Хроматографическая очистка гидролитических ферментов из поджелудочной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Царенко, Ольга Викторовна

  • Царенко, Ольга Викторовна
  • кандидат биологических науккандидат биологических наук
  • 2000, Санкт-Петербург
  • Специальность ВАК РФ03.00.23
  • Количество страниц 125
Царенко, Ольга Викторовна. Хроматографическая очистка гидролитических ферментов из поджелудочной железы: дис. кандидат биологических наук: 03.00.23 - Биотехнология. Санкт-Петербург. 2000. 125 с.

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Царенко, Ольга Викторовна

Введение.

1. Литературный обзор.

1.1. Ферменты поджелудочной железы. Свойства и применение в медицине.

1.2. Основные физико-химические методы, используемые для выделения и очистки ферментов.

1.3. Хроматографические методы очистки белков.

1.3.1. Полимерные носители для хроматографии.

1.3.2. Виды хроматографических процессов. Ионообменная и щдрофобная хроматография

1.4. Термодинамический и кинетико-динамический анализ сорбционнных процессов. Оптимизация хроматографического разделения БАВ.

2. Экспериментальная часть.а.

2.1. Объекты исследования.

2.1.1. Структура и свойства панкреатических ферментов.

2.1.2. Физико-химические характеристики сорбентов.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение концентрации белка по методу Лоури.

2.2.2. Метод определения углеводов.

2.2.3. Определение активности ДНК-азы.

2.2.4. Метод определения активности РНК-азы.

2.2.5. Определение протеолитичеекой активности.

2.2.6. Гельхроматографический анализ.

2.3. Методики проведения сорбционных экспериментов.

2.3.1 Исследование сорбции белков в статических условиях (рН -зависимость и изотермические процессы сорбции).

2.3.2. Исследование кинетики сорбции белков.

2.3.3. Проведение процесса сорбции и десорбции в динамических условиях.

2.4. Математические методы обработки результатов.

3. Результаты и их обсуждение.

3.1. Изучение равновесных и кинетических параметров сорбции панкреатических ферментов на различных хроматографических носителях.

3.1.1. Сорбция панкреатических ферментов на ионогенных и молекулярных сорбентах с модифицированной и немодифицированной поверхностью.

3 .1.2. Сорбция панкреатических ферментов на сверхсшитых полиетирольных сорбентах Стиросорб.

3.2. Исследование динамических процессов сорбции и десорбции.

3.2.1. Теоретический анализ условий оптимизации. Изучение влияния скорости подвижной фазы на процесс сорбции ферментов из многокомпонентной смеси.

3.2.2. Изучение сорбции ферментов из экстракта поджелудочной железы на сорбентах с модифицированной поверхностью.

3.2.3. Изучение сорбции и десорбции ферментов в динамических условиях на сверхсшитых сорбентах Стиросорб.

3.3. Масштабирование хроматографического способа очистки РНК-азы.

Выводы.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биотехнология», 03.00.23 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Хроматографическая очистка гидролитических ферментов из поджелудочной железы»

Производство ферментных препаратов является одним из перспективных направлений в биотехнологии. Ферментные препараты широко используются во многих отраслях промышленности: медицинской, микробиологической, парфюмерной, сельскохозяйственной и других. Особое значение в настоящее время приобретает получение лекарственных средств на основе ферментов из животного сырья, которые могут успешно заменить препараты аналогичного действия, производимые химическим и микробиологическим синтезом.

Гидролитические ферменты из поджелудочной железы крупного рогатого скота - рибонуклеаза (РЖ-аза), дезоксирибонуклеаза (ДНК-аза), трипсин и химотрипсин - обладают выраженным противовоспалительным и противоотечным действием и эффективны при лечении гнойно-воспалительных процессов различной локализации и этиологии. Кроме того, нуклеазьг являются природными регуляторами механизма противовирусной защиты, что позволяет рекомендовать их для лечения и профилактики вирусных инфекций. Поэтому, для использования гидролитических ферментов в медицинской практике путем внутримышечного и, в особенности, внутривенного введения степень очистки препаратов должна быть высокой.

Проблема повышения качества препаратов требует создания новых подходов к методам их выделения и очистки. Используемые в настоящее время промышленные методы выделения и очистки гидролитических ферментов недостаточно эффективны. Первичное концентрирование ферментов из экстракта поджелудочной железы крупного рогатого скота проводится по ионообменой технологии с использованием сульфокатионита КУ-23, однако дальнейшее получение ферментов проводят путем дробного фракционирования сульфатом аммония с последующей индивидуальной доочисткой каждого из ферментов. При этом используются одностадийные статические физико-химические методы (осаждение, диализ, экстракция, высаливание), которые не обеспечивают высокого выхода целевых продуктов, получения препаратов необходимой степени чистоты, связаны е использованием больших объемов органических растворителей и токсичных веществ (в частности, фенол), а также длительны по времени. 5

Вместе с тем, современное состояние развития препаративной хроматографии биологически активных веществ позволяет успешно решать вышеуказанные проблемы.

Целью работы являлось изучение закономерностей сорбции панкреатических ферментов на молекулярных и ионогенных носителях различной структуры и разработка на их основе хроматографического способа очистки. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучение равновесных, термодинамических и кинетических закономерностей сорбции ферментов на различных хроматографических носителях и выбор оптимального сорбента для препаративной хроматографии.

2. Теоретическое обоснование условий разделения компонентов смеси; оптимизация хроматогафического процесса по скорости подвижной фазы.

3. Выбор оптимальных физико-химических условий селективной элюции.

4. Масштабирование хроматографического процесса очистки для полупроизводственных условий.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Похожие диссертационные работы по специальности «Биотехнология», 03.00.23 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Царенко, Ольга Викторовна

ВЫВОДЫ Показана возможность эффективного хроматографического выделения и очистки панкреатических ферментов на сорбентах с модифицированной поверхностью непосредственно из производственного экстракта поджелудочной железы: предварительная очистка от балластных примесей может осуществляться во фронтальном процессе на модифицированных молекулярных сорбентах Полисорб и СКН, а селективная сорбция и десорбция - на модифицированном КУ-23.

2. Впервые исследованы равновесные и кинетические параметры сорбции панкреатических ферментов сверхспштыми сорбентами Стироеорб, различающимися условиями синтеза, в частности, количеством катализатора. Показано, что наибольшей емкостью и улучшенными кинетическими характеристиками обладают Стиросорбы, полученные в присутствии 1-3 моль катализатора. Осуществлен выбор оптимального носителя - Стиросорба 1, который предложено использовать для индивидуальной доочистки ферментов на заключительных стадиях.

3. Установлен преобладающий вклад гидрофобных взаимодействий в изменение свободной энергии процесса сорбции гидролитических ферментов сверхспштыми сорбентами. Это учтено при выборе физико-химических условий элюции с обострением хроматограф ических зон целевых компонентов. Показано, что оптимальным элюирующим раствором является 30-50% этиловый спирт с рН=2-3.

4. Предложена теоретическая модель, позволяющая в зависимости от соотношений между равновесно-кинетическими параметрами сорбции прогнозировать оптимальную скорость хроматографического процесса, при которой возможно максимальное разделение компонентов или изменение порядка их выхода из хроматографической колонки. Получено экспериментальное подтверждение модели при разделении РНК-азы и ДНК-азы.

5. Разработан и запатентован новый способ очистки РНК-азы из производственного высола фермента с использованием сверхсшитого

110 сорбента Стнросорб 1, позволяющий повысить удельную активность в 1,5-2 раза, увеличить выход фермента с единицы сырья в 3,7-4 раза при сокращении времени технологического цикла очистки в 5 раз. Проведено масштабирование процесса хроматографической очистки РНК-азы для полупроизводственных условий и рассчитаны оптимальные параметры препаративной колонки.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Царенко, Ольга Викторовна, 2000 год

1. Банникова Т.Е., Варламов В.П., Самсонова О.Л., Рогожин C.B. Биоспецифическая хроматография нуклеаз.// В кн.: Нуклеазы. Биологическая роль и практическое использование. Киев: Наукова Думка, 1985. - С. 51-56.

2. Банникова Г.Е., Варламов В.П., Рогожин C.B. Способ вьщеления и очистки бактериальной эндонуклеазы из Serratia marcescens.//Авторское свидетельство СССР № 1392902. Опубл. 7.05.90.

3. Батурина И. Д., Бердыш ев Г. Д. Дезоксирибонуклеазы из внутренних органов карпа. Выделение и некоторые свойства.// В кн.: Разнокачественность онтогенеза у рыб. - Киев: Наукова Думка, 1980. - С. 114-128.

4. Башуро Г.С., Ляпунов H.A. К вопросу о применении катамина при создании готовых лекарственных средств.// Фармация, 1988. №1. - С.35-38.

5. Безбород ова С.И. Рибонуклеазы и родственные белки, а также ингибиторы рибонуклеаз.// Прикладная биохимия и микробиология, 1991. Т.27, №3. - С. 308-329.

6. Бейли Дж., Оллис Д. Основы биохимической инженерии. Пер. с англ., в 2 томах. М.: Мир, 1989. - Т.2. - 590 с.

7. Белякова Л.Д. Хроматографические и адсорбционные свойства сверхсшитых полистирольных адсорбентов «Стиросорб».// В сб.: Всероссийский симпозиум по теории и практике хроматографии и электрофореза. Самара: Самарский Университет, 1999.- С. 151-162.

8. Белякова Л.Д., Василевская О.В., Цюрупа М.П., Даванков В.А.

9. Адсорбционные и хроматографические свойства полимерных сорбентов типа «Стиросорб».// ЖФХ, 1995. Т.69, №4. - С. 696-700.

10. Белякова Л.Д., Василевская Ö.B., Цюрупа М.П., Даванков В.А.

11. Адсорбционные и хроматографические свойства микросферических полимерных сорбентов типа «Стиросорб».// ЖФХ, 1996. Т.70, №8. - С. 1476-1481.

12. Березин A.B., Клячко H.K., Левашов A.B., Мартинек К., МожаевВ.В,, Хмельницкий Ю.Л. Иммобилизованные ферменты. М.: Высшая школа, 1987. - 160 с.

13. Быченкова О.В., Ищенко Л.С., Глазова Н.В. Использование хроматографических методов для получения ферментного препарата «Рибонуклеаза».// Тез.Республиканской научной конференции молодых ученых медицинских вузов России. Самара, 1999,- С. 33.

14. Варламов В.П. Хроматографическое выделение гидролаз (нуклеаз, фосфатаз, хитиназ) и их использование в биотехнологических процессах.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени докт. хим. наук. Москва, 1994. -51с.

15. Глазова Н.В., Ефимова Т.Б., Игонина Л.М., Дмитренко Л.В.

16. Использование хроматографических методов для оценки эффективности очистки ферментных препаратов.// Тез. докладов Всесоюзной научной конференции "Технология ключевых соединений, используемых в синтезе БАВ*. Пенза, 1991,- С. 105-112.

17. Глазова Н.В. Сорбционное разделение смесей Б AB в квазиравновесных и неравновесных условиях.// Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биосепарация-96». СПб, 1996.- С. 11.

18. Глазова Н.В., Елькин Г.Э., Рудометова Н.В. Оптимизация ионообменных процессов с использованием ПЭВМ. СПХФИ, 1993. - 19 с.

19. Глухов Б.М. Об участии РНК-азы в механизме противовирусной защиты организма при клещевом энцефалите.// Журн. невропатологии и психиатрии, 1970. Т. 70, вып. 1. - С. 45-48.

20. Горчаков В. Д., Сергиеико В.И., Владимиров В.Г. Селективные гемосорбенты. М.: Медицина, 1989. - 224 с.

21. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. М.: Агропромиздат, 1987. - 335 с.

22. Гуторов А.Н., Лесников Е.П., Салганик Р.И., Кривошеее Б.Н. ДНК-аза в терапии простого рецидивирующего герпеса.// Вестник дерматологии и венерологии, 1976. -№11. С. 75-78.

23. Дарбре А. Практическая химия бежа.// Пер. с англ.- М. : Мир, 1989. 623 с.

24. Демин A.A., Салганик Р.И. Терапевтическая активность ДНК-азы при инфекционном мононуклеозе.// Сов. Медицина, 1983. №8. - С. 91-92.

25. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты,- М.: Мир, 1992. 1117 с.

26. Елькин Г.Э. Концепция регулярности режима сорбции в теории и практике ионного обмена органических ионов.// Межвузовский сборник: Ионный обмен и ионометрия, 1990. Вып. 7. - С. 3-15.

27. Елькин Г.Э. Теоретические основы выбора оптимальных режимов сорбции и хроматографии БАВ.// Тезисы докладов Всерос.симпозиума «Биосепарация-96». -СПб, 1996, СЛ.

28. Елькин Г.Э., Глазова Н.В., Курдявка Л.В. Модификация свойств поверхности макропористых сополимеров путем адсорбции поверхностно-активных веществ.// ЖФХД994.-Т.68, №10,- С. 1782-1783.

29. Елькин Г.Э., Бабенко Г.А., Селезнева A.A., Самсонов Г.В. Кинетика сорбции белков ионообменными смолами. Сорбция химотрипсиногенакарбоксильными катионитами.// Коллоидный Журнал, 1972. Т.34, №2. -€.208-212.

30. Заинкова Н.В. Получение и сравнительный анализ свойств гиалуронидаз из различных источников.// Диссертация на соискание ученой степени канд.биол.наук. СПб: СПХФА, 1998. - 140с.

31. Игонина Л.М. Хроматографическое выделение и изучение свойств фермента гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота // Диссертация на соискание ученой степени канд.биол.наук. СПб: СПХФА, 1996.

32. Игонина Л.М., Глазова Н.В., Дмитренко Л.В., Заинкова Н.В. Применение сорбционно-хроматографических методов очистки ферментного препарата "Лидаза".// В кн.: Химия и технология лекарственных веществ.-СП6.-1994.-с.14.

33. Игонина Л.М., Глазова Н.В., Заинкова Н.В. Использование сорбентов для удаления примесей из инъекционного препарата "Лидаза"// Тез.докладов Международного симпозиума "Проблемы сорбционной детоксикации внутренней среды организма. "-Новосибирск,-1995.

34. Игонина Л.М., Д.Коррадини, Н.В.Глазова, Г.Э.Елькнн, Д.Канарса. Влияние ионов двухвалентных металлов на порядок следования белков при ионообменной ВЭЖХ. // Журнал прикладной химии, 1998. Т. 78, №7. -С. 1094—1098.

35. Иониты. Черкассы: НПО "Пластмассы", 1980,- 32 с.

36. Каталог хроматографичееких материалов для научных исследований.// РАН, Главное Управление материально-технического обеспечения. М.: Наука, 1992.-63 с.

37. Кадолина И.Г. Разработка методов выделения и очистки бактериальных эндотоксинов.// Диссертация на соискание ученой степени канд.биол.наук. -СПб.: СПХФИ. -1995.

38. Коваленко Г.А. Влияние панкреатических рибонуклеаз на клетки и организм животных: клеточный механизм противовирусного действия.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. биол. наук. Казань, 1986. -19 с.

39. Кокотов Ю.А., Золотарев П.П., Елькин Г.Э. Теоретические основы ионного обмена. Л: Химия, 1986. - 280 с.

40. Колбановская Е.Ю. Структурно-функциональный анализ рибонуклеазы А и родственных белков.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. хим. наук. Москва, 1996. - 22 с.

41. Коликов В.М., Мчедлишвили Б.В. Хроматография белков на макропористых кремнеземах. Л. .Химия, 1986. - 192 с.

42. Колодзейская М.В., Пилявская A.C. Пептидазы. Киев: Наукова Думка, 1982. - 176 с.

43. Кривошеев Б.Н., Мотовилова H.H., Салганик Р.И., Савиных Ж.М., Стадиик К.И. ДНК-аза в комплексной терапии герпетиформной экземы Капоши.// Вестник дерматологии и венерологии, 1987. №1. - С. 29-33.

44. Лапик A.C., Губенко U.C., Корочкин Л.И., Салганик Р.й.

45. Фармакологическая активность и токсичность нуклеаз.// Фармакология и токсикология, 1977. - Т.ЗЗ, №2. - С. 210-212.

46. Лебедев Ю.Я. Теория хроматографии медленно диффундирующих веществ. Типы режимов.// ЖФХ, 1995. Т.69, №6. - С. 1080-1084.

47. Лебедев Ю.Я. Теория хроматографии медленно диффундирующих веществ. Обращение порядка элюирования компонентов.// ЖФХ, 1997. Т.71, №6. - С. Ш7-1120.

48. Лещинская И.Б., Клейнер Г.И., Паэгле Б.Я., Знаменская Л.В., Михлин

49. Э.Д. Способ получения внеклеточной щелочной рибонуклеазы.// Авторское свидетельство СССР №1010125. Опубл. 7.04.83.

50. Лукьянова Ö.H., Писарев O.A., Муравьева Т.Д. и др. Десорбция противоопухолевого антибиотика даунорубицина с гелевых и гетероеетчатых карбоксильных катионитов.// ЖПХ, 1991. Т.64, №6. - С. 1361-1363.

51. Лурье A.A. Хроматографические материалы /справочник/. -М.: Химия. 1978. - 440 с.

52. Максимов В.И. Стабильность ферментов при очистке.// В кн.: Кристаллические ферменты: методы получения, их характеристика и использование. Вильнюс, 1975. - С.22-25.

53. Малиновекий H.H., Цацаниди К.Н., Пугаев A.B. и др. Применение панкреатической РНК-азы в комплексе консервативной терапии острого панкреатита.//Хирургия, 1982. Коб.-С. 8-17.

54. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971. - 404 с.

55. Мчедлишвшш Б.В., Коли ко в В.М., Черкасов А.Н. Трековые мембраны в процессах тонкой очистки.// Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биосепарация-96». С-Петербург, 1996. - С. 13.

56. Островский Д.Й., Дмитренко Л.В., Самсонов Г.В. Взаимодействие инсулина с полиэлектролитами макропористой структуры. // Изв. АН СССР. Сер.хим., 1973. №5. - С. 1145-1146.

57. Павлюченко H.H. Сравнительная биохимическая и физиологическая характеристика ферментных препаратов поджелудочной железы.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. мед. наук. -Ростов-на-Дону, 1987. 16 с.

58. Паскевич Й.Ф., Чиеханова М.А., Лиходед B.C. Исследование РНК-азы, связанной с гистонами печени и селезенки крыс.// Биохимия, 1972. - Т.37, №3. - С. 585-589.

59. Патент JP № 460031476. Способ выделения физиологически активных веществ из экстракта поджелудочной железы млекопитающих.// Amano pharm К.К. Опубл. 22.07.85.

60. Патент US № 4973554. Аффинный способ очистки и стабилизации трипсина.-Опубл. 27.11.90.

61. Пирогова О.В., Хохлова Т.Д., Петрова В.Н. Применение трековых мембран для разделения белковых смесей.// Тезисы докладов Всерос.симпозиума «Биоеепарация-96». С-Петербург, 1996. - С. 15.

62. Писарев O.A., Кручина-Богданов И.В., Глазова Н.В., Быченкова О.В. Кинетическое регулирование селективности сорбции в жидкостной хроматографии низкого давления.// ДАН, 1998. Т.362, №3. - С. 357-360.

63. Писарев O.A., Кручина-Богданов И.В., Глазова Н.В., Быченкова О.В. Хроматографические разделения БАВ в кинетически селективных режимах динамики сорбции.// ЖФХ, 1999. Т.73, №9. - С. 750-754.

64. Писарев O.A., Самсонов Г.В., Богданова Л.П., Муравьева Т.Д. Ионно-гидрофобное взаимодействие эремомицина с сетчатыми структурно сегрегированными биосорбентами.// ЖПХ, 1993. Т.66, №12. - С. 2825-2828.

65. Полянский Н.Г., Горбунов Г.В., Полянская Н.Л. Методы исследования ионитов. М.: Химия, 1976. - 208 с.

66. Радченко И.Г., Пономаренко М.Н., Глазова Н.В., Йозеп A.A. Исследование полимерных комплексов, включающих ферменты и растворимые полимеры.// ЖПХ, 1997. Т.70, №6. - С. 1040-1043.

67. Рудометова Н.В. Разработка сорбционного хроматографического выделения панкреатических ферментов. Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук. - СПб.: СПбТИ, 1994.

68. Салганик Р.И., Тухачев A.A., Баталина Т.А. Противовирусное действие дезокеирибонуклеазы и рибонуклеазы.// В кн.: Ингибиторы вирусной активности. Рига: Зинатне, 1972. - С. 147-152.

69. Самсонов Г. В., Тростянекая Е.Б., Елькин Г.Э. Ионный обмен. Сорбция органических веществ. Л.: Наука, 1969. - 333 с.

70. Самсонов Г.В., Меленевский А.Т. Сороционно-хромато графические методы физико-химической биотехнологии. Л.: Наука, 1986.

71. Самсонов Г.В., Писарев O.A. Новые принципы ионообменной препаративной хроматографии и их применение для выделения, очистки и суперочистки антибиотиков.// Прикладная химия и микробиология, 1992. -Т.28,Ш.-С. 5-18.

72. Селезнева A.A., Бабенко Г.А., Елькин Г.Э. и др. Кинетика сорбции ферментов в поверхностном слое карбоксильных катионитов.// Коллоид. Журн, 1974. -Т.36,№3. -С.511-514.

73. Селезнева A.A., Дубинина H.H., Бабенко Г.А., Лукницкая 0.Ф., Самсонов Г.В. Особенности сорбции белков карбоксильным катионитом.// Коллоид. Журн., 1975. Т.37, №6. - С. 1138-1142.

74. Селеменев В.Ф. Обменные процессы и межмолекулярные взаимодействия в системе ионит-вода-аминокислота.// Автореферат диссертации на соискание степени доктора химических наук. Воронеж: В ГУ, 1993. - 49 с.

75. Скоупс Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1985. - 224 с.

76. Смирнов H.H., Аронова Е.Б., Беленький Б.Г., Наследов Д.Г. Экспериментальное исследование поведения белков на ионообменной хромато графической мембране.// Тезисы докладов Всерос.симпозиума «Биосепарация-96». С-Петербург, 1996. - С.22.

77. Стрелке В.В., Плаченов Т.Г., Картель Н.Г. Углеродные адсорбенты. М., Наука, 1983.- 170 с.

78. Таре A.A., Ярве В.Ю., Сийгур Ю.Р., Аавиксар В.А. Способ выделения эндонуклеазы из яда кобры.// Авторское свидетельство СССР № 1203902. Опубл. 30.11.90.

79. Тенникова Т.Б. Полимерные мембранные адсорберы. Высокоэффективная мембранная хроматография белков.// Тезисы докладов Всерос.симпозиума «Биосепарация-96». С-Петербург, 1996. - С. 13-14.

80. Троицкая В.Б. Электролиты и ферменты поджелудочного сока.// В кн.: Руководство по физиологии. Физиология пищеварения. Л.: Наука, 1974. -С.339-359,

81. Тугунов С.С., Константинов В.Л., Манойлов С.Е., Дмитриева В.А.

82. Заводское производство аморфных и кристаллических лечебных препаратовферментов трипсина, химотрипеина и РНК-азы из панкреатической железы.// Труды ЛХФИ, 1967. Вып.20. - С.9-18.

83. Федосов Ю.В., Кожемяко В.Б., Рассказов В.А. Способ получения кислой дезоксирибонуклеазы.// Авторское свидетельство СССР № 1100308. Опубл. 30.06.84.

84. Филимонова М.Н., Беиедик М.Дж., Уразов Н.Г., Лещинская И.Б.

85. Полидисперсность нуклеазы Serratia marcescens при оптимальном значении pH.// Прикладная биохимия и микробиология, 1999. Т.35, №1. - С. 20-24.

86. Хмара М Е. Влияние РНК-азы на интерферирующие, интерферогенные и цитопатичеекие свойства некоторых РНК-содержащих вирусов.// Здравоохранение Белоруссии, 1977. №8. - С. 14-16.

87. Цюрупа М.П., Ослонович К). В., Нистратов А.И., Радченко Л.Г., Даванков В.А. Фазовое расслоение в условиях синтеза сверхсшитых полистирольных сеток в среде циклогекеана.// ВМС, 1995. Т.37А, №6. - С.964-968.

88. Цюрупа М.П., Даванков В.А., Кривоносова Л.Г., Селеменев В.Ф., Чикин Г.А. Поглощение окрашенных веществ из ферментационных растворов лизина сверхсшитым сорбентом.// Прикладная биохимия и микробиология, 1985. Т.21, ML - С.72-77.

89. Цюрупа М.П., Панкратов Е.А., Даванков В.А. Влияние среды синтеза на физико-химические свойства макросетчатых изопористых полимеров стирола.// ВМС, 1980. Т.22Б, №10. - С.746-748.

90. Цюрупа М.П. Структура и свойства полимерных сорбентов на основе сверхсшитого полистирола.// Диссертация на соискание ученой степени доктора химических наук. ~ Москва, 1988.

91. Черкасов А.Н., Пасечник В.А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии. Л.: Химия, 1991.-240 с.

92. Чичкова Н.В., Пейсениекс В.Э., Залите Й.К. Способ получения рибонуклеазы из E.eoli.// Авторское свидетельство СССР № 1495377. Опубл. 23.07.89.

93. Шапот B.C. Нуклеазы. М.: Медицина, 1968. 212 с.

94. Шатаева Л.К., Кузнецова H.H., Елькин Г.Э. Карбоксильные катиониты в биологии. Л.: Наука, 1979. - 229 с.

95. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Р.: Зинанте, 1988. 104 е.

96. Шиманко И.И., Берелавичус В.Ю., Владимиров В.Г. Использование РНК-азы в терапии острого панкреатита.// Сов. медицина, 1981. №1. - С. 50-54.

97. Яскович Г.А., Кошева Е.П., Елькин Г.Э., Воробьева В.Я., Самсонов Г.В. Кинетика сорбции дезоксирибонуклеазы Actinomyces streptomycini из нативного раствора карбоксильным катионитом КМТ.// Хим.-фарм. Журнал, 1974. №10. - С.47-51.

98. Atkinson В., Mavituna F. Biochemical Engineering and Biotechnology Handbook.- England: Macmilan Publishes Ltd., 1983.

99. Aranyl P., Laszlo B. Sorption equilibria between proteins and cation exchangers.// J. Chromatogr., 1974. ¥.89. - P.239-250.

100. Bemtema J.J., Hofsteen J., Jwama M., Morita Т., Ohgi K., Irie M., Sugijama R.H., Schieven G.L. Amino-acid sequence of the nonsecretory ribonuclease.// Biochem., 1988. V.27. - P. 4530-4538.

101. Bell D.J., Hoare M., Dunniil P. Formation of Protein Precipitates and Their Centrifugal Recovery.// Adv. Biochem. Eng./ Ed. Fiechter A. Berlin, N. Y., 1983.- V.26. P. 2.

102. Ben-Naim A. Water aqueous solutions interactions to a molecular theory. N.Y., L.: Plenum Press, 1974. - 474 p.

103. Biotechnoiogical Applications of Proteins and Enzymes./ Ed. by: Zvi Bohak, Nathan Sharon. N. Y., San-Francisco, London: Academic Press, 1977. - 368 p.

104. Blackburn P., Moore S. The Enzymes./ Ed. P.O. Boyer, 1982. V.15. - P. 317433.

105. Brooks C.L. Proteins: A theoretical perspective of dynamics, structure and thermodynamics. N.Y. etc.: Wiley and Sons, 1988. - XIII, 259 p. - Advances in chem. Physics, ¥.71.

106. Bucke C. The biotechnology of enzyme isolation and purification.// In Principles of Biotechnology. Glasgow: Blackie and Son Ltd., 1983. - P. 151-171.

107. Cafaro V., Bracale A., Formiggini F., Notomista E., B'Alessio G., Di Donato A. Protein engineering of ribonucleases.// Biochemie, 1998.—¥.80, №11. P. 905909.

108. Comprehensive biotechnology./ Ed. Cooney C.L., Humphrey R.E. N.Y, L.: Pergamort Press, 1985. - V.2. - 632 p.

109. Corradini D, Filippetti, Corradini C. Salt mediated elution behavior of proteins on a silica-based stationary phase for size exclusion high performance liquid chromatography.// J. Liquid Chromatog., 1993. V. 16. - P.3393-3408.

110. Cramer J.A., Bailey L.C. A reversed-phase ion-pair high-performance liquid chromatography method for bovine testicular hyaluronidase.// Anal. Bioehem.,1991. V.196, №1. - P. 183-191.

111. Curling J.M. Methods of plasma protein fractionation. N.Y.: Academic Press, 1980. - 532 p.

112. Davankov V.A., Tsyurupa M.P. Structure and properties of porous hypercrosslinked polystyrene sorbents styrosorb.// Pure and Appl. Chem., 1989. -V.61.-P. 1881-1888.

113. Davankov V.A., Tsyurupa M.P. Structure and properties of hypercrosslinked polystyrene the lsl representative of a new class of polymer networks.// Reactive Polymers, 1990. - V. 13. - P. 27-42.

114. Desifets C.P., Rounds M.A., Regnier F.E. Semipermeable-surface reversed-phase media for high-performance liquid chromatography.// J. Chromatogr., 1991. -Y.544. P.25.

115. Desnuelle P. In the Enzymes.// 2nd Ed. Academic Press, New York, 1960. V.4. -P.93.

116. Engelhardt H. Hochdruck-flussigkeits-chromatographie. Berlin: Springer. -Verlag, 1977.

117. Fritz J.S. et al. Ion chromatography. Heidelberg etc.: Huthig, 1982. - X, 203 p.

118. Glazova N.V., fgonina L.M., Elkiii G.E. Chromatographic purification of enzyme medicines from macromolecular impurities.// Macromolecular Symposia. -Bratislava, 1995.

119. Glazova N.V. Sorption technology protein medicines including of non-equilibrium chromatographic effects. // 10-th International Symp. of Chromatography in Industry.-Bratislava, 1996. P. 173-174.

120. Glukhov V.M., Jerusalimsky A.P., Canter V.M., Salganik R.I. Ribonuclease treatment of tick-born encephalitis.// Arch. Neurol., 1976. - V.33. - P. 598-603.

121. Gomes E., SerzedeHo A., Da SHva R. Purification and physico-chemical properties of a ribonuclease produced by Aspergillus flavipes.// Microbiol., 1998. -V.96,№383. P. 39-50.

122. Gozzinf L., Moiitecucclii P.C. High performance liquid chromatography in protein and peptide chemistry. Berlin, N.Y.: Walter de Gruyter, 1981. - 365 p.

123. Grabender G.C., Giafz C.E. Protein precipitation: analysis of particle size distribution and kinetics.// Chem. Eng. Commun., 1981. V. 12. - P. 203.

124. Hagglund I. Development of new and modified stationary phases in chromatography: Doctoraithesis. Stockholm, 1994. - 102 p.

125. Henschen, K.P. Hupe, F. Loitspeieh, W. Voelten High Performance Liquid Chromatography in Biochemistry, пер. с англ., под ред. JI.B. Березина. М.: Мир, 1988. - 687 с.

126. Janca J. Size exclusion chromatography.// J. of Liquid Chromatogr. V.13, № 9. -P. 1669.

127. Jansen J.C., fled man P. Large scale chromatography of proteins.// Advances in Biochemical Engineering, 1982. V.25. - P. 43-49.

128. Josic D., Reutter W., Molnar I. Practical aspect of modern HPLC. Berlin, N.Y.: Waiter de Gruyter, 1982. - 123 p.

129. Karlstom В., Vincent J., Jochansson В., Bryno C. A simple purification method of squeezed krill for obtaining high levels of hydrolytic enzymes.// Prep.Biochem. -1991. -V.21, т.- P. 237-256.

130. Kato Y. High-performance hydrophobic interaction chromatography of proteins. Advances in chromatography// Eds. Giddings J.C., Grashka E., Brown P.K. New York, Basel: Marcel Dekker Inc., 1987. - V.26. - P.97-115.

131. Khng Hwee Peng, Cimfiffe В., Davies S., Turner N.A., Vulfson E.N. Hie synthesis of sub-micron magnetic particles and their use for preparative purification of proteins.// Biotechnol. and Bioeng., 1998. V.60, №4. - P. 419-424.

132. Kolbanovskaya E.Yu., Satfryanarayana B.K., Wlodaver A., Karpeisky M.Ya. Intramolecular interactions in pancreatic ribonucleases.// Protein Science, 1992. -V.l.-P. 1050- 1060.

133. Melander W., Horvath C. Salts effects on hydrophobic interaction in precipitation and chromatography of proteins.// Arch. Biochem. Biophys., 1977. V.183. -P.200-215.

134. Moore S., Stein W.H. Chemical structure of pancreatic ribonuclease and deoxyribonuclease.// Science, 1973. V. 180, № 4085,- P. 458-464.

135. Morita T., Sanda A., Takizava Y., Ohgi K., Irie M. Distribution of a kidney acid-ribonuelease-like enzyme and the other ribonucleases in bovine organs and body fluids.//Agr. Biol. Chem., 1987. V.51. - P. 2751-2761.

136. Net Kenneth E. Cooperativity in enzyme function: equilibrium and kinetic aspects.// Meth. in Enzymol.,1980. -V.64. -P. 139-192.

137. Norde W., Zouugrana T. Surface-induced changes in the structure and activity of enzymes physically immobilized at solid/liquid interfaces.// Biotechnol. and Appl. Biochem., 1998. V.28, №2. - P. 133-143.

138. Optimization of Chromatographic Selectivity.// Ed. Peter G. Schoenmakers. -Amsterdam etc., 1986.

139. Paul A.B., Cussler E.L. Bioseparations: Downstream processing for biotechnology. N.Y. etc.: Wiley and Sons, 1988. - XVI, 368 p.

140. Petebauer Z., Lukas J., Svec F., Kadal J. Morphology of polymeric sorbents based on glyeidyl methacrylate copolymers.// J. Chromatogr., 1979. V. 171, №1. -P. 101-107.

141. Proteases and antiproteases.// American J. of respiratory and critical care medicine. V. 150, №6. - P.2.

142. Protein Missassemhly.// Ed. by R.Wetzel. San Diego etc.: Academic Press, 1997. - XX, 282 p.

143. Ravindranath B. Principles and practice of chromatography. Chichester: Horwood; N.Y. etc.: Halsted Press, 1989. - 502 p.

144. Recovery and Purification of Byproducts.// Ed. M.-R.Kula, Steven M. Cramer. -N.Y. etc.: Wiley, 1995. P. 301-427, 429-555.

145. Richards F.M., Wichoff H.G. Bovine pancreatic ribonuclease.// The Enzymes/ Ed. Boyer P.D. New York: Academic Press, 1971. - V.4. - P. 647-806.

146. Richards F.M., Wichoff H.G. Atlas of molecular structures in biology. Oxford: Clarendon Press, 1973. - V. 1. - 369 p.

147. Sewell P.A., Clarke B. Chromatographic separations. London: Chichester etc.: Wiley and sons on behalf of ACOL, Thames Polytechnic, 1987. - XX, 333 p.

148. Svec F., Frechet J.M.J. Modified poiy(glycidyl methaciylate-co-ethylene dimethaeiylate) continuous rod columns for preparative scale ion-exchange chromatography of proteins.// J. Chromatogr., 1995. V.702A. - P.89-95.

149. Tanford C. The hydrophobic effect. Formation of micelles and biological membranes. N. Y.: Willey-Interscience, 1973. - 200 p.

150. Tennfkova T.B., Svec F.// J. Chromatogr., 1992. V.590. - P.353.

151. Ultrafiltration, Membranes and Application.// Ed. by A. Cooper. N.Y.: Plenum Press, 1980. -705 p.

152. Wang Q.C., Svec I ., Frechet J.M.J. Rod of macroporous polymers stationary phase as continuous separation medium for reversed phase chromatography.// Anal. Chem., 1993. V.65. - P.2243-2248.

153. Wang Q.C., Svec F., Frechet J.M.J. Reversed-phase chromatography of small molecules and peptides on a continuous rod of macroporous poly(styrene-co-divinylbenzene).// J. Chromatogr., 1994. V.669. - P.230-235.

154. Wfodawer A. In: Biological Macromolecules and Assemblies. V.2: Nucleic Acids and Interactive Proteins./ Ed. A. McPherson, F. Jurnak. N.Y.: Wiley and Sons, 1985.-P. 395-439.

155. Wolf M., Ransberger K. Enzyme-therapy.- New York: Vantage Press, 1972. -232 p.

156. Zegers I., Maes D., Dao-TM M.-H., Poortmans F., Palraer R., Wyns L. Thestructures of Rnase A complexed with 3-CMP and d(CpA): active site conformation and conserved water molecules.// Protein Sci., 1994. V.3. - P. 2322-2339.

157. По данной технологии получена субстанция фермента с удельной активностью 15000-18000 Ед/мг.

158. Показано , что сорбционная технология является перспективной .так как:

159. Уменьшается время технологического цикла очистки производственного высола рибонуклеазы в 5 раз;

160. Сокращаются потери целевого продукта и увеличивеатся съем фермента с единицы сырья в 3.7-4 раза;

161. Увеличивается удельная активность препарата в 2 раза.

162. К.х.н.,доцент СПХФА Глазова Н.В.1. Шенгер А.А.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.