4 - С. 11-13.

28. Зв.Кивман, ГЛ. Проблемы нормирования микробиологической чистоты лекарственного растительного сырья / Г.Я. Кнвман, Т.Я. Шуб, B.C. Чудаева !/ Хим.-фармацевт. журнал. 1994. - № 6. - С. 60-62.

29. Ковачева И. Г. Лечение растениями 1 Н. Г. Ковалева М, Наука, 1972, -252 с,

30. Компаицева, Е.В. Идентификация и количественное определение флавонон-дов в многокомпонентном лекарственном средстве карднотонического действия / Е.В. Компанцена, А.Ю. Анранстова // Фармация. 2000. - № 1. -С.40-41.

31. Корень лопуха большого источник инулина и бнофлавоноидов / В. II Па-хомов, И, Н. Никулина, А. К. Иванов, А. А, Антонов// Человек н его здоровье. Сб. док. / Курск, гос. мед. ун-т - Курск, 1998. - С. 273-276.

32. Косгина Л А. Лечение лопухом / ЛА Костина СПб.: СДС, 2000. -160с.

33. Крылов, Г В, Козакова Н.Ф. Лагерь А.А. Растения здоровья / Г. В. Крылов, Н, Ф Козакова, А. А. Лагерь. Н.; Новосибирское книжное издательство, 1989. - 304с.

34. Крылов, II. Н. Флора Западной Сибири / П. И. Крылов. Томск : Изд. ТГУ, 1949.-Вып. 2.-3197с

35. Лагерь, А. А Лечение растениями. Фитотерапия ! А- А- Лагерь.- Красноярск : Алис, 1992. 266 с.

36. Лаптев, Ю. Г1- Растения от А до Я / Ю, Г1. Лаптев. М.: Колос, 1992, - 351 с.

37. Ж-карственно-техннчсское сырьс. Корень дщухямй /- М* Стандарт«, 1948.

38. Лилов. А П О составе масла ю семян лопуха (лрра 1) / А И- Лндов И Вестник жировых веществ. -1904. - С. 79.

39. Лунин, Ю. Л. Хроматотрафнческос разделение каротннондов растительного происхождения / Ю- Л. Лунин, Е. А. Симонова Н Хнм.-фармац. журнал. -1991.-№9,-С. 75-77.

40. ГМапку, Я. Атлас лекарственных растений ! Я. Мацку, И. Крейча Б рати слана: Издательство словацкой академии наук. 1970. - 464 с.

41. Методы анатомо-гнстохимического исследования растительных тканей : метод. пособие / сост; Г,Г. Фурст. М. 1979. - 155 с.

42. Методы исследования углеводов / под ред. А. А Харлина; пер. В. А, Несмеянова. М-; Мир, 1975. - 445 с,

43. Методы химии углеводов / под ред. Р.И. Красновой. М. : Мир, 1967. -507с.

44. Ми какова, М. Э. Фитопрепараты в комплексном лечении детских дерматозов/ М.Э. Мннакова, С.С. Кряжева, С,И, Вергазова // 7 Рос, съезд дерматологов и венерологов. Тез. докл. ■ Казань, 1996.- С. 68.

45. Мирович, В. М, Фснолкарбоиовые кислоты Origanum vulgare i

46. B. М, Мирович, В. А. Пешкова. А, П, Шатохннл И Химия природных соединений. I9S9. - №6. - С. 81-82.

47. Мкртчян, Т. А Получение пектина из лопуха (род Arctium) / Мкртчян Т. А, Снапин Г, Г //Укр, бнохнм. жури,- 1998 Т 70, №1, - С 98-105.

48. Наканнси, К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений / К Наканнси М.: Мир, 1967. - 352с,

49. Некоторые механизмы противоязвенного действия растительных лекарственных средств / О. А. Оськина, В. Г Паши некий, Т. А, Канаки на и др. И Экс пери м. и клин, фармакол 1999 - №4. - С- 37-39.

50. Полле, А. Я. Выделение и общая характеристика полисахаридов из пижмы обыкновенной, мать-и-мачехи и лопуха войлочного / А. Я. Полле, Р. Г. Ово-дова, С, В Попов // Химия растит, сырья. 1999. - № К - С. 33-38.

51. Состав летучих веществ н жирных кислот сока листьев лопуха войлочного/ Я- Ф. Копытъко, А. А. Кирьянов, Ю, В. Стихии и щ>Л Хнмнко фармацевтический журнал. - 2003 - Т. 37, №6. - С 46 - 47.

52. Софыгиа, З.П, Модели и методы, применяемые для отбора противоопухолевых препаратов в СССР и за рубежом / 3. П, Софьина // Вопросы онкологии, 1976, -Т.22, №4. - С 82 - 96.

53. Федосеева, Л. М Гистохимический анализ листьев и корней лопуха большого (Arctium Lappa L), произрастающего на территории алтайского края / Л, М. Федосеева, Н. Н. Кнауб, Т. Г. Седнгеева И Химия растительного сырья. -2004 L-C.61-64,

54. Шанкин, В. Лунан лопух культурный / В. Шайкнн // Наука н лишь. - 1997. - №5, -С 106-107.

55. Шматков, Д. А. Изучение химического состава корней лопуха большого (Arctium lappa L.) / Д. А. Шматков, Д. М. Попов // Современные проблемы фармацевтической науки н практики. Сборник научных трудов,/ НИИФ -Москва. 1999. Т. 38. - С. 305 - 308.

56. Шматков, Д. А, Использование физико-химических методов анализа для изучения химического состава, опенки качества и стандартизации корней лопуха: дне. канд. фарм. наук /ДА Шматков. Москва, 2000. - 122 с.

57. Шматков, Д. А, Определение ннулнна в корнях лопуха большого / Д. А. Шматков, К. В. Беляков, Д. М. Попов // Фармация 1998. - №6, - С- 17 -20.

58. LLTnna, И, С. О естественных границах между родами Causinia н Arctium на оснонс полинологических данных / И. С. Штэпа. Л.: -1073. - 126с.

59. В4.Юэепчук. С. В. Флора СССР / С. В. КЪепчук, Е. В. Сергиевская. М: Академия наук СССР, 1962. - Т. 27. - 352с.

60. Юханов, Д. X. Исследование растений семейства Caryophyllaceae на наличие тритерненового соединения гипсозида / Д. X. Юханов. И. Н. Сокольский, Э П. Зннкевич, В. В. Куваев // Растительные ресурсы. - 1971. - № 3. - С, 386 - 390.

61. A biologically active fructan from she roots of Arctium lappa L. / A. Kardosova, A. Ebrmgerova. J. Alfoldi et al. //1 lericulcs. Im J Bio. Macromol. 2003. - №33 -P. 135- 140,

62. Anti-inflammatory and radical scavenge effects of Arctium lappa I CC. Lin, JM. Lu, JJ Yang et al, // Am J Chin Med. 1996. - Vol. 24, № 2. - P. 127-137.

63. Anhmicrobial activity of Arctium lappa constituents against microorganisms commonly found in endodontic infections / J. Pcreira. О Bergamo. J. Pereira et al. I/ Braz Dent J. 2005. -16, Jfa3. - P. 192 - 196

64. Cytotoxic components of bardanae fruclus (Goboshi) / S, Moritani, M. Nomura, Y. Takeda, K. Miyamoto // Biol, and Pharm. Bull. 1996. - № 11. - P. 1515-1517.

65. Dombradi, C, Screening report on the antitumor activity of purified Arctium Lappa extracts / C Dombradi, S. Foldeak H Tumori. 1966 - Vol- 52. № 3, -P. 173- 17594. Duke, J A. Green Pharmacy / J A Duke. - Emmaus: Rodaje Press. 1997 - 507 p.

66. Dyuamical studies on metabolic chemistry of ligan from seeds of Arctium lappa / Y. Zheng, S, Cai, X, Xu, S. Fu J! Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 2005. - Vol, 30, № 16 - P. 1287-1289.

67. E(Tects of arctiin on PhlP-induced mammary, colon and pancreatic carcinogenesis in female Spraguc-Dawlcy rats and MelQx-induced hepatocarcinogencsis in male F344 rats / M. Mirase. T Yamaguchi, C. Lin et ■!.// Cancer Lett, 2000 - Vol. 155, №1,-P. 79-88

68. Idemification of arctigenin as an antitumor agent having the ability to eliminate the tolerance of cancer cells to nutrient starvation / S. Awale, J. Lu. S. K Kalauni, ct al. ii Cancer Res. 2006 - Vol. 66, №3. - P, 1751 -1757.

69. In vitro evaluation of the antibacterial activity of Arctium lappa as a phyto-therapeutic agent used in intracanal dressings / M. Gentil, JV. Pereira. YT. Sousa ct a I // Phytother Res. 2006 - Vol, 20, № 3, - P. 184 - 186,

70. Isolation and identification of arctiin and arctigenin in leaves of burdock (Arctium lappa L,) by polyamide column chromatography in combination with HPLC-ESI/MS / S. Liu, K. Chen. W Schliemann, D Strack // Phytochcm Anal. 2005. -Vol. 16.№2.-P. 86-89.

71. Ito, Y. Suppression of 7,12-dimcthylbenzaJanthracene-induced chromosome aberrations in tat bone marrow cells by vegetable juiccs / Y. Ilo, S. Macda, T. Sugiyama // Mutation Research 1986. - №172- P. 55- 60.

72. Kardosova, A Antioxidant activity of medicinal plant polysaccharides / Kar-dosova A, Machova E, II Fitoterapia. 2006, - Vol. 77, № 5. - P. 367 - 373.

73. Kim, S, Induction of anticarcinogenic ensyme by some Korean vegetable extracts IS. Kim. J. Kim //FASEB Journal 1997. - №3. - 369 p.

74. Koshimizu. K. Screening of edible plants against possible anti-tumor promoting activity / K. Koshimizu, H. Ohigashi. H Tokuda //Cancer Letters 1988. - .№39 -P. 247 - 257.

75. Lapinina L, Investigation of some plants to determine their sugar lowering action t L. Lapinina, T. Sisoeva // Farmatsevt. 1964. - №19 - P. 52-58108. Lewis WH. Medical botany plants affecting man's health / WH. Lewis.

76. New York: Wiley, 1977 184 p.

77. Ma dans, G. Lehrbueh der biologischcn Heilmittel; Hcilpflanzen. Ill Bd / G. Madans Leipzig: 1958. - 2674s.

78. Morita, K. Chemical nature of a desmutagenic factor from burdock (A. lappa L.j/K, Monta //Agric Biol Chem 3985, - №49 - P 925 - 932.

79. Morita, T. Dietary fiber and fat-derivatives prevent mineral oil toxicity in rais by the same mechanism / T. Morita, K. Ebihara, S- Kiriyama U J Nutr. 1993. -Vol. 123, №9 -P 1575 -1585.

80. Murao. S. Purification and characterization of Arctium lappa L- (edible burdock) polyphenol oxidase / S. Murao, H- Oyama, Y. Nomur et al Jl Biosci., Bio-technol, and Biochem, 1993. - Vol. 57, №2. - P, 177 - 180.

81. Murray, M. An Encyclopedia of Natural Medicine / M. Murray, J. Pizzomo. -Rock I in: Prima Publishing, 1 ОТ 1 360 p.

82. New sul far-containing acctylcnic compounds from Arctium lappa / T, Washino // Agric Biol Chem 1986. - № 50, - P 263 - 269,

83. Newall, C. Herbal Medicines: A guide for Health-care Professionals / C. Newall, L, Anderson, J. Phitlipson. London: The Pharmaceutical Press, 1996.- 296 p.

84. Ody, P The Complete Medicinal Herbal / P. Ody Boston: Doriing-Kindersley, 1993. - 192 p.

85. On the constituents of ihc fruit of Arctium lappa (author's transl) / S, Yamagucbi. M. Takido, U- Sankawa, S- Sbibata H Yakugaku Zasshi. 1976. -Vol. 96. № 12, - P. (492-1493.

86. Peirce, A, The American Pharmaceutical Association practical guide to natural medicines / A. Peirce. New York: William Morrow and Company, Inc., 1999. -268 p.

87. Pham, G. H. Nong nghiep cong nghiep thuc pham / G. H. Pham //Agr. and Food Ind. 1994, - №1. - P. 37-38.

88. Structural transformation of hgnan compounds in rat gastrointestinal tract / M Nose, T. Fujimoto, T. Takeda el al J! Planta Med, 1992. ■ Vol. 58, №6. P 520 -523.

89. Studies on differentiation inducers. VI. Ugnan derivatives from Arctium fruc-tus / K. Umehara, M Nakamura, T. Miyase // Client Pharm Bull. 1996. - Vol. 44, J&I2. - P. 2300 - 2304.

90. Sun, W. Determination of arcliin and arctigcnin in Fructus Arctii by reversephase HPLC / W. Sun, Z. Sha. H. Gao // Yao Xue Xue Bao. 1992, - Vol. 27, № 7, - P. 549-551.

91. Surewiez Szcwezyk. H Pharmacochemical investigations on the oil from seeds of Arctium minus (Mill.) Bernh. and Tomcntosum Mill (Compositac) / It Surewiez - Szewezyk H Pharm. Et pharmacol, - 1970. - Vol 22, №6. - P. 45 -51.

92. Suzuki, S. Stereochemical diversity in lignan biosynthesis of Arctium lappa I •! S. Suzuki, T. Umezawa, M. Shimada H Btosci Biolechnol Biochetn. 2002. - Vol. 66, №6.- P 1262-1269.

93. Tsuga. K. Burdock combine harvester / K- Tsuga // J. Japan. Soc~ Arg. 1997, - Vol. 59, № 5. - P. 127-128.

94. Urolithiasis and phytotherapy / F, Grases, G. Melero, A. Costa-Bauza et al. // International Urology & Nephrology 1994. - № 26, - P. 507 - 511.

95. Wang, H. Studies on the chemical constituents of Arctium lappa L / H. Wang . J, Yang // Yao Hsueh Hsuch Pao Acta PharmaceuUca Sinica, - 1993. - - P. 911 -917.

96. Wang, X. Application of preparative high-speed counter-current chromatography for separation and purification of arcliin from Fructus Arctii / X, Wang, F. Li, Q. Sun It J Chromatogr A. 2005. - № 21. - P. 247 - 251.

97. Xie L., Ahn E„ Akao T, Transformation of arcliin to estrogenic and antiestrogenic substances by human intestinal bacteria / L, Xie, E. Ahn, T Akao et al, // Chem Pharm Bull. 2003. - Vol . 51+ № 4 - P. 378 - 384.