Основы патогенеза, принципы диагностики и специфической коррекции геморрагической лихорадки Эбола в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.16, доктор биологических наук Чепурнов, Александр Алексеевич

  • Чепурнов, Александр Алексеевич
  • доктор биологических наукдоктор биологических наук
  • 1998, КольцовоКольцово
  • Специальность ВАК РФ14.00.16
  • Количество страниц 246
Чепурнов, Александр Алексеевич. Основы патогенеза, принципы диагностики и специфической коррекции геморрагической лихорадки Эбола в эксперименте: дис. доктор биологических наук: 14.00.16 - Патологическая физиология. Кольцово. 1998. 246 с.

Оглавление диссертации доктор биологических наук Чепурнов, Александр Алексеевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список использованных сокращений

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Эндотоксический шок при геморрагических

вирусных лихорадках

1.1.1. Геморрагические вирусные лихорадки

1.1.2. Развитие эндотоксического шока при геморрагических лихорадках

1.1.3. Филовирусные инфекции

1.2. Характеристика геморрагической лихорадки Эбола

1.2.1. Этиология

1.2.2. Эпидемиология

факторам

1.2.4. Патология

1.2.5. Диагностика

1.2.6. Специфическая профилактика и лечение

1.2.7. Лабораторные животные для изучения

лихорадки Эбола

1.2.8. Заключение по обзору литературы

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Биологическая безопасность

2.2. Вирусные препараты

2.3. Животные

2.4. Культуры клеток, питательные среды и

сыворотки, использованные в работе

2.5. Титрование вирусных препаратов

2.5.1. Титрование вируса Эбола (ВЭ) методом

негативных колоний под агаровым покрытием

2.5.2. Титрование ВЭ на морских свинках

2.5.3. Титрование ВЭ на новорожденным белых мышах

2.6. Проверка отсутствия остаточной инфекционности инактивированных препаратов

ВЭ на новорожденных белых мышах

2.7. Определение виремии в пробах крови экспериментальных животных

2.8. Серологические реакции

2.8.1 Реакция связывания комплемента (РСК)

2.8.2. Реакция нейтрализации (РН)

2.8.3. Иммуноферментный анализ (ИФА)

2.8.4. Непрямой метод флюоресцирующих антител (НМФА)

2.9. Иммуногистохимические исследования

2.10. Оценка инфекционности и отбор проб

2.11. Гематологические методы

2.12. Методы изучения клеточного иммунного ответа

2.13. Биохимические методы

2.14. Методы исследования системы гемостаза

2.15. Оценка влияния инактивированного вируса Эбола на колониеобразующую активность гемопоэтических предшественников у человека

2.16. Получение инактивированных цельновирионных препаратов для иммунизации и вакцинации экспериментальных животных

2.17. Получение рекомбинантных штаммов вируса осповакцины

2.18. Оценка иммуногенности инактивированных цельновирионных препаратов и рекомбинантных

штаммов ВОВ

2.19. Оценка протективности

2.20. Иммунизация животных

2.20.1. Иммунизация кроликов

2.20.2. Иммунизация овец и коз

2.21. Отбор крови у животных

2.22. Инактивация иммунных сывороток

2.23. Фракционирование иммуноглобулинов

спиртовым осаждением на холоду по Кону

2.24. Определение концентрации белка

2.25. Испытание козьего иммуноглобулина

против болезни Эбола на добровольцах

2.25.1. Введение иммуноглобулина

2.25.2.Общее иследование состояния здоровья

добровольцев

2.25.3. Изучение клинико-лабораторных

показателей крови и мочи

2.26. Методы определения лечебного и

профилактического эффекта иммуноглобулина

2.27. Получение ДНК-зондов для определения

РНК вируса Эбола

2.28. Статистическая обработка результатов

Глава III. Патофизиологические изменения,

влияющие на развитие эндогенного шока

при экспериментальной инфекции Эбола

3.1. Селекция лабораторных штаммов вируса Эбола

3.2. Исследование фагоцитарного ответа у восприимчивых и невосприимчивых к вирусу

Эбола животных

3.3. Изменение биохимических и гемостатических показателей у морских свинок при введении

препаратов вируса Эбола с

различным уровнем вирулентности

3.4. Динамика иммунологических показателей у морских свинок при введении различных

препаратов вируса Эбола

3.5. Изменения некоторых показателей гемостаза у нечувствительных животных

(кроликов) при введении препаратов ВЭ

3.6. Изучение иммуносупрессивных

свойств антигена вируса Эбола

3.7. Изучение влияния вируса Эбола на гемопоэз

3.8. Развитие аутоиммунных процессов при

экспериментальной инфекции Эбола

3.9. Влияние повторных введений препаратов ВЭ на динамику иммунологических показателей

у кроликов и морских свинок

Глава IV. Разработка методов диагностики лихорадки Эбола (ИФА, НМФА, реакция молекулярной

гибридизации нуклеиновых кислот)

4.1. Оптимизация культивирования

вируса Эбола

4.2. Получение концентрированного

и очищенного вируса Эбола

4.3. Получение антисыворотки к вирусу Эбола

4.4. Разработка иммуноферментной тест-системы

для определения антител к вирусу Эбола

4.5. Определение оптимальной концентрации

вирусного антигена для сенсибилизации твердой фазы

4.6. Отработка системы учета и

интерпретации полученных результатов

4.7. Оценка специфичности и чувствительности тест-системы

4.8. Разработка иммуноферментной тест-системы

для выявления антигена вируса Эбола

4.9. Оценка возможности использования тест-систем

для экспресс диагностики лихорадки Эбола

4.10. Непрямой иммунофлуоресцентный анализ

(НМФА) для определения антител к вирусу Эбола

4.11. НМФА для определения антигена вируса Эбола

4.12. Определение геномной РНК вируса Эбола

в сыворотке экспериментально зараженных приматов

методом молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот

Глава V. Разработка методов специфической и неспецифической коррекции развития эндогенного

шока при лихорадке Эбола

4

5.1. Разработка и изучение гетерологичных иммуноглобулиновых препаратов для экстренной профилактики и иммунотерапии лихорадки Эбола

5.2. Изучение возможности вакцинопрофилактики

лихорадки Эбола

5.3. Исследование возможности коррекции развития эндогенного шока антивирусными

препаратами и методами экстренной терапии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Список использованной литературы

Список используемых сокращений.

АЛАТ - аланинаминотрансфераза АСАТ - аспартатаминотрансфераза АГ - антиген

адВЗ - вирус Эбола, адаптированный к морским свинкам АОЗ - антиоксидантная защита АТ - антитело

БОЕ - бляшкообразующая единица БОЕ-Е - бурстобразующая единица эритроидных предшественников

БСА - бычий сывороточный альбумин ВГЛ - вирусные геморрагические лихорадки ВКЖ - вируссодержащая культуральная жидкость ВОВ - вирус осповакцины

ВОВ\/Р24 - ВОВ со встроенным геном белка \/Р24 ВЭ - вирус Эбола

ГЛЭ - геморрагическая лихорадка Эбола

ДВС - диссеминированное внутрисосудистое свертывание

дВЭ - дикий (исходный) штамм ВЭ

ИК - иммунные комплексы

инВЭ - инактивированный вирус Эбола

ИФА - иммуноферментный анализ

К - отрицательный контрольный реагент

К+ - положительный контрольный реагент

КК - культура клеток

КОЕ-ГМ - колониеобразующие единицы гранулоцитарно-макрофагальных предшественников

КРС - крупного рогатого скота (сыворотка) МДА - малоновый диальдегид мин - минут

мкг - микрограмм МЭТ - меркаптоэтанол

НМФА - непрямой метод флюоресцирующих антител

об/мин - оборотов в минуту

ООВИ - особо опасные вирусные инфекции

ООЕ - оспообразующая единица

ОП - оптическая плотность

Опкрит - оптическая плотность критическая

ОФД - ортофенилендиамин

ОЦК - объем циркулирующей крови

ПА - пролиферативная активность

ПААГ полиакриламидный гель

ПАФ - полный адъювант Фрейнда

ПДФ - продукты деградации фибрина и фибриногена

ПМЯЛ - полиморфно-ядерные лейкоциты

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПТИ - протромбиновый индекс

ПЭГ - полиэтиленгликоль

ПФС - показатель фагоцитарной способности

РН - реакция нейтрализации

РСК - реакция связывания комплемента

СПЖ - средняя продолжительность жизни

сут - сутки

ФИТЦ - флюоресцеинизотиоцианат натрия ФНО - фактор некроза опухолей ФС - фагоцитарная способность ФСБ - фосфатно-солевой буферный раствор ФСБ-Т - фосфатно-солевой буферный раствор с добавлением твина-20

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

ЦФБ- цитратно-фосфатный буферный раствор

ЭДТА - этилендиаминтетраацетат

ЭП - этаноловая проба

1дв - иммуноглобулины класса С

БОЗ - додецил сульфат натрия

ТМЕ - трис-НС!, №С1, ЭДТА-буферный раствор

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Патологическая физиология», 14.00.16 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Основы патогенеза, принципы диагностики и специфической коррекции геморрагической лихорадки Эбола в эксперименте»

Введение

Актуальность проблемы:

Вирусные геморрагические лихорадки (ВГЛ) вызывают тяжелые заболевания человека и представляют значительную угрозу здоровью населения многих регионов мира. Возбудителями этих заболеваний,

объединенных из-за сходства клинических проявлений в группу

Р

геморагических лихорадок, являются РНК-содержащие вирусы, принадлежащие к 4 различным семействам: Тодаутйае (Р1аумпс1ае), Bunyaviridae, АгепауИс1ае, РПоуИс1ае [Ниддтв и.УУ. е1 а1., 1996]. Представитель последнего, вирус Эбола (ВЭ), еще недавно знакомый только узкому кругу специалистов, сегодня широко известен благодаря средствам массовой информации, остро отреагировавшим на высокую контагиозность и летальность вызываемой им болезни во время эпидемической вспышки в Заире в 1995 году.

Действительно, геморрагическая лихорадка Эбола сравнительно недавно заявившее о себе тяжелое заболевание, входящее в обойму геморрагических лихорадок и характеризующееся высокой (до 88%) летальностью. Этиологический агент лихорадки по морфологическим, генетическим и антигенным признакам отнесен к семейству филовирусов (РПоу!пс!ае), прототипным для которого является ранее изолированный вирус Марбург. Заболевание характеризуется тяжелым течением с развитием геморрагического синдрома, глобальным нарушением деятельности печени, почек и других внутренних органов. Высокая контагиозность осложняет деятельность медицинского персонала. Более того, часть вспышек этого заболевания, имевших место на африканском континенте, начиналась как внутрибольничная инфекция после хирургического вмешательства у больных лихорадкой Эбола с ошибочно поставленным диагнозом.

Вспышки лихорадки Эбола были впервые зарегистрированы на юге Судана и на севере Заира в июне-ноябре 1976 года. Заболевание и вызывающий его вирус получили название по наименованию реки в Заире (Эбола), в районе деревни Ямбуку, где во время вспышки 1976 года был выделен первый штамм возбудителя [Jonhson К.М., et al., 1977]. В последующие годы в центральноафриканском регионе наблюдался ряд спорадических и эпидемических вспышек лихорадки Эбола [Feldmann Н., etal., 1996а].

В 1989, 1992 и 1996 гг имел место завоз эболаподобного вируса в США и Италию с приматами с Филиппин [Centers..., 1989]. Вирус был впервые зарегистрирован во время вспышки геморрагической болезни в карантинном обезьяньем питомнике в г.Рестон (США) в период прохождения карантина группой обезьян, поступившей из Юго-Восточной Азии (Филиппины). Несмотря на то, что возбудитель был высоколетален для обезьян, никто из обслуживающего персонала питомника, контактировавший с больными животными, не заболел, хотя антитела к возбудителю у части персонала были выявлены. Возбудитель получил название вирус Рестон по наименованию места выделения.

В связи с исключительно высоким уровнем летальности лихорадки Эбола, высокой контагиозностью, способностью вызывать тяжелые эпидемии, актуальными задачами, стоящими перед современной медициной, являются создание средств диагностики, специфической профилактики и лечения этого тяжелого вирусного заболевания. В последние годы, в связи с расширением связей с африканскими государствами и повышением миграционных тенденций у населения эта проблема приобретает особое значение. Однако, предпринимавшиеся попытки не дали заметного успеха. Очевидно, что реализация этих задач затруднена слабой

изученностью биологии возбудителя и патогенеза как этой инфекции, так и геморрагических вирусных лихорадок в целом.

Комитет экспертов ВОЗ в своем докладе [Вирусные геморрагические лихорадки, 1986] обозначил необходимыми следующие научные исследования:

а) определить механизм, приводящий к диатезу при каждой из вирусных геморрагических лихорадок;

б) установить роль иммунной системы в патогенезе каждой из этих болезней;

в) определить механизмы ведущие к шоку, почечной недостаточности и неврологическим расстройствам, наблюдаемым при некоторых вирусных геморрагических лихорадках.

Патогенез лихорадки Эбола сложен и затрагивает жизнедеятельность многих органов. Несмотря на многолетнее изучение патогенетических особенностей инфекции, не существует единого мнения о том, что является пусковым механизмом развития столь быстропрогрессирующего заболевания. Авторы соответствующего раздела Fields virology констатируют, что механизм патофизиологических изменений, которые делают филовирусные инфекции столь смертоносными, остаются непонятыми [Peters C.J., et al., 1996]. Ряд авторов считает важнейшим фактором патогенеза массивную вирусную инфекцию клеток важнейших внутренних органов. Другие связывают разрушительность филовирусных инфекций с инфекцией эндотелиальных клеток, что приводит к нарушению проницаемости сосудов и активации факторов свертывания, провоцирующих развитие синдрома

диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдром) [Fisher-Hoch S.P., et al., 1985, Verstraete M., 1978]. Проведенные различными авторами исследования показывают также задействованность в патологическом процессе макрофагов, как

9

первичных резервуаров вируса в организме. Поражение этих клеток, секретирующих большое число цитокинов и других медиаторов, возможно приводит к нарушению синтеза этих веществ, что, в свою очередь, меняет цитокиновый фон организма, обусловливая развитие ряда патологических процессов [Feldmann. Н., et al., 1996Ь]. В последнее время становится популярной версия молекулярной мимикрии, провоцирующей иммуносуппрессию [Volchkov V.E., et al., 1992] или аутоиммунную агрессию [Tilson M.D., 1996].

Литературные данные о патофизиологических изменениях при лихорадке Эбола, в том числе экспериментальной, крайне малы, исследования проводили, в основном, на высоковосприимчивых к этому возбудителю приматах с использованием больших заражающих доз [Jaax N.K., et al., 1996, Fisher-Hock S.P., et al., 1992a, Jahrling P.В., et al, 1996a, Johnson E., et al, 1995]. Таким образом механизмы развития патологических изменений при данном заболевании остаются слабо изученными и требуют специальных исследований.

Известно, что некоторые животные (например, кролики) невосприимчивы к ВЭ и при инокулировании вирусом не проявляют клинических признаков заболевания. Другие животные (к ним относятся морские свинки) являются условновосприимчивыми к ВЭ, т.е. на введение вируса отвечают повышением температуры тела, снижением веса, но заболевание заканчивается выздоровлением, в отличие от высоковоспррммчивых животных (приматы), у которых заболевание стремительно переходит в стадию исхода.

Для выявления значимых для патогенеза инфекции физиологических нарушений, нами был выбран методический прием сравнительного изучения изменения иммунологических, гематологических и биохимических параметров в цепочке возрастания восприимчивости животных к ВЭ при однократной и повторных

ю

встречах с этим возбудителем. Модификацией этого приема является использование штаммов ВЭ с различным уровнем патогенности для морских свинок.

Поскольку патофизиологические нарушения могут быть вызваны ВЭ не только опосредованно, через поражение клеток, секретирующих медиаторы, но и непосредственно, за счет свойств составляющих вирус белков, для изучения их возможной роли в развитии физиологических дисфункций in vivo и in vitro было исследовано влияние очищенного инактивированного цельновирионного ВЭ, а также его отдельных белков, на иммунную систему макроорганизма.

Раннее распознавание случаев заболевания жизненно необходимо для контроля лихорадочных состояний неясной этиологии при подозрительном анамнезе и может быть выполнено только при наличии быстрого, специфичного и доступного метода. Этот метод должен быть применим также для обследования импортируемых в Россию приматов и для оценки уровня вирус- и антителопродукции в ходе инфекционного процесса, что является важным прогностическим признаком.

Важнейшим вопросом профилактики инфекционных заболеваний является разработка вакцины для иммунизации контингента риска и получение иммуноглобулинов, обладающих протективными свойствами. Первые данные относительно лечения лихорадки Эбола иммунной плазмой конвалесцентов были опубликованы при описании внутрилабораторной инфекции исследователя, работавшего с ВЭ [Emond R.T.D., и др., 1977]. Однако источники такой плазмы чрезвычайно ограничены и, следовательно, единственный способ разрабатывать этот тип антивирусных препаратов состоит в использовании гетерологичной иммунной сыворотки. Несмотря на

существенные недостатки таких препаратов их применение возможно в условиях отсутствия более эффективных и менее реактогенных.

После выделения вируса Эбола, как этиологического фактора одноименного заболевания, учеными предпринимались неоднократные попытки разработать вакцину для профилактики вызываемого им заболевания. В первую очередь пытались создать цельновирионную инактивированную вакцину. Мнения авторов, проводивших подобные исследования, диаметрально различаются. Так, Lange G.V. [1985] с соавторами иммунизировал приматов концентрированным очищенным ВЭ, инактивированным гамма-облучением, с применением бактериального адъюванта. Полученные результаты, по мнению авторов, вызывают сомнение в возможности индукции иммунитета с помощью инактивированных белков. В то же время Lupton H.W. [1980] показал наличие частичной защиты от данной инфекции у иммунизированных морских свинок, а В.В. Михайлов [1994] с соавторами получили выраженную защиту на павианах-гамадрилах при использовании для иммунизации концентрированного инактивированного вируса. Однако для достижения подобного результата были использованы инъекции миллиграммовых количеств очищенного вируса с адъювантом Фрейнда, что недопустимо для человека.

Цель работы.

Выявление комплекса иммунологических, биохимических и гематологических характеристик развития эндотоксического шока при геморрагической лихорадке Эбола в эксперименте. Разрабо-^гка методов специфической диагностики заболевания и предупреждения или коррекции развития эндотоксического шока.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительное изучение патофизиологических особенностей течения экспериментальной лихорадки Эбола у животных с различным уровнем восприимчивости к ВЭ.

2. Провести сравнительное изучение патофизиологических особенностей течения экспериментальной лихорадки Эбола у морских свинок при введении штаммов ВЭ с различным уровнем вирулентности.

3. Изучить модулирующие свойства белков ВЭ в отношении иммунного, гематологического, биохимического статуса восприимчивых и невосприимчивых животных.

4. Исследовать наличие аутоиммунных процессов при экспериментальной лихорадке Эбола и их возможную роль в патогенезе заболевания.

5. Изучить вопросы культивирования и оптимизировать технологию получения очищенного ВЭ в препаративных количествах, разработать методы получения очищенного антигена и специфических антител к ВЭ и на этой основе методы специфической диагностики.

6. Посредством подбора условий иммунизации животных получить иммуноглобулиновый препарат, обладающий протективными свойствами против болезни Эбола. Изучить профилактические и лабораторно-клинические свойства иммуноглобулинов.

7. Сконструировать и испытать цельновирионные инактмвированные и рекомбинантные препараты для изучения возможности специфической профилактики лихорадки Эбола.

Научная новизна.

Проведено сравнительное изучение важнейших физиологических параметров у восприимчивых и невосприимчивых к ВЭ животных в ответ на введение им инактивированного антигена ВЭ и штаммов с различным уровнем вирулентности. Сделаны выводы о том, что развитие летальной инфекции сопровождается ранними дисфункциями системы гемостаза, следствием чего является развитие ДВС-синдрома. При этом собственно белки ВЭ также обладают свойствами, приводящими к дисбалансу гемостатических параметров. Это показывает, что ВЭ как непосредственно, так и через продукты репликации, способен активировать цепь ферментативной активности факторов свертывающей системы крови, что является важным звеном в патогенезе данного заболевания.

Изучено влияние цельновирионного инактивированного ВЭ на гранулоцитарно-макрофагальные и эритроидные предшественники у человека. Показан эффект ингибирования роста ранних эритроидных предшественников.

Изучено и показано in vitro иммуносупрессивное воздействие цельновирионного инактивированного ВЭ на периферические лимфоциты человека. Показано, что иммуносупрессивные свойства ВЭ связаны с поверхностным гликопротеином (125 КДа), но не связаны с «иммуносупрессивным доменом».

Показана роль фагоцитарной активности нейтрофил^ов в формировании устойчивости невосприимчивых к ВЭ животных.

Разработаны иммуноферментные тест-системы для выявления антигена ВЭ и антител к нему. Показана возможность постановки специфического диагноза на 5-6 сутки после инфицирования, до развития основных клинических симптомов заболевания.

Разработанные тест-системы позволяют вести клиническое сопровождение инфекции, корректировать стратегию лечения.

Разработаны методы получения нейтрализующих антител к ВЭ от невосприимчивых животных-доноров; фракционированы, охарактеризованы и испытаны гетерологичные

иммуноглобулиновые препараты для профилактики лихорадки Эбола.

Получены препаративные количества очищенного вируса Эбола. Разработаны и апробированы цельновирионн^ые инактивированные препараты для вакцинации против лихорадки Эбола; апробированы протективные свойства рекомбинантных конструкций на основе вируса осповакцины.

Методом направленной селекции впервые получена коллекция лабораторных штаммов ВЭ с измененнными биологическими свойствами .

Практическая значимость работы.

Разработана модель изучения патофизиологии лихорадки Эбола в градиенте восприимчивости лабораторных моделей.

Полученные данные о развитии эндотоксического шока используются в учебном процессе в Иркутском Государственном Медицинском Университете.

Создана коллекция лабораторных штаммов ВЭ, с измененными биологическими свойствами, депонированная в Музее микроорганизмов ГНЦВБ «Вектор».

В результате проведенных исследований отработаны технология отъемно-доливного культивирования ВЭ в перевиваемых культурах клеток Vero и Л-68 и технология получения очищенного концентрированного препарата вируса с высоким биологическим и физическим титром.

Разработаны действующие макеты иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВЭ и антигена ВЭ.

Разработаны и испытаны гетерологичные иммуноглобулины для профилактики лихорадки Эбола.

Апробация работы и публикации.

Материалы диссертационной работы были доложены:

1) на Всесоюзной конференции "Современные направления создания медицинских диагностикумов" ,1990, Москва;

2) на Всесоюзном научном симпозиуме "Арбовирусы и арбовирусные инфекции. Итоговое совещание центра экологии и индикации возбудителей инфекционных заболеваний". Москва, Лыткино, 1 -4 апр. 1991 ;

3) на международной конференции "Medical Biotechnology,

Immunization and AIDS", Ленинград, 12-18 июня 1991; k

4) на межведомственной конференции "Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций", п.Кольцово, 7-8 апреля 1993 г.;

5) на Всероссийской научной конференции "Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций", г.Саратов, 21-23 сентября 1993 г.;

6) на Российской научной конференции "Генетика и биохимия особоопасных возбудителей инфекционных заболеваний", Волгоград, 1992;

7) на 9-м международном вирусологическом конгрессе в Глазго "IX the International Congress of Virology. Glasgow". 8-13 августа 1993;

8) на научной конференции РАМН "Здоровье и болезни человека на рубеже XXI века", г.Москва, 25-27 мая 1994 г;

9) на научной конференции молодых ученых России, посвященной 50-летию Академии Медицинских Наук. Москва, 1994;

10) на 9 международной конференции по вирусам с негативным геномом "Ninth International Conference on Negative Strand Viruses", Estoril, Португалия, 2-7 октября 1994;

11) на седьмом международном конгрессе инфекционных болезней "7th International Congress for Infectious Diseases", Hong Kong, 10-13 июня 1996;

12) на 10-м международном вирусологическом конгрессе "Xth International Congress of Virology", Иерусалим, 11-16 августа 1996;

13) на конференции "Актуальные вопросы вакцинопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний". Хабаровск, 4-5 декабря 1996;

14) на 10 международной конференции по вирусам с негативным геномом "10th International Conference on Negative Strand Viruses", Дублин, Ирландия, 21-27 сентября 1997.

Результаты проведенных исследований отражены в 58 научных работах, из них 26 статей в российских и зарубежных научных журналах.

Структура работы.

Диссертация состоит из введения, 5 глав, отражающих литературный обзор, использованные материалы и методы, результаты собственных исследований, заключения и выводов. Она иллюстрирована 25 таблицами и 25 рисунками. Указатель литературы содержит ссылки на работы 104 отечественных и 136 зарубежных авторов.

Основные экспериментальные результаты, представленные в диссертации, получены в соавторстве с Н.В.Мерзликиным, Н.М.Зубавичене, А.А.Дадаевой, у которых автор является руководителем диссертационных работ, другими сотрудниками ГНЦ ВБ "Вектор": Л.П.Сизиковой, В.Е.Волчковым, В.И.Офицеровым,

Н.Н.Сергеевым, Л.М.Дедковой, М.П.Смолиной, Н.Б.Черным, С.В.Лучко, В.А.Кузьминым, В.А.Терновым, С.В.Нетесовым, а также сотрудниками ИКИ СО РАН И.В.Чернухиным, М.Н.Тузовой, в соавторстве с которыми опубликованы статьи. Своим коллегам и соавторам проведенных исследований автор приносит искреннюю благодарность.

Положения, выносимые на защиту.

Пассирование вируса Эбола на морских свинках позволяет селектировать минорную популяцию вируса, обладающую повышенной вирулентностью для этих животных. Пассирование ВЭ на культуре клеток привело к снижению патогенных свойств возбудителя для новорожденных мышей.

Степень устойчивости организма к ВЭ определяют клеточные механизмы иммунитета, как специфические, так и неспецифические. Невосприимчивые к ВЭ животные реагируют на введение живого и инактивированного возбудителя активацией фагоцитарной способности (ФС) нейтрофилов крови, в то время как восприимчивые - снижением. У восприимчивых животных также выраженно подавляется Т-клеточное звено иммунитета.

Антиген ВЭ обладает иммуносупрессивными свойствами в отношении периферических лимфоцитов крови человека. Эти свойства опосредованы поверхностным гликопротеидом вируса, но не связаны с его "иммуносупрессивным доменом".

Белки ВЭ способны непосредственно влиять на гемопоэтическую активность, в частности, на эритроидные предшественники.

При экспериментальной инфекции морских свинок патогенными штаммами вируса Эбола в их сыворотке появляются антитела,

образующие иммунные комплексы и реагирующие с эндоваскулярными клетками внутренних органов, в то время как при инфекции, вызванной диким штаммом таковые не появляются. Развивающееся в результате аутоиммунных реакций поражение эндотелия приводит к выходу в кровяное русло факторов гемокоагуляции, провоцирующих внутрисосудистое свертывание.

Развитие летальной инфекции сопровождается ранними дисфункциями системы гемостаза, вызывающими гиперкоагуляцию и активацию системы фибринолиза. ВЭ как непосредственно, так и через продукты репликации, способен активировать цепь ферментативной активности факторов свертывающей системы крови, следствие чего является критическим звеном в патогенезе данного заболевания.

Выраженное снижение содержания ЦИК в крови морских свинок в терминальную стадию заболевания объясняется их осаждением в интиме сосудов, тканях, на тромбоцитах и т.д., что приводит к повреждению последних, провоциру^ыброс факторов гемокоагуляции и развитие ДВС-синдрома.

Отъемно - доливное культивирование ВЭ, его концентрирование и очистка методом ультрафильтрации и ультрацентрифугирования позволяют получить качественные средства диагностики.

Разработанные методы иммуноферментной диагностики антигена и антител ВЭ позволяют поставить диагноз этого заболевания в первые сутки лихорадочного состояния.

Сыворотки, обладающие нейтрализующими ВЭ свойствами, могут быть получены при иммунизации живым ВЭ. Синтез нейтрализующих антител опосредован поверхностным гликопротеином.

Похожие диссертационные работы по специальности «Патологическая физиология», 14.00.16 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Чепурнов, Александр Алексеевич

выводы.

1. Разработана модель для изучения патогенеза геморрагических лихорадок, основанная на изучении комплекса патофизиологических процессов у животных с различной степенью восприимчивости к инфекционному агенту. Данная модель позволяет изучать как патогенез заболеваниядак и механизм устойчивости к нему.

2. При развитии болезни Эбола возникают ранние дисфункции системы гемостаза, приводящие к возникновению ДВС-синдрома, что является следствием способности ВЭ как непосредственно, так и через продукты репродукции активировать цепь ферментативных факторов свертывающей системы крови.

3. Белки ВЭ обладают способностью воздействовать на гемостаз, вызывая гиперкоагуляцию и активацию системы фибринолиза, о чем свидетельствует появление продуктов деградации фибрина и фибриногена в сыворотке крови невосприимчивых к ВЭ кроликов при введении как активногодак и инактивированного препарата вируса.

4. Фагоцитарная способность нейтрофилов у восприимчивых к ВЭ животных снижена по сравнению с невосприимчивыми к нему животными, что, наряду с развивающейся у первых нейтрофилией и появлением молодых форм гранулоцитов в крови позволяет предположить их активную роль в устойчивости макроорганизмов к инфицированию.

5. Антиген вируса Эбола обладает иммуносупрессивными свойствами, связанными с консервативной частью поверхностного гликопротеина, что играет важную роль в патогенезе болезни, а также является причиной низкой иммуногенности инактивированных цельновирионных препаратов для иммунизации против лихорадки Эбола.

6. Полученные данные показывают, что естественная резистентность животных к вирусу Эбола определяется факторами клеточного иммунитета, в частности, активизацией фагоцитарного ответа и увеличением числа Т-лимфоцитов.

7. В крови морских свинок, инфицированных вирулентным (адаптированным) для них штаммом ВЭ, выявлены аутоантитела, взаимодействующие с клетками эндотелия интактных животных, в то время как у морских свинок, инфицированных слабопатогенным для них (диким) штаммом ВЭ, они отсутствуют.

8. Иммунные комплексы играют важную роль в развитии патологического процесса, о чем свидетельствуют наличие в крови инфицированных вирулентным штаммом ВЭ морских свинок пролимфоцитов и лимфобластов при отсутствии антител к ВЭ, элиминация ЦИК из кровотока, появление эозинофилов в крови этих животных и выявление С5а, СЗа на эндотелии.

9. Иммунизация невосприимчивых лабораторных животных живым ВЭ позволяет получить антисыворотки с нейтрализующими свойствами, что позволяет использовать гетерологичные иммуноглобулины для экстренной профилактики инфицирования ВЭ.

10. Культивирование ВЭ на стационарном монослое культур клеток Vero и J1-68 с последующей ультрафильтрацией и ультрацентрифугированием, позволяет получить препаративные количества высокоочищенного ВЭ (95% по данным SDS-ПААГ электрофореза). На этой основе разработаны экспериментальные серии иммуноферментных тест-систем для определения антигена и антител ВЭ у человека и приматов, а также методы непрямой иммунофлюоресценции и молекулярной гибридизации для верификации случаев с подозрением на лихорадку Эбола.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Как уже было сказано, для изучения значимых для патогенеза лихорадки Эбола физиологических нарушений нами был использован методический прием сравнительного изучения изменения иммунологических, гематологических, гемостатических и биохимических параметров у животных, обладающих различным уровнем восприимчивости к ВЭ и лабораторные штаммы с различным уровнем патогенности. Схематическое изображение методического подхода для изучения патогенеза лихорадки Эбола представлено на рис.3.0. Ранжированные в порядке усиления восприимчивости животные образуют своеобразный градиент, в котором сравнительное изучение физиологического ответа на введение ВЭ позволяет выявить наиболее значимые для патогенеза. В созданной таким образом условной цепочке возрастания восприимчивости к вирусу Эбола и были изучены качественные и количественные параметры иммунологических, гемостатических, гематологических и биохимических показателей. Для оценки возможных эффекторных свойств белков вируса Эбола было также исследовано влияние на этих животных инактивированного вируса.

Формирование врожденного иммунитета тесно связано с рядом реакций организма, имеющих неспецифический характер, среди которых фагоцитоз является фундаментальным механизмом. Важную роль в фагоцитозе играют полиморфно-ядерные лейкоциты или нейтрофилы, которые представляют собой важную популяцию лейкоцитов крови и обладают значительной фагоцитарной способностью. Установлено, что невосприимчивые к ВЭ животные реагируют на введение данного вируса (живого и инактивированного) выраженной ФС нейтрофилов, в то время как восприимчивые к ВЭ животные таким образом на введение возбудителя не реагируют.

Поскольку активированные нейтрофилы секретируют целый набор цитокинов, выступающих в качестве модуляторов воспалительного процесса, участвуют в каскадной сети регуляции иммуногенеза, в частности представляют антиген лимфоцитам, стимулируют их пролиферацию и усиливают антителопродукцию, можно сказать, что нейтрофилы крови чувствительных к ВЭ морских свинок не воспринимают ВЭ и его антиген как чужеродные агенты при первой встрече с ними. После повторных встреч с дВЭ нейтрофилы крови морских свинок (вероятно будучи уже активированными другими клетками иммунной системы) дают увеличение ФС нейтрофилов, но гораздо менее выраженное, чем таковое у нечувствительных животных (кроликов).

Возможно, что отсутствие активации нейтрофилов у морских свинок при первой встрече с ВЭ связано с отсутствием необходимого цитокинового фона, вызванного инфекцией продуцирующих их мононуклеарных фагоцитов. Поражение мононуклеарных фагоцитов, которые являются первичной мишенью ВЭ, может приводить к нарушению их регуляторных функций, и в частности, к подавлению синтеза цитокинов или других медиаторов, необходимых для активации нейтрофилов.

В любом случае очевидно, что различие в ФС нейтрофилов у восприимчивых и невосприимчивых к ВЭ животных при инокуляциях этого агента показывает взаимосвязь восприимчивости животного к

ВЭ с активностью фагоцитарных механизмов его организма, и то, что фагоцитоз, по-видимому, является одним из первых звеньев в системе устойчивости организма к инфекции Эбола.

Поскольку инфекционный процесс, вызванный ВЭ, сопровождается тотальными нарушениями в свертывающей системе крови, что выражается в развитии ДВС-синдрома и тромбообразования, вызывающего некротические изменения внутренних органов и гем>оррагии, нами были исследованы время-зависимые изменения ключевых гемостатических и биохимических показателей крови у чувствительных животных (морские свинки)/ в ответ на введение штаммов ВЭ с различным уровнем патоген ности, и нечувствительных животных.

В ответ на введение препаратов ВЭ (в том числе инВЭ) у морских свинок ЭП становится положительной, что свидетельствует об активации фибринолитической системы и косвенно свидетельствует о наличии гиперкоагуляции. У невосприимчивых животных ЭП не превышала норму, однако отмечено появление ПДФ, что говорит о том, что гиперкоагуляция имела место, но не была зафиксирована в силу своей непродолжительности. Возникновение гиперкоагуляции в организме при введении чужеродных агентов может быть связано с наличием в организме пускового уровня эндотоксинов (например, продукты деструкции разрушенных вирусом тканей) или экзотоксинов (например, белки самого вируса). Поскольку при введении инактивированного ВЭ и при экспериментах на нечувствительных животных вопрос о влиянии эндотоксинов отпадает, очевидно, что белки ВЭ способны воздействовать на гемостаз и активировать его не зависимо от чувствительности макроорганизма к ВЭ. Это также косвенно подтверждает, что критической системой макроорганизма, определяющей восприимчивость к ВЭ, является иммунная.

Анализ воздействия препаратов ВЭ на популяции лимфоцитов показал, что хотя инокуляция дикого штамма ВЭ приводила к снижению количества Т и В - лимфоцитов у морских свинок непосредственно после введения, впоследствии оно сменялось умеренным возрастанием, в то время как после введения адВЭ количество В и Т - лимфоцитов резко уменьшилось и оставалось таковым до терминальной стадии.

Накопление в крови ЦИК характеризует многие патологические процессы, в то время как снижение их уровня свидетельствует об элиминации чужеродных антигенов и продуктов распада ткани из организма. Иммуноглобулины при этом, соединяясь с антигенами и продуктами распада, уходят из кровотока. Поэтому, выраженное снижение содержания ЦИК у морских свинок, инфицированных адВЭ, в терминальную стадию заболевания мы объясняем потреблением иммуноглобулинов при связывании их с вирусными антигенами и поврежденными тканями.

Гематологическое изучение периферической крови животных при экспериментальной лихорадке Эбола в наших экспериментах позволило выявить ряд особенностей в ее составе. Развитие лимфопении у морских свинок при инфицировании адВЭ приводило к снижению количества лимфоцитов до 5-9% и эти лимфоциты были обычно крупные, с нежной структурой ядра, что является признаком их незрелости или функциональной недостаточности. В мазках периферической крови наблюдались лишь единичные пролимфоциты и лимфобласты.

Другой особенностью клеточного состава периферической крови экспериментальных животных является появление в терминальную фазу инфекции ювенильных форм гранулоцитов. Появление в крови метамиелоцитов, миелоцитов и промиелобластов сопровождалось увеличением числа палочкоядерных нейтрофилов, и общий пул гранулоцитов достигал 90-95%. Нейтрофилы отличались грубой зернистостью и выраженной вакуолизацией цитоплазмы. К концу заболевания возрастал процент эозинофилов с появлением эозинофильных метамиелоцитов и значительного количества молодых, крупных, малозернистых тромбоцитов, отделившихся от мегакариоцитов 11-й степени зрелости. Все это свидетельствует об активации гранулоцитарного и мегакариоцитарного ростков кроветворения костного мозга животных, сопровождающегося выходом ранних форм клеток в кровоток, что может быть вызвано действием различных пролиферативных факторов, которые, по видимому, отражают состояние повышенного гемопоэтического напряжения.

Снижение клеточного иммунитета при инфекции Эбола может быть опосредовано рядом причин, таких как: непосредственное подавление иммунокомпетентных клеток размножающимся вирусом, продукция эндогенных иммуносупрессивных цитокинов (фактор некроза опухолей, интерфероны), которые, как известно, появляются в высоких концентрациях при различных вирусных заболеваниях, в том числе и при лихорадке Эбола [РеИтапп-Н. а1., 1996Ь]. Проведенные нами эксперименты показали, что данный вирус может непосредственно подавлять активность лимфоцитов и эта способность связана с поверхностным гликопротеином. Как показано [\Zolchkov \/.Е., е* а!., 1996], ОР и ввР ВЭ может секретироваться инфицированной клеткой не только в составе вириона, но и в виде отдельного белка. Это может усиливать иммуносупрессию при данном заболевании, что, в свою очередь, может приводить к снижению иммунного ответа на вирус и неспособности блокировать вирусную инфекцию. Это также может быть причиной низкой эффективности иммунизации инактивированными цельновирионными препаратами. Полученные данные подтверждают предположение об иммуносупресоивных свойствах белков ВЭ, но не совпадают с гипотезой, что это вызвано молекулярной мимикрией с иммуносупрессивным доменом онкогенных ретровирусов [Volchkov V.E. at al, 1992].

Исследование влияния антигена ВЭ на рост гемопоэтических предшественников показал, что белки ВЭ обладают также способностью отрицательно влиять на эритропоэз. В целом приведенные данные показывают способность ВЭ оказывать комплексное негативное воздействие на макроорганизм, что, по-видимому, играет свою важную роль в патогенезе заболевания. Однако ни одна из этих причин не представляется самодостаточной для развития фатального исхода. К аналогичным выводам приходят авторы, анализировавшие патоморфологическую и патофизиологическую картину при инфекции человека и приматов. Внимание специалистов привлек факт, что для лихорадки Эбола типично повышение активности аминотрансфераз, при этом в большинстве случаев наблюдается превышение активности АСАТ над активностью АЛАТ [Fisher-Hoch-1992, Peters-1996], что указывает на внепеченочный генез патологии. Однако, известно, что основным органом-мишенью у человека и обезьян является печень, в которой при патоморфологическом анализе наблюдается коагуляционный некроз на обширных площадях [Baskerville-1978,-1985]. С другой стороны, превалирование активности АСАТ над активностью АЛАТ характерно, прежде всего, для поражения миокарда. В то же время, патоморфологический анализ показывает, что в сердечной мышце имеются лишь минимальные изменения, связанные с нарушением проницаемости кровеносных сосудов [Peters C.J., et al, 1991, Peters

С.е! а1, 1996]. Нам представляется, что подобное соотношение может сложиться из-за нарушения вывода ферментов из организма почками, в связи с чем АСАТ (быстровыводимый из организма фермент) накапливается и относительная концентрация этого фермента в сыворотке становится выше. Следовательно, роль поражения печени в генезе заболевания может быть весьма важной. Однако поражение печени мы увязываем не только с вирусной инфекцией составляющих ее клеток СМФ, купферовских клеток .и гепатоцитов [ЯуаЬс^коуа Е., е! а)., 1996], но и некрозом, спровоцированным кислородным голоданием, которое развивается вследствие тромбоза и других проявлений шока.

Проведенные нами исследования позволили комплексно оценить патофизиологические процессы, развивающиеся у различных по восприимчивости к ВЭ животных в ответ на введение как вирусных белков, так и живого ВЭ. Общие закономерности этих процессов, условно выраженные в трехбальной системе, сведены в табл.3.1. Анализ приведенных данных показывает, что расположенные по градиенту восприимчивости к ВЭ животные обладают различной динамикой биохимических и гемостатических параметров крови, но разным качеством иммунологических процессов, возникающих у них при контакте с ВЭ. Более того, такие важные гемостатические параметры как ЭП и ПДФ у животных любой чувствительности вызывают положительную реакцию, что свидетельствует о способности ВЭ вызывать срыв системы гемостаза любого вида животных. Динамика этих проявлений косвенно свидетельствует, что такая способность прямо коррелирует с количеством антигена. В то

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Чепурнов, Александр Алексеевич, 1998 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Абрамов М.Г. Клиническое значение миелограммы. - В кн: Гематологический атлас. - М.: Медицина, 1979. - С. 87-90.

2. Агафонов А.П., Стрельцова М.А., Игнатьев Г.М., Твердохлебов A.B., Чепурнов A.A., Калиберов С.А., Кузьмин В.А., Черный Н.Б. "Способ получения концентратов вирусов, вызывающих геморрагические лихорадки и обладающих иммуногенной и протективной активностью", Патент РФ N 2029561-. Приоритет 14.10.91, N заявки 5004595. Регистрация в госреестре 27.02.95.

3. Анджапаридзе О.Г. Реактогенные свойства гетерологичных гаммаглобулинов. // В кн: Серопрофилактика и серотерапия вирусных инфекций в эксперименте и клинике. - М., 1968. - С. 149-170.

4. Ашмарин И.П., Воробьев Л.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Ленинград, 1962.

5. Балуда (1980) В.П., Баркаган З.С., Гольдберг Е.Д., Кузник Б.И., Лакин K.M. Лабораторные методы исследования системы гемостаза.- Томск, 1980.

6. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. М.. Медицина. -1980. -С. 15-31.

7. Башкирев Т.А. Клиническая схема патогенеза геморрагической лихорадки с почечным синдромом //Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом в Среднем Поволжье:Сб. научн. трудов. -Л.,1980. -С.103-112.

8. Безредка A.M. Анафилактогенность и анти-анафилактоген-ность.-М„ 1928 -С. 130.

9. Беклемишев Н.Д. Иммунопатология и иммунорегуляция. -М.,1986.- С.42.

10. Белокриницкий Д.В., Дудкина Л.Н., Тарасова Л.Р. Теофиллиновый тест в оценке состояния клеточного иммунитета у

детей с различным клиническим течением системной красной волчанки. // Лаб. дело. - 1989. - N9. - С. 54-56.

11. Борисевич И.В., Краснянский В.П., Михайлов В В., Градобоев

B.Н., Лебединская Е.В., Потрываева Н.В. Разработка и получение иммуноглобулина против лихорадки Эбола. // Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций. Межведомственная конференция. Тезисы докладов. - Кольцово, 1993. -С.44.

12. Васильев Н.В. Очерки о роли кроветворной ткани в антителообразовании. - Томск, 1975. - С. 178, 204.

13. Вельбри С.К., Лиллеорг А.Л., Линдстрем С.Л. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов и иммуноглобулинов для характеристики патологического процесса. // Лаб. дело. -1988. - N5. -

C.7-11.

14. Вирусные геморрагические лихорадки. (Доклад комитета экспертов ВОЗ). - М.,1986. - С. 74-184.

15. Владимиров Ю.А., Арчакова А.И. Перекисное окисление липидов. - М., 1972.

16. Владыко A.C., А.А.Чепурнов, Р.Ф.Марьянкова, С.И.Быстрова, И.Н.Егоричева, В.А.Кузьмин, И.С.Лукашевич. Сравнение методов флюоресцирующих антител и твердофазного иммуноферментного анализа при выявлении антител к вирусу Марбург. // Вопр. вирусол. -1991.-N4. -С. 326-331.

17. Владыко A.C., Чепурнов A.A., Быстрова С.И., Лемешко H.H., Лукашевич И.С. Выявление антигена вируса Марбург методом твердофазного иммуноферментного анализа. Н Вопр. вирусол. - 1991. - N5. -С.419-422.

18. Волчков В.Е., Букреев A.A., Колыхалов A.A., Блинов В.М., Нетесов C.B. Определена нуклеотидная последовательность геномной РНК вируса Эбола. // Генетика и биохимия вирулентности

возбудителей особо опасных инфекций. Материалы Российской научной конференции. Тезисы докладов. - Волгоград, 1992. - С. 31.

19. Вопросы патогенеза и иммунологии вирусных инфекций. Под. ред. A.A. Смородинцева. - Л., 1995.

20. Габитов С.З., Воронина И.Е., Литвинов Р.И. Два простых способа обнаружения продуктов деградации фибрина в крови. // Лаб. дело. - 1982. - N6. - С.354-356.

21. Гавриленкова В.Ю., Рунова В.Ф., Минакова Л.В. Физикохимическая характеристика препаратов иммуноглобулинов человека. //Журнал микробиол. - 1979. - N7. - С.39-43.

22. Гавриленкова В.Ю., Каргина Т.М., Мовсисянц A.A., Сергеева Г.М. Сравнительное изучение физикохимических свойств различных гетерологичных препаратов гаммаглобулинов. // В кн: Стандарты, штаммы и методы контроля бактерийных и вирусных препаратов. - М., 1982. -С.28-33.

23. Геморрагическая лихорадка Денге: диагностика и лечение -ВОЗ, Женева, 1988.

24. Геморрагическая лихорадка Эбола в Заире в 1976 году. Отчет международной комиссии. //. Бюллетень ВОЗ. -1978. -Т.56. -N 2. -С. 213-236.

25. Геморрагическая лихорадка Эбола в Судане в 1976 году. Отчет международной комиссии. // Бюллетень ВОЗ. -1978. -Т.56. -N 2. -С. 247-255.

26. Грачева Л.А. Материалы по получению и очистке иммуноглобулина из плаценты человека. // Вир. и бакт. препараты. -1981. -Т.ЗО. - С.73-79.

27. Гриневич Ю.А., Алферов А.Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных. // Лаб.дело.- 1981.- N8,-С.493-495.

28. Гулый М.Ф. Природа и биологическое значение некоторых метаболических приспособительных реакций организмов. - Киев, 1977.

29. Дадаева A.A., Сизикова Л.П., Бакулина Л.Ф., Чепурнов A.A. Исследование фагоцитарной способности полиморфноядерных лейкоцитов крови кроликов и морских свинок при введении вируса Эбола. // Вопр. вирусол. - 1997. - N 2. - С.56-59.

30. Дедкова Л.М., Кудоярова Н.М., Чепурнов A.A., Офицеров В.И. Состав и иммунохимические свойства козьих иммуноглобуллинов против вируса Эбола. // Вопр. Вирусол. - 1994 - N 5 - С 229-231.

31. Дерябин П.Г., Логинова Н.В., Сергеев Ю.О., Захарова Л.А. Влияние костномозгового стимулятора антителопродуцентов на выработку вирусспецифических антител в организме инфицированных мышей. И Иммунология. -1983. - N6. - С. 30-32.

32. Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения. МЗ СССР. РД 42-28-889. - М„ 1989.

33. Долгушин И.И., Зурочка A.B., Чукичев A.B. Регуляторные пептиды нейтрофилов (нейтрофилокины). // Иммунология. - 1995.-N4. - С. 40-45.

34. Донченко В.В., Лебедев В.Н., Маркин В.А., Фирсова И.В. Эффективность вирусспецифических белков в иммуногенезе при экспериментальной лихорадке Марбург. Н Вопр. вирусол. - 1996. -Т.41. - N5. - С.216-218.

35. Дроздов С.Г., Гарин Н.С., Джиндоян Л.С., Тарасенко В.М. // Основы техники безопасности в микробиологических и вирусологических лабораториях.- М. 1987.

36. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А., Западнюк Б.И. Лабораторные животные. - Киев, Вища школа, 1983. - С.229.

37. Зербино Д.Д., Лукасевич Л.Л. Диссеминированное внутри-сосудистое свертывание крови. Факты и концепции. - М.: Медицина, 1989.

38. Иванов А.П., Е.А.Ткаченко, Г. ван дер Гроен, Бутенко A.M., Константинов O.K. Непрямой иммуноферментный метод для лабораторной диагностики геморрагических лихорадок Ласса и Эбола. // Вопр. вирусол. -1986. - N 2. - С. 186-190.

39. Иммуноферментный анализ / под ред. Т.Т.Нго, Г.Ленхофф. -М.: "Мир". - 1988. -С. 193-209, 220-221.

40. Игнатьев Г.М., Чепурнов A.A., Прозоровский Н.С., Стрельцова М.Ф., Агафонов А.П. Влияние индуктора интерлейкина 2 диуцифона на течение геморрагической лихорадки,вызываемой вирусом Марбург. // Интерферон-92. - М„ 1992. - С.164-168.

41. Инструкция о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп. // Саратов, 1979. - С.91.

42. Канев А.Н., Воробьева М.С., Загребельный С.Н., Широких Е.И. Принципы стандартизации панелей сывороток, предназначенных для оценки качества диагностических тест-систем (на примере иммуноферментной тест-системы для выявления антител к ВИЧ) // Вопр. вирусол. - 1992. - N 2. - С. 122-124.

43. Канев А.Н., Гутова Е.А., Ломанова Г.А., Воробьева М.С., Шалаев Е.Ю., Загребельный С.Н. Принципы создания стандартных панелей сывороток с низкой концентрацией антител к ВИЧ-1 для контроля качества коммерческих иммуноферментных тест-систем. // Вопр. вирусол. - 1993. - N 2. - С.86-89.

44. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Болезни крови и кроветворной системы, - М., 1948.

45. Клаус Д. Лимфоциты. Методы: Пер. санг. - М.,1990.

46. Колб В.Г., Камышников B.C. Клиническая биохимия - Минск, 1976. -С.171-174.

47. Коробейникова Э.Н. Модификация определения продуктов перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой. // Лаб. дело.-1989.- N7,- С.8-9.

48. Краснянский В.П., Михайлов В.В., Борисевич И.В., Градобоев В.Н., Евсеев A.A., Пшеничнов В.А. Получение гипериммунной лошадиной сыворотки к вирусу Эбола. // Вопр. вирусол. - 1995. - Т.40. - N 2. - С. 91-92.

49. Кудоярова Н.М., Дедкова Л.М., Сергеев H.H., Чепурнов A.A. Получение лечебно-профилактического иммуноглобулинового препарата против лихорадки Эбола. // Тезисы докладов российской научной конференции "Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций". - Саратов, 1993. - С.213.

50. Ледвина М.Н. Определение ß-липопротеидов в сыворотке крови. // Лаб. дело. - 1960. - N3. - С. 13.

51. Лихорадка Эбола (Информ. письмо Госкомитета санитарно-эпидемиологического надзора Российской Федерации) // Здоровье населения и среда обитания. - 1995. - N5 (26) - С. 3-6.

52. Лучко C.B., Дадаева A.A. Влияние комплекса специфической и симптоматической терапии на течение геморрагической лихорадки Эбола у приматов. // Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций. Межведомственная конференция. Тезисы докладов.- Кольцово, 1993. - С. 31.

53. Лучко C.B., Дадаева A.A., Устинова E.H., Сизикова Л.П., Рябчикова Е.И., Сандахчиев Л.С. Экспериментальное изучение геморрагической лихорадки Эбола на модели павианов-гамадрилов. // Бюлл. экспер. биол. мед. - 1995. - Т. СХХ. - N 9. - С.302-304.

54. Максам A.M., Гилберт У. Молекулярная биология. - М., 1986. -Т.20. - С.581-638.

55. Маркин В.А., Михайлов В.В., Краснянский В.П., Борисевич И.В., Фирсова И.В. Разработка принципов экстренной профилактики и лечения лихорадки Эбола. // Вопр. вирус. - 1997. - Т.42. - N1. - С.31-34.

56. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. - Новосибирск, 1989.

57. Маянский А.Н. Современная эволюция идеи И.И. Мечникова о внутрисосудистом воспалении. II Иммунология. - 1995. - N5. - С.8-14.

58. Мерзликин Н.В., Чепурнов A.A., Истомина H.H. Офицеров

B.И., Воробьева М.С. Разработка и применение иммуноферментной тест-системы для диагностики лихорадки Эбола. //Вопр. вирусол,-1995,-N 1.- С.31-35.

59. Методические указания по морфологической оценке. - М., 1983.

60. Мечников И.И. ¡1 Русск. мед. - 1883. - N1,- С.З.

61. Механизмы иммунопатологии. Под ред. С. Коена и др. - М.: Медицина, 1983. -С.41.

62. Михайлов В.В., Борисевич И.В., Черникова Н.К., Потрываева Н.В., Краснянский В.П. Оценка на павианах гамадрилах возможности специфической профилактики лихорадки Эбола. // Вопр. вирусол. -1994. -Т.39. - N2. - С.82-84.

63. Неприна Г.С., Пантелеева Е.С., Ярилин Л.А. Взаимосвязь чувствительности к теофиллину и экспрессии Fey- и Ясц-рецепторов Т-лимфоцитов человека в норме. II Иммунология. - 1987. - N2. -

C. 75-78.

64. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. - Кишинев, 1982. - С.113-116.

65. Никифоров В.В., Туровский Ю.Н., Калинин П.П., АкинфееваЛА, Каткова Л.Р., Бармин B.C., Рябчикова Е.И., Попкова Н.И., Шестопалов A.M., Назаров В.П., Ведищев С.В., Нетесов С.В. Случай лабораторного заражения лихорадкой Марбург. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1994. - N3. - С. 104106.

66. Новожилов С.С., Титенко A.M. Вируснейтрализующие антитела в сыворотках морских свинок, иммунизированных вирусом Эбола (штамм Заир). - Иркутск, НИ п/чум. Инст. Сибири и Дальнего Востока.- РЖБ 90-91 гг. - С.1110.

67. Новиков Д. К., Новикова В.Н. Клеточные методы иммунодиагностики,- Минск, 1979. - С. 182, 51, 70.

68. Перебоева Л.А., Рябчикова Е.И., Рассадкин Ю.Н. Морфологическое изучение печени некоторых лабораторных животных при экспериментальной Эбола-инфекции. Материалы межведомственной конференции "Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций" - Кольцово, 7-8 апреля 1993. - С.25.

69. Перебоева Л.А., Ткачев В.К., Колесникова Л.В., Кренделева Л.Я., Рябчикова Е.И., Смолина М.П. Ультраструктурные изменения в органах морских свинок при последовательном пассировании вируса Эбола. // Вопр. вирус. - 1993. - Т.38. - N4. - С. 179-182.

70. Петров Р.В. Иммунология. - М.: Медицина, 1982. - С.57.

71. Петров Р.В., Лебедев К.А., Симонова А.Р. Соотношение уровней субпопуляций Т-лимфоцитов, выявленных с помощью моноклональных антител и методом розеткообразования. //Физиология человека. - 1986. - Т. 12. - N1. - С. 94-99.

72. Понякина И.Д., Лебедев К.А. Метод розеткообразования для выявления Т- и В-иммунокомпетентных клеток. Возможности и ограничения. // Иммунология. - 1983. - N4. - С. 10-21.

73. Порядок и методы контроля иммунологической безопасности вакцин. Общие методические принципы. РД 42-28-10-90. - М.,1989.

74. Потапнев М.П., Печковский Д.В. Влияние цитокинов воспаления на фагоцитоз и бактерицидную активность нейтрофилов человека. -Иммунология. -1992. - N3. - С.34-36.

75. Потапнев М.П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении. // Иммунология. - 1995. - N4. - С. 34-40.

76. Программа изучения безвредности, реактогенности. "и иммунологической эффективности иммуноглобулина против болезни Эбола из сыворотки овец (коз), жидкого на добровольцах -НПО "Вектор", Новосибирск, 1990.

77. Пшеничнов В.А., Краснянский В.П., Михайлов В.В. Иммуноглобулины в вирусологических исследованиях и при профилактике некоторых инфекций. // Вопр. вирусол. - 1992. - Т.37. - N 4. - С. 178181.

78. Пшеничнов В.А., Махлай A.A., Михайлов В.В. Исследования с вирусами Марбург, Ласса и Эбола. // Вопр. вирус. - 1993. - Т.38. - N2-С.54-59.

79. Пугачев B.C. Теория вероятностей и математическая статистика. -М.: Наука, 1979. - 496 с.

80. Пьянков О.В., Сергеев А.Н., Пьянкова О.Г., Чепурнов A.A. Экспериментальная лихорадка Эбола у макак резусов. // Вопр. вирусол. - 1995. -Т.40. - N.. - С. 113-115.

81. РойтА. Основы иммунологии. Пер. санг. - М.. Мир, 1991.

82. Руководство по гематологии. Под. ред. А.И. Воробьева. - М: Медицина, 1985.

83. Рябчикова Е.И., Баранова С.Г., Ткачев В.К., Гражданцева A.A. Морфологические изменения при Эбола-инфекции у морских свинок. // Вопр. вирусол. - 1993. - Т.38. - N4. - С.176-179.

84. Рябчикова Е.И., Лучко C.B., Колесникова Л.В., Ткачев В.К., Перебоева Л.П., Баранова С.Г. Эбола-инфекция: некоторые аспекты патогенеза. // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. Материалы научной конференции НИИ вирусологии и микробиологии. Тезисы докладов. -Покров. - 1992а. - С. 170-171.

85. Рябчикова Е.И., Ткачев В.К., Колесникова Л.В., Лучко C.B. Морфологическая характеристика изменений органов иммунной системы при Эбола-инфекции у разных лабораторных животных. // 1-й съезд иммунологов России. Тезисы докладов. - Новосибирск. - 19926. - С.410.

86. Рябчикова Е.И., Колесникова Л.В., Ткачев В.К., Перебоева Л.А., Лучко C.B. Особенности поражения органов разных видов обезьян, зараженных вирусом Эбола. Материалы межведомственной конференции "Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций" - Кольцово, 7-8 апреля 1993. - С 11.

87. Рутберг P.A. Простой и быстрый метод одновременного определения скорости рекальцификации и фибрина крови. // Лаб. дело.-1961,- N5,- С.6.

88. Сергеев А.Н., Игнатьев Г.М., Пьянков О.В., Котляров Л.А. Эффективность лечебно-профилактического действия лекарственных препаратов при заболеваниях, вызываемых респираторным заражением животных вирусами Эбола и Мачупо. // Тезисы докладов. I Съезда иммунологов России.-Новосибирск. - 1992. - С. 428.

89. Смородинцев A.A. Особенности фагоцитарной защиты против вирусных инфекций.// Иммунология. - 1983. - N6. - С. 12-16.

90. Сура В.В., Насонов Е.Л., Борисов И.А. Клинико-патогенетические закономерности развития болезней иммунных комплексов. // Tep.apx.-1980.-T.52. - N12. - С.3-10.

91. Титов В.Н., Бочкова H.A. Методические и диагностические аспекты исследования активности аминотрансфераз.// Лаб. дело. -1990.-N8-C.4-12.

92. Фодоров И.И., Черное В.И., Бендукидзе К.А., Альтштейн А.Д. Живые рекомбинантные вакцины - новое направление в биотехнологии. // Биотехнология. - 1987. - Т.З. - N3. - С.302-306.

93. Фрейфельд Е.И. Гематология. - М., 1947. - С.374.

94. Чепурнов A.A. Перспективы создания вакцины против лихорадки Эбола. // Тезисы докладов межведомственной конференции " Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций". -Кольцово, 1993. - С.38.

95. Чепурнов A.A., Волчков В.Е., Кудоярова Н.М., Сизикова Л.П., Дадаева A.A. Иммунопатогенез лихорадки Эбола и перспективы создания вакцины против неё. // Тезисы докладов российской научной конференции "Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций". - Саратов, 1993. - С.211.

96. Чепурнов A.A., Мерзликин Н.В., Рябчикова Е.И., Чепурнова Т.С., Волчков В.Е., Истомина H.H., Кузьмин В.А., Воробьева М.С. Получение очищенного антигена вируса Эбола. // Вопр. Вирусол. 1994.-N6.-С.254-257.

97. Чепурнов A.A., Мерзликин В.Н., Чепурнова Т.С., Воробьева М.С. Получение кроличьих антисывороток к вирусу Эбола. // Вопр. вирусол. - 1994. - Т.39. - N6. - С. 286-288.

98. Чепурнов A.A., Чернухин И.В., Терновой В.А., Кудоярова Н.М., Махова Н.М., Азаев М.Ш., Смолина М.П. Попытка получения вакцины против лихорадки Эбола. // Вопр. вирусол,- 1995. - Т.40. - N6.-C.257-260.

99. Чепурнов A.A., Чуев Ю.П., Пьянков О.В., Ефимова И.В.. Влияние некоторых физических и химических факторов на инактивацию вируса Эбола. //Вопр. Вирусол. - 1995. - N 2. - С.74-76.

100. Чепурнов A.A., Терновой В.А., Дадаева A.A., Сизикова Л.П. Изучение протективных и иммунобиологических свойств белков VP24 и VP30 вируса Эбола в составе рекомбинантного вируса осповакцины. Тезисы конференции "Актуальные вопросы вакцинопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний". - Хабаровск. 4-5 декабря 1996. -С.88-89.

101. Чепурнов A.A., Терновой В.А., Дадаева A.A., Дмитриев И.П., Сизикова Л.П., Волчков В.Е., Кудоярова Н.М., Рудзевич Т.Н., Нетесов C.B. Изучение иммунобиологических и свойств белка VP24 вируса Эбола в составе рекомбинантного вируса осповакцины. // Вопр. Вирусол. - 1997а. - N.3. - С.115-120.

102. А.А.Чепурнов, О.В. Пьянков, Т.С. Чепурнова, Н.М.Махова, Л.Ф.Бакулина, Г.И.Тюнников. Методы контроля обсемененности воздуха и поверхностей лабораторных помещений возбудителями некоторых особо опасных вирусных инфекций. // Вопр. Вирусол. -19976. - N.4.-С.189-191.

103. Чепурнов A.A., Чепурнова Т.С., Мерзликин Н.В., Терновой В.А., Устинова E.H., Егоричева И.Н. Лабораторная диагностика геморрагической лихорадки Эбола. // Биотехнология. - 1997в - N3. - С. 22-28.

104. Шок. Под. ред. Г.Риккера. - М. Медицина. 1987. С.367.

105. Abel R.M., Buckley M.J., Austen W.G., Barnett G.О., Beck C.H. Jr., Fisher J.H. Etiology, incidence and prognosis of renal failure following cardiac operations. Results of a prospective analysis of 500 consecutive patients. // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 1976. - Vol.71. - P.323-333.

106. Anderson K., Gilligan K.J., Geisbert J.B., Wasieioski LP., Jährling P.B. Ebola viral proteins that elicit or inhibit protective immunity in guinea pigs. // Abstracts of 10th International Conference on Negative Strand Viruses. - Dublin, Ireland, 22-27 Sep, 1997. - P.m.

107. Ardouin C., Chevalier J.M., Algayres J.P. Less fevres hemorragiques virales de Marburg, Lassa et Ebola. // Med. Trop. Mars. -1981. - Vol. 41. - P.191-199.

108. Baron R.C., McCormick,J.B., and Zubeir,O.A. Ebola virus disease in Sudan: hospital dissemination and intrafamilian spread. - Bull. W.H.O. - 1983. - Vol.61. - P.997-1003.

109. Baskerville A., Bowen E.T.W., Platt G.S., McArdell L.B., Simpson D.I.H. The pathology of experimental Ebola virus infection in monkeys. //J. Pathol. - 1978. - Vol.125. - N3. - P.131-138.

110. Baskerville A., Fisher-Hoch S.R. Ultrastructural pathology of experimental Ebola haemorrhagic fever. // J. Pathol. -1985. - Vol. 147. - N 3. - P. 199-210.

111. Bergmann J.F. These pour le Doktorat en Medicine. Cochin, Port-Royal. -1981.

112. Bonomini V., Vangelista A., Frasca G.M. Value of renal biopsy for langjterm prognosis in acute renal failure. // In: Acute renal failures / Eds D.Seybold, U.Gessier, - Karger, Basel, 1982.

113. Bowen,E.T.W., Lloyd,G., Harris,W.J., Piatt,G.S.,Baskerville A.,

r

and Vella, E.E. Virus haemorrhagic fever in southern Sudan and nothern Zaire: preliminary studies on the aethiological agent. // Lancet. - 1977. - N 1,-P. 571-573.

114. Bowen E.T.W., Platt G.S., Simpson D.I.H., McArdell L.B., Raymon R. T. Ebola haemorrhagic fever: experimental infection of monkeys. //Trans.roy. Soc. Trop. Med. Hyg. - 1978. - Vol.72. - P.584-593.

115. Bowen E.T.W., Piatt G.S., Lloyd G., Raymond R.T., and Simpson D.I.H. A comparative study of strains of Ebola virus isolated from southern Sudan and northern Zaire in 1976. // J. Med. Virol. - 1980. - Vol.6, N 2. -P. 129-138.

116. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. //Anal. Biochem. -1976. -Vol.72. - P.248-254.

117. Breman J.G., Van der Groen G., Peters C.J., Heymann D.L. International Colloquium on Ebola virus research: summary report. // J. Inf. Dis. - 1997 - Vol.176. - P. 1058-1063.

118. Broun D.L. Complement and coagulation. // Brit.J.haemat. - 1975. Vol.30.- P.377-382.

119. Broxmeyer H.E., Williams D.E., Lu L., Cooper S., Anderson S.L., Beyer G.S., Hoffman R., Rubin B.Y. The suppressive influences of

human tumor necrosis factors on bone marrow hematopoietic progenitor

a

cells from normal donors and patients with leuktemia: synergism of tumor necrosis factor and interferon-gamma. // J. Immunol. - 1986. - Vol.136. -P.4487-4495.

120. Buchmeier M.J., DeFries R.U., McCormick J.B. and Kiley M.P. Comparative analysis of the structural polypeptides of Ebola viruses from Sudan and Zaire.//J. Infect. Dis. - 1983. - Vol. 147. - P.276-281.

121. Canonico P.G. Efficacy, toxicology and clinical applications of ribavirin against virulent RNA viral infections. //Antiviral Res. - 1985-Suppl.1. - P.75-81.

122. Carroll M.P., Peterson D.J., May W.S. Interferon-alpha and transforming growth-factor-beta rapidly block hematopoietic growth factor-induced Raf-1 phosphorylation // Blood. -1993.-Vol.82.-P.371.

123. Centres for Decease Control and Prevention. Ebola virus infection in imported primates - Virginia, 1989. - MMWR - 1990. - Vol.38. -P.831-832, 837-838.

124. Chepurnov A.A., Ignatyev G.M., Volchkov V.E. Immunologic and biochemical indices Ebola fever. // Abstracts of 9th International Congress of Virology. - Glasgow, Scotland, 8-13 Aug, 1993. - P. 300.

125. Chepurnov A.A., Ignatyev G.M., Volchkov V.E. Approaches to development of vaccine against Ebola fever. // Abstracts of 9th International Congress of Virology. - Glasgow, Scotland, 8-13 Aug, 1993 -P. 300.

126. Chepurnov A.A., Smolina M.V., Chuev Y.P., Kudojarova N.M., Volchkov V.E., Netesov S.V. Studying of Ebola virus strains with modified properties. // Abstracts of 9th International Congress of Virology. -Glasgow, Scotland, 8-13 Aug, 1993. - P. 300.

127. Chepurnov A.A., Chernukhin I.V. Lethal for guinea pigs strain of Ebola virus provides generation of antibody that reacts with host endovascular cells. // Abstracts of 10th International Congress of Virology. -Jerusalem, Israel, 11-16 Aug, 1996. - P.259.

128. Chepurnov A.A., Chernukhin I.V., Dadaeva A.A., Sizikova L.P. To studying of immunomodulate properties of Ebola virus antigen // Abstracts of 10th International Congress of Virology. - Jerusalem, Israel, 11-16 Aug, 1996. - P.259.

129. Chepurnov A.A., Tuzova M.N., Ternovoi V.A., Chepurnova T.S., Chernukhin I.V. The inactivated Ebola virus possesses imunosuppressive properties connected with the envelope glycoprotein (GP). // Abstracts of 4th International Symposium on Clinical Immunology. - Amsterdam, The Netherland, 19-22 Jun, 1997. - P.68.

130. Chepurnov A.A. The elaboration of laboratory variants of Ebola virus. // Abstracts of 10th International Conference on Negative Strand Viruses. - Dublin, Ireland, 22-27 Sep, 1997. - P.205.

131. Cochen S., Ward P.A., McCluskey R.T. Mechanism of immunopathology. - New York, Chichester, Brislane, Toronto, 1979.

132. Cochrane C.G., Coffler D. Immune complex disease in experimental animals and man. //Advans. lmmunol.-1973.-Vol. 16.-P. 185-264.

133. Cohn E.J., Strong L.E., Hughes W.L. Preparation and properties of serum and plasma proteins. // J. Amer. Chem. Soc. - 1946. - Vol.68, N3 - P.459-475.

134. Cox N.J., McCormick J.B., Johnson K.M., and Kiley M.P. Evidence for two subtypes of Ebola virus based on oligonucleotide mapping of RNA. II J. Infect. Dis. -1983. - Vol.147. - P. 272-275.

135. Dadaeva A.A., Sizikova L.P., Chepurnov A.A. A comparison of hemostatic changes in guinea pigs challenged with Ebola virus preparations. // Abstracts of Russian-German colloquium on Filoviruses. -Koltsovo, Russia, 29 Jan - 2 Feb, 1997. - P. 19.

136. Dadaeva A.A., Sizikova L.P., Chepurnov A.A. Dynamics of some biochemical parameters in guinea pigs inoculated with different Ebola virus preparations. // Abstracts of 10th International Conference on Negative Strand Viruses. - Dublin, Ireland, 22-27 Sep, 1997. - P.205.

137. Dadaeva A.A., Sizikova L.P., Chepurnov A.A. Phagocytic capacity of polymorphonuclear leubocytes in the blood of rabbits and guinea pigs inoculated with Ebola virus. // Abstracts of 10th International Conference on Negative Strand Viruses. - Dublin, Ireland, 22-27 Sep, 1997. -P.206.

138. Dedkova L.M., Zubavichene N.M., Chepurnov A.A., Ofitserov V.I. Changes in composition and immunochemical properties of goat immunoglobulins in the process of immunization with Ebola virus. //

Abstracts of 10th International Congress of Virology. - Jerusalem, Israel, 11-16 Aug, 1996.-P.260.

139. Elliott L.H., McCormick,J.B., and Johnson,K.M. Inactivation of Lassa, Marburg and Ebola viruses by gamma irradiation. // J. Clin. Microbiol. - 1982. - Vol.16. - P.704-708.

140. Elliott L.H., Kiley M.P., McCormick J.B. Descriptive analysis of Ebola virus proteins. //Virology. - 1985. - Vol.147. -P. 169-176.

141. Ellis D.S., Bowen E.T.W., Simpson D.I.H., Stamford S. Ebola virus: a comparison at ultrastructural level of the behavior of the Sudan and Zaire strains in monkeys. // Brit. J. exp. Pathol. - 1978. - Vol.59. - P.584-593.

142. Emond R.T.D., Evans B., Bowen E.T.W., Lloyd G. A case of Ebola virus infection. // Brit. Med. J. - 1977. - Vol.2. - p.541-544.

143. Feldmann H., Klenk H.-D., Sanchez A. Molecular biology and evolution of filoviruses. //Arch. Virol, (suppl) - 1993. - Vol.7.- P.81-100.

144. Feldmann H, Slenczka W, Klenk H-D. Emerging and reemerging of filoviruses.//Arch. Virol, (suppl). - 1996a. - Vol.11. - P. 77-100.

145. Feldmann-H, Bugany-H, Mahner-F, Klenk-HD, Drenckhahn-D, Schnittler-HJ. Filovirus-induced endothelial leakage triggered by infected monocytes/macrophages.// J. Virol. - 1996b. - Vol 70. - P 2208-2214.

146. Filovirus infection in animal handlers. / MMWR. -1992,- Vol. 39. -N13,- P. 351.

147. Fisher-Hoch S.P., Lloyd G., Platt G.S., Simpson D.I.H., Neild G.H., Barret A.J. Haematological and biochemical monitoring of Ebola infection in Rhesus monkeys: implications for patient management // Lancet. - 1983a. - N5 (8358). - P. 1055-1058.

148. Fisher-Hoch S.P. The haemostatic defect in viral haemorrhagic fevers. // Brit. J. Haemat. - 1983b. - Vol. 55. - P.565-571.

149. Fisher-Hoch S.P., Piatt G.S., Neild G.H., Southee T.,Baskerville A., Raymond R.T., Lloyd G., Simpson D.I.H. Pathophysiology of shock and hemorrhage in a fulminating viral infection (Ebola) // J. Infec. Dis. - 1985.-Vol.152. - N5. - P.887-894.

150. Fisher-Hoch S.P., Brammer T.L., Trappier S.G.Hutwagner L.C., Farra B.B., Ruo S.L., Brown B.G., Hermann L.M., Perez-Oronoz G.I., Goldsmith C.S., Hanes M.A., McCormic J.B. Pathogenic potential of Filoviruses: role of geographic origin of primate host and virus strain. // J. Infect. Dis. - 1992. - Vol.166. - N4. - P.753-763.

151. Fitzgerald J.E., Sonis S.T., Rodrick M.L. et al. // Inflammation. -1983.-Vol.7, N1,-P. 25-33.

152. Freidenberg N.. Reise K.N., Characterization of the normal cortic endothelium of adult rats and changes due to endotoxin shock. // Beitr. Path. - 1976. - Vol.159. - P.125-142.

153. Gaynor E. Increased mitotic activity in rabbits endothelium after endotoxin. // Lab. Invest. -1971. - Vol.24. - P.318-320.

154. Georges A.J., Gonzales J.P., Mathiot C.C. Epidemiological and epizoological investigations of Filoviruses in the Central African Republic. // Annu. Rep. Inst. Pasteur Bangui. - 1989. - Vol.89, N 1. -P. 164.

155. Geha R.S. Presence of circulating anti-idiotype-bearing cells after booster immunization with tetanus toxoid (TT) and inhibition of anti-TT antibody synthesis by auto-anti-idiotypic antibody. // J. Immunol. - 1983.-Vol.130, N4.- P. 1634-1639.

156. Gerald A.E., Francis E.C.// Ebola virus haemorrhagic fever. / Ed. S.R.Pattyn.-Amsterdam, New York, 1978.

157. Getchell J.P. Development of an ELISA system for the detection and strain identification of Lassa and Ebola viruses using monoclonal antibodies. - A Dissertation for the degree of Doctor of Public Helth. -Chapel Hill. - 1983. - 111 p.

158. Groen G., Yacob W., Pattyn S.R. Ebola virus virulence for newborn mice. // J. Med. virol.- 1979. - Vol.4, N 3. - P 239-240.

159. Halstead S.B. Virus Haemorrhagic Fevers. // J. Infect. Dis. -1981. - Vol.143.-P.127-129.

160. Harris D.T., Cianciolo G.J., Snyderman R., Argov S., Koren H.R. Inhibition of human natural killer cell activity by a synthetic peptide homologous to a conserved region in the retroviral protein, p15E. // J. Immunol. - 1987. - Vol.138. - P.889-894.

161. Heymann D.L., Weisfeld J.S., Webb P.A., Johnson K.M., Cairus T., Berguist H. Ebola hemorrhagic fever, Tandala, Zaire, 1977-78. //J.lnfec.Diseases.- 1980.-Vol.142, N3,- P.372-376.

162. Holper K., Struck E., Sebening F. The diagnosis af acute renal failure (ARF) following cardiac surgery with cardiopulmonary by pass.'// Thorac.cardiovasc. Surg. - 1979. - Vol.27. - P 231.

163. Huggins J.W. Hantaviruses, Filoviruses, and other small lipid-enveloped RNA viruses causing hemorrhagic encephalitic and febrile decease. //Antiviral agents and human viral diseases. / 4th edition. Ed. G.J.Galasso, R.J.Whitley, and T.C.Merigan.- Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996. - P. 1161-1176.

164. Inst. Pasteur Dakar, Senegal Annu. Rep. -1981.

Isaacson M., Courtelle G., Pattyn S.R. Clinical aspects of Ebola virus disease of the Ngaliema hospital, Kinshasa. // In: Ebola virus haemorragic fever. / Ed. S.R.Pattyn. - Elsevier/North Holland, Amsterdam and New York, 1978. - P. 15-20.

165. Jaax N.K., Davis K.J., Geisbert T.W., Vogel A.P., Jaax G.P., Topper M., Jarling P.B. Lethal experimental infection of rhesus monkeys with Ebola-Zaire (Mayinga) virus by the oral and conjunctival route of exposure. //Arch. Pathol. Lab. Med. - 1996. - Vol.120. - P.140-155.

166. Jährling P.B., Geisbert T.W., Dalgart D.W., Johnson E D., Ksiazek T.G., Hall W.C., Peters C. J. Preliminary report: isolation of Ebola virus from monkeys imported to USA. // Lancet. - 1990. - Vol.335. - P.502-505.

167. Jährling P.B., Geisbert T.W., Jaax N.K., Hanes M.A., Ksiazek T.G., Peters C.J. Experimental infection of cynomolgus macaques with Ebola-Reston filovirus from the 1989-1990 U.S. epizootic. // Arch. Virol. (Suppl) - 1996. - Vol. 11. - P. 115-134.

168. Jährling P.B., Geisbert J., Swearengen J.R., Jaax G.P., Lewis T., Huggins J.W., Schmidt J.J., LeDuc J.W., Peters C.J. Passive immunization of Ebola virus-infected cynomolgus monkeys with immunoglobulin from hyperimmune horses. //Arch. Virol. (Suppl) - 1996. -Vol.11.-P.135-140.

169. Joklick W. K. // Virology.- 1962. - Vol. 18,- P.9-18.

170. Jonhson K.M., Webb P.A., Lange J.V., Murphy F A. Isolation and partial characterisation of a new virus causing acute haemorrhagic fever in Zaire. // Lancet. - 1977. - N1(8011). - P.569-574.

171. Johnson B.K., Gitau L.G., Gichogo A., Tukei P.M., Else J.G., Suleman M.A. Kimani R.. Marburg and Ebola virus antibodies in Kenian primates. //Lancet. -1981. -N 1 (8235). - P. 1420-1421.

172. Johnson B.K., Ocheng D., Oogo S., Gitau L.G., Wambui C., Gichogo A., Lidondo D., Tukei P.M., and Johnson E.T. Seasonal variation in antibodies against Ebola virus in Kenyan fever patients. // Lancet.- 1986.-N1.-P. 1160.

173. Johnson E„ Jaax N„ York C„ White J., Jarling P.B. Lethal experimental infections of rhesus monkeys caused by aerosolized Ebola virus. // Int. J. Exp. Pathol. -1995. - Vol.76. - P.227-236.

174. Kalowski S., Homes E.L., Margaretten W. McKay D.A. Effects of intravascular clotting on the activation of the complement system. // Amer. J. Path. - 1975. - Vol. - P.525-536.

175. Kiley M.P., Bowen E.T.W., Eddy G.A., Isaacson M., Johnson K.M., McCormic J.B., Murphy F.A., Pattyn SR., Peters D., Prozesky D., Regnery R.L., Simpson D.I.H., Slenezka W., Sureau P., van der Groen G., Webb P.A., and Wulff H. Filoviridae: a taxonomic home for Marburg and Ebola viruses? // Intervirology. -1982. - Vol.1824. - P.32.

176. Kiley M.P., Cox N.J., Elliott L.H., R.DeFries, M.J.Buchmeier, D.D.Richman and J.B.McCormic. Physicochemical properties of Marburg virus: evidence for three distinct virus strains and their relationship to Ebola virus. //J. Gen. Virol.- 1988. - Vol.69, N 8. - P. 1957-1967.

177. Kurata, T., Aoyama Y., Tsai T.F., Bauer S. and McCormic G. B. Disseminated infection of suckling mice with Edola virus. // Abstracts of 6th International Congress of Virology. - Sendai, Japan, 1-7 Sep., 1984. -P 273, 269 (CDC Atlanta, Univ. Tokio).

178. Kushner S.R. Genetic engineering / Eds. H.B.Boyer and S.Nicosia. -Amsterdam: Elsevier/North-Holland Biomedical Press, 1978. -P. 17.

179. Lange J.V., McCormick G.B., Walker D.H. Kiley M.P., Neidhard F.S. Vaccination of rhesus monkeys with gamma-inactivated Ebola virus and results of live-virus challenge in immune and naive animals. // Abstracts of Annual Meeting of American Society of Microbiology. - Las Vegas, Nevada, 3-7 Mar, 1985. - P. 295.

180. Langone J.J. Protein A: a tracer for general use in immunoassay. // J. Immunol. Methods. - 1978. - Vol. 24. - P.269-285.

181. Lucas Ch.E. The renal response to acute injury in sepsis. // Surg. Clin. N. Amer. - 1976. - Vol. 56. - P. 953.

182. Lupton H.W., Lambert R.D., Bumgardner D.L., Мое J.В., Eddy G.A. The effect of inactivated vaccine against Ebola fever in the investigation on guinea pigs. // Lancet. - 1980. - Vol.13. - N1 (8207). - P. 1294-1295.

183. Lupton H.W., Lambert R.D., Beauchamp B.M. Мое J.В., Eddy G.A.. Method of plaque neutralisation for Ebola virus. // Abstracts of Annual Meeting of American Society of Microbiology. - Dallas, 1-6 Mar, 1981.-P.251.

184. Macsearraigh E.T., Kallmeyer S.C., Schiff H.B. Acute Renal failure in marathon runners. // Nephron. - 1979. - Vol. 24. - P.236.

185. Mamus S.W., Beck-Schroeder S., Zanjani E D. // J. Clin. Invest. -1985.-Vol.74.-P. 1496-1503.

186. Maniatis Т., Fritsch E.F., Sambrook J. // Gold Spring Harbor Laboratory, Gold Spring Harbor, New York, 1982. - 310 p.

187. Markin V.A., Michailov V.V., Bogaticov G.V., et al. Investigation of the possibility for urgent prophylaxis and treatment of the experimental filoviral infection. // Abstracts of International Symposium "100 Years of Virolo^gy" ( St.Petersburg). - M„ 1992. -P. 57-58.

188. McCormick J.В., Bauer S.P., Elliott L.H., Webb P.A., Johnson K.M. Biological differences between strains of Ebola virus from Zaire and Sudan. // J. Infec. Dis. - 1983. - Vol.147. - N 2. - P.264-267.Mitchell S.W., McCormick J.B. Phyfcochemical inactivation of Lassa, Ebola and Marburg viruses and effect ojclinical laboratory analysis. // J. Clin. Microbiol. -1984. -Vol.20. - N 3. - P.486-489.

189. Мое J.В., Lambert R.D., Lupton H. W. The plaque-forming test for Ebola virus. // J.Clin. Microbiol. -1981. - Vol. 13. - N 4.-P.791-793.

190. Muhlberger E., Sanchez A., Randoff A., et al. The nucleotide sequence of the L-gene of Marburg virus, a Filovirus - homologies with

Paramixoviruses and Rhabdoviruses. // Virology. - 1992. - Vol. 187, N 2. -P. 534-547.

191. Murphy F.A., van der Groen G., Whitefield S.G., and Lange J.V. Ebola and Marburg virus morphology and taxonomy. // In: Ebola virus haemorrhagic fever. / Ed. S.R. Pattyn. - Elsevier / North Holland, Amsterdam, New York. - 1978. - P.61-84.

192. Muyembee T., Kipasa M. Ebola haemorrhagic fever in Kikvit, Zaire. // Lancet. - 1995. - Vol. 345. - P.1448.

193. Newcomb R.W., Coher E.D., Crosby L.K. Time dependent influence of antigenic stimulation on lymphoid tissue RNA synthesis. // Fed. Proc. - 1967. - Vol.24. - P.380-386.

194. Okuda K„ Tani K., Ishigatsubo J.S. Yokota S., DavidC.S. Antigen-pulsed neutrophils bearing a antigens can induce T lymphocyte proliferative response to the syngeneic or semisyngeneic antigen-primed Tlymphocytes // Transplantation. -1980.-Vol.30.- P.368-372.

195. Pawelec G., Brons G. Modification of lymphocyte responsiveness in vitro by lambda carrageenan compared with colloidal silica and depletion of surface adherent cells. // Clin. exp. Immunol. - 1978. - Vol.31. - P.426-435.

196. Penttinen K., Lahdevirta J., Kekomaki R., Ziola B., Salmi A., Hautanen A., Lindstrom P., Vaheri A., Brummer-Korvenkontio M., Wager O. Circulating immune complexes, immunoconglutinins, and rheumatoid factors in neuropathia epidemica. // J. Infect. Dis. -1981. - Vol.143. - P.15-21.

197. Pereira M.S. Inactivation of Lassa, Marburg and Ebola viruses.// Lancet.- 1982,-Vol.11, N 8290. - P. 155-161.

198. Peters C.J., Sanchez A., Rollin P.E., Ksiazek T.G., Murphy F.A., Filoviridae: Marburg and Ebola viruses // Fields Virology. 3rd Edition.

Ed.B.N.Fields, D.M.Knipe, P.M.Howley et al.- Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia. 1996. - p.1161-1176.

199. Porterfield J.S. Immunological enhancement and the pathogenesis of dengue haemorragic fever. // J. Hyg. (London) -1982. -Vol. 89. - P.355-364.

e-

200. Regnery R.L., Johnson K.M., Kiley M.P. Virion nuclic acid of Ebola virus. // J. Virol. - 1980. - Vol.36. - P.465-469.

201. Regnery R.L., Johnson K.M., Kiley M P. Marburg and Ebola viruses: possible members of a new group of negative strand viruses. // In: The replication of negative strand viruses. / Eds D.H.L. Bishop, R.W. Compans. - Elsevier/North Holland, Inc., New York, 1981. - P.971-977.

202. Richardson J.H. and Barkley,W.E. (eds.) Biosafety in microbiological and biomedical laboratories: US Departement of Health and Human Services (HHS publication No.(CDC) 86-8395). - 1984.

203. Richman D.D., Cleveland,P.H., McCormick,J.B., and Johnson,K.M. Antigenic analysis of strains of Ebola virus: identification of two Ebola virus serotypes. // J. Infect. Dis. - 1983. - Vol.147. - P.268-271.

204. Riecker J. Klinische Kardiologie. Krankheiten des Herzens, des Kreislands und der Gefasse. 2., neubearf. und erg. Aufl.- Berlin-Heidelberg-New York: Springer, 1982. -760p.

205. Rigby P.W., Dieckmann M., Rhodes C., Berg P. Labeling deoxyribonucleic acid to high specific activity in vitro by nick translation with DNA polymerase I. //J. Mol. Biol. - 1977. - Vol.133. - P.237-251.

206. Ryabchikova E., Kolesnikova L., Smolina M., Tkachev V., Pereboeva L., Baranova S., Grazhdantseva A., Rassadkin Y. Ebola virus infection in guinea pigs: presumable role of granulomatous inflammation in pathogenesis. //Arch. Virol. - 1996. - Vol. 141. - N5. - P. 909-922.

207. Sanchez A., Kiley M.P. Identification and analysis of Ebola virus messenger RNA. //Virology. - 1987. - Vol.157. -P.414 -420.

208. Sanchez A., Kiley M.P., Holloway B.P., Auperin D.D. Sequence analysis of the Ebola virus genome - organization, genetic elements, and comparison with the genome of Marburg virus. // Virus Res. - 1993,- Vol. 29.-N3.-P. 215-240.

209. Schnittler H.J., Mahner F., Drenckhahn D., Klenk H.D., Feldman H. Replication of Marburg Virus in Human Endothelial Cells - a Possible Mechanism of the Development of Viral Haemorrhagic Disease. // J. Clin. Invest.- 1993.-Vol. 91, N4.-P. 1301-1309.

210. Siegert R. Marburg-, Lassa- and Ebola-virus j>s erreger hämorrhagischer Fieber. // Dtsch. Med. Wschr. - 1988. -J. 103, N 29. -S.1176-1181.

211. Smith G.L., Mackett M., Moss B. Infectious vaccinia virus recombinants that express hepatitis B virus surface antigen. // Nature. -1983.-Vol.302.-P.490-495.

212. Stadecher M.J., Bishop G., Wortis H.H. Rosette formation by guinea pigs thymocytes and thymus derived lymphocytes with rabbit red blood cells. //J. Immunol. - 1973.-Vol. 111. - P. 1834-1837.

213. Stansfield S.K., Scribner C.L., Kaminski R.M., Cairns T., McCormic J.B., Johnson K.M.. Antibody to Ebola virus in guinea pigs: Tandala, Zaire. //J. Infect. Dis. - 1982. - Vol.146. - P.483-486.

214. Swanepoel R., Leman P., Burt F.J., Zachariades N.A., Braack L.E.O., Ksiazek T.G., Rollin P.E., Zaki S.R., Peters C.J. Experimental inoculation of plants and animals with Ebola virus. // Emer. Infect. Dis. -1996. - Vol.2., N.4.-P.321-325.

215. Takemoto K.K. Plaque mutants of animal viruses. // Progr. Med. Virol. -1966. -Vol.8. -P.314-348.

216. Theofilopoulas A.N., Dixon F.G. The biology and detection of immune complex. //Advances in immunology. / Ed. F.G.Dixon. -New. York, 1979. -Vol.28. - P.89-220.

217. Tignor G.H., Casals G., Shope R.E. The yellow fever epidemic in Ethiopia, 1961-1962: retrospective serological evidence for concomitant Ebola or Ebola-like virus infection. //Trans. Roy. Soc. Trop. Med. and Hyg. - 1993. - Vol. 87, N2. -P. 162.

218. Tilson M.D., Ozsvath K.J., Hirose H., Xia Sh., Lahita R. A novel hypothesis to explain the hemorragic and connective tissue manifestation of Ebola virus infection. // Clin. Immunol, immunopath. - 1996 - Vol. 81, N.3 - P.303-306.

219. Tejero C., Testa N.G., Lord B.I. The cellular specificity of haemopoietic stem cell proliferation regulators. // Br. J. Cancer. - 1984. -Vol.50. -P.335-341.

220. Truant A.L., Regnery R.L., Kiley M P. Development of an immunofluorescence focus assay for Ebola virus. // J. Clin. Microbiol,-1983.- Vol.18.- N 2.- P.416-419.

221. Ulich T.R., del Castillo J., Yin S. Tumor necrosis factor exerts dose-dependent effects on erythropoiesis and myelopoiesis in vivo. // Exp. Hematol. - 1990. - Vol. 18. - P.311-315.

222. Van der Groen G. Epidemiology and Diagnosis of Viral I»

Hemorragic Fevers. // In: Applied Virology / Ed. E.Kurstak. - Academic Press, Orlando, Florida. - 1984. - P.299-326.

223. Verstraete M. Disseminated intravascular coagulation in Ebola virus haemorragic fever. // In: Ebola virus hemorrhagic fever. / Ed. S.R. Pattyn. - Amsterdam: Elsevier/Noth-Holland, 1978 - P.225-235.

224. Volchkov V.E., Blinov V.M., Netesov S.V. The envelope glycoprotein of Ebola virus contains an immunosuppressive-like domain similar to oncogenic retroviruses. // FEBS Lett. - 1992. - Vol.305. - N3. - P. 181-184.

225. Volchkov V., Chepurnov A., Dryga S., Becker S., Blinov V., Ternovoj V., Klenk H.-D., Netesov S.V. Molecular characterisation of a

pathogenicity variant of Ebola virus. II Abstracts of 9th International Conference on Negative Strand Viruses. - Estoril, Portugal, .2-7 Oct, 1994. - P.176.

226. Volchkov V.E., Becker S., Volchkova V.A., Ternovoj V.A., Kotov A.N., Netesov S.V., Klenk H.-D. GP mRNA of Ebola virus is edited by the Ebola virus polymerase and by T7 and vaccinia virus polymerases. // Virology. - 1995. - Vol.214. - P.421-430.

227. Volchkov V.E., Feldmann H., Klenk H.-D. Full-length Ebola virus glycoprotein is secreted from cells in soluble and particulate forms. II Abstracts of 10th International Congress of Virology. - Jerusalem, Israel, 11-16 Aug, 1996. -P.37.

228. Volchkov V., Feldmann H., Volchkova V.A., Slenczka W., Klenk H.-D. Expression strategy for Ebola virus glycoproteins (GP). // Abstracts of 10th International Conference on Negative Strand Viruses. - Dublin, Ireland, 22-27 Sep, 1997. - P.207.

229. Volchkova VA., Chepurnov AA., Feldmann H., Ternovoj VA., Klenk H.-D., Volchkov VE. Genetic variability of Ebola virus during host adaptation. // Abstracts of 10th International Conference on Negative Strand Viruses. - Dublin, Ireland, 21-26 Sep, 1997. - P.207.

230. WHO International Study Team Report. 1976. Ebola haemorrhagic fever in Sudan. - Bull. W.H.O. - 1976a. - Vol.56. - P.247 -270.

231. WHO International Study Team Report. 1976. Ebola haemorrhagic fever in Zaire. - Bull. W.H.O. - 1976b. - Vol.56. - P.271 -293.

232. WHO. Viral haemorrhagic fever in imported monkeys. // WER. -1992. - Vol.67. - N19. - P. 142-143.

233. WHO.Ebola haemorrhagic fever. // WER. - 1995. - Vol.70. -P.149-152.

234. WHO. Ebola haemorrhagic fever. // WER. - 1995. - Vol.70. -P.241-242.

235. WHO. Outbreak of Ebola haemorrhagic fever in Gabon officially declared over. // WER. -1996. - Vol.71. - P. 125-126.

236. WHO. Ebola haemorrhagic fever. A summary of the outbreak in Gabon. // WER. - 1997. - Vol.72. - P.7.

237. Wilson M.B., Nakane P.K. Immunofluorescence and Relaied Staining Technigues. / Eds. W.Knapp, K.Holubar, G. Wick. - Amsterdam: Elsevier/North-Holland Biomedical Press, 1978. - P.215-224.

238. Wistler R.L., Stobo J.D. Heterogeneity of murine regulatory T cells. I. Subpopulations of amplifier and suppressor T cells. //J. exp. Med. -1976.-Vol.144. - P. 398-413.

239. Xu L., Sanchez A., Yang Z.-y., Zaki S.R., Nabel E.G., Nichol S.T., Nabel G.J. Immunisation for Ebola virus infection. // Nature medicine. -1998.-Vol. 4.-P.37-42.

240. Yang Z-y., Delgado R., Xu L., Todd R.F., Nabel E.G., Sanchez A., Nabel G.J. Distinct cellular interactions of secreted and transmembrane Ebola virus glycoproteins. // Science. - 1998. - Vol.279. - P. 1034-1037.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.