Некоторые особенности глюконеогенетических процессов в печени крыс при голодании и экспериментальном диабете тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Алеид Суад

• Алеид Суад
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Алеид Суад

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОСОБЕННОСТИ ГЛЮКОНЕОГЕНЕТИЧЕСКИХ

ПРОЦЕССОВ У ЖИВОТНЫХ.

1.1. Ультраструктурные изменения клеток животных при диабете и голодании.

1.2. Гормональная регуляция процессов глюконеогенеза в тканях высших животных.

1.3. Роль аминотрансфераз в глюконеогенезе.

1.4. Трансформация липидов в гликоген в клетках высших животных и человека.

ГЛАВА 2. ГЛИОКСИЛАТНЫЙ ЦИКЛ КАК ПРОМЕЖУТОЧНЫЙ

ЭТАП ГЛЮКОНЕОГЕНЕЗА.

2.1. Распространение глиоксилатного цикла у микроорганизмов.

2.2. Распространение и локализация глиоксилатного цикла.

2.3. Распространение глиоксилатного цикла у высших растений.

2.4. Глиоксилатный цикл в тканях животных.

2.5. Микротельца и их метаболическая функция.

2.6. Роль микротелец в трансформации липидов в гликоген.

2.7. Экспрессия и регуляция работы глиоксилатного цикла.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Объекты исследования.

3.2. Методы исследования.

3.2.1. Создание условий пищевой депривации и экспериментального диабета.

3.2.2. Получение материалов различных тканей.

3.2.3. Дифференциальное центрифугирование.

3.2.4. Изоплотностное центрифугирование.

3.2.5. Определение активности ферментов.

3.2.6. Выделение и очистка ферментов.

3.2.6.1. Экстракция.

3.2.6.2. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония.

3.2.6.3. Гель-фильтрация.

3.2.6.4. Ионообменная хроматография.

3.2.7. Исследование кинетических характеристик и регуляции активности ферментов.

3.2.8. Аналитический электрофорез.

3.2.9. Определение количества белка.

3.2.10. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МОДЕЛИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО

САХАРНОГО ДИАБЕТА.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ГОЛОДАНИЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА НА ГЛЮКОНЕОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ.

5.1. Изучение индукции ключевых ферментов глиоксилатного цикла в гепатоцитах голодающих крыс.

5.2. Изучение тканевой специфичности ключевых ферментов глиоксилатного цикла у голодающих крыс.

5.3. Изучение содержания изоцитратлиазы в крови голодающих крыс и крыс с экспериментальным сахарным диабетом.

5.4. Изучение субклеточной длокализации ключевых ферментов глиоксилатного цикла в печени крыс.

5.5. Очистка изоцитратлиазы из печени крыс и изучение ее свойств.

5.6. Индукция ключевых ферментов глюконеогенеза в гепатоцитах при голодании и сахарном диабете.

ГЛАВА 6. ВЛИЯНИЕ ГОЛОДАНИЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА НА АКТИВНОСТЬ АМИНОТРАНСФЕРАЗ.

6.1. Изучение тканевой специфичности алоанинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы.

6.2. Динамика изменения активности АсАТ и АлАТ в различных органах голодающих крыс.

6.3. Субклеточная локализация АсАТ и АлАТ в различных органах голодающих крыс.

6.4. Определение констант Михаэлиса для АсАТ и АлАТ из цитозоля и митохондрий гепатоцитов голодающих крыс.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Некоторые особенности глюконеогенетических процессов в печени крыс при голодании и экспериментальном диабете»

Актуальность проблемы. Исследование отдельных звеньев клеточного метаболизма является одной из важнейших задач современной биологии. Оно имеет теоретическое и практическое значение, так как позволяет приблизиться к пониманию механизмов функционирования организма, как целостной системы и, благодаря этому, создает условия для решения проблем, связанных с повышением устойчивости живых организмов к неблагоприятным факторам. В последние годы в этом направлении проводится немало исследований, но многие аспекты, связанные, например, с регуляцией и сопряжением отдельных процессов, изучены недостаточно. Это относится и к процессам глюконеогенеза, в частности, в период интенсивной мобилизации запасных жиров и функционирования глиоксилатного цикла. Принято считать, что интенсивно образующийся в этих условиях сукцинат, далее окисляется в отрезке цикла Кребса до оксалоацетата и последний вступает в глюконеогенез. Однако нет данных о том, сбалансирована ли скорость глиоксисомальных и митохондриальных процессов, особенно в период максимальной активности глиоксилатного цикла. Кроме того известно, что для функционирования глю-конеогенетического пути необходимо высокое содержание восстановленных пиридиннуклеотидов и АТФ в клетке, тормозящее работу элект-ронтранспортной цепи митохондрий и, соответственно, сукцинатдегид-рогеназного комплекса. Кроме того принципиально важным является вопрос о функционировании данного процесса в клетках животных.

Вопрос о превращении липидов в углеводы, и в частности в гликоген, в тканях животных и человека до настоящего времени является дискуссионным. Хотя возможность такого процесса и допускается, его механизм детально не исследован. Все еще высказываются сомнения по поводу превращения жиров в углеводы в организме млекопитающих. Правильное решение этого вопроса важно для понимания патомеханизма и поиска способов профилактики и лечения многих заболеваний, особенно обменного характера.

В изученной литературе по данной тематике были обнаружены только цитохимические и гистохимические исследования. Считается, что в нормальных условиях ключевые ферменты глиоксилатного цикла отсутствуют в тканях высших животных и обнаруживаются только в микроорганизмах и высших растениях. Однако, в недавних исследованиях, проведенных на нашей кафедре, было показано, что при патологических состояниях, к которым можно отнести голодание и диабет, наблюдается индукция изоцитратлиазной и малатсинтазной активностей.

Кроме того, в литературе отмечается важная роль аминотрансфераз в глюконеогенезе. Это относится прежде всего к ферментам метаболизма аспартата и аланина, легко мобилизуемых для биосинтетических процессов. Для создания целостной картины процессов, происходящих в клетке, необходимо изучение всех метаболических путей, сопряженных с тем или иным веществом, исследование физических, химических и физиологических свойств отдельных ферментативных структур. В клетках углеводы образуются и утилизуются при работе ферментов, обеспечивающих функционирование центральных метаболических путей, то есть для решения проблемы поиска источников углерода для дополнительного биосинтеза углеводов в стрессовых воздействиях, приводящих к снижению их концентрации в клетке, необходимо проводить анализ взаимосвязи процессов дыхания, глюконеогенеза и синтеза аминокислот.

Особый интерес представляет организация метаболизма жирных кислот в микротельцах. Процесс мобилизации запасных жиров для глюконеогенеза, по-видимому, протекает во всех живых организмах. Однако, для тканей высших животных биохимический механизм данного процесса остается невыясненным. Наличие ферментов (3 -окисления жирных кислот в животных пероксисомах позволяет предположить возможность индукции ферментов глиоксилатного цикла, позволяющих конденсировать две молекулы ацетил-КоА, образующегося при (3 -окислении, в сукцинат.

Множественность ферментативных реакций, связанных с одним субстратом - ацетил-КоА, по-видимому, может обеспечивать тонкую регуляцию анаболических и катаболических процессов, поддерживающих внутриклеточный гомеостаз в условиях изменения окружающей среды.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы являлось изучение организации и ферментативной регуляции глюконеогенетических процессов в животных клетках в условиях необходимости его интенсивного функционирования для поддержания внутриклеточной концентрации углеводов при голодании и искусственном сахарном диабете, а также исследование физико-химических, каталитических и регуляторных свойств отдельных ферментных систем, участвующих в этом процессе.

Исходя из цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработка экспериментальной модели сахарного диабета с использованием инъекции индуктора диабета аллоксана экспериментальным животным.

2. Показать возможность трансформации липидов в гликоген при помощи глиоксилатного цикла в гепатоцитах голодающих крыс и крыс, страдающих аллоксановым диабетом.

3. Изучить изменение активности ряда ферментов глиоксилатного цикла, глюконеоненеза и аминотрансфераз при голодании, их субклеточную локализацию, содержание в различных тканях голодающих крыс

4. Изучить изменение активности ряда ферментов глиоксилатного цикла, глюконеоненеза и аминотрансфераз при экспериментальном диабете, их субклеточную локализацию, содержание в различных тканях голодающих крыс

5. Разработать способы получения высокоочищенных препаратов ферментов, участвующих в глюконеогенезе из запасных жиров и изучить их кинетические характеристики.

6. Исследовать кинетические характеристики ферментов глиоксилатного цикла и аминотрансфераз из печени крыс.

Научная новизна работы. При изучении глюконеогенетических процессов в условиях необходимости поддержания уровня внутриклеточного содержания углеводов при голодании и экспериментальном диабете показано, что интенсификация глюконеогенеза связана с работой глиоксилатного цикла как в растительных, так и в животных тканях. Это подтверждает возможность участия запасных жиров в поддержании углеводного гомеостаза. Для печени крыс показана индукция при голодании и экспериментальном диабете ферментов глиоксилатного цикла и аминотрансфераз, связанных с метаболизацией аланина и аспартата, позволяющая мобилизовывать жиры и через оксалоацетат направлять их на глюконеогенез или поддержание энергетического баланса клетки. Установлено, что ключевые ферменты глиоксилатного цикла - изоцитратлиаза и малатсинтаза локализованы в микротельцих животных тканей. Наличие в этих органоидах ферментов (3 -окисления жирных кислот позволяет считать их полноценными глиоксисомами. Получен гомогенный препарат изоцитратлиазы из животной ткани, изучены его физико-химические свойства и показана регуляция активности данного фермента сахарофосфатами.

Практическая значимость исследования. Научнные положения настоящей работы расширяют и углубляют современные представления о механизмах сопряжения анаболических и катаболических процессов животной клетке. Разработанная схема выделения электрофоретически гомогенного препарата изоцитратлиазы может быть использована для получения коммерческих препаратов фермента. Найденный метод стабилизации фермента позволяет сохранять его активность в течение длительного времени, что обеспечивает возможность использования препарата ИЦЛ для медицинской диагностики и в биохимических исследованиях для количественного определения изоцитрата.

Обнаружение феномена индукции глиоксилатного цикла и аминотрансфераз при голодании и экспериментальном диабете в печени высших животных может служить основой для разработки тест-систем обнаружения нарушений обмена веществ, связанных с мобилизацией запасных жиров. Материалы работы используются в учебном процессе на биолого-почвенном факультете Воронежского госуниверситета. Результаты исследований вошли в курсы лекций по "Биохимии", "Дыханию растений".

Апробация работы. Материалы работы были представлены и обсуждались на сессии Воронежского государственного университета (1996).

Структура диссертации. Диссертационная работа включает 6 глав, страниц, 14 рисунков, 9 таблиц. В работе использовано 162 литературных источника.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Алеид Суад

ВЫВОДЫ

В результате проведенных исследований были сделаны следующие выводы:

1. Выявлено, что мобилизация жирных кислот может быть связана с работой глиоксилатного цикла как в растительной, так и в животной клетках. Показано, что пероксисомы из печени голодающих крыс содержат ключевые ферменты глиоксилатного цикла, то есть являться глиоксисомами.

2. Разработана модель индукции экспериментального сахарного диабета у крыс с использованием инъекции аллоксана. Установлено, что диабет вызывает индукцию ферментов глиоксилатного цикла.

3. Получен препарат изоцитратлиазы и обнаружена возможность ее активации AMP.

4. Установлено, что голодание и экспериментальный сахарный диабет активируют ключевые ферменты глюконеогенеза фосфоенолпируваткарбоксикиназы и фруктозо-1,6-бисфосфатфосфатазы

5. Наибольшая активность аспартатаминотрансферазы обнаружена в сердце, самая высокая активность аланинаминотрансферазы - в печени крыс с экспериментальным диабетом.

6. В период голодания активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы снижалась в течение первых двух дней, затем происходило ее повышение. Наибольшая активность

108 аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы была отмечена на четвертый день голодания.

7. У крыс с экспериментальным сахарным диабетом активность аспартатаминотрансферазы повысилась в сердце и печени крыс, активность аланинаминотрансферазы увеличилась в сердце, печени, почках и поджелудочной железе.

8. Кт для аланинаминотрансферазы в цитозоле гепатоцитов голодающих крыс составила 7,6 ммоль, в митохондриях - 5,4 ммоль. Кт для аспартатаминотрансферазы в гепатоцитах голодающих крыс составила в цитозоле - 5,2 ммоль, в митохондриях - 4,3 ммоль.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для животных тканей считается нехарактерным существование глиоксилатного цикла и процесс интенсивного накопления сукцината в стрессовых условиях, как правило, связывается с работой цикла Кребса. Однако ранее наблюдался феномен ресинтеза гликогена в печени крыс при голодании (Лебкова, 1982). Вторичное накопление гликогена связывалось с процессом деградации запасных жиров. Нами было впервые показано, что биохимическим механизмом данного процесса является индукция ферментов глиоксилатного цикла. Ключевые ферменты глиоксилатного цикла изоцитратлиаза и малатсинтаза обнаруживаются в печени крыс на третий день голодания и при экспериментальном диабете. Показано, что функционирование глиоксилатного цикла протекает в печени и почках крыс, а на поздних стадиях голодания активность изоцитратлиазы обнаруживается и в крови животных. Для изучения физико-химических характеристик и механизмов регуляции нами был получен препарат изоцитратлиазы из печени голодающих крыс. В результате очистки по разработанной нами схеме был получен ферментативный препарат с удельной активностью 9 ФЕ на 1 мг белка. Исследование регуляторных свойств ИЦЛ из печени крыс показало, что фермент активируется AMP.

Полученные в нашей работе результаты указывают на индукцию ключевых ферментов глиоксилатного цикла в печени крыс при голодании и индуцированном аллоксаном диабете, а также на увеличение активности АлАТ и АсАТ и ключевых ферментов глюконеогенеза в тех же условиях. ацетил-СоА

Жирные кислоты аспартат фумаратч— сукцинат аланин 1 | малат пируват ' t оксалоацетат \ / / пируват А аланин оксалоацетат ч— малат глюкозо-1 -фосфат углеводы

ЦИТОЗОЛЬ аспартат

Рис.14. Гипотетическая схема протекания глюконеогенеза в печени крыс при голодании и экспериментальном диабете

Обнаружение активности ключевых ферментов глиоксилатного цикла, а также сведения о наличии в клетках печени ферментов, осуществляющих окисление липидов, служат, на наш взгляд, подтверждением возможности трансформации липидов в углеводы. Кроме того, увеличение активности аминотрансфераз в гепатоцитах голодающих крыс может свидетельствовать о переходе метаболизма белков преимущественно в сторону катаболизма и направления глюкогенных аминокислот (аспартата и аланина) на глюконеогенез.

На основании полученных данных можно предположить следующий механизм описанного ранее феномена новообразования гликогена в гепатоцитах голодающих крыс (Лебкова, 1981).

Наличие в гепатоцитах ферментов р-окисления жирных кислот обеспечивает мобилизацию запасных жирных кислот и образование ацетил СоА, который может далее использоваться в глиоксилатном цикле. Образующийся в изоцитратлиазной реакции сукцинат метаболизируется в цикле Кребса до оксалоацетата, который может далее направляться на синтез гликогена. Кроме того, определенный вклад в процессы новообразования гликогена вносят глюкогенные аминокислоты (аланин и аспартат). Эти молекулы, претерпевая переаминирование, превращаются в пируват и оксалоацетат, которые, в свою очередь, идут на глюконеогенез.

Таким образом, одним из механизмов биохимической адаптации метаболизма в гепатоцитах при голодании может являться увеличение

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Алеид Суад, 2000 год

1. Анисимов А.А., Добротина Н.А., Иудина К.А. Медицинская энзимология // Горький: Изд-во ГГУ.-1978.-96с.

2. Белицер П.В. Адаптивная роль микротелец //Успехи современной биологии.- 1977.-Т.84. N2.-C. 189-206.

3. Благовещенский А.В. Теоретические основы действия янтарной кислоты на растения. // Наука, 1968.- 117с.

4. Виноградов А.Д. Ингибирование окисления янтарной кислоты оксало-ацетатом //Биохимия,-1967.-Т.32, N 6.-С. 1271 -1277.

5. Виноградов А.Д., Зимакова Н.И., Солнцева Т.И. О механизме инги-бирования сукцинатдегидрогеназы оксалоацетатом // Доклады академии наук СССР.-1971.-Т. 201, N 2.- С.359-362.

6. Виноградов А.Д., Гаврилова Э.В., Головешкина В.Г. Кинетические и структурные характеристики компонентов СДН, реагирующих с естественными и искусственными акцепторами электронов // Биохимия.-1976.-t.41, N 7.-С.1155-1168.

7. Виноградов А.Д. Сукцинат-убихинон редуктазный участок дыхательной цепи //Биохимия. 1986.-Т.51, N 12.- С. 1944-1973.

8. Быковская К.Н., Мешков Д.А. Особенности синтеза гликогена в кардиомиоцитах при диабете // Архив патологии.-1981, вып.1.-С.36-40.

9. Гаврикова Э.К., Головешкина В.Г., Виноградов А.Д. Новый каталитический активный центр сукцинатдегидрогеназы // Митохондрии. Аккумуляция энергии и регуляции ферментативных процессов.-М.: Наука, 1977.-С.123-130.

10. Готтшалк Г. Метаболизм бактерий.-М.: Наука, 1982.-312с.

11. Гринева Г.М. Регуляция метаболизма у растений при недостатке кислорода // Успехи современной биологии.- 1975,- Т.80, Вып.2.-С.238-243.

12. Гродзинский A.M., Гродзинский Д.М. Краткий справочник по физиологии растений.- Киев: Наукова думка, 1973.- 273 с.

13. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений. М: Мир, 1986.- Т.2.- 234 с.

14. Детерман Г. Гель-хроматография.-М.: Мир, 1970.-252с.

15. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты.-М.: Мир. 1982.-Т.З.-С.1118.

16. Довганский А.П., Курцер Б.М., Зорькина Т. А. Печень при экстремальных состояниях. Кишинев: Изд-во "Штиинца".-1989.-135с.

17. Догаева JI.H. Ультраструктурные особенности миокарда собак при сахарном диабете // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1960.-N4.-C.53-55.

18. Детерман Г. Гель-хроматография.-М.: Мир, 1970.-252с.

19. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты.-М.: Мир. 1982.-Т.З.-С.1118.

20. Епринцев А.Т., Землянухин Л.А., Алексюк М.П. Очистка и некоторые свойства аконитатгидратазы из щитка кукурузы // Биохимия.-1995. Т.60.- N 8, С.1244-1250.

21. Епринцев A.T., Игамбердиев А.У. Активность и изоформы малатде-гидрогеназы в высоко- и низкомасличных сортах кукурузы // Физиология растений.- 1995.- Т.42, Вып.5.- С. 759-764.

22. Жеребцов П.И., Солонцев А.И., Вракин В.Ф. Обмен и биосинтез белка.-М.: "Колос".-1968.-160с.

23. Зайцева М.Г., Зубкова Н.К. Накопление и потери катионов митохондрии при изменении их метаболических состояний // Физиология растений.-1979.- Т.26, N 5.- С.1085.

24. Зайцева М.Г., Зубкова Н.К. Фонд катионов митохондрий корней пшеницы и способность к окислению сукцината // Физиология растений.- 1985.-Т.32, N 4.-С.762-768.

25. Землянухин А.А., Иванов Б.Ф., Сосновская Н.Г. Метаболизм эндогенных 1-14.С-глицина и 3-14.С-аланина в проростках гороха, экспонированных в различных газовых средах // Физиол.растен.-1980.-Т.27, вып.2.-С.348-355.

26. Землянухин Л.А., Игамбердиев А.У., Землянухин А.А. Очистка и свойства изоцитратлиазы из подсолнечника // Биохимия.-1984, N 84,Т.49. N З.-с. 387-393

27. Землянухин А.А., Игамбердиев А.У. Регуляция активности изоцитратлиазы в растениях конопли // Физиология растений.-1985.-Т.32,В.4.-С.739-746.

28. Землянухин А.А., Землянухин JI.A., Епринцев А.Т., Игамбердиев А.У. Глиоксилатный цикл растений.-Воронеж: Изд-во ВГУ, 1986.-148с.

29. Землянухин А.А.,Игамбердиев А.У.,Преснякова Е.Н. Выделение и характеристика изоцитратлиазы из щитка кукурузы // Биохимия, 1986, т.51, вып.З, с.442-448.

30. Землянухин А.А., Землянухин JI.A. Метаболизм органических кислот растений.-Воронеж: Изд-во ВГУ, 1995.-152с.

31. Землянухин А.А., Землянухин JI.A., Епринцев А.Т. Глиоксилатный цикл. Воронеж: Изд-во ВГУ.-1986.-131с.

32. Игамбердиев А.У., Землянухин А.А., Мещерякова И.В. Внеглиокси-сомальная форма изоцитратлиазы высших растений // Физиология растений, 1986. Т. 33. Вып.6. С. 1113-1120.

33. Игамбердиев А.У. Микротельца в метаболизме растений.-Воронеж: Изд-во ВГУ, 1990.-148с.

34. Игамбердиев А.У., Иванов Б.Ф., Родионова М.И. Окисление сукцината в глиоксисомах щитка кукурузы // Физиология растений. 1990.Т.37. Вып.З. С.505-510.

35. Игамбердиев А.У.,Родионова. М.И. Роль глиоксилатного цикла в метаболизме ацетата и других органических кислот в щитках прорастающих семян кукурузы // Физиология растений. 1991. Т.38. Вып.З.С.492-498.

36. Игамбердиев А.У., Фалалеева М.И. Выделение и характеристика сукцинатдегидрогеназного комплекса митохондрий растений // Биохимия. 1994. Т.59. N 8. С.895-900.

37. Кондрашова М.Н. Терапевтическое действие янтарной кислоты.-Пущино, 1976.-162с.

38. Кондрашова М.Н., Григоренко Е.В., Бабский A.M. Гомеостазирование физиологических функций на уровне митохондрий // Молекулярные механизмы клеточного гомеостаза.-Новосибирск.: Наука, 1987.-С.40-66.

39. Кондрашова М.Н. Взаимодействие процессов переаминирования и окисления карбоновых кислот при разных функциональных состояниях ткани. // Биохимия.- 1991.- Т.56, вып.З.- С.388-403.

40. Котляр А.В., Виноградов А.Д. Константы диссоциации комплексов СДГ с сукцинатом, фумаратом и малонатом // Биохимия.- 1984.-Т.49, N3.-С.511-518.

41. Котляр А.В. Активация комплекса I в реакции окисления НАДН и в Н-зависимом восстановлении НАД сукцинатом // Биохимия.-1990.- Т,55, N.2.-С. 195-200.

42. Лакин Г.Ф. Биометрия. М: Высшая школа, 1980, 293с.

43. Лебкова Н.П., Бондаренко М.Ф. Особенности липидного обмена в период голодания // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1980.-N 5.-С.614-617.

44. Лебкова Н.П. Трансформация липидов в гликоген в клетках животных и человека // Архив патологии.-1981. N2.-C.72-77.

45. Лебкова Н.П. Трансформация липидов в гликоген в клетках животных и человека // Архив Патологии.- 1982.- Т. 6.-С. 68-73.

46. Лебкова Н.П. Субклеточная локализация карнитинацилтрансферазы в клетках разных органов интактных и голодающих крыс //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1983. N7.-C.32-35.

47. Лебкова Н.П. К вопросу о механизме обратимости жировой дистрофии //Архив паталогии.- 1983.- Т. 20, N3.-C. 32-37.

48. Лебкова Н.П., Колесова О.Е., Горбунова В.Д. Внутриклеточное превращение жирных кислот в гликоген у крыс с аллоксановым диабетом по данным электронной авторадиографии //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1984. N12.-С.734-736.

49. Лебкова Н.П. Изучение субклеточной локализации УДФ-глюкозил-трансферазы в печени голодающих крыс // Цитология.-1985.-Т.27. N2.-C.35-40.

50. Манойлов С.Е. Биохимические основы злокачественного роста. Л.: Медицина, 1971. 230с.

51. Мак-Мюррей У. Обмен веществ у человека.- М. Мир. 1981.-257с.

52. Мауэр Г. Диск-электрофорез.М: Мир, 1971.-222с.

53. Мешкова Н.П., Северин С.Е. Практикум по биохимии. Изд-во МГУ, 1979.- 430 с.

54. Мецлер Д.Е. Биохимия.-М.: Мир. 1987.-358с.

55. Панин J1.E. Энергетические аспекты адаптации.- М.: Мир. 1987.-225с.

56. Пашинский Н.К. Лизосомы. Методы исследования.-М.: Мир. 1986.230с.

57. Пинейру де Карвалью М.А.А., Землянухин А.А., Епринцев А.Т. Ма-латдегидрогеназа высших растений. Воронеж: Изд-во ВГУ, 1991. 216 с.

58. Попова Т.Н. Изоцитратдегидрогеназы: изоформы, локализация, свойства и регуляция//Биохимия.- 1993.- T.59,N12, С.1861-1879.

59. Роговин В.В. Роль микротелец в расщеплении липидов // Известия РАН СССР.-1979. N1 .-С.21-32.

60. Райхлин Н.Т. Гистохимия и электронная микроскопия в клеточной и экспериментальной онкологии.-М.: Мир.-1985.-321с.

61. Роговин В.В. Структура и функции лизосом.- М.: Мир. 1989.-351с.

62. Романова А.К. Методы исследования автотрофии // М.: ВШ, 1985.182с.

63. Рубин Б.А., Логинова Л.Н. Альтернативные пути биологического окисления. М.:ВИНИТИ, 1979. 138 с.

64. Скулачев В.П. Понижение внутриклеточной концентрации 02 является специфичной функцией дыхательной системы клетки //Биохимия.-1994.-Т.59, N12.-C.1910-1912.

65. Солдатенков С.В., Мазурова Т.А. Анализ органических кислот методом ионного обмена и хроматографии на бумаге // Биохимические методы в физиологии растений.-М.: Наука, 1971.-С.86-102.

66. Фридрих П. Ферменты: четвертичная структура и надмолекулярные комплексы.-М.: Мир, 1986.-376с

67. Хексон П. Введение в экспериментальные основы патологии сердечной мышцы.-М.: Мир, 1981.-214с.

68. Чудаков М.И., Шкляров С.Х. Применение протеолитических ферментов при лечении воспалительных заболеваний мягких тканей.-"Хирургия".- 1973.-N2.-C.87-91.

69. Allen R.D., Trelease R.H., Thomas T.L. Regulation of isocitrate lyase gene expression in sunflower//J.Plant Physiol.-1988.-V.86, N 2.- P.527-532.

70. Barrett G., Ward C.W., Fairnbairn D. The glyoxylate cycle and the conversion of triglycerides to carbohydrates in developing eggs of Ascaris lumbricoides // Comp.Biochem. and Physiol.-1970.-Vol.35.N4.-P.577-585.

71. Beeckmans S., Khan AS., Van Driessche E., Kanarek L. Specific association between the glyoxylic-acid-cycle enzymes isocitrate lyase and malate synthase // European Journal of Biochemistry.- 1994.- V.224, N1.- P. 197- 201.

72. Beevers H. Microbodies in higher plants.//Ann.Rev.Plant Physiol.-1979.-V.30.- P.159-193.

73. Behari R., Baker A. The carboxyl terminus of isocitrate lyase is not essential for import into glyoxysomes in an in vitro system // Journal of Biological Chemistry.- 1993.- V.268, N10.-P.7315-7322.

74. Behrends W. Birkhan R. Kindl H. Transition form of microbodies. Overlapping of two sets of marker proteins during the rearrangement of glyoxysomes into leaf peroxisomes // Biological Chemistry HoppeSeyler.- 1990.- V. 371, Nl.-P.85-94.

75. Bontemps F., Hue L., Hers H.-G. Phosphorylation of glucose in isolated rat hepatocytes. Sigmoidal kinetics explained by the activity of glucokinase alone //Biochem. J.-1978.-Vol. 174, N 2.-P.603-611.

76. Borst P. Peroxisome biogenesis revisited // Biochimica et Biophysica Acta.-1989.-V. 1008, N 1.-P.1-13.

77. Bowyer P., De Lucas JR., Turner G. Regulation of the expression of the socitrate lyase gene (acuD) of Aspergillus nidulans // Molecular & General Genetics.-1994.-V. 242, N4.-P.484-489.

78. Campbell I.I.R., Smith R.A., Eagles B.A. A deviation from the conventional tricarboxylic acid cycle in Pseudomonas aeruginosa //Biochim.Biophys Acta.-1953.- Vol.11. N 4.-P.594-597.

79. Cioni M., Pinzauti G., Vanni P. Comparative biochemistry of glyoxylate cycle.//Comp.Biochem. and Physiol.-1981.-V.70, B, N 1.-P.1-26.

80. Coinoi M., Pinzauti G., Vanni P. Comprative biochemistry of glyoxylate cycle//Comp.Biochem. and Physiol.-1981.-Vol.70. Ser.B. N1.-P. 1-26.

81. Colonna W.J., McFadden B.A. Isocitrate lyase from parasitic and free-living nematodes // Arch. Biochem. Biophys.- 1975 .- V. 170, N4,- P.608-619.

82. Cornberg H.L., Madsen N.B. The metabolism of C2 compounds in microorganisms. III. Synthesis of malate from acetate via the glyoxylate cycle // Biochem. J.-1958.-Vol.68.N3 .-P.549-557.

83. Cornberg H.L.,Phizackerley P.J.R., Sadler J.R. The metabolism of C2. compounds in microorganisms. V.Biosynthesis of all materials from acetate in Eschirichia coli // Biochem.J.-1960.-Vol.77. N3.-P.438-445.

84. Cooper T.G., Beevers H. Mitochondtia and glyoxysomes from castor bean endosperm //J.Biol.Chem.-1969.-V.244, N 13.- P.3507-3513.

85. Cooper A., Gutman M. Accelerated catalysis by active succinate dehydrogenase: a refiction of a novel regulatory site // FEBS Lett.-1976.-V.67, N 2.-P.130-133.

86. Craves L.B., Hanzely L., Trelease R.N. The occyrence and fine structural characterization of microbodies in Euglena gracilis.//Protoplasms.-1971. Vol.72. N2.-P.141-152.

87. Davis B.J., Ornstein L. A hew high resolution electrophoresis method. Delivered at the society for the study at the New York Academy of Medicine. 1959. March 24,-p.l 12-118.

88. Davis K.A., Hatefi X. Succinate dehydrogenase. Purification molecular properties and substructure // Biochemistry.-1971.- V.10.- P.2509-2516.

89. Davis W.L. Hibernation activates glyoxylate cycle and gluconeogenesis in black bear brown adipose tissue //Biochem.Biophys.Acta 1990.-V.1051.-P.276-278.

90. Davis W.L., Goodman D.B. Evidence for the glyoxylate cycle in human liver //Source Anatomical Record.-1992.-V.234. N4.-P.461-468.

91. De Duve C. Microbodies in the living cell //Sci Amer.-1983.-V.248, N 5.-P.52-62.

92. De Duve C. Baudhuin P. Peroxisomes (microbodies and related particles) // Physiological Reviews.- 1966.-V. 46(2) P.323-357.

93. De Lucas JR. Gregory S. Turner G. Analysis of the regulation of the Aspergillus nidulans acuD gene, encoding isocitrate lyase, by construction of a hybrid promoter // Molecular & General Genetics.- 1994.-V. 243, N6.-P.654-659.

94. Dunham S.M., Thurston C.F. Control of isocitrate lyase synthesis in Chlorella fusca var.vacuolata //Biochem.Y.-1978.-V.176, N 2,- P.179-185.

95. Duntze W., Neuman D., Gancedo Y.M., Atzpodien W., Holzer H. Studies on the regulation and localization of the glyoxylate cycle enzymes in Saccharomyces cerevisiae //Eur.Y.Biochem.-1969.-V.10, N 1.- P.83-89.

96. Eising R., Trelease RN., Ni WT. Biogenesis of catalase in glyoxysomes and leaf-type peroxisomes of sunflower cotyledons // Archives of Biochemistry & Biophysics.- 1990.-V. 278, N1.-P.258-64.

97. Elgersma Y., Tabak H.F. Proteins involved in peroxisome biogenesis and functioning // Biochim.Biophys.Acta.-1996.-V. 1286, N 3,- P.269-283.

98. Faber KN. Keizer-Gunnink I. Pluim D. Harder W. Ab G. Veenhuis M. The N-terminus of amine oxidase of Hansenula polymorpha contains a peroxisomal targeting signal // FEBS Letters.-1995.-V. 357, N 2.- P. 115-120.

99. Fernandez E., Fernandez M., Moreno F., Rodicio R. Transcriptional regulation of the isocitrate lyase encoding gene in Saccharomyces cerevisiae // FEBS Letters.- 1993.-V. 333, N3.-P.238-242.

100. Fernandez E., Moreno F., Rodicio R. The ICL1 gene from Saccharomyces cerevisiae // European Journal of Biochemistry.- 1992.-V. 204, N3.-P.983-990.

101. Firenzuoli A.M., Vanni P., Mastronuzzi E., Zanobini A., Baccari V. Enzymes of glyozylate cycle in conifers.//Plant Physiol.-1968.-V.43, N 7.- P. 11251128.

102. Flabell R.B., Woodward D.O. Metabolic role, regulation opf synthesis, cellular localization and genetic contriol of glyoxylate shunt enzymes in Neurospora crassa.// J.Bacteriol.-1971, V.105, N1.- P.200-210.

103. Frevert J., Koller W., Kindl H. Occurence and biosynthesis of glyoxysomal enzymes in ripening cucumber seeds.-Hoppe-Seyler's //Z.Physiol.Chem.-1980.-Vol.361. N10.-P. 1557-1565.

104. Gemmrich A.M. Isocitrate lyase in germinating spores of the fern Anemia Phyllitidis //Phyrochemistry.-1979.-Vol. 18. N6.-P.1143-1146.

105. Gerhard B. Microbodies / Peroxisomen pflanzlicher Zellen //Cell Biology Monographs.-Wien: Springer-Verlag. 1978.-V.5.-283p.

106. Gerhard B. Enzyme activities of the b -oxydation pathway in spinach leaf peroxisomes //FEBS Lett.-198l.-V. 126, N 1.- P.71-73.

107. Gietl C. Malate dehydrogenase isoenzymes: cellular locations and role in the flow of metabolites between the cytoplasm and cell organelles // Biochimica et Biophysica Acta.- 1992.- V.1100, N3.-P.217-234.

108. Glover JR. Andrews DW. Rachubinski RA. Saccharomyces cerevisiae peroxisomal thiolase is imported as a dimer // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.-1994.-V.91.- N 22.-P. 10541-10545.

109. Gould SJ. Keller GA. Subramani S. Identification of peroxisomal targeting signals located at the carboxy terminus of four peroxisomal proteins // Journal of Cell Biology.- 1990.-V. 107, N3.-P.897-905.

110. Hicks D.S., Donaldson R.P. Electron transport in glyoxysomal membranes //Arch.Biochem and Biophys.-1982.-V.215, N 2.- P.280-288.

111. Holmes RP. The absence of glyoxylate cycle enzymes in rodent and embryonic chick liver//Biochimica etBiophysica Acta.-1993.- V.l 158, N1.-P.47-51.

112. Huang A.H.C. Metabolism in plant peroxisomes // Recent Adv.Phyrochem.-1982.-V. 16.- P.85-123.

113. Iynedjian P.B., Salavert A. Efact of glucagon, dexamethasone and triiodothronine on phosphoenolpyruvate carboxykinase (GTP) synthesis ans mRNA level in rat liver cells //Europ.J.Biochem.-1984.-Vol. 145. N 3.-P.489-497.

114. Kagawa Т., Mc Gregor D.J., Beevers H. Development of enzymes in the cotyledons of watermelon seedlings // Plant Physiol.-1973.-V.51, N 1.- P.66-71.

115. Kato A., Hayashi M., Mori H., Nishimura M. Molecular characterization of a glyoxysomal citrate synthase that is synthesized as a precursor of higher molecular mass in pumpkin // Plant Molecular Biology.- 1995.- V.27, N2.- P.377- 390

116. Kausch A.P. Biogenesis and cytochemistry of unspecialized peroxisonmes in root cortical cells of Yucca torreyi L.//Eur.J.Cell.Biol.-1984.-V.34, N 2.- P.239-247.

117. Khan F.R., McFadden B.A. Enzyme profiles in seedling development and the effect of itaconate, an isocitrate lyase directed reagent.//Plant Physiol.-1979.-V.64, N2.-P.228-231.

118. Koller W., Frevert J., Kindl H. Incomplete glyoxysomes appering at a late stage of maturation of cucumber seeds //Z.Naturforsch.-1979. Bd 34. Ser.C.N12.-P.1232-1236.

119. Korb M.J., Vanderhaenge F., Comberpine G. Particulate enzymes of the glyoxylate cycle in Neurospora crassa //Biochem.Biophys.Res.Communs.-1969.-Vol.37, N3.-P.640-645.

120. Kornberg H.L., Beevers H. The glyoxylate cycle as a stage in the conversion of fat to carbohydrase in castor beans // Biochem.Biophys. Acta.-1957.-V.26.-P.531-537.

121. Kornberg H.L., Krebs H.A. Synthesis of cell constituents from C2-units by a modified tricarboxylic acid cycle // Nature.-1957.-V. 157.- P.988-991.

122. Lazarow P.B., Fujiki J. Biogenesis of peroxisomes // Ann.Rev.Cell Biol.-1985,- V.I.- P.489-530.

123. Lowry O., Rosenbrough N., Farr A. Protein measurement with the Folin-phenol reagent //J.Biol.Chem.l951.-V.194.-P.265-275.

124. Maxwell D.P., Maxwell M.D., Nanssler J. Microbodies and glyoxylate cycle enzymes activities in filamentous fungi.//Planta.-1975.-Vol. 124. N1.-P. 109-123.

125. McKinley M.P., Trelease R.N. Glyoxylate cycle enzymes and catalase in digitonin-fractionated mitochondria in Turbatrix aceti //Protoplasma.-1978.-Vol.94. N2.-P.249-261.

126. McNew JA. Goodman JM. An oligomeric protein is imported into peroxisomes in vivo // Journal of Cell Biology.-1994.-V. 127, N 5.- P. 1245-57.

127. McLaughlin Y.C., Smith S.M. Metabolic regulation of glyoxylate cycle enzyme synthesis in detached cucumber cotyledons and protoplasts //Planta.-1994.-V.195, N 1.- P.22-28.

128. Moore R.E., Hansel J.B., Lardy H.A. The development and application of a redioimmunoassay for rat phosphoenolpyruvate carboxykinase //J.Biol.Chem.-1982.-Vol.257, N 21.-P.12546-12552.

129. Moreau R.A., Huang L.H.C. Gluconeogenesis from storage wax in the cotyledons of yojoba seedlings // Pl.Physiol.1977.- V.60.- P.329-333.

130. Muller M., Hogg Y.F., De Duve C. Distribution of tricarboxylic acid cycle enzymes and glyoxylate cycle enzymes between mitochondria and peroxisomes in Tetrahymena pyriformis //J.Biol.Chem.-1968.-V.243.- P.5385-5395.

131. Muto S., Beevers H. Lipase activities in castor bean endosperm during germination //Pl.Physiol.-1974.-V.54.- P.23-28.

132. Nielson A.M., Taylor G.A. Photogetotrophic utilization of acetate by wild type and an acetate adapted mutant of Phodopseudomonas capsulata //Arch.Microbiol.-1979.-V.120.-N 1.- P.39-42.

133. Olsen LJ., Ettinger WF., Damsz В., Matsudaira K., Webb MA., Harada JJ. Targeting of glyoxysomal proteins to peroxisomes in leaves and roots of a higher plant//Plant Cell.- 1993,- V.5, N8.-P.941-952.

134. Onyeocha I., Behari R., Hill D., Baker A. Targeting of castor bean glyoxysomal isocitrate lyase to tobacco leaf peroxisomes // Plant Molecular Biology.-1993.- V.22, N3.- P.385-396.

135. Osumi M., Kazama H., Sato S. Microbody-associated DNA in Candida tropicalis pK 233 cells //FEBS Lett.-1978.-V.90, N 2.-P.309-312.

136. O'Sullivan J., Casseltor P.J. The cubcellular localization of glyoxylate cycle enzymes in Coprinus lagopus //J.Cen.Microbiol.-1973.-Vol.75. N2.-P.333-337.

137. Prichard P.K., Schofild P.J. The glyoxylate cycle, fructose-1,6-diphosphatase and glyconeogenesis in Fasciola hepatica // Comp.Biochem. and Physiol.-1969.-Vol.29. N4.-P.581 -590.

138. Reshef L., Hanson R.W. The interaction of catecholamines and adrenal corticosteroids in the iduction of phosphoenolpyruvate carboxykinase in rat liver and adipose tissue // BiochemJ.-1972.-Vol. 127, N5.-P.809-818.

139. Rubin H., Trelease R.N. Subcellular localization of glyoxylate cycle enzymes in Ascaris suum larve //J.Cell.Biol.-1976.-Vol.70. N1.-P.374-483.

140. Santos MJ. Imanaka T. Shio H. Small GM. Lazarow PB. Peroxisomal membrane ghosts in Zellweger syndrome—aberrant organelle assembly // Science.-1988.-V. 239, P. 1536-1538.

141. Sautter С., Keller G., Hock B. Glyoxysomal citrate synthase from watermelon cotyledons immunocytochemical localization and heterologous translation in Xenopus oocytes // Planta.-1988.-V.173, N 3.- P.289-295.

142. Swinkels BW. Gould SJ. Subramani S. Targeting efficiencies of various permutations of the consensus C-terminal tripeptide peroxisomal targeting signal // FEBS Letters.-1992.-V. 305, N2. -P. 133-136.

143. Syrett P.I., Merrett M.J., Bocks S.M. Enzymes of the glyoxylate cycle in Chlorella vulgaris //J.Exp.Bot.-1963.-Vol.l4. N2.-P.249-264.

144. Szabo A.S., Avers C.J. Some aspect of regulation of peroxisomes and mitochondria in yeast //Ann.N.Y.Acad.Sci.-1969.-V.168.- P.302-312.

145. Theimer R.R., Anding G., Matzner P. Kinetic action on the development of microbody enzymes in sunflower cotyledons in the dark //Planta.-1976.-V.128, N 1. p.41-47.

146. Titus DE., Becker WM. Investigation of the glyoxysome-peroxisome transition in germinating cucumber cotyledons using double-label immunoelectron microscopy // Journal of Cell Biology.-1985.- V. 101, N4.- P.1288-1299.

147. Tolbert N.E. Microbodies-peroxisomesand glyoxysomes.//Ann.Rev.Plant Physiol.-1971.-V.22.- P.45-74.

148. Vaughn K.C., Stegink S.Y. Peroxisomes of soybean root nodule vascular parenchyma cells contain a "nodule-specific" urate oxidase // Physiol.plantarum.-1987.-V.71, N 3.- P.251-256.

149. Vanni P., Vincenzini M.T., Vincieri F., Baccari V. Stimulation of isocitrate lyase biosynthesis by hydroxylamine and hydrazine // Mol. and Cell.Biochem.-1977.-V. 15, N 2.- P.125-131.

150. Vincenzini M.T., Nerozzi F., Vincieri F., Vanni B. Isolation and properties of isocitrate lyase from Lupinus seeds //Phytochemistry.-1980.-V.19, N 5.- P.769-774.

151. Wong D.T.O., Ajls I. Isocitrate in Eschirichia coli //Nature.-1955.-Vol.l76.-P.970-971.128

152. Woodcock E., Merrett M.Y. Malate synthase messenger Euglena // Arch.Microbiol.-1980.-V.124, N 1.- P.33-38.

153. Woodward Y., Merrett M.Y. Induction potential for glyoxylate cycle enzymesa during the cell cycle of Euglena gracilic.//Eur.Y.Biochem.-1975.-V.55.-P.555-559.