Молекулярно-клеточная оценка рекомбинантных белков VP24 в механизмах вирулентности вируса Эбола тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат наук Шелемба, Арсения Александровна

• Шелемба, Арсения Александровна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Шелемба, Арсения Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1. ВИРУС ЭБОЛА, ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

1.1. Эпидемиологическая характеристика лихорадки Эбола

1.2. Патогенность вируса Эбола для видов животных

и адаптация дикого штамма вируса к новому хозяину

1.3. Клиническая характеристика лихорадки Эбола

1.4. Патогенез лихорадки Эбола

1.5. Структура генома и функции компонентов репликативного комплекса вируса Эбола

1.6. Структура и функции вирусных белков

1.7. Исследование функций вирусных белков на модели Drosophila melanogaster

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика экспериментальных животных, плазмид и рекомбинантных белков

2.2. Метод выделения мононуклеарных клеток и оценка стимулированного синтеза иммуноглобулинов

2.3. Метод выделения плюрипотентных клеток костного мозга и оценка стимулирующей гемопоэз активности рекомбинантных белков

2.4. Метод определения числа коммитированных гемопоэтических предшественников

2.5. Метод оценки индукции интерферона в системе in vivo

2.6. Метод оценки индукции интерферона в системе in vitro

2.7. Метод трансформации Drosophila melanogaster

2.8. Методы статистического анализа

Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ VP24 ВИРУСА ЭБОЛА НА ГУМОРАЛЬНЫЙ ОТВЕТ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК МОРСКИХ СВИНОК

3.1. Исследование спонтанного уровея синтеза глобулинов, стимулируемого бычьим сывороточным альбумином в культуре мононуклеарных клеток

3.2. Построение калибровочных кривых для суммарных иммуноглобулинов и для IgG

3.3. Исследование уровня синтеза суммарных

иммуноглобулинов и IgG в культуре МНК

3.4. Резюме

Глава 4. ВЛИЯНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ ВАРИАНТОВ БЕЛКА VP24 ВИРУСА ЭБОЛА НА КОЛОНИЕОБРАЗОВАНИЕ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИМИ ПРЕДШЕСТВЕННИКАМИ У МЫШЕЙ

4.1. Оценка влияния рекомбинантных белков вируса Эбола

на рост эритроидных предшественников у мышей

4.2. Оценка влияния рекомбинантных белков вируса Эбола на рост гранулоцитарно-макрофагальных

предшественников у мышей

4.3. Резюме

Глава 5. ВЛИЯНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ ВАРИАНТОВ БЕЛКА VP24

ВИРУСА ЭБОЛА НА ИНДУКЦИЮ ИНТЕРФЕРОНА

5.1. Исследование содержания противовирусных интерферонов

в сыворотке in vivo

5.2. Исследование содержания противовирусных интерферонов

в системе in vitro

5.3. Резюме

Глава 6. ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ РОЛИ МУТАЦИОННОЙ ЗАМЕНЫ В ГЕНОМЕ АДАПТИРОВАННОГО К МОРСКИМ СВИНКАМ ВИРУСА ЭБОЛА НА МОДЕЛИ

DROSOPHILA MELANOGASTER

6.1. Получение трансгенных линий Drosophila melanogaster с применением техники трансформации дрозофилы

6.2. Экспрессия ур24-д и ур24-8мс в дорзальной области

почки крылового имагинального диска

6.3. Экспрессия ур24-д и ур24-8мс в соматических тканях Drosophila melanogaster

6.4. Резюме

Глава 7. МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ МОДИФИКАЦИИ МЕХАНИЗМОВ ВИРУЛЕНТНОСТИ ВИРУСА ЭБОЛА ПРИ ВВЕДЕНИИ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ VP24 IN VIVO И IN VITRO (ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ)

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список использованных сокращений

8мс - лабораторный штамм вируса Эбола адаптированный к морским свинкам.

AJTT - аланинаминотрансфераза ACT - аспартатаминотрансфераза БОЕ - бляшкообразующая единица ВВС - вирус везикулярного стоматита ВМ - вирус Марбург ВОВ - вирус осповакцины -ВПЧ - вирусоподобные частицы ВЭ - вирус Эбола

ГМ-КСФ - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

ГНЦВБ «Вектор» - государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор».

ДВС - синдром диссеменированного внутрисосудистого свертывания. ИЕ - интерфероновые еденицы ИЛ (IL) - интерлейкин ИФН - интерферон

К5 - лабораторный штамм вируса Эбола адаптированный к морским свинкам.

ЛПС (LPS) - липополисахарид ЛЭ - лихорадка Эбола.

МА - лабораторный штамм вируса Эбола адаптированный к мышам.

МГМ - межфазный гидрофобный момент

МКА(Т) - моноклональные антитела

МНК - мононуклеарные клетки

ОП - оптическая плотность

РНП-комплекс — рибонуклеопротеиновый комплекс. СМФ - система мононуклеарных фагоцитов ТЭМ - трансмиссионная электронная микроскопия

ФНО (TNF) - фактор некроза опухолиРЭС - ретикулоэндотелиальная система

ЦПД - цитопатогенное действие

1§А, - иммуноглобулины классов А, в, М.

Ша - килодальтон

Ь, вР, ур40, ур35, урЗО, ур24 - структурные белки ВЭ МНС - главный комплекс гистосовместимости Р1 - фосфадилинозитол РС - фосфатидилхолин

- додецилсульфат натрия БМ - сфингомиелин

-и8АММЮ---инсти-ту-т-инфек-ционных-болезней-армии-США-

ур24-д - рекомбинантный белок ур24 ВЭ в конфигурации, соответствующей дикому штамму ВЭ.

ур24 - рекомбинантный белок ур24 ВЭ в конфигурации, соответствующей штамму 8мс.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-клеточная оценка рекомбинантных белков VP24 в механизмах вирулентности вируса Эбола»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Лихорадка Эбола относится к одному из наиболее опасных и тяжелых вирусных инфекционных заболеваний, летальность при которой достигает 88%. Нарастание миграционных тенденций в мире сопровождается распространением ряда опасных инфекций на неэндемичные территории. Несмотря на значительные усилия ученых многих стран по разработке методов специфической профилактики и лечения лихорадки Эбола, следует отметить, что в настоящее время такие средства еще не созданы. Одной из причин этого является недостаточное понимание биологии вируса Эбола (ВЭ). Сложность организации исследований такого опасного возбудителя, как ВЭ, может быть частично компенсирована исследованием его отдельных генов и белков, безопасность которых многократно продемонстрирована (Elliott L. et al., 1985; Elliott L. et al., 1993; Licata J. et al., 2004).

Эффективным методическим приемом изучения патогенеза и функций генома ВЭ является селекция вирулентного штамма для морской свинки и сравнение дикого и полученного в результате селекции штаммов. Показано, что природные высоковирулентные для человека штаммы ВЭ слабо патогенны для морских свинок и мышей (van der Groen G. et al., 1979; Bowen E.T. et al., 1980), но в результате серии слепых пассажей удается получить измененный штамм ВЭ, высоко летальный для этих видов (Чепурнов А.А. и др., 1995; Bray М. et al., 1996; Ryabchikova Е. et al. 1996; Conolly B.M. et al., 1999). Данный подход позволил получить не только дешевую и удобную модель для изучения биологии ВЭ и разработки средств профилактики болезни Эбола, но и стал очень удобным для изучения генетических факторов вирулентности ВЭ.

В результате сравнения нуклеотидных последовательностей геномов исходного штамма ВЭ и адаптированного для морских свинок (штамм 8мс) (Volchkov V. et al., 2000), а также исходного и адаптированного для мышей (штамм MA) (Hart М.К., 2003) были выявлены нуклеотидные замены, опосредующие собственно изменение вирулентности для этих видов животных. Сопоставление работ (Волчков В.Е. и др., 2000; Субботина Е.Л. и др., 2010) позволяет картировать фактор вирулентности ВЭ для морских свинок генами белков NP и vp24. Критичной является замена в vp24, установлена ее локали-

зация. Показано, что в двух независимо проведенных адаптациях замены были в двух последующих позициях: His на Туг в позиции 186 для штамма 8мс и Thr на Не в соседней позиции 187 для штамма К5 (Volchkov V.E. et al., 2000). Установлена значимость нуклеотидной замены в vp24 для изменения вирулентности ВЭ (Mateo М. et al., 2011).

Успехи в клонировании белков ВЭ в составе экспрессирующих векторов и разработке рекомбинантных конструкций на основе его геномной РНК создали предпосылки для изучения биологических свойств конкретных вирусных белков. Получен доступ к изучению путей реализации патогенного потенциала ВЭ. Этот подход был использован нами для изучения модулирующих свойств белка vp24, полученного в рекомбинантных конструкциях, содержащих ген этого белка в оригинальной или измененной в результате адаптации последовательности.

Нарушение гуморального иммунного ответа относится к важным факторам патогенности ВЭ (Peters C.J. et al., 1996). Поэтому мы сочли важным исследовать возможную взаимосвязь особенностей гуморального ответа на ВЭ с выявленными отличиями в геноме авирулентного и вирулентного для морских свинок штаммов ВЭ. Для этого мы использовали рекомбинантные белки vp24 обоих вариантов ВЭ для стимуляции пула мононуклеарных клеток здоровых интактных животных и последующей оценки продукции специфических антител.

Ранее было показано, что антиген ВЭ способен непосредственно влиять на активность гематопоэтических предшественников у человека, ингибируя рост эритроидных колоний (Чепурнов А.А. и др., 1997). Поэтому при оценке биологической роли отличий, выявленных в структуре генома и белка vp24 в вирулентной и авирулентной конфигурациях, важно было оценить потенциальную роль в этом процессе белка vp24 и способность отличий в конфигурации вариантов этого белка влиять на модуляцию иммунопоэза. С этой целью было исследовано влияние вариантов этого белка на колониеобразую-щую активность гематопоэтических предшественников у мышей.

Показана значимость интерфероновой блокады в инфекции мышей, зараженных адаптированным к ним ВЭ (Bray М., 2001). Позднее была продемонстрирована корреляция между уровнем вирулентности вируса и его способностью подавлять ИФН-зависимый противовирусный ответ (Ebihara Н. et

al., 2006). Поэтому важно было оценить потенциальное влияние белка vp24 и его модификаций на индукцию интерферона.

Важное значение имеет проведение исследований по выяснению влияния встройки разных вариантов гена vp24 непосредственно в трансгенную животную модель, например, в Drosophila melanogaster. Изменение вирусного генома, коррелирующее с возрастанием вирулентности, должно сопровождаться изменением некоторых физиологических реакций, поэтому мы использовали геном белка vp24 в исходной и измененной последовательности для оценки функциональной роли этих отличий. Конструирование трансгенных особей Drosophila melanogaster является перспективным подходом к изучению функциональной роли генов, выполняющих общие для всех клеток функции в соматических и генеративных тканях (Spresser C.R., Carlson К.А., 2005; Wong S.L. et al., 2005).

Цель исследования - изучение биологической роли рекомбинантных белков vp24 в механизмах вирулентности вируса Эбола.

Задачи:

1. Определить содержание суммарных иммуноглобулинов и IgG в сыворотке морских свинок при стимуляции рекомбинантными белками ВЭ ур24-д и ур24-8мс.

2. Исследовать направленность и уровень воздействия рекомбинантных аналогов vp24 на пролиферацию клеток-предшественников гранулоци-тарно-макрафагального и эритроидного ростков у мышей.

3. Исследовать способность рекомбинантного белка vp24 в вирулентной и авирулентной для морских свинок конфигурациях воздействовать на индукцию интерферона in vivo и in vitro.

4. Используя технику трансформации, получить трансгенные линии Drosophila melanogaster, содержащие геномные встройки, кодирующие белок vp24 ВЭ дикого типа и белок ур24-8мс.

5. Исследовать экспрессию созданных трансгенных конструкций в различных органах и тканях Drosophila melanogaster.

Научная новизна работы. Впервые создана трансгенная модель Drosophila melanogaster, содержащая геномные встройки, кодирующие белок vp24 ВЭ дикого типа и мутантный белок ур24-8мс с заменой His на Туг в позиции 186, для оценки функциональной роли этой замены.

Впервые на модели Drosophila melanogaster изучены клеточные функции белков ВЭ в исходной (штамм Заир) и модифицированной (штамм 8мс) конфигурации. Ни в одном из проведенных скрещиваний визуально не выявлено фенотипических отличий от исходных линий, что может свидетельствовать о том, что исследуемый ген не является геном общего действия, а нарушает некую специфическую функцию млекопитающих.

Впервые проведено исследование влияния рекомбинантных аналогов вирулентной и авирулентной конфигурации белка vp24 ВЭ на интерфероно-генез. Показано, что рекомбинантные аналоги белков ур24-д и ур24-8мс, представляющие белок vp24 ВЭ в авирулентной и вирулентной для морских свинок конфигурации, ингибируют интерфероногенез in vivo и in vitro. При этом не выявлено отличий в способности к ингибированию между этими двумя конфигурациями белков. Продемонстрировано отсутствие супрессор-ного эффекта для vp24 ВЭ в отношении В-клеток.

Впервые исследованы модулирующие свойства вариантов белка vp24 ВЭ на гемопоэз. Показана способность белка vp24 оказывать негативное воздействие на пролиферацию клеток-предшественников гранулоцитарно-мак-рофагального ростка и выявлен более супрессивный эффект вирулентной для морских свинок конфигурации ВЭ.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты настоящего исследования вносят вклад в понимание роли белка vp24 ВЭ в патогенезе лихорадки Эбола. Получены линии мух, несущие последовательности, кодирующие ген белка vp24 штаммов Заир и 8мс вируса Эбола в векторе pUAST. Это позволяет исследовать экспрессию трансгенных конструкций в различных органах и тканях Drosophila melanogaster.

Рекомбинантные белки ур24-д и ур24-8мс, представляющие белок vp24 ВЭ в авирулентной и вирулентной для морских свинок конфигурации, ингибируют интерфероногенез in vivo и in vitro, что делает их перспективным им-муномодулятором. Выявленная способность белка vp24 к ингибированию пролиферации клеток-предшественников гранулоцитарно-макрофагального ростка имеет большое значение для выбора тактики лечения лихорадки Эбола.

Положения, выносимые на защиту.

1. Белок vp24 вируса Эбола не обладает супрессирующим эффектом в

отношении B-лимфоцитов и стимулирует продукцию специфических антител в культуре мононуклеарных клеток морской свинки.

2. Рекомбинантные белки vp24 ВЭ не влияют на колониеобразование эритроцитарного ростка у мышей, но подавляют пролиферацию клеток-предшественников гранулоцитарно-макрофагального ростка.

3. Рекомбинантные белки vp24 вируса Эбола в вирулентной и авиру-лентной для морских свинок конфигурации ингибируют индукцию интерферона in vivo и in vitro в одинаковой степени.

4. Микроинъекции плазмид pUAST/ ур24-д или pUAST/ ур24-8мс в эмбрионы Drosophila melanogaster позволяют получать линии мух, несущих последовательности, кодирующие различные штаммы геморрагической лихорадки Эбола - 8мс и Заир в векторе pUAST. Отсутствие в проведенных скрещиваниях визуальных отличий от исходных линий свидетельствует, что исследуемый ген не является геном общего действия.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на международных и российских конференциях: Third European Congress of Virology (Nürnberg, Germany, 2007); Winter College on Micro and Nano Photonics for Life Science (Trieste, Italy, 2008); Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине: Геномика, протеомика, биоинформатика (Новосибирск, 2011); межлабораторной научной конференции в ФГБУ «Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики» СО РАМН (Новосибирск, 2014); межлабораторной научной конференции в ФГБУ «Научно-исследовательский институт региональной патологии и па-томорфологии» СО РАМН (Новосибирск, 2014).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 5 - в журналах по списку ВАК.

1. Зубавичене Н.М., Шелемба-Чепурнова A.A., Чепурнов A.A. Гемолитическая активность комплемента при экспериментальной лихорадке Эбола // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2010. - Т. 92, № 1. - С. 22-25.

2. Чепурнов A.A., Сизикова Л.П., Шелемба-Чепурнова A.A., Шестопалова JI.B. Оценка репродукции вируса Эбола в организме взрослых ICR мышей // Вопросы вирусологии. - 2010. - Т. 55, № 4. - С. 33-38.

3. Шелемба-Чепурнова A.A., Омельянчук JI.B., Чепурнов A.A. Изучение функциональной роли мутаций в геноме вируса Эбола, адаптированном к морским свинкам на модели Drosophila melanogaster // Вопросы вирусологии. - 2011. - Т. 56, № 1. - С. 37-40.

и

4. Шелемба A.A., Колесников С.И. Влияние рекомбинантных вариантов белка vp24 вируса Эбола на индукцию интерферона // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра. - 2011. - № 1 (77), часть 1. - С. 255-259.

5. Шелемба A.A., Гуляева Л.Ф. Исследование влияния рекомбинантных белков vp24 вируса Эбола на гуморальный ответ мононуклеарных клеток морских свинок // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра. - 2011. - № 6 (82). - С. 182-186.

6. Arseniya Shelemba-Chepurnova, Leonid Omelyanchuk, Ekaterina Subbotina, Alexander Chepurnov An attempt of "in vivo" functional characterization of the Ebola Zaire virulence-associated changes at vp24 gene in Drosophila // Third European Congress of Virology. - Nürnberg. Germany, 2007. - Abstr. #01912.

7. Shelemba-Chepurnova A.A., Omelyanchuk L.V. Investigation of cells properties using optical methods // Winter College on Micro and Nano Photonics for Life Sciences. - Trieste. Italy, 2008.

8. Шелемба A.A., Гуляева Л.Ф., Иммуномодулирующие свойства рекомбинантных вариантов белка vp24 Вируса Эбола // II международная научно-практическая конференция «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине: геномика, протеомика, биоинфоратика». - Новосибирск, 2011. - С. 58.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1. ВИРУС ЭБОЛА, ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

В 1976 году, в республике Заир (Конго) развилась вспышка тяжелой геморрагической лихорадки, вызванной неизвестным возбудителем. Проведенные исследования позволили изолировать и описать новый вирус, названный по имени небольшой реки в Заире, недалеко от места его выделения -Эбола [Johnson K.M. et al., 1977]. Почти одновременно вспышка аналогичного заболевания развилась в соседнем Судане. Изолированный возбудитель в обоих случаях морфологически представлял собой длинную цилиндрическую структуру, часто свернутую в причудливую конфигурацию, морфологически очень сходную лишь с одним, известным к тому времени вирусом -Марбург.

Вирусы Эбола и Марбург отличаются серологически, однако уникальная нитевидная морфология вирионов обоих вирусов дала снование объединить их новое семейство филовирусов {Filoviridae) (от латинского filium -нить). Вирусы Эбола и Марбург составляют два рода этого семейства, причем на первых порах в роду Эбола выделяли два вида Эбола Заир и Эбола Судан, отличавшихся уровнем летальности и некоторыми другими свойствами. Позднее род Эбола пополнился видами Рестон, Берег Слоновой Кости, Уганда. Геном филовирусов составлен негативной одноцепочечной РНК. В настоящее время международный комитет по таксономии вирусов (ICTV) относит семейство Filoviridae к порядку Mononegavirales и включает в род Ebolavirus пять видов: Zaire ebolavirus (ВЭ-Заир), Sudan ebolavirus (ВЭ-Судан), Reston ebolavirus (ВЭ-Рстон), Ivory Coast ebolavirus и Bundibugyo ebolavirus. Род Марбург представлен одним видом Lake Victoria marburgvirus.

1.1. Эпидемиологическая характеристика лихорадки Эбола

Как отмечено выше, вспышки лихорадки Эбола впервые зарегистрировали на юге Судана и на севере Заира в июне-ноябре 1976 года [WHO, 1978а, 1978Ь]. В Заире заболели 318 человек, из них 280 (88%) умерли. В эпидемию было вовлечено 55 поселений с центром в деревне Ямбуку. В Судане вспышка зарегистрирована в небольших городах Нзара, Мариди, Тембура. Всего

было зарегистрировано 284 случая заболевания, 151 из которых закончились летально (53%). Название реки в Заире, в районе деревни Ямбуку, где был выделен первый штамм вируса-возбудителя [Johnson K.M. et al., 1977], послужило основой для наименования болезни и вируса - его этиологической основы. Вирус был выделен из взятой на 5-й день заболевания крови больной из Заира [Johnson K.M. et al., 1977].

Морфологически изолят ВЭ был идентичен ранее открытому вирусу Марбург [Johnson K.M. et al., 1977; Murphy F.A. et al., 1978]. Частицы вируса Эбола при электронной микроскопии выглядят как длинные филаментозные формы, плеоморфны - иногда с интенсивным ветвлением, могут образовывать "U''-образные, в виде цифры 6, или циркулярные формы [Ellis D.S.et al., 1978]. Вирус Эбола, при относительно стабильном диаметре около 80 нм значительно варьирует по длине, достигая более 1000 нм. Пик инфекционно-сти, приходится на вирионы с длиной 970 нм. Коэффициент седиментации составляет около 1400S. Изучение генома показало, что каждая частица содержит одноцепочечную негативную вирусную РНК. Нуклеокапсид спиральный, окружен липопротеиновой мембраной. На поверхности вириона имеются формируемые трансмембранным гликопротеином шипы 7 нм длиной, расположенные спирально с интервалом 10 нм.

Патогенные для человека виды ВЭ локализованы в центральной и северо-западной части Африканского континента - территории Конго, Судана, Уганды. В 1994 г. в Кот-д'Ивуар (Берег Слоновой Кости) от больной обезьяны был выделен слабопатогенный для человека ВЭ - Берег Слоновой Кости. Единственным неафриканским представителем семейства до настоящего времени остается ВЭ-Рестон, в 1996 г. завезенный в США с обезьянами из Филиппин и не продемонстрировавший патогенности для человека.

Еще с момента первой зарегистрированной вспышки 1976 г. отмечено значительное превышение уровня летальности при заражении людей ВЭ-Заир, чем уровни смертности при вспышках, вызванных другими видами ВЭ. ВЭ-Заир вызывает острую геморрагическую лихорадку, которая может приводить к летальному исходу в течение нескольких дней в 88% случаев заражения. К настоящему времени зарегистрировано тринадцать эпидемических вспышек лихорадки Эбола (табл. 1). Все они ассоциированны с двумя видами ВЭ: ВЭ-Заир и ВЭ-Судан и происходили на территориях западной и цен-

тральной Африки. Специалисты выделяют цикличность эпидемической активности, отмечая три волны: 1976 - 1977, 1994 - 1997 и 2001 - 2007 г. (Pourrut X. et al., 2005). Эпидемия 2002 - 2003 г., отмеченная в Конго и Габоне, во время которой погибло свыше 150 человек, сопровождалась массовыми эпизоотиями среди обезьян, обитавших на территории национальных парков.

| Таблица 1. Вспышки и эпизодические случаи лихорадки Эбола ! http;//www.cdc.gov/ncidod/dvrd/spb/mnpages/disг)ages/ebola/ebolatable.htm (данные на 6 февраля 2013 г.)

Страна Год Вид ВЭ Число заболевших людей % летальных исходов

Судан 1976 ВЭ-Судан 284 53%

Демократическая республика Конго(Заир) 1976 ВЭ-Заир 318 88%

Англия 1976 ВЭ-Судан 1 0%

Заир 1977 ВЭ-Заир 1 100%

Судан 1979 ВЭ-Судан 34 65%

США 1989 ВЭ-Рестон 0 0%

США 1990 ВЭ-Рестон 0 0%

Италия 1992 ВЭ-Рестон 0 0%

Габон 1994 ВЭ-Заир 49 59%

Берег Слоновой Кости 1994 ВЭ-Берег Слоновой Кости 1 0%

Демократическая республика Конго(Заир) 1995 ВЭ-Заир 315 81%

Габон 1996 ВЭ-Заир 31 68%

Габон 1996 ВЭ-Заир 60 75%

Южная Африка 1996 ВЭ-Заир 2 50%

США 1996 ВЭ-Рестон 0 0%

Филиппины 1996 ВЭ-Рестон 0 0%

Уганда 2000-2001 ВЭ-Судан 425 53%

Габон и ДРК 2001-2002 ВЭ-Заир 122 79%

Судан 2004 ВЭ-Судан 17 41%

Россия 2004 ВЭ-Заир 1 100%

Демократическая республика Конго (Заир) 2007 ВЭ-Заир 264 71%

Уганда 2007-2008 ВЭ-Бундибугио 149 25%

Филиппины 2008 ВЭ-Рестон 6 бессимптомно 0%

Демократическая республика Конго (Заир) 2008-2009 ВЭ-Заир 32 47%

Уганда 2011 ВЭ-Судан 1 100%

Исследование сывороток аборигенов и ретроспективный анализ банков крови позволили выявить антитела против ВЭ, в том числе и в тех странах Африки, где случаи геморрагической лихорадки Эбола не регистрировались. Исследователи выявили антитела против ВЭ у жителей Камеруна [Bergmann J.F. 1981], Либерии [Knobloch J. et al., 1982], Северной Родезии и Республики Конго [van der Groen G., 1984], Центрально-Африканской Республики [Georges A.J. et al., 1989]. Это дало основание предположить циркуляцию в этих районах непатогенных штаммов ВЭ.

Изучение сывороток банка крови, собранных в Заире в 1972 г., показывает, что ВЭ циркулировал в Заире еще за четыре года до регистрации первой масштабной вспышки [Иванов А.П. и др., 1986; van der Groen G., 1984]. Такие же результаты получены при исследовании сывороток крови пациентов, собранных в Эфиопии в 1961 - 1962 г. [Tignor G.H. et al, 1993]. Отсутствие лихорадочных состояний в анамнезе многих людей с выявленными антителами против ВЭ позволило предположить наличие апатогенных для человека штаммов ВЭ, вызывающих субклиническую форму заболевания [Chepurnov A.A. et al., 2003].

Важнейшей эпидемиологической проблемой болезни Эбола остается природный резервуар возбудителя. Хотя в большинстве случаев лихорадки Эбола (ЛЭ) с выявленным источником инфекции таковыми являлись обезьяны (использование в пищу инфицированного животного, тактильный контакт с трупом животного), дикие приматы не являются природным резервуаром ВЭ (Leroy Е et. al., 2005). В поисках природного резервуара были исследованы сотни видов фауны и даже флоры эндемичных регионов, однако до настоящего времени отсутствуют надежные доказательства, в какой системе сохраняется данный вирус. К настоящему времени наиболее вероятными претендентами на эту роль являются представители семейства рукокрылых (Leroy Е et. al., 2005; Biek R. et al., 2006).

Важным эпидемиологическим обстоятельством являются также накопленные сведения о совпадающих или не совпадающих по времени с эпидемиями в человеческой популяции вспышки в популяциях приматов (шимпанзе, горилл, мандрилов), а также некоторых других диких млекопитающих (кистеухих свиней, антилоп), ареалы обитания которых совпадают с охваченными эпидемией или могут находиться на прилегающих территориях

(Lahm S.A. et al., 2007; Leroy E.M. et al., 2004). От павших животных выделяли ВЭ, геном которых отличался от изолятов, выделенных от людей в тот же период. Наиболее вариабельными при этом были гены GP и NP. Можно предположить циркуляцию одновременно несколько вариантов ВЭ, имеющих различный источник (Leroy E.M. et al., 2004). При этом показано, что вспышки среди горилл и шимпанзе оказывают сильное влияние на структуру и численность популяций этих животных, являясь значительно более важным регулирующим фактором, чем в человеческой популяции (Walsh P.D. et al., 2003; Bermejo E.M. et al., 2006; Caillaud D. et al., 2006; Lahm S.A. et al., 2007), что указывает на возможные проявления эпизоотий лихорадки Эбола, не взаимосвязанные с эпидемическими вспышками лихорадки Эбола среди людей.

1.2. Патогенность вируса Эбола для видов животных и адаптация дикого штамма вируса к новому хозяину

Вирус Эбола, обладая высочайшей вирулентностью для человека и человекообразных приматов, апатогенен к другим видам животных. Лишь у новорожденных белых мышей ВЭ-Заир вызывает параличи и гибель, развивающиеся в течение 7-12 дней. Это позволяет использовать новорожденных белых мышей (не старше двух-трех дневного возраста) для проведения биологического титрования вирусного материала и постановки реакции нейтрализации [Van der Groen G. et al., 1979; Kurata T., et al., 1984]. При этом отмечено накопление ВЭ в ткани головного мозга и печени [Van der Groen G. et al., 1984].

ВЭ-Судан вызывает гибель мышей-сосунков лишь в части случаев. Клинические признаки болезни можно наблюдать и у части морских свинок, инъекционно инфицированных ВЭ. Заболевание проявляется в повышении ректальной температуры на 1 - 1,5°С и заканчивается полным выздоровлением в течение 3-5 дней [Чепурнов A.A. и др., 1995]. Однако посредством пассажей с отбором наиболее ярко температурящих животных удается в течение 5-7 пассажей получить штамм, вызывающий гибель всех зараженных животных [Чепурнов A.A. и др., 1995; Ardouin Ch., Chevalier G.-M., 1981; Ryabchikova E. et al. 1996; Connolly B.M. et al., 1999]. Процедура пассажей на лабораторных животных с целью модификации вируса для нового хозяина называется адаптацией, а получаемый таким образом штамм вируса - адап-

тированным. Белые мыши старше 3-5 дней имеют низкую восприимчивость к инфекции Эбола, но путем проведения селективных пассажей на мышах с прогрессивным увеличением возраста особей М.Вгау и соавт. [1996] адаптировал ВЭ для мышей.

По мнению исследователей, патогенетические отличия дикого и адаптированного к морским свинкам штаммов реализуются следующим образом. При нелетальной инфекции Эбола у морских свинок вирус размножается только в макрофагах и моноцитах, вызывая очаговое гранулемоподобное воспаление в печени (Рябчикова Е.И. и др. 1993; Ryabchikova Е. et al., 1996). При инфекции адаптированным штаммом инфицируются как макрофаги и моноциты, так и гепатоциты и другие стромальные клетки [Чепурнов A.A., Шестопалова Л.В., 2010].

Молекулярную основу адаптации ВЭ к морским свинкам оценивали, сравнивая геном исходного и адаптированного к морским свинкам штаммов (Volchkov Е. et al., 2000). Адаптированный к морским свинкам ВЭ штамм 8мс отличался от ВЭ дикого типа наличием в геноме восьми мутаций. Одна в некодирующей белок области гена vp30. Две синонимичные мутации в гене NP. Нуклеотидные замены, приводящие к смене аминокислотных остатков, обнаружены в гене NP (U—>С в позиции 2411) и гене L (A—>G в позиции 14038). Три мутации приводили к смене аминокислотных остатков в белке vp24 G->A (10557), U-^C (10784), C^U (10904). В гене GP обнаружена ин-серция одного нуклеотидного остатка в сайте редактирования, приводящая к сдвигу рамки считывания.

На основании полученных данных, в частности снижения электрофоре-тической подвижности белка в денатурирующих условиях, В.Волчков и соавт. [2000] связали изменение вирулентности ВЭ для морских свинок с точечными мутациями в гене vp24. Наиболее значимой заменой представлялась С—>U (10904), приводящая к изменению (Thrille) в позиции 187, поскольку в повторном эксперименте по адаптации ВЭ к морским свинкам замена обнаружена в соседней позиции 186, приводящей к замене His в нелетальной конфигурации на Туг в летальной.

Аналогичная работа по адаптации ВЭ к мышам была проведена М.Вгау и соавт. [1996]. Анализ появившихся в процессе адаптации изменений генома выявил появление девяти точечных нуклеотидных замен по сравнению с ис-

ходным ВЭ [ЕЬШага Н. е1 а1., 2006]. По одной значимой нуклеотидной замене было найдено в генах ур35 С^и (3163), ур24 С-*и (10493) и №> А-^в (683) и две - в гене Ь: И—>0 (14380), А—Ю (16174). Две мутации были обнаружены в нетранслируемых участках генома и две синонимичные нуклеотидные замены присутствовали в генах 1МР и Ь.

Оценка значимости каждой из обнаруженных мутаций для изменения вирулентности ВЭ для мышей проведена с использованием системы обратной генетики, позволяющей реконструировать вирусные частицы. Это позволило исследовать патогенные свойства модифицированного, оживленного ВЭ, геном которого содержит исследуемые мутации, как по отдельности, так и в различных сочетаниях. Показано, что одновременное присутствие двух мутаций в генах ИР и ур24, является определяющим для проявления высоковирулентных свойств ВЭ для мышей.

1.3. Клиническая характеристика лихорадки Эбола

М.А.Влуака и соавт. (1999) приводят описание клинической картины лихорадки Эбола на основании анализа наблюдений за 103 пациентами, госпитализированными во время вспышки 1995 г. в Демократической Республике Конго. В сводной табл. 2 проанализированы симптомы, зарегистрированные у пациентов, и частота их встречаемости у погибших и выживших.

Наиболее характерным признаком является резкое повышение температуры тела. Перемежающаяся температура и ее нормализация накануне смерти типичны для этой болезни. К первичным симптомам также относятся выраженная астения, диарея, тошнота и рвота, потеря аппетита, боли в животе и головные, артралгии, миалгии, поясничные боли. После нескольких дней относительно легкого течения состояние пациентов резко ухудшалось. Появлялись двусторонние повреждения конъюнктивы, макуло-папулезная сыпь и боли в горле, особенно при глотании (одинофагия). Сыпь, начинаясь с пере-ферических частей тела, быстро переходила в сливную.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шелемба, Арсения Александровна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Борисевич И.В., Михайлов В.В., Краснянский В.П., Градобоев В.Н., Лебединская Е.В., Потрываева Н.В., Тиманькова Г.Д. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Эбола // Вопросы вирусологии.

- 1996а. - Т. 40, № 6. - С. 270-273.

2. Борисевич И.В., Михайлов В.В., Потрываева Н.В., Малинкин Ю.Н., Кириллов А.П., Краснянский В.П., Марков В.И., Махлай A.A., Лебединская Е.В. Разработка иммуноферментной тест-системы для определения антигена вируса Эбола // Вопросы вирусологии. - 19966. - Т. 41, № 5. - С. 232-234.

3. Дадаева A.A., Сизикова Л.П., Жуков В.А., Чепурнов A.A. Динамика иммунологических показателей у морских свинок при введении различных препаратов вируса Эбола // Вопросы вирусологии. - 1998. - №.4. - С. 163-169.

4. Дедкова Л.М., Кудоярова Н.М., Чепурнов A.A., Офицеров В.И. Состав и иммунохимические свойства иммуноглобулинов козы, генерированных против вируса Эбола // Вопросы вирусологии. - 1994. - Т. 39, №5. - С. 229-232.

5. Ершов Ф.И., Парфенов В.В. Методические указания по изучению специфической активности интерферонов и индукторов интерферонов // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: Ремедиум, 2000. - С. 281-286.

6. Зубавичене Н.М., Чепурнов A.A. Динамика комплемента при экспериментальной инфекции Эбола // Вопросы вирусологии. - 2004. - Т. 49, № 2. -С. 21-25.

7. Иванов А.П., Ткаченко Е.А., ван дер Гроен Г., Бутенко A.M., Константинов O.K. Непрямой иммуноферментный метод для лабораторной диагностики геморрагических лихорадок Ласса и Эбола // Вопросы вирусологии.

- 1986.-№2.-С. 186-190.

8. Кэтти Д., Райкундалиа Ч. // Антитела. Методы. Под ред. Д.Кэтти. -М.: Мир, 1991.-Кн. 2.-С. 155-157, 195.

9. Лучко C.B., Дадаева A.A., Устинова E.H., Сизикова Л.П., Рябчикова Е.И., Сандахчиев Л.С. Экспериментальное изучение геморрагической лихорадки Эбола на модели павианов-гамадрилов // Бюл. экспер. биол. мед. -

1995. - T. CXX, № 9. - С. 302-304.

10. Маниатис T., Фрич Э., Сэмбрук Дж. // Молекулярное клонирование: методы генетической инженерии. - М.: Мир, 1984. - С. 479.

П.Мерзликин Н.В., Чепурнов A.A., Истомина H.H., Офицеров В.И., Воробьева М.С. Развитие и применение иммуноферментной тест-системы для диагностики лихорадки Эбола // Вопросы вирусологии. - 1995. - Т. 40, № 1.-С. 31-35.

12. Омельянчук JI.B., Юдина О.С. Drosophila melanogaster как модель для изучения функционирования белков вирусов животных // Генетика. -2011.-Т. 47, №4.-С. 1-5.

И.Перебоева J1.A., Ткачев В.К., Колесникова JI.B., Кренделева Л.Я., Рябчикова Е.И., Смолина М.П. Ультраструктурные изменения в органах морских свинок при последовательном пассировании вируса Эбола // Вопросы вирусологии. - 1993. - Т. 38, № 4. - С. 179-182.

14. Пьянков О.В., Сергеев А.Н., Пьянкова О.Г., Чепурнов A.A. Экспериментальная лихорадка Эбола у макак-резусов // Вопросы вирусологии. -1995. - № 3. - С. 113-115.

15. Рябчикова Е.И. Морфофункциональные аспекты патогенеза фило-вирусных геморрагических лихорадок: Дис. докт. ... биол. наук. - Кольцово, 1997.-Т.1.-210 с.

16. Рябчикова Е.И., Баранова С.Г., Ткачев В.К., Гражданцева A.A. Морфологические изменения при Эбола-инфекции у морских свинок // Вопросы вирусологии. - 1993. - Т. 38, № 4. - С. 176-179.

17.Титенко A.M., Андаев Е. И., Борисова Т.И. Динамика экспрессии антигенов вирусов Марбург и Эбола в инфицированных клетках Vero // Вопросы вирусологии. - 2001. - № 6. - С. 43-45.

18. Титенко A.M., Андаев Е. И., Борисова Т.И. Определение специфических антител к вирусам Эбола и Марбург методом клеточного иммуно-ферментного анализа // Биотехнология. - 2002. - № 2. - С. 75-78.

19. Чепурнов A.A., Мерзликин Н.В., Рябчикова Е.И., Воробьева М.С. Получение очищенного вируса Эбола // Вопросы вирусологии. - 1994а. - Т. 39, №6.-С. 254-257.

20. Чепурнов A.A., Мерзликин Н.В., Чепурнова Т.С., Воробьева М.С. Создание кроличьей антисыворотки к вирусу Эбола // Вопросы вирусологии.

- 19946. - Т. 39, № 6. - С. 286-288.

21.Чепурнов А.А., Тюнников Г.И., Чернухин И.В. Влияние инактиви-рованного вируса Эбола на колониеобразующую активность гемопоэтиче-ских предшественников у человека // Вопросы вирусологии. - 1997. - № 2. -С. 91-92.

22. Чепурнов А.А., Чернухин И.В., Терновой В.А., Кудоярова Н.М., Махова Н.М., Азаев М.Ш., Смолина М.П. Попытка получения вакцины против лихорадки Эбола // Вопросы вирусологии. - 1995. - Т. 40, № 6. - С. 257260.

23. Чепурнов А.А., Шестопалова JI.B. Генетические и патофизиологические факторы вирулентности вируса Эбола. - Новосибирск: Наука-центр, 2010. - 150 с.

24. Abrams J.M., White К., Fessler L.I., Steller Н. Programmed cell death during Drosophila embryogenesis // Development. - 1993. - Vol. 117 (1). - P. 2943.

25. Adam В., Lins L., Stroobant V. et al. Distribution of hydrophobic residues is crucial for the fusogenic properties of the Ebola virus GP2 fusion peptide // J. Virol. - 2004. - Vol. 78 (4). - P. 2131-2136/

26. Adamson A.L., Wright N., LaJeunesse D.R. Modeling Early Epstein-Barr Virus Infection in Drosophila melanogaster: The BZLF1 Protein // Genetics. -2005.-Vol. 171.-P. 1125-1135.

27. Alvarez C.P., Lasala F., Carrillo J., Oscar Muñiz O., Corbí A.L., Delgado R. C-type lectins DC-SIGN and L-SIGN mediate cellular entry by Ebola virus in cis and trans // J. Virol. - 2002. - Vol. 76, № 13. - P. 6841-6844.

28. Ardouin C., Chevalier J.M., Algayres J.P. Less fevers hemorragiques virales de Marburg, Lassa et Ebola // Med. Trop. Mars. - 1981. - Vol. 41. - P. 191199.

29. Baize S., Leroy E.M., Georges-Courbot M.C., Capron M., Lansoud-Soukate J., Debré P., Fisher-Hoch S.P., McCormick J.B., Georges A.J. Defective humoral responses and extensive intravascular apoptosis are associated with fatal outcome in Ebola virus-infected patients // Nature Med. - 1999. - Vol. 5. - P. 423426.

30. Baize S., Leroy E.M., Mavoungou E. et al. Apoptosis in fatal Ebola infection. Does the virus toll the bell for immune system? // Apoptosis. - 2000. -

Vol. 5(1).-P. 5-7.

31.Baribaud F., Pohlmann S., Leslie G. et al. Quantitative expression and virus transmission analysis of DC-SIGN on monocyte-derived dendritic cells // J. Virology. - 2002. - Vol. 76, № 18.-P. 9135-9142.

32. Baskerville A., Bowen E.T.W., Platt G.S., McArdell L.B., Simpson D.I.H. The pathology of experimental Ebola virus infection in monkeys // J. Pathol. - 1978. - Vol. 125. -P. 131-138.

33. Baskerville A., Fisher-Hoch S.P., Neild G.H., Dowsett A.B. Ultrastructural pathology of experimental Ebola haemorrhagic fever virus infection // J. Pathol. - 1985. - Vol. 147. - P. 199-209.

34. Basler C.F., Mikulasova A., Martinez-Sobrido L. et al. The Ebola virus VP35 protein inhibits activation of interferon regulatory factor 3 // J. Virol. - 2003. -Vol. 77.-P. 7945-7956.

35. Basler C.F., Wang X., Muhlberger E., Volchkov V., Paragas J., Klenk H.-D., Garcia-Sastre A., Palese P. The Ebola virus VP35 protein functions as a type 1 IFN antagonist // Proc. Natl. Acad. Sei. USA - 2000. - Vol. 97. - P. 1228912294.

36. Basler C.F., Palese P. Modulation of innate immunity by filoviruses // H.-D.Klenk, H.Feldmann (ed.) // Molecular and cellular biology of Marburg and Ebola viruses. - Norfolk, United Kingdom: Horizon Scientific Press, 2004. - P. 305-349.

37. Battaglia P.A., Zito S., Macchini A., Gigliani F. A Drosophila model of HIV-Tat-related pathogenicity // J. Cell Sei. - 2001. - Vol. 114 (Pt 15). - P. 278794.

38. Becker S., Rinne C., Hofsass U. et al. Interactions of Marburg virus nu-cleocapsid proteins // Virology. - 1998. - Vol. 249 (2). - P. 406 - 417.

39. Becker Y. Computer simulations of proteolysis of Marburg and Ebola-Zaire filovirus coded proteins to generate nonapeptides with motifs of known HLA class I haplotypes and detection of antigenic domains in the viral glycoproteins // Virus Genes. - 1996.-Vol. 13(3).-P. 189-201.

40. Bergmann J.F. These pour le Doktorat en Medicine. - Cochin, Port-Royal, 1981.

41.Bermejo M., Rodriguez-Teijeiro J.D., Illera G., Barroso A., Vila C., Walsh P.D. Ebola outbreak killed 5000 gorillas // Science. - 2006. - Vol. 8; 314

(5805).-P. 1564.

42. Biek R., Walsh P.D., Leroy E.M., Real L.A. Recent Common Ancestry of Ebola Zaire Virus Found in a Bat Reservoir // PLoS. Pathog. - 2006. - Vol. 2 (10).-P. 0885-0886.

43. Bowen E.T., Piatt G.S., Lloyd G., Raymond R.T., Simpson D.I. A comparative study of strains of Ebola virus isolated from southern Sudan and northern Zaire in 1976 // J. Med. Virol. - 1980. - Vol. 6. - P. 129-138.

44. Brand A.H., Perrimon N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes // Development. - 1993. - Vol. 118.-P. 401—415.

45. Bray M. The role of the type I interferon response in the resistance of mice to filovirus infection // J. Gen. Virol. - 2001. - Vol. 82. - P. 1365-1373.

46. Bray M., Davis K., Geisbert T., Schmal J., Huggins J. Mouse model for evaluation of Ebola prophylaxis and therapy // Abstracts of International Collo-qium "Ebola virus research". - Antwerp, Belgium, 4-7 Sep, 1996. - P. 83.

47. Bray M., Hatfill S., Hensley L., Huggins J.W. Haematological, biochemical and coagulation changes in mice, guinea-pigs and monkeys infected with a mouse-adapted variant of Ebola Zaire virus // J. Comp. Pathol. - 2001. - Vol. 125 (4).-P. 243-253.

48.Broxmeyer H.E., Piacibello W., Juliano L., Platzer E., Berman E., Rubin B.Y. Gamma interferon induces colony-forming cells of the human monoblast cell line U937 to respond to inhibition by lactoferrin, transferrin, and acidic isoferritins // Exp. Hematol. - 1986. - Vol. 14 (1). - P. 35-43.

49. Bwaka M.A., Bonnet M.J., Calain P., Colebunders R., De Roo A., Guimard Y., Katwiki K.R., Kibadi K., Kipasa M.A., Kuvula K.J., Mapanda B.B., Massamba M., Mupapa K.D., Muyembe-Tamfum J.J., Ndaberey E., Peters C.J., Rollin P.E., Van den Enden E., Van den Enden E. Ebola hemorrhagic fever in Kikwit, Democratic Republic of the Congo: clinical observations in 103 patients // J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 179 (Suppl. 1). - P. 1-7.

50. Caillaud D., Levrero F., Cristescu R., Gatti S., Dewas M., Douadi M., Gautier-Hion A., Raymond M., Menard N. Gorilla susceptibility to Ebola virus: the cost of sociality // Curr Biol. - 2006. - Vol. 16 (13). - P. R489-491.

51.Capdevila J., Guerrero I. Targeted expression of the signaling molecule decapentaplegic induces pattern duplications and growth alterations in Drosophila

wings // EMBO J. - 1994. - Vol. 13 (19). - P. 4459-4468.

52. Cebulla C.M., Miller D.M., Sedmak D.D. Viral inhibition of interferon signal transduction // Intervirology. - 1999. - Vol. 42 (5-6). - P. 325-330.

53.Charnay N., Ivanyi-Nagy R., Soto-Rifo R., Ohlmann T., Lopez-Lastra M., Darlix J.L. Mechanism of HIV-1 Tat RNA translation and its activation by the Tat protein // Retrovirology. - 2009. - Vol. 6. - P. 74-74.

54. Chepurnov A.A., Tuzova M.N., Ternovoy V.A. et al. Suppressive effect of Ebola virus on T cell proliferation in vitro is provided by a 125-kDa GP viral protein // Immunol. Lett. - 1999. - Vol. 68. - P. 257-61.

55. Chepurnov A.A., Chernukhin I.V. Lethal for guinea pigs strain of Ebola

virus provides generation of antibody that reacts with host endovascular cells //

th * Abstracts of 10 International Congress of Virology. - Jerusalem, Israel, 11-16

Aug, 1996.-P. 259.

56. Chepurnov A.A, Zubavichene N.M., Dadaeva A.A. Elaboration of laboratory strains of Ebola virus and study of pathophysiological reactions of animals inoculated with these strains // Acta Trop. - 2003. - Vol. 87 (3). - P. 321-329.

57.Chou J., Roizman B. The yl34. 5 gene of herpes simplex virus 1 precludes neuroblastoma cells from triggering total shutoff of protein synthesis characteristic of programmed cell death in neuronal cells // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1992. - Vol. 89. - P. 3266-3270.

58. Clem R.J., Fechheimer M., Miller L.K. Prevention of apoptosis by a bac-ulovirus gene during infection of insect cells // Science. - 1991. - Vol. 254. - P. 1388-1390.

59. Connolly B.M., Steele K.E., Davis K.J., Geisbert T.W., Kell W.M., Jaax N.K., Jährling P.B. Pathogenesis of experimental Ebola virus infection in guinea pigs//J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 179. - P. S203-S217.

60. Crary S.M., Nowner J.S., Honig J.E. et al. Analysis of the role of predicted RNA secondary structures in Ebola virus replication // Virology. - 2003.306, № l.-P. 210-218.

61. Dessen A., Forest E., Volchkov V. et al. Crystallization and preliminary X-ray analysis of the matrix protein from Ebola virus // Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. - 2000 - Vol. 56. - P. 758-760.

62. Dockrell D.H. Apoptotic cell death in the pathogenesis of infectious diseases (Review) // J. Infection. - 2001. - Vol. 42. - P. 227-234.

63.Dolnik O., Volchkova V., Garten W. et al. Ectodomain shedding of the glycoprotein GP of Ebola virus //EMBO J. -2004. - Vol. 23. - P. 2175-2184.

64. Edgar B.A., Lehner C.F. Developmental control of cell cycle regulators: a fly's perspective // Science. -1996. - Vol. 274 (5293). - P. 1646-1652.

65.Ebihara H., Takada A., Kobasa D., Jones S., Neumann G., Theriault S., Bray M., Feldmann H., Kawaoka Y. Molecular determinants of Ebola virus virulence in mice // PLoS. Pathog. - 2006. - Vol. 2 (7). - P. e73.

66. Elliott L. H., Kiley M. P., McCormick J. B. Descriptive analysis of Ebola virus proteins //Virology. - 1985. - Vol. 147, N 1. - P. 169-176.

67. Elliott L. H., Sanchez A., Holloway B. P. et al. Ebola protein analyses for the determination of genetic organization // Arch. Virol. - 1993. - Vol. 133. -P. 423-436.

68. Ellis D.S., Bowen E.T., Simpson D.I., Stamford S. Ebola virus: a comparison, at ultrastructural level, of the behaviour of the Sudan and Zaire strains in monkeys // Br. J. Exp. Pathol. - 1978. - Vol. 59. - P. 584-593.

69.Empig C.J., Goldsmith M.A. Association of the caveola vesicular system with cellular entry by filoviruses // J. Virology. - 2002. - Vol. 76, № 10. - P. 5266-5270.

70. Feldman H., Slenczka W., Klenk H.-D. Emerging and reemerging of filoviruses // Arch. Virol. - 1996a. - Vol. 11. - P. 77-100.

71. Feldmann H., Bugany H., Mahner F., Klenk H.D., Drenckhahn D., and Schnittler H.J. Filovirus-induced endothelial leakage triggered by infected monocytes/macrophages // J. Virol. - 19966. - Vol. 70. - P. 2208-2214.

72. Feldmann H., Kiley M.P. Classification, structure, and replication of filoviruses // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 1999. - Vol. 235 - P. 1-21.

73.Ferron F., Longhi S., Henrissat B. et al. Viral RNA-polymerases - a predicted 2'-0-ribose methyltransferase domain shared by all Mononegavirales // Trends Biochem. Sci. - 2002. - Vol. 27. - P. 222-224.

74. Fisher-Hoch S.P. The haemostatic defect in viral hemorrhagic fevers // Brit. J. Haemat. - 1983a. - Vol. 55. - P. 565-571.

75. Fisher-Hoch S.P., Lloyd G., Piatt G.S., Simpson D.I.H., Neild G.H., Barret A.J. Haematological and biochemical monitoring of Ebola infection in Rhesus monkeys: implications for patient management // Lancet. - 19836. - N 5 (8358). -P. 1055-1058.

76. Fisher-Hoch S.P., Platt G.S., Neild G.H., Southee T., Baskerville A., Raymond R.T., Lloyd G., Simpson D.I.H. Pathophysiology of shock and hemorrhage in a fulminating viral infection (Ebola) // J. Infec. Dis. - 1985. - Vol. 152, N 5.-P. 887-894.

77. Fisher-Hoch S.P., Brammer T.L., Trappier S.G., Hutwagner L.C., Farra B.B., Ruo S.L., Brown B.G., Hermann L.M., Perez-Oronoz G.I., Goldsmith C.S., Hanes M.A., McCormick J.B. Pathogenic potential of Filoviruses: role of geographic of primate host and virus strain // J. Infect. Dis. - 1992. - Vol. 166, N 4. -P. 753-763.

78.Formenty P., Hätz C., Le Guenno B., Stoll A., Rogenmoser P., Widmer A. Human infection due to Ebola virus, subtype Cote d'lvoire: clinical and biologic presentation // J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 179, Suppl. 1. - P. S48-53.

79. Geisbert T.W., Hensley L.E., Gibb T.R., Steele K.E., Jaax N.K., Jährling P.B. Apoptosis induced in vitro and in vivo during infection by Ebola and Marburg viruses//Lab. Invest. - 2000. - Vol. 80. - P. 171-186.

80. Geisbert T.W., Hensley L.E., Larsen T., Young H.A., Reed D.S., Geisbert J.B., Scott D.P., Kagan E., Jährling P.B., Davis K.J. Pathogenesis of Ebola hemorrhagic fever in cynomolgus macaques: evidence that dendritic cells are early and sustained targets of infection // Am. J. Pathol. - 2003. - Vol. 163. - P. 23472370.

81. Geisbert T., Gibb T., Hensley L. et al. Apoptosis induced in vivo during

* th infection by Ebola and Marburg viruses // Abstracts of the 11 International Congress of Virology, August 9-13, 1999. - Sydney, Australia. - P. 128.

82. Geisbert T.W., Jährling P.B. Differentiation of filoviruses by electron microscopy //Virus Res. - 1995. - Vol. 39 (2-3). - P. 129-150.

83. Geisbert T.W., Young H.A., Jährling P.B., Davis K.J., Kagan E., Hensley L.E. Mechanisms underlying coagulation abnormalities in Ebola hemorrhagic fever: overexpression of tissue factor in primate monocytes/macrophages is a key event//J. Infect. Dis. - 2003. - Vol. 188.-P. 1618-1629.

84. Georges A.J., Gonzales J.P., Mathiot C.C. Epidemiological and epizo-ological investigations of Filoviruses in the Central African Republic // Annu. Rep. Inst. Pasteur Bangui. - 1989. - Vol. 89, N 1. - P. 164.

85. Gibb T.R., Bray M., Geisbert T.W., Steele K.E., Kell W.M. et al. Pathogenesis of experimental Ebola Zaire virus infection in BALB/c mice // J. Comp.

Pathol. -2001. - Vol.125. - P. 233-242.

86. Gomis-Ruth F.X., Dessen A., Timmins J. et al. The matrix protein VP40 from Ebola virus octamerizes into pore-like structures with specific RNA properties // Structure (Camb.). - 2003. - Vol. 11, № 4. - P.423-433.

87.Gooding L.R, Elmore L.W., Tollefson A.E, Brady H.A., Wold W.S. M.A 14,700 MW protein from the E3 region of adenovirus inhibits cytolysis by tumor necrosis factor // Cell. - 1988. - Vol. 53. - P. 341-346.

88.Groserth A., Stroher U., Theriault S., Feldman H. Molecular characterization of an isolate from the 1989/1990 epizootic of Ebola virus Reston among macaques imported into the United States // Virus Research. - 2002. - Vol. 87, № l.-P. 155-163.

89.Gupta M.S., Mahanty R.A., Rollin P.E. Monocyte-derived human macrophages and peripheral blood mononuclear cells infected with Ebola virus secrete MIP-1 alpha and TNF-alpha and inhibit poly-IC-induced IFN-alpha in vitro // Virology. - 2001. - Vol. 284. - P. 20-25.

90.Halstead S.B. Viral hemorrhagic fevers // J. Infect. Dis. - 1981. - Vol. 143 (l).-P. 127-129.

91.Harcourt B.H., Sanchez A., Offermann M.K. Ebola virus inhibits induction of genes by double-stranded RNA in endothelial cells // Virology. - 1998. -Vol. 252.-P. 179-188.

92.Harcourt B.H., Sanchez A., Offermann M. K. Ebola virus selectively inhibits responses to interferons, but not to interleukin-1 (3, in endothelial cells // J. Virol. - 1999. - Vol. 73. - P. 3491-3496.

93.Hart M.K. Vaccine research efforts for filoviruses // Int. J. Parasitol. -2003.-Vol. 33.-P. 583-595.

94.Hartlieb B., Modrof J., Muhlberger E. et al. Oligomerization of Ebola virus VP30 is essential for viral transcription and can be inhibited by a synthetic peptide // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278. - P. 41830-41836.

95.Hay B.A., Wolff T., Rubin G.M. Expression of baculovirus P35 prevents cell death in Drosophila//Development. - 1994. - Vol. 120. - P. 2121-2129.

96.Henderson S., Rowe M., Gregory C., Croom-Carter D., Wang F., Longnecker R., Kieff E., Rickinson A. Induction of bcl-2 expression by Epstein-Barr virus latent membrane protein 1 protects infected B cells from programmed cell death // Cell. - 1991. - Vol. 65. - P. 1107-1115.

97.Hercyk N., Horikami S.M., Moyer S.A. The vesicular stomatitis virus L protein possesses the mRNA methyltransferase activities // Virology. - 1988. -Vol. 163.-P. 222-225.

98. Huang Y., Xu L., Sun Y. et al. The assembly of Ebola virus nucleocapsid requires virion-associated proteins 35 and 24 and posttranslational modification of nucleoprotein // Mol. Cell. -2002. - Vol. 10. - P. 307-316.

99.Hutchinson K.L., Villinger F., Miranda M.E., Ksiazek T.G., Peters C.J., Rollin P.E. Multiplex analysis of cytokines in the blood of cynomolgus macaques naturally infected with Ebola virus (Reston serotype) // J. Med. Virol. - 2001. -Vol. 65 (3).-P. 561-566.

100. Isaacson M., Sureau P., Courteille G., Pattyn S.R. Clinical aspects of Ebola virus disease of the Ngaliema hospital, Kinshasa // Ebola virus haemorragic fever / Ed. S.R. Pattyn - Amsterdam, New York: Elsevier; North Holland Boimed-ical Press, 1978.-P. 15-20.

101. Ito H., Watanabe S., Takada A. et al. Ebola virus glycoprotein: proteolytic processing, acylation, cell tropism, and detection of neutralizing antibodies // J. Virol. - 2001. - Vol. 75. - P. 1576-1580.

102. Jaax N.K., Davis K.J., Geisbert T.W., Vogel A.P., Jaax G.P., Topper M., Jarling P.B. Lethal experimental infection of rhesus monkeys with Ebola-Zaire (Mayinga) virus by the oral and conjunctival route of exposure // Arch. Pathol. Lab. Med. - 1996. - Vol. 120. - P. 140-155.

103. Jährling P.B., Geisbert T.W., Jaax N.K., Hanes M.A., Ksiazek T.G., Peters C.J. Experimental infection of cynomolgus macaques with Ebola-Reston fi-loviruses from the 1989-1990 U.S. epizootic // Arch. Virol. Suppl. - 1996a. - Vol. 11.-P. 115-134.

104. Jährling P.B., Geisbert J., Swearengen J. R., Jaax G.P., Lewis T., Hug-gins J.W., Schmidt J.J., LeDuc J.W., Peters C.J. Passive immunization of Ebola virus-infected cynomolgus monkeys with immunoglobulin from hyperimmune horses//Arch. Virol. - 1996b. -Vol. 11.-P. 135-140.

105. Jährling P.B., Geisbert T.W., Geisbert J.B., Swearengen J.R., Bray M., Jaax N.K., Huggins J.W., LeDuc J.W., Peters C.J. Evaluation of immune globulin and recombinant interferon-a2b for treatment of experimental Ebola virus infections //J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 179 (Suppl. 1). - P. 224-234.

106. Jeffers S.A., Sanders D.A., Sanchez A. Covalent medications of the

Ebola virus glycoprotein // J. Virology. - 2002. - Vol. 76, № 24. - P. 12463-1247.

107. Johnson E.D., Gonzalez J.P., Georges A.,Trans R. Haemorrhagic fever virus activity in equatorial Africa: distribution and prevalence of filovirus reactive antibody in the Central African Republic // Soc. Trop. Med. Hyg. - 1993. - Vol. 87 (5).-P. 530-535.

108. Johnson E., Jaax N., York C., White J., Jarling P.B. Lethal experimental infections of rhesus monkeys caused by aerosolized Ebola virus // Int. J. Exp. Pathol. - 1995. - Vol. 76. - P. 227-236.

109. Johnson K.M., Lange J.V., Webb P.A., Murphy F.A. Isolation and partial characterisation of a new virus causing acute haemorrhagic fever in Zaire // Lancet. - 1977.-Vol. 12, 1 (8011).-P. 569-571.

110. Jones D.T. Protein secondary structure prediction based on position-specific scoring matrices // J. Mol. Biol. - 1999. - Vol. 292. - P. 195-202.

111. Jones R.A., Drexler H.G., Gignac S.M., Child J.A., Scott C.S. In vitro beta 2-microglobulin (beta 2m) secretion by normal and leukaemic B-cells: effects of recombinant cytokines and evidence for a differential response to the combined stimulus of phorbol ester and calcium ionophore // Br. J. Cancer. - 1990. - Vol. 61 (5).-P. 675-680.

112. Jones S., Feldman H., Stroher U., Geisbert J., Fernando L., Grolla A., Klenk H., Sillivan N., Volchkov V., Fritz E., Daddario K., Hensley L., Jährling P., Geisbert T. Live attenuated recombinant vaccine protects nonhuman primates against Ebola and Marburg viruses // Nat. Med. - 2005. - Vol. 11 (7). - P. 786790.

113. Kehrl J.H., Miller A., Fauci A.S. Effect of tumor necrosis factor alpha on mitogen-activated human B cells // J. Exp. Med. - 1987. - Vol. 166 (3). - P. 786-791.

114. Kiley M.P., Bowen E.T., Eddy G.A., Isaäcson M., Johnson K.M., McCormick J.B., Murphy F.A., Pattyn S.R., Peters D., Prozesky O.W., Regnery R.L., Simpson D.I., Slenczka W., Sureau P., van der Groen G., Webb P.A., Wulff H. Filoviridae: a taxonomic home for Marburg and Ebola viruses? // Intervirology. - 1982.-Vol. 18(1-2).-P.24-32.

115.Kimata H., Yoshida A. Differential effects of gangliosides on Ig production and proliferation by human B cells // Blood. - 1994. - Vol. 84 (4). - P. 1193-1200.

116. Klenk H.D., Feldmann H., Volchkov V.E. et al. Structure and function of the proteins of Marburg and Ebola viruses SGM symposium 60: New challenges to health: the threat of virus infection // Cambridge University Press. 2001. - P. 233-245.

117. Knobloch J., Albiez E.J., Schmitz H. A serological survey on viral haemorrhagic fevers in Liberia//Ann. Virol. - 1982. - Vol. 133E. - P.125-128.

118. Krause R.M., Dimmock N.J., Morens D.M. Summary of antibody workshop: The Role of Humoral Immunity in the Treatment and Prevention of Emerging and Extant Infectious Diseases // J. Infect. Dis. - 1997. - Vol. 176 (3). -P. 549-559.

119. Ksiazek T.G., Rollin P.E., Williams A.J., Bressler D.S., Martin M.L., Swanepoel R., Burt F.J., Leman P.A., Khan A.S., Rowe A.K., Mukunu R., Sanchez A., Peters C.J. Clinical virology of Ebola hemorrhagic fever (EHF): virus, virus antigen, and IgG and IgM antibody findings among EHF patients in Kikwit, Democratic Republic of the Congo, 1995 // J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 179, Suppl. l.-P. 177-187.

120. Kudoyarova-Zubavichene N.M., Sergeyev N.N., Chepurnov A.A., Netesov S.V. Preparation and use of hyperimmune serum for prophylaxis and therapy of Ebola virus infections // J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 179, Suppl l.-P. 218-223.

121. Kurata T., Aoyama Y., Tsai T.F., Bauer S., McCormic G.B. Disseminated infection of suckling mice with Edola virus // Abstracts of 6th International Congress of Virology. - Sendai, Japan, 1-7 Sep., 1984. - P. 2-73, 269.

122. Lahm S.A., Kombila M., Swanepoel R., Barnes R.F. Morbidity and mortality of wild animals in relation to outbreaks of Ebola haemorrhagic fever in Gabon, 1994-2003 // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. - 2007. - Vol 101. - P. 6478.

123. Lee S.B., Park J., Jung J.U., Chung J. Nef induces apoptosis by activating JNK signaling pathway and inhibits NF-KB-dependent immune responses in Drosophila//J. Cell Science. - 2005. - Vol. 118.-P. 1851-1859.

124. Leroy E.M., Baize S., Debre P., Lansoud-Soukate J., Mavoungou E. Early immune responses accompanying human asymptomatic Ebola infections // Clin. Exp. Immunol. - 2001. - Vol. 124 (3). - P. 453-460.

125. Leroy E.M., Rouquet P., Formenty P., Souquiere S., Kilbourne A.,

Froment J.M., Bermejo M., Smit S., Karesh W., Swanepoel R., Zaki S.R., Rollin P.E. Multiple Ebola virus transmission events and rapid decline of central African wildlife // Science. - 2004. - Vol. 16. - P. 387-390.

126. Leroy E.M., Kumulungui B., Pourrut X., Rouquet P., Hassanin A., Yaba P., Délicat A., Paweska J.T., Gonzalez J.P., Swanepoel R. Fruit bats as reservoirs of Ebola virus // Nature. - 2005. - Vol. 438. - P. 575-576.

127. Leulier F., Marchai C., Miletich I., Limbourg-Bouchon B., Benarous R., Lemaitre B. Directed expression of the HIV-1 accessory protein Vpu in Dro-sophila fat-body cells inhibits Toll-dependent immune responses // EMBO Rep. -2003.-Vol. 4.-P. 976-981.

128. Levashina E., Ohresser S., Lemaitre B., Imler J. Two distinct pathways can control expression of the Drosophila antimicrobial peptide metchnikowin // J. Mol. Biol. - 1998.-Vol. 278.-P. 515-527.

129. Licata J.M., Johnson R.F., Han Z. et al. Contribution of ebola virus glycoprotein, nucleoprotein, and VP24 to budding of VP40 virus-like particles // J. Virol. - 2004. - Vol.78. - P. 7344-7351.

130. Lin G., Simmons G., Pohlmann S. et al. Differential N-linked glycosyl-ation of Human Immunodeficiency virus and Ebola virus envelope glycoproteins modulates interactions with DC-SIGN and DC-SIGN // J. Virology. - 2003. - Vol. 77, № 2. - P.1337-1346.

131.Lunde K., Biehs B., Nauber U., Bier E. The knirps and knirps-related genes organize development of the second wing vein in Drosophila // Development. - 1998. - Vol. 125 (21).-P. 4145-4154.

132.Mahanty S., Bray M. Pathogenesis of filoviral haemorrhagic fevers // Lancet Infect. Dis. - 2004. - Vol. 4. - P. 487^98.

133.Maksyutov A.Z., Bachinsky, A.G., Chepurnov A.A. Possible role of molecular mimicry in pathogenesis of Ebola virus: implications for a rational vaccine design // Int. J. Biotechnology. - 2007. - Vol. 9, N 3/4. - P. 332-343.

134.Mamus S.W., Beck-Schroeder S., Zanjani E.D. Suppression of normal human erythropoiesis by gamma interferon in vitro. Role of monocytes and T lymphocytes // J. Clin. Invest. - 1985. - Vol. 74. - P. 1496-1503.

135. Mateo M., Reid S.P., Leung L.W., Basler C.F., Volchkov V.E. Ebo-lavirus VP24 binding to karyopherins is required for inhibition of interferon signaling//J. Virol.-2010.-Vol. 84 (2).-P. 1169-1175.

136. Mateo M., Carbonnelle C., Reynard O., Kolesnikova L., Nemirov K., Page A., Volchkova V.A., Volchkov V.E. VP24 is a molecular determinant of Ebola virus virulence in guinea pigs // J. Infect. Dis. - 2011. - Vol. 204. - Suppl. 3.-P. S1011-S1020.

137. Modrof J., Becker S., Muhlberger E. Ebola virus transcription activator VP30 is a zinc-binding protein // J. Virol. - 2003. - Vol. 77. - P. 3334-3338.

138. Modrof J., Muhlberger E., Klenk H.D. et al. Phosphorylation of VP30 impairs Ebola virus transcription // J. Biol. Chem. - 2002. - Vol. 277. - P. 3309933104.

139. Muhlberger E., Lotfering B., Klenk H.D., Becker S. Three of the four nucleocapsid proteins of Marburg virus, NP, VP35, and L, are sufficient to mediate replication and transcription of Marburg virus-specific monocistronic minigenomes // J. Virol. - 1998. - Vol. 72 (11). - P. 8756-8764.

140. Muhlberger E., Weik M., Volchkov V. E. et al. Comparison of the transcription and replication strategies of Marburg virus and Ebola virus by using artificial replication systems // J. Virol. - 1999. - Vol. 73. - P. 2333-2342.

141. Murphy F.A., van der Groen G., Whitefield S.G., Lange J.V. Ebola and Marburg virus morphology and taxonomy // Ebola virus haemorrhagic fever / Ed. S.R.Pattyn. - Elsevier: North Holland, Amsterdam, New York, 1978. - P. 61-84.

142. Nakayama E., Saijo M. Animal models for Ebola and Marburg virus infections // Front Microbiol. - 2013. - Vol. 4. - P. 267.

143.Nanbo A., Watanabe S., Halfmann P., Kawaoka Y. The spatio-temporal distribution dynamics of Ebola virus proteins and RNA in infected cells // Sei Rep. - 2013. - Vol. 3. - Article number 1206.

144.Niikura M., Ikegami T., Saijo M. et al. Analysis of linear B-cell epitopes of the nucleoprotein of Ebola virus that distinguish Ebola virus subtypes // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2003. - Vol. 10, № 1. -P.83-87.

145. Nöda T., Sagara H., Suzuki E. Ebola virus VP40 drives the formation of virus-like filamentous particles along with GP // J. Virol. - 2002. - Vol. 76. - P. 4855^1865.

146.Noyori O., Nakayama E., Maruyama J. et al. Supression of Fasmediated apoptosus via steric shielding by filovirus glycoproteins // Biochem. Bi-ophys. Res. Commun. - 2013. - Vol. 441 (4). - P. 994 - 998.

147.Panchal R.G., Ruthel G., Kenny T.A. et al. In vivo oligomerization and

raft localization of Ebola virus protein VP40 during vesicular budding // PNAS. -2003.-Vol. 100, №26.-P. 15936-15941.

148.Parton R.G. Caveolae - from ultrastructure to molecular mechanisms // Nature Reviews. Mol. Cell Biology. - 2003. - Vol. 4, № 2. - P. 162-167.

149. Pass R.F., Stagno S., Myers G.J., Alford C.A. Outcome of symptomatic congenital cytomegalovirus infection, results of long-term longitudinal follow-up // Pediatrics. - 1980. - Vol. 66. - P. 758-762.

150. Perry D.L., Bollinger L., White G.L. The Baboon (Papio spp.) as a model of human Ebola virus infection // Viruses. - 2012. - Vol. 4 (10). - P. 24002416.

151. Peters C.J., Khan A.S. Filovirus diseases // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 1999. - Vol. 235. - P. 85-95.

152. Peters C.J., Sanchez A., Feldmann A., Rollin P.E., Nichol S., Ksiazek T.G. Filoviruses as emerging pathogens // Semin. Virol. - 1994. - Vol. 5. - P. 147154.

153. Peters C.J., Sanchez A., Rollin P.E., Ksiazek T.G., Murphy F.A. Filo-viridae: Marburg and Ebola virus // Fields Virology / Eds B.N.Fields, D.M.Knipe, P.M.Howley et al. - Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996. - P. 11611176.

154.Pourrut X., Kumulungui B., Wittmann T., Moussavou G., Délicat A., Yaba P., Nkoghe D., Gonzalez J.P., Leroy E.M. The natural history of Ebola virus in Africa // Microbes Infect. - 2005. - Vol. 7. - P. 1005-1014.

155.Raoult D., Audic S., Robert C., Abergel C., Renesto P., Ogata H., La Scola B., Suzan M., Claverie J.M. The 1.2-megabase genome sequence of Mimi-virus // Science. - 2004. - Vol. 306 (5700). - P. 1344-1350.

156.Reid S.P., Cardenas W.B., Basler C.F. Homo-oligomerization facilitates the interferon-antagonist activity of the ebolavirus VP35 protein // Virology. -2005.-Vol. 341.-P. 179-189.

157. Reid S.P., Leung L.W., Hartman A.L., Martinez O., Shaw M.L., Car-bonnelle C., Volchkov V.E., Nichol S.T., Basler C.F. Ebola virus VP24 binds kar-yopherin al and blocks STAT1 nuclear accumulation // J. Virol. - 2006. - Vol. 80. -P. 5156-5167.

158.Reiter, L.T., Potocki L., Chien S., Gribskov M., Bier E. A Systematic Analysis of Human Disease-Associated Gene Sequences in Drosophila melano-

gaster // Genome Res. - 2001. - Vol. 11 (6). - P. 1114-1125.

159. Regnery RL, Johnson KM, Kiley MP. Virion nucleic acid of Ebola virus // J. Virol. - 1980. - Vol. 36 (2). - P. 465-469.

160. Rubin G.M. Around the genomes: the Drosophila genome project // Genome Res. - 1996. - Vol. 6 (2). - P. 71-79.

161. Ryabchikova E., Kolesnikova L., Smolina M., Tkachev V., Pereboeva L., Baranova S., Grazhdantseva A., Rassadkin Y. Ebola virus infection in guinea pigs: presumable role of granulomatous inflammation in pathogenesis // Arch. Virol. - 1996. - Vol. 141, № 5. - P. 909-922.

162. Ryder E., Russell S. Transposable elements as tools for genomics and genetics in Drosophila // Brief Funct. Genomic Proteomic. - 2003. - Vol. 2 (1). -P. 57-71.

163. Säez-Cirion A., Gomara M.J., Agirre A., Nieva J.L. Pre-transmembrane sequence of Ebola glycoprotein. Interfacial hydrophobicity distribution and interaction with membranes // FEBS Lett. - 2003. - Vol. 533 (1-3). - P. 47-53.

164. Sanchez A., Geisbert T., Feldmann H. Filoviridae: Marburg and Ebola viruses // Fields virology, 5th ed. / Knipe D.M., Howley P.M. (ed.). - Philadelphia: Lippincott/Williams & Wilkins Co, 2007. - P. 1409 - 1448.

165. Sanchez A., Khan A.S., Zaki S.R., Nabel G.J., Ksiazek T.G., Peters C.J. Filoviridae: Marburg and Ebola viruses / D.M. Knipe, P.M. Howley (ed.) // Fields virology. -2001. - P. 1279-1304.

166. Sanchez A., Kiley M.P., Holloway B.P. et al. Sequence analysis of the Ebola virus genome: organization, genetic elements, and comparison with the genome of Marburg virus // Virus Res. - 1993. - Vol. 29. - P. 215-240.

167. Sanger F., Donelson A.R., Coulson H.K., Fischer D. Use of DNA polymerase I primed by a synthetic oligonucleotide to determine a nucleotide sequence in phage fl DNA // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1973. - Vol. 70 (4). - P. 1209.

168. Scianimanico S., Schoehn G., Timmins J. et al. Membrane association induces a conformational change in the Ebola virus matrix protein // EMBO J. -2000. - Vol. 19. - P. 6732-6741.

169. Simmons G., Lee A., Rennekamp A.J. et al. Identification of murine T-cell epitopes in Ebola virus nucleoprotein // Virology. - 2003. - Vol. 318, №1. - P. 224-230.

170. Simmons G., Reeves J.D., Grogan C.C., Vandenberghe L.H., Baribaud F., Whitbeck J.C., Burke E., Buchmeier M.J., Soilleux E.J., Riley J.L., Doms R.W., Bates P., Pohlmann S. DC-SIGN and DC-SIGNR bind Ebola glycoproteins and enhance infection of macrophages and endothelial cells // Virology. - 2003b. -Vol. 305.-P. 115-123.

171. Spresser C.R, Carlson K.A. Drosophila melanogaster as a complementary system for studying HIV-1-related genes and proteins // J. Neurosci. Res. -2005. - Vol. 80 (4). - P. 451-455.

172. Stahelin R.V. Could the Ebola virus matrix protein VP40 be a drug target? // Expert Opin. Ther. Targets. - 2014. - Vol. 18 (2). - P. 115-120.

173. Steinberg R., Shemer-Avni Y., Adler N., Neuman-Silberberg S. Human cytomegalovirus immediate-early-gene expression disrupts embryogenesis in transgenic Drosophila // Transgenic Res. -2008. - Vol. 17. - P. 105-119.

174. Stroher U., West E., Bugany H., Klenk H.D., Schnittler H.J., Feldmann H. Infection and activation of monocytes by Marburg and Ebola viruses // J. Virol. -2001.-Vol. 75 (22).-P. 11025-11033.

175. Suarez T., Gomara M.J., Goni F.M., Mingarro I., Muga A., Perez-Paya E., Nieva J.L. Calcium-dependent conformational changes of membrane-bound Ebola fusion peptide drive vesicle fusion // FEBS Lett. - 2003. - Vol. 535 (1-3). -P. 23-28.

176. Suarez T., Nir S., Goni F.M., Saez-Cirion A., Nieva J.L. The pre-transmembrane region of the human immunodeficiency virus type-1 glycoprotein: a novel fusogenic sequence // FEBS Lett. - 2000. - Vol. 477 (1-2). - P. 145-149.

177. Subbotina E., Dadaeva A., Kachko A., Chepurnov A. Genetic factors of Ebola virus virulence in guinea pigs // Virus Res. - 2010. - Vol. 153 (1). - P. 121133.

178. Takada A., Feldmann H., Stroeher U. et al. Identification of protective epitopes on ebola virus glycoprotein at the single amino acid level by using recombinant vesicular stomatitis viruses // J. Virol. - 2003. - Vol. 77. - P. 1069-1074.

179. Takada A., Watanabe S., Ito H. et al. Downregulation of betal integrins by Ebola virus glycoprotein: implication for virus entry // Virology. - 2000. - Vol. 278.-P. 20-26.

180.Theriault S., Groseth A., Neumann G. et al. Rescue of Ebola virus from cDNA using heterologous support proteins // Virus Res. - 2004. - Vol. 106. - P.

43-50.

181.Tignor G.H., Casals G., Shope R.E. The yellow fever epidemic in Ethiopia, 1961-1962: retrospective serological evidence for concominant Ebola or Ebo-la-like virus infection // Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. - 1993. - Vol. 87, N 2. -P. 162.

182.Tilson M.D., Ozsvath K.J., Hirose H., Xia S., Lahita R. A novel hypothesis to explain the hemorrhagic and connective tissue manifestations of Ebola virus infection // Clin. Immunol. Immunopathol. - 1996. - Vol. 81 (3). - P. 303306.

183.Timmins J., Schoehn G., Kohlhaas C. et al. Oligomerization and polymerization of the filovirus matrix protein VP40 // Virology. - 2003. - Vol. 312, №2.-P. 359-368.

184.Tumang J.R., Owyang A., Andjelic S., Jin Z., Hardy R.R., Liou M.L., Liou H.C. c-Rel is essential for B lymphocyte survival and cell cycle progression // Eur. J. Immunol. - 1998. - Vol. 28 (12). - P. 4299-4312.

185.Ulich TR, del Castillo J, Yin S. Tumor necrosis factor exerts dose-dependent effects on erythropoiesis and myelopoiesis in vivo II Exp Hematol. -1990.-Vol. 18(4).-P. 311-315.

186. van der Groen G. Epidemiology and diagnosis of viral hemorragic fevers // Applied Virology. - 1984. - P. 299-326.

187. van der Groen G., Iacob W., Pattyn S.R. Virulence of Ebola virus for newborn mice // J. Med. Virol. - 1979. - Vol. 4, N 3. - P. 239-240.

188.Verstraete M. Disseminated intravascular coagulation in Ebola virus haemorragic fever // Ebola virus hemorrhagic fever / Ed. S.R. Pattyn. - Amsterdam: Elsevier/Noth-Holland, 1978. - P. 225-235.

189.Villinger F., Rollin P.E., Brar S.S., Chikkala N.F., Winter J., Sundstrom J., Zaki S.R., Swanepoel R., Ansari A., Peters C. J. Markedly elevated levels of interferon (IFN)-gamma, IFN-alpha, interleukin (IL)-2, IL-10, and tumor necrosis factor-alpha associated with fatal Ebola virus infection // J. Infect. Dis. - 1999. -Vol. 179.-P. S188—S191.

190.Volchkov V.E., Becker S., Volchkova V.A. et al. GP mRNA of Ebola virus is edited by the Ebola virus polymerase and by T7 and vaccinia virus polymerases //Virology. - 1995. - Vol. 214. - P. 421-430.

191.Volchkov V.E., Blinov V.M., Netesov S.V. The envelope glycoprotein

of Ebola virus contains an immunosuppressive-like domain similar to oncogenic retroviruses // FEBS Lett. - 1992. - Vol. 305. - P. 181-184.

192.Volchkov V.E., Chepurnov A.A., Volchkova V.A. et al. Molecular characterization of guinea pig-adapted variants of Ebola virus // Virology. - 2000. -Vol. 277.-P. 147-155.

193.Volchkov V.E., Volchkova V.A., Chepurnov A.A., Blinov V.M., Dolnik O., Netesov S.V., Feldmann H. Characterization of the L gene and 5' trailer region of Ebola virus // J. Gen. Virol. - 1999. - Vol. 80. - P. 355-362.

194.Volchkov V.E., Feldmann H., Volchkova V.A. et al. Processing of the Ebola virus glycoprotein by the proprotein convertase furin // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1998a. - Vol. 95. - P. 5762-5767.

195.Volchkov V.E., Volchkova V.A., Slenczka W. et al. Release of viral glycoproteins during Ebola virus infection // Virology. - 1998b. - Vol. 245. - P. 110-119.

196.Volchkova V.A., Feldmann H., Klenk H.D. et al. The nonstructural small glycoprotein of Ebola virus is secreted as an antiparallel-orientated homodi-mer // Virology. - 1998. - Vol. 250. - P. 408-414.

197.Volchkova V., Klenk H.D., Volchkov V. D-peptide is the carboxy-terminal cleavage fragment of the nonstructural small glycoprotein sGP of Ebola virus // Virology. - 1999. - Vol. 265. - P. 164-171.

198.Walsh P.D., Abernethy K.A., Bermejo M., Beyers R., De Wächter P., Akou M.E., Huijbregts B., Mambounga D.I., Toham A.K., Kilbourn A.M., Lahm S.A., Latour S., Maiseis F., Mbina C., Mihindou Y., Obiang S.N., Effa E.N., Starkey M.P., Telfer P., Thibault M., Tutin C.E., White L.J., Wilkie D.S. Catastrophic ape decline in western equatorial Africa // Nature. - 2003. - Vol. 422 (6932).-P. 611-614.

199.Watanabe S., Nöda T., Kawaoka Y. Functional mapping of the nucleo-protein of Ebola virus // J. Virol. - 2006. - Vol. 80 (8). - P. 3743-3751.

200. Watanabe S., Watanabe T., Nöda T. et al. Production of novel Ebola virus-like particles from cDNAs: an alternative to Ebola virus generation by reverse genetics // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. - P. 999-1005.

201. Weik M., Modrof J., Klenk H.-D. et al. Ebola virus VP30-mediated trancription is regulated by RNA secondary structure formation // J. Virology. -2002.-Vol. 76, № 17.-P. 8532-8539.

202. Weissenborn W., Carfi A., Lee K.H. et. al. Crystal structure of the Ebola virus membrane fusion subunit, GP2, from the envelope glycoprotein ectodo-main // Mol. Cell. - 1998. - Vol. 2. - P. 605-616.

203. WHO. Ebola haemorrhagic fever in Sudan, 1976. International Study Team Report // Bull WHO. - 1978a. - Vol. 56. - P. 247-270.

204. WHO. Ebola haemorrhagic fever in Zaire, 1976. International Study Team Report // Bull WHO. - 1978b. - Vol. 56. - P. 271-293.

205. Wong S.L, Chen Y., Chan C.M., Chan C.S., Chan P.K, Chui Y.L., Fung K.P., Waye M.M., Tsui S.K., Chan H.Y. In vivo functional characterization of the SARS-Coronavirus 3a protein in Drosophila // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2005. - Vol. 337 (2). - P.720-729.

206. Yang L., Sanchez A., Ward J., Murphy B., Bukreyev A. A paramyxovi-rus-vectored intranasal vaccine against Ebola virus is immunogenic in vector-immune animals // Virology. - 2008. - Vol. 377 (2). - P. 255-264.